Ymateb Imiwn Gwell Beta-glwcan i Frechlyn Clefyd Newcastle A Mynegiant MRNA Wedi Newid o Ddug mewn Ieir

ABSENOLDEB

Perfformiwyd yr astudiaeth bresennol i ymchwilio i effaith rhoi b-glwcan (G70), cynnyrch a geir o wal gell burum, ar deitlau ataliad hemagglutination (HI) penodol firws clefyd Newcastle (NDV), amlhau lymffocytau, a rôl isboblogaethau lymffosyt T mewn ieir sy'n cael eu trin â brechlyn NDV byw. Yn ogystal, archwiliwyd dylanwad b-glwcan ar fynegiant genynnau splenig trwy ddilyniannu trawsgrifiad. Datgelodd y canlyniadau fod ychwanegiad b-glwcan wedi rhoi hwb i'r titer o serwm NDV Cynyddodd HI fynegai symbyliad NDV o lymffocytau mewn gwaed ymylol a llwybr berfeddol, a hyrwyddo gwahaniaethu lymffocytau T i gelloedd T CD4+. Dangosodd y dadansoddiad dilyniannu RNA (RNA-seq) fod G70 wedi uwchreoleiddio'r mynegiadau mRNA sy'n ymwneud â derbynnydd cypledig G-protein a polypeptid dosbarth I MHC, ac wedi is-reoleiddio'r mynegiadau mRNA yn ymwneud â cathelicidin a betadefensin. Gallai effaith immunomodulatory G70 weithredu trwy'r llwybr signalau kinase protein a weithredir gan mitogen. I grynhoi, gallai G70 roi hwb i effeithiolrwydd imiwnolegol brechlyn NDV byw mewn ieir a gellid ei gymhwyso fel ymgeisydd cynorthwyol posibl yn y diwydiant dofednod.

cistanche tubulosa-gwella system imiwnedd

Geiriau allweddol: brechlyn clefyd Newcastle, beta-glwcan, cynorthwyol, cyw iâr asgwrn du, RNA-seq

RHAGARWEINIAD

Mae polysacaridau wal gell burum yn cael eu rigineiddio'n uniongyrchol o wal gell Saccharomyces cerevisiae ac fe'u defnyddir yn eang fel hyrwyddwyr twf, asiantau gwrthficrobaidd, neu imiwnofodylyddion mewn dofednod i wella cynhyrchiant ac iechyd (Schiavone et al., 2017; Hasted et al., 2021). Yn flaenorol, dangoswyd bod cynnyrch o’r enw PW220, sy’n cynnwys polysacaridau wal gell burum, yn hybu’r ymateb imiwn a ysgogwyd gan firws clefyd Newcastle (NDV) ac yn newid cymuned ficrobaidd cecum ieir trwy roi llafar (Bi et al., 2020). ). Mae polysacaridau cellfuriau burum yn cynnwys b-glwcan a mannan-oligosaccharides yn bennaf (Wang et al., 2018). Yn yr astudiaeth bresennol, ymchwiliwyd i b-glwcan am ei effaith ar yr ymateb imiwn i frechlyn NDV mewn ieir. Mae'r ddueg yn organ ganolog ar gyfer cychwyn yr ymateb imiwn. Nododd astudiaeth ddiweddar fod PW220, sy'n gynnyrch cellfur burum, wedi dadreoleiddio mynegiant mRNA TGF-b, IL-6, TLR5, GATA-3, a T-bet yn dueg ieir ( Bi et al., 2022). Fodd bynnag, mae angen egluro'r mecanwaith penodol. Mae dilyniannu RNA (RNA-seq) yn un o'r technolegau trwybwn uchel y gellir eu cymhwyso i assay mynegiant genynnau meintiol a darparu dadansoddiad o broffiliau mynegiant gwahanol ar lefel y trawsgrifiad cyfan (Zhao et al., 2018). Gyda manteision sensitifrwydd uchel a chost isel, mae RNA-seq wedi'i ddefnyddio'n fras mewn astudiaethau da byw a dofednod (Teixeira et al., 2019; Yuan et al., 2020). Felly, yn yr astudiaeth hon, aseswyd effaith gweinyddu b-glwcan ar deitrau ataliad hemagglutination (HI) NDV-benodol, ymlediad lymffocytau, ac is-boblogaethau T-lymffosyt mewn cywion ieir sydd wedi'u brechu ar lafar â brechlyn NDV. At hynny, defnyddiwyd dadansoddiad trawsgrifio i werthuso effaith b-glwcan ar fynegiant genynnau a llwybrau trawsgludo signal sylfaenol yn ddueg ieir.

cistanche tubulosa-gwella system imiwnedd

Cliciwch yma i weld cynhyrchion Gwella Imiwnedd Cistanche

【Gofyn am fwy】 E-bost:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Anifeiliaid

Prynwyd ieir asgwrn du masnachol undydd (gwrywaidd) gan Guizhou Yushun Poultry Co, Ltd (Anshun, Tsieina). Rhannwyd yr ieir yn gewyll gwifren gan ganiatáu mynediad am ddim i borthiant a dŵr. Yn y 7 d cyntaf, cynhaliwyd tymheredd yr ystafell ar 33 gradd C i 35 gradd Cand yna gostyngodd 1 gradd C am bob 2 d tan 27 gradd C yn raddol. Proseswyd pob ieir yn ôl y safonau a sefydlwyd gan Ofal Anifeiliaid Prifysgol De-orllewin a Pwyllgor Defnyddio (Rhif Tystysgrif Moeseg: IAC-2021-0057). Cafodd pob aderyn arbrofol ei ewthaneiddio â CO2 ar ddiwedd yr astudiaeth.

manteision cistanche ar gyfer dynion-cryfhau system imiwnedd

Brechlyn

Darparwyd y brechlyn byw o NDV (Strain La Sota) gan Qingdao YEBIO Bioengineering Co, Ltd (Qingdao, Tsieina).

Adweithyddion 

Cafwyd cynnyrch wal gell burum (YP) G70 o wal cell burum (Saccharomyces cerevisiae), sy'n cynnwys b-glwcan (Yn fwy na neu'n hafal i 70%) (AngelG70, QB/T4572, Angel Yeast, Yichang, Tsieina). Prynwyd sera antigen a rheolaeth gadarnhaol ar gyfer mesur teitrau HI penodol i NDV o Ganolfan Datblygu Diagnosteg Qingdao Regen (Qingdao, Tsieina). CD gwrth-cyw iâr3-APC (C2818-T9580), CD4-FITC(D0117-WA78E), a CD8- PE (L{{14) Cynigiwyd }}TH49T) mewn llygod mawr gan Nanjing Zeweil Biological Technology Co, Ltd (Nanjing, Tsieina).

Dylunio Arbrofol

Cafodd pedwar deg wyth o ieir asgwrn du yn 5 diwrnod oed eu neilltuo ar hap i 3 grŵp (Tabl 1) a rhoddwyd naill ai'r diet gwaelodol (Tabl 2) neu'r diet gwaelodol gyda 0.1% G7{{10} } (b-glwcan, 0.7 g/kg) atodiad am gyfnod yr ymchwil presennol. Cafodd brechlyn NDV Grŵp H (G70 +) a C (Brechlyn) eu himiwneiddio trwy'r geg ar 14 a 28 d, yn y drefn honno. Cafodd Grŵp S (Sailne) ei drin â chyfaint cyfartal o halwynog. Cynaeafwyd samplau gwaed trwy wythïen-bigo adenydd yn 5, 7, 14, 21, 28, 35, a 42 d oed i brofi'r titer HI. Saith diwrnod ar ôl y brechiad atgyfnerthu, cafodd 8 iâr ym mhob colofn eu dewis ar hap a'u haberthu trwy fygu gan ddefnyddio CO2. Gwahanwyd lymffocytau oddi wrth waed ymylol a jejunum i berfformio ymlediad lymffocytau a dadansoddiad cytometreg llif. Yn achos samplu jejunal, y ligament crog dwodenol oedd man cychwyn y jejunum a chasglwyd adran 5 cm o hyd o fan cychwyn y jejunum. Roedd y ddueg wedi'i rewi'n gyflym mewn nitrogen hylifol ac yna'n cael ei storio ar -80 gradd ar gyfer RT-qPCR a phroffilio dilyniant.

Tabl 1. Dyluniad arbrofol

Tabl 2. 1 Cyfansoddiad a chynnwys maeth dietau gwaelodol brwyliaid arbrofol.

Astudiaeth HI

Perfformiwyd yr assay ar gyfer titers HI penodol NDV yn y serwm yn dilyn y disgrifiad blaenorol (Ball et al., 2019). Yn gryno, cafodd serwm ei wanhau â halwynog wedi'i glustogi â ffosffad (PBS) o 1:2 i 1:1,024 yn y plât microteitr ffynnon 96-gwaelod V. Yna, ychwanegwyd 25 ml o wanhau NDV fesul ffynnon a'i ddeor ar 37 gradd am 30 munud. Ar ôl hynny, ychwanegwyd 25 ml o ataliad erythrocyte ceiliog 1% at bob ffynnon a'i ddeor ar 37 gradd am 30 munud. Profwyd pob sampl ddwywaith a chynhwyswyd rheolaethau cadarnhaol a negyddol ar bob plât. Roedd titers HI yn seiliedig ar y gwanhad mwyaf a arweiniodd at ataliad llwyr o hemagglutination. Mesurwyd y titer HI cyfartalog a gwall safonol (SE) fesul grŵp.

Ynysu Lymffocytau O Waed Ymylol

Cafodd lymffocytau eu hynysu a'u casglu o lymffocytau gwaed ymylol gan ddefnyddio'r Pecyn Canolig Gwahanu Lymffocyt (Tianjin Haoyang Biological Manufacture Co. Ltd., Tianjin, Tsieina). Yna, cafodd lymffocytau eu storio mewn ataliad gyda RPMI 1640 cyfrwng (Solarbio, Beijing, Tsieina) gan gynnwys serwm llo ffetws 5% a 25 mM HEPES (pH 7.0).

Ynysu Lymffocytau O Jejunum

Cynhaliwyd y broses aseiniad yn unol â'r disgrifiad blaenorol, a chyda mân addasiadau (Yuan et al., 2020). Yn fyr, defnyddiwch hidlydd cell 70 mm i rannu'r coluddyn yn 4 ml o PBS oer. Yn dilyn hynny, cafodd ataliad celloedd sampl ei allgyrchu ar 4,500 rpm am 12 munud gyda thynnu'r uwchnatant. Yna, ataliwch y celloedd perfedd i gyfrwng llawn (Solarbio Co., Beijing, China) sy'n cynnwys 5% o serwm buchol ffetws (FBS) yn RPMI 1640 (Sijiqing Co., Hangzhou, Tsieina). Yn y diwedd, mae'r pecyn ynysu lymffosyt cyw iâr (Tianjin Haoyang Biological Manufacture Co. Ltd.) i wahanu lymffocytau. rhannwyd meinwe'r coluddyn yn 4 ml o PBS oer gan ddefnyddio hidlydd cell 70 mm. Nesaf, cafodd ataliad celloedd sampl ei allgyrchu ar 4,500 rpm am 12 munud a chafodd y supernatant ei daflu. Ar ôl hynny, cafodd y celloedd berfeddol eu hailddarlledu i RPMI 1640 (Solarbio Co.) sy'n cynnwys 5% FBS (Sijiqing Co.). Yn olaf, gwahanwyd lymffocytau gan ddefnyddio'r pecyn ynysu lymffocytau cyw iâr (Tianjin Haoyang Biological Manufacture Co. Ltd.).

Ymlediad Lymffocytau 

Cafodd celloedd eu hadu mewn 96-platiau ffynnon (5£105 y ffynnon), wedi'u hysgogi gan antigen NDV anweithredol ar gyfer 4 uned hemagglutination neu gyfaint cyfartal o halwynog. Profwyd pob sampl mewn 3 atgynhyrchiad. Deorwyd y celloedd a'r antigen am 44 h ar 37 gradd mewn 5% CO2 ac yna ychwanegwyd 50 mL methyl thiazolyl tetrazolium (MTT) (2 mg / mL) at bob ffynnon a'i ddeor am 4 awr arall. Cafodd y samplau eu centrifugio ar 1,200 £ g am 8 munud ar dymheredd dan do. Wedi hynny, tynnwyd y supernatant yn ofalus ac ychwanegwyd 100 ml o DMSO at bob ffynnon. Ysgwyd y platiau am 8 munud i hydoddi'r crisialau yn llawn. Yn olaf, cofnodwyd y dwysedd optegol cyfartalog (OD) yn 570 nm. Cafwyd y mynegai ysgogi (SI) gan ddefnyddio'r hafaliad: gwerthoedd OD ffynhonnau wedi'u hysgogi / gwerthoedd OD ffynhonnau heb eu symbylu (Cui et al., 2020).

manteision cistanche ar gyfer dynion-cryfhau system imiwnedd

Dadansoddiad Cytometreg Llif o Isboblogaethau T-Lymffosyt

Cafodd ataliadau celloedd lymffoid eu hynysu a'u golchi ddwywaith gyda PBS. Addaswyd crynodiad y gell i 106 /mL ac yna'i gadw ar yr iâ. Cafodd pob sampl ei staenio â 2 ml o CD gwrth-cyw iâr llygod mawr3-APC, CD4- FITC, a CD gwrth-cyw iâr llygod mawr8-PE dan amodau gwrth-olau am 30 munud, wedi'i ddilyn trwy 2 olchi gyda PBS. Assayed y celloedd trwy ddadansoddiad cytometreg llif ar cytomedr Llif (BD Bioscience, San Jose, CA).

Dadansoddiad RT-qPCR

Roedd cyfanswm yr RNA yn deillio o'r ddueg gan ddefnyddio adweithydd TRIzol (Takara, Shiga, Japan) yn unol â chanllawiau'r gwneuthurwr ac yna'n cael ei drawsnewid yn cDNA gan ddefnyddio PrimeScript RT Master Mix (Takara, Dalian, China) ar feiciwr thermol T100 (Bio-Rad, Hercules, CA). Defnyddiwyd y beta-actin cyw iâr fel genyn rheolaeth fewnol. Cynhaliwyd RT-qPCR o enynnau dethol ar System PCR Amser Real Lluosog (AB, Carlsbad, CA) gyda'r SYBR Premix Ex Taq II (Tli RNAseH Plus) (Takara). Perfformiwyd y dull meintiol cymharol (244CT) i asesu'r amrywiad meintiol (Bi et al., 2022). Rhestrir y dilyniannau preimio yn Nhabl 3.

Echdynnu RNA

Defnyddiwyd pob un o'r 3 sampl dueg o Grŵp H (G70 +Vaccine) a Grŵp C (Brechlyn) ar gyfer yr adweithydd RNA-seq ag adweithydd TRIzol (Takara). Ar ôl hynny, profwyd yr RNA am halogiad a diraddiad gyda gel agarose 1% a dadansoddwyd y purdeb RNA gan ddefnyddio sbectrophotometer NanoPhotometer (IMPLEN, Westlake Village, CA). Penderfynwyd ar grynodiad RNA gan ddefnyddio Pecyn Assay Qubit RNA yn Qubit 2.0 Fluorometer (Life Technologies, Carlsbad, CA). Mesurwyd cywirdeb RNA gan ddefnyddio Pecyn Assay RNA Nano 6000 o'r system Bioanalyzer 2100 (Agilent Technologies, Santa Clara, CA). Dangosodd y canlyniadau fod yr RNA yn gyflawn a heb halogiad DNA.

Dadansoddiad Trawsgrifiadol

Darparwyd dilyniant trawsgrifiad, cydosod dilyniant, a dadansoddi data gan Novogene Bioinformatics Technology Co. Ltd. (Beijing, Tsieina). Rhestrwyd y prif weithdrefnau ar gyfer trawsgrifiad fel a ganlyn: 1) Perfformiwyd puro mRNA o gyfanswm RNA gan ddefnyddio gleiniau magnetig poly-T yn gysylltiedig ag oligo. Cyflawnwyd darnio gyda catïonau divalent yn NEB Clustogi Adwaith Synthesis Llinyn Nesaf Nesaf (5X) ar dymheredd uchel. 2) Cafodd cDNA llinyn cyntaf ei faint synthe gan ddefnyddio paent preimio hecsamer ar hap a Firws Lewcemia Moloney Murine (M-MuLV) Reverse. Yna cafodd synthesis cDNA ail linyn ei syntheseiddio gan ddefnyddio DNA Polymerase I ac RNase H. 3) Trawsnewidiwyd y bargodion oedd yn weddill yn bennau di-fin trwy'r gweithgareddau exonuclease/polymeras. Yna cysylltwyd NEB Next Adapter adeiledd dolen hairpin i baratoi ar gyfer hybrideiddio ar ôl adenylation diwedd 3' y darnau DNA. 4) Cafwyd tua 250 i 300 darnau cDNA bp a purwyd y llyfrgell gan ddefnyddio system AMPure XP Beckman Coulter (Beckman Coulter, Beverly, MA). Yna cymhwyswyd Ensym NEBU SER 3 ml (Thermo Fisher, Hillsboro, NEU) gyda cDNA wedi'i ddewis o ran maint, wedi'i addasu gan glymwr ar 37 gradd C am 15 munud, ac yna 5 munud ar 95 gradd. Cyflawnwyd ymhelaethiad PCR gyda polymeras DNA Phusion High-Fidelity. Yn y diwedd, purwyd cynhyrchion PCR (system AMPure XP) ac amcangyfrifwyd ansawdd y llyfrgell gan ddefnyddio system Agilent Bioanalyzer 2100. Perfformiwyd clystyru'r samplau cod mynegai ar TruSeq PE Cluster Kit v3-cBot-HS (Illumina, San Diego, CA). Yna, perfformiwyd y dilyniant ar lwyfan Illumina Novaseq a chynhyrchwyd darlleniadau pen pâr 150 bp. Cafodd ffeiliau anodi genom cyfeirio a model genynnau eu llwytho i lawr o wefan y genom (ftp://ftp.ensembl.org/pub/release- 98/fasta/gallus_gallus/ a ftp://ftp. ensembl.org/ pub/re-lease-98/gtf/gallus_gallus/). Sefydlwyd mynegai o'r genom cyfeirio gan ddefnyddio HISAT2 (v2.0.5) ac roedd darlleniadau glân pen pâr yn cyd-fynd â'r genom cyfeirio. Cyfrifwyd nifer y darlleniadau a fapiwyd i bob genyn a'r Darnau Per Kilobase y Miliwn (FPKM) ar gyfer pob genyn yn seiliedig ar hyd y genyn a nifer y darlleniadau a fapiwyd i'r genyn gan ddefnyddio Feature Counts v1.5.{{38} }t3. Cafwyd mynegiant gwahaniaethol rhwng grŵp H (G70 + Brechlyn) a grŵp C (Brechlyn) gan ddefnyddio pecyn DESeq2 R (1.16.1). Genynnau gyda P < 0.05 a |log2 (plyg newid)| Diffiniwyd > 1 fel genynnau mynegiant gwahaniaethol (DEGs).

Tabl 3. Dilyniannau paent preimio ar gyfer RT-qPCR.

Dilysiad PCR Meintiol Amser Real 

Dewiswyd dau DEG wedi'u huwch-reoleiddio a 4 DEG is-reoleiddiedig wrth gymharu grŵp H (G70 + Brechlyn) â Grŵp C (Brechlyn) i gadarnhau'r canlyniadau dilyniannu trawsgrifiad gan RT-qPCR. Troswyd yr RNA i cDNA gan ddefnyddio PrimeScript RT Master Mix (Takara) ar y beiciwr thermol T100 (Bio-Rad). Rhestrir y dilyniannau preimio yn Nhabl 3. Defnyddiwyd b-actin cyw iâr fel y genyn rheoli mewnol. Cynhaliwyd RT-qPCR o enynnau dethol ar System PCR amser real Lluosog (Biosystemau Cymhwysol, Carlsbad, CA) gyda'r SYBR Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus) (Takara). Defnyddiwyd dull meintiol cymharol (244CT) i asesu'r amrywiad mewn meintioli. Perfformiwyd yr holl samplau mewn triphlyg i'w dadansoddi.

Dadansoddiad Ystadegol

Defnyddiwyd prawf post hoc ANOVA unffordd gyda Duncan ar gyfer cymariaethau lluosog rhwng grwpiau gan ddefnyddio meddalwedd SPSS (fersiwn 21.0, SPSS Inc., Chicago, IL). Mynegir data fel y cymedr § SE. Ystyriwyd gwerth P < 0.05 yn ystadegol arwyddocaol.

CANLYNIADAU Effaith b-Glucan ar Deitrau Gwrthgyrff Serwm

Fel y dangosir yn Ffigur 1, gostyngodd teitrau HI penodol NDV ym mhob grŵp cyn brechu a chynyddodd mewn grwpiau H (G70+Brechlyn) a C (Brechlyn) ar ôl imiwneiddio. Yn ddiddorol, gwelwyd lefelau HI uwch yng ngrŵp H (G70+Brechlyn) yn 21 (P > 0.05), 28 (P < 0.{{} 14}}5), 35 (P > 0.05), a 42 (P > 0.05) d oed nag yng ngrŵp C (Brechlyn).

Effaith b-Glucan ar Amlhad Lymffosyt

Dangosir effaith G70 ar ymlediad lymffocytau gwaed ymylol yn Ffigur 2A. Cynyddwyd SI mewn lymffocytau gwaed mewn adar a ategwyd â G70 (G70 + Brechlyn) ar 7 d (P < 0.05) yr imiwneiddiad atgyfnerthu, o'i gymharu â'r grŵp Brechlyn. Ymhellach, cynyddwyd SI mewn lymffocytau jejunal yn sylweddol ar 7 d (P < 0.05) ar ôl imiwneiddiad atgyfnerthu o'i gymharu â'r grŵp Brechlyn (Ffigur 2B).

Effaith b-Glucan ar Gymhareb Cell T CD4 + / CD8 + mewn Gwaed Ymylol 

Roedd Ffigurau 3A a 3B yn dangos gatio celloedd lymffocytau a CD3 + a dangosodd Ffigurau 3C i 3E gymhareb celloedd T CD4 + /CD8 + yn y G70, brechlyn, a grwpiau halwynog, yn y drefn honno. Fel y dangosir yn Ffigur 3F, nid oedd gwahaniaeth rhyfeddol rhwng y grŵp Brechlyn a'r grŵp Halwynog yn dilyn imiwneiddiad atgyfnerthu (P > 0.05), tra bod cyfran y CD4 + /CD{{12} } Roedd cell T yn amlwg yn uwch yn y grŵp G70 (G70 + Brechlyn) nag yn y grŵp brechlyn (P < 0.05).

Ffigur 1. Effaith rhoi b-glwcan drwy'r geg ar deitrau gwrthgyrff serwm i'r brechlyn NDV. Mynegir data fel cymedr § SE.

Mynegiant Genynnau Cysylltiedig

Fel y dangosir yn Ffigur 4, cynyddodd mynegiant mRNA yn sylweddol TGF-b (P < 0.05), IL-6 (P < 0.{{13} }5), a TLR5 (P < 0.05) wedi'u canfod yn ddueg yr ieir a gafodd eu trin â brechlyn G70 (G{-), o gymharu â'r grŵp Brechlyn. Ni chanfuwyd unrhyw wahaniaeth arwyddocaol yn y mynegiant mRNA o IFN-g (P> 0.05), TLR4 (P> 0.05), a TLR3 (P> 0.05) yn y ddueg rhwng y brechlyn G70 (G{0) a Brechlyn grwpiau.

Dadansoddiad Data Dilyniannu RNA 

Arweiniodd dilyniannu RNA o 8 llyfrgell ddueg 24.1 G o ddata crai fel y'i cyflwynir yn Nhabl S1 o'r deunydd atodol. Mae CN yn golygu brechlyn grŵp, ac mae HN yn golygu brechlyn grŵp G70 +. Mae Llyfrgell C1, C2, C3, C4, H1, H2, H3, a H4 yn y drefn honno, yn cynnwys 45,591,492, 47,424,782, 46,193,492, 54,403,376, 47,118,476, 45,81,44,45,81,476,45,814,47,47,118,476,45,814,47,49,49,49,49,49,49,492 8 darlleniad gwreiddiol. Yn dilyn aptamer, tynnwyd dilyniannau amwys a dilyniannau o ansawdd isel, gan adael 44,050,198, 45,449,884, 44,261,112, 52,097,846, 45,542,404, 44,56,96,9720, 440, 440, 440, 440, 440, 440, 4410, 440, 440, 440, 440, 440, 440, 4410, 4410, 440, 440, 4410, 4410, 4410, 440, 440, 440, 4410, 440, 440, 4410, 4410, 4410, 440, 4410, 4410, 4 Roedd mwy na 96% o'r darlleniadau glân ymhlith y darlleniadau gwreiddiol, a pharwyd 8 llyfrgell gan ddefnyddio HISAT2 ar gyfer dilyniannu darlleniadau yn erbyn cronfa ddata gyfeirio yn cynnwys genom Gallus. At hynny, cafodd y darlleniadau glân eu mapio i'r gronfa ddata hon mewn mwy na 95% o achosion. Penodol i'r llyfrgelloedd o'r C1, C2, C3, C4, H1, H2, H3, a H4 oedd 40,921,384 (92.9%), 41,302,100 (90.87%), 40,771,075 (92.11%), 46,99,14 (92.11%), 46,905,284. %), 40,213,444 (90.23%), 40,922,895 (92.77%), a 40,971,972 (93.06%) o ddarlleniadau eu neilltuo'n unigryw i'r gronfa ddata gyfeirio, yn y drefn honno.

Genynnau a Fynegwyd yn Wahanol

Fel y nodir yn Ffigur 5A, nodwyd cyfanswm o 198 o enynnau wedi'u mynegi'n wahaniaethol, gan gynnwys 47 o enynnau wedi'u huwchreoleiddio a 151 o enynnau wedi'u rheoleiddio i lawr. Disgrifiwyd y DEGs yn fanwl yn Nhabl S2 deunydd atodol. Mae Ffigur 5B yn dangos bod gan DEGs atgynhyrchedd da o driniaethau.

Dadansoddiad o Ddosbarthiad Ontoleg Genynnau a Gwyddoniadur Kyoto o Genynnau a Chyfoethogi Genomau

Dosbarthwyd genynnau sy'n cael eu mynegi'n wahaniaethol yn 3 phrif gategori swyddogaethol yn seiliedig ar system ddosbarthu Gene Ontology (GO): proses fiolegol, cydran cellog, a swyddogaeth foleciwlaidd. Cyflwynir y 10 term GO uchaf yn y 3 chategori yn Ffigur 6. Roedd goruchafiaeth o enynnau yn ymwneud â'r "ymateb i imiwnedd humoral," "ymateb chemokine," "ymateb i humoral gwrthficrobaidd," "ymateb amddiffyn yn erbyn y bacteriwm, " "ymateb imiwn i hiwmor gwrthficrobaidd wedi'i gyfryngu gan beptidau gwrthficrobaidd," "ymateb amddiffyn yn erbyn bacteriwm Gram-negyddol," ac "ymateb amddiffyn yn erbyn bacteriwm Gram-positif" yn y categori prosesau biolegol. Yn ogystal, yn y categori o swyddogaeth moleciwlaidd, roedd cymhareb rhyfeddol o'r genynnau yn gysylltiedig â "rhwymo derbynnydd chemokine motiff CC derbynnydd chemokine (CCR)," "rhwymo derbynnydd chemokine," a "rhwymo lipopolysaccharide." Ar ben hynny, "cymhleth cadwyn anadlol mitochondrial I," "cymhleth dehydrogenase NADH," a "chadwyn anadlol" oedd y termau cyfoethogi mwyaf amlycaf yn y categori cydrannau cell. Perfformiwyd dadansoddiad llwybr Gwyddoniadur Genynnau a Genomau Kyoto hefyd ar y genynnau a fynegwyd yn wahaniaethol. Roedd y canlyniadau'n awgrymu bod genynnau wedi'u grwpio'n bennaf yn 7 llwybr gan gynnwys "Rhyngweithiad ligand-derbynnydd Niwroweithredol," "Cyffordd Gap," "llwybr signalau kinase protein-activated mitogen (MAPK)," "cludwyr ABC," "Biosynthesis asidau amino," "Metaboledd cyffuriau," a "Protein allforio."

Ffigur 2. Effaith gweinyddiaeth lafar b-glwcan ar fynegai ysgogol lymffocyt (SI). (A) Lymffocytau gwaed ymylol; (B) lymffocytau coluddyn. Mynegir data fel cymedr § SE.

Ffigur 3. Effaith rhoi b-glwcan yn y geg ar gymhareb celloedd gwaed ymylol CD4+/ CD8+. (A) Gate ar lymffocytau; (B) giât ar CD3+ celloedd T; (C) amlder celloedd T CD3+ CD4 + CD{8}} yn y grŵp brechlyn G70+; (D) amlder celloedd T CD3+ CD4 + CD8 + yn y grŵp brechlyn; (E) amlder celloedd T CD3+ CD4 + CD8 + yn y grŵp Halwynog; (F) bardiagram yn cynrychioli cymhareb CD4+/CD8+. Mynegir data fel cymedr § SE.

Ffigur 4. Effaith rhoi b-glwcan ar lafar ar fynegiant mRNA mewn dueg cyw iâr. Mynegir data fel cymedr § SE.

Ffigur 5. Crynodeb o ddata RNA-Seq. (A) Rhestr o enynnau a fynegwyd yn wahaniaethol, (B) map clystyru o'r DEGs.

Dilysu Genynnau a Fynegwyd yn Wahanol gan RT-qPCR

Cadarnhawyd y 6 DEG a oedd wedi'u rheoleiddio i fyny neu i lawr gan PCR meintiol amser real. Roedd y canlyniad yn awgrymu bod y data RT-qPCR yn gyffredinol yn unol â'r data RNA-seq yn gyffredinol, gan nodi canlyniad dilyniannu dibynadwy (Ffigur 7). Mynegiad mRNA o Genynnau Cysylltiedig Llwybr MAPK Fel y dangosir yn Ffigur 8, roedd mynegiant mRNA o FAS (P < 0.05) a CACNA2 (P < {0.05) wedi gostwng yn sylweddol a ganfyddir yn ddueg yr ieir yn y grŵp G70 (G70 + Brechlyn) o'i gymharu â'r grŵp Brechlyn. Yn ogystal, canfuwyd mynegiant mRNA cynyddol o DUSP5 a DUSP4 yn rhifiadol, a mynegiant mRNA gostyngol yn rhifol o p38, JNK, ac ERK yn y grŵp G70 (Brechlyn G70 +) o'i gymharu â'r grŵp Brechlyn (P> 0.05) .

TRAFODAETH

Mae brechlyn ND byw yn cael ei frechu’n eang mewn ffermydd ieir ac eto mae achosion achlysurol o glefyd Newcastle mewn heidiau dofednod wedi’u himiwneiddio (Zhang et al., 2022). Diffinnir y brechlynnau gorau posibl i ysgogi imiwnedd cellog a mwcosaidd yn ogystal ag imiwnedd humoral effeithiol (Shan et al., 2019). Felly, rhoddwyd mwy a mwy o sylw i gynorthwywyr a allai roi ymatebion imiwn mwcosaidd yn ogystal ag imiwn cellog (Chen et al., 2014; Yu et al., 2015). O'i gymharu â'r llwybr pigiad, mae gweinyddiaeth lafar yn ddull haws sy'n lleihau costau ac yn achosi llai o straen i ieir brwyliaid (Boyaka et al., 2003; Zhang et al., 2008). Dangosodd canlyniadau'r astudiaeth hon fod diet wedi'i ategu â b-glwcan wedi cynyddu'n rhyfeddol lefel y titers HI penodol NDV yn serwm ieir, sy'n gyson ag adroddiadau blaenorol (Horst et al., 2019). Mae gwrthgorff NDV-benodol yn hanfodol ar gyfer datblygu ymateb imiwn humoral i amddiffyn ieir rhag haint NDV (Martinez et al., 2018; Li et al., 2020). Mae lymffocytau B yn cynhyrchu gwrthgyrff ac mae lymffocytau T yn ehangu mewn ymateb i mitogen (Bohacova et al., 2021). Yn yr astudiaeth bresennol, roedd y mynegai ysgogi o lymffocytau gwaed ymylol cyw iâr i NDV o'r grŵp G70 yn amlwg yn uwch nag un y grŵp brechlyn, gan nodi bod mwy o lymffocytau T wedi'u actifadu. Y prif isboblogaethau o lymffocytau T yw'r celloedd T CD{4 + a CD8 + (Cui et al., 2020). Mae celloedd T CD4 + yn bennaf yn cynhyrchu cytocinau ac yn hyrwyddo aeddfedu celloedd B, tra bod celloedd T CD8 + yn gysylltiedig â lladd y celloedd targed (Zhang et al., 2021b). Yn yr ymchwil hwn, roedd y gymhareb o gelloedd T CD4 +/CD{8 + T a ganfuwyd yn y grŵp G70 yn amlwg yn cynyddu, sy'n awgrymu y gallai G70 actifadu mwy o gelloedd CD4 + T o waed ymylol. Yn ogystal, gwelsom fynegai ysgogi lymffocytau berfeddol sylweddol uwch yn y grŵp G70 nag yn y grŵp Brechlyn, a gadarnhaodd y gallai b-glwcan hefyd ysgogi lymffocytau berfeddol. Cadarnhaodd ein harbrofion blaenorol fod echdyniad wal gell burum PW220 wedi cynyddu celloedd sIgA ac IgA + berfeddol-benodol yn sylweddol (Bi et al., 2020). Hynny yw, mae b-glwcan G70 a PW220 yn effeithiol wrth hyrwyddo imiwnedd mwcosol berfeddol.

manteision cistanche ar gyfer dynion-cryfhau system imiwnedd

Adroddwyd yn flaenorol bod gwell imiwnedd anifeiliaid trwy roi b-glwcan. Mae Guo et al. (2003) yn cadarnhau bod rhoi b-glwcan wedi gwella'r mynegai o wrthgyrff byrsa a NDV-benodol mewn cywion ieir. Mae Levine et al. (2018) y gall ychwanegiad b-glwcan uwch-reoleiddio MHC Ⅱ berfeddol a chynyddu nifer y celloedd CD45 + i liniaru anaf coluddol.

Mae Li et al. (2005) y gallai b-glwcan dietegol uwchreoleiddio lefelau mynegiant mRNA o IL-8 a TGF-b yn llwybr berfeddol moch. Nid yw mecanwaith effaith immunomodulatory b-glwcan yn glir. Mae Kim et al. (2010) yn dangos bod b-glwcan yn hybu aeddfediad celloedd dendritig trwy uwch-reoleiddio mynegiant CD40, CD80, a CD86. Yn ogystal, mae Lee a Kim (2014) a Su et al. (2020) fod derbynyddion adnabod patrwm actifedig b-glwcan fel y derbynnydd Dectin-1, derbynnydd tebyg i doll, a CR3 (Baert et al., 2015). Mae'r ddueg yn organ hanfodol ar gyfer ysgogi ymateb imiwn ac mae'n chwarae rhan hanfodol mewn imiwnedd cynhenid ​​​​a chaffaeledig (Bronte a Pittet, 2013). Fodd bynnag, dim ond ychydig o ymchwil sydd wedi'i seilio ar ddadansoddiad RNA-seq o fynegiant mRNA wrth weinyddu polysacaridau burum ar ôl y ddueg ar ôl y geg. Yn yr astudiaeth bresennol, awgrymodd dadansoddiad llwybr Gwyddoniadur Genynnau a Genomau Kyoto fod y genynnau hyn wedi'u grwpio'n bennaf yn 2 lwybr, gan gynnwys "Rhyngweithiad ligand-derbynnydd Niwroweithredol" a "llwybr signalau MAPK." Cyfoethogwyd y derbynyddion ar gyfer adnabod patrwm sy'n targedu b-glwcan ar wyneb celloedd imiwnedd (Goodridge et al., 2009). Yn dilyn cydnabyddiaeth b-glwcan, ysgogwyd y tyrosine kinase a ffactor niwclear kappaB (NF-kappaB) gan y derbynyddion hyn, gan arwain at sefydlu secretiad cytocin pro-llidiol ac actifadu ymatebion imiwn (Kankkunen et al., 2010; Masuda et al. ., 2012; Xu et al., 2016; Bode et al., 2019). Mae'r MAPK, fel teulu o kinases protein serine-threonine, yn chwarae rhan hanfodol mewn llid a chynhyrchu cytocin mewn ieir. Roedd Byun et al. (2016) yn dangos bod b-glwcan wedi cynyddu cynhyrchiant interfferon-g ac interleukin-2 ac wedi sbarduno lefelau sylweddol uwch o ffosfforyleiddiad MAPK p38 mewn macrophage peritoneol. Mae Wang et al. (2014) fod b-glwcan yn gwanhau ymatebion llidiol mewn celloedd THP-1 trwy atal actifadu p38 MAPK. Yn yr astudiaeth hon, nodwyd 13 DEG gan gynnwys DUSP4, CACNA2D1, PDGFD, PTPRR, ENSGALG00000006351, FAS, MAP2K3, MYC, DUSP5, MAX, SRF, PRKCB, ac EGFR yn llwybr ymateb signalau MAPK, a awgrymodd y gallai b-glwcan reoleiddio o ddueg trwy MAPK mewn cywion ieir. Mae'r MAPK yn ddosbarth cadw o Ser / Thr kinases mewn celloedd sy'n ymwneud yn bennaf ag ymatebion cellog fel ymateb imiwn, apoptosis, ac amlhau. Mae'r teulu MAPK yn cynnwys o leiaf 3 is-deulu: c-Jun N-terminal kinase (JNK), t38 MAPK, a kinase allgellog a reoleiddir gan signal (ERK) (Hong et al., 2020; Zhang et al., 2021a). Mae DUSP4 a DUSP5 yn ffosffatasau manyleb ddeuol sy'n atal gweithgaredd aelodau teulu MAPK yn benodol fel p38, JNK, ac ERK, gan chwarae rhan reoleiddiol bwysig wrth atal gor-ymateb ymfflamychol a hyrwyddo atchweliad llid yn y corff (Imasato et al ., 2002; Talreja et al., 2021). Yn ogystal, adroddwyd bod RNA bach di-godio o'r enw gga-miR-200a{{-3p{{-3p{{{-3}p{{{-3}p{{{-3}p{{{{-3}p{{{{{{{-3}p{{{{-3}p{{{{-3}p{{{-3}p) ffactorau pro-llidiol ac felly’n rheoleiddio’r ymateb hunanimiwn gwesteiwr drwy reoleiddio’r llwybr MAPK yn negyddol). a'i moleciwlau signalau i lawr yr afon (Pham et al., 2017). Yn yr astudiaeth bresennol, dangosodd dadansoddiad RT-qPCR fod mynegiant mRNA o P38, JNK, ac ERK wedi lleihau a mynegiant mRNA o DUSP4 a DUSP5 wedi cynyddu mewn cywion ieir sy'n cael eu bwydo â b-glwcan (G70). Mae'r canlyniadau hyn yn awgrymu y gallai effaith gwella imiwnedd b-glwcan (G70) ar frechlyn clefyd Newcastle fod yn gysylltiedig â rheoleiddio adborth negyddol ffactorau pro-llidiol a gyfryngir trwy MAPK. Yn ogystal, mae FAS yn sylwedd hanfodol sy'n cyfryngu apoptosis ac mae'n hanfodol ar gyfer homeostasis imiwn (Krueger et al., 2003; Guegan a Legembre, 2018). Yn y cyfamser, mae CACNA2 yn is-uned sianel calsiwm sy'n ddibynnol ar foltedd, sy'n cael effaith hyrwyddo ar amlhau celloedd, mudo a goresgyniad (Sun et al., 2020). Yn yr astudiaeth hon, gostyngwyd FAS a CACNA2 yn sylweddol mewn ieir a ategwyd â b-glwcan (G70), sy'n nodi bod b-glwcan (G70) yn cael effeithiau sy'n gwella imiwnedd yn bennaf trwy atal apoptosis celloedd imiwnedd a chydbwyso awtoimiwnedd. Mae'r canfyddiadau hyn yn darparu cyfeiriad damcaniaethol ar gyfer defnyddio b-glwcan (G70) fel teclyn gwella imiwnedd mewn lleoliadau clinigol. Fodd bynnag, mae angen prawf pellach ar fecanwaith b-glwcan sy'n gwella ymateb imiwn trwy effaith adborth negyddol llwybr MAPK. Mae'n ddiddorol nodi bod genynnau sy'n amgodio cathelicidin sy'n cynnwys CATH3, CATH1, CATH2, a genynnau sy'n amgodio b-defensin gan gynnwys AvBD6, AvBD7, AvBD1, ac AvBD4 wedi'u rheoleiddio'n sylweddol is-reoledig yn y frechlyn cymhariaeth H (Grŵp G70 +) vs Rheolaeth (Brechlyn Grŵp). Mae Peptidau Amddiffyn Gwesteiwr (HDPs) yn foleciwlau effeithydd sy'n chwarae rhan hanfodol yn y system imiwnedd gynhenid ​​(Cuperus et al., 2013). Mae'r peptidau hyn wedi'u darganfod mewn amrywiaeth o rywogaethau anifeiliaid o famaliaid i adar. Mae 4 cathelicidin mewn cywion, sy'n cynnwys CATH1, CATH2, CATH3, a CATHB1, sydd i bob pwrpas yn lladd gwahanol facteria (Hamad et al., 2017). Mae beta-amddiffynnau adar (AvBDs), a elwir yn gallinacean fel arall, yn peptidau cationig bach gyda 3 bond disulfide cystein rhwng eu gweddillion cystein ac yn cyflawni rôl bwysig yn y system imiwnedd gynhenid ​​(Yoshimura, 2015). Mae'n bosibl bod y gostyngiad mewn mynegiant cathelicidinau a beta-defensin wedi'i esbonio gan reoleiddio adborth, lle cafodd poblogaethau bacteriol a pharabacteriol eu lleihau gan polysacaridau cellfur burum (Bi et al., 2020). Datgelwyd canlyniadau tebyg mewn astudiaethau eraill. Mae Shao et al. (2016) yn dangos bod ychwanegu at burum b-glwcan mewn cyw iâr brwyliaid yn atal haint Salmonela ac yn lleihau mynegiant HDPs trwy ddadansoddiad PCR meintiol amser real. Yn yr astudiaeth hon, roedd cynnyrch G70 sy'n cynnwys b-glwcan yn bennaf yn gwella lefel gwrthgyrff NDV-benodol mewn serwm, yn cynyddu mynegai ysgogi NDV o lymffocytau gwaed ymylol a lymffocytau berfeddol, ac yn hyrwyddo gwahaniaethu lymffocytau T gwaed ymylol yn CD{{ 123 }} T celloedd. Yn ogystal, dangosodd dadansoddiad RNA-seq fod G70 wedi dadreoleiddio'r mynegiadau mRNA yn ymwneud â derbynnydd serotonin cypledig G-protein a polypeptid dosbarth I MHC ac wedi is-reoleiddio'r mynegiadau mRNA yn ymwneud â cathelicidin a beta-defensin. O ystyried effaith well G70 ar y brechlyn ND mewn cyw iâr, gellir astudio ymhellach effaith G70 ar frechlynnau dofednod eraill fel y brechlyn ffliw adar.

Ffigur 6. Dadansoddiad llwybr KEGG.

Ffigur 7. Cadarnhad RT-qPCR o ymgeiswyr DEG dethol. Mynegir data fel cymedr § SE.

Ffigur 8. Mynegiant mRNA cymharol yn y ddueg. Cyfanswm RNA ei dynnu o'r ddueg. Gwasanaethwyd y cyw iâr b-actin fel y genyn rheolaeth fewnol. Mynegir data fel cymedr § SE.

CYFEIRIADAU

Baert, K., E. Sonck, BM Goddeeris, B. Devriendt, ac E. Cox. 2015. Gwahaniaethau math-benodol o gelloedd mewn adnabyddiaeth b-glwcan a signalau mewn celloedd imiwnedd cynhenid ​​mochyn. Dev. Cyf. Imiwnol. 48:192–203.

Ball, C., A. Forrester, A. Herrmann, S. Lemiere, a K. Ganapathy. 2019. Imiwnedd amddiffynnol cymharol a ddarperir gan frechlynnau byw o firws clefyd Newcastle neu fetapniwmofeirws adar pan gaiff ei gyd-weinyddu ochr yn ochr â straenau clasurol ac amrywiol o firws broncitis heintus mewn cywion brwyliaid diwrnod oed. Brechlyn. 37:7566–7575.

Bi, S., J. Zhang, Y. Qu, B. Zhou, X. He, a J. Ni. 2020. Gwellodd cynnyrch wal gell burum ymateb IgA berfeddol a newidiodd rywogaethau cecum microflora ar ôl brechu trwy'r geg mewn ieir. Poult. Sci. 99:6576–6585.

Bi, S., J. Zhang, L. Zhang, K. Huang, J. Li, ac L. Cao. 2022. Ymatebion imiwnedd cell-gyfryngol wedi'u huwchreoleiddio i'r brechlyn firws clefyd Newcastle. Poult. Sci. 101:101712–101721.

Bode, K., F. Bujupi, C. Link, T. Hein, S. Zimmermann, D. Peiris, V. Jaquet, B. Lepenies, H. Weyd, a PH Krammer. 2019. Mae dectin-1 rhwymo anecsinau ar gelloedd apoptotig yn peri goddefgarwch imiwnedd ymylol trwy NADPH oxidase-2. Cell. Sylw 29:4435–4446.

Bohacova, P., J. Kossl, M. Hajkova, B. Hermankova, V. Holan, ac E. Javorkova. 2021. Gwahaniaeth rhwng celloedd B a T a symbylir gan mitogen yn y rhwymiad amhenodol o wrthgyrff cyfun R-phycoerythrin. J. Immunol. Dulliau. 493:113013–113023.

Boyaka, PN, A. Tafaro, R. Fischer, K. Fujihashi, E. Jirillo, a JR McGhee. 2003. Trin y system imiwnedd yn therapiwtig: gwella imiwnedd mwcosaidd cynhenid ​​ac addasol. Curr. Pharm. Dylunio. 9: 1965-1972.

Bronte, V., a MJ Pittet. 2013. Y ddueg mewn rheoleiddio imiwnedd yn lleol ac yn systemig. Imiwnedd. 39:806-818.

Byun, E., S. Park, B. Jang, N. Sung, ac E. Byun. 2016. Mae b-glwcan wedi'i arbelydru gan gama yn ysgogi gweithgarwch imiwnofodiwleiddio a gwrthganser trwy lwybrau MAPK a NF-kB. J. Sci. Bwyd. Agr. 96:695-702.

Chen, X., X. Chen, S. Qiu, Y. Hu, C. Jiang, D. Wang, Q. Fan, C. Zhang, Y. Huang, Y. Yu, H. Yang, C. Liu, Z .Gao, R. Hou, ac X. Li. 2014. Effeithiau hylif llafar flavone polysacarid-propolis epimedium ar imiwnedd mwcosaidd mewn ieir. Int. J. Biol. Macromol. 64:6-10.

Cui, X., Y. Wang, R. Guan, M. Lu, L. Yuan, W. Xu, a S. Hu. 2020. Ymatebion imiwn gwell gyda dadansoddiad proteomig serwm o ddefaid hu i frechlyn clwy'r traed a'r genau wedi'i emwlsio mewn cynorthwyydd olew llysiau. Brechlynnau. 8:180-197

Cuperus, T., M. Coorens, A. van Dijk, a HP Haagsman. 2013. Peptidau amddiffyn lletyol adar. Dev. Cyf. Imiwnol. 41:352-369.

Goodridge, HS, AJ Wolf, a DM Underhill. 2009. Cydnabyddiaeth beta-glwcan gan y system imiwnedd gynhenid. Imiwnol. Dat. 230:38-50.

Guegan, J., a P. Legembre. 2018. Swyddogaethau anapoptotig Fas/ CD95 yn yr ymateb imiwn. FEBS J 285:809–827.

Guo, Y., RA Ali, ac MA Qureshi. 2003. Dylanwad beta-glwcan ar ymatebion imiwn mewn cywion brwyliaid. Imiwnoffarm. Imiwnol. 25:461–472.

Hamad, SK, S. Kim, SW El-Kadi, EA Wong, ac RA Dalloul. 2017. Mynegiant cymharol o beptidau amddiffyn gwesteiwr mewn dofednod twrci. Poult. Sci. 96: 2083-2090.

Hasted, T., S. Sharif, P. Boerlin, ac MS Diarra. 2021. Potensial imiwn-ysgogol ffrwythau a'u hechdyniadau mewn dofednod. Blaen. Imiwnol. 12:641696.

Hong, Y., J. Lee, TH Vu, S. Lee, HS Lillehoj, ac YH Hong. 2020. Mae adar cyw iâr b-defensin 8 yn modiwleiddio ymateb imiwn trwy'r llwybrau signalau kinase protein a weithredir gan mitogen mewn llinell gell macrophage cyw iâr. Poult. Sci. 99:4174–4182.

Horst, G., R. Levine, R. Chick, a C. Hofacre. 2019. Effeithiau beta- 1,3-glwcan (AletaTM) ar ymateb brechu mewn ieir brwyliaid. Poult. Sci. 98:1643–1647.

Imasato, A., C. Desbois-Mouthon, J. Han, H. Kai, ACB Cato, S. Akira, a J. Li. 2002. Gwahardd glucocorticoidau p38 MAPK trwy anwytho MAPK phosphatase-1 yn gwella mynegiant anfathadwy Haemophilus a achosir gan ddylanwad derbynnydd tebyg i dollau 2. J. Biol. Cemeg. 277:47444–47450.

Kankkunen, P., L. Teiril€a, J. Rintahaka, H. Alenius, H. Wolff, a S. Matikainen. 2010. (1,3)-beta-glwcanau yn actifadu dectin-1 a NLRP3 inflammasome mewn macroffagau dynol. J. Immunol. 184:6335–6342.

Kim, HS, JY Kim, HK Lee, MS Kim, SR Lee, JS Kang, HM Kim, K. Lee, JT Hong, Y. Kim, a S. Han. 2010. Gweithrediad celloedd dendritig gan glwcan wedi'i ynysu o umbilicaria esculenta. Imiwnedd. Rhwyd. 10:188-197.

Krueger, A., SC Fas, S. Baumann, a PH Krammer. 2003. Rôl CD95 wrth reoleiddio apoptosis cell T ymylol. Imiwnol. Dat. 193:58-69.