Pennod 5 Newidiadau mewn Gweithgaredd Ensymau Yn ystod Eplesu Ensymau
Oct 29, 2024
Pennod 5 Newidiadau mewn Gweithgaredd Ensymau Yn ystod Eplesu Ensymau
Proteas, lipase asuperoxide dismutase (dywarchen)yw prif ensymau swyddogaetholbwydydd iechyd ensymau microbaidd. Yn eu plith,broteinyn chwarae rôl ynhyrwyddo hydrolysis protein mewn bwydyn y corff dynol. Yn ogystal, gall hefyd ddadelfennu rhai celloedd sy'n marw, tynnu baw ar wyneb y croen a mandyllau, a chwarae rôl mewn alltudio, felly fe'i defnyddir yn helaeth mewn cynhyrchion baddon. Mae lipas yn gweithredu ar y bond ester rhwng asidau brasterog a glyserol, ac mae'r swbstrad hydrolysis yn olewau naturiol yn gyffredinol. Felly, fe'i gwelir mewn llawer o fwydydd colli pwysau a chynhyrchion iechyd. Mae llawer o fenywod yn bryderus iawn am bwnc colli pwysau, a dyna pam mae ensymau wedi dod yn boblogaidd yn gyflym ledled y byd.Mae ensymau yn llawn lipas, sy'n golygu bod ganddyn nhw werth ymchwil uchel a rhagolygon cais.Nrysonyn ensym metel arbennig sy'n cataleiddio adwaith gwrthodradicalau anion superoxide, a thrwy hynnycael gwared ar radicalau anion superoxideyn y corff. Mae'n rhwystr amddiffynnol i organebau, felly fe'i defnyddir yn helaeth yn y maes meddygol.
Mae'r bennod hon yn cymryd ensym Apple fel enghraifft. Gan ddechrau o gam cychwynnol yr eplesiad, mae'rGweithgareddau superoxide dismutase, Amylase, Lipase, Protease a Cellulase yn y grŵp arbrofol a'r grŵp rheoli roeddent yn cael eu mesur bob 15 diwrnod i adlewyrchu'n gynhwysfawr ac yn systematig y duedd newidiol o weithgaredd ensymau yn ystod y broses eplesu gyfan.
Cliciwch i gael mwy o fanylion
Gwasanaeth cefnogol Wecistanche-yr allforiwr Cistanche mwyaf yn y Tsieina:
E -bost: wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/tel: +86 15292862950
5.1 Deunyddiau a Dulliau
5.1.1 Deunyddiau
(1) Deunyddiau Arbrofol
Golchwch afalau ffres gyda dŵr di -haint o dan amodau di -haint, eu sychu'n naturiol ar fwrdd gweithredu di -haint, eu pilio, a'u sleisio i'w defnyddio'n ddiweddarach. Ychwanegwch siwgr gwyn ac afalau i jar wydr wedi'i sterileiddio ar gymhareb màs o 1: 1. Ysgogi'r bacteria sy'n ofynnol ar gyfer yr arbrawf a'u brechu i'r ensym yn ôl y cynllun gorau posibl (hepgorir y cam llawdriniaeth hwn ar gyfer y grŵp rheoli), ei selio a'i roi mewn lle cŵl a sych. Ar ôl 3 mis o eplesu tymheredd ystafell, cymerwch sampl i gael yr hylif ensym cyfan sy'n cynnwys y mwydion a'i hidlo. Cymerwch y goruwchnaturiol fel y sampl arbrofol. Ar ôl i'r sampl gael ei centrifugio ar 10, 000 rpm am 15 munud mewn centrifuge cyflym, fe'i defnyddir i fesur data perthnasol. Mae'n werth nodi, yn y broses o wneud ensymau, er mwyn osgoi halogi diangen, bod ein holl weithrediadau wedi'u cyflawni o dan amodau di -haint.
(2) prif offerynnau
Mae'r offerynnau sy'n ofynnol ar gyfer yr arbrawf yr un fath â 3.1.1 (2).
5.1.2 Dulliau
(1) Penderfynu ar weithgaredd dismutase superoxide (SOD) [66]
Cafodd yr hydoddiant pyrogallol ei gynhesu ymlaen llaw mewn baddon dŵr tymheredd cyson 25 gradd am gyfnod o amser. Yn ôl Tabl 5.1, ychwanegwyd swm priodol o byffer, dŵr distyll a'r un cyfaint o asid hydroclorig neu doddiant pyrogallol at y tiwb prawf. Gosodwyd y baddon dŵr tymheredd cyson i 25 gradd ar gyfer 2 0 min. Ar ôl i'r hylif cymysg gael ei ysgwyd yn gyflym, cafodd ei chwistrellu ar unwaith i'r cuvette. Mesurwyd gwerth amsugno A0 y sampl bob 30 eiliad ar donfedd o 325nm gan ddefnyddio sbectroffotomedr.
Tab.5.1 Ychwanegwch faint o ymweithredydd ffenol bensen cyfagos ar gyfer pennu cyfradd awtocsidiad
Mae'r dull ar gyfer pennu gweithgaredd SOD yr un peth yn y bôn â'r gweithrediad uchod. Yr unig wahaniaeth yw, cyn ychwanegu pyrogallol, mae angen ychwanegu {{0}}. 5 ml o doddiant sampl ensymau o wahanol grynodiadau yn gyntaf. Ar yr un pryd, ychwanegir yr un cyfaint o ddŵr distyll. Mae'r amsugnedd mesuredig yn asod. Cyfrifir y gyfradd atal a'r gweithgaredd ensymau SOD yn ôl Fformiwla 5.1 a Fformiwla 5.2: Cyfradd Atal (%)=(△ a 0- △ asod)/△ a 0 × 100 (5.1) gweithgaredd enzyme (u/× × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × ostyngedig (5.2) Lle: V1 yw cyfanswm cyfaint yr hydoddiant, ml; V2 yw cyfaint yr hydoddiant sampl ensymau, mL; △ A0 yw cyfradd awto-ocsidiad pyrogallol; △ ASOD yw cyfradd newid y gwerth amsugno sampl; n yw pennu gwanhau (2) gweithgaredd amylase defnyddiodd yr astudiaeth hon y dull lliwimetrig startsh ïodin i bennu gweithgaredd amylas. Mae'r camau gweithredu penodol yn cyfeirio at y "weithdrefn gweithredu Labordy Clinigol Cenedlaethol" [67]. Fe'i rhennir yn bennaf yn y ddau bwynt canlynol:
① Paratoi datrysiad
Datrysiad startsh clustogi ({{{{0}}. 4g/l): pwyso 9g o sodiwm clorid yn gywir, 22.6g o ffosffad disodiwm hydrogen anhydrus, a 12.5g o botasiwm anhydrus diffosid}} dŵr, a'i gynhesu nes bod y toddiant yn berwi; Pwyso 0.4g o startsh hydawdd yn gywir, ei doddi mewn 10ml o ddŵr distyll, cymysgu'n gyfartal, a'i addasu i past; Chwistrellwch y toddiant startsh wedi'i addasu i past i'r toddiant berwedig uchod, a golchwch y bicer dro ar ôl tro nes bod y startsh wedi'i drosglwyddo'n llwyr i'r toddiant dŵr berwedig. Ar ôl ei droi yn gyfartal gyda gwialen wydr, oeri i dymheredd yr ystafell, ychwanegwch 5ml o doddiant fformaldehyd gwallt 37%, a'i wanhau i 1L â dŵr distyll. Gwerth pH yr hydoddiant yw 7.0 ± 0.1, ac fe'i rhoddir yn yr oergell i'w ddefnyddio.
Datrysiad stoc ïodin (0. 1 mol/l): Pwyswch yn gywir 1.7835g ïodad potasiwm a 22.5g ïodid potasiwm mewn 500ml glân
Mae bicer, yn araf ac yn gyfartal yn ychwanegu asid hydroclorig crynodedig 4.5ml, gan ei droi yn barhaus yn ystod y broses ychwanegu, ei wanhau i'r raddfa â dŵr distyll, a'i droi yn gyfartal. Rhowch ef yn yr oergell i'w ddefnyddio a'i storio mewn potel ymweithredydd brown.
Datrysiad cais ïodin ({{{0}}. 01mol/l): Cymerwch rywfaint o doddiant stoc ïodin (0.1 mol/L), ei wanhau 10 gwaith â dŵr distyll, ei roi yn yr oergell i'w ddefnyddio, a'i storio am hyd at 1 mis.
② Camau gweithredu arbrofol
Cymerwch yr hydoddiant ensym a'i wanhau 10 gwaith gyda halwyn ffisiolegol, a gweithredwch yn ôl Tabl 5.2. Cymysgwch yn dda, tonfedd y sbectroffotomedr yw 660Nm, a llwybr golau'r cwpan lliwimetrig yw 10mm. Sero â dŵr distyll a darllen amsugnedd pob tiwb. Cyfrifwch y gweithgaredd amylas yn seiliedig ar y Fformiwla Cyfrifo Sylfaenol 5.3.
Tab.5.2 Camau Gweithredu Penderfynu amylase
(3) Penderfynu ar weithgaredd lipas
Gwnaed y dull penderfynu yn unol â qb/t {{{0}} [68]. Paratowyd datrysiad prawf ensym 2% gyda 0. 0 25 mol/l Byffer ffosffad (pH 7.5), defnyddiwyd ffenolphthalein fel dangosydd, a chafodd asidau brasterog eu titradio â hydoddiant sodiwm hydroxid safonol. Cyfrifwyd y gweithgaredd lipas yn seiliedig ar gyfaint y sodiwm hydrocsid a ddefnyddir yn yr arbrawf. Y rheol yw: ar pH o 7.5 a thymheredd amgylchynol o 40 gradd, mae 1 ml o doddiant ensym hylif yn hydroli lipase am 1 munud i gynhyrchu 1 μmol o asid brasterog, sy'n un uned weithgaredd lipas, a fynegir fel U/ml. Then, the lipase activity was calculated according to formula 5.4: enzyme activity (U/mL)=(BA) × c/0.05 × 50 × 1/15 × n=200/3 × (BA) × c × n (5.4) Where: B is the volume of sodium hydroxide standard solution consumed, mL; A yw cyfaint yr hydoddiant safonol sodiwm hydrocsid a ddefnyddir yn y grŵp rheoli gwag, ML; C yw crynodiad hydoddiant safonol sodiwm hydrocsid, mol/L; 0.05 yw ffactor trosi crynodiad toddiant safonol sodiwm hydrocsid; 50 yw cynnwys asid brasterog hydoddiant sodiwm hydrocsid; 15 mun yw'r amser ymateb; n yw'r gwanhau lluosog.
(4) Pennu gweithgaredd proteas
Cyfeiriwch at GB/T 23527-2009 [69] gydag addasiadau bach.
① Paratoi cromlin safonol
Cymerwch 1ml o doddiant safonol tyrosine gyda chrynodiadau màs gwahanol, sef 0, 1 0, 20, 30, 40, a 50mg/L, ac ychwanegwch 5ml o doddiant carbonad sodiwm 0.4mol/L ac 1ml o doddiant adweithydd ffoliant iddo. Ymateb am 20 munud ar dymheredd o 40 gradd. Ar ôl i'r adwaith gael ei gwblhau, tynnwch yr hydoddiant adweithio a mesurwch werth amsugno'r toddiant ar donfedd o 680Nm gan ddefnyddio sbectroffotomedr. Lluniwch gromlin safonol tyrosine gyda chrynodiad tyrosine fel yr echel lorweddol a'r gwerth amsugno fel yr echelin fertigol.
Perlysiau newydd cistanche gyda phwer gwrthocsidiol cryf
② Pennu gweithgaredd proteas
Grŵp Arbrofol: Cymerwch 1ml o doddiant casein gyda chrynodiad o 10 g/L a'i gymysgu'n gyfartal ag 1ml o'r toddiant sampl i'w brofi, ac ymateb am 10 munud ar dymheredd amgylchynol o 40 gradd; Hidlo a chael yr hidliad ar ôl sefyll, cymerwch 1ml o'r hidliad, 5ml o doddiant sodiwm carbonad ac 1ml o adweithydd folin, cymysgu'n gyfartal, ac ymateb am 20 munud ar dymheredd amgylchynol o 40 gradd; Defnyddiwch sbectroffotomedr i fesur gwerth amsugno'r toddiant ar donfedd o 680Nm.
Grŵp Rheoli Blank: Cymerwch 1ml o'r toddiant sampl i'w brofi, ychwanegwch asid trichloroacetig, ymateb yn llawn i anactifadu'r proteas, ac mae dulliau gweithredu eraill yr un fath â'r grŵp arbrofol.
Cyfrifwch y gweithgaredd proteas yn ôl Fformiwla 5.5:
Gweithgaredd proteas (u/ml)=ak × 4/10 (5.5) lle: a yw amsugnedd yr hydoddiant ensym yn y grŵp arbrofol; K yw faint o tyrosine pan fydd yr amsugnedd yn hafal i 1; 4 yw cyfanswm cyfaint yr hydoddiant adweithio, ML; 10 yw'r amser ymateb, min.
(5) Pennu gweithgaredd cellulase [70]
Yn gyffredinol, mynegir gweithgaredd cellulase mewn ensymau gan faint o glwcos sy'n cael ei ryddhau gan rywfaint o doddiant ensymau fesul amser uned. Yr egwyddor o ddefnyddio'r dull papur hidlo i fesur gweithgaredd cellulase yw y gall cellulase ddadelfennu seliwlos yn y papur hidlo i gynhyrchu metabolion eilaidd fel glwcos, a gall glwcos adweithio â 3, {5- asid dinitrosalicylic i ffurfio cymhleth melyn. Mae lliw yr adwaith hwn yn gymharol ddisglair, a all bennu faint o glwcos a siwgrau lleihau eraill a gynhyrchir.
①3, 5- asiant lliwimetrig asid dinitrosalicylic
Pwyso'n gywir 1 0 g o 3, {5- asid dinitrosalicylig gyda phwynt toddi o radd 168-169, ei doddi â dŵr distyll, ychwanegwch 20g o sodiwm hydrocsid a 200g o ddistylliad potasiwm sod -terteled, yn parhau i fod yn solet, yn parhau i fod yn solet, yn parhau i fod yn solet, yn parhau i fod yn solet, yn cael ei ddistyllu, yn parhau i fod phenol and 0.5g of anhydrous sodium sulfite, stir continuously during the addition process until it is completely dissolved, stop heating after mixing evenly, cool to room temperature, transfer all to a 1000mL volumetric flask, dilute to the mark with distilled water, place at room temperature for one week, filter, obtain the supernatant, and store in a brown reagent bottle.Hydrolysis ②enzymatig
Pipette yn gywir {{{0}}, 0. 5, 1. 0, 1.5, 2.0ml o doddiant sampl ensymau i 2ml o doddiant byffer asetad asid-sodiwm asetig gyda gwerth pH o 4.5. Ar ôl 5 munud o faddon dŵr tymheredd cyson ar 40 gradd, ychwanegwch 6 darn o bapur hidlo cromatograffeg gydag ardal o 1 × 1cm2 yn y drefn honno, a dechrau amseru ar unwaith i wneud yr amser ymateb yn gywir i 60 munud. Trosglwyddwch ar unwaith i faddon dŵr berwedig i gael adwaith am 10 munud, ac mae'r cellulase yn colli ei weithgaredd.
③ Adwaith lliw
Cymerwch yr ensym sampl datrysiad% 2c ychwanegu 3mL o 3% 2c {% 7b2% 7d% 7ddinitrosalicylic asid colorimetrig asiant wedi'i baratoi i mewn �% a0% 2c gwres i mewn berwi dŵr bath am 15 munud % 2c cymryd allan% 2c oer i ystafell tymheredd% 2c ychwanegu 10ml o distylledig dŵr , cymysgu yn gyfartal % 2c defnydd sbectroffotomedr ar a tonfedd o 550nm % 2c addasu y gwag rheoli grŵp i sero % 2c a mesur ei amsugno gwerth.
④ Lluniadu cromlin safonol glwcos
Paratowch doddiant safonol glwcos gyda chrynodiad o 1mg/ml yn gywir, a defnyddiwch ddŵr distyll i wneud yr hydoddiant safonol glwcos gyda chyfaint o 0, 0. 2, 0. 4, 0,},},},}. 3ml o 3, 5- Asiant lliwimetrig asid dinitrosalicylic wedi'i baratoi yn ① i berfformio adwaith datblygu lliw. Plotiwch y gromlin safonol gyda chrynodiad glwcos fel yr echel lorweddol ac amsugnedd fel yr echelin fertigol.
⑤Calculation
Defnyddiwch y gwerth amsugno A ar ôl Datblygu Lliw gyda hydoddiant ensym, ac yna cyfrifwch y swm rhyddhau glwcos M yn ôl y gromlin safonol glwcos, a'i gyfrifo yn ôl Fformiwla 5.6:
Gweithgaredd cellulase (u/ ml)=m/ (t · m) (5.6) lle: m yw'r swm rhyddhau glwcos, ug; T yw'r amser hydrolysis ensymatig, min; M yw cynnwys yr ensymau yn yr adwaith, UG/mL.
