Strategaeth Wrth-Hidus Yn Erbyn Retinol Yn Seiliedig ar Ddadansoddiad Genetig o Boblogaeth Corea: Agwedd Wedi'i Arwain yn Enetig o'r Brig i Lawr

Geiriau allweddol: retinol ; retinoid;colur; gwrth-llid; addasu yn enetig; polymorphisms niwcleotid sengl

Cliciwch Yma I Gael Mwy o Wybodaeth Am Driniaeth Gwrth-heneiddio Cistanche

1. Rhagymadrodd

Mae retinoidau, teulu o gyfansoddion sy'n deillio o fitamin A sy'n cynnwys cyfansoddion synthetig a naturiol, wedi'u hastudio'n ddwys a'u defnyddio mewn cymwysiadau biofeddygol amrywiol megistriniaeth canser(lewcemia myeloid acíwt), neoplasia ceg y groth, aanhwylderau croenyn yr ychydig ddegawdau diwethaf. Mae'r defnydd eang o retinoidau, yn enwedig asid retinoig, yn seiliedig ar y rhagosodiad gwyddonol hynnyasid retinoigyn cymryd rhan mewn nifer o lwybrau biolegol ym myd natur trwy sbarduno rhyngweithio rhwng derbynyddion niwclear sy'n rheoli mynegiant genynnau [1-5]. Un o gymwysiadau mwyaf trawiadol retinoidau yw'r dull dermatolegol, ynghyd â chyffuriau fferyllol a chynhyrchion cosmetig. Ers i retinoidau gael eu defnyddio gyntaf ar gyfer trin acne yn y 1940au, adroddir ei effeithiolrwydd therapiwtig yn erbyn anhwylderau croen fel keratosis actinig, soriasis, ac ichthyosis [6]. Gan fod llawer o astudiaethau gwyddonol ac astudiaethau clinigol wedi dangos effeithiolrwydd therapiwtig tretinoin (asid retinoig holl-draw) ar dynnu lluniau, ysgogwyd datblygiad deilliadau retinoid i'w defnyddio fel cynhwysion cosmetig. Mae retinoidau cosmetig, sy'n cynnwys retinyl palmitate, retinyl asetad, retinol, a retina wedi cael eu hymchwilio'n ddwys yn y farchnad fasnachol ers i asid retinoig gael ei wahardd mewn cynhyrchion cosmetig gan reoliadau byd-eang fel Atodiad II 375 (EC 1223/2009). Mae rhai astudiaethau wedi datgelu bod y retinoidau cosmetig hyn hefyd yn effeithiol ar gyfer trin lluniau, y mae eu nodweddion patholegol yn cynnwys crychau mân a bras, garwedd y croen, a phigmentiad annormal, a hyd yn oed yn dadlau eu bod yn gryf fel tretinoin [7].

Fodd bynnag, mae retinoidau yn achosi cosi a rhai sgîl-effeithiau a nodweddir gan erythema, graddfeydd, llosgi, a chosi, a elwir hefyd yn ddermatitis retinoid [8]. Mae rhai astudiaethau wedi ymchwilio i fecanwaith cosi, ac awgrymir bod mecanweithiau amrywiol yn ymwneud â llid a achosir gan retinoid, sy'n cynnwys llid helaeth a threiddiol a nodweddir gan ryddhau cytocinau a ymdreiddiad celloedd imiwn [9], ac amhariad rhwystr croen wedi'i nodweddu. gan anghydbwysedd genetig yr amlen cornifified (CE) ffactorau cysylltiedig [10,11]. Yn ogystal, mae ffotowenwyndra retinoid a'i sgil-gynhyrchion diraddiedig oherwydd ei ansefydlogrwydd o dan UV a gwres wedi'i awgrymu'n eang i dalu teyrnged i'r llid a achosir gan retinoid [12]. Fodd bynnag, nid yw'r arsylwadau hyn yn ddigonol i esbonio'r llid a achosir gan retinoid yn drylwyr, ac ni ddaethpwyd i gasgliad clir hyd yn hyn. Am y rheswm hwn, mae gan gynhyrchion cyfredol sy'n seiliedig ar retinol fformiwla gwrthlidiol "diflas", a ddefnyddir yn gyffredinol ac yn gyffredinol mewn cynhyrchion masnachol cyffredinol. Felly, nid yw strategaeth gwrth-llid yn erbyn retinol sy'n seiliedig ar gefndir gwyddonol cryf wedi'i sefydlu eto.

Gall dull genetig fod yn ateb arall ar gyfer sefydlu strategaeth gwrth-llid yn erbyn retinol. Astudiwyd amrywiadau genetig yn helaeth i ddarganfod genynnau sy'n gysylltiedig ag effeithiolrwydd cyffuriau a sgîl-effeithiau [13]. Roedd Nelson et al. dangos bod cyffuriau a ragfynegir gan gysylltiadau genetig hysbys yn cyfrif am ddim ond 2.{3}} y cant o'r cyffuriau yn y cam rhag-glinigol, er bod y gyfran yn cynyddu i 8.2 y cant mewn cyffuriau cymeradwy [14]. Mae hyn yn awgrymu y byddai canolbwyntio ar dargedau a ddarganfuwyd gan astudiaethau genetig yn cynyddu'r siawns o ddatblygu cyffuriau yn llwyddiannus yn ddramatig, fel y dangosir gyda chyffuriau ar gyfer colesterol neu arthritis gwynegol [15-18].

Mae triniaeth retinol yn achosi newidiadau yn y mynegiant o ffactorau trawsgrifio sy'n gysylltiedig â thwf cellog [19] a phroteinau strwythurol [11]. Yn fwy penodol, roedd amrywiaeth o teinau pro yn gysylltiedig â llid a achosir gan retinol, sy'n cynnwys cytocinau sy'n gysylltiedig â llid (MCP-1, TNF-a, interferons, a interleukins) [9], derbynnydd asid retinoig (RARG) [ 20], potensial derbynnydd dros dro sianel synhwyro poen vanilloid 1 (TRPV1) [21], a GPCR sy'n actifadu celloedd mast (MRGPRX2) [22]. Fodd bynnag, mae'r rhan fwyaf o astudiaethau genetig wedi'u cyfyngu i un genyn neu lwybr, ac mae mecanwaith cynhwysfawr dermatitis retinoid i'w egluro o hyd. Felly, cynhaliwyd dadansoddiad "genyn ymgeisydd" o lid a achosir gan retinoid i sgrinio ar gyfer gwrth-lidwyr yn erbyn dermatitis retinoid, a bydd canlyniadau'r un peth yn ychwanegu at y gronfa bresennol o enynnau targed ar gyfer astudio dermatitis retinoid.

2. Defnyddiau a Dulliau

2.1. Dylunio Astudio

Dyluniwyd yr astudiaeth hon fel y dangosir yn Ffigur 1. Yn gryno, perfformiwyd ffenoteipio ar gyfer llid a achosir gan retinol o'r gwerthusiad clinigol 1af o 173 o Coreaid. Trwy ddadansoddi genetig, cafodd marcwyr genetig eu sgrinio, ac archwiliwyd gwrth-lidyddion a fformiwlâu. Yn dilyn, cynhaliwyd astudiaeth beilot ar raddfa fach (n=7) a gwerthusiad clinigol ar raddfa fawr (2il, n=91) ​​i wirio effeithiolrwydd gwrth-anniddig y fformiwla newydd ei datblygu.

Dengys Ffigur1.DyluniadAstudiaeth.diagram(siart llif)y weithdrefn gyffredinol o'r astudiaeth.Mae'r tabl isaf yn dynodi'r profion sy'n seiliedig ar waith sylfaenol. w;5000IU=0.15 y cant w/w).

2.2. Ffenoteipio o lid a achosir gan Retinol

cael gwybod am gynhwysion yr hufen cyn yr arbrawf, a chafodd y cyfranogwyr a oedd wedi profi llid y croen i unrhyw un o'r cynhwysion yn yr hufen, ac eithrio retinol, eu heithrio o'r arbrawf. Disgrifir y weithdrefn fanwl yn y Gwybodaeth Ategol.

2.3. Polymorffedd Niwcleotid Sengl (SNP) Microarae

Echdynnwyd DNA genomig o samplau poer gan ddefnyddio'r QIAmp Mini Prep Kit (QIAGEN, Germantown, MD, UDA). Cyflawnwyd genoteipio gan ddefnyddio sglodyn fersiwn 2 assay Sgrinio Byd-eang yn unol â phrotocol assay Sgrinio Trwybwn Uchel Illumina Infifinium (HTS) (Illumina, San Diego, CA, UDA). Cafwyd dwyster gleiniau gan ddefnyddio'r offeryn iScan® ac fe'i defnyddiwyd wedyn i gynhyrchu data genoteip gan ddefnyddio meddalwedd GenomeStudio® (Illumina, San Diego, CA, UDA).

Perfformiwyd rheolaeth ansawdd y data genoteip yn ffafriol o dan yr amodau a ganlyn: Ymhlith y samplau genoteip, cafodd unigolion â chyfradd galw genoteip is na 98 y cant eu heithrio. Ar gyfer amrywiadau genoteip, cafodd SNPs â chyfraddau galwadau is na 98 y cant, amleddau alel bach yn is nag 1 y cant , gwyriad o gydbwysedd Hardy-Weinberg (gwerth p HWE < 1 × 10 - 6), a'r rhai â mwy na dau alel eu heithrio. Ymhlith y 173 o unigolion a genoteipiwyd, llwyddodd 159 i fodloni'r meini prawf QC a chawsant eu dewis i'w dadansoddi ymhellach.

2.4. Asesiad o lid

Rhoddwyd y ddau fath o hufen, sef yr hufen rheoli gyda 5000 o retinol IU, a'r hufen seiliedig ar fformiwla gwrth-lid (AF) gyda 5000 IU retinol, i saith unigolyn (tri dyn a phedair menyw) yn yr astudiaeth beilot. Rhoddai'r unigolion yr hufenau ar eu hwynebau cyn amser gwely yn y modd a ganlyn: un eli ar hanner yr wyneb ac un arall ar hanner arall yr wyneb. Cafodd pynciau'r prawf eu dallu i'r hufen sy'n cynnwys y fformiwla gwrth-lid (sengl-ddall). Ar ôl tri diwrnod o gais, gofynnwyd i'r pynciau ddod â'r cais i ben am 4 diwrnod. Mesurwyd cochni croen a cholli dŵr trawsepidermol (TEWL) gan ddefnyddio cromamedr (CR-400, Konica Minolta, Osaka, Japan) a Tewameter® (TM 300 E, Courage a Khazaka electronic GmbH, Köln, yr Almaen), yn y drefn honno. I fesur y trothwy pwysedd poen (PPT), cynhyrchwyd a defnyddiwyd algomedr gyda diamedr stiliwr o 1 mm wedi'i gyfuno â silindr. Cyn y mesuriad, cafodd wynebau'r pynciau eu glanhau a'u cysoni am 20 munud mewn ystafell aerdymheru (tymheredd, 23 ± 2◦C; lleithder cymharol, 50 ± 10 y cant).

O ystyried bod llid a achosir gan retinoid yn sbarduno ystod eang iawn o fathau o lid a difrifoldeb, mae'n ymddangos nad yw canllawiau mesur llid traddodiadol sy'n canolbwyntio'n bennaf ar erythema a gynigir gan ganllawiau Frosh a CTFA [23] yn cymhwyso nac yn meintioli'r llidiau hyn yn effeithiol. Felly, fe wnaethom ail-ddylunio'r canllaw hunanwerthuso ar gyfer llid y croen, fel y dangosir yn Nhabl S1 (gweler Deunyddiau Atodol). Perfformiwyd yr hunanwerthusiad hwn mewn astudiaeth beilot fach ac 2il werthusiad clinigol ar raddfa fawr.

2.5. Paratoi Celloedd ac Arbrawf In Vitro

Darperir gwybodaeth fanwl am baratoi celloedd a gweithdrefnau arbrofol in vitro yn y Wybodaeth Atodol. Yn gryno, cafodd keratinocytes, ffibroblasts, mast-gelloedd, a TRPV gorfynegi HEKs eu meithrin gan ddefnyddio eu protocolau diwylliant ac arbrofion eu hunain. Dadansoddwyd RT-PCR, -hexosaminidase release, a mewnlifiad calsiwm. 2.6. Dadansoddiad Ystadegol Perfformiwyd dadansoddiad ystadegol gan ddefnyddio SNP ac Variation Suit (SVS) v8.9.0 (Golden Helix, Bozeman, MT, UDA), a PLINK 1.90 (Caergrawnt, MA, UDA) [24]. Ar gyfer dadansoddiad genynnau ymgeisydd, echdynnwyd SNPs o fewn y genynnau ymgeisydd (gan gynnwys rhanbarth hyrwyddwr −2 kb a rhanbarth i lawr yr afon 500 bp). Pennwyd arwyddocâd ystadegol y cymarebau cysylltiadau ac ods gan brawf cysylltiad genoteip gyda model ychwanegyn. Cyn cyfrifo'r sgôr risg polygenig, archwiliwyd anghydbwysedd cysylltedd (LD), a dewiswyd SNPs gan ddefnyddio Haploview 4.2 (Caergrawnt, MA, UDA). [25]. Defnyddiwyd alelau a ddangosodd duedd gynyddol ar gyfer llid a achosir gan retinol ar gyfer y dadansoddiad. Cyfrifwyd y sgôr risg polygenig fel swm pwysol cymarebau ods pob alel [26]. Cynhaliwyd rhagbrosesu data mewnbwn, gan gynhyrchu is-set o gyfranogwyr ar hap i'w dilysu dro ar ôl tro, a chyfrifo sgôr risg polygenig gan ddefnyddio cod a ysgrifennwyd yn arbennig yn R v.4.0.3. Defnyddiwyd GraphPad Prism v7.04 (GraphPad Software, San Diego, CA, UDA) ar gyfer delweddu data. Dangosir bariau gwall y cafwyd eu gwerthoedd trwy rannu pob gwyriad safonol â gwreiddyn sgwâr nifer y samplau yn y ffigurau.

Yn y dadansoddiad o'r gyfradd achosion o lid yn seiliedig ar y cwestiwn deuol (a yw hufen retinol yn llidus: Y/N), cynhaliwyd y prawf chi-sgwâr i ymchwilio i'r arwyddocâd ystadegol.

3. Canlyniadau a Thrafodaeth

3.1. Cynnig Genynnau Targed ar gyfer Sgrinio Gwrth-Irritants i Lid a Achosir gan Retinol

3.1.1. Gwerthusiad Clinigol 1af - Cymhwyso Retinol ar Draws a Dadansoddiad o'i Nodweddion Anhydrin

Fe wnaethom ymchwilio i briodweddau llidus retinol a'i berthynas â sensitifrwydd croen 173 o unigolion Corea. Fe wnaethant gymhwyso retinol am 3 diwrnod, a ddilynwyd gan weddill o 4 diwrnod yr wythnos am 3 wythnos, gyda phob crynodiad o retinol yn cynyddu'n raddol bob wythnos (2500 IU yn yr wythnos 1af, 3300 IU yn yr 2il wythnos, a 5000 IU yn y 3edd wythnos). Yna, dadansoddwyd yr holiadur a dderbyniwyd ar ôl yr arbrawf i ymchwilio i'r ffactorau sy'n ymwneud â llid a achosir gan retinol.

Dywedodd cyfran uwch o gyfranogwyr yn y grŵp croen sensitif eu bod wedi profi llid o gymharu â’r grŵp croen ansensitif (Ffigur 2a). Dangoswyd hefyd bod unigolion sy'n perthyn i'r grŵp croen sensitif tua thair gwaith yn fwy tebygol o fod â phrofiad yn y gorffennol o roi'r gorau i ddefnyddio cynhyrchion cosmetig oherwydd llid y croen (Ffigur 2b). Ymhlith y rhai â phrofiadau llid yn y gorffennol, atebodd y rhan fwyaf o unigolion fod colur sylfaenol yn achosi llid, a ddilynwyd gan ataliad haul, glanhawr, a chynhyrchion cosmeutical (Ffigur 2c). Atebodd cyfran uwch o unigolion a oedd â llid croen cynhyrchion retinol yn y gorffennol eu bod wedi cael llid yn yr arbrawf hwn o gymharu â'r rhai nad oeddent wedi profi llid wrth ddefnyddio cynhyrchion retinol yn y gorffennol (Ffigur 2d). Datgelodd y canlyniad hwn fod llid a achosir gan retinol yn tueddu i ddigwydd dro ar ôl tro yn dibynnu ar unigolion, sy'n cefnogi'r rhagdybiaeth y gallai ffactorau genetig effeithio ar y sensitifrwydd i retinol. Mae astudiaethau cynharach wedi dangos bod amrywiadau genetig yn effeithio'n sylweddol ar fio-argaeledd retinol a retinoid, sy'n cefnogi y gallai ffactorau genetig hefyd reoli llid a achosir gan retinol [27,28].

Mae'r math o lid a achosir gan ddefnydd retinol yn amrywio'n fawr ymhlith unigolion. Fodd bynnag, pigo oedd yn fwyaf cyffredin, a oedd yn cynnwys tua thair rhan o bedair o'r llid a dilynwyd hynny gan losgi, cosi ac erythema (Ffigur 2e).

(c) Cyfran yr unigolion sy'n profi llid wrth ddefnyddio cynhyrchion cosmetig sylfaenol. (d) Cyfran yr unigolion sydd â phrofiad blaenorol o lid i gynhyrchion sy'n cynnwys retinol. (e) Y mathau o lid y mae unigolion wedi'u profi wrth ddefnyddio cynhyrchion amserol sy'n cynnwys retinol; * gwerth-p < 0.05; *** p-gwerth < 0.001; ns, ddim yn arwyddocaol.

3.1.2. Dadansoddiad Genynnau Ymgeisydd ar gyfer Llid a Achosir gan Retinol

Er mwyn darganfod amrywiadau genetig sy'n gysylltiedig â sensitifrwydd croen i retinol, dewiswyd 14 genyn ymgeisydd sy'n adnabyddus am eu swyddogaethau mewn metaboledd retinoid a sensitifrwydd croen (Tabl S2). Cyfeiriasom at ddadansoddiad trawsgrifomig blaenorol o'r croen ailgyfansoddedig 3D o dan driniaeth sensiteiddwyr [29].

Dewiswyd cyfanswm o 319 PCE sydd wedi'u lleoli o fewn y genynnau ymgeisydd a'u defnyddio ar gyfer y dadansoddiad cysylltiad gan ddefnyddio'r model ychwanegyn. Roedd tri deg PCE yn arwyddocaol gysylltiedig â llid a achosir gan retinol, ac nid oes yr un ohonynt wedi'u hadrodd yn flaenorol (p < {{ }}.05; Tabl 1). Yn fanwl, canfuwyd cyfanswm o 12 PCE yn RARB, tri yn EGFR, tri yn CD44, dau yn IL18, dau yn IL4R, a phedwar yn BCL2. Roedd y pedwar genyn arall, CD86, RXRB, MMP10, a COL6A2, yn cynnwys SNPs sengl. Roedd yr SNPs a ddarganfuwyd yn perthyn i 10 genyn, dau ohonynt yn enynnau cysylltiedig â retinol, ac roedd yr wyth arall yn gysylltiedig â sensitifrwydd croen cyffredinol yn ôl astudiaethau cynharach. Ymhlith y 10 genyn, dewiswyd y tri genyn pwysicaf o ran llid y croen: COL6A2, EGFR, ac IL-4R.

Dangoswyd bod COL6A2, sy'n amgodio un o'r tair cadwyn alffa o golagen math VI a geir yn y mwyafrif o feinweoedd cysylltiol, yn rheoleiddio cynulliad matrics dermol a symudedd fifibroblast [30], ac mae'n cyfrannu at ailfodelu meinwe a gwella clwyfau [31,32]. Mae'r diffyg hwn yn arwain at ffurfio keloid [33] a ffenoteipiau croen annormal [34]. Mae derbynnydd ffactor twf epidermaidd (EGFR) yn rheolydd pwysig o swyddogaeth rhwystr epidermaidd. Dangoswyd bod signalau EGFR yn atal cymhwysedd yr amlen cornifified ac yn amharu ar swyddogaeth rhwystr cyffordd dynn mewn keratinocytes epidermaidd [35,36]. Yn ogystal â signalau EGFR, credir bod ystod eang arall o ffactorau megis ADAM17 (disintegrin a metalloproteinase 17) [37] a sianel TRP [38] hefyd yn effeithio ar y swyddogaeth rhwystr epidermaidd sy'n gysylltiedig yn systematig ag EGFR.

Yn ystod yr ychydig ddegawdau diwethaf, mae swyddogaethau a rolau interleukin 4 (IL-4) a'i dderbynnydd, IL-4R, wedi cael eu hymchwilio'n helaeth. Fel rheolydd allweddol yn y system imiwnedd humoral ac addasol, mae IL-4, sy'n cael ei gyfrinachu'n bennaf o gelloedd mast a chelloedd Th2, yn cymell gwahaniaethu celloedd Th2 ac yn ysgogi celloedd B. Er nad yw ei rôl yn cael ei deall yn glir, mae llawer o astudiaethau wedi nodi y gall IL-4 yrru prosesau pro- a llid helaeth, tra dangoswyd bod ei ddiffyg yn gyrru clefyd alergaidd, clefyd Alzheimer, a thiwmorau [39]. Ar hyd yr un echel ar gyfer yr ymateb imiwn sy'n gysylltiedig ag IL-4-, mae IL-4R yn cael ei fynegi'n hollbresennol ar wahanol gelloedd imiwn yn y systemau imiwnedd cynhenid ​​ac addasol. Mae IL-4R yn dderbynnydd cyffredin ar gyfer IL-4 ac IL-13 [40]. Yn wahanol i IL-4, sy'n effeithio'n uniongyrchol ar wahaniaethu Th2, mae IL-13 hefyd yn gyfrifol am actifadu celloedd mast, sy'n rheoli swyddogaeth eosinoffilig, ac mae ganddo effeithiau gwrthimiwnedd a gwrthlidiol ar macroffagau trwy atal cytocinau pro-llidiol. a chemocinau [41].

3.2. Dull o'r Brig i Lawr: Sgrinio Gwrth-Irritants In Vitro

3.2.1. Genynnau sy'n Gysylltiedig â Thrwsio Meinwe, COL6A2, ac EGFR

Yn seiliedig ar y genynnau a ddewiswyd, fe wnaethom sgrinio ar gyfer gwrth-lidyddion a allai fodiwleiddio pathogenesis moleciwlaidd, megis rheoli mynegiant y genynnau targed.

Datgelodd adroddiadau cynharach fod retinoidau yn achosi newidiadau ffisiolegol a morffolegol yn rhwystr y croen [8,42,43]. Sylwyd bod trin meinwe croen ag asid retinoig ex vivo ac in vivo yn cynyddu colled dŵr trawsepidermal (TEWL), ac mae sawl astudiaeth wedi datgelu bod yr amhariad hwn ar swyddogaeth rhwystr croen yn cael ei gyfryngu gan batrwm mynegiant anghydbwysedd o'r amlen cornified a dynn. genynnau sy'n gysylltiedig â chyffordd. Gwelwyd is-reoleiddio filaggrin (FLG), loricrin, a CLDN1, a dadreoleiddio CLDN2, CLDN4, a mynegiant sylweddol wahanol o enynnau aelod o'r teulu serpin mewn astudiaeth gynharach, y credir ei fod yn brif achos llid a achosir gan retinoid. [10,11]. \Roeddem yn rhagdybio bod unigolion ag amrywiadau genetig yn COL6A2 ac EGFR yn tueddu i fod yn agored i wanhau swyddogaeth rhwystr croen gan retinol, sy'n arwain at lid a achosir gan retinol (Ffigur 3a). Fe wnaethom hefyd ystyried, ar wahân i golagen VI, bod colagen IV hefyd yn ffactor pwysig yn y bilen islawr epidermaidd a'r broses gwella clwyfau, er bod ei union rôl yn y meinwe croen yn parhau i fod yn aneglur [44]. Tybiwyd gennym fod diffyg neu annormaledd colagen VI a IV yn arwain at dueddiad i lid a achosir gan retinol, a gallai gorfynegiant y ddau fath o golagen wanhau'r gwanhau a achosir gan retinol yn rhwystr y croen. Ymhlith y gwahanol sylweddau, gwelsom fod glwcosamin yn cynyddu mynegiant COL6A2 a COL4A2 gan 1.5-plyg ac 1.7-plyg, yn y drefn honno (Ffigur 3a, panel canol). Nid yw rôl fodiwlaidd glwcosamin ar COL6A2 a COL4A2 wedi'i hadrodd o'r blaen, sy'n awgrymu bod yr arsylwadau hyn yn wyddonol bwysig.

Yn achos EGFR, gwnaethom ystyried yn ofalus ymchwil flaenorol sy'n nodi bod asid retinoig yn achosi gorfynegiant aquaporin 3 (AQP3) trwy'r llwybr EGFR / ERK mewn keratinocytes dynol [45]. Yn yr adroddiad cyntaf, gwelsom fod nid yn unig asid retinoig ond hefyd retinol wedi achosi'r mynegiant AQP3 tua deublyg mewn ffibroblastau (panel dde Ffigur 3a). Mae effaith gwanhau gorfynegiant AQP3 gan niacinamide (nicotinamide) yn debyg i'r hyn a ddarganfuwyd mewn astudiaeth gynharach. Ymhlith y sylweddau amrywiol, mae trehalose ac ewpatilin wedi'i wanhau gan wasgedd overex AQP3 a achosir gan retinol. Adroddwyd bod Eupatilin (5,7-dihydroxy-3',4',6-trimethoxyflavone), math o flavonoid a ddarganfuwyd yn Artemisa asiatica, yn gwella swyddogaeth rhwystr y croen o dan amodau patholegol in vivo [46].

Yn ogystal, gwnaethom ymchwilio i fynegiant FLG, sy'n brif ddangosydd swyddogaeth rhwystr croen. Yn debyg i astudiaethau in vivo blaenorol [47], gwelsom fod retinol wedi lleihau mynegiant FLG yn sylweddol tua 45 y cant, a gwrthdroi'r gostyngiad hwn gan niacinamide, glwcosamine, a swcralfate (Ffigur S1a, gweler Deunyddiau Atodol).

Gyda'i gilydd, gallai glwcosamin, trehalose, a swcralfate liniaru aflonyddwch croen a achosir gan retinol trwy fodiwleiddio mynegiant COL6A2, AQP3, a FLG.

3.2.2. Genyn llidiol: IL-4R

Yna, fe wnaethom geisio nodi gwrthlidyddion sy'n gysylltiedig â genynnau llidiol. Yn seiliedig ar ein canlyniadau dadansoddiad genetig, dangoswyd bod unigolion sy'n dueddol o gael llid a achosir gan retinol yn tueddu i fod â marcwyr SNP ar gyfer IL-4R ond nid IL-4. Yn gyntaf, gwnaethom ymchwilio i weld a yw triniaeth â retinol yn modylu mynegiant IL-4 neu IL-4R mewn celloedd mast, sydd hefyd yn brif yrrwr llid sy'n gysylltiedig ag IL-4-. Fe wnaeth Retinol achosi gorfynegiant IL-4R 1.74-plyg. Er na wnaeth retinol achosi gorfynegiant IL-4 (Ffigur S1b, gweler Deunyddiau Atodol), sylwyd bod ectoin i bob pwrpas yn lleihau mynegiant IL-4 y gell mast, sy'n cyd-fynd ag astudiaethau cynharach a oedd yn dadlau effeithiau gwrthlidiol ectoine mewn rhai modelau clefyd fel IBD (clefyd y coluddyn llidiol) a chlefyd llwybr anadlu alergaidd [48,49]. Yn fwy penodol, dangosodd astudiaethau cynharach y gallai ectoine normaleiddio mynegiant IL-4 yn llid yr ysgyfaint a achosir gan CNP (carbon nanoronynnau) mewn model in vivo, gan gefnogi ein canlyniadau arbrofol [50].

Lliniaru crosin, glwcosamine, ac ectoine y gorfynegiant a ysgogwyd gan retinol o IL-4R mewn celloedd mast, gyda gostyngiad o 37.03 y cant, 41.97 y cant, a 82.59 y cant, yn y drefn honno. Dangoswyd bod ectoin (1,4,5,6-tetrahydro-2-methyl-4-asid pyrimidinecarboxylic), cyfansoddyn naturiol a ddarganfuwyd mewn nifer o facteria haloffilig, yn modiwleiddio llawer o cytocinau a chemocinau o dan amodau llidiol, er nad yw rôl ectoine wrth wella mynegiant IL-4R wedi'i egluro eto. Mae ein harsylwadau yn cynnig mewnwelediad newydd i swyddogaeth ectoin. Dangosodd astudiaeth flaenorol gan ein grŵp fod ectoin ar grynodiad gorau posibl o 100 ppm yn dangos yr effaith gwrthlidiol uchaf yn erbyn effeithiau retinoidau a sytowenwyndra dibwys yn yr arbrawf in vitro sy'n seiliedig ar gelloedd (data heb ei ddangos). Fe wnaethom hefyd fesur cyfradd rhyddhau -hexosaminidase o gelloedd mast, sy'n ddangosydd o ddirywiad celloedd mast (Ffigur 3b, panel dde). Ni leihaodd Ectoine ryddhad -hexosaminidase a achosir gan retinol yn y retinol 400 ppm, er ei fod yn lleihau rhyddhau -hexosaminidase a achosir gan retinol yn y retinol 200 ppm. Gyda'i gilydd, gellir dod i'r casgliad y gall ectoine leddfu llid sy'n gysylltiedig â IL{-4 ac IL{{-4R) a achosir gan retinol. O ystyried yr ymchwil flaenorol bod ectoine yn ymyrryd wrth actifadu EGFR mewn llid yr ysgyfaint a achosir gan CNP [50], mae'n ymddangos bod ectoine hefyd yn fuddiol ar gyfer tarfu rhwystr croen a achosir gan retinol.

3.2.3. Llid Niwrogenig, Adiponectin, a TRPV1

Un nodwedd wahaniaethol o lid a achosir gan retinol mewn cleifion hynod o sensitif i retinoid yw adweithiau tebyg i alergedd fel llosgi cyflym a theimlad o bigiad, cosi, oedema tryledol cyflym, a brech. Datgelodd astudiaeth fod retinoidau, gan gynnwys retinol ac asid retinoig, yn actifadu TRPV1 [21]. Felly, rydym yn rhagdybio bod llid a achosir gan retinol, yn enwedig yn digwydd yn brydlon o fewn ychydig funudau, yn cael ei gyfryngu gan actifadu TRPV1 gan retinol.

Ffigur 3. Y dadansoddiad ar gyfer mynegiant mRNA i sgrinio gwrth-lidyddion a allai fodiwleiddio pathogenesis moleciwlaidd sy'n gysylltiedig â llid. (a) Ymchwiliad i bathogenesis moleciwlaidd sy'n gysylltiedig ag amhariad ar y croen Diagram sgematig ar gyfer y dull modiwleiddio genetig ar gyfer retinol (darfodiad rhwystr croen a achosir gan ROL. (chwith) Mynegiad mRNA cymharol COL4A2 a COL6A2 pan gafodd ffibroblastau eu trin â glwcosamin (canol) a mynegiad mRNA cymharol AQP3 (keratinocyte, ar y dde). (b) Ymchwiliad ar gyfer llid (a yrrir gan gell mast) pathogenesis moleciwlaidd cysylltiedig. Mynegiad mRNA cymharol IL-4R pan gafodd RBL-2H3 ei drin ag 1 0 µM retinol ac ymgeiswyr amrywiol. (c) Llid niwrogenig wedi'i gyfryngu â TRPV1 a achosir gan retinol ac effaith antagonistaidd gan 4-t-butylcyclohexanol ac omega-9; Tri chyflwr ar gyfer cyfuniad: (1) 4-t-butylcyclohexanol 25 µM ac omega-9 5 µM, (2) 4-t-butylcyclohexanol 50 µM ac omega-9 10 µM, a (3) 4- t-butylcyclohexanol 100 µM a omega-9 20 µM, BC, 4-t-butylcyclohexanol; OA, omega-9 asid oleic; Dangoswyd bar graddfa 50 µm (gwyn); * p < 0.05; ns, ddim yn arwyddocaol; dangoswyd bar gwall; ppm, rhannau y filiwn.

Mae TRPV1, catation nonselective a weithredir gan wahanol ysgogiadau ffisigocemegol, wedi'i astudio'n eang, yn enwedig ei rôl yn y croen. [51-54] Er na ddaeth TRPV1 i'r amlwg yn y dadansoddiad genetig blaenorol, dylid nodi bod adiponectin (ADIPQ) yn ymddangos mewn rhai modelau dadansoddi gydag arwyddocâd ystadegol isel i gymedrol. Dangosodd astudiaeth gynharach o boblogaeth Corea ei bod yn ymddangos bod y ffenoteip croen "sensitif" yn gysylltiedig â diffyg adiponectin, sydd o ganlyniad yn cyfrannu at ddadreoleiddio TRPV1 [55]. Cafodd celloedd TRPV a orfynegodd HEK293 eu trin â retinol, a chadarnhawyd gweithrediad TRPV1 trwy ddelweddu mewnlifiad calsiwm. Gwelsom y gallai retinol actifadu TRPV1 mewn modd sy'n dibynnu ar ddos ​​(Ffigur S1c, gweler Deunyddiau Atodol). Mewn crynodiadau uwch na 50 µM, roedd yn ymddangos bod yr effaith agonistaidd ar TRPV1 yn cyrraedd llwyfandir. Yn seiliedig ar astudiaeth flaenorol, gwnaethom ymchwilio i weld a all 4-t-butylcyclohexanol ac omega-9 asid oleic elyniaethu actifadu TRPV1 a achosir gan retinol. Yn ôl y disgwyl, gall y ddau sylwedd elyniaethu TRPV1, tra ar ddos ​​isel, roedd asid oleic omega-9 yn fwy grymus na 4-t-butylcyclohexanol (Ffigur S1d, gweler Deunyddiau Atodol). Dangosodd y cyfuniad o'r ddau ddeunydd hyn ychydig o effaith synergaidd ar ataliad TRPV1 gan retinol. Dangosodd tri chrynodiad gwahanol o'r cyfuniad o 4-t-butylcyclohexanol a omega-9 lai o actifadu TRPV1 a achosir gan retinol, 28.25 y cant , 43.73 y cant , a 68.50 y cant , yn y drefn honno. Gwelwyd mewnlifiad calsiwm i gelloedd wedi'i gyfryngu gan actifadu TRPV1 o dan ficrosgopeg fflwroleuol (Ffigur 3c). I gloi, gwnaethom wirio y gallai llid a achosir gan retinol hefyd fod yn gysylltiedig â llid niwrogenig wedi'i gyfryngu gan actifadu TRPV1 mewn model in vitro, a gellid defnyddio asid oleic butylcyclohexanol ac omega-9 i liniaru niwrogenig. inflflam mation gan elyniaethu TRPV1.

E-bost:wallence.suen@wecistanche.com Whatsapp plws 86 15292862950