Cistanche: Mae Echinacoside yn Atal Twf Cell Adenocarsinoma Pancreatig Trwy Gymell Apoptosis Trwy'r Llwybr Protein Kinase a ysgogwyd gan Mitogen

Cyswllt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-bost:audrey.hu@wecistanche.com

WEI Wang, JINBIN LUO, YINGHUI LIANG a XINFENG LI

Haniaethol.

Mae cymhwyso clinigol cynhyrchion naturiol sy'n deillio o feddyginiaeth draddodiadol Tsieineaidd wedi ennill sylw mewn cemotherapiwteg canser.Echinacoside(ECH), un o'r ffenylethanoidau, wedi'i ynysu oddi wrth goesynnauCistanche(meddyginiaeth lysieuol Tsieineaidd) yn cael effeithiau amddiffynnol meinwe a gwrth-apoptotig ar y system nerfol ganolog. Fodd bynnag, mae'n parhau i fod yn aneglur i raddau helaeth a oes gan ECH weithgaredd sy'n atal tiwmor. Yn yr astudiaeth bresennol, dangoswyd y gall ECH atal twf celloedd adenocarcinoma pancreatig yn sylweddol trwy ysgogi cynhyrchu rhywogaethau ocsigen adweithiol a tharfu ar botensial pilen mitocondriaidd a thrwy hynny ysgogi apoptosis. Ymhellach, eglurwyd bod ECH(Echinacoside)yn atal twf celloedd tiwmor trwy fodiwleiddio gweithgaredd MAPK. I gloi, mae'r astudiaeth hon yn datgelu swyddogaeth newydd ECH (Echinacoside) wrth atal datblygiad canser, ac mae’n awgrymu y gallai defnyddio ECH fod yn strategaeth cemotherapiwtig bosibl ar gyfer canser.

Rhagymadrodd

Mae'r llwybr atal tiwmor p53 trwy anwytho'r atalydd tiwmor, ARF yn lliniaru'r diraddiad p53 wedi'i gyfryngu gan E{1} ligas munud dwbl (MDM) oncogenig (3). Mae hwn yn fecanwaith hunan-amddiffynnol a reoleiddir yn awtomatig sy'n atal celloedd rhag trawsnewid malaen. Yn nodedig, gall t53 atal gweithgaredd Myc trwy actifadu'n drawsgrifiadol, er enghraifft, miR-145 sy'n targeduMycmRNA ar gyfer tawelu cyfieithu (4,5), a thrwy hynny ffurfio dolen reoleiddio adborth negyddol.

Y strategaeth fwyaf syml ac effeithiol i drin canser yw lladd y celloedd canseraidd. Dangosir bod y cyffuriau gwrthganser a ddefnyddir yn gyffredin, megis cisplatin (6), actinomycin D (7), ac adriamycin (8) yn atal twf tiwmor trwy hyrwyddo apoptosis. Yn ddiweddar, mae tystiolaeth gynyddol wedi dangos bod nifer o gynhyrchion naturiol a deilliadau o blanhigion, yn enwedig o blanhigion meddyginiaethol a ddefnyddir mewn meddygaeth Tsieineaidd draddodiadol (TCM), yn arddangos swyddogaeth atal tiwmor trwy ysgogi apoptosis celloedd canser a bod ganddynt y potensial ar gyfer defnydd clinigol. mewn therapi canser (9). Er enghraifft, mae'r emodin anthraquinone naturiol wedi'i ynysu o sawl math o gelloedd canser (10,11). Camptothecin, sy'n deillio o'r 'goeden hapus' Tsieineaidd,Camptotheca craffter, yn gynnyrch naturiol gwerthfawr sy'n atal y ligation o DNA yn dilyn topo I-gyfryngu toriad llinyn (12). Mewn astudiaeth carfan ôl-weithredol arall yn seiliedig ar boblogaeth o gyfanswm o 729 o gleifion â chanser datblygedig y fron, awgrymwyd y gall therapi TCM gyfrannu at driniaeth canser. O'r garfan hon, roedd 115 o gleifion yn ddefnyddwyr TCM tra nad oedd 614 o gleifion yn defnyddio TCM. Dangosodd y dadansoddiad aml-amrywedd, o'i gymharu â'r rhai nad oeddent yn ddefnyddwyr, fod y defnydd o TCM yn gysylltiedig â risg sylweddol is o farwolaethau o bob achos (13). Roedd yr holl ganfyddiadau a grybwyllwyd uchod yn nodi bod TCM yn feddyginiaeth gyflenwol ac amgen bwysig y gellir ei defnyddio i drin canser.

llygod ag anaf acíwt i'r ysgyfaint (16,17). Hefyd, ECH(Echinacoside)dangoswyd ei fod yn cael effeithiau amddiffynnol ar feinwe nerfol ac yn gwella anhwylderau ymddygiad mewn modelau murine o glefyd Parkinson (18). Yn nodedig, canfuwyd bod ECH yn hyrwyddo amlhau celloedd ac yn atal apoptosis yng nghelloedd MODE-K epithelial berfeddol y llygoden (19). Hyd yn hyn, fodd bynnag, mae llai o sylw wedi'i roi i rôl bosibl ECH mewn atal canser.

Yn yr astudiaeth hon, archwiliwyd a yw triniaeth ECH yn effeithio ar dwf celloedd tiwmor ac amlhau ac a yw ECH(Echinacoside)yn cymell apoptosis, yn dyrchafu cynhyrchiad rhywogaethau ocsigen adweithiol (ROS) ac yn lleihau potensial pilen mitocondriaidd (MMP), ac o ganlyniad yn atal twf celloedd tiwmor. At hynny, nod yr astudiaeth bresennol oedd nodi'r mecanweithiau moleciwlaidd sy'n gyfrifol am atal twf celloedd trwy gyfrwng ECH.

Defnyddiau a dulliau

Cell llinell, adweithydd, a gwrthgyrff.Cafodd celloedd adenocarcinoma pancreatig SW199 0 (ATCC, Manassas, VA, UDA) eu meithrin yng nghyfrwng Eagle wedi'i addasu ag Dulbecco ynghyd â serwm buchol ffetws 10 y cant, penisilin 50 U/ml a 0.1 mg/ml streptomycin ar 37˚C mewn a 5 y cant CO2 awyrgylch llaith. ECH(Echinacoside)ei brynu oddi wrth Jrdun Biotechnology Corp. (Shanghai, Tsieina). Prynwyd gwrthgyrff yn erbyn AKT, P-AKT, ERK, P-ERK, JNK, p-JNK, P38, p-P38, a GAPDH gan Cell Signaling Technology (Danvers, MA, UDA); prynwyd gwrth-Bax a gwrth-Bcl-2 oddi wrth Santa Cruz Biotechnology Inc. (Santa Cruz, CA, UDA); a phrynwyd gwrth-Casase-3 gan Abcam (Shanghai, Tsieina).

Cell hyfyweddassay. I asesu cyfradd twf celloedd tiwmor, defnyddiwyd pecyn Cyfrif Cell{{{0}} (CCK-8; Dojindo Molecular Technologies, Rockville, MD, USA) yn unol â chyfarwyddiadau'r gwneuthurwr. Cafodd ataliadau celloedd eu hadu ar 5,000 o gelloedd fesul ffynnon gyda thriniaeth ECH am 0, 12, 24, 48 neu 72 h mewn 96 -platiau meithrin ffynnon. Penderfynwyd atal twf celloedd trwy ychwanegu adweithydd WST-8 o'r pecyn CCK-8 ar grynodiad terfynol o 10 y cant i bob ffynnon, a mesurwyd amsugnedd y samplau ar 450 nm gan ddefnyddio darllenydd microplate (Multiskan MK3; Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA, UDA).

Hoechst 33342 staenio.Cafodd celloedd (cydlif 60 y cant) eu trin â Hoechst 33342 (Sefydliad Biotechnoleg Beyotime, Haimen, Tsieina) mewn crynodiad terfynol o 1µg/ml, wedi'i ddeor mewn deorydd 37˚C am 15 munud, wedi'i olchi â halwynog wedi'i glustogi â ffosffad ddwywaith, wedi'i osod mewn paraformaldehyde 4 y cant am 30 munud ar dymheredd yr ystafell, a'i osod ar sleidiau. Gwelwyd newidiadau morffolegol y cnewyllyn cell o dan ficrosgop fflworoleuedd (Olympus BX51, Melville, NY, UDA). Roedd y niwclysau arferol yn grwn ac wedi'u staenio'n las golau, tra bod y niwclysau apoptotig wedi'u crebachu a'u staenio'n las llachar.

Fflworoleuedd-activated cell didoli (FACS) dadansoddiadau.Ar gyfer asesu apoptosis, defnyddiwyd pecyn canfod fluorescein isothiocyanate (FITC)-Atodiad V Apoptosis (BD Biosciences, Shanghai, China) yn unol â chyfarwyddiadau'r gwneuthurwr. Yn gryno, golchwyd celloedd 5x104 â PBS oer iâ, eu hailddarparu mewn byffer rhwymo 0.1 ml (Sefydliad Biotechnoleg Beyotime), a'u staenio â 10 ml o Annexin V wedi'i gyfuno â FITC (10 mg/ml) a 10 ml propidium ïodid (PI) (50 mg/ml). Yn dilyn deori am 15 munud ar dymheredd ystafell yn y tywyllwch ac ychwanegu byffer rhwymo 400 ml, dadansoddwyd y celloedd gan cytomedr llif (C6; BD Biosciences, Shanghai, China).

Mesur o adweithiol ocsigen rhywogaeth (ROS).Er mwyn gwerthuso cynhyrchiad ROS, defnyddiwyd y pecyn Assay Rhywogaethau Ocsigen Adweithiol (Biotechnoleg Egnïol, Beijing, Tsieina) yn unol â chyfarwyddiadau'r gwneuthurwr. Yn gryno, cynaeafwyd celloedd (cydlif 80 y cant) a'u golchi â PBS cyn eu staenio â'r hydoddiant dihydroethidium (DHE) (Sefydliad Biotechnoleg Beyotime). Yna dadansoddwyd celloedd yn ôl dadansoddiadau cytometrig llif.

Mesur o mitocondriaidd pilen potensial (MMP).

Defnyddiwyd pecyn Assay ester tetramethylrhodamine methyl ester (TMRM) (ImmunoChemistry Technologies, Bloomington, MN, UDA) i ganfod y newidiadau mewn MMP. Yn gryno, cynaeafwyd celloedd (cydlif 80 y cant), eu golchi â PBS a'u staenio â TMRM am 15-20 munud mewn deorydd 37˚C. Yna roedd celloedd yn cael eu golchi unwaith gyda PBS ac yn destun dadansoddiadau llif cytometrig.

Imiwnoblottingdadansoddiadau. Cafodd y celloedd (cydlif 80 y cant) eu cynaeafu a'u gorchuddio mewn byffer RIPA (Jrdun Biotechnology) yn cynnwys 50 mM Tris-HCl, pH 7.4; NaCl 150 mM, EDTA 1 mM, 1 y cant NP-40, 1 y cant sodiwm asid deoxycholic a 0.1 y cant SDS ac atalyddion proteasome wedi'u hychwanegu'n ffres. Defnyddiwyd meintiau cyfartal o lysate celloedd clir ar gyfer dadansoddiad imiwnoblotting fel y disgrifiwyd yn flaenorol (20).

Ystadegol dadansoddi.Mynegir data meintiol fel y cymedr ± gwyriad safonol. Gwerthuswyd gwahaniaethau ystadegol gan brawf-t Myfyriwr heb ei baru gan ddefnyddio meddalwedd ystadegol SPSS 15.0. P<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">

Canlyniadau

ECH (Echinacoside)yn atal tiwmor celltwf. Er ei fod wedi cael ei adrodd bod ECH(Echinacoside)yn arddangos rôl amddiffynnol trwy atal apoptosis a signalau llidiol mewn celloedd somatig, megis celloedd epithelial niwronaidd a berfeddol (16-19), mae'n dal yn aneglur a yw ECH yn rheoli twf celloedd canseraidd ac amlhau. Er mwyn profi hyn, cynhaliwyd assay goroesiad celloedd trwy drin celloedd SW1990, sy'n deillio o adenocarcinoma pancreatig gradd II, gyda dosau titradiedig o ECH fel y dangosir yn Ffig. 1. Yn nodedig, dangoswyd bod ECH yn arafu twf celloedd tiwmor yn sylweddol mewn dogn -dibynnol yn ystod 5-cyfnod diwylliant o ddiwrnod (Ffig. 1).ECH sbardunauapoptosis. Gan fod colli apoptosis yn un o'r prif fecanweithiau achosol sy'n sail i'r toreth afreolus o gelloedd canser y pancreas (21), perfformiodd yr astudiaeth bresennol set o arbrofion i benderfynu a yw ECH yn sbarduno apoptosis. Yn gyntaf, trwy staenio cnewyllyn celloedd tiwmor â Hoechst 33342, dangoswyd bod ECH yn arwain at apoptosis mewn modd dos-ddibynnol (Ffig. 2A). Yn ogystal, cynhaliwyd dadansoddiadau FACS gan ddefnyddio staen V/PI Annexin i gadarnhau ymhellach effaith apoptotig ty ECH (Ffig. 2 B). Canran gyfartalog y celloedd apoptotig oedd 1.1 y cant o dan amodau diwylliant arferol, tra bod y ganran hon wedi cynyddu'n sylweddol i 10.6, 21.4 a 51.3 y cant mewn ymateb i driniaeth ECH mewn modd dos-ddibynnol (Ffig. 2 C). Mae'r canlyniadau hyn, ynghyd â'r assay hyfywedd celloedd a ddangosir yn Ffig. 1, yn dangos bod triniaeth ECH yn atal toreth o gelloedd tiwmor trwy sbarduno apoptosis.

cynhyrchu ethidium sy'n rhyngosod â DNA, yn cael ei ddefnyddio yn yr astudiaeth hon i werthuso cynhyrchiad ROS. Canfuwyd bod ECH, fel cyffuriau gwrthganser eraill, hefyd yn ysgogi cynhyrchu ROS mewn modd sy'n dibynnu ar ddos ​​fel y dangosir gan y dwysedd fflworoleuedd uchel ar driniaeth ECH (Ffig. 3).

ECH (Echinacoside)yn lleihau MMP.Dangoswyd bod camweithrediad mitocondriaidd yn gysylltiedig ag anwythiad apoptosis. Dangoswyd bod agor mandwll trawsnewid athreiddedd mitocondriaidd yn achosi dadbolaru'r potensial trawsbilen a rhyddhau ffactorau pro-apoptotig (23). Felly, profwyd a allai ECH achosi colli MMP mewn celloedd tiwmor trwy berfformio assay TMRM, sy'n ddull sydd wedi'i hen sefydlu, gan fod dwyster fflworoleuedd TMRM yn gymesur â photensial y bilen. Dangoswyd bod triniaeth ECH yn lleihau MMP yn sylweddol mewn modd sy'n dibynnu ar ddos ​​(Ffig. 4).ECH rheolaethau tiwmor cell twf trwy protein wedi'i actifadu gan mitogensail moleciwlaidd marwolaeth celloedd tiwmor wedi'i gyfryngu gan ECH, archwiliwyd gweithgaredd sawl llwybr signalau hanfodol, megis MAPK ac AKT (24,25), sy'n rheoli goroesiad a marwolaeth celloedd. Mae'r MAPKs yn cael eu cadw'n esblygiadol, kinases protein Ser/Thr sy'n cael eu cyfeirio at proline, gan gynnwys kinases allgellog a reoleiddir gan signal (ERKs), c-Mehefin NH2-cinase terfynell (JNKs) ac aelodau'r teulu p38 sy'n cael eu hactifadu trwy dri- rhaeadrau signalau kinase haen (26,27). Yn yr astudiaeth hon, aseswyd mynegiant MAPKs ac AKT, yn ogystal â'u ffurflenni ffosfforyleiddiad actifedig, a datgelwyd bod ECH yn atal gweithgaredd JNK ac ERK1/2 yn sylweddol, ond yn gwella gweithgaredd t38 (Ffig. 5). Yn nodedig, dangoswyd nad yw triniaeth ECH (Ffig. 5) yn effeithio ar weithgaredd AKT, sydd hefyd yn hanfodol bwysig ar gyfer amlhau celloedd. Yn ogystal, dangoswyd bod triniaeth ECH yn dyrchafu mynegiant Bax a Caspase-3 tra'n lleihau mynegiant Bcl-2 (Ffig. 5), sy'n gyson â Ffig. 2. Felly, mae'r canlyniadau'n dangos bod Mae ECH yn sbarduno apoptosis celloedd tiwmor trwy'r llwybr MAPK.

Trafodaeth

Hyd eithaf ein gwybodaeth, dyma'r astudiaeth gyntaf i ddangos bod gan ECH swyddogaeth atal tiwmor trwy sbarduno apoptosis (Ffig. 2), hyrwyddo cynhyrchu ROS (Ffig. 3) a chymell dadbolariad potensial pilen mitocondriaidd (Ffig. 4) , o ganlyniad yn arwain at ataliad twf celloedd tiwmor (Ffig. 1). Ar ben hynny, dangoswyd bod sail moleciwlaidd marwolaeth celloedd tiwmor wedi'i gyfryngu gan ECH yn digwydd trwy reoleiddio llwybrau signalau MAPK (Ffig. 5). Mae'r canfyddiadau hyn yn dangos swyddogaeth newydd ECH wrth atal tumorigenesis ac felly'n awgrymu y gallai fod yn asiant ymgeisiol ar gyfer therapi canser.

Gall y mwyafrif o gyffuriau gwrthganser achosi apoptosis celloedd tiwmor, heneiddedd a/neu ataliad cylchred celloedd, sy'n arwain at atal twf celloedd tiwmor ac amlhau. Mae arestiad cylchred celloedd yn ymateb cellog i signalau straen ysgafn sy'n caniatáu i gelloedd atgyweirio DNA sydd wedi'i ddifrodi cyn cychwyn synthesis neu mitosis DNA atgynhyrchu, tra bod apoptosis a heneiddedd (arestiad cylchred celloedd parhaol) yn digwydd mewn ymateb i signalau straen sy'n dileu celloedd anadferadwy neu falaen ( 28,29). Felly, dim ond effaith apoptotig ECH ar gelloedd tiwmor a aseswyd yn yr astudiaeth hon, gan fod lladd celloedd canseraidd yn faen prawf mawr ar gyfer gwerthuso cryfder asiant gwrthganser. Yn nodedig, dangoswyd bod ECH yn ysgogi mynegiantBax(Ffig. 5), genyn pro-apoptotig, a weithredir yn drawsgrifiadol gan yr atalydd tiwmor t53 (30). Felly, mae'n werth profi a all ECH actifadu'r llwybr signalau p53. Os felly, efallai y bydd ECH hefyd yn gallu cael arestiad cylchred celloedd dibynnol, heneiddedd, apoptosis neu awtophagi. Yn yr astudiaeth hon, eglurwyd swyddogaeth atal tiwmor ECH yn llinell gell adenocarcinoma pancreatig SW1990. Fodd bynnag, mae angen astudiaethau pellach sy'n arsylwi mwy o linellau celloedd canser y pancreas. Dangoswyd bod treigladau yn y protein oncogenig RAS a'r suppressor tiwmor p53 yn gysylltiedig â datblygiad canser y pancreas (31); fodd bynnag, nid yw llinell gell SW1990 yn cynnwys unrhyw dreiglad p53, yn ôl cronfa ddata p53 IARC (http://p53.iarc.fr/CellLines.aspx). Felly, mae'n bwysig ymchwilio i weld a all ECH effeithio ar dwf ac ymlediad llinellau celloedd canser pancreatig eraill gyda threigladau p53 gwahanol. Yn ogystal, byddai'n ddiddorol penderfynu a yw ECH yn gallu hyrwyddo apoptosis ac atal twf mathau eraill o diwmorau.

Dangoswyd bod drychiad ROS a gostyngiad MMP, a achoswyd gan driniaeth ECH, yn hanfodol mewn anwythiad apoptosis (22). Yn ogystal, canfuwyd y gall ROS ysgogi ocsidiad y mandyllau mitocondriaidd gan gyfrannu at ryddhau cytochromec, canolradd mewn apoptosis, oherwydd tarfu ar y MMP (22). Felly, mae angen penderfynu a yw ECH yn tarfu ar MMP yn anuniongyrchol drwy sefydlu ROS. Ar ben hynny, dangoswyd bod straen ocsideiddiol a achosir gan ROS hefyd yn ymwneud â modiwleiddio myrdd o signalau rheoli twf celloedd, gan gynnwys p53, NF-κB, HIFs a PI3K (32). Mae angen penderfynu a yw ECH yn rheoleiddio'r llwybrau signalau pwysig hyn ac, os felly, sut. Yn nodedig, mae straen ocsideiddiol yn achosi amryw o glefydau niwroddirywiol oherwydd y defnydd uchel o ocsigen, systemau gwrthocsidiol gwan a nodweddion gwahaniaethiad terfynol y system nerfol ganolog (33). Fodd bynnag, mae sawl astudiaeth wedi dangos bod gan ECH effeithiau amddiffynnol a gwrth-apoptotig ar feinwe nerfol. Yn hyn o beth, mae'n rhesymol damcaniaethu y gallai ECH leihau cynhyrchiad ROS yn y celloedd niwral â gwahaniaeth terfynell. Felly, mae angen penderfynu hefyd a yw rheoleiddio cynhyrchu ROS gan ECH yn dibynnu ar y statws gwahaniaethu celloedd. Felly, mae'r canlyniadau presennol ynghyd ag astudiaethau eraill yn datgelu y gall ECH, y TCM a ddefnyddir yn eang, fod yn strategaeth cemotherapiwtig bwysig nid yn unig ar gyfer trin clefydau niwroddirywiol ond hefyd carcinomas malaen.

Yn ddiweddar, mae defnyddio TCM mewn therapi canser wedi cael mwy a mwy o sylw. Mae potensial cynhyrchion naturiol o blanhigion meddyginiaethol a ddefnyddir yn TCM wedi'i gydnabod gan y gymuned wyddonol hyd yn oed yn y byd gorllewinol (9). Mae angen ymdrechion i egluro mecanweithiau gweithredu sylfaenol y cynhyrchion naturiol hyn, a allai arwain yn y pen draw at ddatblygu meddyginiaethau effeithlon a diogel ar gyfer therapi canser.

I gloi, dangosodd yr astudiaeth bresennol swyddogaeth ataliol tiwmor ECH ac mae hefyd yn ymhelaethu ar sail foleciwlaidd atal tiwmor wedi'i gyfryngu gan ECH, gan awgrymu felly y cymhwysiad clinigol posibl ECH mewn therapi canser.

Diolchiadau

Ariannwyd a chefnogwyd yr astudiaeth hon gan Raglen Allweddol Ymchwil Gwyddonol FMU (grant rhif 09ZD014). Hoffai'r awduron ddiolch i Biomedworld (Shanghai, Tsieina) am gymorth gyda golygu'r llawysgrif.

Cyfeiriadau

1. Hanahan D a Weinberg RA: Nodweddion canser: Y genhedlaeth nesaf. Cell 144: 646-674, 2011.

2. Alderton GK: Trawsgrifio: Effeithiau trawsgrifio MYC. Nat Parch Canser 14:513, 2014 .

3. Zindy F, Eischen CM, Randle DH, Kamijo T, Cleveland JL, Sherr CJ a Roussel MF: Mae signalau Myc trwy'r atalydd tiwmor ARF yn rheoleiddio p53-apoptosis dibynnol ac anfarwoli. Genes Dev 12: 2424-2433, 1998.

4. Mae Sachdeva M, Zhu S, Wu F, Wu H, Walia V, Kumar S, Elble R, Watabe K a Mo YY: t53 yn atal c-Myc trwy sefydlu'r atalydd tiwmor miR-145. Proc Natl Acad Sci USA 106: 3207-3212, 2009.

5. Liao JM, Cao B, Zhou X a Lu H: Mewnwelediadau newydd i swyddogaethau p53 trwy ei microRNAs targed. J Mol Cell Biol 6: 206-213, 2014.

6. Zamble DB a Lippard SJ: Trwsio cisplatin a DNA mewn cemotherapi canser. Tueddiadau Biochem Sci 20: 435-439, 1995.

7. Kleeff J, Kornmann M, Sawhney H a Korc M: Mae Actinomycin D yn cymell apoptosis ac yn atal twf celloedd canser y pancreas. Int J Cancer 86: 399-407, 2000.

8. Tacar O, Sriamornsak P a Dass CR: Doxorubicin: Diweddariad ar weithredu moleciwlaidd gwrthganser, gwenwyndra a systemau cyflenwi cyffuriau newydd. J Pharm Pharmacol 65: 157-170, 2013.

9. Efferth T, Li PC, Konkimalla VS a Kaina B: O feddyginiaeth draddodiadol Tsieineaidd i therapi canser rhesymegol. Tueddiadau Mol Med 13: 353-361, 2007.