Wedi'i Nodweddu Gan Ddirywiad mewn Swyddogaethau Ffisiolegol mewn Systemau Organau Unigol
Sep 15, 2022
Cysylltwch am fwy o wybodaeth
CRYNODEB
Te du yw'r ddiod te sy'n cael ei fwyta fwyaf yn y byd a dywedwyd yn gyson ei fod yn meddu ar fanteision gwrth-heneiddio. Fodd bynnag, mae p'un a yw theaflavins, un math o'r ffytogemegau nodweddiadol mewn darnau te du, yn ymwneud â rheoleiddio heneiddio a hyd oes defnyddwyr yn parhau i fod yn anhysbys i raddau helaeth. Yn yr astudiaeth hon, rydym yn dangos bod theaflavins yn chwarae rhan fuddiol wrth atal gollyngiadau coluddol a dysbiosis sy'n cychwyn yn oed, gan ohirio heneiddio yn Drosophila. Yn fecanyddol, mae theaflavins yn rheoleiddio cynulliad cyddwysiad Imd i reoli'n negyddol gor-actifadu signalau Imd mewn coluddion pryf ffrwythau. Yn ogystal, mae theaflafinau yn atal colitis a achosir gan DSS mewn llygod, gan awgrymu bod theaflafinau yn chwarae rhan mewn modiwleiddio cyfanrwydd berfeddol. Yn gyffredinol, mae ein hastudiaeth yn datgelu mecanwaith moleciwlaidd y mae theaflafinau yn ei ddefnyddio i reoleiddio homeostasis perfedd yn debygol trwy reoli cyfuniad Imd.
RHAGARWEINIAD
Mae heneiddio, a nodweddir gan ddirywiad mewn swyddogaethau ffisiolegol mewn systemau organau unigol a risg gynyddol o afiechyd a marwolaeth, yn cynnwys difrod i foleciwlau, celloedd a meinweoedd (Alavez et al., 2011; Bartke et al., 2019; Engeet al., 2017). Heb os, mae nodi deunyddiau swyddogaethol neu gemegau sy'n atal dirywiad biolegol i ohirio'r broses heneiddio ac ymestyn oes yn hollbwysig (Bar-ardo et al., 2017; Kapahi et al., 2017). Mae astudiaethau blaenorol wedi nodi bod te du, y te sy'n cael ei fwyta fwyaf yn y byd, yn cynnwys gweithgareddau sylweddol sy'n gohirio heneiddio (Cameron et al., 2008; Fei et al., 2017; Kumar a Rizvi, 2017; Naumovski et al., 2019 ; Peng et al., 2009; Xiao et al., 2020). Mae ychwanegiad dietegol gyda darnau o de du yn effeithlon yn ymestyn oes anifeiliaid arbrofol fel mwydod (Feet al., 2017), pryfed ffrwythau (Peng et al., 2009; Site al., 2011), llygod (Safle al., 2011 ; Xiao et al., 2020), a llygod mawr (Kumar a Rizvi, 2017).
Mae'n hysbys bod darnau te du yn bennaf yn cynnwys dau fath o ffytogemegau, sef, catechins a theaflavins (TFs) (Cameron et al., 2008; Kondo et al., 2019; Li et al., 2013), a'r olaf ohonynt yn cael eu cynhyrchu o catechins gan polyphenol oxidase mewndarddol a peroxidase yn ystod y broses ocsideiddio mewn cynhyrchu te du (Li et al., 2013). Mae cyfres o astudiaethau wedi nodi rôl gwrth-heneiddio y catechins trwy wella straen ocsideiddiol a llid sy'n gysylltiedig ag oedran a lleihau niwed i feinwe (Cameron et al., 2008; Niu et al., 2013; Peng et al., 2009; Si et al. .2011; Waaner et al.,2015). Fodd bynnag, mae astudiaethau swyddogaethol ar gyfraniadau TFs at heneiddio wedi llusgo'n fawr y tu ôl i'r rhai ar catechins, oherwydd mae'n anodd tynnu symiau digonol o TFs o ddail te du ar gyfer astudiaethau meddygol (Takemoto a Takemoto, 2018). Yn ddiweddar, datblygwyd sawl dull biosynthetig ar gyfer cynhyrchu màs TFs (Takemoto a Takemoto, 2018), gan ei gwneud hi'n bosibl archwilio union effeithiau biolegol TFs a'r mecanweithiau rheoleiddio sylfaenol.
Yn ddiweddar, mae setiau cynyddol o ddata wedi amlygu rolau canolog y coluddion mewn heneiddio a modiwleiddio hyd oes (Guo et al., 2014; Jji et al., 2019; Maynard a Weinkove, 2018; Rothenberg a Zhang, 2019; Salazar et al. ,2018). Mae'r epitheliwm berfeddol, sy'n gweithredu fel rhwystr dethol, yn caniatáu amsugno maetholion, ïonau, a dŵr ac yn cyfyngu ar gyswllt gwesteiwr ag endidau niweidiol, gan gynnwys micro-organebau, antigenau dietegol, a thocsinau amgylcheddol (Capo et al., 2019; Nicholson et al. , 2012; Ryu et al., 2010). Fel meinwe trosiant uchel mewn unigolion, mae'r llwybr berfeddol yn darparu'r amgylchedd byw gorau ar gyfer micro-organebau symbiotig, gan gynnwys amodau anaerobig naturiol, digonedd o faetholion, a thymheredd a pH addas.
Ffigur 1. Mae Theaflavins yn ymestyn oes Drosophila ac yn gwella'r gallu i ddringo
(A a B) Roedd pryfed ffrwythau benywaidd yn cael eu meithrin â bwydydd safonol a oedd yn cael eu hategu â theaflavins 1 mg/ml neu 2.5 mg/mL (TFs) neu heb TFs fel gwaelodol. Trosglwyddwyd pryfed i ffiolau ffres yn cynnwys cyfryngau newydd bob yn ail ddiwrnod, ac mae pryfed marw wedi sgorio trwy gydol oes yr oedolyn, dadansoddwyd a dangoswyd cromliniau Goroesi(A) a hirhoedledd cymedrig (B) pryfed benywaidd.
(Cand D) Roedd merched w18 yn cael eu bwydo â bwydydd safonol Drosophila (Basal wedi'i gyfeirio) neu â bwydydd wedi'u hychwanegu ag 1mg/ml neu 2.5mg/ETF, yn y drefn honno. Bu chwe grŵp annibynnol o bryfed ar yr oedrannau a nodir (10 diwrnod, 30 diwrnod, 40 diwrnod, a 50 diwrnod, yn y drefn honno) yn destun profion caffi(C) a bwydo Fluorescein (D). gwerth, gan ffurfio cilfachau a feddiannir gan rywogaethau bacteriol penodol yn y corff (Bonfini et al., 2016; Buchon et al., 2013; Nicholson et al., 2012). Yn y cyfamser, mae'r micro-organebau symbiotig hyn a'u metabolion hefyd yn effeithio'n uniongyrchol neu'n anuniongyrchol ar brosesu maetholion; treuliad ac amsugno; cydbwysedd ynni; swyddogaeth imiwnedd; datblygiad gastroberfeddol ac aeddfedu; a llawer o weithgareddau ffisiolegol pwysig eraill (Bonfini et al., 2016; Broderick, 2016; Maynard a VVeinkove, 2018; Nicholson et al., 2012). Gall y berthynas fuddiol i'r ddwy ochr rhwng y ddau symbiont gynnal sefydlogrwydd a chydbwysedd deinamig y micro-ecosystem berfeddol (Bonfini et al., 2016; Brodeerick, 2016; Broderick et al., 2014; Guo et., 2014; May-nard a Weinkove, 2018; Nicholson et al., 2012).
gall cistanche gwrth-heneiddio
Mae cyfres o astudiaethau wedi dangos bod yr ymateb imiwn cynhenid yn hanfodol ar gyfer cynnal homeostasis microbiota berfeddol ac yn cael ei warchod rhag infertebratau i fertebratau (Guillouet al., 2016; Guo et al., 2014; Ryu et al., 2006, 2010; Vijay- Kumar et al., 2010). Yn Drosophila, mae dau brif lwybr signalau, sef y llwybrau Toll a diffyg imiwnedd (Imd), yn rhan o’r ymatebion imiwnedd cynhenid (Lu et al., 2020; Myllymakiet al., 2014; Valanne et al., 2011). Yn nodedig, mae llwybr Tollau Drosophila yn rhannu tebygrwydd â llwybrau derbynnydd rhynglewcinaidd mamalaidd (IL-1R) a MyD88-dibynnol ar ffurf Tollau derbynnydd (TLR), tra bod llwybr Imd yn debyg i'r llwybr derbynnydd ffactor necrosis tiwmor (TNFR) a'r llwybr TLR sy'n ddibynnol ar TRIF mewn mamaliaid (Imler, 2014; Myllymaki et al., 2014; Valanne et al., 2011). Mae'r ddau lwybr hyn yn rheoli mynegiant peptidau gwrthficrobaidd (AMPs) trwy actifadu ffactorau trawsgrifio NF-KB (Imler, 2014; Myllymaki et al., 2014; Valanne et al., 2011).bioflavonoidauMae llwybr signalau Imd fel arfer yn cael ei actifadu gan haint bacteriol Gram-negyddol ac yn arwain at fynegiant set arall o CRhA, megis Attacin, Cecropin, a Diptericin (Kleino a Silverman, 2014; Myllymaki et al., 2014). Mae mynegi'r CRhA hyn yn gofyn am y derbynnydd protein adnabod peptidoglycan (PGRP)-LC yn y llwybr Imd a holltiad signal-ddibynnol a thrawsleoli niwclear Relish, ffactor trawsgrifio teulu NF-kB (Kleino a Silverman, 2014; Myllymaki et al., 2014). Dangosodd astudiaeth ddiweddar fod angen ffurfio amyloid ar gyfer actifadu llwybr Drosophila Imd ar gydnabod peptidoglycanau bacteriol (Kleino et al., 2017). Fodd bynnag, mae p'un a yw'r cyddwysiad Imd hwn yn ymwneud â phrosesau biolegol eraill, megis cynnal a chadw homeostasis berfeddol a rheoleiddio heneiddio, yn anhysbys i raddau helaeth.
Yn yr astudiaeth bresennol, gwnaethom ddefnyddio pryfed ffrwythau a llygod fel modelau anifeiliaid i ymchwilio i rolau TFs wrth reoli cyfanrwydd berfeddol a heneiddio. Fe wnaethom ddangos bod TFs yn gohirio gorlethu bôn-gelloedd berfeddol sy'n cychwyn yn oed, yn amddiffyn rhag dysbiosis microbiome y perfedd, ac yn atal actifadu llwybr signalau Imd, gan felly ymestyn oes Drosophila. Dangosodd astudiaethau mecanistig pellach y gall TFs gyfrannu'n negyddol at signalau Imd trwy rwystro anwedd Imd yn hytrach na'i hollbresennol. At hynny, canfuom fod TFs yn hynod effeithiol wrth atal colitis a achosir gan DSS mewn llygod. Gyda'i gilydd, mae ein canfyddiadau'n datgelu rôl bosibl TFs wrth fodiwleiddio ymddygiad Imd, a allai fod yn ffactor allweddol yn eu cyfraniadau cadarnhaol at homeostasis berfeddol ac ymestyn oes.
CANLYNIADAU
Mae ychwanegiad dietegol i theaflavins yn ymestyn oes Drosophila
Er mwyn archwilio a yw theaflavins (TFs) yn effeithio ar heneiddio a hyd oes yn Drosophila, fe wnaethom godi pryfed w'118 benywaidd gyda bwydydd magu safonol a gafodd eu hategu â TFs 1mg/mL neu 2.5mg/ml a chynnal profion hyd oes fel y disgrifiwyd yn flaenorol (Ji et al .,2019). Ystyriwyd bod pryfed sy'n cael eu bwydo â diet wedi'i ategu â chyfaint cyfartal o doddydd TFs (H2O) yn rheolaethau. Fel y dangosir yn Ffigur 1A, roedd ychwanegiad dietegol o grynodiad cymharol isel o TFs (1 mg / mL) ychydig yn ymestyn hyd oes y pryf ffrwythau, a chafodd crynodiad uchel o TFs (2.5 mg / mL) effaith gadarnhaol iawn ar estyniad oes. Yn nodedig, arweiniodd y defnydd hirdymor o grynodiadau uchel o TFs (2.5 mg/mL) at tua 8 diwrnod o ddrychiad yn hyd oes cyfartalog pryfed benywaidd (Ffigur 1B), gan awgrymu rôl fuddiol TFsin wrth reoleiddio hirhoedledd yn Drosophila. Cafwyd canlyniadau tebyg pan wnaethom brofi effeithiau posibl TFs ychwanegol ar hyd oes pryfed gwryw w'*'''8 (Ffigurau S1A a S1B).
Ffigur 2. Mae Theaflavins yn atal camweithrediad perfedd sy'n cychwyn yn oed a dysbiosis microbiota yn Drosophila
(A a B) Profwyd colli cyfanrwydd berfeddol gan y Smurftest yn 10 diwrnod, 30 diwrnod, 40 diwrnod, a 50 diwrnod o oedolion benywaidd w18 oed. Dangoswyd enghreifftiau o'r rhai nad ydynt yn Smurf a Smurf yn (A). Dadansoddwyd canrannau Smurf mewn gwahanol grwpiau a nodwyd a'u dangos yn (B).
(C) Dadansoddwyd a dangoswyd y labordai bacteria a arbedwyd gan qPCR o'r genyn rRNA 16S mewn ffeiliau w18 benywaidd o wahanol grwpiau a nodwyd.
(DF) Dilyniannu'r genyn rRNA bacteriol 16S cymesurol ei berfformio. Dadansoddwyd a chyflwynwyd cyfrannau tacsa bacteriol (D), map gwres o'r prif dacsa microbaidd (F), a digonedd cymharol Gammaproteobacteria (F).
Ffigur 2. Parhad
(G a H) Roedd perfedd yn cael ei rannu o'r pryfed benywaidd a nodwyd a oedd yn cael eu bwydo â TFs 2.5 mg/ml neu heb TFs fel rheolaeth ar y 10 diwrnod a 40 diwrnod oed. Cafodd delweddau o sleidiau gwybed eu dal gan ficrosgopeg fflworoleuedd ar gyfer signalau GFP (G). Dangosir dadansoddiad ystadegol sy'n dangos canrannau celloedd GFP-positif yn (H).
(I) Casglwyd perfedd o'r pryfed benywaidd a nodwyd a bu'n destun profion gwrthimiwnedd gan ddefnyddio gwrthgyrff yn erbyn Histone 3(pH3) â ffosfforyleiddiad. Yn B, C, H, a, dadansoddir data gan brawf y Myfyriwr dwy gynffon ac fe'u dangosir fel modd ± SEM.NS, nid yw'n arwyddocaol,*p<><0.001. see="" also="" figure="">
Mae'n hysbys bod gan ETFs flas chwerw, ac mae'r ddau ddefnyddiwr fel arfer yn osgoi bwydydd chwerw gan gynnwys pryfed ffrwythau a mamaliaid (Yamazaki et al., 2014; Yang et al., 2018). Yna fe wnaethom geisio egluro a all TFs effeithio ar gymeriant bwyd Drosophila, oherwydd mae astudiaethau blaenorol wedi profi bod cyfyngiad dietegol yn arwain at oes estynedig mewn fertebratau ac infertebratau (Hudry et al., 2019; Kapahi et al., 2017; Moger-Reischer et al ., 2020). I wneud hyn, fe wnaethom berfformio'r assay caffi yn gyntaf, dull a ddefnyddir yn eang i fesur y gyfradd fwydo yn uniongyrchol ac yn gywir trwy ddefnyddio porthwr capilari sy'n cynnwys cyfrwng hylif, fel y disgrifiwyd yn flaenorol (Ja et al., 2007). Fel y dangosir yn Ffigurau 1C ac S1C, prin y newidiodd ychwanegiad dietegol TFs (1 mg/mL a 2.5 mg/mL, yn y drefn honno) y defnydd o fwyd o bryfed a brofwyd. I gadarnhau hyn ymhellach, fe wnaethom wedyn ddefnyddio'r Fluorescein fel olrheiniwr bwyd (Rera et al., 2012; Wang et al., 2005) a chynnal assay bwydo naturiol (Danilov et al., 2015). Fel y dangosir yn Ffigurau 1D ac S1D, ni wnaethom fethu ag arsylwi unrhyw gydberthynas rhwng ychwanegion TFs a lefelau cymeriant bwyd. Gyda'i gilydd, awgrymodd ein canlyniadau ei bod yn bosibl nad yw swyddogaethau buddiol TFs wrth ymestyn hyd oes oherwydd cyfyngiad dietegol yn Drosophila.
Mae TFs ychwanegol yn anhepgor ar gyfer effeithio ar gartrefostasis ynni Drosophila
Awgrymwyd bod polyffenolau te du yn cael effaith gadarnhaol ar atal gordewdra trwy atal treuliad lipid a sacarid, amsugno a chymeriant, gan leihau cymeriant calorïau (Cameron et al., 2008). Yna fe wnaethom geisio egluro a yw estyniad oes LDrosophila a reoleiddir gan TFs yn ganlyniad i newidiadau mewn amsugno maetholion a storio ynni. I wneud hyn, yn gyntaf fe wnaethom archwilio lefelau triacylglyceride (TAG), un o'r metabolion lipid a ganfuwyd amlaf (Tennessen et al., 2014), mewn pryfed benywaidd trwy gydol eu hoes fel y disgrifiwyd yn flaenorol (Fan et al., 2017).prynu cistancheFel y dangosir yn Ffigur 1E, prin yr effeithiodd triniaeth TFs ar gyflenwadau TAG cyffredinol ar wahanol adegau oedran. Pan wnaethom ganfod ymhellach gynnwys glycogen a meintioli carbohydradau cylchredol (glwcos a trehalose) gan y pecyn Hexokinase (Li et al., 2018; Ten-nessen et al., 2014), dangosodd y canlyniadau nad oedd unrhyw newidiadau amlwg rhwng samplau gyda neu heb driniaeth TFs (Ffigurau 1F-1H). O bwys, cafwyd canlyniadau cyson pan wnaethom archwilio ffenoteipiau metabolaidd gan ddefnyddio w118 gwrywaidd fel modelau anifeiliaid (Ffigurau S1E-S1H). Gyda'i gilydd, roedd y data hyn yn awgrymu bod ychwanegiad dietegol o TFs yn anhepgor ar gyfer rheoleiddio carbohydradau ac homeostasis egni trwy gydol oes Drosophila.
Fe wnaethom ymchwilio ymhellach i cineteg heneiddedd naturiol Drosophila o dan ymyrraeth TFs dietegol trwy berfformio profion geotaxis negyddol ailadroddol cyflym (RING) fel y disgrifiwyd yn flaenorol (Dilliane et al., 2017; Staats et al., 2018). Fel y dangosir yn Ffigurau 1l,1J, S1l, ac S1J, roedd mynegeion dringo o oedran (40 diwrnod) w1118 (benywod a gwrywod) mewn grwpiau atodol TFs wedi gwella'n sylweddol (cynnydd o bron i 12 y cant mewn merched a bron i 18 y cant drychiad mewn dynion ) gymharu â grwpiau rheoli, gan awgrymu y gallai TFs wella gweithgareddau dringo a locomotor Drosophila.
Mae Theaflavins yn atal gollyngiadau perfedd sy'n cychwyn yn oed a dysbiosis microbiota
Mae astudiaethau blaenorol wedi dangos bod gweithgareddau locomotor pryfed ffrwythau a hyd oes yn gysylltiedig iawn â chyflwr iechyd y gwesteiwr, megis rhyw, diet, oedran, a genoteip (Caruso et al., 2013; Heintz a Mair, 2014). Yn ddiweddar, mae sawl llinell o dystiolaeth wedi profi bod cadw homeostasis signalau Imd berfeddol yn lleddfu cyfanrwydd y perfedd trwy atal gor-ormodedd o ISC a chelloedd rhagflaenol a thrwy ohirio camweithrediad epithelial coluddol sy'n cychwyn yn oed, sydd yn ei dro yn cyfrannu'n gadarnhaol at iechyd yr organeb (Clark et al. , 2015; Guo et al., 2014). Yn Drosophila, mae hyd oes byrrach yn gysylltiedig yn agos â chamweithrediad y rhwystr epithelial berfeddol, ac mae datblygiad cyfanrwydd y rhwystr hwn yn ystod heneiddio yn arwain at estyniad oes (Clark et al., 2015; Guoet al., 2014; Jet al., 2019). Felly, ceisiwyd pennu a yw TFs yn newid cyfanrwydd y coluddyn trwy berfformio assay Smurf, dull a ddisgrifiwyd eisoes (Clark et al., 2015; Rera et al., 2011). Fel y dangosir yn Ffigur 2A, cyfeiriwyd at y pryfed ffrwythau a brofwyd lle'r oedd lliwiau glas wedi'u cyfyngu i'r llwybr treulio fel rhai nad ydynt yn Smurf (panel chwith yn Ffigur 2A). Os gwelwyd lliwiau glas
Ffigur 3. Parhad
(EG) Roedd perfedd yn cael ei ynysu o ffeiliau w1118 benywaidd a fwydwyd â TFs 2.5 mg/ml neu heb TFs fel gwaelodol ar 10 diwrnod, 30 diwrnod, 40 diwrnod, a 50 diwrnod oed, yn y drefn honno. Echdynnwyd cyfanswm RNA a bu'n destun dadansoddiadau aRT-PCR. Dadansoddwyd a dangoswyd lefelau mynegiant mRNA diptericin (F), attacin (F). a cecropin A1(G). Yn EG, caiff data eu dadansoddi gan brawf-t y Myfyriwr dwy gynffon a'u dangos fel modd ± SEM.NS, heb fod yn arwyddocaol, *p<><><0.001. see="" also="" figure="">
yn gollwng o'r coluddion i'r abdomen, cafodd y gwesteiwyr eu cyfrif fel Smurf (panel dde yn Ffigur 2A). Yn gyson â chanfyddiadau blaenorol (Clark et al.,2015), cynyddodd cyfrannau Smurf yn raddol wrth heneiddio (Ffigur 2B). Yn ddiddorol, gostyngwyd cyfrannau oedolion Smurf yn fawr yn y grwpiau a borthwyd gan TFs o'i gymharu â'r rheolaethau sy'n cyfateb i oedran yn y ddwy fenyw (o 8.2 y cant i 3.7 y cant , o 19.4 y cant i 15.6 y cant , ac o 35.4 y cant i 27.1 y cant ar gyfer grwpiau ). ar oedran o 30 diwrnod, 40 diwrnod, a 50 diwrnod, yn y drefn honno, Ffigur2B) ac oedolion gwrywaidd (o 2.7 y cant i 0.9 y cant , o 6.9 y cant i 0.9 y cant , ac o 8.3 y cant i 2.7 y cant yn 30 oed diwrnod, 40 diwrnod, a 50 diwrnod, yn y drefn honno, Ffigur S2A), sy'n nodi y gall TFs atal camweithrediad rhwystr berfeddol mewn pryfed ffrwythau oedrannus. O bwys, gwelsom ostyngiadau mwy yng nghanrannau Smurf ymhlith dynion (gostyngiad o bron i 65.8 y cant , 86.9 y cant , a 67.4 y cant yn 30 diwrnod, 40 diwrnod, a 50 diwrnod, yn y drefn honno) na'r rhai mewn oedran - menywod cyfatebol (gostyngiad o bron i 54.1 y cant, 19.5 y cant, a 23.3 y cant yn 30 diwrnod, 40 diwrnod, a 50 diwrnod, yn y drefn honno), sy'n awgrymu y gallai TFs chwarae rhan well wrth leihau gollyngiadau coluddol mewn pryfed gwrywaidd.
Mae astudiaethau blaenorol wedi awgrymu bod camweithrediad rhwystr berfeddol sy'n cychwyn yn oed yn aml yn cydberthyn â dysbiosis microbiota'r perfedd (Clark et al., 2015; Guo et al., 2014). Felly, archwiliwyd cyfansoddiad bacteriol cymesurol berfeddol ar ôl ychwanegiad TFs. Fe wnaethom ddefnyddio paent preimio cyffredinol yn gyntaf a chynnal arbrofion meintiol PCR i feintioli lefelau genynnau rRNA 16S bacteriol. Fel y dangosir yn Ffigur 2C, mewn toriadau oedran, dangosodd cyfanswm y boblogaeth bacteriol o grwpiau ymyrraeth TFs ostyngiad trawiadol (bron i 45 y cant -55 y cant) o'i gymharu â'r rheolaethau, sy'n awgrymu bod ychwanegiad TFs yn ôl pob tebyg yn atal ehangu microbiota yn ystod heneiddio. . Yna, gwnaethom berfformio metagenomeg i archwilio'n fanwl y newidiadau yn y gymuned ficrobaidd berfeddol a achosir gan ychwanegiad dietegol â TFs. Fel y dangosir yn Ffigurau 2D-2F, roedd cyfran y Gammaproteobacteria, y canfuwyd bod ei ehangiad yn gysylltiedig yn agos â methiant rhwystr berfeddol (Clark et al., 2015), yn amlwg wedi'i ostwng gan ychwanegiad TFs mewn coluddion oedrannus ( gostyngiad o bron i 7 y cant), sy'n awgrymu bod TFs yn cyfrannu'n gadarnhaol at homeostasis microbiota'r perfedd yn ystod heneiddio yn Drosophila.
Mae Theaflavins yn gwella homeostasis ymledol berfeddol yn Drosophila
We further examined the intestinal integrity of flies that were treated with or without TFs. First, we employed the widely-used P{Esg-Gal4}/P{Uasp-GFP};{Tub-Gal80*s}strain(referred to as esgts>GFP), lle cafodd y bôn-gelloedd berfeddol (ISCs) a'r celloedd epil eu labelu â GFP. Fel y dangosir yn Ffigurau2G a 2H, roedd nifer y celloedd GFP-positif yn y grwpiau ymyrraeth TFs yn 40 diwrnod oed (cyfrifwyd 20 perfedd) yn llawer llai (bron i 29.7 y cant) nag yn y rheolaethau sy'n cyfateb i oedran (bron i 47.6 y cant a Cafodd 19 perfedd eu cyfrif), sy'n awgrymu y gallai TFs lesteirio'r gormodedd o ISCs sy'n dechrau o ran oedran. Ar ben hynny, fe wnaethom gynnal arbrofion imiwno-staen gan ddefnyddio gwrthgyrff yn erbyn Phospho-Histone 3 (pH3), marciwr penodol ar gyfer celloedd mitotig mewn meinweoedd perfedd. Gwelsom lai o gelloedd pH3-positif yn y coluddion gan oedolion oed TFs-ychwanegol (y nifer cymedrig oedd 20.6) nag yn y rhai o'r rheolyddion (y nifer cymedrig oedd 39.5, Ffigur 2). Gyda'i gilydd, mae ein canlyniadau'n awgrymu bod ychwanegiad dietegol gyda TFs yn lleddfu homeostasis ymledol berfeddol ac yn atal dysplasia microbiota sy'n cychwyn yn oed, gan felly oedi heneiddio yn Drosophila.
Mae Theaflavins yn modiwleiddio signalau Imd berfeddol yn negyddol
Er mwyn archwilio'r mecanweithiau moleciwlaidd sylfaenol y mae TFs yn cyfrannu'n gadarnhaol atynt at homeostasis perfedd Drosophila, gwnaethom ddadansoddiad RNA-seq gan ddefnyddio samplau coluddol sy'n cyfateb i oedran gan oedolion benywaidd w1118 a gafodd eu trin â TFs neu hebddynt. Roedd dadansoddiadau darnau fesul cilobase fesul miliwn (FPKM) yn awgrymu bod y patrymau mynegiant genynnau cyffredinol yn debyg rhwng y ddau grŵp arbrofol (Ffigur 3A). Fodd bynnag, nododd dadansoddiad mynegiant gwahaniaethol pellach gyfanswm o 229 o enynnau wedi’u mynegi’n wahaniaethol, gyda 99 ohonynt wedi’u huwchreoleiddio a 126 wedi’u dadreoleiddio (Ffigur 3B). Yn ddiddorol, datgelodd dadansoddiad ontoleg genynnau o'r genynnau hyn fod y llwybr ymateb imiwn wedi'i newid yn fawr gan ychwanegiad dietegol gyda TFs (Ffigur 3C).
Yn Drosophila, profwyd bod llwybrau signalau imiwnedd cynhenid yn chwarae rhan flaenllaw wrth reoleiddio cartrefostasis y perfedd sy'n cychwyn yn oed a hirhoedledd (Clark et al, 2015; Guo et al, 2014). Yna fe wnaethom ganolbwyntio ar archwilio patrymau mynegiant y peptidau gwrthficrobaidd (AMPs) i lawr yr afon o'r signalau imiwnedd cynhenid. Fel y dangosir
Ffigur 4. Parhad
(D) Deorwyd proteinau Imd wedi'u Puro â chrynodiadau amrywiol o TFs (50 uM, 100 uM, a 200 uM, yn y drefn honno) ar dymheredd ystafell am 5 munud. Yna bu samplau yn destun dadansoddiad sbectrwm allyriadau fflworoleuedd gan ddefnyddio'r tonfeddi a nodwyd (cyffro ar 430 nm, allyriadau o 450 nm i 550 nm gyda lled hollt o 5 nm). Defnyddiwyd sampl heb TFs fel rheolaeth sylfaenol.
（E and F）Lysates of guts from NP11>Cafodd pryfed Myc-Imd eu paratoi a'u deor gyda TFs (100μM) ar dymheredd ystafell am 30 munud. Perfformiwyd profion SDD-AGE （panel uchaf yn E) a SDS-PAGE (panel isaf yn E) i ddadansoddi agregau protein Imd. Defnyddiwyd Tubulin fel y rheolydd llwytho.cistanchPerfformiwyd dadansoddiad densitometreg i feintioli cyddwysiadau Imd mewn gwahanol samplau, a dangoswyd y canlyniadau yn (F). (G) Cromatogram cynrychioliadol o sampl TFs.
（H ac I） Cafodd proteinau Baner-Imd Buro eu deor gyda TFs, TF1, TF2a, TF2b, neu TF3 (100 μM ar gyfer pob sampl) neu gyda chyfaint cyfartal o glustogi (rheolaeth) ar dymheredd ystafell am 30 munud fel y nodir. Yna bu samplau yn destun profion SDD-AGE (panel uchaf yn H) a SDS-PAGE (panel isaf yn H) i bennu patrymau agregu Imd. Perfformiwyd dadansoddiad densitometreg i fesur cyddwysiadau Imd mewn gwahanol samplau a'u dangos yn (). Yn C, F, ac I, mae data'n cael eu dadansoddi gan brawf y Myfyriwr dwy gynffon a'u dangos fel modd ± SEM.***p< 0.001.="" see="" also="" figure="">
yn Ffigur 3D, genynnau AMP a lywodraethir gan y llwybr diffyg imiwnedd (Imd), gan gynnwys diptericin A (DptA), dip-tericin B(DptB), attacin A(AttA), cecropin A1 (CecA1), cecropin A2(CecA2), a cecropin C (Cece), yn gostwng yn sylweddol (gan 39.4 y cant , 72.3 y cant , 10.5 y cant , { { 12 }} . 5 y cant , 99.8 y cant , a 36.1 y cant , yn y drefn honno ) mewn grwpiau TF-drin o gymharu â'r grwpiau rheoli . I gadarnhau ymhellach y canlyniadau a gafwyd o ddadansoddiad RNA-seq, fe wnaethom gynnal adwaith cadwynol trawsgrifio-polymerase meintiol meintiol (gRT-PCR) i feintioli lefelau mynegiant cymharol genynnau AMP cysylltiedig ag Imd mewn samplau perfedd Drosophila a gafwyd ar bedwar pwynt oedran gwahanol. gan gynnwys 10 diwrnod, 30 diwrnod, 40 diwrnod, a 50 diwrnod. Fel y dangosir yn Ffigurau 3E-3G, gostyngwyd lefelau mynegiant mRNA rhai genynnau, gan gynnwys diptericin, attacin, a cecropin A1, yn sylweddol (gan bron i 35.9 y cant -66.6 y cant) mewn TFs a driniwyd perfedd oed. Gyda'i gilydd, datgelodd ein data y gallai TFs gythruddo gweithrediad y llwybr signalau Imd yng nghelloedd perfedd Drosophila yn ystod heneiddio.
Mae Theaflavins yn anhepgor ar gyfer rheoleiddio trawsgrifiadol o'r llwybr Imd neu hollbresennol Imd
Fe wnaethom geisio archwilio’r cysylltiad rhwng TFs ac Imd a chynnal y assay cyseiniant plasmon arwyneb (SPR) fel y disgrifiwyd yn flaenorol (Lan et al., 2020). Fel y dangosir yn Ffigur 4A. Roedd TFs yn arddangos affinedd rhwymol cymedrol â phrotein Imd wedi'i buro ar gysonyn Kp amcangyfrifedig o 8.078 uM. Yna rydym yn tueddu i benderfynu sut mae TFs yn rheoli llwybr signalau Imd berfeddol. Yn seiliedig ar ganlyniadau dadansoddiad trawsgrifiad o ddata RNA-seq, canfuom mai prin y newidiwyd lefelau mynegiant y ffactorau rheoleiddiol allweddol yn llwybr signalau Imd, megis PGRP-LC, Imd, a Relish, gan driniaeth TFs (Ffigur S3A ). Fe wnaethom gasglu ymhellach samplau perfedd o bryfed a oedd yn destun ychwanegiad dietegol gyda neu heb TFs ar wahanol oedrannau a chynnal arbrofion qRT-PCR i ganfod patrymau mynegiant y genynnau hyn yn benodol. Fel y dangosir yn Ffigur S3B, roedd lefelau mRNA rhai genynnau, gan gynnwys effete, pylu, tak1, pgrp-Ica, uev1a, plygu, relish, imd, pgrp-sc2, tab2, ird5 Kenny, a diap2, yn debyg rhwng y grwpiau rheoli a grwpiau ymyrraeth TFs, sy'n awgrymu nad yw TFs yn ymwneud â rheoleiddio signalau Imd ar y lefel drawsgrifiadol.
Nesaf, fe wnaethom archwilio proffiliau hollbresennol Imd oherwydd bod astudiaethau blaenorol wedi awgrymu bod ubigui-tination of Imd yn hanfodol ar gyfer trawsgludo signal i lawr yr afon yn llwybr Imd (Myllymaki et al., 2014; Zhou et al., 2005). Yn gyntaf fe wnaethom berfformio assay shifft in vitro E1 a chanfod nad oes gan driniaeth gyda TFs unrhyw ddylanwad amlwg ar adweithiau ensymatig E1 ac ubiquitin i ffurfio E1/Ub cyfun (Ffigur S4A). Ar ben hynny, fe wnaethom drawsosod celloedd Drosophila S2 gyda phlasmidau yn mynegi Imd wedi'i dagio â Baner ynghyd ag Ub wedi'i dagio gan HA ac yna trin y celloedd â TFs neu hebddynt. Awgrymodd profion hollbresennol pellach mai prin yr effeithiodd ychwanegiad TFs ar lefelau Imd hollbresennol mewn celloedd diwylliedig (Ffigurau S4B ac S4C). Er mwyn pennu'r perthnasoedd rhwng TFs a ubiquitination Imd in vivo, defnyddiwyd y pryfyn trawsgenig P {NP1-Gal4}/P{Uasp-Myc-Imd};P{Tub-Gal80*} (cyfeirir ato fel NP1* s > Myc-Imd), lle'r oedd protein Imd wedi'i dagio â Myc wedi'i fynegi'n fawr mewn celloedd perfedd (Ffigur S4D). Dangosodd ein harbrofion hollbresennol fod ychwanegiad dietegol gyda TFs yn anhepgor ar gyfer modiwleiddio hollbresennol Imd mewn meinweoedd perfedd (Ffigurau S4D a S4E). Gyda'i gilydd, dangosodd ein canlyniadau fod TFs yn rheoli signalau Drosophila Imd yn negyddol trwy beidio ag effeithio ar batrwm hollbresennol Imd.
Mae Theaflavins yn atal cynulliad cyddwysiad Imd
Awgrymodd astudiaeth ddiweddar fod agregu Imd yn hanfodol ar gyfer actifadu genynnau i lawr yr afon yn y llwybr Imd (Kleino et al., 2017). Yna ceisiasom archwilio a yw TFs yn rheoleiddio'r broses o
Ffigur 5. Parhad
(F a G) Benyw w18 (cyfeirir ato fel imd plus / plus ), mutants heterosygaidd a homosygaidd imd (y cyfeirir atynt fel imd plus /- ac imd-/-, yn y drefn honno) yn cael eu magu yn fwydydd safonol Drosophila (y cyfeirir atynt fel Basal) neu atodiad dietegol gyda 2.5 mg/mL (cyfeirir ato fel TFs) ac yna yn destun assay hyd oes Cromlin goroesi (F) a hirhoedledd cymedrig (G) eu dadansoddi a'u dangos.
Yn ac F, defnyddiwyd y prawf Log Rank ar gyfer dadansoddiad ystadegol. Yn BE, a, defnyddiwyd y prawf-t Myfyriwr dwy gynffon ar gyfer dadansoddiad ystadegol, a chaiff y data eu defnyddio fel modd ± SEM. NS, ddim yn arwyddocaol, *t<0.05, **p="" <="" 0.01,=""><0.001. see="" also="" figure="">
Ffurfiant cyfanredol imd. Yn gyntaf, fe wnaethon ni buro proteinau Imd wedi'u tagio â Myc o gelloedd S2 diwylliedig a deor y proteinau â chrynodiadau gwahanol o TFs (Ffigur 4B). Yn ddiddorol, canfuom fod TFs yn atal agregu Imd yn sylweddol (gostyngiad o 81.7 y cant -89.7 y cant , Ffigurau 4B a 4C), fel yr awgrymwyd gan ein profion electrofforesis gel agarose glanedydd lled-ddannaturing (SDD-AGE). I gadarnhau'r canfyddiad hwn, gwnaethom berfformio profion rhwymo thioflavin-T ymhellach a chael canlyniadau cyson (Ffigur 4D). Yn olaf, fe wnaethom godi pryfed trawsenynnol NP1ts > Myc-Imd a oedd yn destun ychwanegiad dietegol gyda TFs neu hebddynt a chasglu samplau perfedd gan oedolion oedrannus. Awgrymodd yr arbrofion SDD-AGE fod agregu Imd yn cael ei is-reoleiddio'n fawr gan TFs mewn celloedd berfeddol (gostyngiad o 16.7 y cant -22 y cant, Ffigurau 4E, a 4F).
Er mwyn pennu sut mae TFs yn cyfrannu at reoli cynulliad cyddwysiad Imd, gwnaethom ddarostwng TFs i HPLCanal-ysis a chanfod eu bod yn bennaf yn cynnwys pedwar math o fonomerau (Ffigur 4G), sef, theaflavin (TF1), theaflavin 3-O-gallate ( TF2a), theaflavin 3'-O-gallate (TF2b), a theaflavin 3,3'-di-O-gallate (TF3), a oedd yn gyson ag adroddiadau blaenorol (Li et al., 2013; Takemoto a Takemoto, 2018) . Yna, gwnaethom ddeor pob un o'r cemegau hyn ag Imdprotein wedi'i buro a pherfformio arbrofion SDD-AGE. Fel y dangosir yn Ffigurau 4H a 4l, arweiniodd triniaeth yr holl TFmonomers hyn at ostyngiad amlwg (59.5 y cant ,60.9 y cant ,58.4 y cant .58.2 y cant . a 55.8 y cant ar gyfer TFs, TF1, TF2a, TF2b, a TF3, yn y drefn honno) yn y lefelau cyfun Imd. Gyda'i gilydd, roedd ein canlyniadau'n awgrymu bod TFs yn rheoleiddio llwybr signalau Drosophila Imd yn negyddol yn ôl pob tebyg trwy reoli ymddygiad cyddwysiadau Imd.
Mae Theaflavins yn ymestyn oes Drosophila mewn modd sy'n ddibynnol ar Imd
To examine whether TFs prolong Drosophila lifespan depending on their regulatory role in Imd, we specifically knocked down Imd in gut tissues using the transgenic flies P{NP1-gal4)PITub-gal80*}/P{Uasp-imd-IR(KK)} (referred to as Imd RNAi). As shown in Figures 5A and 5B, dietary supplementation of TFs extended the lifespan of controls (elevation of nearly 7.2 days in the mean lifespan), whereas prevention of Imd expression in guts apparently reversed the lifespan extension caused by TFs. Consistent results were obtained when we utilized male Imd RNAi and control flies to perform lifespan assays (Figures S5A and S5B). Further qRT-PCR assays showed that the mRNA expression levels of AMP genes at ages of 10 days, 30 days, 40 days, and 50 days, including diptericin, attacin, and cecropin A1.hardly changed in the gut tissues of Imd RNAi flies(Figures 5C-5E), whereas additional TFs caused reductions of 31%-72.3% in mRNA abundances of these genes in samples from control groups. To confirm these results from Imd RNAi flies, we first performed lifespan assays using w18(control, referred to as imd+/+), imd' heterozygous (referred to as imd+/-), and homozygous(referred as imd-/-)mutant flies. We found that TFs addition extended lifespan and increased mean life longevity of imd+/-flies (elevation of nearly 6.2 days, Figures 5F and 5G). However, this lifespan extension effect by TFs was almost abolished in imd-/-flies (Figures 5F and 5G). Next, we performed lifespan assays utilizing Relish RNAi(NP1's>Relish RNAi and control(NP1ts>plis )clêr. oherwydd Relish yw'r ffactor trawsgrifio allweddol sy'n gyfrifol am fynegiadau genynnau AMP Imd-i lawr yr afon (Myllymaki et al., 2014). Fel y dangosir yn Fiqures S5C a S5D. roedd ychwanegiad dietegol TFs yn ymestyn hirhoedledd pryfed rheoli yn sylweddol, ac ataliwyd yr estyniad hwn mewn oes yn sylweddol mewn pryfed Relish RNAi. Gyda'i gilydd, nododd ein data fod ychwanegiad dietegol TFs yn cyfrannu'n gadarnhaol at hyd oes Drosophila yn dibynnu ar signalau Imd berfeddol.
Er mwyn gweld a yw'r estyniad oes gan TFstill yn digwydd mewn cefndir asenig, gwnaethom gynnal profion oes gan ddefnyddio benywod w1118 o dan amodau asenig. Fel y dangosir yn Ffigurau S5E a S5F, prin yr effeithiodd ychwanegu crynodiadau gwahanol o TFs (1 mg/mL a 2.5 mg/mL) ar gymarebau marwolaethau a hyd oes cymedrig yn w18 oedolion. Oherwydd y gall amodau magu asenig atal microbiota helaeth i raddau helaeth, gan gyfyngu ar signalau Imd mewn toriadau (Clarke al., 2015), mae ein data yn awgrymu y gallai TFs ymestyn oes Drosophila fod trwy fodiwleiddio signalau imiwnedd cynhenid a reoleiddir gan ficrobiota perfedd.
Ffigur 6. Mae Theaflavins yn lleddfu colitis a achosir gan DSS mewn llygod CD-1
(A) Nid oedd triniaeth TFs yn effeithio ar y defnydd o ddŵr mewn grwpiau amrywiol o lygod CD-1.
(BD) Fe wnaeth gweinyddu gavage o grynodiadau amrywiol o TFs (1 mg/mL, 2.5 mg/mL, a 5mg/mL, yn y drefn honno) wella byrhau'r colon ac ehangu'r ddueg a achosir gan DSS mewn llygod CD-1. Dangoswyd delweddau cynrychioliadol (B) a dadansoddiadau ystadegol o'r colon (C) a'r ddueg (D). (E) Roedd gweinyddu crynodiadau amrywiol o TFs (1 mg/mL, 2.5 mg/ml, a 5mg/mL, yn y drefn honno) yn atal gollyngiadau perfedd a achosir gan DSS mewn llygod CD-1. (F a G) Casglwyd colon o grwpiau o lygod a nodwyd. Echdynnwyd cyfanswm RNA a bu'n destun profion qRT-PCR i ganfod lefelau mynegiant mRNA TNFa(F) ac IL-6 (G).
(HL) Casglwyd colonau o grwpiau amrywiol o lygod yn hydredol a buont yn destun profion staenio AU. Archwiliwyd samplau trwy ficrosgopeg, a chafwyd a dangoswyd delweddau cynrychioliadol o'r samplau a nodwyd （HL）. Bariau graddfa, 40 μm. (MQ') Delweddau SEM yn dangos microtrichomes colonau o wahanol samplau a nodwyd. Bariau graddfa, 50 um (MQ) a 4 um (M'-Q').
Yn CG, dadansoddir data gan brawf y Myfyriwr dwy gynffon a'i ddangos fel modd ± SEM.NS, nid yw'n arwyddocaol, *p<><><0.001. see="" also="" figure="">
Mae Theaflavins yn lleddfu colitis a achosir gan DSS mewn llygod CD-1
Er mwyn ymchwilio ymhellach i rôl bosibl TFs wrth gynnal homeostasis berfeddol mewn mamaliaid, defnyddiwyd llygod CD-1 i gymell colitis gan sodiwm dextran sylffad (DSS). Rhoddwyd crynodiadau gwahanol o TFs (1 g / L, 2.5 g / L, neu 5 a / L) neu ddŵr fel rheolydd am bedair wythnos i lygod, ac yna triniaeth gyda 2 y cant DSS mewn dŵr yfed am 7 diwrnod. Er mwyn gweld a yw TFs yn effeithio ar faint o DSS sy'n yfed ar draws gwahanol grwpiau o lygod, buom yn monitro yfed llygod bob dydd. Fel y dangosir yn Fiqure6A, mae triniaeth TFs yn anhepgor i effeithio ar y defnydd o ddiod mewn llygod colitis a achosir gan DSS, roedd llygod a gafodd eu trin gan DSS yn cyflwyno syndrom colitis gyda dolur rhydd a/neu hematochezia, a gafodd eu hatal gan driniaeth TFs sy'n dibynnu ar ddos (Ffigurau S6A-S6E).cistanche AwstraliaAt hynny, fe wnaeth ymyrraeth â TFs achub y gostyngiad yn hyd y colon a achosir gan DSS a lleddfu ehangiad y ddueg (Ffigurau 6B-6D).
Yna defnyddiwyd dextran{0}}FITC (FITC-DX) i archwilio swyddogaeth rhwystr berfeddol y llygod hyn. Fel y dangosir yn Ffigur 6E, dangosodd llygod o'r grwpiau a driniwyd gan DSS grynodiad uchel o FITC-DX mewn samplau gwaed, gan nodi gollyngiadau perfedd yn yr anifeiliaid hyn, Fodd bynnag, roedd ymyrraeth â TFs yn atal yn sylweddol gludo FITC-DX o organau treulio i mewn i'r system gylchredol (gostyngiad o 56.1 y cant -77.5 y cant , Ffigur 6E). Yn nodedig, ni wnaeth gweinyddu TFs newid athreiddedd perfedd llygod o dan amodau arferol (Ffigur S6F). Oherwydd bod llid yn chwarae rhan ganolog yn natblygiad colitis model llygoden, fe wnaethom berfformio arbrofion qRT-PCR ymhellach, gan ddangos bod triniaeth TFs yn is-reoleiddio mynegiadau IL-6 a TNF yn sylweddol yng ngholuddion llygod a driniwyd gan DSS (Ffigurau 6F a 6G).
Er mwyn dadansoddi'r newidiadau patholegol yn y colon ymhellach, gwnaethom gynnal profion staenio hematocsilin-eosin (AU). Fel y dangosir yn Ffigurau6H-6L a S6G-S6J, cafodd y difrod epithelial difrifol a achoswyd gan DSS ei leddfu'n sylweddol gan driniaeth TFs mewn modd a oedd yn dibynnu ar ddos. Darparodd sganio delweddu microsgopeg electron o'r samplau berfeddol hyn ganlyniadau cyson ymhellach (Ffigurau 6M-6Q' a S6K-S6N'). Gyda'i gilydd, nododd ein canfyddiadau fod TFs yn chwarae rhan fuddiol wrth amddiffyn swyddogaeth rhwystr berfeddol mewn pryfed a mamaliaid.
TRAFODAETH
Yn yr astudiaeth hon, fe wnaethom ymchwilio i swyddogaethau ffisiolegol TFs wrth fodiwleiddio homeostasis berfeddol a hirhoedledd a'r mecanweithiau moleciwlaidd sylfaenol. Fe wnaethom ddangos bod ychwanegiad dietegol gyda TFs yn cyfrannu'n gadarnhaol at atal dysbiosis y microbiota berfeddol rhag dechrau oed ac oedi camweithrediad epithelial y perfedd, gan felly ymestyn oes Drosophila. Datgelodd ein hastudiaethau mecanistig in vitro ac in vivo fod TFs yn debygol o chwarae rhan negyddol wrth reoli llwybr signalau Imd trwy rwystro Imd rhag cyfuno. Ar ben hynny, canfuom y gall colitis a achosir gan DSS gael ei liniaru'n effeithlon trwy ychwanegiad TFs mewn llygod CD-1. Mae ein canlyniadau yn cefnogi'r syniad bod TFs yn cyfrannu'n fanteisiol at homeostasis berfeddol mewn infertebratau a fertebratau.
Mae ychwanegiad dietegol gyda theaflavins yn ymestyn oes Drosophila
Mae bwyta te yn boblogaidd ledled y byd ac yn ail yn unig i'r defnydd o ddŵr (Rothenberg a Zhang, 2019). Mae astudiaethau niferus wedi canolbwyntio ar y swyddogaethau ffisiolegol yn aml trwy ddulliau arbrofol a chlinigol (Cameron et al., 2008; Niu et al., 2013; Peng et al., 2009; Rothenberg a Zhang.2019; Spindleret al., 2013; Takemoto a Takemoto, 2018; Unno et al., 2020; Zhou et al., 2020. Dangoswyd yn helaeth bod te o fudd i iechyd trwy ostwng lefelau lipid a thrwy effeithiau gwrth-ordewdra, a'r prif gyfansoddion swyddogaethol mewn te yw catechins, yn enwedig epigallocatechin gallate (EGCG)(Abbas a Wink, 2009; Modernelli et al., 2015; Niu et al., 2013; Wagner et al., 2015; Xiong et al., 2018) Mae astudiaethau blaenorol hefyd wedi nodi bod te gwyrdd a gall te du gynyddu rhychwant iechyd a hyd oes pryfed ffrwythau (Safle al., 2011; Wagner et al., 2015), mwydod (Fei et al., 2017; Xiong et al., 2018), a llygod mawr (Imran et al. ., 2018; Niu etal.2013) a'r prif fecanwaith rheoleiddio yw atal straen ocsideiddiol yn effeithiol gan EGCG trwy fodiwleiddio signalau ROS.budd-daliadau cistanche,Fodd bynnag, mae p'un a yw TFs, fel y cyfansoddion "aur" nodweddiadol mewn te du, yn chwarae rhan wrth reoleiddio heneiddio a hyd oes yn parhau i fod yn anhysbys i raddau helaeth. Mae'r astudiaeth hon yn darparu tystiolaeth gymhellol sy'n nodi bod ymyrraeth TFs yn anhepgor ar gyfer effeithio ar gymeriant bwyd, ac mae'r defnydd hirdymor o TFs trwy'r diet yn ymestyn oes pryfed ffrwythau gwrywaidd a benywaidd yn sylweddol. Mae'r canfyddiadau hyn yn darparu canllawiau ar gyfer astudiaethau pellach ar swyddogaethau TFs mewn hirhoedledd mamaliaid.
Mae Theaflavins yn gwella dysbiosis microbiota sy'n cychwyn ar oed ac yn hyrwyddo homeostasis berfeddol Mae anghydbwysedd cynyddol homeostasis toreithiog a gallu adfywiol yn nodwedd o heneiddio a chlefydau sy'n cychwyn yn oed (Clark et al., 2015; Heintz a Mair, 2014; Maynard a Weinkove, 2018; Rera; et al. 2012). Mae llid cronig yn gysylltiedig â cholli homeostasis a mwy o achosion o ganser mewn organebau sy'n heneiddio (Bartke et al., 2019; Kapahi et al., 2017; Xiao et al., 2020). Mae hyn yn arbennig o arwyddocaol mewn epithelia rhwystr fel yr epitheliwm berfeddol (Guo et al., 2014; Maynard a Weinkove, 2018). Gyda model ar gyfer datblygu dysplasia sy'n gysylltiedig ag oedran yn y coluddyn sy'n heneiddio, gwnaethom ddangos y gallai gwella rhyngweithiadau cymesurol gwesteiwr mewn epithelia rhwystr heneiddio hybu iechyd a hyd oes. Fe wnaethom ddefnyddio nifer o ddulliau anfewnwthiol i assay swyddogaeth berfeddol a deinameg microbiota yn ystod heneiddio. Yn gyntaf, nododd assay Smurf rôl gadarnhaol TFs wrth reoleiddio camweithrediad rhwystr epithelial yn ystod heneiddio. Yna, datgelodd yr assay immunostaining gan ddefnyddio nifer o bryfed trawsgenig fod TFs wedi gohirio gor-ymlediad ISCs a throsiant celloedd gwahaniaethol. Yn olaf, roedd dilyniannu'r microbiome yn awgrymu bod TFs yn is-reoleiddio ehangiad cynnar-oed y microflora coluddol. Roedd y canlyniadau hyn yn dangos yn gryf bod TFs yn chwarae rhan allweddol wrth ohirio proses heneiddio'r gwesteiwr trwy gynnal homeostasis perfedd.
Mae Theaflavins yn lleddfu ymatebion imiwn gormodol yn y perfedd trwy reoleiddio signalau Imd yn negyddol
Awgrymwyd bod yn rhaid cynnal y cydbwysedd cain rhwng swyddogaeth imiwnedd y perfedd a microbiota er mwyn sicrhau cartrefostasis hirdymor epithelia rhwystr (Guo et al., 2014; Maynard a Weinkove, 2018). Mae astudiaethau blaenorol hefyd wedi dangos bod llid gormodol cronig yn y perfedd yn gysylltiedig â chamweithrediad sy'n gysylltiedig ag oedran mewn epithelia rhwystr a'i fod yn nodwedd o heneiddio (Clark et al., 2015; Guo et al., 2014; Ji et al., 2019) . Felly, mae cynnal poblogaeth gyffredin iach trwy gadw homeostasis imiwnedd cynhenid mewn epithelia o'r fath yn ddull addawol o hybu iechyd a hirhoedledd (Bonfini et al., 2016; Broderick, 2016; Clark et al., 2015). Archwilio'r mecanweithiau moleciwlaidd trwy y mae TFs yn gohirio heneiddio, gwnaethom ddadansoddiad RNA-seq gan ddefnyddio coluddion wedi'i ddyrannu gyda thriniaeth TFs neu hebddo. Roedd ein data'n awgrymu bod y grŵp o enynnau a fynegwyd yn uchel yng ngholuddion pryfed ffrwythau rheoli o'i gymharu â rhai anifeiliaid sy'n cael eu trin â TFs wedi'u cyfoethogi â genynnau a ddosbarthwyd fel genynnau "ymateb imiwn". Datgelodd dadansoddiad bio-wybodus pellach a phrofion cael-PCR fod mynegiant genynnau AMP cysylltiedig â Imd wedi'i rwystro'n ddramatig gan ychwanegiad dietegol TFs. Cadarnhaodd canlyniadau arbrofion llygoden y CD a oedd yn defnyddio DSS i ysgogi ymatebion imiwn annormal yn y coluddion ymhellach y syniad bod TFs yn gweithredu fel amddiffynwyr rhag llid y coluddion.
Mae Theaflavins yn atal signalau trwy bennu cydosodiad amyloid Imd
Sut mae TFs yn rheoleiddio llwybr signalau Imd yn negyddol? Yn seiliedig ar ganlyniadau dadansoddiad trawsgrifiad, canfuom fod TFs yn anhepgor ar gyfer rheoleiddio trawsgrifiadol o'r ffactorau allweddol yn llwybr signalau Imd. O ddiddordeb, gwelsom affinedd rhwymol ymddangosiadol TFs â phrotein Imd wedi'i buro trwy assay SPR, a oedd yn awgrymu tebygolrwydd y gallai TFs chwarae rhan wrth reoli ymddygiad protein Imd neu ei broses addasu ôl-gyfieithu. Mae astudiaethau blaenorol wedi amlygu rôl ganolog hollbresennol wrth drosglwyddo signal Imd (Kleino a Silverman, 2014; Myllymaki et al., 2014), ac atal hollbresennol Imd yn arwain at gau signalau Imd yn sylweddol (Myllymaki et al., 2014; Thevenon et al., 2009). Fodd bynnag, dangosodd ein profion in vitro ac in vivoubiquitination mai prin y mae TFs yn effeithio ar batrwm hollbresennol Imd. Mae astudiaeth ddiweddar wedi dangos bod angen ffurfio amyloid ar gyfer actifadu llwybr Drosophila Imd ar ôl adnabod peptidoglycanau bacteriol (Kleino et al., 2017). Yn ddiddorol, roedd ein profion SDD-AGE a ThTbinding yn awgrymu bod TFs yn atal cyfuniad Imd. Mae'n debyg bod atal agregu Imd trwy ddymchwel neu dreiglo Imd mewn celloedd perfedd wedi gwrthdroi effeithiau buddiol TFs ar ymestyn oes. I gadarnhau ein canfyddiad ymhellach, byddai'n ddiddorol archwilio a yw TFs yn ddim mwy ymarferol i ymestyn hyd oes mewn taflenni ffrwythau pan fydd motiff RHIM cryptig (cRHIM, asidau amino o'r 118fed i'r 121h) o Imd yn cael ei ddinistrio'n benodol, yn seiliedig ar y canfyddiad bod y drosedd yn yr Imd yn hanfodol ar gyfer ei agregu a ffurfio amyloid (Kleino et al., 2017). Serch hynny, mae ein hastudiaeth yn amlygu rôl ganolog TFs wrth reoli homeostasis berfeddol a'r broses heneiddio, efallai trwy fodiwleiddio cyfuniad Imd. Dylai astudiaethau yn y dyfodol ganolbwyntio ar archwilio pa weddillion neu ranbarthau o Imd sydd wedi'u rhwymo gan TFs a sut mae'r rhwymiad hwn yn arwain at atal anwedd Imd. At hynny, nododd ein canfyddiadau yn y system famalaidd y gallai TFs amddiffyn y colon yn effeithiol rhag llid a achosir gan y cemegyn gwenwynig alldarddol DSS, gan awgrymu rôl reoleiddiol warchodedig TFs wrth gynnal homeostasis berfeddol. Mae'n werth ymchwilio i weld a yw TFs yn chwarae rhan mewn llywodraethu cydosod protein mewn meinweoedd mamalaidd.
Mae'r erthygl hon wedi'i thynnu o zhongwenxie@ahau.edu.cn
