Effaith Rhwystr Perfedd Glycoside Cistanche a Microbiota Perfedd mewn Clefyd Micealcoholig yr Afu

Crynodeb:

Amcan:Model y llygoden oclefyd yr afu alcoholig(ALD) ei sefydlu gan Lieber-Decarli porthiant hylif alcohol, ac effeithiauglycosidau ffenylethanoid Cistanche(CPhGs) ar rwystr berfeddol a chyfansoddiad microbiota perfedd llygod ALD wedi'u trafod.

Dull: Rhannwyd y llygod benywaidd 36 C57BL/6N ar hap yn grŵp arferol, grŵp arferol CPhGs, grŵp model, a grwpiau dos isel, canolig ac uchel CPhGs (175 mg·kg-1, 350 mg·kg{6 }}a 700 mg·kg-1), gyda 6 llygod. Sefydlu model llygoden ALD gan ddefnyddio porthiant hylif alcohol Lieber-Decarli. Roedd grŵp dos y CPhGs a grŵp arferol y CPhGs yn cael Gavage CPhGsby yn ddyddiol ar y dosau priodol. Canfu dadansoddwr biocemegol awtomatig lefelau Serum ALT, AST, TG a TC. Canfuwyd SerumTNF- , IL-1 , LPS, LBP, D-LA, DAO, a LBP yr afu gan ELISA. Canfuwyd lefelau TG a TC mewn samplau homogenad yr iau gan liwimetreg. Roedd meinwe'r afu wedi'i staenio â staen olew coch O ac AU. Cafodd y meinweoedd berfeddol eu staenio â staen AU acAB-PAS, ac imiwn-histocemeg Muc2. Casglwyd cynnwys berfeddol y grŵp arferol, grŵp arferol CPhGs, grŵp model, a grŵp dos uchel CPhGs, a chafodd y microbiota perfedd ei ddilyniannu.

Canlyniad: Sefydlwyd y model ALD yn llwyddiannus. O'i gymharu â'r grŵp arferol, cynyddwyd lefelau serwm ALT, AST, a TG, a lefelau'r iau TG a TC yn y grŵp model yn sylweddol (P<0.05). Histopathology showed that compared with the normal group, the liver cells in the model group showed obvious steatosis. Compared with the model group, the levels of serum TG liver TG, and TC in the CPhGs dose group decreased significantly (P<0.05). The serum ALT, AST, TNF-α, IL-1β, LPS, and LBP in the CPhGs high dose group were also significantly decreased (P<0.05). Compared with the model group, the number of fatty liver cells in the CPhGs high dose group was significantly reduced, the microvilli structure of jejunum epithelial cells was intact, and the expression of Muc2 was reduced in the colon.Compared with the model group, the flora of the CPhGs high dose group changed significantly (P<0.05). Compared with the normal group, the Allobaculum was significantly up-regulated in the model group (P<0.05). Compared with the model group, the abundance of Akkermansia in the CPhGs high dose group was significantly increased (P<0.01). Akkermansia was negatively correlated with Allobaculum (r = -0.701, P<0.01). 

Casgliad: Gall CPhGs leihau'r anaf rhwystr berfeddol a achosir gan ALD, a allchwarae rôl amddiffynnol trwy reoleiddio helaethrwydd a strwythur Akkermansia ac Allobaculum, ac yn effeithio ar yr haen mwcws homeostasisof y rhwystr mwcosol berfeddol.

Geiriau allweddol:CPhGs; clefyd yr afu alcoholig; rhwystr berfeddol; microbiota perfedd

DYFYNIAD ORGANIG NATURIOL GYDA 40% ECHINACOSIDE AC 16% ACTEOSIDE AR ​​GYFER

Gwasanaeth Cefnogol Wecistanche - Yr allforiwr cistanche mwyaf yn Tsieina:

E-bost:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Ffôn:+86 15292862950

Siop Am Fwy o Fanylion:

https://www.xjcistanche.com% 2fcistanche-siop

Mae alcohol wedi dod yn un o'r ffactorau risg pwysig ar gyferafiechydon cronig ledled y byd.Mae'r "Adroddiad Byd-eang ar Alcohol ac Iechyd 2018" a ryddhawyd gan Sefydliad Iechyd y Byd yn dangos bod tua 3 miliwn o bobl wedi marw oherwydd defnydd gormodol o alcohol ledled y byd yn 2016, gan gyfrif am 5.3% o'r cyfanswm [1]. Yn ein gwlad, mae afiechydon yr afu a achosir gan alcohol yn cynyddu o flwyddyn i flwyddyn a dyma'r ail achos mwyaf o sirosis yr afu [2], sydd wedi dod yn broblem iechyd cyhoeddus ddifrifol. Mae mecanweithiau cychwyn a dilyniant clefyd yr afu alcoholig (ALD) yn gymhleth ac yn niferus, yn bennaf mecanwaith difrod yr afu o metabolit acetaldehyde ethanol a rhywogaethau ocsigen adweithiol [3]. Yn eu plith, mae rôl yr "echel perfedd-afu" yn natblygiad ALD wedi bod yn Mae wedi denu cryn sylw [4-5]. Yr afu yw'r prif safle ar gyfer metaboledd ocsideiddiol alcohol. Gall yfed trwm hirdymor niweidio'r afu yn uniongyrchol, gan arwain at ALD [6]. Mae steatosis hepatig yn adwaith cynnar ar ôl yfed alcohol. Amcangyfrifir bod microbiota'r perfedd dynol (GM) yn 10 triliwn [ 7 ]. Cydbwysedd microecolegol sy'n cynnwys fflora berfeddol, firysau, ffyngau a metabolion.

Mae cydbwysedd, hynny yw, microecoleg berfeddol, wedi'i gysylltu'n agos â dilyniant ALD trwy'r "echel perfedd-afu", ond mae'r mecanweithiau perthnasol yn dal yn aneglur [8-9]. Mae'r rhwystr berfeddol a fflora yn dominyddu'r "echel perfedd-afu", ac mae dadreoleiddio GM a gorfynegiant ffactorau llidiol yn chwarae rhan bwysig yn nigwyddiad a datblygiad ALD [10-11].

Mae astudiaethau wedi canfod bod dadreoleiddio GM difrifol a gorfynegi ffactorau llidiol yn digwydd yn ystod digwyddiad a datblygiad ALD [12]. Bydd cymeriant cronig hirdymor neu gymeriant tymor byr o lawer o alcohol yn newid athreiddedd berfeddol, gan achosi LPS berfeddol i fynd i mewn i gylchrediad y porth, gan achosi ymateb llidiol a gwaethygu niwed i'r afu [12-13].

Mae Cistanche, fel deunydd meddyginiaethol Tsieineaidd nodweddiadol yn Xinjiang, wedi'i gofnodi yn Materia Medica Wu Pu o'r Wei a Jin Dynasties, "Compendium of Materia Medica" o Frenhinllin y Gân, a "Compendium of Materia Medica" o Frenhinllin Ming [14 ]. Mae ymchwil ffarmacolegol modern wedi canfod bod Cistanche phenylethanoid glycosides (CPhGs) yn chwarae rhan bwysig mewn ffibrosis gwrth-llid a gwrth-hepatig [15-16]. Fodd bynnag, mae diffyg ymchwil ar hyn o bryd ynghylch a all CPhGs reoleiddio swyddogaeth rhwystr berfeddol neu fflora berfeddol yn ALD a chael effaith hepatoprotective.

Defnyddiodd yr astudiaeth hon borthiant hylif alcohol Lieber-Decarli i sefydlu'r Sefydliad Cenedlaethol ar Gam-drin Alcohol ac Alcoholiaeth (NIAAA) [17] model llygoden anaf i'r afu alcoholig tymor byr i archwilio effaith CPhGs ar ficroecoleg berfeddol ALD. Dylanwad. Rhoddwyd sylw arbennig i effeithiau CPhGs ar swyddogaeth rhwystr berfeddol a homeostasis microbiota berfeddol mewn llygod model ALD. Mae hyn yn helpu i ddatgelu mecanwaith hepatoprotective CPhGs o safbwynt microecoleg berfeddol ac yn darparu cyfeiriad arbrofol ar gyfer datblygu cyffuriau.

1. Deunyddiau

1.1 Anifeiliaid

Prynwyd llygod benywaidd gradd C57BL/6N SPF, 17 ~ 20 g, gan Beijing Vitong Lihua Experimental Animal Technology Co., Ltd., rhif tystysgrif SCXK (Beijing) 2021-0006. Codwyd anifeiliaid a chynhaliwyd arbrofion yn amgylchedd SPF Canolfan Arbrofi Anifeiliaid Prifysgol Feddygol Xinjiang (SYXK (newydd) 2022-0003). llym

Cydymffurfio â gofynion lles anifeiliaid a moesegol Pwyllgor Moeseg Anifeiliaid Arbrofol Prifysgol Feddygol Xinjiang (IACUC-20220127-4).

1.2 Adweithyddion

Ethanol absoliwt, alcohol isopropyl (Ffatri Adweithydd Cemegol Tianjin Damao, rhifau swp 20230201 a 20190103 yn y drefn honno); Porthiant hylif rheoli Lieber-Decarli, porthiant hylif alcohol Lieber-Decarli (Daitz Biotechnology (Wuxi) Co., Ltd., niferoedd swp yn y drefn honno ar gyfer 710027 a 710260);

Gosodyn paraformaldehyde, sefydlyn Carnoy a microsgop electron (Wuhan Sevier Biotechnology Co., Ltd., rhifau swp CR2208028, CR2305094 a CR2210001 yn y drefn honno); Pecyn assay immunosorbent LBP (ELISA) sy'n gysylltiedig ag ensymau, pecyn TNF- ELISA, IL-1

Pecyn ELISA, cit ELISA D-LA, cit DAO ELISA, pecyn prawf lliwimetrig TG a phecyn prawf lliwimetrig TC (Wuhan Yilerite Biotechnology Co., Ltd., rhifau swp yw CV072V649815, CV112VX05028, CV106T8F3303, GY4{423}L)

GY010XN08244, GY03P04Z5104 a GY02DHB82603); Pecyn ELISA LPS (Wuhan Fein Biotechnology Co, Ltd., rhif swp U3126I069T); Pecyn assay ALT, pecyn assay AST, pecyn assay TG a phecyn assay TC (Shenzhen Mindray Biomedical Electronics Co, Ltd. Co, Ltd., niferoedd swp yw 140122014, 140223002, 141722001 a 141622017); Ateb staen AU, toddiant staenio Olew Coch O dirlawn, datrysiad staenio AB-PAS; Gwrthgorff cynradd Muc2, gwrthgorff eilaidd gwrth-lygoden gafr (Wuhan Sevier Biotechnology Co, Ltd., y niferoedd swp yw G1005, G1015, G1049, GB11344 a GB23301 yn y drefn honno).

1.3 Cyffuriau

Prynwyd dyfyniad Cistanche oddi wrthMae Xinjiang Hotan Dichen Pharmaceutical and Biological Co., Ltd. (echinaceaside Yn fwy na neu'n hafal i 40%, verbascoside Yn fwy na neu'n hafal i 16%, glycosid ffenylethanoid Yn fwy na neu'n hafal i 85%, rhif swp 20230103).

1.4 Offerynnau

Dadansoddwr biocemegol awtomatig BS-240VET (Shenzhen Mindray Biomedical Electronics Co., Ltd.); Microsgop electron trawsyrru HT7800 (Hitachi Manufacturing Co, Ltd., Japan).

2. Dull

2.1 Grwpio a sefydlu model anifeiliaid

Rhannwyd 36 o lygod ar hap yn grŵp arferol, grŵp gweinyddu arferol, grŵp model a grwpiau dos isel, canolig ac uchel CPhGs (175 mg·kg-1, 350mg·kg-1 a 700 mg·kg{{ 6}}), pob Grŵp o 6. Rhoddwyd porthiant hylif rheoli Lieber-Decarli i bob llygod yn gyntaf a'i addasu i fwydo am 3 diwrnod. arferol

Cafodd y grŵp rheoli a'r grŵp dosage arferol eu bwydo â phorthiant hylif rheoli Lieber-Decarli; cafodd y grŵp model a grwpiau dos isel, canolig ac uchel y CPhGs eu bwydo â hylif hylif alcohol LieberDecarli. Gan ddechrau o 4ydd diwrnod yr arbrawf, cynyddodd y grŵp model a'r grwpiau dos isel, canolig ac uchel CPhG yn raddol grynodiad alcohol y porthiant alcohol o 0% i 5%, a chynnal y porthiant alcohol o 5% tan diwedd yr arbrawf, a phwysodd 9 awr cyn casglu deunyddiau. 0.2 mL·10 g-1 wedi'i roi i'r stumog gyda 30% ethanol.

Mae'r holl borthiant yn cael ei baratoi a'i ddefnyddio nawr, a chaiff porthiant ffres ei ddisodli bob dydd o 17:00 i 19:00. Arsylwch fwyta, gweithgaredd a chyflwr meddwl y llygod bob dydd. Pan fydd y llygod yn y grŵp model yn ymddangos mewn cyflwr meddw fel diffyg rhestr, llai o weithgaredd, a llai o gymeriant bwyd, mae'n nodi bod y modelu yn llwyddiannus [17]. Pan ddechreuodd grwpiau dos isel, canolig ac uchel y CPhGs a'r grŵp gweinyddu arferol fwydo porthiant alcoholig, roedd hydoddiant CPhGs o grynodiad cyfatebol yn cael ei fesur bob dydd am gyfanswm o 14 diwrnod, a chafodd halwynog arferol ei fesur ar gyfer y gweddill.

2.2 Arsylwi cyffredinol

Gwelwyd bwyta, gweithgaredd, cyflwr meddwl ac ysgarthu'r llygod bob dydd; yn ystod y modelu a gweinyddu cyffuriau, cofnodwyd sefyllfa marwolaeth a phwysau'r llygod. Cyfernod organ=màs organ/(màs y corff/100)×100%.

2.3 Dewis anifeiliaid arbrofol

Ar ôl cael eu hamddifadu o fwyd a dŵr am 12 h, anestheteiddiwyd y llygod, tynnwyd peli eu llygaid, a chasglwyd gwaed cyn eu haberthu. Gosodwyd meinwe'r afu o'r llabed mwyaf mewn hydoddiant paraformaldehyd. Cafodd y meinwe jejunal ei wahanu'n gyflym ar rew a'i osod mewn gosodiad microsgop electron; Cafodd 3 cm o feinwe jejunal a cholon (heb fflysio'r cynnwys) ei wahanu a'i osod yng nghorff Carnoy. Gosodwyd 3 cm arall o feinwe jejunum a cholon (cynnwys wedi'i rinsio â halwynog ffisiolegol) mewn hydoddiant paraformaldehyd. Casglwyd cynnwys yr holl segmentau berfeddol yn cryovialau di-haint di-ensymau, wedi'u rhewi'n gyflym mewn nitrogen hylifol, ac yna'n cael eu trosglwyddo i oergell gradd -80 i'w storio.

2.4 ELISA a chanfod lliwimetrig dangosyddion homogenad serwm a meinwe'r afu

Defnyddiwyd yr offeryn biocemegol awtomatig i ganfod lefelau serwm ALT, AST, TG a TC; defnyddiwyd dull ELISA i ganfod lefelau serwm TNF- , IL-1 , LPS, LBP, DAO a D-LA, a lefelau LBP yr afu. Gweithredu yn unol â'r cyfarwyddiadau. I homogeneiddio meinwe'r afu, cymerwch 0.05~1.00 g o feinwe'r afu ffres, ychwanegwch alcohol isopropyl ar 2 ~ 8 gradd yn ôl cymhareb pwysau (g): cyfaint (mL) { {9}}:9, malu i homogenate, a centrifuge ar 20000g·min-1 15 min, cymerwch y uwchnatant a'i roi ar rew i'w brofi, a gweithredwch yn unol â'r cyfarwyddiadau. Canfod lefelau lliwimetrig o TG a TC mewn samplau homogenad meinwe'r afu.

2.5 staen AU ac Olew Coch O i ganfod patholeg meinwe'r afu

Ar gyfer staenio hematoxylin-eosin (AU), tynnwyd meinwe sefydlog yr afu, cafodd y paraffin ei dorri, ei staenio gan HE, a'i ddadhydradu a'i osod. Tynnwyd meinwe sefydlog yr afu allan, ei rewi wedi'i dorri, ei olchi ag alcohol isopropyl, ei staenio ag Oil Red O, ei selio, a'i arsylwi o dan ficrosgop ysgafn.

2.6 Staenio AU ac AB-PSA i ganfod arsylwi patholegol meinwe berfeddol

Cafodd meinwe Jejunal ei dynnu a'i osod mewn hydoddiant paraformaldehyd ar gyfer staenio AU; tynnwyd meinwe'r colon a'i osod yng ngosodiad Carnoy ar gyfer staenio AB-PAS. Camau imiwnohistocemeg: adrannau paraffin dadhydradu, adalw antigen, bloc peroxidase mewndarddol, blocio serwm, ychwanegu gwrthgorff cynradd, ychwanegu gwrthgorff eilaidd, gwrth-staen cnewyllyn celloedd ar ôl datblygu lliw, dadhydradu a mowntio, ac arsylwi o dan ficrosgop golau. Tynnwyd y meinwe jejunal, ei dorri'n ddarnau bach 1 mm × 1 mm × 1 mm, wedi'u gosod cyn y mislif, yn ôl-sefydlog, wedi'u dadhydradu, wedi'u mewnosod, wedi'u polymeroli, ac wedi'u torri'n ultrathinly. Arsylwyd y newidiadau microfili o gelloedd epithelial jejunal ym mhob grŵp o dan ficrosgop electron trawsyrru.

2.7 Dilyniannu a dadansoddi fflora coluddol gan ddefnyddio dull 16S

Cynnwys berfedd y grŵp arferol, grŵp dosio arferol, grŵp model a grŵp dos uchel CPhG, yn seiliedig ar V3-rhanbarth V4 341F (5'-CCTAYGGGRBGCASCAG-3') a 806R (5'-GGACTACNNNGGGTATCTAAT -3'), gan ddefnyddio technoleg dilyniannu trwybwn uchel 16S rDNA ar gyfer dilyniannu cymunedol bacteriol. Cwblhawyd yr arbrawf dilyniannu yn yr astudiaeth hon gan Shenzhen Microtech Technology Group Co., Ltd. Mae'r data dilyniannu microbiota perfedd yn yr astudiaeth hon wedi'u llwytho i fyny i'r Ganolfan Genedlaethol ar gyfer Gwybodaeth Biotechnoleg o dan rif prosiect PRJNA1006676.

Yn seiliedig ar ganlyniadau dadansoddi amrywiadau dilyniant amplicon (ASVs), perfformir amrywiaeth Alpha, dadansoddiad amrywiaeth Beta, anodi dosbarthiad rhywogaethau a dadansoddiad gwahaniaeth. Yn eu plith, mae mynegai amrywiaeth Alpha yn bennaf yn cynnwys mynegai Shannon a'r mynegai Chao1, ac mae'r prawf ystadegol yn defnyddio prawf Wilcoxon; PCoA

Perfformiwyd prif ddadansoddiad cydgysylltu (PCoA) gan ddefnyddio Anosim i ddadansoddi gwahaniaethau rhwng grwpiau; Defnyddiwyd LEfSe i ddadansoddi LEfSe) i gael rhywogaethau â gwahaniaethau sylweddol rhwng grwpiau. Perfformiwyd dadansoddiad biowybodeg gan ddefnyddio offer Bioincloud Platform (https://www.bioincloud.tech) Microtech Alliance.

2.8 Dadansoddiad ystadegol

Disgrifir yr holl ddata mesur fel igh̅± 𝑠. Ar gyfer data sy'n ufuddhau i'r dosbarthiad arferol ac yn bodloni'r prawf homogenedd amrywiant, defnyddir dadansoddiad un ffactor o amrywiant. Fel arall, defnyddir y prawf nad yw'n barametrig. Mae'r data'n cael ei ddadansoddi'n ystadegol gan ddefnyddio SPSS 24.0. P<0.05 means the difference is statistically significant.