Potensial Gwrth-Heneiddio Hydrogel Seiliedig ar Sylweddau Ar gyfer Hirhoedledd Croen Dynol

Geiriau allweddol:sylwedd Cistanche; effaith gwrth-heneiddio; effaith gwrthlidiol; amsugno croen; Model croen dynol 3D;cynhwysyn cosmetig

Cliciwch Yma I Gael Cistanche Ar Gyfer Croen Oed

1. Rhagymadrodd

Heneiddio croenyn digwydd o ganlyniad i brosesau amrywiol, gan gynnwys mewnol (metaboledd cellog, newidiadau hormonaidd, a threiglad genetig) a ffactorau allanol (tocsinau, cemegau, ac ymbelydredd uwchfioled (UV)) [1-3].Croen oedyn cael ei nodweddu'n fiolegol gan ddirywiad cyffredinol o gydrannau'r matrics allgellog (ECM), gyda cholagen ac elastin anhrefnus a llai [4,5]. Yn ogystal, affenomen ymfflamycholfel arfera achosir gan groen sy'n heneiddio, gan achosicrychu a thewychu y dermisaepidermis. Cyfryngwyr pro-llidiol a ryddhawyd o gelloedd llidiolyn gallu gwella gweithrediad colagenau, metalloproteinases matrics a enwir (MMPs), gan arwain at ddiraddio colagen [6-8]. Mae llawer o ddeunyddiau gwrth-heneiddio, sydd â'r gallu i wella synthesis colagen, wedi'u hawgrymu yn ystod y dyddiau diwethaf. Un o'r deunyddiau adnabyddus yw'r ffactor twf. Mae ffactorau twf wedi'u hastudio'n helaeth ar gyfer gwella clwyfau croen [9]. Mae llawer ohonynt, megis ffactor twf sy'n deillio o blatennau (VEGF), ffactor twf epidermaidd (EGF), a ffactor twf keratinocyte, yn effeithio'n uniongyrchol ar synthesis colagen trwy rwydwaith o lwybrau signalau rhyng-gellol ac mewngellol [9,10]. Fodd bynnag, nid yw ffactorau twf a gymhwyswyd yn topig wedi bod yn ddefnyddiol iawn fel asiantau gwrth-heneiddio oherwydd eu maint moleciwlaidd mawr, sy'n cyfyngu ar eu gallu i dreiddio i'r stratum corneum tynn [11]. Yn ogystal â ffactorau twf, mae llawer o peptidau gwrth-heneiddio o bwysau moleciwlaidd isel hefyd wedi'u datblygu. Er enghraifft, mae tripeptidau palmitoyl yn atal diraddio colagen trwy ymyrryd â gostyngiad colagen gan golagenasau, megis MMP1 a 3 [12]. Ar ben hynny, dangoswyd bod tripeptidau copr, y peptidau sydd wedi'u harchwilio fwyaf, yn ysgogi synthesis procolagen [13].

Er bod sawl astudiaeth wedi nodi hyrwyddo synthesis colagen gan ffactorau twf a pheptidau a gymhwysir yn topig, efallai na fydd effaith sengl synthesis colagen, heb effaith gwrthlidiol, yn ddigon i wella perfformiad gwrth-heneiddio yn glinigol. I gael effeithiau mwy amlwg, mae angen danfon y cyfansoddyn i haenau dwfn y croen. Felly, mae angen cryf am ddatblygu deunyddiau newydd, sy'n meddu ar swyddogaeth ddeuol synthesis colagen ac effeithiau gwrthlidiol, ynghyd â mwy o amsugno croen. Mae sylwedd Cistanche (CP), peptid maint bach sy'n cynnwys 11 asid amino, yn arddangos gweithgaredd gwella clwyfau posibl, a gyflawnir trwy sefydlu amlhau celloedd, synthesis colagen, ac effeithiau gwrthlidiol [14-16]. Fodd bynnag, mae cymhwysiad therapiwtig CP wedi'i gyfyngu gan ei sefydlogrwydd isel, a all ohirio ei briodweddau iachâd [17-19]. Yn ein hastudiaeth flaenorol, rydym wedi datblygu fformiwleiddiad newydd o CP, a elwir yn gel CP, sy'n cynyddu sefydlogrwydd CP o dan amodau storio amrywiol [20]. Yn ogystal â'i sefydlogrwydd, mae gel CP wedi dangos bod clwyfau'n gwella'n fwy effeithiol na CP yn unig trwy wella ymlediad keratinocyte a ffibroblast. Yn y gwaith presennol, rydym wedi ymestyn nodweddu gel CP ac wedi dangos ei fod yn hyrwyddo synthesis colagen ac effeithiau gwrthlidiol ar gyfer perfformiad gwrth-heneiddio. Archwiliwyd ymhellach amsugno croen a phigmentiad gan gel CP. Mae ein canfyddiadau'n dangos potensial gwrth-heneiddio uwch gel CP o gymharu â CP yn unig, gyda mwy o effaith amsugno croen, ac felly, cymhwysedd cosmetig ehangach.

2. Canlyniadau

2.1. Gwenwyndra In-Vitro Gel CP

Er mwyn i'r gel CP fod yn wrth-heneiddio, byddai gweithgareddau uchel ynghyd â gwenwyndra isel yn erbyn croen dynol yn ddymunol. Felly, gwerthuswyd gwenwyndra in-vitro gel CP gan ddefnyddio ffibroblastau dermol dynol (HDFs) a chroen dynol 3D wedi'i ail-greu, keraskin®-FT. Yn gyntaf, fe wnaethom asesu effeithiau niweidiol gel CP ar gellbilen, mewn perthynas â CP yn unig, trwy assay lactad dehydrogenase (LDH) gan ddefnyddio HDFs (Ffigur 1A). Defnyddiwyd y assay LDH ymhellach, yn ogystal â'r 3-(4,{7}}dimethylthiazol-2-yl)-2,5-deuffenyl tetrazolium bromid (MTT) blaenorol assay [20], ar gyfer mesur gwenwyndra gel CP yn fwy cywir. Dangosodd y canlyniadau nad oedd gel CP na CP yn unig yn dangos unrhyw niwed i gellbilen yn erbyn HDFs ym mhob crynodiad a brofwyd. Ar ben hynny, ni chafodd triniaeth gyda cherbyd heb CP unrhyw effaith ar y gellbilen o'i gymharu â chyfrwng sy'n cynnwys PBS yn unig. Er mwyn profi ymhellach y llid posibl ar groen dynol oherwydd y gel CP, gwnaethom gymhwyso'r olaf, mewn crynodiadau gwahanol, ar y model croen trwch llawn, keraskin®-FT (Ffigur 1B, C) am gyfanswm o 24 h. I gymharu'r effeithiau ar hyfywedd meinwe, defnyddiwyd 5 y cant o sodiwm dodecyl sylffad (SDS), llidiwr hysbys, fel rheolaeth gadarnhaol. Nid oedd gel CP (1–10 µg/mL) yn wenwynig i keraskin®-FT, fel y dangoswyd gan yr assay MTT (Ffigur 1B), gan nodi nad oedd unrhyw lid croen posibl o'i gymharu â rheolaeth (triniaeth PBS). Yn ogystal, datgelodd archwiliad histolegol nad oedd y keraskin®-FT wedi dioddef unrhyw niwed o gwbl gan gel CP (Ffigur 1C). Cafwyd yr un canlyniadau yn y grŵp a gafodd ei drin â CP yn unig (Ffigur S1). Yn seiliedig ar y canlyniadau hyn, daethpwyd i'r casgliad nad oedd hyd yn oed crynodiad uchel o gel CP (10 µg/mL o CP) yn wenwynig, gan achosi dim llid ar y croen.

Ffigur 1, Effaith gel sylwedd Cistanche (CP) ar hyfywedd HDFs a chroen dynol 3D wedi'i ail-greu in-vitro, keraskin@-FT.(A) Ar gyfer effeithiau niweidiol ffurfio gel CP ar y gellbilen, cafodd HDFs eu trin â PBS (Con; rheolaeth), CP yn unig, neu gel CP (1-10 ug/mL) am 24 h, a phenderfynwyd hyfywedd celloedd gan assay LDH. (B, C) Profwyd anniddigrwydd croen gan ddefnyddio gel CP (1-10 ug/mL) ar groen dynol 3D wedi'i adeiladu mewn vitroreconstructed, keraskin@-pT. Dadansoddwyd hyfywedd meinwe yn y grŵp CP a driniwyd â gel gan assay MTT (B) ac archwiliad histolegol (C), defnyddiwyd PBS fel rheolydd, ac mae Gwerthoedd yn cynrychioli cyflym a SD o dri arbrawf annibynnol. Cymharwyd pob gwerth â'r rheolydd gan ddefnyddio Student'st-test (** p < 0.01). Bar graddfa=500 um. HDF, ffibroblast dermol dynol; LDH, lactad dehydrogenaseMTT, 3-(4.5-dimethylthiazol-2-vl)-2 .5-bromid tetrazolium deuffenyl: PBS, saline menyn ffosffadSDS, sodiwm dodecyl sylffad.

2.2. Effect o CP Gel ar Gynhyrchu Collagen

I archwilio effaith gel CP ar synthesis colagen ar y croen, cafodd HDFs eu trin â gel CP. Dangosodd ein canlyniadau fod gel CP, sy'n cynnwys 1–10 µg/mL o CP, yn sylweddol (p < 0.01) wedi cynyddu cynhyrchiad procolagen math I i 128.05 ± 5.19, 145.19 ± 6.80, a 150.68 ± 16.70 y cant, o'i gymharu â'r driniaeth reoli (PBS) (Ffigur 2A). Fel arall, fel y dangosir yn Ffigur 2A, ni welwyd unrhyw wahaniaeth nodedig mewn cynhyrchiad colagen math I ar draws HDFs a gafodd eu trin ag 1 µg/mL o CP yn unig. Er bod CP yn unig wedi cael rhywfaint o effaith ar gynhyrchu colagen mewn crynodiadau o 5-10 µg/mL (119.96 ± 3.8 a 124.77 ± 8.87 y cant ,), roedd yr effaith hon yn arwyddocaol (p < 0.01) yn is na gyda gel CP.

Ffigur 2. Effeithiau gel CP yn cynyddu colagen mewn HDFs. Mesurwyd effeithiau gel CP ar golagen math 1 (A)MMP-1 (B), a TIMP-1 (C) mewn HDFs. Cafodd HDFs eu trin â PBS (Con; control) CP yn unig, neu gel CP (1-10 ug/mL) am 24 h, a mynegiant y math [procolagen, MMP-1, a TIMP{{8} }}cafodd ei fesur gan ddefnyddio pecyn EIA Procollagen Math IC-peptid (PIP), cit MMP dynol{{10}} cit ELISA, a phecyn ELISA IIMP-1, yn y drefn honno. Defnyddiwyd PBS fel rheolydd. Mae gwerthoedd yn cynrychioli'r cymedrig plws DC o dri arbrawf annibynnol. * p < 0.05, ** p < 0.01 vs. PBS-yn cynnwys cyfrwng heb CP, # p < 0.05# y < 0.01 vs. CP yn unig. HDE, ffibroblast dermol dynol; PBS, halwynog wedi'i glustogi ffosffad; MMP-1matrics metalloproteinase-1; TIMP-1, atalyddion meinwe metalloproteinase-1; EL ISA, assay immunosorbent-gysylltiedig ag ensymau.

Wedi hynny. Aseswyd y lefelau sy'n gysylltiedig â diraddio colagen mewn HDEs a driniwyd gan CPwegel. Datgelodd ein canlyniadau fod gel CP sy'n cynnwys 1-10 ug/mL o CP yn atal y lefelau MMP-1 yn sylweddol (p < 0.01) i 62.88 plws 6.54, 59.54 plws 8.35, a 57.44 plws 7.69 y cant , o'i gymharu â hynny yn y HDFs rheoli (triniaeth PBS) (Ffigur 2B). Yn ôl y disgwyl, roedd CP yn unig, yn cynnwys 1-10 ug/mL o CP, hefyd yn atal lefelau MMP-1 i 80.18 plws 2.88, 78.48 plws 6.19, a 79.84 plws 15.08 y cant, er bod yr effeithiau hyn yn sylweddol is na rhai gel CP. Yn yr HDFs a gafodd eu trin â gel CP, mewn crynodiadau CP o 1-10 ug/mL, roedd lefelau mynegiant atalydd meinwe metalloproteinase (IIMP)-1, sy'n achosi ataliad o MMP-1, yn cynyddu i 113.41 ynghyd â 4.74, 116.76 ynghyd â 3.31, a 115.8 ynghyd â 10.13 y cant o'i gymharu â'r un yn y driniaeth reoli (PBS) (Ffigur 2C). Roedd y canlyniadau hyn gyda'i gilydd yn awgrymu y gall gel CP gyflymu cynhyrchiad procolagen math I trwy atal MMP-1 a gwella mynegiant TIMP{-1 yn yr HDFs. Datgelodd dadansoddiad cymharol o gel CP a CP yn unig fod gel CP yn fwy effeithiol o ran ysgogi cynhyrchu colagen na CP yn unig.

2.3. Effiicacy o CP Gel mewn Llid y Croen

I ymchwilio i'r effaitho gel CP ar fynegiant cytocinau llidiol, archwiliwyd a oedd gan gel CP rôl gwrthlidiol trwy leihau IL-1 alpha neu -6 a chynyddu IL-10 neu drawsnewid ffactor twf (TGF). )-beta 1 mewn keratinocytes epidermaidd dynol (HEKs) a achosir gan SDS. Ystyriwyd bod celloedd wedi'u trin â PBS yn rheolaethau negyddol tra bod celloedd a ysgogwyd gan SDS yn rheolaethau cadarnhaol. Fel y dangosir yn Ffigur3A, 24-h triniaeth â gel CP (5µg/mL o CP mewn gel CP) yn arwyddocaol (p < 0.01) wedi lleihau'r mynegiad a achosir gan SDS o IL-1 alpha ac IL-6. Ar y llaw arall, mae gel CP yn arwyddocaol (p < Cynyddodd 0.01) fynegiad a achosir gan SDS o IL-10 a TGF-beta 1 (Ffigur3B). Mae'r canlyniadau hyn yn awgrymu effaith gwrthlidiolo gel CP ar y HEKs.

Ffigur 3. Effaith gwrthlidiol gel CP mewn HEKs a ysgogir gan SDS. Cafodd HEKs eu deor ar yr un pryd â 0.0015 y cant SDS a gel CP am 24 awr. Cynaeafwyd uwchnatyddion meithriniad celloedd a mesurwyd lefel y ffactorau llidiol gyda chitiau ELISA. Canfuwyd cynnydd plyg cymharol o ffactorau pro-llidiol,IL-1 alpha ac IL-6 (A), a ffactorau gwrthlidiol, IL-10 a TGF-beta 1(B), fel y disgrifir yn y gweithdrefnau arbrofol; Defnyddiwyd PBS fel rheolydd. Mae'r holl werthoedd yn cynrychioli'r modd ynghyd â SD o dri arbrawf annibynnol. ** p < 0.01 Vs. PBS-yn cynnwys cyfrwng heb CP.# p < 0.01 vs. HEKs wedi'u trin gan SDS yn unig. HEK, keratinocyte epidermaidd dynol; SDS, sodiwm dodecyl sylffad; ELISA, assay immunosorbent-gysylltiedig ag ensymau; PBS, halwynog wedi'i glustogi ffosffad; IL, interleukin.IGF, trawsnewid ffactor twf.

2.4. Priodweddau Amsugno Croen Gel CP In Vitro

Er mwyn gwerthuso cymhwysiad clinigol posibl gel CP ar gyfer eiddo gwrth-heneiddio, gwnaethom ymchwilio i allu gel CP i gael ei amsugno i'r stratum corneum (SC), haen allanol y croen, a mynd i mewn i'r epidermis a'r dermis. Er mwyn mynd i'r afael â'r agwedd hon, cafodd gel CP sy'n cynnwys 5 ug/mL o CP wedi'i labelu â isothiocyanate fluorescein (FITC) ei gymhwyso'n topig ar groen dynol 3D wedi'i ail-greu, keraskin@-FT (Ffigur 4A). Fel y dangosir yn Ffigur 4B, ar ôl 1 awr o gymhwyso, dangosodd y darnau croen a gafodd eu trin â gel sy'n cynnwys CP â label FlTC fflworoleuedd gwyrdd sylweddol trwy gydol yr epidermis, ynghyd â fflworoleuedd wedi'i ddiffiwsio yn y meinwe ddermol, sy'n awgrymu gallu gel CP i gael ei amsugno. i mewn i'r SC a chael eu mewnoli i'r epidermis a'r dermis. Ar ôl 6 a 24 h, gwelwyd fflworoleuedd gwyrdd mwy amlwg milfeddyg yn yr epidermis a dermis adrannau croen a gafodd eu trin â gel CP. Mewn cyferbyniad, ni welwyd unrhyw fflworoleuedd sylweddol pan gymhwyswyd PBS yn unig yn topig.

Ffigur 4. Amsugno croen gel CP i groen dynol 3D wedi'i ail-greu mewn vitro, keraskin@-FI. (Gel APBS neu CP (yn cynnwys CP wedi'i labelu gan FITC) wedi'i roi ar stratum corneum keraskin@-FTB) Roedd delweddau fflworoleuedd yn dangos i ba raddau roedd gel CP yn cael ei amsugno. Defnyddiwyd gel PBS (heb ei drin) neu gel CP sy'n cynnwys CP wedi'i labelu gan FITC) yn topig am y cyfnod a nodwyd. Arsylwyd rhannau o broblemau croen wedi'u rhewi o dan ficrosgop fflworoleuedd. Bar graddfa=1 mm

Gofynnwch am fwy:

E-bost:wallence.suen@wecistanche.com Whatsapp plws 86 15292862950