Beta Vulgaris Rubra L. (Betys) Mae Peel Methanol Dyfyniad yn Lleihau Straen Ocsidiol Ac yn Ysgogi Ymlediad Celloedd Trwy Gynyddu Mynegiant VEGF mewn Celloedd Endothelaidd Gwythïen Ocsidyddol Anwythol Ocsidiol Dynol dan straen H2O2

Cysylltwchoscar.xiao@wecistanche.comi wybod mwy

Laila Naif Al-Harbi 1,*, Subash-Babu Pandurangan 1, Alhanouf Mohammed Al-Dossari 1, Ghalia Shamlan 1, Ahmad Mohammad Salamatullah 1, Ali A Alshatwi 1 ac Amna Abdullah Alotiby 2

Crynodeb:Mae gallu gwrthocsidiol polyffenolau aflavonoidausy'n bresennol mewn cyfryngau dietegol yn helpu i atal datblygiad rhywogaethau ocsigen adweithiol (ROS) ac amddiffyn celloedd cyhyrau llyfn endothelaidd rhag straen ocsideiddiol / necrosis a achosir. Llysieuyn sy'n cael ei fwyta'n gyffredin yw betys (Beta vulgaris var. Rubra L.; BVr) sy'n cynrychioli ffynhonnell gyfoethog ogwrthocsidyddion. Nid oes digon o ymchwil o hyd i gyfansoddion bioactif croen betys a'u rôl mewn celloedd endothelaidd gwythiennau bogail dynol (HUVECs). Yn yr astudiaeth bresennol, paratowyd echdyniad methanol croen betys (BPME), a'i effaith ar fio-effeithiolrwydd, cyfanrwydd niwclear, potensial pilen mitocondriaidd, twf celloedd fasgwlaidd, a lefelau mynegiant genynnau sy'n gysylltiedig â immunoregulation mewn HUVECs ag anwythiadocsidioldadansoddwyd straen. Cadarnhaodd canlyniadau cromatograffaeth nwy-sbectrosgopeg màs (GC-MS) fod BPME yn cynnwys 5-hydroxymethylfurfural (32.6 y cant ), methyl pyruvate (15.13 y cant ), furfural (9.98 y cant), a 2, 3-dihydro{{11} },5-dihydroxy-6-methyl-4H-Pyran-4-un (12.4 y cant ). Roedd dyfyniad BPM yn gwella amlhau celloedd yn effeithiol ac fe'i cadarnhawyd gan assay MTT; cadarnhawyd y cyfanrwydd niwclear gan assay staenio propidium ïodid (PI); cadarnhawyd potensial y bilen mitocondriaidd (∆ψm) gan assay staenio JC. Cadarnhaodd assay Annexin V fod HUVECs a driniwyd gan BPME yn dangos 99 y cant o gelloedd hyfyw, ond dim ond hyfywedd 39.8 y cant a ddangoswyd mewn HUVECs a gafodd eu trin â H2O2 yn unig. Yn ogystal, roedd triniaeth BPME o HUVECs ar gyfer 48 h yn lleihau mynegiant mRNA o berocsidiad lipid (LPO) a mwy o NOS-3, Nrf-2, GSK-3 , GPX, synthase nitrig ocsid endothelaidd (eNOS). ), a lefelau mynegiant mRNA ffactor twf celloedd fasgwlaidd (VEGF). Canfuom fod triniaeth BPME wedi gostwng proinflammatory (ffactor niwclear-κ (F-κ ), ffactor necrosis meinwe- (TNF- ), derbynnydd tebyg i doll -4 (TLR-4), interleukin{{37} } (IL-1))a fasgwlaiddllid(moleciwl adlyniad mewngellol (ICAM), moleciwl adlyniad celloedd fasgwlaidd (VCAM), EDN1, IL-1 ) mynegiadau mRNA cysylltiedig. I gloi, roedd triniaeth croen betys i bob pwrpas yn cynyddu ffactorau twf celloedd llyfn fasgwlaidd a datblygiad microtiwbwl, tra'n lleihau rheoleiddwyr llid fasgwlaidd. Gall BPM fod yn fuddiol ar gyfer adfywio celloedd llyfn fasgwlaidd, atgyweirio meinwe, a photensial gwrth-heneiddio.

Geiriau allweddol:betys; straen ocsideiddiol; mitocondria; angiogenesis; llid

Os gwelwch yn dda cliciwch yma i ddysgu mwy

1. Rhagymadrodd

Angiogenesis yw'r broses ffisiolegol o vasculogenesis o fasgwleiddiad presennol y corff [1]. Mae'n hanfodol nid yn unig ar gyfer datblygiad ac atgenhedlu embryonig ond hefyd ar gyfer atgyweirio cylchred celloedd a meinwe [2,3]. Fodd bynnag, mae'n gysylltiedig â pathogenesis afiechydon amrywiol, megis tyfiant tiwmor, arthritis gwynegol, a chlefydau isgemig a llidiol amrywiol [3-5]. Mae'r endotheliwm fasgwlaidd yn chwarae rhan bwysig wrth gynnal hemostasis fasgwlaidd trwy reoleiddio tôn pibellau gwaed ac adweithiau imiwnedd ac ymfflamychol [6,7]. Mae celloedd endothelaidd (ECs) yn haenau monocellog tenau sy'n leinio holl arwynebau mewnol pibellau gwaed ac yn cynhyrchu amrywiaeth o foleciwlau sy'n gweithredu'n lleol neu mewn safleoedd pell [7]. Mae'r endotheliwm yn sylfaenol ar gyfer cartrefostasis y corff, ac mae unrhyw newid yn yr ymateb celloedd endotheliwm yn arwain at ddigwyddiadau sylfaenol prosesau clefyd llidiol a fasgwlaidd, megis atherosglerosis a gorbwysedd [6,8,9]. Mae'r clefydau hyn yn achosi straen ocsideiddiol, sy'n newid strwythur a chyfanrwydd swyddogaeth y CE ac yn arwain at gamweithrediad endothelaidd [9]. Mae ECs gwythiennau bogwlaidd dynol (HUVECs) wedi cael eu defnyddio'n eang fel model ar gyfer astudiaethau sy'n gysylltiedig â endotheliwm fasgwlaidd dynol. Ar ben hynny, maent yn fodel defnyddiol ar gyfer astudio'r prif lwybrau biolegol sy'n ymwneud â swyddogaeth endotheliwm [10]. Mae cyfansoddion bioactif a ffytogemegau i'w cael yn helaeth mewn ffrwythau, llysiau, perlysiau gwyrdd, a llawer o blanhigion, sy'n dangos nifer o fanteision iechyd, megis eiddo gwrthlidiol, gwrthocsidiol, gwrth-garsinogenig ac angiogenig [11-13]. Yn hyn o beth, mae betys coch (Beta vulgaris var. Rubra L.; BVr) yn perthyn i'r teulu Amaranthaceae ac fe'i dosbarthir fel un o'r ffynonellau gorau o lefelau uchel o gwrthocsidyddion [14,15]. Yn benodol, mae'n cynnwys ffytogemegau lluosog sy'n weithgar yn fiolegol, gan gynnwysbetalains, flavonoidau,polyffenolau, ensymau therapiwtig, asid ascorbig, asid dehydroascorbig (DHAA), a nitrad anorganig (NO3) [16-18]. Ar ben hynny, mae'n darparu maetholion hanfodol gwerthfawr, megis potasiwm, calsiwm, magnesiwm, sodiwm, haearn, sinc, ffosfforws, copr, a manganîs [19]. Mae sawl astudiaeth wedi nodi bod echdyniad betys coch (gwraidd) yn cael nifer o effeithiau buddiol oherwydd ei briodweddau hypoglycaemig, gostwng lipidau, gwrthlidiol, gwrthhypertensive, a gwrth-ymledol [20-22]. Gellir cysylltu'r holl briodweddau buddiol hyn â galluoedd chwilota radical rhydd y cyfansoddion bioactif. Felly, mae bwyta betys coch wedi'i gysylltu â nifer o fanteision maethol ac iechyd. Oherwydd ei werth maethol, gellir ei ddefnyddio fel ffynhonnell fwyd swyddogaethol yn erbyn straen ocsideiddiol sy'n achosi clefydau metabolaidd cronig, megis diabetes math 2 a chlefyd cardiofasgwlaidd [23]. Yn seiliedig ar yr adolygiad llenyddiaeth, mae gan Beta vulgaris briodweddau gwrthocsidiol, imiwn-reoleiddio ac angiogenig cryf. Mae apigenin wedi'i ddarganfod mewn dail betys; mae ganddo effeithiau gwrth-ymledol mewn celloedd yr afu a'r coluddyn, a gall wella comorbidrwydd gordewdra braster uchel a achosir gan ddeiet trwy actifadu AMPK [24,25]. Nododd De Silva et al., (2020) [26] fod Beta vulgaris yn amddiffyn ECs fasgwlaidd rhag straen ocsideiddiol a achosir yn allanol, a allai fod oherwydd effaith gyfunol nifer o gyfansoddion bioactif sy'n bresennol yn y planhigyn hwn. Hyd yn hyn, nid oes digon o ymchwil wedi'i wneud i'r weithred fecanyddol ar gyfer ymlediad y GE ac effaith angiogenesis croen gwraidd Beta vulgaris. Felly, ein nod oedd cynnal yr astudiaeth bresennol i archwilio'r twf celloedd fasgwlaidd, datblygiad microtiwbwl, straen ocsideiddiol, a chynhwysedd angiogenesis yn ymwneud â chroen gwraidd Beta vulgaris gan ddefnyddio morffoleg cellog a dadansoddiad mynegiant genynnau mewn HUVECs. Archwilir effeithiau angiogenig echdyniad methanol croen betys coch sy'n gysylltiedig ag uniondeb niwclear, datblygiad microtiwbwl, effeithlonrwydd mitocondriaidd, ac ysgogiad cylchred celloedd mewn ECs fasgwlaidd dynol.

2. Defnyddiau a Dulliau

2.1. Paratoi betys(Beta vulgaris rubra L.) Methanol Detholiad Cafwyd samplau o fetys ffres (Beta vulgaris var. Rubra L.; BVr.) i ddechrau o siopau llysiau, Riyadh, Teyrnas Saudi Arabia (KSA). Roedd y betys ffres yn cael eu golchi â dŵr distyll i ddileu'r coesynnau a'r halogion. Roedd y croen allanol yn cael ei blicio i gael ei dynnu a'i dorri'n ddarnau bach. Sychwyd samplau mewn popty aer poeth ar 40 ◦Gan ei falu i bowdr gan ddefnyddio cymysgydd electronig. Yna, echdynnwyd 5{{10}}0 g o'r powdr mewn potel ddi-haint yn cynnwys 1 L o fethanol (Sigma, St. Louis, MO, UDA) am 24 h ar dymheredd ystafell ymlaen ysgydwr ac ailadrodd dair gwaith. Wedi hynny, defnyddiwyd Whatmanfiilter (Whatman, Clifton, NJ, UDA) i hidlo'r dyfyniad. Yn olaf, trwy leihau'r pwysau, gwahanwyd y toddydd o'r dyfyniad, a chasglwyd y dyfyniad fel sylwedd sych solet ar ôl anweddu methanol. Roedd y sampl a echdynnwyd yn cael ei storio mewn oergell ar dymheredd o 4 ◦C nes ei ddefnyddio ymhellach. 2.2. Cromatograffaeth Nwy a Dadansoddiad Sbectrosgopeg Màs Chwistrellwyd echdyniad methanol croen betys (BPME) i mewn i golofn capilari silica (30 m × {{60}}.25 mm ID × 0 Trwch ffilm .25 µm) o offeryn GC-MS (Agilent 6890N/5973I, California, CA, UDA) gyda synhwyrydd dethol màs i ganfod y cyfansoddiadau cemegol. Gosodwyd tymheredd yr offeryn fel 7{{9{0}} ◦C cychwynnol, gan ddal 2 funud, i 305 ◦C ar 20 ◦C/munud, ac yna ei ddal am 1 munud. Gosodwyd cyfanswm amser rhedeg GC i 45 munud gyda'r nwy heliwm (99.999 y cant) fel nwy cludo (cyfradd gyson gyson o 1.2 mL / mun), 250 ◦C fel tymheredd y chwistrellwr, a 230 ◦C fel ffynhonnell ïon tymheredd. Yn seiliedig ar y sbectrwm GC-MS, cyfrifwyd canran gymharol y gydran gyfatebol, a nodwyd sbectra màs y gydran anhysbys trwy gymharu â'r 62,{29}} patrwm hysbys sydd ar gael yn y Sefydliad Cenedlaethol Safonau a Thechnoleg llyfrgell gyfrifiadurol (NIST08). 2.3. Deunyddiau Diwylliant Cell a Chemegau Prynwyd HUVECs o'r Casgliad Diwylliant Math Americanaidd (ATCC, Manassas, VA, UDA). Cafwyd deunyddiau meithrin celloedd fel Modified Eagle Medium Dulbecco (DMEM), EDTA, trypsin, ac eraill gan Gibco (Paisley, UK). Prynwyd penisilin-streptomycin (PS) a serwm buchol ffetws (FBS) gan Hyclone Laboratories, UDA. Cafwyd y cemegau a ddefnyddiwyd yn yr arbrawf bioleg foleciwlaidd gan Sigma-Aldrich, yn enwedig, MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5- diphenyltetrazolium bromid], PI, a JC-1 staen. Cafwyd y SYBR Green PCR Master Mix a'r pecyn synthesis cDNA gan Qiagen (Hilden, yr Almaen). 2.4. HUVECs Cafodd HUVECs eu meithrin yn DMEM a'u hategu gan 1 y cant PS a 10 y cant FBS cymhleth. Roedd celloedd yn cael eu deor mewn awyrgylch llaith ar 37 ◦C, 5 y cant o CO2, ac yn cael eu his-ddiwyllio tua bob 3 diwrnod. 2.5. Hyfywedd Celloedd ac Amlhau Celloedd gan Assay MTT Cafodd HUVECs (1 × 104 cell/ffynnon) eu meithrin â chyfrwng cynnal a chadw a chaniatawyd iddynt gadw dros nos mewn 96-plât meithriniad iach. Yna, disodlwyd y cyfrwng gan gyfrwng diwylliant newydd yn cynnwys crynodiadau cynyddol o BPME (0, 0.05, 0.1, 0.2, 0.4, 0.8, 1.6, a 3.2 µg/mL) yn unol â map plât assay MTT a'i ddeor ar gyfer 24 a 48 h; defnyddiwyd celloedd heb eu trin fel rheolyddion. Ar ôl y cyfnod deori, cafodd y celloedd arbrofol eu trin â 20 µL/ffynnon o 5 mg/mL o MTT (3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2), 5-bromid diphenyltetrazolium a gafodd ei hydoddi mewn sylffocsid deumethyl (DMSO)) a'i ddeor hefyd am 4 awr ar 37 ◦C. Yna, cafodd y cyfrwng ei daflu, a diddymwyd y formazan porffor a gynhyrchwyd mewn 100 µL o 100 y cant DMSO. Mesurwyd amsugnedd yr hydoddiant gan ddefnyddio darllenydd microplate (Thermo Scientific, Waltham, MA, UDA) ar donfedd 570 nm. Cyfrifwyd y ganran ( y cant ) o amlhau celloedd gan yr hafaliad canlynol: (amsugno'r sampl / amsugnedd cymedrig y rheolaeth) × 100. 2.6. Dyluniad Arbrofol Yn ôl y assay presennol ar amlhau celloedd, dangosodd grynodiad is o BPME (0.1 a 0.2 µg/mL) a brofwyd HUVECs amlhau a morffoleg microtiwb heb wenwyndra. Cafodd cyfeintiau o 0.1 a 0.2 µg/mL dos o BPME eu dewis a'u trin â HUVECs arferol a 10 mM o HUVECs a achosir gan ocsideiddiol a achosir gan straen am 48 h i bennu'r potensial ymlediad celloedd, gwrthlidiol, angiogenig ac apoptotig. (Ffigur 1). Roedd rheolaeth cerbydau hefyd yn cael ei chynnal am 48 h yn y ddau grŵp. Defnyddiwyd Quercetin (10 µM) fel rheolydd cyfeirio yn y ddau grŵp arbrofol. Ar ôl deori, dadansoddwyd y celloedd arbrofol ac heb eu trin ar gyfer morffoleg celloedd a niwclear a photensial pilen mitocondriaidd gan ddefnyddio Pecyn MitoScreen BDTM (JC-1); penderfynwyd apoptosis gan y dull didoli celloedd yn seiliedig ar Atodiadin V/apoptosis mewn cytometreg cyd. Ymchwiliwyd i'r lefelau mynegiant genynnau straen ocsideiddiol, proinflammatory, ac angiogenesis.

2.7. Assay Stainging Propidium Iodid ar gyfer Difrod Niwclear Morffolegau cellog ar gyfer difrod niwclear nodweddiadol, pyknosis neu newidiadau morffolegol apoptotig ar ôl triniaeth â 0.1 a 0.2 µg/mL o BPME (gyda neu heb H2O2) mewn HUVECs penderfynwyd gan ddefnyddio dadansoddiad staenio DP o dan ficrosgopeg fflworoleuedd gwrthdro, fel y disgrifiwyd gan Leite et al. [27].

2.8. Assay of Mitochondrial Membrane Potential (∆ψm) gan JC-1 Lliwio Lliw Pennwyd potensial y bilen mitocondriaidd (∆ψm) gan assay JC-1 i asesu effeithlonrwydd mitocondriaidd wrth reoli cerbydau a {{4} }.1 a 0.2 µg/mL o HUVECs wedi'u trin â BPME (gyda a heb H2O2). Yn gryno, cymysgwyd hydoddiant staenio JC-1 â chyfaint tebyg o gyfrwng diwylliant ac yna ei ychwanegu at yr HUVECs arbrofol a'i ddeor yn y tywyllwch am 20 munud ar 37 ◦C. Yna, golchwyd y llifyn JC-1 heb ei rwymo yn ysgafn ddwywaith gan ddefnyddio 200 µL o glustog golchi staenio JC{-1 ar 4 ◦C. Wedi hynny, gwelwyd cronni j-agregu yn erbyn staen JC-1 o dan ficrosgopeg fflworoleuedd gan ddefnyddio microsgop fflworoleuedd, a chafodd delweddau eu dal. Yn ogystal, mesurwyd potensial y bilen mitocondriaidd mewn cytometreg llif gan ddefnyddio'r Pecyn BDTM MitoScreen (JC-1).

2.9. Dadansoddiad V/apoptosis Annexin gan Ddefnyddio Sytometreg Llif Defnyddiwyd y dull cyd-dull canfod Annexin V/PI sy'n seiliedig ar cytometreg (Sigma Chemicals, UDA) i feintioli celloedd hyfyw, proapoptotig, apoptotig cynnar a necrotig. Cafodd HUVECs a achosir gan straen ocsidol (1 × 105/wel) eu platio mewn 24-platiau ffynnon a'u deor â BPME (0.1 a 0.2 µg/mL) neu reolaeth cerbyd ar gyfer 48 h. Ar ôl deori, deorwyd celloedd mewn 400 µL o 5 µL Annexin V-fluorescein isothiocyanate (FITC) a 5 µL o DP yn cynnwys byffer rhwymol; yn dilyn hyn, cadwyd y celloedd am 15 munud ar dymheredd ystafell (RT) yn y tywyllwch. Dadansoddwyd y celloedd gan gyd-gytometreg (BD Biosciences, San Jose, CA, UDA) i nodi celloedd apoptotig (PI negatif ac Annexin V positif) a chelloedd apoptotig hwyr (PI-positif ac Annexin V positif) [28].

2.10. Dadansoddiad PCR Meintiol Amser Real Defnyddiwyd Fastlane® Cell i becyn cDNA (Qiagen, Hilden, yr Almaen) i dynnu cyfanswm RNA a synthesis cDNA o reolaeth cerbydau, HUVECs wedi'u trin gan BPME (gyda a heb H2O2) gan ddefnyddio PCR meintiol (qPCR) lled-awtomataidd offeryn (Biosystemau Cymhwysol, Foster City, CA, UDA). Lefelau mynegiant o straen ocsideiddiol gan gynnwys (perocsid lipid, NOS-3), gwrthocsidiol (Nrf-2, GSK-3, a GPx), proinflammatory (ffactor niwclear-κ (NF-κ), ffactor necrosis tiwmor- (TNF- ), interleukin-1 (IL-1 ), ffactor twf celloedd fasgwlaidd (VEGF), derbynnydd tebyg i doll-4 (TLR-4)) , a llid fasgwlaidd (moleciwl adlyniad mewngellol (ICAM), moleciwl adlyniad celloedd fasgwlaidd (VCAM), EDN1 ac endothelaidd nitric ocsid synthase (eNOS)) sy'n gysylltiedig â genynnau a'r genyn cyfeirio, -actin, eu dadansoddi mewn HUVECs a'u meintioli gan y dull o Yuan et al. [29]. Cyfrifwyd y gwerthoedd mwyhau (∆Ct) gan y gwahaniaeth rhwng Ct (wedi'i drin) a Ct (rheolaeth). Plotiwyd mynegiant genynnau gan ddefnyddio mynegiant gwerth 2−∆∆Ct.

2.11. Dadansoddiad Ystadegol Cafodd yr holl arbrofion eu treblu, a mynegwyd y data canlyniadol fel gwerthoedd cymedrig ± gwyriad safonol (SD). Perfformiwyd y dadansoddiad ystadegol o wahaniaethau ymhlith y grwpiau gan ddadansoddiad un ffordd o amrywiant (ANOVA) gan ddefnyddio meddalwedd SPSS (Fersiwn 28.5, SAS Institute Inc., Cary, NC, UDA). Yna, cynhaliwyd prawf cymharu lluosog Tukey os canfuwyd gwahaniaethau sylweddol. Cyflwynwyd yr holl ganlyniadau fel y cymedrig ± DC ar gyfer chwe atgynhyrchiad ym mhob grŵp. Ystyriwyd bod gwerth-p < 0.05="" yn="" arwydd-="" cant="">

Cistanche ar gyfer gwella imiwnedd

3. Canlyniadau

3.1. Moleciwlau Bioactif mewn BPME Cadarnhawyd cyfansoddion cemegol BPME gan ddefnyddio GC-MS (Turbomass, PerkinElmer). Penderfynwyd ar gyfansoddiad cemegol echdyniad croen betys trwy gymharu'r sbectra màs sydd ar gael â chronfa ddata Sbectrol y Sefydliad Cenedlaethol Safonau a Thechnoleg (NIST). Cadarnhaodd canlyniadau GC-MS fod y BPME yn cynnwys hydroxyacetone (8.18 y cant), 5- hydroxymethylfurfural (32.6 y cant), methyl pyruvate (15.13 y cant), beta-d-alopyranose (1.48 y cant), furfural (9.98 y cant ), 2-hydroxy-gama-butyrolactone (1.32 y cant ), a 2,3-dihydro-3,5-dihydroxy- 6-methyl-4H-Pyran -4-un (12.4 y cant; Ffigur 2a, Tabl 1). 3.2. Amlhad Celloedd Cyflwynir potensial amlhau celloedd in vitro BPME yn erbyn HUVECs yn Ffigur 2b. Ni welwyd unrhyw ataliad twf celloedd sylweddol yn y grwpiau arbrofol o'i gymharu â rheolaeth y cerbyd. Cadarnhawyd gan yr astudiaeth bresennol bod cynyddu'r crynodiad o BPME sy'n cael ei drin â HUVECs wedi arwain at fwy o ymlediad celloedd a hyfywedd ar ôl 48 h (112 y cant) o'i gymharu â 24 h (103 y cant) o driniaeth. Yn ogystal, cadarnhaodd y delweddau microsgopig ysgafn o HUVECs a driniwyd gan BPME ar ôl 48 h y celloedd arferol gyda siâp unffurf morffoleg celloedd ymlynol, roedd nifer cynyddol o gelloedd amlhau (dyblygu) heb unrhyw ddifrod yn amlwg (Ffigur 2c). 3.3. Dadansoddiad o Morffoleg Celloedd a Niwclear, Ffurfiant Microdiwbyl, a Lliwio JC mewn HUVECs Dengys Ffigur 3 morffoleg datblygiad microtiwb mewn delweddau microsgopig fflworoleuedd FL. Roedd H2O HUVECs dan straen ocsideiddiol yn dangos amlder gwael a morffoleg afreolaidd celloedd ymlynol o gymharu â HUVECs rheoli. Roedd HUVECs arferol a gafodd eu trin â 0.2 µg/mL o BPME yn dangos celloedd amlhau trwy ddyblygiad neu neogenesis gyda morffoleg microtiwb. Yn y cyfamser, dangosodd 0.1 µg/mL dos o gelloedd wedi'u trin â BPME 100 y cant o gelloedd ymlynol gyda chamau cynnar microdiwbylau. Nododd HUVECs dan straen ocsideiddiol a gafodd eu trin â 0.2 µg/ml o BPME amlhau celloedd newydd â morffoleg microtiwb a llai o ddifrod ocsideiddiol i gelloedd. Yn ogystal, cynyddodd 0.1 µg/mL o BPME hefyd morffoleg celloedd fasgwlaidd arferol gyda chelloedd amlhau.

Mae Ffigur 4a yn dangos morffoleg arferol yr adeiledd niwclear, gyda siâp sfferig, yn y HUVECs rheoli a BPME (0.1 neu 0.2 µg/mL) wedi'u trin. Mae Ffigur 4b yn dangos y delweddau ar gyfer staenio DP o normal a HUVECs gyda straen ocsideiddiol a achosir gan H2O2. Mae H2O{{10}}wedi trin HUVECs yn dangos niwclysau â siapiau afreolaidd, yn arddangos anwedd a pyknosis ar ôl 3{{0} munud. Fodd bynnag, dangosodd 0.2 µg/mL o driniaeth BPME ar gyfer HUVECs dan straen ocsideiddiol niwclysau crwn gyda morffoleg normal. O'i gymharu â 0.2 µg/mL o echdyniad BPME, cafodd 0.1 µg/mL o BPME effaith amddiffynnol lai yn erbyn straen ocsideiddiol a achosir gan H2O mewn HUVECs.

Ffigur 2. Canlyniadau cromatogram GC-MS o echdyniad methanol croen betys (a), amlhau celloedd in vitro (b), a delweddau microsgopeg ysgafn ar gyfer morffoleg celloedd (c) mewn HUVECs, wedi'u trin â chrynodiad cynyddol o echdyniad methanol croen betys (BPME). ) (siâp unffurf o gelloedd ymlynol ac amlhau a grybwyllir gan ben saeth coch). Mae pob gwerth yn golygu ± SD (n=6). * p Llai na neu'n hafal i 0.05 o gymharu â rheolaeth cerbyd.

Ffigur 3. Dadansoddiad o ffurfiant microtiwb yn seiliedig ar fflworoleuedd microsgopig wrth reoli cerbydau, 0.1 a 0.2 µg/mL dos o echdyniad methanol croen betys (BPME) wedi'i drin yn normal a H2O{{6} }HUVECs a achosir gan straen ocsideiddiol ar ôl 48 h. Ar ôl 48 h, dangosodd HUVECs dan straen ocsideiddiol a achoswyd gan H2O newid morffoleg o gymharu â rheoli cerbydau. Roedd cyfeintiau o0.1 a 0.2 µg/mL o echdyniad methanol croen betys (BPME) wedi'i drin yn dangos morffoleg normal gyda microtiwbiau fasgwlaidd gyda chelloedd amlhau yn debyg i forffoleg gyffredin ymddygiad celloedd cyhyrau llyfn.

Ffigur 4. Dadansoddiad staenio Propidium ïodid (PI) ar gyfer morffoleg niwclear wrth reoli cerbydau, 0.1 a 0.2 µg/mL o echdyniad methanol croen betys (BPME) - normal wedi'i drin (3a) a H2O2-wedi'i achosi gan ocsideiddiol (3b) HUVECs ar ôl 48 h. Yn PIstaining, dangosodd rheolaeth cerbydau fod y cnewyllyn yn ymddangos yn normal heb unrhyw arwyddion o gnewyllyn crebachu, pyknosis, neu apoptotig. Yn H2O2 yn unig, dangosodd celloedd wedi'u trin bilen niwclear polariaidd ar ôl 48 h. Roedd triniaeth gyda 0.2 µg/mL o BPME yn normaleiddio'r polareiddio pilen niwclear ysgogedig H2O o'i gymharu â 0.1 µg/mL BPME neu Quercetin 10 µM.

Mae Ffigur 5a yn dangos canlyniadau staenio JC-1 ar gyfer HUVECs, gan gynnwys celloedd rheoli a BPME wedi'u trin; mae'r ffigur yn dangos celloedd iach gyda mitocondria actif, fel y cadarnhawyd gan y nifer o mitocondria â gwefr negatif o'r JC-1 cationig lipoffilig extramitochondrial (lliw gwyrdd) a J-agregau wedi'u trosi â lliw coch mewn-drially intramitochon. Mae Ffigur 5b yn dangos canlyniadau staenio JC-1 ar gyfer 0.2 µg/mL o BPME a weinyddir i HUVECs gyda straen ocsideiddiol wedi'i achosi gan H2O2; cadarnhaodd y canlyniadau fod bron i 94 y cant o mitocondria â gwefr negyddol wedi trosi'r JC -1 cationig lipoffilig (lliw gwyrdd) yn J-agregau lliw coch o'i gymharu â 0.1 µg/mL o driniaeth BPME (61.4 y cant ) neu H2O(2{{{0}}) straen ocsideiddiol mewn HUVECs (2 y cant ). Gwelwyd bod potensial y bilen mitocondriaidd (MMP) yn uwch mewn celloedd sy'n cael eu trin â BPME o gymharu â'r cyffur cyfeirio quercetin. 3.4. Potensial Membran Mitocondriaidd gyda Chymorth FACS (∆ψm; BD MitoScan) a Dadansoddiad V/apoptosis Annexin mewn HUVECs Mae Ffigur 6 yn dangos cynhwysedd potensial pilen mitocondriaidd mewn dadansoddiad BD MitoScan ar ôl 0.2 µg/mL o driniaeth BPME o HUVECs arferol a HUVECs â straen ocsideiddiol a achosir gan H2O2. Gwelsom fod 0.2 µg/mL o driniaeth BPME wedi cynyddu'r MMP (∆ψm) i 92.7 y cant ± 3.7 y cant o'i gymharu â HUVECs a gafodd eu trin â H2O2 yn unig (27.9 y cant ± 7.2 y cant ). Mewn cyferbyniad, dangosodd celloedd wedi'u trin â quercetin ganran o 41.4 y cant ± 1.6 y cant o MMP uwch (∆ψm) o'u cymharu â HUVECs a gafodd eu trin â BPME a H2O2 neu H2O2 yn unig.

Ffigur 5. Dadansoddiad o botensial pilen mitocondriaidd gan ddefnyddio staenio JC-1 ar gyfer rheoli cerbyd, 0.1 a 0.2 µg/mL o echdyniad methanol croen betys (BPME) wedi'i drin yn normal (a ) a H2O2-wedi'i achosi gan ocsidydd dan straen (b) HUVECs ar ôl 48 h. Delweddau fflworoleuedd JC yn dangos delweddau cyfun o signalau coch a gwyrdd y llifyn, sy'n cyfateb i JC-1 ar ffurf J-agregau yn erbyn monomerig. Gwelsom lai o J-agregau H2O2 yn unig wedi'u trin HUVECs. Mewn 0.2 µg/mL HUVECs wedi'u trin â BPME yn dangos agregau j uchel sy'n cynrychioli'n uniongyrchol (MMP uchel, ∆ψm) botensial pilen mitocondriaidd uchel o gymharu â 0.1 µg/mL o BPME neu 10 µM o Quercetin.

4. Trafodaeth

Ar ôl straen allgellog neu fewngellog, mae bio-argaeledd rhywogaethau ocsigen adweithiol (ROS) yn goddiweddyd yr amddiffyniad gwrthocsidiol, ac mae straen ocsideiddiol yn tarfu ar signalau a rheolaeth rhydocs [31]. Mae datblygiad straen ocsideiddiol yn gysylltiedig â phathogenesau anhwylderau cronig, megis clefydau niwroddirywiol, diabetes, ac atherosglerosis. Megis, mae straen ocsideiddiol yn cychwyn camweithrediad endothelaidd ac yn hyrwyddo llid systemig a recriwtio macroffagau [32]. Mae celloedd imiwnedd actifedig yn mudo i'r fasgwlaidd ac yn rhyddhau cytocinau a chemocinau sy'n gysylltiedig â vasoconstriction ac ailfodelu pibellau gwaed celloedd cyhyrau llyfn a llid sy'n effeithio ar gelloedd cyhyrau llyfn fasgwlaidd a'r wal fasgwlaidd [33]. Mae straen ocsideiddiol fasgwlaidd cynyddol yn dod i ben gyda difrod fasgwlaidd, anystwythder celloedd cyhyrau llyfn, ac annormaleddau elastin strwythurol. Yn ogystal, mae straen ocsideiddiol fasgwlaidd wedi'i ysgogi mewn amodau patholegol eraill, megis gordewdra visceral neu atherosglerosis, oherwydd mwy o weithgaredd NADPH oxidase (NOX-2) mewn meinwe adipose perivaswlaidd [34]. Mae straen ocsideiddiol fasgwlaidd yn achosi prif newidiadau epigenetig sy'n digwydd yn ystod heneiddio, ac mae'n gorffen gyda phroses heneiddio'n gynnar [35]. Mae datblygiad cynhyrchu ROS a straen ocsideiddiol yn y system fiolegol yn dibynnu i raddau helaeth ar gamweithrediad mitocondriaidd, yn ogystal â NOX -2, xanthine oxidase endothelaidd, eNOS heb ei gyplu, a lipoxygenase [36]. Gall priodweddau gwrthocsidiol asiantau dietegol niwtraleiddio cynhyrchu ROS trwy gynyddu gallu gwrthocsidiol [26]. Mae detholiad Ginkgo Biloba yn amddiffyn rhag datblygiad atherosglerosis trwy leihau cenhedlaeth ROS a gweithgaredd lipoxygenase mewn camweithrediad endothelaidd a achosir gan OxiLDL [37]. Yn ogystal, mae cyfansoddion ffenolig amrywiol aflavonoids omae gan blanhigion a grawn bwytadwy yr eiddo i ysbeilio ROS a perocsidiad lipid [38]. Mae gan echdyniad methanolig croen betys (Beta vulgaris) botensial gwrthocsidiol oherwydd argaeledd ffibr uchel, anthocyaninau, a flavonoidau fel vitexin a betanin [39]. Yn yr astudiaeth bresennol, dewiswyd BPME i nodi'r dull mecanistig dibynnol mitocondriaidd i ddarganfod ei effaith ar botensial y bilen mitocondriaidd, diffodd LPO, ac ataliad ar lefelau mynegiant mRNA sy'n gysylltiedig â llid fasgwlaidd. Cadarnhaodd assay MTT fod BPME wedi cynyddu ymlediad celloedd yn sylweddol, fel y cadarnhawyd gan y cywirdeb niwclear cynyddol mewn staenio PI gyda'r dos effeithiol o 0.2 µg/mL o BPME yn erbyn 0.1 µg/mL a brofwyd. o BPME. Gellir ystyried bod adnabod dos effeithiol gyda chrynodiad isel a gweithgaredd uchaf yn ffisiolegol ddiogel. Gwelsom staenio microsgopig fflworoleuedd FL o JC-1, ac adferwyd potensial y bilen mitocondriaidd mewn HUVECs normal a H2O a ysgogwyd yn allanol â straen ocsideiddiol ar ôl 0.2 µg/mL o BPME triniaeth. Mae camweithrediad mitocondriaidd yn newid ffosfforyleiddiad ocsideiddiol, sy'n methu â thrawsnewid radicalau ocsigen (O2 · -) i H2O2 a H2O gan glutathione peroxidase. Oherwydd dadwenwyno ROS annigonol neu gynhyrchu ROS heb ei reoli, mae mwy o straen ocsideiddiol mitocondriaidd yn gysylltiedig ag atherosglerosis [40]. Adferodd darnau croen betys botensial y bilen mitocondriaidd yn effeithiol, a chynyddodd y broses ddadwenwyno ROS a chynhyrchu H2O2 yn llwyddiannus. Cadarnhaodd dadansoddiad staenio V/PI Annexin fod triniaeth BPME yn cynnal y ganran celloedd hyfyw ac yn gwella'r cam amlhau celloedd mewn HUVECs a HUVECs arferol gyda straen ocsideiddiol wedi'i achosi gan H2O2. Yn y cyd-destun hwn, mae Choo et al. Cadarnhaodd [41], ar ôl cynhyrchu ROS gormodol neu H2O2 alldarddol ar y safle isgemig, y gallai bôn-gelloedd mesenchymal a drawsblannwyd (MSCs) amharu ar allu hunan-amlhau a llinachedd. Mewn meddygaeth adfywiol, celloedd cyhyrau llyfn fasgwlaidd yw prif reoleiddwyr y rhydwelïau tôn cyfangol trwy gynnal ymwrthedd ymylol rhydwelïol, rheolyddion pwysedd gwaed, cymrawd gwaed, ac atgyweirio rhydwelïau [42]. Yn ogystal, mae modiwleiddio ffenoteip a achosir gan oedran mewn ECS yn gysylltiedig â chyfyngder cellog llai a mwy o heneiddedd celloedd. Yn dilyn straen parhaus neu oherwydd llai o sensitifrwydd, mae llai o addasu signalau micro-amgylchedd yn cael ei nodi mewn celloedd cyhyrau llyfn oed [43]. Cadarnhaodd y canlyniadau presennol fod y driniaeth BPME wedi cynnal y boblogaeth celloedd hyfyw, fel y dangosir gan y gallu angiogenesis. Mae'r gallu lluosogi a nodwyd o BPME ar HUVECs wedi'i gefnogi gan y gostyngiad mewn mynegiant LPO a mwy o fynegiadau genynnau gwrthocsidiol. Mae ROS a LPO yn cael eu cynhyrchu i ddechrau o'r cymhleth mitocondriaidd (I a III) a NOX-4 yn ystod amlhau celloedd neu wahaniaethu [44]. Mae ROS gormodol yn adweithio ac yn niweidio'r biomoleciwlau, yn enwedig gan newid cyfanrwydd DNA genomig, sy'n hanfodol ar gyfer amlhau cellog a swyddogaethau [45]. Fodd bynnag, cadarnhawyd bod cymeriant dietegol polyphenolau gwrthocsidiol, megis epigallocatechin a tocopherol, yn amddiffyn y celloedd rhag straen ocsideiddiol ac yn cynyddu gallu amlhau [46]. Yn ein hastudiaeth, gostyngodd lefelau mynegiant mRNA LPO, a chanfuwyd bod NOS-3, Nrf-2, ac eNOS wedi cynyddu'n ddeublyg mewn HUVECs gyda straen ocsideiddiol wedi'i achosi gan H2O2. eNOS yw prif isoform NOS, sy'n gyfrifol am y rhan fwyaf o'r cynhyrchion NOS mewn celloedd cyhyrau llyfn a meinweoedd fasgwlaidd. NA· yn ymledu pob math o lestri fasgwlaidd ac yn amddiffyn cydgasglu platennau ac adlyniad leukocyte mewn ECs [47]. Hyd yn hyn, bu llawer o adroddiadau gwrthgyferbyniol am ffactorau risg cardiofasgwlaidd, ac mae camweithrediad endothelaidd wedi bod yn gysylltiedig â mynegiant eNOS gostyngol neu fwy [48]. Mynegiant uwch o eNOS a welwyd ar glefyd fasgwlaidd, sy'n debygol o fod o ganlyniad i gynhyrchu gormodol o H2O2. Gall O2·−, cynnyrch dismutation, gynyddu mynegiant eNOS trwy fecanweithiau trawsgrifio ac ôl-drawsysgrifol [49]. Mae pathogenesis y clefyd fasgwlaidd yn cyd-fynd â diraddiad cyflymach o NO· ar ôl adwaith ag O2·−, ac yn olaf, ffurf ONOO−, gan arwain at ddatgysylltu eNOS a chamweithrediad ensymau NOX [50]. Mae straen ocsideiddiol wedi'i atal gan ensymau gwrthocsidiol, ac mae lefelau mRNA o GSK-3 a GPX wedi cynyddu ar ôl triniaeth BPME. Mae BPME yn cynnwys ffytogemegau lluosog sy'n weithgar yn fiolegol, gan gynnwys betalainau, flavonoidau, polyffenolau, ensymau therapiwtig, asid asgorbig, asid dehydroascorbig (DHAA), a nitrad anorganig (NO3), a gall y rhain fod yn rhan o'r gwaith o ddadreoleiddio gallu gwrthocsidiol mewn HUVECs. Yn y cyd-destun hwn, mae Cha et al. (2014) [51] fod asid clorogenig yn amddiffyn yn effeithiol rhag difrod DNA ocsideiddiol a achosir gan straen mewn keratinocytes dynol. Mae Endothelin-1 (Edn-1), fasoconstrictor sy'n deillio o endotheliwm, yn cyflawni mudo celloedd cyhyrau llyfn ac yn gweithredu fel ffactor gwrthiapoptotig mewn celloedd â straen a achosir gan ocsid nitrig [52,53]. Mae prosesau ailfodelu fasgwlaidd, mudo, ymlediad a chroniad matrics allgellog wedi'u hysgogi gan Edn-1 a NO [54,55]. Gwelsom gynnydd mewn mynegiant Edn-1 ar ôl triniaeth BPME mewn HUVECs â straen ocsideiddiol. Ar ôl straen ocsideiddiol neu groniad LPO, cam cynnar llid fasgwlaidd yw adlyniad leukocytes i gelloedd cyhyrau llyfn endothelaidd, mae'n amlwg ar gyfer digwyddiadau critigol isgemia ac atherosglerosis [56]. Fe'i cyfryngir gan ymadroddion VCAM ac ICAM; mae wedi cael ei ysgogi gan lawer o'r chemokines a chyfryngau chemotaxis, megis NF-κB, IL-1 , ac ymadroddion TNF- [57]. Mae ataliad actifadu IL-1 ac yna mynegiant moleciwl adlyniad wedi'i gyflawni gan asid ellagic cyfansawdd ffenolig dietegol [58]. Roedd triniaeth gyda BPME i HUVECs a ysgogwyd yn allanol â straen ocsideiddiol yn lleihau'n sylweddol y ffactorau proinflammatory cell-benodol fasgwlaidd, megis VCAM, ICAM, NF-κB, IL-1, a lefelau mynegiant TNF-. Yn y cyd-destun hwn, mae Crespo et al. [59] adroddodd fod kaempferol a quercetin yn atal genynnau pro-llidiol, megis ymadroddion VCAM, ICAM, NF- κB, ac IL-1, yn y drefn honno. Ar y cyfan, roedd atal straen ocsideiddiol a photensial mynegiant genynnau sy'n gysylltiedig â llid fasgwlaidd BPME yn ffafrio mynegiant ffactorau twf celloedd fasgwlaidd ac o bosibl yn cynorthwyo twf a thwf celloedd fasgwlaidd.

5. Casgliadau

Mae'r canfyddiadau presennol yn cadarnhau bod mynegiant cynyddol genynnau gwrthocsidiol yn gysylltiedig â diffodd straen ocsideiddiol, gan helpu i oresgyn amhariad amlhau HUVEC ac angiogenesis. Mae garlleg du sy'n cynnwys hydroxymethylfurfural yn atal effaith llidiol adlyniad celloedd monocyte a achosir gan TNF i HUVECs ac yn atal ymhellach genhedlaeth ROS, mynegiant VCAM-1, ac actifadu NF-κB [60]. Yn ogystal, mae He et al. Cadarnhaodd [61] fod gan hydroxymethylfurfural y potensial i amddiffyn ECs rhag hypocsia. Mae croen betys hefyd wedi'i nodi i gynnwys flavonoids, ffwran, a chydrannau gwrthocsidiol, megis 5-hydroxymethylfurfural, methyl pyruvate, furfural, a 2,3-dihydro-3,5- dihydroxy-6-methyl-4H-Pyran-4-un; mae'r cydrannau hyn yn gyfrifol am y gallu gwrthocsidiol gwell ac atal moleciwlau adlyniad celloedd cyhyrau llyfn fasgwlaidd proinflammatory. Mae croen betys wedi'i ddefnyddio fel symbylydd ar gyfer pyllau gwrthocsidiol i dorri'r ysgogiad allanol neu ysgogiad patholegol mewnol straen cellog perocsidiol. Dangosodd ein canfyddiadau fod cydrannau cymorth betys wrth leihau straen metabolig a llid mewn HUVECs, a allai fod yn fuddiol ar gyfer amlhau celloedd fasgwlaidd ac angiogenesis.

Cyfraniadau Awdur:

Cysyniadoli, LNA-H. ac S.-BP; methodoleg, LNA-H. ac S.-BP; meddalwedd, GS; dilysu, LNA-H. ac S.-BP; dadansoddiad ffurfiol, S.-BP, AMA-D., AAA (Ali A Alshatwi)a GS; ymchwiliad, LNA-H., S.-BP ac AMA-D.; adnoddau, LNA-H.; curadu data, S.-BP a LNA-H.; ysgrifennu — paratoi drafft gwreiddiol, LNA-H. ac S.-BP; ysgrifennu — adolygu a golygu, LNA-H., AMS, GS ac AAA (Amna Abdullah Alotiby); delweddu, S.-BPand AAA (Ali A Alshatwi); goruchwyliaeth, LNA-H., ac S.-BP; gweinyddu prosiect, LNA-H.; caffael cyllid, LNA-H. Mae pob awdur wedi darllen a chytuno i'r fersiwn cyhoeddedig o'r llawysgrif. Ariannu: Mae'r awduron yn estyn eu gwerthfawrogiad i Ddeoniaeth Ymchwil Gwyddonol Prifysgol King Saud am ariannu'r gwaith hwn drwy grŵp ymchwil dim RG-1442-432.Datganiad y Bwrdd Adolygu Sefydliadol: Ddim yn berthnasol.Datganiad Cydsyniad Gwybodus: Ddim yn berthnasol.Datganiad Argaeledd Data : Mae'r data a gyflwynir yn yr astudiaeth hon ar gael ar gais gan yr awdur cyfatebol.Gwrthdaro Buddiannau: Nid oes gwrthdaro buddiannau ar gyfer yr astudiaeth hon.

Cyfeiriadau

1. Abdolmaleki, Z. ; Arabaidd, H.-A.; Amanpour, S.; Muhammadnejad, S. Effeithiau gwrth-angiogenig dyfyniad ethanolig o Artemisia sieberi o'i gymharu â'i sylwedd gweithredol, artemisinin. Bras y Parch. Farmacon. 2016, 26, 326–333. [CrossRef]
2. Yoo, SY; Kwon, SM Angiogenesis a'i gyfleoedd therapiwtig. Mediat. Inflflamm. 2013, 2013, 127170. [CrossRef] [PubMed]
3. Folkman, J. Angiogenesis mewn canser, fasgwlaidd, gwynegol a chlefydau eraill. Nat. Med. 1995, 1, 27–31. [CrossRef]
4. Hoeben, A. ; Landuyt, B. ; Highley, Llsgr.; Wildiers, H.; Van Oosterom, AT; De Bruijn, EA Ffactor twf endothelaidd fasgwlaidd ac angiogenesis. Ffarmacol. Parch 2004, 56, 549–580. [CrossRef]
5. Ferrara, N.; Alitalo, K. Cymwysiadau clinigol o ffactorau twf angiogenig a'u hatalyddion. Nat. Med. 1999, 5, 1359–1364. [CrossRef]
6. Galley, HF; Webster, NR Ffisioleg yr endotheliwm. Br. J. Anaesth. 2004, 93, 105–113. [CrossRef]
7. Onat, D.; Brillon, D.; Colombo, PC; Schmidt, AC Celloedd endothelaidd fasgwlaidd dynol: System fodel ar gyfer astudio llid fasgwlaidd mewn diabetes ac atherosglerosis. Curr. Cynrychiolydd Diabetes 2011, 11, 193–202. [CrossRef] [PubMed]
8. Packard, RR; Libby, P. Llid mewn atherosglerosis: O fioleg fasgwlaidd i ddarganfod biomarcwr a rhagfynegi risg. Clin. Cemeg. 2008, 54, 24–38. [CrossRef]
9. Esper, RJ; Nordby, RA; Vilariño, JO; Paragano, A. ; Cacharrón, JL; Machado, RA Camweithrediad endothelaidd: Arfarniad cynhwysfawr. Cardiofasg. Diabetol. 2006, 5, 4. [CrossRef]
10. Baudin, B. ; Bruneel, A. ; Bosselut, N.; Vaubourdolle, M. Protocol ar gyfer ynysu a meithrin celloedd endothelaidd gwythiennau bogail dynol. Nat. Protoc. 2007, 2, 481–485. [CrossRef] [PubMed]
11. Cao, Y. ; Cao, R. Angiogenesis atal trwy yfed te. Natur 1999, 398, 381. [CrossRef] [PubMed]
12. Yen, G.-C.; Duh, P.-D.; Tsai, H.-L. Priodweddau gwrthocsidiol a pro-oxidant asid asgorbig ac asid galig. Cemegydd Bwyd. 2002, 79, 307–313. [CrossRef]
13. Dhalaria, R. ; Verma, R. ; Kumar, D.; Puri, S.; Tapwal, A. ; Kumar, V. ; Nepovimova, E.; Kuca, K. Cyfansoddion bioactif o ffrwythau bwytadwy gyda'u priodweddau gwrth-heneiddio: Adolygiad cynhwysfawr i ymestyn bywyd dynol. Gwrthocsidyddion 2020, 9, 1123. [CrossRef] [PubMed]
14. Baião, DdS; da Silva, D.; Del Aguila, EM; Paschoalin, VMF Nodweddion maethol, bioactif a ffisigocemegol gwahanol fformwleiddiadau betys. Caethiwed Bwyd. 2017, 6. [CrossRef]
15. Lalonde, R. ; Roitberg, B. Ar esblygiad ymddygiad paru mewn coed: Ysglyfaethu neu dywydd? Yn. Nat. 1992, 139, 6. [CrossRef]
16. Silva, D. ; Baiao, DDS; Ferreira, VF; Paschoalin, VMF Betanin fel modulator straen ocsideiddiol a llid aml-lwybr: Pigment betys gydag effeithiau amddiffynnol ar pathogenesis clefyd cardiofasgwlaidd. Crit. Gwydd Bwyd y Parch. Nutr. 2020, 1–16. [CrossRef]
17. Baiao, DDS; Silva, D.; Paschoalin, VMF Llysieuyn rhyfeddol: Gellir addasu ei gynnwys nitrad a ffytocemegol mewn fformwleiddiadau newydd er budd iechyd a chefnogi therapïau clefyd cardiofasgwlaidd. Gwrthocsidyddion 2020, 9, 960. [CrossRef] 18. Abd El-Ghaffar, EA; Hegazi, NM; Saad, HH; Soliman, MM; El-Raey, MA; Shehata, SM; Barakat, A. ; Yasir, A. ; Sobeh, M. HPLC-ESI- Dadansoddiad MS/MS o ddail betys (Beta vulgaris) a'i briodweddau buddiol mewn llygod mawr diabetig math 1. Biomed. Fferyllydd. 2019, 120, 109541. [CrossRef]
19. Singh, B. ; Nathan, BS Cyfansoddiad cemegol, priodweddau swyddogaethol, a phrosesu betys-adolygiad.... Int. J. Sci. Eng. Res. 2014, 5, 679.
20. Ninfali, P. ; Angelino, D. Potensial maethol a swyddogaethol Beta vulgaris cicla a rubra. Fitoterapia 2013, 89, 188–199. [CrossRef]