Trosglwyddiad Gweithredol O Gyfnod Cof Ofn O'r Ail-gydgrynhoi i Ddifodiant Trwy Atal Ailgydgrynhoi trwy ERK-Gyfryngol

Cyswllt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-bost:audrey.hu@wecistanche.com

Mae'radalw cof ofnyn achosi dwy broses cof cyferbyniol, hy, ailgyfnerthu a difodiant. Mae adalw byr yn cymell ailgyfnerthiad i gynnal neugwella cof ofn,tra y mae attaliad hirfaith yn diffodd y cof hwn. Er yr ymchwiliwyd i fecanweithiau ailgadarnhau a difodiant, nid yw'n hysbys o hyd sut mae cyfnodau cof ofn yn cael eu newid o ailgydgrynhoi i ddifodiant yn ystod adalw cof. Yma, rydym yn dangos bod proses drosglwyddo cof allgellog sy'n dibynnu ar kinase (ERK) sy'n dibynnu ar signal ar ôl adalw yn rheoleiddio'r broses o newid cyfnodau cof o ailgydgrynhoi i ddifodiant trwy atal sefydlu ailgyfnerthu mewn tasg osgoi ataliol (IA) mewn llygod gwrywaidd. Yn gyntaf, nodwyd y cyfnod cof pontio, sy'n canslo'r anwythiad o ailgadarnhau, ond sy'n annigonol ar gyfer caffael difodiant, ar ôl ailgydgrynhoi, ond cyn cyfnodau difodiant. Yn ail, dangosodd y cyfnodau ailgydgrynhoi, trosglwyddo a difodiant ar ôl adalw cof lofnodion moleciwlaidd a chellog gwahanol trwy brotein sy'n rhwymo elfen ymatebol cAMP (CREB) a ffosfforyleiddiad ERK yn yr amygdala, hippocampus, a cortecs rhagflaenol medial (mPFC). Dangosodd y cam ail-atgyfnerthu mwy o ffosfforyleiddiad CREB, tra bod y cyfnod difodiant yn dangos nifer o boblogaethau niwral gyda chyfuniadau amrywiol o ffosfforyleiddiad CREB a/neu ERK, yn y rhanbarthau ymennydd hyn. Yn ddiddorol, dangosodd y tri chyfnod cof, gan gynnwys y cyfnod pontio, actifadu ERK dros dro yn syth ar ôl ei adalw. Yn bwysicaf oll, roedd gwarchae ERK yn yr amygdala, hippocampus, neu mPFC yn y cyfnod cof pontio yn atal gwella cof IA a achosir gan ailgydgrynhoi. Mae'r arsylwadau hyn yn awgrymu bod llwybr signalau ERK yn mynd ati i reoleiddio'r broses o drosglwyddo'r cyfnod cof o ailgydgrynhoi i ddifodiant ac mae'r broses hon yn gweithredu fel switsh sy'n canslo ailgadarnhau ofn.cof.

Geiriau allweddol: ERK; difodiant;ofn cof; ailgadarnhau; trawsnewid

1Adran Biowyddoniaeth, Cyfadran y Gwyddorau Bywyd, Prifysgol Amaethyddiaeth Tokyo, Tokyo 156-8502, Japan, a

2Graddedig Ysgol Amaethyddiaeth a Gwyddorau Bywyd, Prifysgol Tokyo, Tokyo 113-8657, Japan

Datganiad o Arwyddocâd

Adalw cof ofnyn achosi dwy broses cof cyferbyniol; ailgadarnhau a difodiant. Mae ailgydgrynhoi yn cynnal/yn gwella cof ofn, tra bod difodiant yn gwanhau cof ofn. Mae'n parhau i fod yn anhysbys sut mae cyfnodau cof yn cael eu newid o ailgydgrynhoi i ddifodiant yn ystod adalw. Yma, fe wnaethom nodi proses trosglwyddo cof gweithredol sy'n gweithredu fel switsh sy'n atal ailgyfnerthu. Dangosodd y cyfnod pontio cof hwn gynnydd dros dro mewn ffosfforyleiddiad kinase allgellog a reoleiddir gan signal (ERK) yn yr amygdala, hippocampus, a cortecs rhagflaenol medial (mPFC). Yn ddiddorol, roedd ataliad o ERK yn y rhanbarthau hyn yn y cyfnod pontio yn atal y gwelliant cof osgoi ataliol (IA) trwy ailgyfnerthu. Mae'r canfyddiadau hyn yn awgrymu bod y broses cof pontio yn mynd ati i reoleiddio'r newid o gyfnodau cof ofn cof ofn trwy atal sefydlu ailgyfnerthu trwy actifadu llwybr signalau ERK.

Rhagymadrodd

Adfer cofnid yw’n broses oddefol ond yn hytrach yn broses ddeinamig sy’n caniatáu cynnal, cryfhau, gwanhau, neu newid/diweddaru cof gwreiddiol (Misanin et al., 1968; Schneider a Sherman, 1968; Lewis, 1979; Mactutus et al. , 1979; Gordon, 1981; Nader et al., 2000; Nader a Hardt, 2009; Dudai, 2012; Fukushima et al., 2014). Yn bwysig, mae cof ofn cyflyredig a adferwyd trwy ail-amlygiad byr i'r ysgogiad cyflyredig (CS) yn dod yn labile ac mae angen ailgyfnerthu mynegiant genynnau er mwyn ei gynnal neu ei wella (Nader et al., 2000; Dudai, 2002; Kida et al., 2002; Suzuki et al., 2004; Tronel et al., 2005; Fukushima et al., 2014). I’r gwrthwyneb, mae ail-amlygiad parhaus neu dro ar ôl tro i’r CS yn achosi difodiant cof, sy’n gwanhau cof ofn (Pavlov, 1927; Rescorla, 2001; Myers a Davis, 2002). Felly, yadalw cof ofnyn achosi dwy broses cof cyferbyniol, hy, ailgyfnerthu a difodiant, er bod y ddwy broses yn cael eu hysgogi gan ail-amlygiad i CS union yr un fath, ond maent yn amrywio yn ôl hyd yr ail-amlygiad i'r CS.

Nodwedd biocemegol gyffredin a hanfodol ailgydgrynhoi a difodiant yw'r gofyniad am fynegiant genynnau wedi'i gyfryngu â phrotein elfen-rhwymo elfen ymatebol cAMP (CREB) (Mamiya et al., 2009). Yn ddiddorol, rydym wedi dangos llofnodion moleciwlaidd, anatomig ac ymddygiadol cyferbyniol rhwng cyfnodau ailgydgrynhoi a difodiant cof ofn cyd-destunol (Suzuki et al., 2004; Mamiya et al., 2009). Mae blocio synthesis protein yn ystod y cyfnod ailgyfuno yn amharu ar y cof ofn gwreiddiol, tra bod rhwystro synthesis protein yn ystod y cyfnod difodiant yn methu â gwneud hyn, er bod y cof ofn cyd-destunol wedi'i ail-ysgogi. Mae'r gofyniad i ranbarthau'r ymennydd sy'n arddangos actifadu mynegiant genynnau wedi'i gyfryngu gan CREB yn amrywio rhwng ailgadarnhau a difodiant; mae ailgydgrynhoi yn dibynnu ar yr amygdala a'r hippocampus, tra bod difodiant yn dibynnu ar yr amygdala a'r cortecs rhagflaenol medial (mPFC). Fodd bynnag, mae cwrs amser actifadu CREB amygdaloid yn wahanol rhwng y cyfnodau ailgydgrynhoi a chof difodiant. Roedd yr arsylwadau hyn yn awgrymu nad yw'r cyfnodau ailgrynhoi a difodiant yn annibynnol, ond yn hytrach yn rhyngweithio â'i gilydd. Yn ddiddorol, mae astudiaethau diweddar wedi nodi ffenestr amser (cyfnod trawsnewid) sy'n dangos dim actifadu kinase allgellog a reoleiddir gan signal (ERK) yn yr amygdala ar ôl ailgyfuno, ond cyn y cyfnodau difodiant yn dilyn adalw cof ofn clywedol (Merlo et al., 2018 ). Gyda'i gilydd, mae'r canfyddiadau hyn yn awgrymu'r mecanweithiau posibl ar gyfer newid cyfnodau cof o ailgyfnerthu i ddifodiant yn ystod y cyfnod.adalw cof ofn. Mewn geiriau eraill, mae'n bosibl bod y broses trosglwyddo cof yn rheoleiddio'r switsh hwn yn weithredol.

Mewn tasg osgoi ataliaeth (IA), mae llygod yn cael sioc traed trydanol ar ôl iddynt fynd i mewn i adran dywyll o adran ysgafn a ffurfcofi osgoi'r adran dywyll. Yn flaenorol, trwy ddefnyddio'r dasg hon, gwnaethom ddangos y gellir gwahaniaethu rhwng y cyfnodau ailgyfuno a difodiant ar yr adeg pan fydd llygoden yn mynd i mewn i adran dywyll o adran golau yn ystod sesiwn ail-amlygiad (Fukushima et al., 2014). Felly, mae'r dasg hon yn caniatáu inni nodweddu llofnodion moleciwlaidd persbectif y cyfnodau atgyfnerthu a difodiant, mewn cyferbyniad â'r patrwm cyflyru ofn cyd-destunol clasurol lle mae adweithio cof ofn cyflyredig trwy ail-amlygiad i'r CS yn cychwyn ailgydgrynhoi a difodiant; mae ail-amlygiad byr (3 munud) i'r cyd-destun cyflyredig yn arwain at ailgyfnerthiad, tra bod ail-amlygiad hir (30 munud) neu ail-amlygiad dro ar ôl tro i'r cyd-destun hwn yn peri difodiant (Eisenberg et al., 2003; Pedreira a Maldonado, 2003; Suzuki et al., 2004; Lee et al., 2008; Mamiya et al., 2009). At hynny, canfuom fod y cof IA a adalwyd yn cael ei wella trwy ailgyfnerthu cof yn y dasg hon (Fukushima et al., 2014).

Deall y mecanwaith ar gyfer y trawsnewid o ailgydgrynhoi i ddifodiant yn ystod yadalw cof ofn, Anelwyd at nodi a nodweddu llofnodion moleciwlaidd, cellog ac ymddygiadol cyfnodau cydgrynhoi, trosglwyddo a difodiant cof IA. Fe wnaethom ddadansoddi actifadu CREB ac ERK yn yr amygdala, hippocampus, a mPFC yn y cyfnodau cydgrynhoi, trosglwyddo a difodiant ac archwilio rolau actifadu ERK yn y prosesau cof hyn.

Defnyddiau a Dulliau

Llygod Cynhaliwyd pob arbrawf yn unol â'r Canllaw ar gyfer Gofalu a Defnyddio Anifeiliaid Labordy (Cymdeithas Niwrowyddoniaeth Japan a Phrifysgol Amaethyddiaeth Tokyo). Cymeradwywyd yr holl arbrofion anifeiliaid a gynhaliwyd yn yr astudiaeth hon gan Bwyllgor Gofal a Defnydd Anifeiliaid Prifysgol Amaethyddiaeth Tokyo (awdurdodiad #280037). Perfformiwyd yr holl weithdrefnau llawfeddygol o dan anesthesia Nembutal a gwnaethpwyd pob ymdrech i leihau dioddefaint. Cafwyd llygod gwrywaidd C57BL/6N o Charles River. Roedd y llygod yn cael eu cadw mewn cewyll o bump neu chwech, yn cael eu cynnal ar gylchred golau/tywyll 12/12 h, ac yn caniatáu mynediad at fwyd a dŵr ad libitum. Roedd y llygod o leiaf wyth wythnos oed pan gawsant eu profi. Perfformiwyd profion yn ystod cyfnod ysgafn y cylch. Cynhaliwyd pob arbrawf yn ddall i gyflwr triniaeth y llygod.

Prawf IA Roedd y cyfarpar IA cam-drwodd (OHARA Pharmaceutical) yn cynnwys blwch gyda adrannau golau a thywyll ar wahân (y ddau yn 15.5 12.5 11.5 cm). Goleuwyd y compartment golau gan olau fflwroleuol (2500 lux; Fukushima et al., 2008, 2014; Zhang et al., 2011; Ishikawa et al., 2016). Cyn dechrau hyfforddiant IA, roedd y llygod yn cael eu trin yn unigol am 2 funud bob dydd am wythnos. Yn ystod y sesiynau hyfforddi, caniatawyd i bob llygoden gynefino â'r adran olau am 30 s, a chodwyd y drws gilotîn i ganiatáu mynediad i'r adran dywyll. Ystyriwyd bod hwyrni i fynd i mewn i'r adran dywyll yn fesur o gaffaeliad. Cyn gynted ag yr oedd y llygoden wedi mynd i mewn i'r adran dywyll, caewyd y drws gilotîn. Ar ôl 5 s, darparwyd sioc troed (0.2 mA) am gyfanswm cyfnod o 2 s (hyfforddiant). Am 24 awr ar ôl y sesiwn hyfforddi, gosodwyd y llygoden yn ôl yn y compartment golau nes iddi fynd i mewn i'r adran dywyll (cyfartaledd 459 6 15.49 s). Yn syth ar ôl i'r llygoden fynd i mewn i'r adran dywyll, caewyd y drws gilotîn ac arhosodd y llygoden yn yr adran dywyll am gyfnodau amrywiol o amser (0, 1, neu 10 munud) heb ergyd traed (ail-ysgogi). Aseswyd cof 48 h yn ddiweddarach [prawf cof hirdymor ôl-adweithiol (PR-LTM)] fel yr hwyrni trawsgroesi i'r llygoden fynd i mewn i'r adran dywyll pan gaiff ei disodli yn y compartment golau, fel wrth adweithio.

Ar gyfer yr arbrawf cyntaf, fe wnaethom archwilio effaith ataliad synthesis protein ar ôl adweithio (ail-amlygiad i'r adran dywyll am 0, 1, neu 10 min; Ffig. 1). Diddymwyd yr atalydd synthesis protein anisomycin (ANI; Wako) mewn halwynog (pH wedi'i addasu i 7.0-7.4 gyda NaOH). Hyfforddwyd y llygod fel y disgrifir uchod, ac ar 24 h yn ddiweddarach, cawsant gerbyd (VEH) neu ANI (150 mg / kg, ip) yn syth ar ôl ail-amlygiad i'r adran dywyll am 0, 1, neu 10 munud heb ergyd traed. (adweithiol). Ar y dos hwn, mae ANI yn atal .90 y cant o synthesis protein yn yr ymennydd yn ystod y 2 awr gyntaf (Flood et al., 1973). Am 48 awr ar ôl y sesiwn adweithio, cafodd llygod unigol eu gosod unwaith eto yn yr adran olau ac aseswyd hwyrni trawsgroesi.

Ar gyfer yr ail arbrawf [ffosphorylated CREB (pCREB) a phosphorylated ERK (pERK) immunohistochemistry; Ffigys. 2-5], fe wnaethom archwilio rhanbarthau'r ymennydd a gafodd eu hactifadu ar ôl ail-amlygiad i'r golau (nes i'r llygod fynd i mewn i'r adran dywyll, ail-amlygiad i'r adran dywyll am 0 mun) neu adran dywyll (ail- amlygiad i'r adran dywyll am 1 neu 10 mun). Rhannwyd y llygod yn bedwar Fukushima et al. · Pontio Cyfnodau Cof Ofn ar ôl Adalw J. Neurosci., Chwefror 10, 2021, • 41(6):1288-1300 • 1289groups. Ar 24 h ar ôl hyfforddi, roedd llygod unigol yn cael eu hail-agor i'r adran golau ac yna'n aros yn y compartment tywyll ar ôl eu mynediad o'r adran dywyll [ail-ysgogiad: 0 min yn y compartment tywyll, grŵp ailgyfnerthu (Recon); 1 mun, grŵp pontio (Tran); 10 mun, grŵp difodiant (Est)]. Ni ddychwelwyd grŵp arall o lygod i'r adran golau/tywyll [grŵp heb ei ailysgogi (NR)]. Yna cafodd y llygod eu hanestheteiddio gyda Nembutal (750 mg/kg, ip) ar 5, 15, neu 30 munud ar ôl adweithio.

Ar gyfer y trydydd arbrawf (micrinfusion o U{{2{0}} 126; Ffig. 6,7), fe wnaethom archwilio effeithiau ataliad ERK yn yr amygdala, hippocampus, neu mPFC ar ail-gydgrynhoi/gwella cof, trawsnewid, a difodiant. Diddymwyd yr atalydd MEK U0126 (Sigma-Aldrich) mewn hylif serebro-sbinol artiffisial sy'n cynnwys tri diferyn o Tween 80 (Sigma) mewn 2.5 ml o 7.5 y cant o dimethyl sulfoxide (Wako) a'i addasu i pH 7.4 gyda NaOH. Hyfforddwyd y llygod fel y disgrifir uchod, a 24 h yn ddiweddarach, fe'u gosodwyd yn ôl yn y compartment golau (adweithiol). Roedd y llygod yn microinfused gyda U0126 (1 mg) neu VEH i mewn i'r rhanbarthau ymennydd amrywiol yn syth ar ôl (Ffig. 6A, C, E-H, 7A-C) neu ar 30 munud ar ôl (Ffig. 6B, D) adweithio. Ar 48 awr ar ôl adweithio, rhoddwyd llygod unigol unwaith eto yn y compartment golau ac aseswyd hwyrni croesi (PR LTM). Gwnaethpwyd micro-arlifiadau i'r hipocampws a'r mPFC (0.5 ml) ar gyfradd o 0.25ml/munud. Gwnaed microinfusions i'r amygdala (0.2 ml) ar gyfradd o 0.1ml/munud. Gadawyd y caniwla pigiad yn ei le am 2 funud ar ôl micro-trwythiad ac yna dychwelwyd y llygod i'w cewyll cartref. Diddymwyd yr atalydd MEK SL327 (Santa Cruz Biotechnology) mewn dimethyl sulfoxide a'i wanhau â saline. Hyfforddwyd y llygod fel y disgrifir uchod, a 24 h yn ddiweddarach, gosodwyd llygod unigol yn ôl yn y compartment golau (adweithiol). Chwistrellwyd y llygod yn systemig gyda SL327 (10 neu 20 mg/kg) neu VEH yn syth ar ôl adweithio (Ffig. 7D-F). Ar 48 awr ar ôl adweithio, rhoddwyd llygod unigol unwaith eto yn y compartment golau ac aseswyd hwyrni croesi (PR-LTM).

Perfformiwyd immunohistochemistry fel y disgrifiwyd yn flaenorol (Mamiya et al., 2009; Suzuki et al., 2011; Zhang et al., 2011; Fukushima et al., 2014; Ishikawa et al., 2016; Hasegawa et al., 2019). Ar ôl anesthetization, darlifwyd pob llygod â 4 y cant o baraformaldehyd. Tynnwyd yr ymennydd, ei osod dros nos, ei drosglwyddo i swcros 30 y cant, a'i storio ar 4 gradd. Torrwyd rhannau coronaidd (30mm) mewn cryostat.

Ar gyfer staenio pCREB a pERK, cafodd adrannau sy'n arnofio'n rhydd eu trin ag 1 y cant H2O2 a'u deor dros nos gyda gwrthgorff gwrth-ffosffo-ffosffo-polyclonaidd cwningen (serine 133; S133); #{06-519 }}, Millipore) a/neu gwningen monoclonaidd gwrth-ffosffo-ERK1/2 (T202/Y204) gwrthgorff (1:300; #4370; Technoleg Signalau Cell) mewn toddiant blocio (hallt â byffer ffosffad ynghyd ag 1 y cant o albwmin serwm gafr, albwmin serwm buchol 1 mg/ml, a 0.05 y cant Triton X-100). Golchwyd yr adrannau â halwynog wedi'i glustogi â ffosffad a'u deor â IgG gwrth-gwningen asyn wedi'i gyfuno â rhuddygl poeth (1:500; Jackson ImmunoResearch) ar gyfer pCREB neu IgG gwrth-gwningen gafr cyfun peroxidase marchruddygl ar gyfer pERK am 1 h ar dymheredd yr ystafell. Cafodd signalau pCREB eu chwyddo gan biotin tyramid a'u delweddu gan ddefnyddio streptavidin wedi'i gyfuno â Alexa Fluor (Invitrogen). Cafodd signalau pERK eu chwyddo gyda TSA-FCM (Invitrogen). Cafodd yr adrannau eu gosod ar sleidiau a'u gorchuddio â chlipiau gan ddefnyddio cyfrwng mowntio (Millipore).

Perfformiwyd meintioli fel y disgrifiwyd yn flaenorol (Frankland et al., 2006; Fukushima et al., 2014; Mamiya et al., 2009; Zhang et al., 2011; Suzuki et al., 2008). Diffiniwyd strwythurau yn anatomegol yn ôl atlas Franklin a Paxinos (1997). Cafodd pob niwron imiwn-adweithiol eu cyfrif gan arbrofwr sy'n ddall i gyflwr y driniaeth

Canlyniadau

Nodweddu cyfnodau cof ar ôl adalw yn y dasg IA

Mae'r dasg IA yn ein galluogi i wahaniaethu yn y cyfnodau ailgyfuno a difodiant ar yr adeg pan fydd llygoden yn mynd i mewn i adran dywyll o adran golau (Fukushima et al., 2014). Er mwyn deall y mecanwaith sy'n sail i newid cyfnodau cof o ailgydgrynhoi i ddifodiant, gwnaethom nodweddu'r cyfnodau cof IA yn dilyn adalw cof trwy archwilio effeithiau atal y synthesis protein sy'n ofynnol ar gyfer ailgyfnerthu a difodiant cof IA (Fukushima et al., 2014). Gosodwyd y llygod am y tro cyntaf yn y compartment golau. Am 5 s ar ôl iddynt fynd i mewn i'r adran dywyll, cafwyd sioc troed drydanol fer (hyfforddiant). Roedd y llygod yn ail-amlygiad i'r adran golau 24 h ar ôl yr hyfforddiant (sesiwn adweithio; Ffig. 1 A) ac aseswyd eu hwyrni croesi i fynd i mewn i'r adran dywyll (Ffig. 1 B). Dychwelwyd y llygod i'w cewyll cartref yn syth ar ôl iddynt fynd i mewn i'r adran dywyll o'r adran olau (0-munud o ail-amlygiad i'r adran dywyll; cyfnod atgyfnerthu) neu aros yn y compartment tywyll am 1, 3, neu 10 munud heb gael sioc troed (cyfnod difodiant; Ffig. 1C–E). Yn syth ar ôl y sesiwn adweithio, derbyniodd y llygod chwistrelliad systemig o VEH neu'r atalydd synthesis protein ANI. Ar 48 h yn ddiweddarach, aseswyd hwyrni trawsgroesi PR-LTM.

Yn gyson â'n hastudiaeth flaenorol (Fukushima et al., 2014), ail-amlygiad i'r adran golau (0 grŵp min) a achosir gan ailgyfnerthu a gwella cof IA. Datgelodd ANOVA dwy ffordd effeithiau sylweddol amser (F(1,24)=10.433, p=0.{{20}}036), cyffur (F(1) ,24)=23.197, p , 0.0001) ac amser rhyngweithio cyffuriau (F(1,24)=25.022, p , 0.0001; Ffig. 1B). Datgelodd prawf post hoc Bonferroni a phrawf-t pâr fod y grwpiau VEH ac ANI, a ddangoswyd wedi cynyddu neu ostwng yn sylweddol, yn y drefn honno, hwyrni croesi drosodd yn PR-LTM o'i gymharu â'r sesiwn adweithio (ps , 0.05; VEH, t(6) {{28 }} 5.134, p=0.0021, ANI, t(6)=4.804, p=0.003; Ffig. 1B). Mae'r arsylwadau hyn yn dangos bod adalw cof IA yn y compartment golau wedi gwella'r cof, tra bod ataliad synthesis protein wedi amharu ar y cof a adalwyd, gan gadarnhau'r sylw blaenorol bod adalw cof IA yn gwella'r cof trwy ailgydgrynhoi mewn modd sy'n dibynnu ar synthesis protein.

Mewn cyferbyniad, roedd yr ail-amlygiad i'r adran dywyll yn achosi difodiant hirdymor [ANOVA dwy ffordd, amser (Ffig. 1C, F(1,28)=9.575, p=0.{ {50}}04; Ffig. 1d, F(1,36)=11.699, p=0.0016), cyffur (Ffig. 1C, F(1,28)=4.674, p=0.039; Ffig. 1D, F(1,36)=12.285, p {{29} }}.0012), amser rhyngweithio cyffuriau (Ffig. 1C, F(1,28)=7.916, p=0.009; Ffig. 1D, F(1,36) {{41 }}.915, p=0.0079)], fel y sylwyd yn flaenorol (Fukushima et al., 2014). Dangosodd y grwpiau VEH a arhosodd yn yr adran dywyll am 3 neu 10 munud lai o hwyrni trawsgroesi yn sylweddol yn PR-LTM o’i gymharu â’r sesiwn adweithio, tra dangosodd y grwpiau ANI hwyrni trawsgroesi tebyg yn PR-LTM o’i gymharu â’r sesiwn adweithio ac i’r Grwpiau VEH (prawf post hoc Bonferroni, ps , 0.05; prawf t pâr, Ffig. 1C, VEH, t(7)=4.976, p=0.0016, ANI, t(7) { {59}}.796, t. 0.05; Ffig. 1D, VEH, t(9)=10.211, p , 0.0001, ANI, t(9)=1.02, t. 0.05 ). Mae'r arsylwadau hyn yn dangos bod yr ail-amlygiad i'r adran dywyll am 3 neu 10 munud wedi diffodd cof IA a bod ataliad synthesis protein wedi rhwystro difodiant hirdymor. Felly, mae adalw cof IA yn yr adran dywyll yn diffodd cof IA mewn modd sy'n dibynnu ar fynegiant genynnau.

Yn bwysig, dangosodd y grŵp VEH hwyrni trawsgroes tebyg yn PR-LTM o'i gymharu â'r sesiwn adweithio ac i'r grŵp ANI pan arhoson nhw yn y compartment tywyll am 1 munud [ANOVA dwy ffordd, amser (F(1,36) {{ 5}}.03, p . 0.05), cyffur (F(1,36)=0.019, p . 0.05), rhyngweithiad cyffuriau amser (F(1,36)=0.011, t . 0.05); prawf post hoc Bonferroni, ps . 0.05; prawf-t pâr, VEH, t(9)=0.091, t . 0.05, ANI, t(9)=0.328, t . 0.05; Ffig. 1D]. Mae'r arsylwadau hyn yn dangos na ddangosodd y grŵp VEH welliant na difodiant cof IA ac na ddangosodd y grŵp ANI unrhyw amhariad ar gof IA. Felly, fe wnaeth ail-amlygiad i'r adran dywyll am 1 munud rwystro'r gwelliant a'r amhariad a achosir gan ANI i'r cof IA wedi'i ail-ysgogi, ond nid yw wedi'i ddiffodd cof IA, sy'n awgrymu bod yr ail-amlygiad 1-munud hwn yn canslo'r broses o ailgydgrynhoi. , ond mae'n annigonol i ddiffodd cof IA.

I grynhoi, mae'r canlyniadau hyn yn dangos bod ail-amlygiad i'r adran golau yn arwain at y cyfnod ailgyfuno, tra bod ail-amlygiad hirach i'r adran dywyll (3 neu 10 munud) yn achosi'r cyfnod difodiant. Yn bwysicach fyth, mae aros am 1 munud yn yr adran dywyll yn cymell y cyfnod pontio o ailgydgrynhoi i ddifodiant, sydd, yn atal ofn ailgyfnerthu cof heb achosi difodiant.

Llofnodion moleciwlaidd o'r cyfnodau ailgydgrynhoi, trosglwyddo a difodiant yn yr amygdala, hippocampus, a mPFC ar ôl adalw cof IA

Mae ailgydgrynhoi a difodiant cof ofn cyd-destunol yn dangos cynnydd mewn ffosfforyleiddiad CREB yn S133, marciwr actifadu mynegiant genynnau sydd ei angen ar gyfer ailgyfnerthu a difodiant hirdymor, ond yn dangos deinameg amlwg ffosfforyleiddiad CREB (Mamiya et al., 2009 ). Yn ddiddorol, mae astudiaethau diweddar wedi dangos nad oes unrhyw gynnydd yn ffosfforyleiddiad ERK, rheolydd CREB i fyny'r afon (Impey et al., 1998; Wu et al., 2001), yn rhanbarth gwaelodol yr amygdala ar y cyfnod pontio o ailgydgrynhoi i ddifodiant cof ofn ciwio, er bod y ffosfforyleiddiad hwn yn cynyddu yn y rhanbarth gwaelodol pan fydd cof ofn ciwio yn cael ei ailgyfuno a'i ddiffodd (Merlo et al., 2014, 2018). Nododd astudiaeth arall fod hippocampal ERK yn cael ei actifadu dim ond pan fydd cof ofn cyd-destunol yn cael ei ddiffodd, ond nid yn cael ei ailgyfuno (Tronson et al., 2009). Mae'r canfyddiadau hyn yn awgrymu bod cyfnodau ailgyfnerthu, trawsnewid a difodiant yn dangos llofnodion moleciwlaidd a cellog gwahanol. Felly, fe wnaethom fesur a chymharu lefelau pCREB a pERK yn y cyfnodau cydgrynhoi, trawsnewid a difodiant gan ddefnyddio imiwn-histocemeg. Fe wnaethom berfformio amserlenni arbrofol tebyg fel yn Ffigur 1B, D, E gan ddefnyddio pedwar grŵp arbrofol. Ail-amlygwyd y llygod i'r adran golau am 24 h ar ôl yr hyfforddiant ac yna aros yn y compartment tywyll [ail-ysgogiad: 0 min yn y compartment tywyll, ailgydgrynhoi (Recon) grŵp; 1 mun, grŵp pontio (Tran); 10 mun, grŵp difodiant (Est)]. Ni ddychwelwyd grŵp arall o lygod i'r adran golau/tywyll (grŵp NR heb ei ailysgogi). Fe wnaethom gyfrif niwronau pCREB-positif (pCREB1), niwronau pERK-positif (pERK1), a niwronau dwbl-bositif (pCREB1 / pERK1) yn yr amygdala, hippocampus, a mPFC ar 30 munud ar ôl y sesiwn adweithio.

Amygdala (rhanbarth ochrol) CREB ei actifadu yn y cyfnodau difodiant ac ailgyfnerthu, tra ERK ei actifadu yn unig yn y cyfnod difodiant (Ffig. 2A-C). Datgelodd ANOVA un ffordd effaith sylweddol grŵp (Ffig. 2B, F(3,29)=14.85, p , 0.0001). Yn debyg i ganfyddiadau blaenorol (Mamiya et al., 2009), datgelodd prawf post hoc Newman-Keuls fod y grwpiau Recon ac Est yn dangos llawer mwy o niwronau pCREB1 na’r grwpiau eraill (t, 0.05). Nododd yr arsylwadau hyn, yn debyg i'r arsylwadau ar y lefelau ymddygiad (Ffig. 1), bod dod i gysylltiad â'r adran dywyll am 1 munud (cyfnod trawsnewid) yn canslo "troi ymlaen" ffosfforyleiddiad CREB a fyddai'n cael ei gynyddu yn y cyfnod ailgyfuno. Mewn cyferbyniad, arsylwyd llawer mwy o niwronau pERK1 yn y grŵp Est nag yn y grwpiau eraill, er bod llawer llai o niwronau pERK1 na niwronau pCREB1 yn y grŵp Est (F(3,29)=3.793, p { {23}}.0207; Ffig. 2C).

Yn gyson, gwelwyd llawer mwy o niwronau positif dwbl (pCREB1/pERK1) yn y grŵp Est (F(3,29)=6.698, p=0.00 14; Ffig. 2D), tra bod llawer mwy o niwronau pCREB1/ pERK – (pCREB sengl positif) i'w gweld yn y grwpiau Recon ac Est (F(3,29)=13.689, p , 0 .0001; Ffig. 2E). Felly, dim ond un boblogaeth o niwronau pCREB1/pERK a ddangosodd y cyfnod ailgrynhoi. Mewn cyferbyniad, dangosodd y cyfnod difodiant ddwy boblogaeth o niwronau pCREB1/pERK- a pCREB1/perK1, sy'n dangos mai dim ond mewn is-set o niwronau pCREB1 y caiff ERK ei actifadu. Yn bwysig, gwelwyd canlyniadau tebyg yn rhanbarth gwaelodochr yr amygdala (Ffig. 2G, F(3,29)=13.042, p , 0.0001; Ffig. 2H, F(3,29) {{32} }.824, p=0.0201; Ffig. 2I, F(3,29)=12.633, p , 0.0001; Ffig. 2J, F(3,29)=12 .505, p , 0.0001).

Cychwyn deuphasig o ERK yn y cyfnod difodiant Mae ERK yn actifadu CREB i fyny'r afon ac felly, mae angen actifadu ERK ar gyfer cydgrynhoi ac ailgyfnerthu cof ofn (Schafe et al., 200{{31) }}; Duvarci et al., 2005). Fodd bynnag, yn anghyson, ni welwyd unrhyw actifadu ERK yn yr amygdala, hippocampus, neu mPFC yn y cyfnod ailgyfuno pan fesurwyd pERK ar 30 munud ar ôl y sesiwn adweithio (Ffigs. 2-4). Felly, archwiliwyd cyrsiau amser ffosfforyleiddiad ERK a CREB. Gwnaethom arbrawf tebyg i'r hyn a geir yn Ffigurau 2-4, ac eithrio bod lefelau pCREB a pERK wedi'u mesur ar 5, 15, a 30 munud ar ôl y sesiwn adweithio (ail-amlygiad i'r adran dywyll ar gyfer {{). 66}}, 1, neu 10 mun; Ffig. 5A). Yn gyson â'r data a ddangosir yn Ffigurau 2-4, gwelwyd cynnydd sylweddol mewn niwronau pCREB1 ar 30 munud, ond nid ar 5 munud, ar ôl y sesiwn adweithio yn y Recon (amygdala, mPFC a hippocampus) ac Est (amygdala a mPFC ) grwpiau, ond nid y grŵp Tran (Ffig. 5E, ANOVA unffordd, amygdala, 5 mun, F(3,23)=0.346, t. 0.05, 30 mun, F(3,23)=15.272, p , 0.0001; mPFC, 5 mun, F(3,23)=1.169, p . 0.05, 30 mun, F(3,23)=32. 346, p , 0.0001; hippocampus, 5 mun, F(3,23)=0.154, t. 0.05, 30 mun, F(3,23)=16.197, p , 0.0001; prawf t heb ei baru, amygdala, ailgyfuno, 5 vs 30 mun, t(12)=7.807, p , 0.0001, difodiant, 5 vs 30 mun, t(12)=5.405, p { {73}}.0002; mPFC, atgyfnerthiad, 5 vs 30 mun, t(12)=5.727, p , 0.0001, difodiant, 5 vs 30 mun, t(12)=4.188 , p=0.0013; rhanbarth CA1 hippocampal, ailgyfuno, 5 vs 30 mun, t(12)=2.339, p=0.0374).

Yn ddiddorol, gwelwyd cynnydd sylweddol mewn niwronau pERK1 yn amygdala, mPFC a hippocampus y grwpiau Recon, Tran, ac Est am 5 munud ar ôl y sesiwn adweithio o'i gymharu â'r grŵp NR (Ffig. 5F, amygdala, F (3,23)=10.961, p=0.0001; mPFC, F(3,23)=7.525, p { {13}}.0011; hippocampus, F(3,23)=6.924, p=0.0017). Roedd yr arsylwadau hyn yn dangos bod ERK yn cael ei actifadu yn syth ar ôl y sesiwn adweithio ym mhob cyfnod cof. Fodd bynnag, dychwelodd y cynnydd hwn yn nifer y niwronau pERK1 i lefelau gwaelodol (sy'n debyg i'r grŵp NR) am 15 munud ar ôl y sesiwn adweithio (Ffig. 5F, amygdala, F(3,20)=2.676, t .0.05; mPFC, F(3,23)=0.683, t . 0.05; hippocampus, F(3,20)=0.74, p . 0.05). Ar ben hynny, yn gyson â'r canfyddiadau a ddangosir yn Ffigurau 2-4, gwelwyd llawer mwy o niwronau pERK1 yn yr amygdala, mPFC, a hippocampus ar 30 munud ar ôl y sesiwn adweithio yn unig yn y grŵp Est (Ffig. 5F, amygdala, F ( 3,23)=6.616, p=0.022; mPFC, F(3,23)=8.012, p=0.0008; hippocampus, F( 3,23)=6.206, p=0.003). Felly, mae'r cyfnodau ailgrynhoi a thrawsnewid yn dangos actifadu ERK dros dro ar y pwynt amser cynnar yn unig (5 munud), tra bod y cyfnod difodiant yn dangos actifadu ERK deuffasig yn gynnar (5 munud) a hwyr (30 munud) ar ôl yr adweithio. sesiwn. Roedd yr arsylwadau hyn yn dangos bod y mecanweithiau ar gyfer rheoleiddio actifadu ERK yn wahanol yn y cyfnodau atgyfnerthu / trawsnewid a difodiant. Gyda'i gilydd, dangosodd ein harsylwadau fod y cyfnodau ailgrynhoi, trawsnewid a difodiant yn dangos llofnodion moleciwlaidd gwahanol.

Rolau actifadu ERK yng nghamau ailgyfuno a difodiant cof IA

Roedd y cyfnodau ailgyfuno/pontio a difodiant yn dangos actifadu ERK monophasig a deuphasig, yn y drefn honno. Rydym yn ymchwilio nesaf ac yn cymharu rolau cynnar (5 munud) a hwyr (30 munud) ERK activation yn y mPFC yn y cyfnodau atgyfnerthu a difodiant drwy archwilio effeithiau atal ERK (Ffig. 6).

Trafodaeth

Yn yr astudiaeth hon, fe wnaethom ymchwilio i'r mecanweithiau ar gyfer trosglwyddo cof o'r cyfnodau ailgyfuno i ddifodiant ar ôl adalw cof IA. Fe wnaethom nodweddu llofnodion ymddygiadol cyfnodau cof IA yn gyntaf ar ôl adalw. Yn gyson â'n hastudiaeth flaenorol (Fukushima et al., 2014), atgyfnerthiad a difodiant a achosir gan adalw cof IA trwy ail-amlygiad i'r golau (0 min yn y compartment tywyll) a thywyll ( 3 neu 10 munud) adrannau, yn y drefn honno. Yn ddiddorol, ni chafodd cof IA ei wella na'i ddiffodd a dangosodd wrthwynebiad i atal synthesis protein pan ail-amlygwyd y llygod i'r adran dywyll am 1 munud yn unig. Felly, mae'r arsylwadau hyn yn awgrymu bod 1-munud o ail-amlygiad i'r adran dywyll yn canslo'r broses o atgyfnerthu, ond nid yw'n ddigon i ddileu cof IA. Ar ben hynny, canfuom fod ERK wedi'i actifadu yn yr amygdala, hippocampus, a mPFC ar bwynt amser cynnar (5 mun) ar ôl ail-amlygiad i'r adran dywyll am 0, 1, neu 10 min. Yn gyson, rhwystrodd ataliad ERK yn y rhanbarthau ymennydd hyn ailgydgrynhoi / gwella a difodiant cof IA. Yn bwysicaf oll, roedd ataliad ERK yn yr amygdala, hippocampus, a mPFC yn dilyn 1-munud o ail-amlygiad i'r adran dywyll yn atal gwelliant cof IA trwy ail-gyfryngu, gan awgrymu bod actifadu ERK yn dilyn ail-amlygiadau byr (1 munud) i'r adran dywyll yn ofynnol ar gyfer atal ailgyfnerthu cof IA. I'r gwrthwyneb, roedd ail-amlygiad 1-munud i'r adran dywyll yn annigonol i ddiffodd cof IA, er bod ail-amlygiad estynedig i'r adran dywyll (3 neu 10 munud) wedi diffodd y cof hwn. Felly, mae ein canlyniadau'n awgrymu bod 1-munud o ail-amlygiad i'r adran dywyll yn arwain at broses trawsnewid cof sy'n canslo ailgyfnerthu/gwella ond nad yw'n cychwyn dysgu difodiant. Gyda'i gilydd, rydym yn awgrymu bod y broses o drosglwyddo cof yn cyfrannu at newid cyfnodau cof o ailgydgrynhoi i ddifodiant trwy atal ailgyfnerthu trwy gyfrwng ERK.

Yn debyg i'n harsylwadau presennol, dangosodd astudiaeth ddiweddar gan ddefnyddio cyflyru ofn clywedol fod cyflwyniadau CS sengl (1) neu hirfaith (10) yn achosi ailgyfnerthu cof a difodiant, yn y drefn honno, trwy gynnydd mewn lefelau pERK yn rhanbarth gwaelodol yr amygdala. Mewn cyferbyniad, nid yw cyflwyniadau CS canolradd (4-7) yn newid lefelau pERK yn rhanbarth gwaelodol yr amygdala. Yn bwysig, nid oedd ataliad ERK yn y cyflwyniadau CS canolradd yn effeithio ar y cof ofn. Awgrymodd yr astudiaeth hon fod cyfnod y cof yn trosglwyddo o ailgydgrynhoi i ddifodiant ar ôl adalw cof ofn (Merlo et al., 2018). Yn yr astudiaeth bresennol, fe wnaethom ymestyn y canfyddiad hwn ac awgrymu bod y cyfnod pontio yn mynd ati i newid cyfnodau cof o ailgydgrynhoi i ddifodiant trwy actifadu llwybr trawsgludo signal ERK. Yn wahanol i ganfyddiadau blaenorol (Merlo et al., 2018), canfuom fod y cyfnod pontio yn cynnwys ffosfforyleiddiad ERK yn yr amygdala, hippocampus, a mPFC. Efallai bod yr anghysondebau hyn oherwydd y gwahaniaeth mewn pwyntiau amser yn archwilio ffosfforyleiddiad ERK; roedd yr astudiaeth flaenorol yn mesur lefelau pERK yn; 12 munud ar ôl cyflwyniad CS (Merlo et al., 2018), tra bod ein hastudiaeth yn dangos bod lefelau pERK uwch yn dychwelyd i'r lefel sylfaenol tua'r adeg hon (15 munud ar ôl yr ail-amlygiad). Yn ogystal, mae'n bwysig nodi bod y dasg IA yn galluogi arsylwi gwella cof IA trwy ailgydgrynhoi, a thrwy hynny arwain at ein canfyddiad bod atal ERK yn y cyfnod trosglwyddo yn atal gwella cof IA.

Mae astudiaethau blaenorol wedi dangos bod ffosfforyleiddiad ERK yn cynyddu yn rhanbarth gwaelodol yr amygdala ar 20-60 munud yn dilyn dysgu difodiant o gof ofn ciwio (Herry et al., 2006; Merlo et al., 2014, 2018), tra bod yr hippocampus yn dangos actifadu hwn am 1 h yn dilyn dysgu difodiant cof ofn cyd-destunol (Fischer et al., 2007; Tronson et al., 2009). Yn yr astudiaeth bresennol, cawsom arsylwadau tebyg bod pERK yn cynyddu 30 munud ar ôl y sesiwn adweithio yn y cyfnod difodiant. Mae'r canfyddiadau hyn yn awgrymu bod ffosfforyleiddiad ERK yn arwydd moleciwlaidd cyffredin o'r cyfnod difodiant hwyr (20-60 mun).

Ar ben hynny, gwelsom fod actifadu ERK yn digwydd yn ddeublyg ar adegau cynnar a hwyr (5 a 30 munud) ar ôl y sesiwn adweithio yn y cyfnod difodiant, tra bod yr actifadu hwn yn digwydd mono yn raddol ar y pwynt amser cynnar yn y cyfnod ailgyfuno (Ffig. 5) . Yn gyson, roedd atal ERK yn rhanbarthau'r ymennydd ar yr adegau hyn o'r cyfnodau ailgyfuno a difodiant yn rhwystro ailgydgrynhoi / gwella a difodiant hirdymor, yn y drefn honno (Ffig. 6 A, C-H). Mae'r arsylwadau hyn yn awgrymu bod angen actifadu ERK monophasig a deufasig ar gyfer gwella cof IA trwy ail-gyfryngu a difodiant, yn y drefn honno. Mae'n bwysig nodi bod ERK yn gweithredu fel rheolydd i fyny'r afon o ffosfforyleiddiad CREB. Felly, gall actifadu ERK dros dro yn y cyfnod cof cynnar, yn rhannol o leiaf, gyfrannu at y ffosfforyleiddiad hwn o CREB, sy'n actifadu mynegiant y genynnau sydd eu hangen ar gyfer ailgadarnhau a difodiant hirdymor.

Yn debyg i'n canfyddiadau blaenorol gan ddefnyddio cyflyru ofn cyd-destunol (Mamiya et al., 2009), cafodd CREB ei actifadu yn y cyfnodau cof ailgydgrynhoi (amygdala / hippocampus / mPFC) a difodiant (amygdala / mPFC), tra bod ERK wedi'i actifadu yn y cyfnod difodiant yn unig. ar 30 munud ar ôl y sesiwn adweithio. Yn gyson, dim ond un boblogaeth o pCREB1/pERK- niwronau a arsylwyd yn y cyfnod ailgyfuno, tra bod poblogaethau niwronau gwahanol arsylwyd yn y cyfnod difodiant: pCREB1/pERK- a pCREB1/pERK1 niwronau yn yr amygdala (Ffig. 2); pCREB- /pERK1 niwronau yn yr hippocampus (Ffig. 3); a pCREB1/pERK–, pCREB–/pERK1, a niwronau pCREB1/pERK1 yn y mPFC (Ffig. 4). Mae'r arsylwadau hyn, yn enwedig arsylwi cyferbyniol o niwronau pCREB-/ pERK1 a pCREB1/pERK-, yn awgrymu bod actifadu CREB ac ERK yn cael ei reoleiddio'n wahanol ym mhob ardal ymennydd pan fydd y cof yn cael ei ddiffodd a bod actifadu cyfnod hwyr ERK yn chwarae'n benodol ac yn wahanol. rolau ar gyfer difodiant cof ofn o'i gymharu â phrosesau cof eraill megis cydgrynhoi ac ailgyfnerthu fel y trafodir isod. Yn ddiddorol, gwelsom fod niwronau pERK1 yn fwy niferus yn y mPFC o gymharu â'r hippocampus ac amygdala, gan fod y mPFC yn dangos cymhareb uwch o niwronau pERK1 (cyfnod difodiant) a niwronau pCREB1 (cyfnod ailgyfuno) o gymharu â'r hippocampus ac amygdala, gan awgrymu hynny mae actifadu ERK yn y mPFC yn chwarae rhan fwy penodol mewn difodiant cof.

Mae'n parhau i fod yn aneglur a yw'r un poblogaethau neu wahanol boblogaethau o niwronau yn cael eu hactifadu yn y cyfnodau atgyfnerthu, trosglwyddo a chof difodiant. Nododd astudiaeth flaenorol actifadu "niwronau ofn" a "niwronau difodiant" yn yr amygdala pan fydd cof ofn ciwio yn cael ei ail-ysgogi neu ei ddileu, yn y drefn honno (Herry et al., 2008). Felly, mae'n bosibl bod ERK a CREB yn cael eu actifadu yn y gwahanol boblogaethau o niwronau gyda phroffiliau amser gwahanol (hy, "niwronau ail-gydgrynhoi" a niwronau difodiant). Fel y trafodwyd uchod, gall niwronau pCREB1, gan gynnwys niwronau pCREB1 / pERK1, reoleiddio ailgyfnerthiad a difodiant cof IA yn y tymor hir trwy actifadu mynegiant genynnau fel niwronau ailgydgrynhoi a difodiant, yn y drefn honno. I'r gwrthwyneb, gall actifadu ERK mewn niwronau pCREB- / pERK1 gyfrannu at ganslo actifadu trawsgrifio wedi'i gyfryngu gan CREB a fyddai'n ofynnol ar gyfer ailgydgrynhoi gan fod yr actifadu ERK hwn yn cael ei arsylwi'n benodol yn y cyfnod difodiant hwyr; Mae ERK wedi actifadu yn y niwronau ailgyfuno i ganslo actifadu mynegiant genynnau yn y cyfnod difodiant. Yn ddiddorol, dangosodd astudiaeth flaenorol fod actifadu ERK hippocampal yn rhwystro sefydlu c-fos pan fydd cof ofn cyd-destunol yn cael ei ddiffodd (Guedea et al., 2011), gan godi'r posibilrwydd bod yr actifadu ERK hwn yn gwrthweithio llwybr signalau CREB. Mae'n bwysig nodi'r poblogaethau niwronaidd sy'n rheoleiddio ailgyfnerthu, trawsnewid, a difodiant ac ymchwilio i lofnodion moleciwlaidd ac arwyddocâd swyddogaethol y niwronau hynny. Yn ogystal, mae rhyngweithiadau ymhlith poblogaethau niwral a nodwyd yn yr astudiaeth hon yn parhau i fod yn anhysbys. Mae'n bosibl bod "niwronau difodiant (pontio)" yn modiwleiddio swyddogaeth niwronau ailgyfuno i ganslo atal ailgyfnerthu trwy ryngweithio rhyngddynt (Eisenberg et al., 2003; Merlo et al., 2014). Felly, mae hefyd yn bwysig archwilio'r rhyngweithiadau hyn yn ac ymhlith yr amygdala, mPFC, a hippocampus.

Yn flaenorol, gwnaethom ddangos nad yw'r hippocampus yn dangos unrhyw newid o ffosfforyleiddiad CREB a mynegiant Arc yn dilyn dysgu difodiant o ofn cyd-destunol, ac yn gyson, mae ataliad synthesis protein yn yr hippocampus yn y cyfnod difodiant yn methu â rhwystro difodiant hirdymor (Mamiya et al. , 2009). Mae'r sylwadau hyn wedi codi'r posibilrwydd nad oes angen yr hippocampus ar gyfer difodiant hirdymor. Fodd bynnag, gwnaethom ddangos bod ERK yn cael ei actifadu yn yr hippocampus ar ôl dysgu difodiant cof IA, ac yn gyson, mae rhwystro actifadu ERK yn yr hippocampus yn amharu ar ddifodiant hirdymor. Felly, mae ein harsylwadau presennol yn nodi rolau hanfodol ar gyfer yr hippocampus yn diflaniad cof. Ar y cyd â'n canfyddiadau blaenorol, rydym yn awgrymu bod angen yr hippocampus ar gyfer difodiant cof ond nid ar gyfer proses debyg i gydgrynhoi i sefydlogi "cof difodiant" trwy actifadu mynegiant genynnau.