Pennu Echinacoside mewn Dwr Detholiad O Cistanche Herba Gan HPLC

Crynodeb:

Amcan Sefydlwyd dull HPLC ar gyfer ypenderfynu ar echinacosideyn yechdynnu dŵr o Cistanchellysieuyn.

Dulliau Pennwyd Echinacoside gan HPLC. Perfformiwyd y gwahaniad ar golofn Inertsil ODS-SP C18 gyda chyfnod symudol yn cynnwys acetonitrile(A) a 0.4% hydoddiant asid ffosfforig(B), yn ôl elution graddiant. Gosodwyd y donfedd canfod ar 333 nm, ac roedd tymheredd y golofn yn 30 gradd . Cyfradd y llif oedd 1.0 mL·min-1 a chyfaint y pigiad oedd 10 μL. Canlyniadau Roedd perthynas llinol echinacoside o fewn yr ystod crynodiad o 44.939 7-539.276 4 ug ·mL- 1 yn dda(r=0.999 8). Yr adferiadau oedd 94.59%-105.31% (RSD= 2.93%,n= 9). Cynnwys echinacoside mewn echdynion dŵr o Cistanche herba oedd 15.527,7.347,12.267 mg·g-1. Casgliad Mae'r dull HPLC sefydledig gydag ailadroddadwyedd da yn gywir, yn syml ac yn ymarferol. Mae'n addas ar gyfer pennu echinacoside yn y darn dŵr o Cistanche herba.

Geiriau allweddol:HPLC;dyfyniad dŵr o Cistanche herba; Echinacoside; penderfynu ar gynnwys

Mae Cistanche deserticola yn feddyginiaeth Tsieineaidd draddodiadol tonic a ddefnyddir yn gyffredin mewn ymarfer clinigol ac fe'i gelwir yn "ginseng anialwch" [1]. Y Cistanche deserticola a gofnodwyd yn rhifyn 2015 o'r Pharmacopoeia Tsieineaidd yw'r coesyn cigog sych gyda dail cennog Cistanche deserticola YC Ma neu Cistanche tubulosa (Schenk) Wight. Mae'n gynnes, melys a hallt, ac yn dychwelyd i'r arennau a meridians coluddyn mawr. Mae ganddo effeithiau maethlon yang aren, ailgyflenwi hanfod a gwaed, a lleithio'r coluddion a'r carthyddion [2]. "Mae Materia Medica Shen Nong," yn dweud y gall "tonify y canol, maethu'r pum organau mewnol, cryfhau yin a meithrin hanfod". Mae Cistanche deserticola yn bennaf yn cynnwys glycosidau ffenylethanoid, iridoidau a'u glycosidau, lignans a'u glycosidau, polysacaridau, cyfansoddion ester ac alcaloidau [3]. Glycosidau ffenylethanol yw prif gynhwysion gweithredol Cistanche deserticola. Yn eu plith, mae echinacoside a verbascoside wedi'u rhestru yn Cistanche deserticola yn y Pharmacopoeia Tsieineaidd.

Cydrannau dangosol ar gyfer adnabod a phennu cynnwys. Mae astudiaethau ffarmacolegol [4] yn dangos bod gan Cistanche deserticola effeithiau ffarmacolegol amrywiol megis carthydd, amddiffyn yr afu, gwrth-osteoporosis, gwrthocsidiol, gwrth-heneiddio, a gwrth-blinder. Gall dyfyniad dyfrllyd Cistanche deserticola hyrwyddo mynegiant genyn protein morphogenetic asgwrn 2 mewn osteoblasts llygod mawr, phosphatase asid tartrate-gwrthsefyll, osteocalcin yn y serwm o lygod ovariectomized, a Smad1, genynnau mad5, trawsnewid ffactor twf-, ac ati yn y mêr esgyrn. , yn cael effeithiau gwrth-osteoporosis [5-6].

Gall Echinacea hyrwyddo lledaeniad osteoblastau a hyrwyddo gwahaniaethu bôn-gelloedd mesenchymal mêr esgyrn sydd wedi'u meithrin yn vitro yn osteoblasts [7-9]. Yn ystod y blynyddoedd diwethaf, bu llawer o adroddiadau ymchwil ar bennu cynnwys echinacoside a verbascoside yn dyfyniad ethanol Cistanche deserticola a'i baratoadau cyfansawdd [10-12], ond ychydig o adroddiadau sydd ar bennu cynnwys cydrannau mynegai yn Cistanche deserticola dyfyniad dyfrllyd. Yn yr astudiaeth hon, defnyddiwyd cromatograffaeth hylif perfformiad uchel (HPLC) i bennu cynnwys echinaceaside yn y darn dyfrllyd o Cistanche deserticola.

1 deunydd

1.1 Offerynau

LC{0}}AT cromatograffaeth hylif perfformiad uchel, SPD{2}}Synhwyrydd, SIL-20Awtosampler, CTO-10popty colofn ASvp, gweithfan cromatograffaeth hylif hydoddiant LC, Shimadzu Corporation of Japan; Cydbwysedd dadansoddol electronig MES125P-OCE-DU, Cwmni Sartorius, yr Almaen; SHZ-D (Ⅲ) pwmp gwactod aml-bwrpas sy'n cylchredeg dŵr, Henan Yuhua Instrument Co, Ltd; System cylchrediad oeri anweddydd cylchdro RC2B SO25, anweddydd cylchdro RV 10 D S96, Cwmni IKA, yr Almaen; DK-S26

baddon dŵr tymheredd cyson trydan, Shanghai Jinghong Arbrofol Offer Co, Ltd; Peiriant dŵr ultrapure cyfres UPR, Sichuan Youpu Ultrapure Technology Co, Ltd.

1.2 Deunyddiau meddyginiaethol ac adweithyddion

Prynwyd deunydd meddyginiaethol Cistanche deserticola gan Guangzhou Lingnan Traditional Chinese Medicine Pieces Co., Ltd., rhif swp: 1801001, 1806001, 181001. Nododd Tu Xingming, y prif fferyllydd Tsieineaidd traddodiadol yn y Trydydd Ysbyty Cysylltiedig o Brifysgol Meddygaeth Tsieineaidd Guangzhou, ei fel y coesyn cigog sych gyda dail cennog o Cistanche deserticola YCMa. Mae'r sampl yn cael ei storio yn Ystafell Profi Cyffuriau Trydydd Ysbyty Cysylltiedig Prifysgol Meddygaeth Tsieineaidd Guangzhou; Sylwedd cyfeirio Echinacea Glycoside, cynnwys 89.7%, Sefydliad Rheoli Bwyd a Chyffuriau Tsieina, rhif swp: 111670-

201706; mae acetonitrile yn gromatograffig bur (Merck, yr Almaen); methanol ac asid ffosfforig yn ddadansoddol pur (Tianjin Fuyu Fine Chemical Co, Ltd.); mae dŵr yn ddŵr pur iawn.

2 Dulliau a chanlyniadau

2.1 Paratoi echdyniad dŵr o Cistanche deserticola

Cymerwch y powdr bras o ddeunydd meddyginiaethol Cistanche deserticola, ychwanegwch 10 gwaith faint o ddŵr distyll, gwres ac adlif i'w echdynnu ddwywaith, 1 awr bob tro, hidlo, cyfuno'r hidlif, a chanolbwyntio'r hidlif ag anweddydd cylchdro. i gynnwys cyffur crai o 0.100 g·mL-1, a'i storio ar 4 gradd i'w ddefnyddio'n ddiweddarach.

2.2 Amodau cromatograffig ac addasrwydd systemau

Colofn cromatograffig: colofn Inertsil ODS SP C18 (150 mm × 4.6 mm, 5 μm); cyfnod symudol: acetonitrile (A)-0.4% hydoddiant asid ffosfforig (B), elution graddiant: 0 ~ 5 mun, 17%

A; 5 ~ 25 mun, 20 % A; 25 ~ 30 mun, 17% A; tonfedd canfod: 333 nm; tymheredd colofn: 30 gradd; cyfradd llif: 1.0 mL·mun-1;

Cyfaint chwistrellu: 10 μL. O dan yr amodau cromatograffig hyn, mae'r gwahaniad rhwng echinacoside a chopaon cydran cyfagos yn fwy na 1.5, ac ni ddylai nifer y platiau damcaniaethol sy'n seiliedig ar uchafbwynt echinaceaside fod yn llai na 4,000. Dangosir y cromatogram yn Ffigur 1.

2.3 Paratoi datrysiad

2.3.1 Datrysiad sylwedd cyfeirio Pwyswch swm priodol o sylwedd cyfeirio echinacoside, ei bwyso'n gywir, ei roi mewn fflasg gyfeintiol 10 mL, ychwanegu methanol i'w doddi, a pharatoi datrysiad sylwedd cyfeirio sy'n cynnwys 898.794 ug o echinaceaside fesul ml, 4 gradd Arbedwch i'w ddefnyddio'n ddiweddarach.

2.3.2 Ateb prawf

Mesurwch yn fanwl gywir 2.0 mL o echdynnyn dyfrllyd Cistanche deserticola, anweddwch i sychder mewn baddon dŵr, ychwanegu methanol i hydoddi, gwanhau i gyfaint mewn fflasg folwmetrig 10 mL, ysgwyd yn dda, a hidlo gyda pilen micromandyllog 0.22 μm i'w chael.

2.4 Ymchwilio i berthynas llinol

Mesur yn fanwl gywir {{0}}.25, 0.50, 1.00, 2.00, 2.50, 3.00 mL o'r hydoddiant cyfeirio o dan eitem 2.3.1, ei roi mewn fflasg gyfeintiol 5 mL, ychwanegu methanol i wneud hyd at gyfaint, a'i ysgwyd yn dda i gael crynodiad graddiant o 44.{{17} }, 89.879 4. 179.758 8, 359.517 6, 449.397 0, 539.276 4 ug·mL-1 datrysiad cyfeirio, wedi'i hidlo drwy bilen microfandyllog 0.22 μm. Mesurwch yn ôl yr amodau cromatograffig o dan 2.2, a chofnodwch yr ardal brig. Perfformiwch atchweliad llinol gyda chrynodiad màs y sylwedd cyfeiriol fel yr abscissa (X, ug·mL-1) a'r arwynebedd brig fel y gyfesuryn (Y), a cheir yr hafaliad atchweliad: Y=13 185 .0X-32 273.0, r=0.999 8. Mae'r canlyniadau'n dangos bod gan echinacea berthynas llinol dda o fewn yr ystod crynodiad o 44.939 7 ~ 539.276 4 ug·mL-1.

2.5 Prawf manwl

Cymerwch 539.276 4 ug ·mL- 1 datrysiad cyfeirio, chwistrellwch a mesurwch 6 gwaith yn barhaus yn ôl yr amodau cromatograffig o dan 2.2, a chofnodwch yr arwynebedd brig. Dangosodd y canlyniadau fod yr RSD o ardal brig echinacoside yn 1.81%, sy'n nodi cywirdeb offeryn da.

2.6 Prawf sefydlogrwydd

Mesurwch 2 yn union.0 mL o echdynnyn dyfrllyd Cistanche deserticola, anweddu i sychder mewn baddon dŵr, ychwanegu methanol i hydoddi, gwanhau i fflasg gyfeintiol 10 mL, ysgwyd yn dda, hidlo gyda {{ 7}}.22 μm pilen micromandyllog, dilynwch yr amodau cromatograffig o dan eitem 2.2, a gosodwch ar 0 a 2 yn y drefn honno. , 4, 8, 12, 24 h mesuriad pigiad, cofnodwch yr ardal brig. Dangosodd y canlyniadau fod yr RSD o ardal brig echinacoside yn 1.16%, gan nodi bod gan yr ateb prawf sefydlogrwydd da o fewn 24 awr.

2.7 Prawf ailadrodd

Mesurwch yn fanwl gywir 2.0 mL o echdyniad dŵr Cistanche deserticola a pharatowch 6 hydoddiant prawf ochr yn ochr â'r dull o dan 2.3.2. Chwistrellu samplau i'w mesur yn unol â'r amodau cromatograffig o dan 2.2 a chofnodwch yr ardal brig. Dangosodd y canlyniadau fod yr RSD o'rechinacosidecrynodiad màs oedd 1.28%, sy'n dangos ailadroddadwyedd da'r dull.

2.8 Prawf adennill sampl

Mesurwch yn fanwl gywir 9 dogn o 1.0 mL o echdyniad dŵr Cistanche deserticola, ychwanegwch 0.8, 1.0, ac 1.2 mL o hydoddiant cyfeiriol (1.552 mg·mL{{11) }}) yn y drefn honno, anweddu i sychder mewn baddon dŵr, ychwanegu methanol i hydoddi, a'i addasu i fflasg gyfeintiol 10 mL; Ysgwydwch yn dda a hidlo trwy bilen microfandyllog 0.22 μm i baratoi atebion prawf crynodiad uchel, canolig ac isel. Paratowch 3 chopi o bob crynodiad yn gyfochrog. Mesur yn ôl yr amodau cromatograffig o dan 2.2. Cofnodwch yr ardal brig a chyfrifwch adferiad y sampl. Cyfradd. Dangosir y canlyniadau yn Nhabl 1.

2.9 Penderfynu ar gynnwys sampl

Mesurwch yn fanwl gywir 3 dogn o 2.0 mL o echdynnyn dyfrllyd Cistanche deserticola, anweddwch i sychder mewn baddon dŵr, ychwanegu methanol i hydoddi, gwanhau i fflasg folwmetrig 10 mL, ysgwyd yn dda, hidlo gyda pilen micromandyllog 0.22 μm, a mesur yn ôl yr amodau cromatograffig o dan 2.2. Cofnodwch yr arwynebedd brig a chyfrifwch y cynnwys echinaceaside. Dangosir y canlyniadau yn Nhabl 2.

Tabl 1 Canlyniadau profion adfer echinacoside

Tabl 2 Canlyniadau penderfyniad cynnwys echinacoside mewn echdyniad dŵr o Cistanche herba