Mae Brechlyn Feirws Ffliw Gwanedig Deufalent Byw yn Amddiffyn Rhag H1N2 A H3N2 Wedi'i Ddiferu arunigau Clinigol mewn Moch Rhan 2

2.5. Assay Imiwnoorbent Cysylltiedig ag Ensym (ELISA)

Er mwyn gwneud antigenau cotio, cafodd SD435 a SD467 eu lluosogi mewn celloedd MDCK a'u puro gan ddefnyddio uwch-ganrifiad graddiant swcros. Digwyddodd anactifadu'r firysau trwy ychwanegu 97 y cant -propiolactone at y firws mewn crynodiad o 1:1000 (v/v) (Thermo Fisher Scientific, AAB2319703). Cafodd y cymysgedd hwn ei siglo ar 4 ◦C dros nos, ei ddeor ar 37 ◦C am ddwy awr i hwyluso hydrolysis -propiolactone, yna ei storio ar −80 ◦C nes ei ddefnyddio.

Mae antigenau ac imiwnedd yn anwahanadwy. Mae antigen yn cyfeirio at unrhyw sylwedd y gall y system imiwnedd ei adnabod ac achosi ymateb imiwn, gan gynnwys bacteria, firysau, celloedd tiwmor, ac ati, tra bod imiwnedd yn cyfeirio at allu'r corff i ymateb i'r antigenau hyn.

Gellir dangos y berthynas rhwng antigenau ac imiwnedd gyda throsiad syml: Yn union fel ymarfer corff mae angen digon o hyfforddiant ac atchwanegiadau maethol, mae gwella imiwnedd hefyd yn dibynnu ar gysylltiad dro ar ôl tro ag antigenau a'r celloedd imiwnedd cyfatebol a'r moleciwlau imiwnedd. cynnyrch. Pan fydd y system imiwnedd yn dod ar draws antigen, mae'n ymosod trwy gynhyrchu gwrthgyrff penodol, neu gelloedd imiwn, ynghyd â chelloedd cof i'n hamddiffyn rhag ail-heintio.

Mae gwyddoniaeth wedi cadarnhau y gall datblygu arferion byw a bwyta da helpu i wella imiwnedd. Er enghraifft, gall cadw'n lân, peidio ag ysmygu, ymarfer corff cymedrol ac arferion cysgu helpu i leihau ymlediad antigenau fel bacteria a firysau. Ar yr un pryd, gall bwyta rhai bwydydd sy'n llawn gwrthocsidyddion, fitaminau a mwynau, fel llysiau a ffrwythau, grawn cyflawn, a physgod, hefyd helpu i wella imiwnedd.

Yn fyr, mae'r berthynas rhwng antigen ac imiwnedd yn agos iawn. Dim ond trwy gyswllt dro ar ôl tro ag antigenau ac arferion byw priodol y gellir gwella imiwnedd yn barhaus, a gellir atal a thrin afiechydon amrywiol. Felly, dylem gynnal agwedd gadarnhaol a datblygu arferion byw da i amddiffyn ein hunain rhag afiechydon. Gellir gweld bod angen inni wella ein himiwnedd. Gall Cistanche ein helpu i wella ein imiwnedd, gan fod Cistanche yn gyfoethog mewn amrywiaeth o sylweddau gwrthocsidiol, megis fitamin C, carotenoidau, ac ati Gall y cynhwysion hyn chwilota radicalau rhydd a lleihau straen ocsideiddiol, Gwella ymwrthedd y system imiwnedd.

Cliciwch atodiad cistanche deserticola

Er mwyn mesur y lefelau IgG swIAV-benodol a achosir gan frechu a her, cymerwyd serwm moch ar ôl y brechiad cyntaf (diwrnod 20) a'r ail (diwrnod 30), a chyn necropsi (diwrnod 36).

Cafodd firysau wedi'u puro - propiolactone-anweithredol SD435 (1 µg/mL), a SD467 (2 µg/mL), wedi'u gwanhau mewn byffer cotio carbonad/bicarbonad, (pH 9.6) eu cymhwyso i blatiau ffynnon Immulon ar 1{{{} 12}}0 µL/wel (Thermo Labsystems, Ottawa, ON, Canada, 3655) a'i ddeor dros nos am 4 ◦C. Ar ôl deori dros nos, golchwyd y platiau wedi'u gorchuddio bedair gwaith gyda TBST (0.1 M Tris, 0.17 M NaCl, a 0.05 y cant Tween 20), yr ychwanegwyd gwanediadau cyfresol pedwar-plyg o'r serwm neu BALF ato y plât yn ddyblyg, ac yna deoriad dwy awr ar dymheredd ystafell. Ychwanegwyd serwm ar wanediad cychwynnol o 1:10, ac ychwanegwyd BALF heb ei wanhau. Roedd samplau o sera rheoli cadarnhaol a ddiffiniwyd yn flaenorol a'r rheolaethau negyddol priodol, serwm, a BALF o foch heb eu brechu mewn astudiaeth flaenorol yn cael eu rhedeg ar bob plât [14].

Golchwyd y platiau bedair gwaith gyda TBST, ac ar ôl hynny gwrthgorff puro gwrth-moch gafr IgG (H plws L) affinedd wedi'i labelu â phosphatase (1:5000) (Sigma Aldrich, SAB3700435) neu IgA gwrth-fochyn llygoden (Serotec, MCA658) ( 1:300) wedi'i wanhau mewn TBST ei ychwanegu a'i adael i ddeor ar dymheredd ystafell am awr. Datblygwyd yr ELISAs IgA trwy ychwanegu gwrthgyrff IgG (H plws L) gwrth-lygoden gafr biotinylated (CALTAG, Burlingame, CA, UDA, M30015) a hydoddiant ffosffatas alcalïaidd streptavidin (Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA) am awr. ar dymheredd ystafell.

Yn dilyn deori, golchwyd platiau IgG ac IgA bedair gwaith gyda TBST, y mae swbstrad ffosffad p-nitrophenyl (PNPP) [10 mg/mL p-nitrophenyl phosphate di(tris) halen grisialaidd (Sigma-Aldrich) iddo , 1 y cant diethanolamine (Sigma-Aldrich), 0.5 mg / mL MgCl2, a pH 9.8] (1 mg / mL) ei ychwanegu a'i ddeor ar dymheredd ystafell am ddwy awr.

Ataliwyd yr adwaith trwy ychwanegu 0.3 M asid ethylenediaminetetraacetig (EDTA), a darllenodd y platiau mewn sbectroffotomedr ar 405 nm gyda chyfeirnod o 490 nm. Diffiniwyd titer y sampl fel y gwanhad uchaf lle'r oedd OD y sampl hwnnw yn uwch na'r toriad diffiniedig (OD cymedrig sampl negyddol hysbys ynghyd â dwywaith y gwyriad safonol).

2.6. Assay Niwtraleiddio Feirws (VN).

Cafodd celloedd MDCK (3.5 × 104 ) eu platio i mewn i 96-blatiau ffynnon. Cafodd serwm a BALF eu hanactifadu gan wres ar 56 ◦C am 30 munud. Ychwanegwyd gwanediadau deublyg o'r serwm a BALF at y plât mewn pedwarplyg, a deorwyd 60 µL o serwm gwanedig neu BALF gyda chyfaint cyfartal o SD435 neu SD456 yn cynnwys 100 TCID50 ar 37 ◦C am 1 awr. Yna ychwanegwyd 100 µL o'r gymysgedd at y celloedd MDCK, a dogfennwyd yr effaith cytopathogenig (CPE) ar 48 awr a 72 awr ar ôl yr haint (pi). Y titer gwrthgyrff niwtraliad oedd y gwanhad uchaf o bob sampl serwm a oedd yn amddiffyn y celloedd yn llwyr rhag CPE mewn o leiaf 2 allan o 4 ffynnon.

2.7. Penderfyniad firaol

Ar ôl eu casglu, rhoddwyd y samplau ysgyfaint ar rew ar unwaith a'u rhewi ar −80 ◦C nes eu prosesu. Ar gyfer prosesu, cafodd pob meinwe ysgyfaint ei bwyso ac ychwanegwyd crynodiad o 10 y cant (w/v) o MEM wedi'i ategu â gwrthfiotig-antimycotig 1 × (Thermo Fisher Scientific, 15240-062). Cafodd meinwe'r ysgyfaint ei homogeneiddio yn y TissueLyser II (Qiagen, Hilden, yr Almaen) ar 30 Hz am 5 munud, ac yna centrifugation ar 5000 × g am 10 munud ar 4 ◦C. Mae'r supernatant homogenized ei gasglu a'i storio ar −80 ◦C nes dadansoddiad pellach. Cafodd y swabiau trwynol eu vortexed am 15 eiliad a'u centrifugio ar 1600 × g am 25 munud ar 4 ◦C. Casglwyd y supernatants a'u storio ar −80 ◦C nes dadansoddiad pellach. Pennwyd y titers firaol gan assay TCID50 ar gyfer yr ysgyfaint ac RT-PCR meintiol ar gyfer y swabiau trwynol.

2.8. Echdynnu RNA a RT-PCR meintiol (qRT-PCR)

Er mwyn pennu lefelau RNA firaol o SD467 a SD435 yn y swabiau trwynol ar ôl yr her, perfformiwyd qRT-PCR. Gwnaed cromlin safonol gan ddefnyddio RNA a dynnwyd o SD435 a SD467 o titer hysbys. Yn gryno, defnyddiwyd y RNeasy Plus Mini Kit (Qiagen, Toronto, ON, Canada, 74136) i echdynnu vRNA o 200 µL o olchi trwynol. Troswyd RNA i cDNA gan ddefnyddio'r primer ffliw cyffredinol Uni12 a SuperScript III Transcriptase (Invitrogen, Burlington, ON, Canada) [19]. Perfformiwyd qPCR yn driphlyg ar system PCR Amser Real StepOnePlusTM (Applied Biosystems, CA, UDA) gyda'r Power SYBR Green PCR Master Mix (Biosystemau Cymhwysol), 5 µL cDNA, ac 1 µL o preimio ymlaen a gwrthdroi 10µM. Roedd adweithiau PCR yn cael eu rhedeg ar dymheredd anelio o 58 ◦C am 40 cylch. Mae pob dilyniant o preimwyr qPCR ar gael ar gais.

2.9. Dadansoddiad Ystadegol

Perfformiwyd dadansoddiad ystadegol gan ddefnyddio meddalwedd GraphPad Prism 8. Defnyddiwyd profion di-barametrig Mann-Whitney a Kruskal-Wallis. Mae gwahaniaethau sylweddol yn cael eu dynodi gan *(p < 0.05), ** (p < 0.01), *** (p < 0.001) , neu **** (p < 0.0001). ns=ddim yn arwyddocaol.

3. Canlyniad

3.1. Roedd brechu â'r brechlyn Deufalent yn Amddiffyn rhag Unigeddau Clinigol Newydd

Fe wnaethom fesur yr ymateb corfforol i firysau her yn ogystal ag atgynhyrchu firaol yn y llwybr anadlol i asesu'r amddiffyniad a ddarperir gan y brechlyn deufalent yn erbyn yr unigion clinigol newydd hyn. Cofnodwyd y tymheredd yn ddyddiol am bum niwrnod ar ôl her feirws ym mhob grŵp. Dangosodd moch a gafodd eu brechu ffug a'u herio â SD435 (H3N2) (MEM/SD435) neu SD467 (H1N2) (MEM/SD467) bigyn tymheredd nodweddiadol ar ddiwrnod 1 her ôl-feirws, gyda thymheredd canolrif o 40.6 ◦C a 41.1 ◦C a 41.1 ◦C a 41.1 ◦C. C, yn y drefn honno. Ni welwyd y pigyn hwn yn y grwpiau brechu a heriwyd gyda SD435 (Deufalent/SD435) neu SD467 (Deufalent/SD467), a oedd â thymheredd canolrif o 39.4 ◦C a 39.6 ◦C, yn y drefn honno. Ar ddiwrnodau 2-5 ar ôl yr her, roedd gan grwpiau wedi'u brechu a heb eu brechu dymereddau o gwmpas 39 ◦C (Ffigur 2A).

Bum diwrnod ar ôl yr her, cafodd pob mochyn ei necropsi, gyda'r ysgyfaint yn cael eu tynnu i mewn i'r toto a'u dadansoddi i fesur faint o friwiau oedd yn bresennol. Dangosodd y grŵp Deufalent/SD435 ychydig iawn o friwiau, os o gwbl, gyda chanolrif o 0.65 y cant o gyfanswm briwiau ysgyfaint. Roedd gan y grŵp MEM/SD435 briwiau sylweddol uwch na'i gymar wedi'i frechu, gyda chanolrif o 5.1 y cant (p=0.0025) (Ffigur 2B). Yn y grŵp Deufalent/SD467, roedd gan bump o bob saith mochyn symiau isel o friwiau (<2%), one had minor lesions (3.75%), and one outlier had high lesions (31%), with a group median of 1.9%. Compared with the vaccinated group, the MEM/SD467 group had a higher degree of lesions with a median of 4.55% (p = 0.0417) (Figure 1C).

Yn yr ysgyfaint, roedd gan y grwpiau Deufalent/SD435 a Deufalent/SD467 ill dau lefelau isel o'r firws, gyda chyfartaleddau o 8.6 PFU/mL/gr a 3.0 PFU/mL/gr, yn y drefn honno. I'r gwrthwyneb, roedd gan grwpiau MEM/SD435 a MEM/SD467 symiau uwch o firws, gyda chyfartaleddau o 656.1 a 9118.2 PFU/mL/gr, yn y drefn honno (p=0.0025 ar gyfer y ddau) (Ffigur 3A, B). Gwelwyd tueddiadau tebyg yn y swabiau trwynol. Yn y grŵp Deufalent/SD435, roedd y titrau trwynol yn isel ar ddiwrnodau 1, 3, a 5 ar ôl yr her (dpc), ond yn y grŵp MEM/SD435 roedd titers ychydig yn uwch ac yn cynyddu wrth i ddyddiau fynd yn eu blaenau (ns) (Ffigur 3C). Yn y grŵp Deufalent/SD467, roedd y lefelau trwynol hefyd yn isel, ar gyfartaledd yn is na 5 PFU/mL ar ddiwrnodau 1 a 5, a 10.0 PFU/mL ar ddiwrnod 3 ar ôl yr her. Roedd y lefelau yn uwch yn y grŵp MEM/SD467 bob dydd, gyda chyfartaledd o 4123.6 PFU/mL/gr ar 1dpc (p=0.0278), 77233.1 PFU/mL/gr (p=0.0009) ar 3dpc, a 65.2 PFU/mL/gr ar 5dpc (ns) (Ffigur 3D).

Ar y cyfan, mae'r canlyniadau hyn yn awgrymu bod y brechlyn deufalent yn cynnig amddiffyniad sylweddol rhag straeniau her, gan leihau briwiau ar yr ysgyfaint ac atgynhyrchu firaol sy'n gysylltiedig â haint gyda'r ddau ynysiad swIAV hyn yn yr ysgyfaint a'r trwyn.

3.2. Mae'r Brechlyn Deufalent yn Ysgogi Ymatebion Imiwn yn erbyn Straenau Her

Fe wnaethom fesur yr ymateb gwrthgyrff yn y serwm a'r ysgyfaint penodol i'r ddau straen her ar ôl brechiad hwb cysefin gyda'r brechlyn deufalent. Casglwyd serwm o foch ar ôl y brechlyn cyntaf (diwrnod 2{{0) ac ar ôl yr ail frechlyn (diwrnod 30). Defnyddiwyd firysau her SD435 (H3N2) a SD467 (H1N2) fel antigenau dal i fesur ymateb gwrthgyrff IgG firws-benodol yn y serwm. Gyda SD435, nid oedd gwahaniaeth arwyddocaol rhwng titers gwrthgyrff yn y MEM a'r grwpiau brechu deufalent ar ôl y brechiad cyntaf (diwrnod 20). Fodd bynnag, yn erbyn SD467 roedd titers gwrthgyrff yn sylweddol uwch yn y grŵp a frechwyd ar ddiwrnod 20 (p=0.0321). Ar ôl yr ail frechlyn (diwrnod 31), roedd titers gwrthgyrff yn sylweddol uwch yn y grŵp a frechwyd yn erbyn SD435 a SD467 nag yn y grwpiau brechlyn ffug MEM (p < 0.0001) (Ffigur 4A, B). Yn benodol, yn erbyn antigen dal SD435, roedd titrau IgG serwm yn y grŵp brechu ffug MEM yn 52 ar gyfartaledd ar ddiwrnodau 20 a 30, tra roeddent yn 311 (diwrnod 20) a 4852 (diwrnod 30) yn y grŵp brechlyn deufalent (Ffigur 3A). Yn erbyn SD467, roedd titers serwm IgG yn y grŵp MEM ffug a frechwyd yn 39 (diwrnod 20) a 38 (diwrnod 30), tra yn y grŵp brechlyn deufalent, roeddent yn 219 (diwrnod 20) a 3509 (diwrnod 30) (Ffigur 3B).

Gwelwyd tueddiadau tebyg wrth fesur titers gwrthgyrff niwtraleiddio yn y serwm yn erbyn y ddau straen her. Unwaith eto, nid oedd unrhyw wahaniaeth arwyddocaol rhwng y titers gwrthgyrff niwtraleiddio yn y MEM a grwpiau brechu deufalent yn erbyn SD435 ar ôl un dos o'r brechlyn (diwrnod 20) ​​(Ffigur 5A, B). Yn erbyn SD467, roedd lefelau gwrthgyrff yn sylweddol uwch ar ddiwrnod 20, ar ôl un brechlyn (p=0.0069). Yn erbyn y ddau firws, bu cynnydd mewn titers gwrthgyrff yn y grwpiau brechlyn deufalent ar ôl yr ail ddos ​​ar ddiwrnod 30) (p < 0.0001). Heriwyd y teitrau yn y grŵp brechiadau ffug MEM gyda SD435 ar gyfartaledd 1 (diwrnod 20) a 3 (diwrnod 30), tra bod titers yn y grŵp deufalent ar gyfartaledd yn 10 (da20) a 77 (diwrnod 30) (Ffigur 5A). Roedd teitrau yn y grŵp brechu ffug MEM a heriwyd gyda SD467 ar gyfartaledd yn 0 (diwrnod 20) a 2 (diwrnod 30), tra bod y titrau yn y grŵp brechlyn deufalent ar gyfartaledd yn 10 (diwrnod 20) a 54 (diwrnod 30) (Ffigur 5B).

Ar ôl necropsi (diwrnod 36), casglwyd BALF o bob un o'r moch fel y gellid mesur lefelau gwrthgyrff yn yr ysgyfaint. Defnyddiwyd firysau her SD435 a SD467 fel antigenau dal i fesur yr ymateb IgA ac IgG sy'n benodol i firws. Yn erbyn SD435, roedd lefelau IgA yn y grwpiau brechlyn ffug MEM yn 17 ar gyfartaledd, tra bod y lefelau yn y grŵp brechlyn deufalent yn sylweddol uwch, ar gyfartaledd o 95 (p=0.0014) (Ffigur 6A). Ar gyfer SD467, roedd lefelau IgA yn 18 ar gyfartaledd yn y grŵp brechlyn ffug ac yn sylweddol uwch, sef 158 yn y grŵp brechlyn deufalent (p=0.0185) (Ffigur 6B). O ran IgG, roedd y titers yn erbyn SD435 yn y grŵp brechlyn ffug MEM ar gyfartaledd yn 3, tra yn y grŵp deufalent, roeddent yn sylweddol uwch ar gyfartaledd o 138 (p < 0.0001) (Ffigur 6C). Roedd gwrthgyrff IgG yn erbyn SD467 yn 16 ar gyfartaledd yn y grwpiau brechlyn ffug MEM, ond yn y grŵp brechlyn deufalent, roeddent yn sylweddol uwch, ar gyfartaledd o 259 (p < 0.0001) (Ffigur 6D).

O ran niwtraleiddio gwrthgyrff yn y BALF, roedd y tueddiadau yn debyg i'r rhai a welwyd yn IgA ac IgG ELISAs. Yn erbyn SD435, roedd niwtraleiddio titers gwrthgyrff yn anganfyddadwy yn y grwpiau brechlyn ffug MEM, ac roeddent yn sylweddol uwch ar gyfartaledd, sef 13.2 yn y grŵp brechlynnau deufalent (p < 0.{7}}001) (Ffigur 7A). Yn yr un modd, roedd titrau gwrthgyrff penodol i SD467 ar gyfartaledd yn 0.7 yn y grwpiau brechlyn ffug MEM ac roeddent yn sylweddol uwch yn y grŵp brechlyn deufalent gyda titr cyfartalog o 10.9 (p=0.0002) (Ffigur 7B). Gyda'i gilydd, mae'r data hwn yn dangos bod dau ddos ​​​​o'r brechlyn deufalent yn achosi ymateb digrif systemig cryf, yn ogystal ag ymateb imiwn lleol yn yr ysgyfaint yn erbyn y ddau unigyn clinigol anhomologaidd hyn.

4. Trafodaeth

Fe wnaethom ddangos yn flaenorol bod firysau sy'n ddibynnol ar elastase SD191-R342V a SD69.K345V wedi'u gwanhau'n llwyr ac yn anfeirysol mewn moch a bod dau frechiad gyda'r LalV deufalent hwn wedi ennyn ymateb imiwn cadarn ac yn darparu amddiffyniad rhag haint â SD191 homologaidd ( H1N2) a SD69 (H3N2) straen [14). Yn yr astudiaeth gyfredol hon, roeddem am brofi a fyddai’r brechlyn deufalent yn dal i fyny in vivo yn erbyn unigion clinigol mwy diweddar sydd wedi mynd trwy drifft antigenig. Mae SD467, fel SD191, yn aelod o'r grŵp antigenig Ho sydd wedi dod i'r amlwg yng Nghanada, ond mae wedi cael nifer o dreigladau mewn safleoedd antigenig allweddol (12,15].Yn yr un modd, mae SD435 yn cynrychioli clwstwr H3N2 IV-E sy'n bresennol yng ngorllewin Canada ac sy'n meddu ar amnewidiadau asid amino lluosog mewn safleoedd antigenig H3 allweddol o'r rhai sy'n bresennol yn SD69 (17].

Fe wnaeth yr LAlV deufalent leihau briwiau mewn moch wedi'u brechu yn sylweddol pan heriwyd naill ai SD435 (H3N2) neu SD467 (H1N2) ac atal cynnydd mewn tymheredd a welwyd mewn grwpiau undydd a gafodd eu brechu MEM (ffug) ar ôl yr her. Arweiniodd hefyd at ostyngiad mewn dyblygu firaol o'r ddau straen yn yr ysgyfaint a gostyngiad o SD467 (H1N2) yn y swabiau trwynol. Yn ddiddorol, roedd titrau trwynol SD435 (H3N2) yn isel mewn grwpiau wedi'u brechu a heb eu brechu, er gwaethaf dulliau samplu union yr un fath, sy'n awgrymu efallai nad oes gan y straen hwn gymaint o dropiaeth ar gyfer y darnau trwynol. O ran y mochyn allanol yn y Grŵp a gafodd sgôr uchel o friw yr ysgyfaint o 31, nid oedd mesuriadau tymheredd yn dangos unrhyw bigyn yn yr her, ac roedd y lefelau firws yn yr ysgyfaint yn is na 10 PFU/g/mL. Roedd lefelau gwrthgyrff yn y serwm ac ymateb lleol yr ysgyfaint hefyd yr un fath ag ym mhob mochyn arall a frechwyd. Mae hyn yn ein harwain i ddyfalu nad oedd y briwiau'n gysylltiedig â ffliw. Datgelodd sero-ddadansoddiad fod ymateb imiwn cryf wedi'i osod yn erbyn y ddau straen ar ôl dau ddos ​​o'r brechlyn a phrofodd yr un peth yn wir o ran dadansoddiad lleol yn yr ysgyfaint. Mae glycoproteinau arwyneb a gyfeirir gan wrthgyrff yn hollbwysig wrth amddiffyn rhag haint IAV, felly mae lefel uchel y gwrthgyrff niwtraleiddio yn ogystal â lgG a lgA a geir mewn moch wedi'u brechu yn cefnogi'r amddiffyniad a welir yn vivo [20].

Brechlynnau firws anweithredol cyfan (WIV) yw'r rhai mwyaf cyffredin sydd ar gael ar gyfer swinelly fformiwleiddio gyda chymhorthion cynorthwyol, maent yn cael eu hystyried yn ddull diogel gan nad oes unrhyw risg o ailsortment gyda straen sy'n cylchredeg. Fodd bynnag, maent yn darparu effeithiolrwydd cyfyngedig yn erbyn straeniau nad ydynt yn cyfateb a dangoswyd eu bod yn arwain at anhwylder anadlol uwch sy'n gysylltiedig â brechlyn (VAERD) pan gânt eu defnyddio yn erbyn straeniau nad ydynt yn cyfateb. Mae eu heffeithiolrwydd hefyd yn lleihau ym mhresenoldeb gwrthgyrff sy'n deillio o famau (MDAs) [4]. Mae'r rhai sydd ar gael yn fasnachol yng Ngogledd America yn cynnwys FluSure XP®, sydd ar gael fel fformiwleiddiad tetravalent yn UDA gyda chlystyrau H1N1, H1N2, a H3N2 IV-A ac IV-B [21]. Mae fformiwleiddiad hŷn o Flusure XP® ar gael yng Nghanada gyda dau straen o H1N1 ac un straen H1N2, wedi'u hynysu rhwng 2000 a 2005 [22]. Yn y ddwy wlad yng Ngogledd America, mae FluSure® Pandemic ar gael, brechlyn monofalent sy'n cynnwys y straen H1N1pdm09, yn ogystal â Pneumostar SIV Complete (Elanco, Greensboro, North Carolina, US Inc.), sy'n cynnwys H1N1, H1N2, a H3N2, a Pneumostar SIV, gyda straen isdeip H1N1 a H3N2 (GOC, USDA) [23,24]. Mae'r brechlynnau hyn sydd ar gael yn fasnachol yn cyfrif am tua 50 y cant o'r brechlynnau ffliw moch yng Ngogledd America, ac mae'r 50 y cant arall o frechiadau yn frechlynnau awtogenaidd [4].

O ran llwyfannau brechlyn amgen, trwyddedwyd brechlyn gronynnau replicon ailgyfunol yn deillio o alffafeirws yn UDA [4]. Mae'r platfform brechlyn hwn yn defnyddio alffafeirws gyda genom wedi'i newid, lle mae genyn o ddewis yn cymryd lle genynnau adeileddol firaol, gan wneud yr atgynhyrchu alffafeirws yn ddiffygiol. Mae'r RNA hwn yn hunan-ddyblygu, felly mae'r llwyfan brechlyn yn arwain at fynegiant uchel o'r genyn o ddiddordeb, ac ar gyfer ffliw, mae HA a niwcleoprotein (NP) wedi'u profi fel antigenau [25]. Mae astudiaethau wedi dangos bod defnyddio'r platfform hwn yn amddiffyn rhag heriau sy'n cyfateb i HA ac nad ydynt yn cyfateb yn antigenig, yn ogystal â straenau nad ydynt yn cyfateb i NP, er nad oedd y platfform yn gallu amddiffyn rhag presenoldeb MDAs.

Cymeradwywyd yr LAIV cyntaf ar gyfer ffliw moch gan Adran Amaethyddiaeth yr Unol Daleithiau (USDA) yn 2017. Mae Ingelvac Provenza™ yn frechlyn H3N2 a H1N1 deufalent, gyda'r HA a NA o ddau fath wedi'u hynysu yn UDA, a fynegir ar asgwrn cefn TX98, gwanhau trwy gwtogi'r protein anstrwythurol (NS1) [14,26]. Mae LAIVs yn dynwared haint naturiol ac yn arwain at fwy o imiwnedd mwcosaidd yn y llwybrau anadlu uchaf pan gaiff ei ddosbarthu'n fewnnasol. Lle mae brechlynnau anweithredol yn arwain yn bennaf at gynhyrchu gwrthgyrff IgG systemig, gall brechlynnau byw wedi'u gwanhau achosi IgA mwcosaidd yn y llwybr anadlol, yn ogystal â mwy o ymateb trwy gyfrwng celloedd oherwydd amlygiad y system imiwnedd i broteinau ffliw mewnol, sy'n cynnwys mwy o T. epitopau cell [27]. Mae hyn yn arwain at well amddiffyniad rhag straeniau nad ydynt yn cyfateb.

Maent wedi dangos amddiffyniad rhannol ym mhresenoldeb MDAs. Mae gwrthgyrff IgG cyfan yn fwy cyffredin yn y llwybr anadlol isaf, ac mae gwrthgyrff IgA polymerig yn bennaf yn llwybr anadlol uchaf moch, yn fwyaf aml fel dimers [28]. Mae'r gwrthgyrff hyn yn cael eu cynhyrchu'n lleol ac yn cael eu cludo ar draws yr haen gell epithelial lle maent yn aros yn y mwcws, gyda chymorth cydran secretory sy'n gwrthsefyll diraddio gan proteasau [28,29]. Gwrthgyrff IgA yw llinell amddiffyn gyntaf y system imiwnedd addasol yn erbyn pathogenau sy'n dod i mewn, gan weithio i rwystro ymlyniad firaol i dderbynyddion asid sialig [30]. Mae gwrthgyrff IgA polymerig yn fwy cyffredinol traws-adweithiol na gwrthgyrff IgG monomerig, o bosibl oherwydd rhwymiad amlfalent [31]. Mae astudiaethau hefyd wedi dangos y gall y gwrthgyrff hyn atal rhyddhau IAV sydd newydd ei ffurfio o gelloedd heintiedig yn llawer mwy effeithlon nag IgG neu IgA monomerig, sydd i'w gael mewn serwm mochyn, sy'n awgrymu bod strwythur polymerig IgA yn fanteisiol ar gyfer croesgysylltu'r epil firaol. i HA wedi'i fynegi ar wyneb y gell heintiedig [31-33]. Felly mae'r ymateb gwrthgorff IgA lleol yn rhan annatod o'r amddiffyniad rhag haint ag IAV ac awgrymwyd ei fod yn gydberthynas o amddiffyniad mewn pobl [34].

Fodd bynnag, y risg gyda LAIV yw'r posibilrwydd o ailsortio gyda straenau sy'n cylchredeg. Canfu astudiaeth ffylogenetig yn UDA straenau newydd mewn cylchrediad a oedd wedi ail-wneud y mathau o frechlyn a gynhwyswyd yn Ingelvac Provenza™ [26]. Mae'r llwyfan LAIV sy'n ddibynnol ar elastase yn lleihau'r risg hon, gan fod y protein elastase yn brin iawn yn llwybr anadlol y mochyn, felly mae ailadrodd firysau brechlyn yn gyfyngedig iawn, yn ogystal â'r amserlen ar gyfer ailsortio. Bydd astudiaethau yn y dyfodol yn cynnwys gwerthuso risg ailsortio'r brechlyn deufalent hwn, yn ogystal â sut mae'r brechlyn hwn yn dal i fyny ym mhresenoldeb MDAs. Byddai hefyd yn ddiddorol profi ymateb cell-mediated y brechlyn hwn, gan mai dyma un o brif fanteision LAIV. I gloi, roedd yr LAIV deufalent-ddibynnol ar elastase yn ymestyn amddiffyniad i unigion clinigol newydd a ddarganfuwyd yng ngorllewin Canada, a byddai'n llenwi rhai bylchau yn y farchnad brechlyn ffliw moch.

Cyfraniadau Awdur:

Cysyniadoli, YZ; methodoleg, YZ, ac ALl; dadansoddiad ffurfiol, ALl; ymchwiliad, ALl ac UB-C.; adnoddau, DC; ysgrifennu — paratoi drafft gwreiddiol, ALl; ysgrifennu— adolygu a golygu, YZ, UB-C., a SD; goruchwyliaeth, YZ; caffael cyllid, YZ Mae pob awdur wedi darllen a chytuno i'r fersiwn gyhoeddedig o'r llawysgrif.

Ariannu:

Ariannwyd yr ymchwil hwn gan y Gronfa Datblygu Amaethyddiaeth (ADF), Gweinyddiaeth Amaethyddiaeth Saskatchewan. Mae LA yn cael ei gefnogi'n rhannol gan Ysgoloriaeth Brechlyn ac Imiwnotherapiwteg (V&I) o Ysgol Iechyd y Cyhoedd, Prifysgol Saskatchewan. Mae VIDO yn derbyn cyllid gweithredol gan Lywodraeth Saskatchewan trwy Innovation Saskatchewan a'r Weinyddiaeth Amaeth a chan Sefydliad Arloesedd Canada trwy'r Mentrau Gwyddoniaeth Mawr ar gyfer ei gyfleuster CL3 (InterVac).

Datganiad y Bwrdd Adolygu Sefydliadol:

Ddim yn berthnasol.

Datganiad Argaeledd Data:

Mae data a dadansoddiadau'r astudiaeth hon i gyd yn cael eu hadrodd yn yr erthygl hon.

Diolchiadau:

Hoffem ddiolch i filfeddygon a thechnegwyr anifeiliaid VIDO am berfformio'r holl waith anifeiliaid ar gyfer ein treialon anifeiliaid. Cyhoeddir y gwaith hwn gyda chaniatâd cyfarwyddwr VIDO fel cyfres llawysgrif #1005.

Gwrthdaro Buddiannau:

Nid yw'r awduron yn datgan unrhyw wrthdaro buddiannau.

Cyfeiriadau

Webster, RG Firws y ffliw: Trosglwyddiad rhwng rhywogaethau a pherthnasedd i ymddangosiad y pandemig dynol nesaf. Arch. Firol. Suppl. 1997, 13, 105–113. [PubMed]

2. Li, Y. ; Robertson, I. Epidemioleg ffliw moch. Anim. Dis. 2021, 1, 21. [CrossRef] [PubMed]

3. Donovan, T. Rôl Ffliw ar Berfformiad Tyfu Moch; Prifysgol Minnesota: Minneapolis, MN, UDA, 2005.

4. Gracia, JCM; Pearce, DS; Masic, A. ; Balasch, M. Ffliw Feirws Mewn Moch: Epidemioleg, Heriau a Strategaethau Brechu. Blaen. Vet.-Sci. 2020, 7, 647. [CrossRef] [PubMed]

5. Ma, W. Firws ffliw moch: Statws a her gyfredol. Firws Res. 2020, 288, 198118. [CrossRef]

6. Suzuki, Y.; Ito, T. ; Suzuki, T.; Holland, AG; Siambrau, TM; Kiso, M.; Ishida, H.; Kawaoka, Y. Rhywogaethau Asid Sialaidd fel Penderfynydd yr Ystod Lletyol o Feirysau Ffliw A. J. Firol. 2000, 74, 11825–11831. [CrossRef]

7. Haul, H. ; Xiao, Y.; Liu, J. ; Wang, D.; Li, F. ; Wang, C. ; Li, C. ; Zhu, J.; Cân, J.; Haul, H. ; et al. Firws ffliw moch H1N1 tebyg i adar Ewrasiaidd cyffredin gyda genynnau firaol pandemig 2009 yn hwyluso haint dynol. Proc. Natl. Acad. Sci. UDA 2020, 117, 17204–17210. [CrossRef]

8. Henritzi, D.; Petric, PP; Lewis, NS; Graaf, A. ; Pessia, A.; Starick, E. ; Breithaupt, A. ; Strebelow, G. ; Luttermann, C.; Parker, LMK; et al. Mae Gwyliadwriaeth o Boblogaethau Moch Domestig Ewropeaidd yn Nodi Cronfa Ddŵr Ddatblygol o Feirysau Ffliw Moch A a Allai Milhaint. Microb Host Cell 2020, 28, 614–627.e6. [CrossRef]

9. Vincent, AL; Ma, W. ; Lager, KM; Janke, BH; Richt, JA Firysau ffliw moch: Persbectif Gogledd America. Adv. Firws Res. 2008, 72, 127–154.

10. Rajao, DS; Anderson, TK; Kitikoon, P.; Stratton, J.; Lewis, NS; Vincent, AL Esblygiad antigenig a genetig firysau ffliw H1 moch cyfoes yn yr Unol Daleithiau. Firoleg 2018, 518, 45–54. [CrossRef]

11. Mena, I. ; I Nelson, M.A.; Quezada-Monroy, F.; Dutta, J.; Cortes-Fernández, R.; Lara-Puente, JH; Castro-Peralta, F.; Cunha, LF; Trovão, NS; Lozano-Dubernard, B.; et al. Gwreiddiau pandemig ffliw H1N1 2009 mewn moch ym Mecsico. Elife 2016, 5, e16777. [CrossRef]

12. Nelson, MI; Culhane, MR; Trovão, NS; Patnayak, DP; Halpin, RA; Lin, X. ; Shilts, MH; Das, SR; Detmer, SE Ymddangosiad ac esblygiad firysau ffliw A (H1 ) mewn moch yng Nghanada a'r Unol Daleithiau. J. Gen. 2017, 98, 2663–2675. [CrossRef] [PubMed]

13. Chauhan, RP; Gordon, ML Adolygiad Systematig sy'n Dadansoddi Amlygrwydd a Chylchrediad Firysau Ffliw mewn Poblogaeth Moch Ledled y Byd. Pathogenau 2020, 9, 355. [CrossRef]

14. Landreth, A.S.; Detmer, S.; Gerdts, V. ; Zhou, Y. Mae brechlyn firws ffliw gwanedig deufalent byw yn amddiffyn rhag haint firaol H1N2 a H3N2 mewn moch. milfeddyg. Microbiol. 2020, 253, 108968. [CrossRef] [PubMed]

15. McCormick, K.; Jiang, Z.; Zhu, L.; Lawson, SR; Langenhorst, R.; Ransburgh, R.; Brunick, C. ; Tracy, MC; Hurtig, AD; Mabee, LM; et al. Adeiladu ac Imiwnogenigrwydd Gwerthusiad o Feirysau Ailgyfunol Ffliw A Sy'n Cynnwys Genynnau Hemagglutinin Chimerig Deillio o Feirysau Is-deip Ffliw A H1N1 sy'n Ddargyfeiriol yn Enetig. PLoS ONE 2015, 10, e0127649. [CrossRef] [PubMed]

For more information:1950477648nn@gmail.com