Nid yw Llygod Diamine Oxidase Knockout yn Gorsensitif i Histamin a Weinyddir ar Lafar Neu'n Isgroenol
Jun 26, 2023
Haniaethol
1. Amcan
Gwerthuso cyfraniad diamine ocsidase mewndarddol (DAO) wrth anactifadu histamin alldarddol, dod o hyd i straen llygoden gyda mwy o sensitifrwydd histamin, a phrofi effeithiolrwydd rhDAO mewn model her histamin.
2. Dulliau
Heriwyd llygod cnocio Diamine oxidase (KO) â histamin a roddwyd ar lafar ac yn isgroenol ar y cyd â'r atalydd -adrenergic propranolol, gyda'r ddau atalydd histamine-N-methyltransferase (HNMT) methoprene a tacrine, gydag asid ffolig i ddynwared anaf acíwt i'r arennau a'i drin. gyda DAO dynol ailgyfunol. Mesurwyd tymheredd craidd y corff gan ddefnyddio microsglodyn a fewnblannwyd yn isgroenol a mesurwyd lefelau plasma histamin gan ddefnyddio assay fflworoleuedd homogenaidd a ddatryswyd gan amser.
3. Canlyniadau
Nid oedd tymheredd craidd y corff a lefelau histamin plasma yn sylweddol wahanol rhwng llygod math gwyllt (WT) a DAO KO ar ôl her histamin llafar ac isgroenol gyda a heb anaf acíwt i'r arennau neu weinyddu atalyddion HNMT. Lleihaodd triniaeth gyda DAO dynol ailgyfunol yr ardal gymedrig o dan y gromlin (AUC) ar gyfer colli tymheredd craidd y corff 63 y cant (p=0.002) a'r sgôr clinigol 88 y cant (p<0.001). The AUC of the histamine concentration was reduced by 81%.
4. Casgliadau
Nid yw anactifadu histamin alldarddol yn cael ei ysgogi gan ddiraddiad ensymatig a hidlo arennau. Roedd triniaeth gyda DAO dynol ailgyfunol yn lleihau'n sylweddol golled tymheredd craidd y corff a achosir gan histamin, a chrynodiadau histamin ac atal datblygiad symptomau clinigol difrifol.
Geiriau allweddol
Amine ocsidas (sy'n cynnwys copr) · Histamine N-methyltransferase · Anaf acíwt i'r arennau · Metabolaeth · Tacrin · Metoprin · Tymheredd y corff
Cliciwch yma i brynu'r atodiad Cistanche
Rhagymadrodd
Mae mwy na 95 y cant o'r holl histamin mewn bodau dynol yn cael ei storio mewn celloedd mast a basoffiliau. Mae'r un peth yn debygol o fod yn wir am lawer o famaliaid. Mewn bodau dynol, mae dwyseddau celloedd mast ar eu huchaf yn y llwybr gastroberfeddol, y croen, a'r ysgyfaint [1], ac o ganlyniad, mae'r organau hyn yn dangos symptomau a achosir gan histamin mewn clefydau gyda chyfranogiad clir o actifadu celloedd mast. Gall y crynodiadau interstitial lleol o histamin ar ôl digroeniad acíwt gyrraedd 10-1000 µMs [2, 3, gweler Adnoddau Ar-lein]. Mewn pobl, yn debyg i gŵn a moch, mae crynodiadau histamin plasma arferol yn is na 1 ng / ml (9 nM) ac mae'r symptomau'n dechrau datblygu ar ychydig o naogramau fesul mililitr [4-7]. Gellir mesur isbwysedd sylweddol gyda chynnydd yng nghyfradd y galon o 5 ng/ml a phan fydd lefelau'n codi uwchlaw 10 ng/ml gall datblygiad broncospasm, arhythmia cardiaidd, isbwysedd difrifol, a sbasm coronaidd arwain at gamweithrediad aml-system sy'n bygwth bywyd [8, 9]. Mae histamin nid yn unig yn ymwneud â faswilediad, cynnydd mewn athreiddedd fasgwlaidd, hypocsia, a datblygiad oedema fasgwlaidd ond mae hefyd yn dangos cyfranogiad pro-llidiol sy'n dylanwadu ar y system imiwnedd addasol trwy recriwtio, aeddfedu, ac actifadu celloedd effeithwyr imiwn. Yn ogystal, mae'n chwarae rhan yn y system imiwnedd gynhenid trwy ryngweithio â chelloedd dendritig, celloedd lladd naturiol, a granulocytes [10, 11].
Mae crynodiadau histamin gwaelodlin mewn llygod a llygod mawr rhwng 20 a 100 ng/ml o'u mesur gan ddefnyddio dulliau dibynadwy ac felly maent lawer gwaith yn uwch na'r rhai a geir mewn bodau dynol [6, 7]. Nid yw'n glir a yw'r lefelau histamin uchel hyn yn chwarae unrhyw rôl ffisiolegol. Mae cnofilod yn hynod o ymwrthol i histamin gyda dosau angheuol o 50 y cant (LD50) mewn gwahanol fathau o lygoden o 3000-4000 a 400-500 mg / kg ar ôl ei roi trwy'r geg a mewnwythiennol, yn y drefn honno [12, 13]. Byddai'r crynodiad histamin plasma brig ar ôl rhoi bolws o 400 mg/kg mewn llygoden 20 g tua 8 mg/ml gan dybio bod cyfaint plasma o 1 ml. Pan ysgogwyd anaffylacsis mewn pobl trwy her pigiad gwenyn meirch rheoledig, roedd crynodiadau histamin o 140 ng / ml yn gysylltiedig â isbwysedd difrifol sy'n bygwth bywyd [14]. Sut mae histamin yn cael ei fetaboli a'i anactifadu?
Mae histamin yn dangos rhwymiad protein plasma cymedrig 13 y cant ac mae'n cael ei hidlo'n rhydd yn yr arennau [15]. Yn ddamcaniaethol, gall y gyfradd hidlo glomerwlaidd (GFR) gyfrannu tua 15-20 y cant at hanner oes 3-4 munud a geir mewn gwirfoddolwyr iach [5, gweler Adnoddau Ar-lein]. Ar GFR arferol o 100 ml/munud a chyfaint plasma o 3000 ml hanner oes histamin fyddai 20 munud. Mewn llygod, byddai GFR arferol o 10 µl/mun/g yn arwain at hanner oes histamin o 3 munud [16, gweler Adnoddau Ar-lein]. Serch hynny, mae histamin yn dangos cyfradd echdynnu uchel yn yr aren, sy'n uwch na'r cyfraddau sy'n seiliedig ar y GFR, a phriodolir yr echdyniad hwn i dderbyniad ac adamsugniad i'r celloedd tiwbaidd procsimol trwy gludwr cation organig 2 (OCT2), ac yna anactifadu enzymatig [17, gweler isod]. Mewn bodau dynol, canfuwyd llai nag 1 y cant o'r histamin ymbelydrol wedi'i chwistrellu mewn wrin o fewn y 6 h cyntaf [18]. Mae cyfradd isel ysgarthiad histamin mewn pobl, sydd hefyd i'w weld mewn cŵn a chathod, wedi'i gadarnhau gan eraill [19]. Mewn meinweoedd llygod a llygod mawr, canfyddir mwy na 50 y cant o'r ymbelydredd wedi'i chwistrellu yn yr arennau, a llai na 2 y cant fel histamine 30 munud ar ôl ei roi mewnwythiennol [20]. Yr arennau hefyd oedd yr organ â'r ymbelydredd uchaf ar ôl rhoi dos uchel o histamin mewn llygod mawr [21]. Mae'r cludwr OCT2 wedi'i fynegi'n fawr mewn arennau dynol a chnofilod a gallai fod yn gyfrifol am echdynnu histamin o'r adran plasma ac ail-amsugno histamin yn yr hidlif wrin cynradd i gelloedd tiwbaidd procsimol [22, gweler isod].
Byddai cludo histamin allgellog yn gyflym o'r hylif interstitial ar ôl rhyddhau o gelloedd mast neu blasma i adrannau eraill i ffwrdd o'r celloedd endothelaidd yn bosibilrwydd arall i anactifadu histamin. Gallai hyn atal anwytho isbwysedd difrifol a gollyngiadau fasgwlaidd a gyfryngir trwy signalau endothelaidd nitrig ocsid synthase (NOS) a rhwymo derbynyddion histamin [23-25]. Fodd bynnag, nid oes unrhyw ddata anifeiliaid in vivo sy'n astudio cyfraddau cludo histamin o'r cylchrediad systemig i gelloedd endothelaidd neu barenchymal ar gael. Mewn sawl astudiaeth in vitro, mae histamin yn cael ei gludo'n ddeugyfeiriol gan ddefnyddio'r OCT2 affinedd isel, gallu uchel, ac OCT3 [22, 26, 27]. Mae histamine yn swbstrad ardderchog ar gyfer y cludwr llygoden fawr OCT2 ac OCT3, gan ddangos effeithlonrwydd trafnidiaeth uwch o'i gymharu â'r proteinau OCT dynol cyfatebol [26].
Herba Cistanche
Pan ddefnyddir crynodiadau isel o histamin ymbelydrol mewn llygod, ymddengys mai methylation trwy histamine-N-methyltransferase (HNMT) yw'r prif lwybr anactifadu. Fodd bynnag, mae llygod heriol gyda dosau uwch o histamin yn symud metaboledd i asid asetig imidazole (IMAA) a chyfuniadau riboside, gyda dim ond ychydig bach o ddeilliadau methyl wedi'u canfod [28-30]. Mae'r crynodiadau histamin serwm gwaelodlin cynyddol bum gwaith yn y llygod canlyniadol HNMT yn cefnogi'r data hyn [31]. Cynhyrchir asid imidazoleacetig trwy ocsidiad histamin gan diamine oxidase (DAO) sy'n rhyddhau acetaldehyde imidazole, sy'n cael ei drawsnewid i ddeilliadau IMAA a riboside, yn bennaf yn yr afu. Mae'n ymddangos bod ocsidiad histamin trwy DAO yn chwarae mwy o ran mewn cataboliaeth histamin ar ôl her lafar mewn llygod, nad yw'n syndod o ystyried bod mynegiant DAO mewn llygod yn uchel yn y llwybr gastroberfeddol yn unig [30]. Pan berfformir her histamin llafar mewn bodau dynol, diheintio ocsideiddiol trwy DAO yw'r llwybr catabolaidd amlycaf gydag IMAA fel y prif fetabolyn wrinol [18].
Mae diamine oxidase yn amin ocsidas sy'n cynnwys copr ac yn un o ddau ensym sy'n gallu anactifadu histamin [32]. Mewn meinweoedd dethol, yn bennaf y coluddyn bach a'r celloedd tiwbaidd procsimol yr arennau, mae DAO wedi'i leoli mewn strwythurau gronynnog mewngellol heb eu diffinio'n dda ac wedi'u rhwymo'n allgellog i broteoglycanau sylffad heparan, tra bod HNMT yn bresennol yn y cytoplasm yn unig [33, 34]. Mae mynegiant HNMT yn gyffredin ledled y corff, gyda lefelau uwch i'w cael yn y system nerfol ganolog, y bledren, y galon, yr arennau, yr afu, yr ysgyfaint, ac mewn meinwe adipose.
Ar ôl ataliad DAO gan ddefnyddio aminoguanidine, dangosodd defaid symptomau clinigol helaeth o wenwyndra histamin ar ôl her histamin llafar o'i gymharu â rheolaethau heb rag-driniaeth aminoguanidine [35]. Arweiniodd arbrawf tebyg mewn moch at afiachusrwydd a marwolaethau difrifol mewn anifeiliaid a gafodd eu trin ymlaen llaw ag aminoguanidine ac wedi hynny eu herio â histamin llafar [36]. Cynyddodd crynodiadau histamin plasma canolrif 20-plygiad mewn moch ag ataliad DAO. Cynyddodd triniaeth llygod mawr ag aminoguanidine ac yna her histamin llafar IMAA wrinol a lleihau crynodiad histamin tua phum gwaith [37]. Roedd y data hyn yn dangos bod DAO yn chwarae rhan hanfodol wrth ddiraddio histamin alldarddol a weinyddir ar lafar.
Mewn llygod, cynyddodd triniaeth aminoguanidine grynodiadau histamin yn gryf yn y coluddyn ar ôl her histamin mewnwythiennol [30]. Fodd bynnag, nid yw aminoguanidine yn atalydd DAO penodol, ond mae hefyd yn blocio pob un o'r tri ensym NOS ac mae'n ymddangos ei fod yn rhwystro cludo histamin gwaed i feinweoedd [38, 39]. Dangosodd gweinyddu burimamide, antagonist derbynnydd histamin 2, effeithiau andwyol gyda mwy o farwolaethau mewn model sioc cylchrediad y gwaed mewn llygod mawr. Fodd bynnag, ar yr un pryd, cyhoeddwyd bod burimamide yn atalydd DAO cryf [40, 41]. Mewn cŵn, achosodd burimamide gynnydd 17-plyg mewn crynodiad histamin plasma cymedrig a gostyngiad cryf yn y pwysedd rhydwelïol cymedrig [42]. Credwyd bod yr effaith o ganlyniad i actifadu celloedd mastiau posibl.
Yn yr un modd, astudiwyd rôl HNMT gan ddefnyddio methylhistamine fel atalydd HNMT, ond mae methyl-histamine hefyd yn swbstrad ardderchog ar gyfer DAO [43]. Mae Amodiaquine a quinacrine yn atalyddion HNMT cryf [44-46] ond maent hefyd yn atal DAO gyda chrynodiad ataliol o 50 y cant (IC50) o tua 500 nM [47, data heb ei gyhoeddi]. Felly, rhaid bod yn ofalus wrth ddehongli data sy'n deillio o ddefnyddio atalyddion, a ddefnyddir yn aml mewn crynodiadau uchel, oherwydd mae effeithiau hysbys ac anhysbys oddi ar y targed yn debygol a gallant ystumio perthnasedd ffisiolegol astudiaethau in vivo yn sylweddol.
Gallai astudiaethau metabolaidd roi rhyw syniad o bwysigrwydd y ddau ensym wrth ddiraddio histamin, ond gallai cataboledd histamin gael ei ddatgysylltu oddi wrth effeithiau ffisiolegol neu bathoffisiolegol. Gallai'r crynodiadau histamin adrannol fod yn hollbwysig a gallai'r metaboledd fod i lawr yr afon.
Penderfynasom, felly, ddefnyddio'r llygoden DAO knock-out (KO) i astudio rôl DAO wrth ddiraddio histamin alldarddol. Ail nod allweddol oedd datblygu model llygoden gyda mwy o sensitifrwydd histamin i'n galluogi i astudio rôl histamin yn well mewn gwahanol fathau o mutant genetig ac i brofi effeithiolrwydd DAO dynol ailgyfunol mewn model her histamin.
Capsiwlau Cistanche
Deunydd a dulliau
Modelau anifeiliaid
Perfformiwyd arbrofion gan ddefnyddio llygod KO 1{0–18-wythnos oed C57BL6/J Aoc1tm1b(EUCOMM)Hmgu (DAO) KO a sbwriel tebyg i wyllt (WT). Darparwyd embryonau heterosygaidd gan Archif Mutant Llygoden Ewrop, Munich, yr Almaen, a'u mewnblannu i lygod ffug-regan C57BL6/N. Cadarnhawyd llygod epil Heterosygaidd C57BL6/J gan ddefnyddio PCR (gweler Adnoddau Ar-lein) a'u defnyddio ymhellach i fridio llygod DAO KO yn yr Is-adran Ymchwil Biofeddygol, Prifysgol Feddygol Fienna, gan y protocol anifeiliaid GZ 66.009/{ {14}}WF/V/3b/2016. Cynhaliwyd yr holl arbrofion anifeiliaid yn unol â phrotocol GZ 66.009/0258- V/3b/2019. Cymeradwywyd protocolau arbrofol gan Weinyddiaeth Addysg, Gwyddoniaeth ac Ymchwil Awstria. Roedd anifeiliaid yn cael eu cadw ar gylchred dydd-nos 12:12 h ar 22 gradd gyda dŵr a bwyd ad libitum. Ar gyfer mesuriadau tymheredd anfewnwthiol, mewnblannwyd trawsatebwr (IPTT-300, BioMedic Data Systems Inc., UDA) yn isgroenol bythefnos cyn yr arbrawf gan ddefnyddio anesthesia isoflurane byr. Mae'r trawsatebwr yn mesur y tymheredd deirgwaith o fewn un eiliad a chaiff cymedr y mesuriadau hyn ei gofnodi o'r tu allan i'r cawell gan ddefnyddio darllenydd. Yna defnyddir y gwerth cymedrig hwn ar gyfer cyfrifiadau pellach. Defnyddir y trawsatebyddion isgroenol hyn i osgoi trin anifeiliaid yn ormodol ac i atal anafiadau rhag gosod stilwyr tymheredd rhefrol dro ar ôl tro [48]. Mewn sawl rhywogaeth o anifeiliaid gan gynnwys cnofilod, dangoswyd bod gweinyddu histamin yn gostwng tymheredd y corff ac fe'i hystyrir yn ddarlleniad o'r radd flaenaf ar gyfer effeithiau histamin [49, 50]. Yn ystod y cyfnod arsylwi, gwerthuswyd symptomau clinigol gan filfeddyg profiadol yn ôl sgôr gorsensitifrwydd cyhoeddedig [51]. Roedd y sgôr yn amrywio o 0 (dim symptomau) i 1 (rhwbio a chrafu’r pen a’r trwyn), 2 (llai o weithgarwch gyda chyfradd anadlol uwch a/neu lai o weithgarwch, puffiness o amgylch y geg a’r llygaid), 3 (anadlu llafur, cyanosis o amgylch y gynffon a'r geg, gwichian) a 4 (dim gweithgaredd ar ôl ymledu neu gryndod a chonfylsiwn). Roedd sgôr o 5 yn dynodi marwolaeth. Dechreuwyd pob arbrawf her rhwng 9:00 a 11:00 am er mwyn osgoi amrywiadau sy'n dibynnu ar amser o'r dydd [52].
Gosodiad arbrofol cyffredinol
Rhoddwyd yr holl sylweddau mewn cyfaint o 5 ml/kg. Cafodd Propranolol (P0884, Sigma-Aldrich, Awstria) ei hydoddi mewn halwynog a'i gymhwyso'n fewnberitoneol (ip) mewn crynodiad o 2 mg / kg 20 munud cyn yr her histamine i gynyddu sensitifrwydd ar gyfer histamin [53]. Diddymwyd histamin dihydrochloride (H7250, Sigma-Aldrich, Awstria) mewn H2O distyll dwbl (dd) a'i wanhau ymhellach mewn halwynog. Mae pob crynodiad histamin a nodir yn cyfeirio at y sylfaen histamin (111.15 Dalton).
1. Gweinyddiad llafar ac isgroenol o histamin
Roedd llygod yn ymprydio am 60 munud i gyd. Ar ôl 40 munud o ymprydio, gweinyddwyd propranolol ac 20 munud yn ddiweddarach rhoddwyd histamine ar grynodiad o 30 mg / kg fesul os (po) gan ddefnyddio gavage llafar. Ar gyfer y model her isgroenol (sc) roedd llygod naill ai'n derbyn histamine ar grynodiad o 50 mg/kg heb propranolol neu 5 mg/kg gyda propranolol. Ar gyfer pennu crynodiadau histamin plasma, anestheteiddiwyd is-set o lygod ar wahanol adegau ar ôl yr her histamin gan ddefnyddio 10 mg/kg xylazine a 100 mg/kg cetamin. Casglwyd plasma sitrad o lygod anestheteiddiedig gan ddefnyddio pigiad cardiaidd. Defnyddiwyd un i bump o lygod fesul pwynt amser a genoteip.
2. Ataliad histamin-N-methyltransferase (HNMT) cydredol
Diddymwyd Metoprine (M338835, Cemegau Ymchwil Toronto, Canada) mewn asid lactig 10 y cant (L1875, Sigma-Aldrich, Awstria), wedi'i wanhau ymhellach mewn halwynog a'i weinyddu ip ar 3 mg / kg 1 h cyn her gyda 5 mg / kg histamin. Diddymwyd Tacrine (A79922, Sigma-Aldrich, Awstria) mewn ddH2O, ei wanhau ymhellach mewn halwynog, ac wedi hynny defnyddiwyd 10 mg/kg ip 1 h cyn 25 mg/kg histamine sc a 2 mg/kg propranolol. Defnyddiwyd crynodiad o 2 mg/kg Tacrine ip mewn cyfuniad â po 30 mg/kg histamine ynghyd â 2 mg/kg propranolol.
Cistanche Safonol
3. Sefydlu anaf acíwt i'r arennau (AKI) cyn her histamin
Folic acid (F7876, Sigma-Aldrich, Austria) was reconstituted in ddH2O, further diluted in saline, and applied i.p. at a concentration of 100 mg/kg 48 h before challenge with 5 mg/kg s.c. histamine and 2 mg/kg propranolol. The degree of acute kidney injury was estimated using plasma creatinine values. As a cut-off for inclusion, a creatinine value of at least threefold above the mean baseline value was used as described [54]. Baseline plasma creatinine concentrations of 0.11 and 0.17 mg/dl were measured in two mice and therefore an inclusion cut-off of>Dewiswyd 42 mg/dl. Defnyddiwyd plasma sitrad a dynnwyd trwy dyllu cardiaidd i fesur creatinin gan ddefnyddio dadansoddwr Cobas (dadansoddwr Cobas C311, Roche, y Swistir). Er mwyn pennu crynodiadau histamin plasma ar wahanol adegau yn ystod her sc histamin gyda propranolol mewn anaf acíwt i'r arennau, anestheteiddiwyd dwy i bedwar o lygod fesul pwynt amser, a chasglwyd plasma sitrad trwy dyllu'r galon.
4. DAO achub ar ôl gweinyddu histamin
Cymhwyswyd DAO dynol ailgyfunol (rh) gyda motiff rhwymo heparin treigledig (a ddisgrifir yn Gludovacz et al. [55]) yn fewnwythiennol (iv) ar grynodiad o 4 mg/kg 40 munud cyn taenu 2 mg/kg propranolol a 60 munud cyn her gyda 5 mg/kg sc histamin.
Ar gyfer pennu crynodiadau histamin a DAO mewn plasma, cafodd llygod eu trin â naill ai 4 mg/kg DAO neu glustog iv 60 munud cyn her gyda 5 mg/kg sc histamine ynghyd â 2 mg/kg propranolol. Cafodd y llygod eu hanestheteiddio ar wahanol adegau. Casglwyd plasma citrate gan ddefnyddio twll cardiaidd o ddau i dri llygod fesul pwynt amser. Casglwyd gwaed mewn 3.8 y cant sodiwm sitrad a chymysgwyd un rhan ar unwaith â diminazene-aceturate (D7770, Sigma-Aldrich, Awstria) gan arwain at grynodiad terfynol o 10 µM i atal diraddio histamin gan rhDAO.
Dadansoddiad mynegiant genynnau
Cafodd samplau meinwe eu rhewi â sioc mewn nitrogen hylifol a chafwyd cyfanswm RNA gan ddefnyddio Pecyn RNA Cyfanswm Meinwe FavorPrep (FATRK001, Favorgen, Taiwan) ar ôl homogeneiddio meinwe gan ddefnyddio tiwbiau lysing (Lysing Matrix E, AS Biomedicals, yr Almaen) ar Precellys 24 (Bertin Instruments, Ffrainc). Perfformiwyd trawsgrifiad o chwith gan ddefnyddio pecyn synthesis cDNA OneScript Plus (G236, ABM Good, Canada). Ar gyfer PCR meintiol defnyddiwyd BrightGreen Express 2 × Mastermix (MasterMix-EL, ABM Good, Canada). Dyluniwyd preimwyr rhychwantu Exon ar gyfer DAO, HNMT, a histidine decarboxylase (HDC) gan ddefnyddio meddalwedd Primer3 (Tabl Adnoddau Ar-lein 1). Defnyddiwyd y genyn cadw tŷ RPLP0 ar gyfer normaleiddio [56].
Blot gorllewinol
Ar gyfer dadansoddiad blot gorllewinol, cafodd samplau meinwe wedi'u rhewi eu rhoi mewn byffer K-ffosffad 2{0 mM (pH 7.2) gan ddefnyddio tiwbiau lysio (tiwbiau Lysing Matrix E, AS Biomedicals, yr Almaen) ar Precellys 24 (Bertin Instruments, Ffrainc) . Pennwyd cyfanswm crynodiad protein gan ddefnyddio Pecyn Assay QuantiPro BCA (QPBCA-1KT, Sigma, Awstria). Ar gyfer electrofforesis gel Polyacrylamid, gwahanwyd cyfanswm o 40 µg o brotein a 40 ng murine ailgyfunol DAO (a ddarparwyd gan EG, Prifysgol Adnoddau Naturiol a Gwyddorau Bywyd, Fienna, Awstria, gan ddefnyddio dulliau a ddisgrifir yn [57]) gan ddefnyddio gel Tris-glycine 12 y cant ( 4561043, Bio-Rad, UDA). Defnyddiwyd gwrthgorff monoclonaidd ABP1 (sc-515908, Santa Cruz, UDA) ar gyfer canfod DAO ar grynodiad o 0.4 µg/ml, a defnyddiwyd gwrthgorff GAPDH monoclonaidd (2118, Cell Signal Technology, UDA) fel llwyth rheoli ar wanediad o 1:2000. Defnyddiwyd y gwrthgorff IgG-HRP gwrth-lygoden monoclonaidd (A2554, Sigma Aldrich, Awstria) a'r gwrthgorff gwrth-gwningen IgG-HRP (A0545, Sigma Aldrich, Awstria) fel gwrthgyrff canfod ar wanhad o 1:40,000. Cafwyd delweddau gan ddefnyddio Clarity Max Western ECL Substrate (1705062, BioRad, UDA) ar System Ddelweddu ChemiDoc (17001401, Bio-Rad, UDA).
Cistanche tubulosa
Mesur gweithgaredd DAO
Mesurwyd gweithgaredd diamine oxidase o wahanol homogenadau meinwe ac ataliad gan methoprene a tacrine fel y disgrifiwyd [58]. Cafodd samplau meinwe wedi'u rhewi eu rhoi mewn byffer K-ffosffad 20 mM (pH 7.2) gan ddefnyddio tiwbiau lysing ar Precellys 24. Pennwyd cyfanswm crynodiad protein gan ddefnyddio'r QuantiPro BCA Assay Kit a deorwyd 500 µg echdynion protein o wahanol feinweoedd am 120 munud gyda ortho-aminobenzaldehyde (oABA) a naill ai ddH2O neu 200 µM cadaverine (CAD). Mae Delta-1-piperidine, sef cynnyrch awtogylchu CAD ar ôl ei ddadheintio gan DAO, yn cyddwyso ag oABA sy'n ffurfio fflworoffor, y gellir ei fesur yn EX440/30 ac EM620/40 nm. Er mwyn penderfynu ar ataliad DAO, cafodd rhDAO ei rag deori â methoprene a thacrin mewn crynodiadau gwahanol am 30 munud a'i fesur fel y disgrifir uchod.
Er mwyn pennu gweithgaredd DAO, cymysgwyd homogenadau meinwe â chrynodiad protein o 200 µg/ml â HRP (crynodiad terfynol 1.2 µg/ml, P6782, Sigma-Aldrich, Awstria) ac aminoguanidine (crynodiad terfynol 10 µM, 396494, Sigma-Aldrich , Awstria) neu byffer K-ffosffad (pH 7.2) yn cael ei ychwanegu a'i ddeor am 15 munud ar 37 gradd . Ychwanegwyd Amplex red™ (crynodiad terfynol 100 µM, A12222, Thermo Scientific, UDA) a dechreuwyd adweithiau trwy ychwanegu crynodiad pydrescine terfynol 200 µM (51799, Sigma-Aldrich, Awstria). Defnyddiwyd byffer ffosffad potasiwm (pH 7.2) fel rheolaeth negyddol. Deorwyd samplau ar 37 gradd a'u mesur bob 10 munud am 120 munud gan ddefnyddio EX550 ac EM590 nm. Cyfrifwyd y signal DAO-benodol trwy dynnu samplau ag aminoguanidine, atalydd DAO cryf ac anwrthdroadwy, o samplau â byffer K-ffosffad.
Ar gyfer mesuriadau gweithgaredd plasma DAO mewn llygod sy'n derbyn iv Rhoda defnyddiwyd assay hybrid gan ddefnyddio gwrthgorff monoclonaidd o'r llinell gell hybridoma clon gwrth-DAO 8/119 a ddarparwyd gan yr Athro Quaroni (Prifysgol Cornell, Ithaca, NY), ac Amplex red™. Roedd platiau fflworoleuedd du rhwymol uchel-protein (475,515, Thermo Scientific Nunc, Denmarc) wedi'u gorchuddio â 100 µl o 5 µg/ml gwrth-DAO 8/119 mewn byffer carbonad-bicarbonad 50 mM ( C3041, Sigma-Aldrich, Awstria), deor dros nos ar 4 gradd ac wedi hynny blocio gyda 120 µl 1 y cant BSA (A4503, Sigma-Aldrich, Awstria) am 50 munud ar dymheredd ystafell. Ar ôl blocio 100 µl o samplau a safonau plasma, ychwanegwyd 1:10 wedi'i wanhau'n flaenorol mewn PBS a'i ddeor am 1 h ar dymheredd ystafell. Wedi hynny ychwanegwyd 90 µl marchruddygl peroxidas (crynodiad terfynol 1.2 µg/ml) ac Amplex coch™ (crynodiad terfynol 100 µM) mewn PBS gyda 0.1 y cant BSA a dechreuwyd adweithiau trwy ychwanegu 10 µl pyrascine (crynodiad terfynol 200 µM) neu PBS. Mesurwyd fflworoleuedd ar 37 gradd bob 5 munud am 120 munud gan ddefnyddio EX550 ac EM590 nm. Yr ateb golchi oedd 0.1 y cant Tween-20 (P1379, Sigma-Aldrich, Awstria) yn PBS. Paratowyd cromlin safonol o 3-30 ng/ml rhDAO mewn plasma llygoden. Perfformiwyd pob mesuriad yn ddyblyg.
Mesuriadau histamin
Defnyddiwyd plasma citrad sy'n cynnwys 10 µM diminazene-aceturate (D7770, Sigma-Aldrich, Awstria) i fesur crynodiadau histamin gan ddefnyddio pecyn deinamig fflworoleuedd datrys amser homogenaidd (HTRF) histamine (62HTMDPET, Cisbio, Ffrainc). Defnyddiwyd y pecyn yn unol â'r cyfarwyddiadau a ddarparwyd gan y gwneuthurwr. Defnyddiwyd cromlin safonol histamin mewn plasma cyfun o lygod C57Bl/6J ar gyfer meintioli. Mae pob crynodiad histamin yn cyfeirio at y sylfaen histamin a pherfformiwyd pob mesuriad yn ddyblyg.
Dadansoddiad ystadegol
Perfformiwyd dadansoddiadau ystadegol gan ddefnyddio GraphPad Prism Version 8.4.0. (GraphPad Meddalwedd Inc. San Diego). Cyfrifwyd arwyddocâd ystadegol gwahaniaethau mewn gweithgaredd DAO mewn homogenadau meinwe gan ddefnyddio ANOVA a ailadroddir gyda chywiriad Geisser-Tŷ Gwydr. Cymharwyd yr ardal o dan y cromliniau (AUC) o fesuriadau tymheredd y corff craidd unigol a sgoriau clinigol yn ystod arbrawf gan ddefnyddio profion t dwy ochr, di-bâr heb gywiriad Welch. Cymharwyd crynodiadau histamin plasma rhwng grwpiau ag ANOVA dwy ffordd. Er mwyn cymharu crynodiadau histamin plasma ar ôl sc yr her rhwng llygod â genoteipiau gwahanol, gyda a heb anaf acíwt i'r arennau a derbyn naill ai DAO neu glustog, grwpiwyd data yn gyfyngau i gyfrif am werthoedd coll mewn is-grwpiau unigol (genoteipiau: 5, 1{{). 14}}, 20, 30, 40, 45, 60 munud; anaf acíwt i'r arennau: 0, 10–15, 20–30, 40–45 a 60 mun; DAO: 0, 10, 30 a 45 min). Defnyddiwyd prawf-t dwy ochr, di-bâr i brofi am wahaniaethau mewn crynodiadau creatinin plasma o lygod a gafodd eu trin â 100 mg/kg o asid ffolig a hebddo. Diffiniwyd arwyddocâd ystadegol fel t<0.05 in all tests.
Dyfyniad Cistanche
Casgliad
Yn y bôn, nid oedd modd gwahaniaethu rhwng llygod DAO KO a llygod WT gan ddefnyddio heriau histamin llafar alldarddol ac isgroenol. Cymedrol ar y gorau yw cynnwys HNMT mewn anactifadu histamin sy’n arwain at ostyngiad mewn symptomau, ond gellir ystyried canlyniadau ataliad ffarmacoleg yn rhagarweiniol. Dangosodd data sy'n defnyddio ataliad HNMT â methoprene duedd tuag at gynnwys DAO mewndarddol mewn anactifadu histamin. Mae'r arennau'n ymwneud ag echdynnu histamin yn gyflym o'r cylchrediad, ond nid yw'r llygod cnocio 509 Diamine oxidase uchel saithplyg yn orsensitif i weinyddion ar lafar neu'n isgroenol… 1 3 ni throsodd crynodiadau histamin yn ffenoteip gorliwiedig a fesurwyd gan ddefnyddio tymheredd canolog colled fel darlleniad ffenoteipaidd. Gallai defnyddio DAO dynol neu lygoden ailgyfunol gefnogi neu helpu i ddiystyru ymglymiad histamin mewn modelau anifeiliaid amrywiol gydag amheuaeth o ddirywiad celloedd mast ynghyd â rhyddhau histamin yn gyflym ac yn enfawr, neu gydag anwythiad uwch o'r ensym histidine decarboxylase wedi'i ddilyn gan ryddhad ffres wedi'i syntheseiddio. histamin dros oriau. Efallai y byddai'n werth astudio bridio llygoden KO ddwbl go iawn gyda chopïau anactif o'r DAO a'r genyn HNMT, os yw'n ymarferol. Nid yw llygod KO sengl o naill ai DAO neu HNMT yn dangos ffenoteipiau amlwg. [data heb ei gyhoeddi, 31] Yn yr un modd, gallai profi cyfranogiad y ddau brif gludwr histamin, OCT2 ac OCT3, mewn newidiadau ffenoteipaidd a achosir gan histamin ganiatáu i ni gael gwell dealltwriaeth o'r mecanweithiau y tu ôl i ddatblygiad symptomau cyfryngol histamin mewn cnofilod a o ganlyniad hefyd o bosibl mewn bodau dynol. Er gwaethaf ymdrechion ymchwil sylweddol ers dros 100 mlynedd ers ei ddarganfod, mae gennym dipyn o ffordd i fynd eto cyn i ni gael gwir ddealltwriaeth o gataboledd histamin.
Cyfeiriadau
1. Boehm T, Ristl R, Joseph S, et al. Dadrywiadau metabolom a lipidome yn ystod digwyddiad actifadu mast-gelloedd difrifol mewn claf â mastocytosis systemig andolent. J Alergedd Clin Immunol. 2021. https://doi.org/10.1016/j.jaci.2021.03.043. 2. Packard KA, Khan MM. Effeithiau histamin ar Th1/Th
2 cydbwysedd cytocin. Int Immunopharmacol. 2003; 3:909–20. https://doi.org/ 10.1016/S1567-5769(02)00235-7.
3. Hesterberg R, Sattler J, Lorenz W, et al. Cynnwys histamin, gweithgaredd diamine oxidase a gweithgaredd histamine methyltransferase mewn meinweoedd dynol: ffaith neu ffuglen? Gweithrediadau Asiantau. 1984;14:325– 34. https://doi.org/10.1007/BF01973821 .
4. Dyer J, Warren K, Myrddin S, et al. Mesur histamin plasma: disgrifiad o ddull gwell a gwerthoedd arferol. J Alergedd Clin Immunol. 1982; 70:82-7. https://doi.org/10.1016/ 0091-6749(82)90233-0.
5. Pollock I, Murdoch RD, Lessof MH. Histamin plasma a goddefgarwch clinigol i histamin trwytho mewn pynciau arferol, atopig ac wrticaraidd. Gweithrediadau Asiantau. 1991; 32:359–65. https://doi.org/10. 1007/BF01980899.
6. Liu J, Wang L, Hu W, et al. Datblygu dull UHPLC-MS/MS ar gyfer pennu histamin plasma mewn rhywogaethau mamalaidd amrywiol. J Chromatogr B. 2014;971:35–42. https:// doi.org/10.1016/j.jchromb.2014.08.043 .
7. Xu Y, Kang T, Dou D, et al. Gwerthuso ac optimeiddio model anifeiliaid ar gyfer adwaith anaffylactoid a achosir gan bigiadau. Imiwnol Alergedd Pac Asiaidd. 2015; 33:330–8. https://doi.org/ 10.12932/AP0619.33.4.2015.
8. Maintz L, Novak N. Histamine ac anoddefiad histamin. Am J Clin Nutr. 2007; 85: 1185-96. https://doi.org/10.1093/ajcn/85.5 . 1185. llarieidd-dra eg.
9. Ginsburg R, Bristow MR, Kantrowitz N, et al. Histamin yn ysgogi sbasm rhydwelïau coronaidd clinigol: goblygiadau ynghylch pathogenesis angina pectoris amrywiol. Am Galon J. 1981; 102:819–22. https://doi.org/10.1016/0002-8703(81) 90030-2.
10. O'Mahony L, Akdis M, Akdis CA. Rheoleiddio'r ymateb imiwn a llid gan dderbynyddion histamin a histamin. J Alergedd Clin Immunol. 2011; 128: 1153-62. https://doi. org/10.1016/j.jaci.2011.06.051 .
11. Thurmond RL, Gelfand EW, Dunford PJ. Rôl derbynyddion histamin H1 a H4 mewn llid alergaidd: chwilio am wrthhistaminau newydd. Nat Parch Drug Discov. 2008; 7:41–53. https://doi.org/10.1038/nrd2465 .
12. Pericin C, Thomann P. Cymhariaeth o wenwyndra acíwt clioquinol, histamine, a chlorofform mewn gwahanol fathau o lygod. Yn: Chambers PL, Günzel P, golygyddion. Mecanwaith gweithredu gwenwynig ar rai organau targed. Berlin: Springer; 1979. t. 371–3.
13. Lamanna C, Ross HE. Perthynas dos gwenwynig angheuol â phwysau corff y llygoden. Gwenwynig Appl Pharmacol. 1968; 13:307-15. https://doi.org/10.1016/0041-008X(68)90104-X.
14. Van der Linden P, Hac C, Poortman J, et al. Yr her pigo pryfed mewn 138 o gleifion: perthynas rhwng difrifoldeb clinigol anaffylacsis ac actifadu celloedd mast. J Alergedd Clin Immunol. 1992; 90: 110-8. https://doi.org/10.1016/S0091-6749(06) 80017-5.
15. Williams WR, DJ siâl. Dadleoli cyfryngwyr fasoweithredol o broteinau plasma yn vitro: mecanwaith posibl ar gyfer adweithiau ffug-alergaidd i gyffuriau blocio niwrogyhyrol. Br J Anaesth. 1992; 69:508-10. https://doi.org/10.1093/bja/69.5.508 .
16. Sasaki Y, Iwama R, Sato T, et al. Amcangyfrif o gyfradd hidlo glomerwlaidd mewn llygod ymwybodol gan ddefnyddio hafaliad symlach. Cynrychiolydd Corfforol 2014; 2:e12135. https://doi.org/10.14814/phy2.12135 .
17. Helander CG, Lindell SE, Westling H. Tynnu arennol C14-labelu histamin o'r gwaed mewn dyn. Scand J Clin Lab Investig. 1965. https://doi.org/10.1080/00365516509083360.
18. Sjaastad O, Sjaastad ÖV. Cataboliaeth o l4C-histamine a weinyddir ar lafar mewn dyn. Acta Ffarmacol Gwenwynig. 1974; 34:33-45. https://doi.org/10.1111/j.1600-0773.1974.tb02011.x.
19. Schayer RW. Metabolaeth histamin mewn gwahanol rywogaethau. Br J Pharm Chemoth. 1956; 11:472-3. https://doi.org/10.1111/j. 1476-5381.1956.tb00020.x.
20. Snyder SH, Axelord J, Bauer H. Tynged C14-Histamine mewn meinweoedd anifeiliaid. J Pharmacol Exp Ther. 1964; 144:373-9.
21. Rhosyn B, Browne JSL. Dosbarthiad a chyfradd diflaniad histamin wedi'i chwistrellu'n fewnwythiennol yn y llygoden fawr. Am J Physiol. 1938; 124:412-20. https://doi.org/10.1152/ajplegacy.1938.124.2 . 412.
22. Koepsell H, Gwefusau K, Volk C. Cludwyr cation organig polyspecifc: strwythur, swyddogaeth, rolau ffisiolegol, a goblygiadau biofferyllol. Pharm Res. 2007; 24: 1227-51. https://doi.org/ 10.1007/s11095-007-9254-z.
23. Lantoine F, Iouzalen L, Devynck MA, et al. Mae cynhyrchu ocsid nitrig mewn celloedd endothelaidd dynol a ysgogwyd gan histamine yn gofyn am fewnlifiad Ca2 plus. Biocemeg. 1998; 330:695-9. https://doi.org/10.1042/ bj3300695 .
24. Mikelis CM, Simaan M, Ando K, et al. Mae RhoA a ROCK yn cyfryngu gollyngiadau fasgwlaidd a achosir gan histamin a sioc anaffylactig. Cymmun Nat. 2015; 6: 6725. https://doi.org/10.1038/ncomms7725 .
25. Ashina K, Tsubosaka Y, Nakamura T, et al. Mae histamine yn achosi gor-athreiddedd fasgwlaidd trwy gynyddu llif y gwaed ac aflonyddwch rhwystr endothelaidd in vivo. PLoS UN. 2015;10:e0132367. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0132367 .
26. Schömig E, Lazar A, Gründemann D. Cludwr monoamine all-niwronol a chludwyr catation organig 1 a 2: adolygiad o effeithlonrwydd trafnidiaeth. Yn: Sitte HH, Freissmuth M, golygyddion. Cludwyr niwrodrosglwyddydd. Berlin: Springer; 2006. t. 151–80.
27. Ohtsu H. Cynnydd mewn ymchwil signal alergedd ar gelloedd mast: rôl histamin mewn clefyd imiwnolegol a chardiofasgwlaidd a'r system gludo histamin yn y gell. J Ffarmacol Sci. 2008; 106:347-53. https://doi.org/10.1254/jphs.FM0070294 .
28. Karjala SA, Turnquest B, Schayer RW. Metabolion wrinol histamin ymbelydrol. J Biol Chem. 1956; 219: 9-12. https://doi. org/10.1016/S0021-9258(18)65762-X.
29. Schayer RW. Cataboliaeth o feintiau ffisiolegol o histamin in vivo. Diwygiad Ffisegol 1959; 39:116-26. https://doi.org/10.1152/ physrev.1959.39.1.116.
30. Reilly MA, Schayer RW. Astudiaethau in vivo ar gataboledd histamin a'i ataliad. Br J Pharmacol. 1970; 38:478-89. https://doi. org/10.1111/j.1476-5381.1970.tb10590.x.
31. Naganuma F, Nakamura T, Yoshikawa T, et al. Mae Histamine N-methyltransferase yn rheoleiddio ymddygiad ymosodol a'r cylch cysgu-effro. Cynrychiolydd Gwyddonol 2017; 7: 15899. https://doi.org/10.1038/s41598-017-16019-8.
32. McGrath AP, Hilmer KM, Collyer CA, et al. Adeiledd ac ataliad diamine ocsidas dynol. Biocemeg. 2009; 48:9810–22. https://doi.org/10.1021/bi9014192 .
33. Schwelberger HG. Dadansoddiad o feinwe a lleoliad isgellog diamine ocsidas mamalaidd trwy ficrosgopeg fflworoleuedd sganio laser cydffocal. Infamm Res. 1998; 47:60–1. https://doi.org/ 10.1007/s000110050273 .
34. Nishibori M, Tahara A, Sawada K, et al. Lleoli niwronaidd a fasgwlaidd o histamin N-methyltransferase yn y system nerfol ganolog buchol. Eur J Neurosci. 2000; 12: 415-24. https://doi.org/ 10.1046/j.1460-9568.2000.00914.x.
35. Sjaastad ÖV. Potensial gan aminoguanidine o sensitifrwydd defaid i histamin a roddir trwy'r geg. Effaith amino-guanidine ar ysgarthiad wrinol histamin mewndarddol. Exp Physiol. 1967; 52: 319-30. https://doi.org/10.1113/expphysiol.1967.sp001 918.
36. Sattler J, Häfner D, Klotter HJ, et al. Histaminau a achosir gan fwyd fel problem epidemiolegol: drychiad histamin plasma a newidiadau hemodynamig ar ôl gweinyddu histamin trwy'r geg a blocâd diamine oxidase (DAO). Gweithrediadau Asiantau. 1988; 23:361–5. https://doi.org/10.1007/BF02142588 .
37. Bowman MA, Simell OG, Peck AB, et al. Ffarmacokinetic gweinyddu aminoguanidine ac effeithiau ar amlder diabetes mewn llygod diabetig nonobese. J Pharmacol Exp Ther. 1996; 279: 790-4.
38. Matejovic M, Krouzecky A, Martinkova V, et al. Ataliad synthase ocsid nitrig anwythol dethol yn ystod bacteremia mochyn hyperdynamig hirdymor. Sioc. 2004; 21:458–65. https://doi. org/10.1097/00024382-200405000-00010.
39. Alderton WK, Cooper CE, Knowles RG. Synthases ocsid nitrig: strwythur, swyddogaeth, ac ataliad. Biochem J. 2001;357:593–615. https://doi.org/10.1042/bj3570593 .
40. Altura BM, Halevy S. Gweithredoedd buddiol a niweidiol antagonyddion derbyn histamin H1- a H{{2} mewn sioc cylchrediad y gwaed. PNAS. 1978; 75: 2941-4. https://doi.org/10.1073/pnas.75.6.2941 .
41. Thomas LL, Bochner BS, Lichtenstein LM. Atal gweithgaredd histaminase sy'n deillio o leukocyte polymorphoniwclear dynol gan wrthwynebwyr H-2. Biochem Pharmacol. 1978; 27: 2562-5. https:// doi.org/10.1016/0006-2952(78)90327-1.
42. Thermann M, Lorenz W, Schmal A, et al. Dylanwad antagonyddion derbynnydd H1- a H{2- ar y system gylchrediad gwaed a chrynodiadau histamin plasma mewndarddol mewn cŵn. Gweithrediadau Asiantau. 1977; 7:97–101. https://doi.org/10.1007/BF01964888 .
43. Elmore BO, Bollinger JA, Dooley DM. Diamin ocsidas arennau dynol: mynegiant heterologaidd, puro a nodweddu. J Biol Inorg Chem. 2002; 7:565–79. https://doi.org/10. 1007/s00775-001-0331-1.
44. Duch DS, Bowers SW, Nichol CA. Cynnydd yn lefelau histamin yr ymennydd gan atalyddion diaminopyrimidine o histamine N-methyl transferase. Biochem Pharmacol. 1978; 27: 1507-9. https://doi. org/10.1016/0006-2952(78)90109-0.
45. Horton JR, Sawada K, Nishibori M, et al. Sail strwythurol ar gyfer atal histamin N-methyltransferase gan gyffuriau amrywiol. J Mol Biol. 2005; 353:334-44. https://doi.org/10.1016/j.jmb.2005 . 08.040.
46. Horton JR, Sawada K, Nishibori M, et al. Dau ffurf polymorffig o histamin dynol methyltransferase: cymariaethau strwythurol, thermol a cinetig. Strwythur. 2001; 9:837–49. https:// doi.org/10.1016/S0969-2126(01)00643-8.
47. Duch DS, Bacchi CJ, Edelstein AS, et al. Atalyddion metaboledd histamin in vitro ac in vivo: cydberthynas â gweithgaredd antitrypanosomaidd. Biochem Pharmacol. 1984; 33: 1547-53. https:// doi.org/10.1016/0006-2952(84)90426-X.
48. Hox V, Desai A, Bandara G, et al. Mae estrogen yn cynyddu difrifoldeb anaffylacsis mewn llygod benywaidd trwy fynegiant synthase ocsid nitrig endothelaidd gwell a chynhyrchiad nitrig ocsid. J Alergedd Clin Immunol. 2015;135:729-736.e5. https://doi.org/ 10.1016/j.jaci.2014.11.003.
49. Packman EW, Rossi GV, Harrisson JWE. Effaith histamin a gwrthhistaminau ar dymheredd y corff. J Pharm Ffarmacol. 1953; 5:301–10. https://doi.org/10.1111/j.2042-7158.1953.tb139 90.x.
50. Morris SC, Perkins C, Potter C, et al. Optimeiddio ataliad cyffuriau o anaffylacsis cyfrwng IgE mewn llygod. J Alergedd Clin Immunol. 2021; 149: 671-84. https://doi.org/10.1016/j.jaci.2021.06.022 .
51. Li XM, Serebrisky D, Lee SY, et al. Model murine o anaffylacsis cnau daear: Mae ymatebion celloedd T a B i alergen cnau daear mawr yn dynwared ymatebion dynol. J Alergedd Clin Immunol. 2000; 106: 150-8. https://doi.org/10.1067/mai.2000.107395 .
52. Hasegawa A, Watanabe M, Osada H, et al. Dylanwad glucocorticoidau ar amrywiadau sy'n dibynnu ar amser o'r dydd mewn anaffylacsis systemig systemig sy'n ysgogi IgE-, histamine-, a phlatennau mewn gwahanol fathau o lygoden. Biochem Biophys Res Commun. 2018; 495: 2184–8. https://doi.org/10.1016/j.bbrc.2017.12.099.
53. Fishel CW, Szentivanyi A, Talmage DW. Sensiteiddio a dadsensiteiddio llygod i histamin a serotonin gan niwrohumoriaid. J Immunol. 1962; 89:8-18.
54. Stallons LJ, Whitaker RM, Schnellmann RG. Biogenesis mitocondriaidd wedi'i atal mewn anaf acíwt i'r arennau a achosir gan asid ffolig a ffibrosis cynnar. Gwenwynig Lett. 2014; 224:326-32. https://doi. org/10.1016/j.toxlet.2013.11.014.
55. Gludovacz E, Schuetzenberger K, Resch M, et al. Mae treigladau motiff sy'n rhwymo heparin o diamine oxidase dynol yn caniatáu datblygu biofferyllol diraddiol histamin o'r radd flaenaf. Elife. 2021; 10:e68542. https://doi.org/10.7554/eLife . 68542.
56. Eissa N, Kermarrec L, Hussein H, et al. Priodoldeb genynnau cyfeiriol ar gyfer normaleiddio RNA negeseuol mewn llygoden 2, colitis a achosir gan asid dinitrobensen sylffonig (DNBS) gan ddefnyddio PCR meintiol amser real. Cynrychiolydd Gwyddonol 2017; 7:42427. https://doi.org/10. 1038/rep42427.
57. Gludovacz E, Maresch D, Bonta M, et al. Nodweddu diamine oxidase dynol ailgyfunol (rhDAO) a gynhyrchir mewn celloedd Ofari Hamster Tsieineaidd (CHO). J Biotechnol. 2016; 227: 120-30. https://doi.org/10.1016/j.jbiotec.2016.04.002 .
58. Boehm T, Karer M, Gludovacz E, et al. Meintioliad syml, sensitif a phenodol o weithgaredd diamine oxidase mewn matricsau cymhleth gan ddefnyddio fflworofforau sydd newydd eu darganfod sy'n deillio o swbstradau naturiol. Infamm Res. 2020; 69: 937-50. https://doi.org/10. 1007/s00011-020-01359-5.
59. Matsumura Y, Tan EM, Vaughan JH. Gor-sensitifrwydd i histamin ac anaffylacsis systemig mewn llygod â rhwystr ffarmacolegol beta-adrenergig: amddiffyniad gan niwcleotidau. J Alergedd Clin Immunol. 1976; 58:387-94. https://doi.org/10.1016/0091- 6749(76)90119-6.
60. Hunter AJ, Murray TK, Jones JA, et al. Ffarmacoleg cholinergig tetrahydroaminoacridine in vivo ac in vitro. Br J Pharmacol. 1989; 98:79 –86. https://doi.org/10.1111/j.1476-5381. 1989.tb16865.x.
61. Rabe M, Schaefer F. Modelau llygoden nad ydynt yn drawsgenig o glefyd yr arennau. Nephron. 2016; 133:53-61. https://doi.org/10.1159/00044 5171.
62. Miyamoto Y, Nakano S, Kaneko M, et al. Gwerthusiad clinigol o atalydd proteas synthetig newydd mewn llawdriniaeth agored ar y galon. Effaith ar serotonin plasma a rhyddhau histamin a chadwraeth gwaed. ASAIO. 1992; 38:M395-8. https://doi.org/10.1097/00002480- 199207000-00063.
63. Oncoleg hil — oncoleg fanwl. https://www.raceoncoleg. com/. Cyrchwyd 23 Tachwedd 2021
64. Myers JW, Von Hof DD, Kuhn JG, et al. Adweithiau anaffylactoid sy'n gysylltiedig â arllwysiadau bisantrene. Cyffuriau Newydd Ymchwiliol. 1983; 1:85–8. https://doi.org/10.1007/BF00180195 .
65. Reilly MA, Schayer RW. Astudiaethau pellach ar gataboledd histamin in vivo. Br J Pharmacol. 1971; 43:349–58.
66. Malinski T, Taha Z, Grunfeld S, et al. Trylediad ocsid nitrig yn wal yr aorta yn cael ei fonitro yn y fan a'r lle gan ficrosynwyryddion porffyrinig. Biochem Biophys Res Commun. 1993; 193: 1076-82. https://doi. org/10.1006/bbrc.1993.1735.
67. Ginsburg M, Wajda I, Waelsch H. Transglutaminase ac ymgorffori histamin yn vivo. Biochem Pharmacol. 1963; 12: 251-64. https://doi.org/10.1016/0006-2952(63)90148-5.
68. Vowinckel J, Stahlberg S, Paulmann N, et al. Mae histaminyleiddiad gweddillion glutamine yn addasiad ôl-gyfieithu newydd sy'n gysylltiedig â signalau protein G. FEBS Lett. 2012; 586:3819–24. https://doi.org/10.1016/j.febslet.2012.09.027 .
69. McNally W, Roth M, Young R, et al. Penderfyniad meintiol awtoradiograffeg corff cyfan o ddosbarthiad meinwe tacrin mewn llygod mawr yn dilyn dos mewnwythiennol neu drwy'r geg. Pharm Res. 1989;6:924– 32. https://doi.org/10.1023/A:1015933210803.
70. Cumming P, Reiner PB, Vincent SR. Atal histamine ymennydd llygod mawr-N-methyltransferase gan 9-amino-1,2,3,{7}}tetrahydroacridine (THA). Biochem Pharmacol. 1990; 40: 1345-50. https://doi.org/10. 1016/0006-2952(90)90402-7.
71. Cavallito JC, Nichol CA, Brenckman WD, et al. Atalyddion hydoddadwy lipid o dihydrofolate reductase. I. Cineteg, dosbarthiad meinwe, a graddau metaboledd pyrimethamine, methoprene, ac etorffin yn y llygoden fawr, y ci, a'r dyn. Dispos Metab Cyffuriau. 1978; 6:329–37.
72. Nishibori M, Oishi R, Itoh Y, et al. 9-Amino-1, 2, 3, 4-Mae tetrahydroacridine yn atalydd cryf o histamin N-methyltransferase. Jpn J Fferyllol. 1991; 55:539-46. https://doi.org/10.1254/jjp.55 . 539.
73. Hough LB, Khandelwal JK, Gwyrdd YH. Atal metaboledd histamin yr ymennydd gan fethoprene. Biochem Pharmacol. 1986;35:307–10. https://doi.org/10.1016/0006-2952(86)90530-7.
74. Kaneko H, Koshi S, Hiraoka T, et al. Atal anaf atdlifiad ôl-isgemig i'r aren gan diamine oxidase. Biochim Bioffys Acta. 1998; 1407: 193-9. https://doi.org/10.1016/S0925- 4439(98)00039-8.
75. Koshi S, Inoue M, Obayashi H, et al. Atal anaf atdlifiad ôl-isgemig i'r coluddyn bach gan diamine oxidase. Biochim Bioffys Acta. 1991; 1075: 231-6. https://doi.org/10.1016/ 0304-4165(91)90271-H.
Matthias Karer1 · Marlene Rager‑Resch1 · Teresa Haider2 · Karin Petroczi1 · Elisabeth Gludovacz3 · Nicole Borth3 · Bernd Jilma1 · Thomas Boehm1
1 Adran Ffarmacoleg Glinigol, Prifysgol Feddygol Fienna, Waehringer Guertel 18-20, 1090 Fienna, Awstria
2 Adran Niwroffisioleg, Canolfan Ymchwil yr Ymennydd, Prifysgol Feddygol Fienna, Fienna, Awstria
3 Adran Biotechnoleg, Prifysgol Adnoddau Naturiol a Gwyddorau Bywyd, Fienna, Awstria
