Mae Echinacoside yn Hyrwyddo Ymlediad Celloedd Epithelial Tiwbaidd Arennol Dynol Trwy Rhwystro'r Llwybr Signalu NF-κB wedi'i gyfryngu gan HBX/TREM2

Cyswllt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-bost:audrey.hu@wecistanche.com

YuFan ZHanG , QinFanG Wu , liMin ZHong , donGWei GonG

Haniaethol.

Mae angen protein firws Hepatitis B X (HBX) ar gyfer atgynhyrchu HBV ac mae'n chwarae rhan yn natblygiad hepatitis mewn pobl. Fodd bynnag, nid yw swyddogaeth sylfaenol HBX yn ystod glomerulonephritis cronig a achosir gan HBV (HBV-Gn) yn hysbys. (echinacoside o cistanche)(ecH) yn glycosid ffenylethanoid o'r genws Cistanche, sy'n meddu ar weithgareddau gwrthiapoptosis a niwro-amddiffynnol cryf. yn yr astudiaeth bresennol, archwiliwyd swyddogaeth HBX a'r berthynas rhwng HBX ac ecH mewn celloedd epithelial tiwbaidd arennol dynol (rTecs; HK-2 llinell gell). Defnyddiwyd dadansoddiadau Pcr meintiol trawsgrifio cefn a gorllewinol i feintioli lefelau mynegiant mRNA a phrotein HBX mewn celloedd HK-2, yn y drefn honno. Perfformiwyd yr assay Kit cyfrif celloedd-8 i ddadansoddi amlhau celloedd. Defnyddiwyd dadansoddiad cytometreg llif i bennu cyfradd apoptosis. Dangosodd HBX effeithiau gwrth-proliferative a proapoptotig mewn celloedd HK-2 ac roedd yn gysylltiedig yn gadarnhaol â derbynnydd sbarduno a fynegir ar fynegiant cell myeloid 2 (TreM2). Ymhellach, amharodd ECH ar swyddogaeth HBX mewn celloedd HK-2, gan weithredu fel atalydd HBX. Ar ben hynny, defnyddiwyd atalydd NF-κB penodol, PdTc, i archwilio ymhellach y berthynas rhwng HBX a nF-κB. Roedd y canlyniadau'n awgrymu bod nF-κB yn ymwneud â llwybr signalau HBX/TreM2 a mynegiant TreM2 wedi'i reoleiddio'n negyddol yn RTECS. Darparodd yr astudiaeth bresennol fewnwelediadau newydd i swyddogaeth HBX, a nododd hefyd werth posibl ECH fel asiant therapiwtig ar gyfer HBV-Gn.

Rhagymadrodd

Mae firws Hepatitis B (HBV) yn firws Hepadnaviridae, sy'n arwain at hepatitis acíwt a chronig mewn pobl (1). Mae HBV, nid yn unig yn achosi haint parhaus neu dros dro yn yr afu ond mae hefyd yn heintio meinwe allhepatig, gan gynnwys y pancreas, dwythell y bustl, y system lymffoid a'r arennau (2). Ar ben hynny, mae haint HBV yn gysylltiedig yn agos â glomerulonephritis cronig (HBV-Gn); fodd bynnag, nid yw mecanweithiau moleciwlaidd HBV yn ystod HBV-Gn yn cael eu deall yn llwyr (3,4).

Mae angen protein firws hepatitis B rheoleiddiol HBV X (HBX) ar gyfer atgynhyrchu HBV (5,6). mae nifer o astudiaethau wedi nodi bod HBX yn hybu amlhau celloedd yn ystod hepatocarsinoma sy'n gysylltiedig â haint HBV (7-9). Mae celloedd epithelial tiwbaidd arennol dynol (rTecs) yn rhan fawr o'r interstitiwm tiwbaidd arennol ac yn chwarae rhan weithredol mewn llid arennol (10). Mae cysylltiad agos rhwng apoptosis rTec a chamweithrediad yr interstitium tiwbaidd, sydd wedyn yn arwain at ddilyniant HBV-Gn (10). Mynegir HBX yn bennaf mewn celloedd rTec ac mae'n achosi apoptosis rTec a briwiau tiwb arennol mewn cleifion â HBV-Gn (11,12). Ar ben hynny, adroddwyd bod HBX yn atal y toreth o rTecs llygod mawr (13), ac mae gorfynegiant HBX yn cyflymu dilyniant cylchred celloedd o G1 i gyfnod S mewn rTecs cynradd, gan arwain at arestiad cylchred celloedd yn y cyfnod S ( 14 ). Felly, gall nodi atalydd HBX ddarparu therapiwtig newydd ar gyfer HBV-Gn. Fodd bynnag, nid yw union rwydwaith moleciwlaidd HBX mewn rTecs dynol yn cael ei ddeall yn llwyr.(echinacoside o cistanche)(ecH) yn gyfansoddyn naturiol a dynnwyd oCistancheplanhigion, sy'n dangos effeithiau antiapoptotig a gwrthlidiol (15,16). Nododd astudiaeth flaenorol fod ecH yn cymell ymlediad ac yn atal apoptosis celloedd epithelial berfeddol (17). Ar ben hynny, adroddwyd bod ecH yn cyflymu adfywiad esgyrn trwy gynyddu amlder celloedd osteoblast (18). Gall ecH hefyd leihau dyblygu HBV, mynegiant antigen a llid mewn celloedd epithelial berfeddol llygod mawr (16,19). Fodd bynnag, nid yw effaith fiolegol ecH ar rTecs wedi'i hegluro'n llawn.

Roedd gorfynegiant TreM2 yn hybu toreth o gelloedd glioma (22). Mewn cyferbyniad, mae dymchwel TreM2 yn lleihau trawsleoli nF-κB i'r cnewyllyn mewn celloedd pulposus cnewyllyn dynol dirywiol (23). At hynny, mae TreM2 wedi'i nodi fel targed therapiwtig newydd ar gyfer dirywiad disg rhyngfertebraidd dynol (23). Fodd bynnag, ni adroddwyd am swyddogaeth fiolegol TreM2 mewn rTecs dynol. yn yr astudiaeth bresennol, ysgogwyd gorfynegiant HBX (oeHBX) mewn llinell gell rTecs dynol (HK-2) ​​ac wedi hynny, effaith ecH (echinacoside o cistanche) ar gelloedd oeHBX a drosglwyddwyd yn cael ei ymchwilio. Nod yr astudiaeth bresennol oedd ymchwilio i swyddogaethau HBX a gwerth posibl ecH fel cyfrwng therapiwtig effeithiol ar gyfer HBV-Gn.

Defnyddiau a dulliau

Cell diwylliant.Prynwyd y llinell gell rTec ddynol HK-2 oddi wrth Shanghai Yaji Biotechnology co., Ltd. Cafodd celloedd HK-2 eu meithrin mewn cyfryngau DME/F12 (cat. rhif. SH30023.01B; Hyclone; cytiva) wedi'i ategu â 10 y cant o serwm buchol ffetws (cat. rhif. 16000-044; Gibco; Thermo Fisher Scientific, gan gynnwys .), 2 mM l-glutamin ac 1 y cant penisilin/streptomycin (cat. rhif. P1400-100; Beijing Solarbio Science & Technology co., Ltd.) ar 37˚C gyda 5 y cant CO2.

RNA ynysu a gwrthdroi trawsgrifio-meintiol PCR (RT-qPCR).Echdynnwyd cyfanswm rna o gelloedd HK-2 gan ddefnyddio Trizol® (cat. no. 1596 -026; Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, inc.), yn ôl protocol y gwneuthurwr. Trawsgrifiwyd cyfanswm RNA i'r chwith yn cDNA gan ddefnyddio'r pecyn Synthesis cDNA Strand Cyntaf yn unol â phrotocol y gwneuthurwr (cat. rhif. K1622; Thermo Fisher Scientific, Inc.). Perfformiwyd qPCR gan ddefnyddio SYBr-Green premix yn unol â phrotocol y gwneuthurwr (cat. rhif. K0223; Thermo Fisher Scientific, Inc.) ar synhwyrydd amser real ABI-7300 (Applied Biosystems; Thermo Fisher Scientific, Inc.). Amodau PCR oedd: 95˚C am 10 munud ac yna 40 cylch o 95˚C am 15 eiliad, 60˚C am 45 eiliad. Roedd angen tri ailadrodd ar gyfer pob adwaith. Defnyddiwyd y parau preimio canlynol ar gyfer y qPCR: HBX ymlaen, 5'-GGcTGcTaGGTTGTacTG-3' a chefn, 5'-caGaGGTGaaGcGaaGTG -3'; TreM2 ymlaen, 5'-TGGcacTcTcaccaTTacG-3' a chefn, 5'-ccTccc aTcaTcTTccTTcac-3'; a GaPdH ymlaen, 5'-AAT cccaTcaccaTcTTc-3' a chefn, 5'-aGGcTGTTG TcaTacTTc-3'. mesurwyd lefelau mRNA gan ddefnyddio'r dull 2-ΔΔCq a'u normaleiddio i'r genyn cyfeirio mewnolGAPDH (24).

Gorfynegiant a dymchweliad.Er mwyn cymell gorfynegiant HBX a TreM2, mewnosodwyd y dilyniannau cDNA HBX neu TreM2 hyd llawn yn y fector plVX-puro (labordai technoleg lân, gan gynnwys) trwy dreuliad dwbl (Hindiii aEcoRI). Yn dilyn hynny, trosglwyddwyd y plasmid ailgyfunedig (1.5 µg) i gelloedd HK-2 (2x105). Trosglwyddwyd y ffug plasmid (fector gwag, 1 µg) yn dros dro i gelloedd HK-2 (2x105) fel rheolydd negyddol (oenc) gan ddefnyddio lipofectamine® 2000 (cat. no. 11668-027, Invitrogen, Thermo Fisher Gwyddonol, inc.). ecH(echinacoside o cistanche)(cath. rhif. 82854-37-3; Biopurify Phytochemicals, ltd.) ei hydoddi yn DMSO (cat. rhif. d2650; Sigma-Aldrich; Merck KGaa) ar y crynodiad o 1, 2.5, 5, 10, 20 a

50 mg/l yn y drefn honno; ac wedi'i ychwanegu at ddiwylliant celloedd oeHBX neu oeTreM2 wedi'u trawsosod. Dechreuodd yr arbrawf dilynol 48 h yn ddiweddarach.

Er mwyn dymchwel y mynegiant TreM2, cafodd tri ymyriad bach (si)RNAs (siTreM2-1, siTreM2-2 a siTreM2-3; 20 µM) yn targedu TreM2 eu syntheseiddio (Shanghai Majorbio Bio-Pharm Technology co ltd.) ac yna'n cael ei drawsnewid i gelloedd HK-2 (2x105) gan ddefnyddio lipofectamine® 2000 yn unol â phrotocol y gwneuthurwr (Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Inc.). Defnyddiwyd dilyniant siRNA sgramblo amhenodol (5'uucuccGaacGuGucacGu3, 25 nM) rheolaeth si-negyddol (nc) fel y rheolaeth negyddol. Mae'r locws wedi'i dargedu a'r dilyniannau o'r sirnas TreM2 i'w gweld yn Nhabl Si. Perfformiwyd yr arbrawf dilynol 48 awr yn ddiweddarach.

Gorllewinol blotio.Echdynnwyd cyfanswm protein o gelloedd HK-2

gan ddefnyddio byffer lysis RIPA (cat. rhif. BYl40825; Jrdun Biotech Co., Ltd.). Mesurwyd cyfanswm y protein gan ddefnyddio'r pecyn Assay Bicinchoninic Assay (cat. rhif. PICPI23223; Thermo Fisher Scientific, inc.) yn ôl protocol y gwneuthurwr a gwahanwyd 20 µg o brotein/lôn drwy SDS-PaGe ar gel 15 y cant. Canfuwyd densitometreg samplau gan ddefnyddio darllenydd microplate (dnM-9602, Pulangxin). Yn dilyn hynny, trosglwyddwyd y proteinau wedi'u gwahanu i bilen PVDF. Yn dilyn blocio gyda 5 y cant o laeth sych di-fraster am 1 h ar dymheredd yr ystafell, cafodd y bilen ei deor â gwrthgyrff cynradd (Tabl SII) ar 4˚C dros nos a'i hail-deor gyda'r igG gwrth-lygoden gwrthgyrff eilaidd (1: 1, 000, cath. rhif a0216, Sefydliad Biotechnoleg Beyotime) am 1 awr ar 37˚C. Delweddwyd y bandiau protein imiwn-adweithiol gan ddefnyddio system ecl (cytiva). Perfformiwyd blotiau yn driphlyg.GAPDHa H3 yn cael eu defnyddio fel rheolyddion llwytho ar gyfer proteinau cytoplasmig a niwclear, yn y drefn honno.

Canlyniadau

ECH (echinacoside o cistanche)yn atal y swyddogaeth o HBX mewn HK-2 celloedd.I asesu

ysgogwyd swyddogaeth HBX, gorfynegiant HBX mewn celloedd HK-2. Cafodd lefelau mrna a phrotein cymharol HBX eu huwchreoleiddio'n sylweddol mewn celloedd oeHBX o'u cymharu â chelloedd oenc (Ffig. 1a a B). Yn dilyn hynny, cafodd celloedd oeHBX eu meithrin â chrynodiadau gwahanol o ecH (1, 2.5, 5, 10, 20 a 50 mg/l; e1, e2.5, e5, e10, e20 ac e50, yn y drefn honno). Roedd gorfynegiant HBX yn lleihau'n sylweddol nifer y celloedd HK-2, a chafodd y gostyngiad hwn ei wrthdroi gan ecH mewn modd dos-ddibynnol yn 24 a 48 h (Ffig. 1c).

At hynny, nid oedd cyfradd amlhau celloedd oeHBX yn dangos unrhyw wahaniaeth arwyddocaol o'i gymharu â chelloedd wedi'u trin ag E1 (Ffig. 1c). Mewn cyferbyniad, cynyddodd triniaeth e10 yn sylweddol gyfradd amlhau celloedd oeHBX o'i gymharu â thriniaeth E20 ac E50 nad oedd yn dangos unrhyw wahaniaeth arwyddocaol (Ffig. 1c). Felly, archwiliwyd effaith ecH ar apoptosis mewn celloedd wedi'u trin e2.5, e5 ac e10-. Cynyddodd gor-fynegiant HBX yn sylweddol apoptosis celloedd HK-2, a gostyngodd cyfradd apoptosis celloedd oeHBX gyda thriniaeth ecH mewn modd dos-ddibynnol (Ffig. 1d). yn gyffredinol, roedd y canlyniadau'n awgrymu bod ecH yn atal swyddogaeth HBX mewn celloedd HK{-2 mewn modd sy'n dibynnu ar ddos.

TREM2 mynegiant yn rhwystredig gan ECH(echinacoside o cistanche) mewn trawsgludo oeHBX

celloedd.Defnyddiwyd rT-qPcr a blotio gorllewinol i archwilio lefelau mynegiant cymharol mrna a phrotein TreM2 mewn celloedd oeHBX, yn y drefn honno. Cafodd lefelau mrna TreM2 a mynegiant protein eu huwchreoleiddio'n sylweddol mewn celloedd oeHBX o'u cymharu â chelloedd oenc (Ffig. 2a a B). Fodd bynnag, gostyngodd ecH lefelau mynegiant TreM2 mewn celloedd oeHBX a drawsnewidiwyd mewn modd sy'n dibynnu ar ddos ​​(Ffig. 2a a B). Felly, roedd y canlyniadau'n awgrymu bod cysylltiad cadarnhaol rhwng mynegiant HBX a mynegiant TreM2, a nododd ymhellach effaith ataliol ecH ar HBX mewn celloedd HK-2.

Knockdown a gorfynegiant o TREM2 mewn HK-2 celloedd.Er mwyn asesu ymhellach swyddogaeth TreM2, ysgogwyd dymchwel TreM2 a gorfynegiant mewn celloedd HK-2 gan ddefnyddio ymyrraeth rna a fector lentifeirol, yn y drefn honno. Ar gyfer yr assay dymchwel, tri siRNAs targedu'r genyn dynolTREM2(siTreM2-1, siTreM2-2 a siTreM2-3) eu trawsgludo i gelloedd HK-2, a defnyddiwyd siRNA amhenodol fel rheolydd negyddol (sinc). llwyddodd pob un o'r tri syrna TreM2 i ddymchwel y mynegiant mewndarddol o TreM2 mewn celloedd HK-2 (Ffig. 3a a B). Fodd bynnag, arsylwyd ar y lefelau cymharol TreM2 mrna a mynegiant protein isaf yng nghelloedd trawsyrru siTreM2-1 a siTreM (Ffig. 3a a B), felly, siTreM2-1 a siTreM2-2- }}dewiswyd celloedd a drosglwyddwyd ar gyfer arbrofion dilynol. Ar gyfer yr arbrofion gorfynegiant, cafodd plasmid yn cynnwys y dilyniant TreM2cdna dynol hyd llawn ei adeiladu a'i drawsnewid wedyn i gelloedd HK-2 (oeTreM2). a

plasmid ffug yn gwasanaethu fel rheolaeth negyddol (oenc). Cynyddwyd lefel mynegiant TREM2 yn sylweddol mewn celloedd oeTREM2 o'i gymharu â chelloedd oenc (Ffig. 3c a d). Felly, defnyddiwyd celloedd oeTreM2 ar gyfer arbrofi dilynol.

TREM2 distewi yn lleihau yr apoptosis o oeHBX celloedd.Aseswyd proffil apoptosis celloedd oeHBX a drawslifwyd â siTREM2 neu sinc. Roedd cyfradd apoptosis celloedd oeHBX ynghyd â sinc yn sylweddol uwch o gymharu â chelloedd agored. Fodd bynnag, bu gostyngiad sylweddol yn y gyfradd apoptosis mewn celloedd oeHBX plus siTreM2-1 neu siTreM2-2 o gymharu â chelloedd oeHBX plws sinc (Ffig. 4a). Roedd y canlyniadau'n awgrymu bod dymchwel TreM2 yn atal swyddogaeth HBX yn ystod apoptosis celloedd HK-2.

Mae Survivin yn perthyn i atalydd teulu protein apoptosis, sy'n atal gweithgaredd apoptotig ac yn atal marwolaeth celloedd (25). Mae Targedu Survivin wedi'i nodi fel dull newydd o drin carcinoma celloedd arennol (26). Mae nF-κB hefyd yn atalydd apoptosis sy'n chwarae rhan mewn prosesau tiwmor gwrthiapoptotig (27). Ar ben hynny, mae cysylltiad agos rhwng actifadu caspase3 ag apoptosis (28). yn yr astudiaeth bresennol, mesurwyd cynnwys protein TreM2, Survivin a caspase3 hollt mewn celloedd HK-2. Gostyngwyd lefel mynegiant TREM2 yn sylweddol mewn celloedd oeHBX a siTreM2-1/2 o gymharu â chelloedd oeHBX ynghyd â sinc (Ffig. 4B). Cynyddwyd lefel mynegiant Survivin yn sylweddol mewn celloedd oeHBX a siTreM2-1/2 o gymharu â chelloedd oeHBX. yn ogystal, gostyngwyd lefel y mynegiant caspase3 hollt yn sylweddol mewn celloedd oeHBX a siTreM2-1/2 o gymharu â chelloedd oeHBX a sinc (Ffig. 4B). Ymhellach, gostyngodd oeHBX yn sylweddol drawsleoliad NF-κB i'r cnewyllyn, a chynyddodd trawsluniad siTREM2-1/2 yn sylweddol drawsleoli niwclear nF-κB (Ffig. 4 B). Gyda'i gilydd, roedd y canlyniadau'n awgrymu bod TreM2 yn ffactor i lawr yr afon o HBX mewn celloedd HK-2, felly, gallai HBX hyrwyddo apoptosis trwy reoleiddio mynegiant TreM2 mewn rTecs dynol.

TREM2 gorfynegiant yn atal yr trawsleoli oNF-κB i yr cnewyllyn mewn HK-2 celloedd.Effaith ecH(echinacoside o cistanche)ar oeTreM2-dadansoddwyd celloedd a drosglwyddwyd. Roedd gorfynegiant TreM2 yn hybu apoptosis celloedd HK-2 (Ffig. 5a). Gostyngwyd apoptosis celloedd oeTREM2 yn sylweddol gan driniaeth ECH (E10; Ffig. 5A). At hynny, gostyngodd ECH fynegiant TreM2 mewn celloedd oeTreM2 yn sylweddol. Gostyngodd gorfynegiant TREM2 lefelau mynegiant Survivin yn sylweddol, fodd bynnag, cafodd y gostyngiad hwn mewn mynegiant ei wrthdroi gan ecH. yn ogystal, cynyddwyd lefelau mynegiant protein caspase wedi hollti3 yn sylweddol mewn celloedd oeTreM2 o gymharu â chelloedd oenc; effaith a leihawyd yn sylweddol gan driniaeth ECH. Ar ben hynny, hyrwyddodd ecH drawsleoli nF-κB i'r cnewyllyn mewn celloedd oeTreM2 (Ffig. 5 B). Gyda'i gilydd, dangosodd y canlyniadau fod ecH hefyd yn atal swyddogaeth TreM2 mewn celloedd rTec dynol.

Swyddogaethau HBX yn attal gan yr NF-κB atalydd PDTCmewn dynol RTECs.Er mwyn asesu ymhellach y berthynas rhwng

Cafodd celloedd HBX a nF-κB, HK-2 eu meithrin ag atalydd nF-κB penodol, PdTc (10 µmol/l; P10). Cynyddwyd cyfradd apoptosis celloedd oeHBX yn sylweddol o gymharu â chelloedd oenc (Ffig. 6a). Fodd bynnag, dangosodd celloedd oeHBX a PdTc gyfradd apoptosis sylweddol uwch o gymharu â chelloedd oeHBX. Ymhellach, mae lefelau mRNA cymharol a mynegiant protein TreM2 wedi gostwng mewn celloedd oeHBX ynghyd â PdTc o gymharu â chelloedd oeHBX (Ffig. 6 B). Felly, y canlyniadau

yn awgrymu bod nF-κB yn rheoleiddio mynegiant TreM2 yn negyddol mewn celloedd a drosglwyddir oeHBX.

NF-κB atalydd PDTC yn atal TREM2 hyrwyddwr gweithgaredd mewn oeHBX celloedd.lluniwyd gohebydd luciferase (pGl3-enhancer-luc2) yn cynnwys y dilyniant hyrwyddwr math gwyllt o TreM2 (pGl3-enhancer-luc2-pTreM2) a'i drawsnewid wedyn yn oenc , oeHBX a oeHBX ynghyd â chelloedd diwylliedig P10.

Cynyddwyd gweithgaredd luciferase fector y gohebydd sy'n cynnwys yr hyrwyddwr TREM2 math gwyllt yn sylweddol mewn celloedd oeHBX o'i gymharu â chelloedd oenc. Fodd bynnag, ataliodd PdTc weithgaredd luciferase y gohebydd yn sylweddol mewn celloedd oeHBX (Ffig. 7). yn gyffredinol, dangosodd y canlyniadau fod PdTc yn atal trawsgrifio TreM2 trwy atal gweithgaredd hyrwyddwr TreM2 mewn celloedd oeHBX.

Trafodaeth

Mynegir HBX yn bennaf yn rTecs cleifion â HBV-Gn, ac mae'n gweithredu fel penderfynydd pathogenesis firaol (11,29). Felly, mae cynyddu gwybodaeth am swyddogaeth rhwydwaith moleciwlau HBX yn gam hanfodol wrth ddatblygu dull newydd o drin HBV-Gn. Nod yr astudiaeth bresennol oedd archwilio ymhellach swyddogaeth HBX ac archwilio ei rwydwaith moleciwlaidd posibl mewn rTecs dynol.

Mae HBX yn atal toreth o rTecs (11). yn yr astudiaeth bresennol, nodwyd swyddogaethau gwrth-ymlediad a phro-apoptosis HBX mewn RTECs dynol, gan awgrymu bod HBX yn atal datblygiad rTecs dynol. Dangosodd astudiaeth flaenorol fod ecH(echinacoside o cistanche)yn atal dyblygu HBV a mynegiant antigen (19). yn yr astudiaeth bresennol, ecH(echinacoside o cistanche)roedd triniaeth yn amharu ar weithrediad HBX mewn celloedd HK-2, felly, gall ecH mewn celloedd HK-2 effeithio ar HBX.

ADRODDIADAU Meddyginiaeth Foleciwlaidd 22: 1137-1144, 2020 1143

Ymhellach, roedd y canlyniadau'n awgrymu bod ecH(echinacoside o cistanche)Gall fod yn asiant therapiwtig posibl ar gyfer HBV-Gn.

Mae TreM2 yn dderbynnydd imiwnedd cynhenid ​​​​sy'n chwarae rhan yn yr ymateb llidiol (30). Yn yr astudiaeth bresennol, roedd cysylltiad cadarnhaol rhwng mynegiant HBX a mynegiant TreM2 mewn RTECS dynol. Ar ben hynny, gostyngodd dymchweliad TREM2 yn sylweddol gyfradd apoptosis celloedd oeHBX, ac ecH(echinacoside o cistanche)roedd triniaeth yn lleihau effaith oeTreM2 ar apoptosis celloedd. Gyda'i gilydd, roedd y canlyniadau hyn yn awgrymu bod TreM2 wedi'i dargedu gan HBX mewn celloedd HK-2. Felly, ecH(echinacoside o cistanche)Gall atal apoptosis rTecs dynol trwy rwystro gweithgaredd y llwybr signalau HBX/TreM2.

Dangosodd adroddiad blaenorol fod nF-κB nid yn unig yn chwarae rhan mewn apoptosis celloedd ond hefyd yn ymwneud â rheoleiddio ymatebion imiwn a llid (31). At hynny, mae TreM2 yn cael ei gyfryngu gan y microRNA sy'n sensitif i nF-κB-34a yn ystod clefyd Alzheimer a dirywiad macwlaidd (32,33). yn yr astudiaeth bresennol, cynyddwyd cyfradd apoptotig celloedd oeHBX yn sylweddol ym mhresenoldeb PdTc . Hyd eithaf ein gwybodaeth, awgrymodd yr astudiaeth bresennol am y tro cyntaf bod atalydd NF-κB PdTc wedi atal gweithgaredd hyrwyddwr TreM2. At hynny, roedd y canlyniadau'n awgrymu bod TreM2 yn rheoleiddio trawsleoli nF-κB i'r cnewyllyn mewn celloedd HK-2 yn negyddol, ond ei fod yn gysylltiedig yn gadarnhaol â lefelau mynegiant caspase3 hollt. Chwaraeodd TreM2 rôl groes mewn celloedd HK-2 i'w rôl mewn pulposus cnewyllyn dirywiol dynol a chelloedd glioma (22,23). Felly, awgrymodd yr astudiaeth bresennol y gallai fod gan TreM2 swyddogaethau gwahanol mewn gwahanol fathau o gelloedd dynol.

Gyda'i gilydd, roedd yr astudiaeth bresennol nid yn unig yn nodi bod nF-κB yn elfen newydd o'r llwybr signalau HBX/TreM2 ond hefyd yn awgrymu bod nF-κB yn rheoleiddio mynegiant TreM2 mewn rTecs dynol yn negyddol. Fodd bynnag, prif gyfyngiadau'r astudiaeth bresennol oedd diffygmewn vivoarbrofion a data clinigol. Felly, ymhellachmewn vivoac mae angen astudiaethau clinigol i gadarnhau canfyddiadau'r astudiaeth bresennol.

yn yr astudiaeth bresennol, swyddogaeth ecH(echinacoside o cistanche)ac roedd y canlyniadau'n awgrymu effeithiau posibl ecH(echinacoside o cistanche)ar y llwybrau signalau mewn rTecs dynol. At hynny, fe wnaeth yr astudiaeth bresennol wella'r wybodaeth bresennol am swyddogaeth fiolegol ecH mewn celloedd rTec dynol ac awgrymodd hefyd ei botensial fel cyfrwng therapiwtig newydd ar gyfer HBV-Gn.

Cyfeiriadau

1. Karayiannis P: firws Hepatitis B: firoleg, bioleg moleciwlaidd, cylch bywyd, a lledaeniad intrahepatig. Hepatoleg rhyngwladol 11: 1-9, 2017.

2. Seeger c a Mason WS: Bioleg firws Hepatitis B. Microbiol Mol Biol rev 64: 51-68, 2000.

3. Usama e , ana Maria S, W ray K a Fervenza Fc: Trin neffropathi sy'n gysylltiedig â firws hepatitis B. nephron clin Pract 119: c41-c49, 2011.

4. Zhang Y, li J, Peng W, Yu G, Wang l , chen J a Zheng F: Glomerulonephritis aciwt Ôl-heintus sy'n gysylltiedig â HBV: adroddiad o 10 achos. PloS un 11: e0160626, 2016.

5. Slagle Bl a Bouchard MJ: Feirws Hepatitis B X a rheoleiddio mynegiant Genynnau Feirysol. oer Spring Harb Perspect Med 6: a021402, 2016.

6. Guerrieri F, Belloni l , d'andrea d, Pediconi n, Pera l , Testoni B, Scisciani c, Floriot o, Zoulim F, Tramontano a,et al: Adnabod targedau genomig HBx uniongyrchol ar draws y genom. Genomeg BMc 18:184, 2017.

7. Shi T, Hua Q, Ma Z a lv Q: is-reoleiddio mir-200a{-3p a achosir gan firws hepatitis B X (HBx) protein yn hybu amlhau celloedd a goresgyniad mewn heintiau HBV sy'n gysylltiedig â hepato- carcinoma. Pathol res Pract 213: 1464-1469, 2017.

8. Tian Y, Xiao X, Gong X, Peng F, Xu Y, Jiang Y a Gong G: Mae HBx yn hyrwyddo amlhau celloedd trwy darfu ar y traws-siarad rhwng mir-181a a PTen. Cynrychiolydd gwyddonol 7: 40089, 2017.

9. Idris Me, Hachem H, Koering c , Merle P, Thénoz M, Montreux F, a Wattel e: Mae HBx yn sbarduno naill ai heneiddedd cellog neu amlhau celloedd yn dibynnu ar ffenoteip cellog. J Feirol Hepat 23: 130-138, 2016.

10. Wang X, Wang l , Zhu n, Zhou Y, Gu lJ a Yuan WJ: Mae firws Hepatitis B protein X yn modiwleiddio ymatebion celloedd T a macrophage tiwbaidd epithelial arennol a achosir gan gelloedd T a macrophage. Cell imiwnol Biol 94: 266-273, 2016.

11. He P, Zhang d, li H, Yang X, li d, Zhai Y, Ma l a Feng G: Mae protein firws Hepatitis B X yn modiwleiddio apoptosis mewn celloedd epithelial tiwbaidd procsimol arennol dynol trwy actifadu llwybr signalau JaK2/STAT3. int J Mol Med 31:1017-1029, 2013.

12. Yang Y, Wang X, Zhang Y a Yuan W: Mae protein firws Hepatitis B X a cytocinau proinflammatory yn synergedd i wella apoptosis a achosir gan y Llwybr o gelloedd tiwbaidd arennol trwy uwchreoleiddio dr4. int J Biochem cell Biol 97: 62-72, 2018.

13. He P, Zhou G, Qu d, Zhang B, Wang Y a li d: Mae HBx yn atal amlhau ac yn achosi apoptosis trwy upregulation Fas/Fasl mewn celloedd epithelial tiwbaidd arennol llygod mawr. J neffrol 26: 1033, 2013 .

14. Han W, luo M, He M, Zhu Y, Zhong Y, ding H, Hu G, liu l , chen Q a lu Y: Mae trawsfudiad genyn HBx yn effeithio ar gylchred celloedd epithelial tiwbaidd arennol cynradd trwy reoleiddio mynegiant cyclin. Mol Med cynrychiolydd 18: 1947-1954, 2018.