Ymatebion Biocemegol A Histopatholegol Biomphalaria Alexandrina i RIPEX (Rheoleiddiwr Twf Planhigion) Ⅱ

3 Canlyniadau

3.1 Gwenwyndra RIPEX

Dangosodd canlyniadau gwenwyndra RIPEX i Biomphalaria alexandrina ar ôl 1 diwrnod mai gwerthoedd LC50 a LC90 oedd 39.9 5 a 73.6 µL/L, yn y drefn honno. Roedd crynodiadau islethal Te LC10 a LC20 yn 8 ac 16 µL/L, yn y drefn honno (Tabl 1 a Ffig. 1).

3.2 Effaith RIPEX ar y marcwyr straen ocsideiddiol

Effeithiodd yr amlygiad i RIPEX ar weithgareddau SOD a GST a lefelau MDA yn y chwarren dreulio B. Alexandrina (Tabl 2). Dangosodd malwod a amlygwyd i RIPEX ar 8 µL/L gynnydd ansylweddol (p=0.6) yng ngweithgaredd SOD o gymharu â'r malwod rheoli. Fodd bynnag, dangosodd malwod B. alexandrina a oedd yn agored i 16 µL/L am 7 diwrnod ostyngiad sylweddol mewn gweithgaredd SOD (p=0.{8}}5). Cynyddodd gweithgaredd GST yn sylweddol (p Llai na neu'n hafal i 0.001) ar ôl dod i gysylltiad â'r ddau grynodiad. Nodwyd y cynnydd uchaf mewn malwod sy’n agored i 16 µL/L am 1 diwrnod (39.7±3.2 U/mg) a’r gwerth uchaf yn y crynodiad 8 µL/L oedd (33.7±1.7 U/mg) ar 7 diwrnod, o’i gymharu â y rheolaethau ar 17.1 ± 3.6 U/mg (ar ôl 1 diwrnod) a 22.6 ± 1.3 U / mg (ar ôl 7 diwrnod).

Cliciwch i cistanche beneficios ar gyfer testosteron

Yn dibynnu ar ysbeidiau amser, achosodd amlygiad am 7 diwrnod gynnydd sylweddol (p=0.0{{20}}}3). Achosodd amlygiad i grynodiadau gwahanol o RIPEX gynnydd sylweddol (p Llai na neu'n hafal i 0.04) yn lefelau MDA. Cynyddodd y crynodiad o 8 µL/L y lefel MDA (45.06±4.1) o'i gymharu â'r rheolaeth (16.4±2.1). Yn dibynnu ar amser y datguddiad, roedd lefelau MDA yn 45.06 ± 4.1 a 56.1±0.7 nmol/g yn y crynodiadau, 8 ac 16 µL/L, yn y drefn honno, o gymharu â 13.5±0.7 nmol/g ar gyfer y rheolaeth (Tabl 2).

3.3 Effaith RIPEX ar actifedd hormonau steroid

Achosodd amlygiad i 16 µL/L gynnydd sylweddol mewn crynodiad testosteron (52.6±2.5 nmol/L) (p=0.002) o gymharu â rheolaeth (34.6±2.3 nmol/L). Er bod y crynodiad o 8 µL/L RIPEX wedi achosi cynnydd sylweddol (p=0.005) mewn testosteron ar ôl 3 diwrnod o amlygiad o gymharu â 16 µL/L. Yn dibynnu ar y cyfnodau amser, nid oes unrhyw arwyddocâd ac eithrio'r gostyngiad sylweddol mewn crynodiad testosteron a ddigwyddodd ar y 7 diwrnod (19.6±2 nmol/L) o amlygiad (p=0.003) o gymharu â 3 diwrnod (47.3± 6 nmol/L). O ran estradiol, bu cynnydd sylweddol (p=0.003) yn y crynodiad hormonau ar ôl 3 diwrnod o amlygiad i 16 µl/L (73.6±3.5 pg/mL o gymharu â'r rheolaeth (43.3 pg/mL) a 7 diwrnod o amlygiad i 8 µL/L (56.3±1.5 pg/mL o gymharu â'r rheolaeth (50.3±5.6 pg/mL) (Ffig. 2, b).

3.4 Effaith RIPEX ar ensymau potensial imiwn

Achosodd amlygiad B. Alexandrina i ddau grynodiad o RIPEX gynnydd sylweddol yng ngweithgaredd yr ensym MPO (Ffig. 3a) yn dibynnu ar amser y datguddiad ar ôl 3 diwrnod (p=0.0 {35}}4) a 7 diwrnod (p=0.01). Roedd amlygiad i 8 µL/L RIPEX, wedi cynyddu gweithgaredd MPO yn sylweddol (55.3±4.8 mU/mg protein (p=0.004) o gymharu â 15.4±1.2 mU/mg ar gyfer y rheolaeth. Tra bod 16 µL/L yn agored malwod roedd y gweithgaredd (53.03±2.3 mU/mg protein a 73.9±2.8 mU/mg protein, p Llai na neu hafal i 0.05) Hefyd, achosodd y crynodiad o 16 µL/L gynnydd sylweddol (p=0 .05) yn y actifedd o'i gymharu â 8 µL Cynyddodd y ddau grynodiad (8 a 16 µL/L) yn sylweddol (p Llai na neu'n hafal i 0.009) actifedd ADA o'i gymharu â'r rheolydd (Ffig. 3b) bob amser Cynnydd yn y actifedd ar grynodiad 16 µL/L Yn dibynnu ar y cyfnodau amser, cofnododd yr amlygiad am 7 diwrnod gynnydd sylweddol o'i gymharu ag 1 diwrnod a 3 diwrnod (p Llai na neu'n hafal i 0.05) Gwerthoedd o gweithgaredd ar 7 diwrnod oedd 27.03 ± 14 a 74.3 ± 1.9 U/mg protein

3.5 Cyfrif hemocyte gwahaniaethol

Dangosodd archwiliad o samplau hemolymff o falwod B. alexandrina dri math morffolegol gwahanol o hemocytes; hyalinocytes, crwn bach, a hemocytes ymledol. Nodweddir hyalinocytes gan eu siâp crwn, cellbilen glir, drwchus, a chymhareb cnewyllyn-i-cytoplasm mawr. Fe'i cynrychiolir gan gyfrif uchel mewn rheolaeth (56.3±0.5, 1 diwrnod). Mae celloedd crwn bach yn gelloedd canolraddol gydag ychydig o ronynnau cytoplasmig a dim ffugenwau. Mae gan hemocytes ymlediad feintiau gwahanol, gyda chnewyllyn bach a gronynnau cytoplasmig mawr. Maent yn gelloedd ffagocytig oherwydd gallant ffurfio ychydig o ffug-ymlediad sy'n lledaenu'n fyr. Cynyddodd yr amlygiad i'r ddau grynodiad o RIPEX y cyfrif hemocyte, a gwelwyd cynnydd sylweddol yn y granulocytes o falwod sy'n agored i 8 µL/L (p=0.02) a 16 µL/L (p{{12) }}.006) am 1, 3, a 7 diwrnod o'i gymharu â'r rheolaeth. (Tabl 3). Achosodd y driniaeth rai annormaleddau morffolegol mewn hemocytes megis hyalinocytes gyda elongation filopodial, granulocytes anffurfiedig gyda gwagolau, a lledaenu ffilopodia (Ffig. 4).

3.6 Effaith RIPEX ar histopatholeg y chwarennau treulio ac ovotestis

Mae chwarennau treulio B. Alexandrina yn cynnwys tiwbiau, ac mae pob tiwbyn yn cynnwys un haen o gelloedd epithelial colofnol wedi'u gwahaniaethu'n gelloedd treulio ac secretory, sydd wedi'u trefnu o amgylch lwmen canolog (Ffig. 5a). Mae tiwbiau te yn cael eu cysylltu â'i gilydd gan feinwe gyswllt. Achosodd amlygiad RIPEX rai newidiadau, megis dirywiad yn y meinwe gyswllt. Dangosodd malwod a amlygwyd i 8 µL/L bresenoldeb blebs cellog, sy'n dynodi marwolaeth celloedd a chlocsio'r lwmen. Gwelwyd bwyd heb ei dreulio (Ffig. 5b–d). Roedd malwod a amlygwyd i 16 µL/L yn dangos dirywiad yn y celloedd wedi'u leinio gyda rhai arwyddion patholegol megis gwagio ac ymledu'r lwmen. Daeth y tiwbyn wedi'i ddifrodi, yn anffurfio, ac yn necrotig (Ffig. 5e, f).

Ovotestis rheolaeth B. Mae malwod alexandrina yn cynnwys sawl acini wedi'u cysylltu â meinwe gyswllt. Mae pob acinws wedi'i leinio ag epitheliwm germinaidd sy'n cynnwys gwahanol gamau o sbermatogonia ac oogonia. Mae Tey yn gwahaniaethu i oocytau cynradd, uwchradd, ac un neu ddau o oocytau aeddfed (oogonia). Mae sbermau aeddfed i'w cael mewn grwpiau y tu mewn i'r acinws (Ffig. 6a). Newidiodd strwythur histolegol ovotestis malwod agored ar ôl 7 diwrnod o ddod i gysylltiad â RIPEX. Mewn malwod a oedd yn agored i 8 µL/L, gwelwyd nifer cynyddol o sberm, sbermau necrotig, ac atroffi. Roedd anffurfiad gametocytau gwrywaidd neu fenywaidd a dirywiad acini hefyd yn niferus. Hefyd, gwnaeth yr amlygiad i 16 µL/L yr acini yn fwy dirywiedig a chynyddwyd necrosis (Ffig. 6b–e).

4 Trafodaeth

Gwneir defnydd helaeth o PGRs mewn arferion amaethyddol. Mae gan y sylweddau hyn nifer o effeithiau niweidiol ar organebau byw. Nod yr astudiaeth bresennol oedd asesu effeithiau gwenwynegol RIPEX (plaladdwr organoffosfforws yn cynnwys etheffon sy'n cynnwys 48 y cant o etheffon fel y cynhwysyn gweithredol ynghyd â 52 y cant o gynhwysion anadweithiol). Dangosodd profion gwenwyndra RIPEX gyda B. Alexandrina mai gwerthoedd 1-dydd LC50 a -LC90 oedd 39.95 a 73.6 µl/L, yn y drefn honno.

Cefnogwyd y canlyniadau hyn gan [54] a ddangosodd werth EC50 ar gyfer ethephon yn erbyn embryonau Daphnia magna (125 mg / L ar ôl 48 h o amlygiad). Mae plaladdwr yn ymddangos yn fwy gwenwynig i Biomphalaria na fformiwleiddiadau cyfansawdd organoffosfforws eraill megis clorpyrifos (LC50 9.6 mg/L; [30] a profenofos (LC50 1.10 mg/L; [10]) .

Mae homeostasis yn bodoli rhwng cynhyrchu radicalau rhydd o ocsigen a chynhyrchu moleciwlau gwrthocsidiol o dan amodau ffisiolegol arferol [23]. Gelwir anghydbwysedd rhwng y systemau gwrthocsidiol ac ocsidydd yn straen ocsideiddiol [32]. Mewn ewcaryotau a phrocaryotau, mae superoxide dismutase (SOD) a glutathione S-transferases yn ensymau gwrthocsidiol hanfodol a all dynnu gormod o ocsigen o radicalau rhydd a gwarchod yr organeb rhag difrod ocsideiddiol [34, 38].

Maent hefyd yn cymryd rhan mewn dadwenwyno sawl xenobiotig [8, 15]. Datgelodd yr astudiaeth bresennol fod amlygiad malwod B. alexandrina i grynodiadau sublethal o RIPEX 48 y cant EC yn tarfu ar weithgaredd gwrthocsidiol y malwod agored. Mae amlygiad acíwt (24 h) yn tueddu i leihau gweithgareddau SOD a GST cyffredinol mewn malwod, ac yna cynnydd ar ôl 3 diwrnod o amlygiad ac ataliad sydyn ar ôl 7 diwrnod o amlygiad.

Roedd lefelau MDA yn sylweddol uwch mewn malwod agored o gymharu â rheolaethau ar ôl pob cyfnod datguddio. Mae'r canlyniadau hyn yn awgrymu cyflwr o straen ocsideiddiol mewn malwod a achosir gan amlygiad RIPEX. Gwelodd y malwod leihad sydyn mewn gweithgareddau ensymau ar ôl 1 diwrnod o amlygiad a cheisiwyd gwneud iawn trwy orgynhyrchu ensymau ar ôl 3 diwrnod o amlygiad. Fodd bynnag, erbyn y 7fed diwrnod o amlygiad, nid oedd malwod yn gallu goresgyn y cynhyrchiad gormodol o rywogaethau ocsigen adweithiol, fel yr amlygwyd gan y cynnydd mewn lefelau MDA (perocsidiad lipid), gan arwain at ataliad o gynhyrchu ensymau gwrthocsidiol. Mae MDA ymhlith prif effeithiau perocsidiad lipid ac mae ganddo'r pŵer i darfu ar gyfnewid ïon yn y gellbilen, addasu athreiddedd ïon, a dylanwadu ar swyddogaeth ensymau [9].

Gall mecanwaith straen ocsideiddiol RIPEX 48 y cant a achosir gan y EC mewn Biomphalaria fod yn wahanol i blaladdwyr organoffosfforws eraill. Achosodd ataliad ensymau dim ond ar ôl 7 diwrnod o amlygiad. Fodd bynnag, achosodd clorpyrifos, er enghraifft, gynnydd mewn gweithgaredd SOD a gostyngiad mewn gweithgaredd GST yn B. Alexandrina yn fuan ar ôl diwrnod 1 o amlygiad [30]. Mae testosteron ac estradiol yn chwarae rhan hanfodol wrth atgynhyrchu malwod B. alexandrina [20, 45]. Gellir defnyddio newidiadau yn yr hormonau hyn fel diweddbwynt gwenwyndra cemegol [14]. RIPEX 48 y cant EC achosi amhariad hormonaidd mewn B. malwod alexandrina.

Dangosodd malwod a amlygwyd i 16 µL/L gynnydd sylweddol mewn testosteron ar ôl 3 diwrnod o amlygiad. Fodd bynnag, gostyngodd RIPEX lefelau hormonau mewn malwod a oedd yn agored i 8 µL/L ar ôl 1 a 3 diwrnod o amlygiad. Ynglŷn ag estradiol, mae'r hormon yn tueddu i gynyddu mewn malwod agored. Fodd bynnag, gwelwyd y cynnydd amlycaf mewn malwod a ddaeth i gysylltiad â 16 µL/L ar ôl 3 diwrnod o amlygiad. Gall RIPEX felly gael effaith aflonyddgar endocrin ar falwod B. alexandrina. Adroddwyd canfyddiadau tebyg hefyd gan Ibrahim a Hussein [30], a adroddodd gynnydd sylweddol yn lefelau testosteron ac estradiol ar ôl dod i gysylltiad â B. Alexandrina i grynodiadau sublethal o clorpyrifos 48 y cant EC. Fodd bynnag, mae agrocemegau eraill, megis chwynladdwr oxyfluorfen (24 y cant EC), wedi lleihau lefelau testosteron a 17- yn B. Alexandrina ar ôl pythefnos o amlygiad [31]. Mae Myeloperoxidase (MPO), sy'n trosi H2O2 i asid hypochlorous (HOCl), gwrthfiotig cryf, yn aml yn cael ei ystyried yn gonglfaen cytotoxicity wedi'i gyfryngu â ROS, ac mae tystiolaeth gref bod gan hemocytes molysgaidd weithgaredd MPO sy'n debyg i weithgaredd ffagosytau mamalaidd [22 , 44, 49]. Mae adenosine deaminase (ADA) yn chwarae rhan bwysig yn systemau imiwnedd anifeiliaid asgwrn cefn ac infertebrat, gan gynnwys malwod Biomphalaria [51].

Mae ei ddiffyg yn gysylltiedig â chlefyd imiwnoddiffyg cyfun [25]. Achosodd amlygiad B. Alexandrina i 8 ac 16 µL/L RIPEX gynnydd sylweddol yng ngweithgaredd ensymau MPO ac ADA yng nghwarennau treulio malwod ar ôl 3 a 7 diwrnod o ddod i gysylltiad. Mae'n ymddangos bod y cynnydd mewn gweithgaredd ensymau yn dibynnu ar amser a chydlyniad. Y chwarennau treulio yw'r prif safle ar gyfer metaboledd halogion cemegol mewn gastropodau [46]. Mae'r cynnydd yn yr ensymau hyn yn awgrymu ymateb imiwnolegol o B. Alexandrina i wenwyndra RIPEX gan fod MPO, er enghraifft, yn gallu trosi llygryddion i radicalau rhydd trwy dyniadau electronau sengl [41], a all arwain at ddigwyddiadau beicio rhydocs sy'n cynhyrchu oxyradicals ac o bosibl yn cychwyn perocsidiad lipid [36].

Mae malwod yn dibynnu'n bennaf ar sytotocsigedd cyfryngol celloedd i gael gwared ar wrthrychau goresgynnol [5, 53]. Y celloedd amddiffynnol sydd wedi'u hastudio fwyaf mewn malwod yw hemocytes. Mae hemosytau yn symud ymlaen o gelloedd bach, crwn, agranwlaidd i gelloedd mawr, gronynnog, sy'n lledaenu trwy gyfnodau canolradd [6, 53]. Hemocytes gronynnog yn bennaf ffagocytose sylweddau tramor [28]. Cynyddodd yr amlygiad i ddau grynodiad o RIPEX 48 y cant EC y cyfrif hemocyte. Ymddangosodd te hyalinocytes gyda gwagolau mewn samplau a gasglwyd o falwod agored. Nodwyd cynnydd sylweddol mewn granulocytes, sy'n dangos cynnydd yn ymateb imiwnedd cellog y falwen i herio gwenwyndra RIPEX. Dangosodd Ibrahim a Hussein [30] fod amlygiad B. Alexandrina i glorpyrifos yn cael effeithiau negyddol ar forffoleg a chyfanswm cyfrif hemocyte malwod agored.

Ymhellach, datgelodd microsgopeg ysgafn fod gan rai hyalinocytes niwclysau crebachu, rhaniad celloedd anghyflawn, a ffurfiant ffug-goden. Mae'r effeithiau hyn ar gyfrif hemocyte a morffoleg B. Alexandrina yn cael effaith negyddol ar imiwnedd y malwod, gan fod yr organebau hyn yn dibynnu i raddau helaeth ar hemocytes i'w hamddiffyn rhag cyfarfyddiadau tramor. Dangosodd ymchwiliadau histopatholegol o chwarennau treulio B. Alexandrina fod amlygiad RIPEX am 7 diwrnod wedi achosi rhai newidiadau patholegol megis dirywiad meinwe gyswllt, gwaedu cellog, a dirywiad celloedd wedi'u leinio yn y lumen. Daeth y tiwbiau treulio yn difrodi, yn anffurfio, ac yn necrotig. Mae histopatholeg yn bwynt terfyn pwysig wrth asesu'r newidiadau patholegol mewn anifeiliaid dyfrol sy'n agored i halogion [33].

Mae sensitifrwydd uchel y chwarennau treulio yn cael ei briodoli'n uniongyrchol i'w rôl mewn homeostasis, cymeriant halogion, treuliad, metaboledd, a'r broses ddadwenwyno [24]. Gall yr effeithiau a arsylwyd fod o ganlyniad i groniad uniongyrchol o'r RIPEX yng nghelloedd y chwarren dreulio neu'n anuniongyrchol trwy ddifrod ocsideiddiol a achosir gan gynhyrchu rhywogaethau ocsigen adweithiol (ROS). Yn wir, mae straen ocsideiddiol eithafol wedi'i gysylltu â difrod meinwe sy'n cynnwys amrywiaeth o brosesau ffisiolegol a newidynnau amgylcheddol, gan gynnwys marwolaeth celloedd necrotig ac apoptotig [19]. At hynny, roedd dod i gysylltiad â dau grynodiad gwahanol o RIPEX am 7 diwrnod yn newid strwythur histolegol ovotestis gyda chynnydd yn nifer y sbermau necrotig, atroffi, anffurfiad gametocytau gwrywaidd neu fenywaidd, a dirywiad yr acini. Mae’r newidiadau hyn yn debygol o leihau potensial atgenhedlu malwod ac, felly, eu ffitrwydd yn y system ddyfrol.

5 Casgliad

Cafodd crynodiadau islethal o RIPEX 48 y cant EC effaith amlochrog ar falwod Biomphalaria alexandrina. Mewn malwod, gostyngodd amlygiad cronig i RIPEX gynhyrchiad yr ensymau gwrthocsidiol SOD a GST tra'n cynyddu cynhyrchiad MDA, gan nodi cyflwr straen ocsideiddiol. Ar ben hynny, cafodd effaith aflonyddgar endocrin ar falwod, fel y dangosir gan gynnydd cyffredinol mewn lefelau hormonau steroid. Mae'n ymddangos bod system imiwnedd y falwen yn agored i amlygiad RIPEX. Achosodd gynnydd sylweddol yng ngweithgaredd ensymau MPO ac ADA mewn chwarennau treulio malwod ar ôl 3 a 7 diwrnod o amlygiad, yn ogystal â chynnydd sylweddol mewn granulocytes mewn grwpiau malwod agored. Roedd annormaleddau patholegol mewn chwarennau treulio malwod agored ac ovotestis hefyd yn arwyddion o newidiadau histopatholegol a achoswyd gan amlygiad RIPEX. Mae'r canfyddiadau hyn yn dangos bod RIPEX yn brifo ffawna dyfrol, gan gynnwys B. Alexandrina. Tus, gellir defnyddio malwod Biomphalaria fel bioddangosyddion ar gyfer llygredd amgylcheddol gyda rheoleiddwyr twf planhigion.

Mae mecanwaith Cistanche yn rhoi hwb i effaith testosterone

Canfuwyd bod Cistanche yn hybu lefelau testosteron mewn sawl ffordd. Yn gyntaf, mae'n cynnwys cyfansoddion o'r enw echinacoside ac acteoside, y dangoswyd eu bod yn gwella cynhyrchiad hormon luteinizing (LH) yn y chwarren bitwidol. Mae LH yn ysgogi'r celloedd Leydig yn y ceilliau i gynhyrchu testosteron. Mae Cistanche hefyd yn cynnwys polysacaridau a glycosidau ffenylethanoid, y dangoswyd bod ganddynt briodweddau gwrthocsidiol a gwrthlidiol. Gall hyn helpu i leihau straen ocsideiddiol a llid yn y ceilliau, a all amharu ar gynhyrchu testosteron Yn ogystal, canfuwyd bod Cistanche yn cynyddu mynegiant genynnau sy'n ymwneud â synthesis testosterone a lleihau gweithgaredd ensymau sy'n dadelfennu testosteron, megis {{1} }alpha-reductase. Yn gyffredinol, credir bod y cyfuniad o'r mecanweithiau hyn yn cyfrannu at effeithiau hybu testosteron Cistanche.