Cynhwysion Effeithiol Cistanche: Dull Gwahanu A Phuro Glycosidau Phenylethanoid

Cyswllt:joanna.jia@wecistanche.com

Ynysu A Phuro Glycosidau Phenylethanoid O Cistanche Deserticola Trwy Gromatograffaeth Gwrth-gyfredol Cyflym

Li a, b, Rong Tsao b,*, Raymond Yang b, Chunming Liu a,

J. Christopher Young b, Honghui Zhu b

Adran Cemeg, Prifysgol Normal Changchun, Changchun 130032, Tsieina

b Canolfan Ymchwil Bwyd Guelph, Amaethyddiaeth a Bwyd-Amaeth Canada, 93 Stone Road West, Guelph, Ontario, Canada N1G 5C9

Derbyniwyd 31 Mai 2007; derbyniwyd ar ffurflen ddiwygiedig 16 Hydref 2007; Derbyniwyd 29 Hydref 2007

Crynodeb:

Pumpglycosidau ffenylethanoid(PhGs),echinacoside, cistanoside A, acteoside, isoacteoside, ac 20-acetylacteoside, eu hynysu a'u puro oCistanche deserticolaam y tro cyntaf gan gromatograffaeth gwrthgyfredol cyflym (HSCCC) gan ddefnyddio dwy system ddeuffasig, un yn cynnwys asetad ethyl–ethanol-dŵr (5:0.5:4.5, v/v/v) ac un arall o asetad ethyl–n-butanol-ethanol-dŵr ({{10}}.5:0.5:0.1:1, v/v/v/v). Mae cyfanswm o 28.5 mg o echinacoside, 18.4 mg oochr cistano A, 14.6 mg oacteosid, purwyd 30.1 mg o isoacteoside a 25.2 mg o 20-acetylacteoside o 1412 mg o'r dyfyniad n-butanol oCistanche deserticola, pob un ar fwy na 92.5 y cant purdeb fel y pennir gan HPLC. Cafodd y strwythurau eu nodi gan eu hamser cadw, UV, LC-ESI-MS yn y modd ïon negyddol, a'u cadarnhau gan arbrofion NMR. Trafodir patrwm darnio nodweddiadol LC-ESI-MSn y pum cyfansoddyn, a chanfyddir ei fod yn arf penodol a defnyddiol iawn ar gyfer adnabod adeileddol PhGs o'r planhigyn meddyginiaethol pwysig hwn.

Hawlfraint y Goron © 2007 Cyhoeddwyd gan Elsevier Ltd. Cedwir pob hawl.

Geiriau allweddol:Cistanche deserticola; Phenylethanoid;Echinacoside; Cistanoside A;Acteoside; Isoacteoside; 20-Asetylacteoside; HSCCC; LC-ESI-MS; NMR

1. Rhagymadrodd

Cistanche deserticolaMae YC Ma yn feddyginiaeth lysieuol Tsieineaidd adnabyddus ac fe'i defnyddiwyd yn helaeth mewn paratoadau traddodiadol tebyg i gynhwysion bwyd swyddogaethol neu atchwanegiadau bwyd heddiw (Wong, Li, Cheng, & Chen, 2006). Y prif gyfansoddion bioactif yn C. deserticola ywffenylethanoidglycosidau (PhGs), gan gynnwysechinacoside, acteoside, isoacteoside, 20-acetylacteoside, aochr cistano A(Kobayashi, Karasawa, & Miyase, 1984; Kobayashi et al., 1987). Mae PhGs wedi'u dosbarthu'n eang yn y deyrnas planhigion ac wedi cael eu hastudio'n helaeth ar gyfer eu swyddogaethau biolegol amrywiol megis hepatoprotective (Xiong et al., 1998), gweithgaredd gwrth-lidiol, gwrthnociceptive (Schapoval et al., 1998), a gweithgareddau gwrthocsidiol (Cheng , Wei, Guo, Ni, & Liu, 2005; Ef, Lau, Xu, Li, & But, 2000; Li, Wang, & Wang, 1997; Li, Wang, Zheng, Liu, & Jia, 1993; Wang, Jiang , Wu, & Wang, 2001; Xiong, Kadota, Tani, & Namba, 1996), gwella gweithrediad rhywiol (Xie & Wu, 1993; Zong, He, Wu, & Chen, 1996), ac effaith tawelyddol (Lu, 1998) .

Oherwydd y bioweithgareddau sylweddol uchod, mae angen llawer iawn o gyfansoddion pur ar frys fel safonau cyfeirio ac ar gyfer astudiaethau in vitro ac in vivo amrywiol sy'n ymwneud â defnyddio meddyginiaethau Tsieineaidd traddodiadol. Felly, daw angen dulliau effeithiol ar gyfer ynysu, puro, a nodweddu strwythurol PhGs. Fodd bynnag, mae gwaith o'r fath fel arfer yn gofyn am ddefnyddio camau cromatograffig lluosog ar gyfer glanhau samplau ac ynysu (Gross, Lahloub, Anklin, Schulten, & Sticher, 1988; Nishimura, Sasaki, Inagaki, Chin, & Mitsuhashi, 1991; Ravn, Nishibe , Sasahara, a Li, 1990; Shoyama, Matsumoto, & Nishioka, 1987), sydd fel arfer yn arwain at gyfraddau adfer isel oherwydd arsugniadau anghildroadwy o PhGs ar y gefnogaeth solet yn ystod gwahanu (Lei et al., 2001). Mewn cyferbyniad, mae cromatograffaeth gwrthgyfredol cyflym (HSCCC) wedi dod yn ddewis amgen effeithiol i'r technegau cromatograffig confensiynol ar gyfer gwahanu rhai PhGs oddi wrth echdynion planhigion (Lei et al., 2001; Li et al., 2005). Mae Lei et al. gwahanu yn llwyddiannusacteosida 20-acetylacteoside o Cistanches salsa (CA Mey.) G. Beck drwy ddefnyddio HSCCC (Lei et al., 2001). Mae awduron y papur hwn wedi adrodd yn flaenorol ar wahanuacteosidac isoacteoside o Plantago psyllium L. gan HSCCC (Li et al., 2005). Fodd bynnag, nid oes unrhyw adroddiad wedi'i gyhoeddi ar wahanu a phwro PhG lluosog oddi wrthCistanche deserticoladefnyddio HSCCC. Oherwydd diffyg safonau, mae dulliau LC-MS wedi'u datblygu a'u defnyddio fel arf dadansoddol pwerus ar gyfer nodweddu ac adnabod rhai PhGs yn gyflym mewn echdyniad planhigion (Li et al., 2005; Wang et al., 2000).

Yn y papur hwn, rydym yn adrodd ar ddull HSCCC a ddatblygwyd ar gyfer paratoi echinacoside,ochr cistano A, acteoside, isoacteoside ac 20-acetylacteoside oCistanche deserticola. Cyflawnwyd nodweddu a dadansoddi'r pum PhG a wahanwyd trwy ddefnyddio LC ynghyd ag arbrofion sbectrometreg màs ESI ac NMR mewn-lein. Mae'r amser cadw, pwysau moleciwlaidd, a'r ïonau darn nodweddiadol o'r pum PhG yn cael eu cyflwyno a'u trafod yn y papur hwn. Dangosir strwythurau'r pum PhG a nodwyd yn yr ymchwiliad hwn yn Ffig. 1.

echinacosidemewn cistanche

2. Arbrofol

2.1. Cemegau ac adweithyddion

Acteosideei brynu oddi wrth Sigma-Aldrich (Oak-Ville, ON), prynwyd echinacoside oddi wrth ChromaDex (Santa Ana, CA). Cafodd Isoacteoside ei ynysu oddi wrth P. psyllium L. (Li et al., 2005).Cistanche deserticolaei brynu o Beijing TongRenTang Meddyginiaethol Store (Tsieina). Roedd pob toddydd o radd HPLC ac fe'i prynwyd gan Caledon Laboratories Ltd. (Georgetown, ON).

2.2. Paratoi sampl

Cistanche deserticola(20 g) ei dynnu bum gwaith ar dymheredd ystafell am 12 awr yr un gyda 100 ml o ethanol dyfrllyd 80 y cant. Bob tro roedd y cymysgedd echdynnu yn cael ei hidlo trwy bapur hidlo Whatman Rhif 1 (Whatman International Ltd., Maidstone, Lloegr). Crynhowyd yr hidlif cyfun i 100 ml mewn gwactod ar <40 gradd.="" cafodd="" yr="" hydoddiant="" dyfrllyd="" a="" ddeilliodd="" ohono="" ei="" ddisychedu="" ddwywaith,="" pob="" un="" â="" 100="" ml="" o="" hecsan,="" ac="" yna="" ei="" dynnu'n="" olynol="" am="" bum="" gwaith,="" pob="" un="" â="" 100="" ml="" n-butanol.="" cyfunwyd="" yr="" haenau="" n-butanol="" a'u="" crynhoi="" i="" sychder="" mewn="" gwactod="" ar="">< 40="" gradd="" ,="" a="" roddodd="" 2.2="" go="" echdyniad="" n-butanol.="" storiwyd="" y="" detholiad="" ar="" -20="" gradd="" cyn="" gwahaniad="">

2.3. Gweithdrefn wahanu HSCCC

Cynhaliwyd yr HSCCC paratoadol mewn cromatograffaeth gwrth-gyfredol cyflym Model CCC (Pharma-Tech Research, Baltimore, Maryland USA). Roedd gan y cyfarpar hwn dri coil paratoadol, wedi'u cysylltu mewn cyfres (cyfanswm cyfaint, 325 mL). Gellid rheoli cyflymder chwyldro'r offer rhwng 0 a 2000 rpm. Roedd gan system HSCCC bwmp HPLC (Pharma-Tech Research, Baltimore, Maryland, UDA), synhwyrydd UV Model 450 (Alltech, UDA), recordydd gwely fflat Model L 120 E (Linseis Inc., Princeton Jct, UDA), casglwr ffracsiynau (Advantec MFS Inc., UDA) a falf chwistrellu sampl gyda dolen sampl 10-ml.

Cafodd cymysgedd o asetad ethyl–ethanol-dŵr (5:0.5:4.5, v/v/v) ei ysgwyd yn egnïol mewn twndis gwahanu a gadewch iddo sefyll a gwahanu ar dymheredd ystafell. Defnyddiwyd y ddau gam yn yr HSCCC ar ôl iddynt gyrraedd ecwilibriwm. Cafodd y golofn torchog gyfan ei llenwi'n gyntaf â'r haen uchaf, sy'n gweithredu fel y cyfnod llonydd. Yna cafodd yr haen isaf (cyfnod symudol) ei bwmpio i ben pen y golofn ar gyfradd llif o 1.5 mL/munud. Gosodwyd y cyflymder cylchdroi ar 1050 rpm. Llwythwyd sampl (tua 230 mg bob tro) wedi'i ddad-doddi mewn 8 ml o'r cymysgedd o asetad ethyl-ethanol-dŵr (5:0.5:4.5, v/v/v) i'r falf chwistrellu ar ôl i'r system gyrraedd hydrodynamig cydbwysedd. Dewiswyd y system hydoddydd deuffasig hon yn seiliedig ar y cyfernod rhaniad (K), sef 0.87, 1.11, a 1.32 ar gyferacteosid, isoacteoside, ac 20 acetylacteoside, yn y drefn honno. Y gwerth K oedd cymhareb y crynodiadau yn haenau uchaf a gwaelod yr un cyfansoddyn a bennwyd gan HPLC (Ffig. 2). Roedd yr elifiant o allfa'r golofn yn cael ei fonitro'n barhaus gan synhwyrydd UV ar 254 nm a'i gasglu i mewn i diwbiau profi gyda chasglwr ffracsiynau wedi'i osod ar 4 munud ar gyfer pob tiwb.

2.4. Amodau LC

defnyddiwyd auto-samplydd statig a synhwyrydd arae ffotodiode (DAD) ar gyfer dadansoddi PhGs yn y dyfyniad n-butanol oCistanche deserticolaa ffracsiynau a gasglwyd o wahaniad HSCCC. Cynhaliwyd y gwahaniad mewn colofn Phenomenex ODS-C18 (250 × 4.6 mm, 5 lm) gyda cholofn gwarchod C18. Roedd y cyfnod symudol deuaidd yn cynnwys acetonitrile (toddydd A) a dŵr yn cynnwys 2 y cant o asid asetig (toddydd B). Hidlwyd pob toddydd trwy a

{{0}}.45 lm hidlydd cyn ei ddefnyddio. Cadwyd y gyfradd llif yn gyson ar 1.0 mL/munud am gyfanswm amser rhedeg o 25 munud. Roedd y system yn cael ei rhedeg gyda rhaglen graddiant: 0–20 mun: 90 y cant B i 60 y cant B; 20–22 mun: 60 y cant B i 0 y cant B; a 22 - 25 mun, 0 y cant B i 90 y cant B. Cyfaint y pigiad sampl oedd 10 lL. Cafodd uchafbwyntiau o ddiddordeb eu monitro ar 320 nm gan synhwyrydd DAD.

2.5. Arbrofion LC-ESI-MS

Cynhaliwyd arbrofion LC-MS gan ddefnyddio sbectromedr màs trap ïon Finnigan LCQ DECA (Thermo Finnigan, San Jose, CA, UDA) gyda ffynhonnell ïoneiddiad electrochwistrellu (ESI). Dadansoddwyd y samplau yn yr un cyflwr cromatograffig. Defnyddiwyd model negyddol ar gyfer casglu data. Pennwyd cyfraddau'r nwy gwain a'r llifau ategol ar 96 a 7 (uned fympwyol), yn y drefn honno. Gosodwyd y foltedd capilari ar 29 V a rheolwyd ei dymheredd ar 350 gradd. Roedd foltedd y lens mynediad wedi'i osod ar 40 V a'r osgled RF aml-bolyn wedi'i osod ar 540 V. Roedd foltedd y nodwydd ESI yn cael ei reoli ar 4.5 kV. Offset y lens tiwb oedd 16 V, yr offset lens aml-bolyn 1 oedd 8.20 V a'r offset lens aml-bolyn 2 oedd 10.5 V. Gosodwyd foltedd y lluosydd electronau ar 980 V ar gyfer canfod ïon.

2.6. NMR ar gyfer Adnabod

Cofnodwyd sbectra NMR ar sbectromedr Bruker Avance (Bruker BioSpin Ltd., Milton, Canada). Dim ond cyfansoddion 2 a 5 (dim safonau ar gael) oedd yn destun arbrofion NMR. Diddymwyd samplau mewn CD3OD.

3. Canlyniadau a thrafodaeth

3.1. Gwahaniad HSCCC

Dyfyniad n-butanol oCistanche deserticolaa dadansoddwyd y ffracsiynau sy'n cyfateb i bob brig a ynysu gan HSCCC gan HPLC, a rhoddir y canlyniadau yn Ffig. 2. Cafodd pum cyfansoddyn mawr (uchafbwyntiau 1–5) eu gwahanu a'u canfod gydag amseroedd cadw yn 9.2 mun, 10.7 mun, 12.3 mun ,

13.3 munud ac 16.2 munud, yn y drefn honno.

Mae gwahaniad HSCCC llwyddiannus yn dibynnu i raddau helaeth ar system hydoddydd dau gam addas sy'n darparu cyfernod rhaniad delfrydol (K) o gwmpas 1 ar gyfer y cyfansoddyn a ddymunir. Dylai system ddeuffasig o'r fath hefyd arwain at amser setlo gweddol fyr (Chen, Games, & Jones, 2003; Foucault & Chevolot, 1998; Oka, Oka, & Ito, 1991). Yn ein harbrawf, fe wnaethom ddewis pedair cyfres o systemau toddyddion yn ôl hydoddedd y cyfansoddion targed ynCistanche deserticola. Defnyddiwyd HPLC i fesur y crynodiad ym mhob cam, ac o hynny cyfrifwyd gwerthoedd K y cyfansoddion targed. Dwy system, asetad ethyl - n-butanol-ethanol-dŵr (4:0.6:0.6:5, v/v/v/v) ac asetad ethyl-dŵr (1: 1, v/v), wedi'u defnyddio o'r blaen yn HSCCC i wahanuacteosida 20-asetylacteoside oC. salsa,acteosid, ac isoacteoside o P. Psyllium, yn y drefn honno (Lei et al., 2001; Li et al., 2005). Er bod y system gyntaf wedi cael amser setlo cymharol fyr, roedd ganddi berfformiad gwael wrth wahanu'r PhGs oCistanche deserticola, oherwydd y gwerthoedd K isel ar gyfer cyfansoddion 1 a 2, a gwerthoedd K uchel ar gyfer cyfansoddion 3–5. Roedd y gwerthoedd K yn isel iawn ar gyfer cyfansoddion 1–4 yn yr ail system, ond yn uchel iawn ar gyfer cyfansawdd 5 (Tabl 1). Rhoddodd system wedi'i haddasu sy'n cynnwys asetad ethyl–ethanol-dŵr (5:{{10}}.5:4.5, v/v/v), werth K delfrydol ar gyfer cyfansoddion 3–5 yn 0.87, 1.11, ac 1.32, yn y drefn honno, a arweiniodd at wahanu'r tri chyfansoddyn hyn yn dda (Ffig. 3A a B). Fodd bynnag, cynhyrchodd y system hon

gwerth K rhy fach ar gyfer cyfansoddion 1 a 2, sy'n achosi i'r ddau gyfansoddyn gyd-eliwt ger blaen y toddydd (ffracsiwn 1 yn Ffig. 3A). Addasiad pellach i'r system (ethyl asetad–n-butanol–ethanol-dŵr (0.5:0.5:0.1:1, v/v/v/ v) dyrchafodd y gwerthoedd K ar gyfer cyfansawdd 1 a 2 i 0.52 a 0.92, yn ôl eu trefn, ac arweiniodd at wahaniad llwyr (Ffig. 3C).Mae Ffig. 3A yn dangos gwahaniad HSCCC a sampl yn cynnwys 230 mg o'r dyfyniad n-butanol oCistanche deserticoladefnyddio asetad ethyl–ethanol-dŵr (5:0.5:4.5, v/v/v). Cafodd ffracsiynau a gadarnhawyd gan HPLC i gynnwys cyfansoddion 3, 4, neu 5 yn unig eu cyfuno ar wahân, a chafodd y rhai sy'n cynnwys cyfansoddion 3 a 4 eu cyfuno, eu rhewi-sychu, a'u hail-ddarostwng i'r HSCCC i'w gwahanu ymhellach (Ffig. 3 B). Rhoddodd y gwahaniad HSCCC dau gam a ddisgrifir uchod gyfanswm o 14.6 mg, 30.1 mg, a 25.2 mg o gyfansoddion 3-5 o 1412 mg o echdyniad n-butanol. Mae Ffig. 3C yn dangos gwahaniad HSCCC sampl sy'n cynnwys cyfansoddion 1 a 2 (ffracsiwn 1 yn y gwahaniad cyntaf) gan ddefnyddio asetad ethyl–n-butanol–ethanol-dŵr (0.5:0.5 :0.1:1, v/v/ v/v). Cafwyd cyfanswm o 28.5 a 18.4 mg o gyfansoddion 1 a 2. Roedd purdeb cromatograffig y cyfansoddion rhewi-sychu 1-5 dros 92.5 y cant , a ddefnyddiwyd yn uniongyrchol ar gyfer dadansoddiadau LC-ESI-MS ac NMR.

3.2. Adnabod strwythurol gan LC-ESI-MS ac NMR

Cyflawnwyd adnabyddiaeth betrus o gyfansoddion 1, 3, a 4 trwy amseroedd cadw cyfath a data sbectrol UV â rhai'r echinacoside dilys,acteosid, ac isoacteoside (Ffig. 2). Roedd cyfansoddion 2 a 5 yn anhysbys, fodd bynnag, roedd sbectra UV pob un o'r pum cyfansoddyn yn debyg iawn, gan ddangos nodweddion strwythurol tebyg.

Er mwyn ymchwilio ymhellach i strwythurau'r pum cyfansoddyn hyn, ceisiwyd arbrofion LC-ESI-MSn a dangosir y canlyniadau yn Ffig. 4 a Thabl 2. Roedd cyfansoddion yn ymwneud â'r brigau (1–5) yn Ffig. 2 yn arddangos ïonau moleciwlaidd dadbrotonedig dwys [MH]— ar m/z 785, 799, 623, 623, a 665, yn y drefn honno, yn y modd negyddol. Dimeric [2M H]— arsylwyd ïonau hefyd ar gyfer copaon 1–4 yn Ffig. 2. Cadarnhaodd y rhain fod pwysau moleciwlaidd copaon 1–5 yn 786, 800, 624, 624, a 666, yn y drefn honno. Darparodd data LC-MSN (Tabl 2) wybodaeth strwythurol hynod ddefnyddiol ar gyfer y pum PhG, megis colli niwtral

Triniaeth Arbrofol: cafodd tua 1 mg o bob sampl ei bwyso mewn tiwb profi 10 ml ac ychwanegwyd 1 ml o bob cam o'r system hydoddydd dau gam wedi'i rag-gydbwyso iddo. Cafodd y tiwb profi ei gapio a'i ysgwyd yn egnïol am 1 munud, a'i adael i sefyll nes iddo wahanu'n llwyr. Tynnwyd cyfanswm o 100 lL o bob haen allan a'i anweddu ar wahân i sychder mewn gwactod yn<40 °c.="" the="" residue="" was="" dissolved="" in="" 10="" ll="" methanol="" and="" analyzed="" by="" hplc="" for="" determining="" the="" partition="" coefficient="" (k)="" of="" compounds="" 1–5.="" the="" k="" value="" was="" expressed="" as="" the="" peak="" area="" of="" the="" target="" compound="" in="" the="" upper="" phase="" divided="" by="" that="" in="" the="" lower="">

y moiety caffeoyl (162), y moiety glwcos (162), y moiety rhamnose (146), radical CH2 (14), a'r grŵp COCH2 (42).

Dangosir LC-ESI-MS brig 1 yn Ffig. 4A. Yr ïon moleciwlaidd dadprotonedig [MH] — ar m/z 785 gyda digonedd uchel a moleciwlaidd deprotonated dimeric

ion [2M H]— ar m/z gwelwyd 1571 yn y modd negyddol, sy'n awgrymu pwysau moleciwlaidd o 786, a oedd yr un peth â phwysau echinacoside. Fe wnaeth ymchwiliad pellach yn yr arbrawf LC-MS2 o'r ïonau m/z 785 esgor ar un prif ïon merch ar m/z 623 (Ffig. 4B) a gynhyrchwyd yn uniongyrchol o m/z 785 trwy golli moiety caffeoyl neu laith hecsos fel [M 162 H]—. Mae'r sbectrwm LC-MS3 o m / z 623 arddangos dau ïon mawr yn m / z 477 a 461, a dau mân ïonau ar m/z 315 a 179 (Ffig. 3 C, Tabl 2). Y gwahaniaethau màs rhwng m/z 623 a'r ïonau darn m/z 477 a 461 oedd 146 a 162, yn y drefn honno, sy'n cyfateb i golli uned rhamnose a moiety glwcos neu moiety caf-teimlo [M 162 H]—. Collodd yr ïonau m/z 623 hefyd ran o gaffeoyl a moiety rhamnose i gynhyrchu'r ïonau m/z 315. Cynhyrchwyd yr ïon ar m/z 179 o holltiad y moiety caffeoyl, gyda'r gwefr negatif yn aros ar ran y caffeoyl moiety. Dangosodd arbrawf LC-ESI-MSN ar yr echinacoside dilys yr un patrwm darnio. Felly cadarnhawyd bod brig 1 yn echinacoside.

Ar gyfer brig 2, dangosodd yr LC-ESI-MS m/z 799 fel yr ïon moleciwlaidd dadprotonedig [MH]— a m/z 1599 fel ei ïon dimeric, sy'n awgrymu màs moleciwlaidd o 800. Yn ystod arbrofion MS2, yr m/z Ffurfiodd 799 ion dair merch

ïonau ar m/z 637, 623, a 475 (Tabl 1). Cynhyrchwyd yr ïon ar m/z 637 yn uniongyrchol o riant ïon m/z 799 eto oherwydd colled niwtral y caffeoyl [M—162—H]— neu moiety glwcos [M—162—H]—. Mae'r ïon ar m/z 623 yn deillio o golli radical CH2. Ffurfiwyd yr ïon yn m/z 475 o golled niwtral y moiety caffeoyl [M 162 H]— a'r moiety glwcos o'r rhiant ïon. Cynhyrchodd yr arbrawf MS3 ar m/z 637 dri ïon ar m/z 619, 491, a 475, yn cyfateb i golledion un dŵr, uned rhamnose, a moiety glwcos, yn y drefn honno. Cynhyrchodd yr ïon merch m/z 623 m/z 461 a 315 yn yr astudiaeth MS3, a ddilynodd yr un llwybrau darnio ag echinacoside fel y trafodwyd uchod. Roedd data LC- ESI-MSN yn cefnogi dynodiad petrus ar gyfer brig 2 felochr cistano A.

Cynhaliwyd arbrofion LC-ESI-MS hefyd ar gyfer cyfnodau brig

3 a 4 (tR 12.49 a 13.46 mun yn Ffig. 2). Roedd y ddau gopa yn dangos yr un peth [MH]— ïon ar m/z 623 a dimer ar m/z 1247 yn y modd negyddol (Tabl 1), sy'n dangos eu bod o bosibl yn isomerau gyda'r un pwysau moleciwlaidd o

624, yr un aacteosidac isoacteoside. Roedd sbectra MS2 yr ïonau [MH]— hefyd yn dangos un ïon merch o m/z 461, a oedd yn dangos bod y rhan o gaffeoyl wedi’i golli o’r ïon rhiant m/z 623 (Tabl 1). Cafwyd sbectra MS3 tebyg ar gyfer y ddau gyfansoddyn. Ar gyfer brig 3, ffurfiodd sbectrwm MS3 yr ïon ar m/z 461 dri ïon ar m/z 315, 161, a 135. Mae'r m/z 315 yn cael ei ffurfio ar ôl colli rhamnose fel y trafodwyd yn gynharach. Cynyrchwyd yr ion m/z 161 o holltiad y caffeoyl moiety, a dilynwyd ef gan golled pellach o un dwfr; arhosodd y cyhuddiad ar ran y caffeoyl moiety. Cododd yr ïon ar m/z 135 [aglycone 18 H]— o holltiad y bond glycosidig yn safle C1 gyda cholled ychwanegol o un dŵr, gan adael y gwefr i fod ar ran y moiety aglycone. Roedd sbectrwm MS3 brig 4 yn dilyn yr un llwybr darnio â brig 3 ac eithrio'r ïon coll ar m/z 135. Mae'r ïon moleciwlaidd a phatrymau darnio'r ddau gyfansoddyn hyn yn gyson â'r data llenyddiaeth aracteosidac isoacteoside (Wang et al., 2000), er bod ïon ychwanegol m/z 153 wedi'i ganfod a

wedi'i neilltuo fel [aglycone H]— gan Wang et al. (Wang et al., 2000). Efallai bod yr ïon hwn wedi bod yn ansefydlog ac wedi colli dŵr i roi m/z 135 yn ein harbrawf. Yn seiliedig ar ddata'r MS a'r amseroedd cadw cyfath o uchafbwyntiau 3 a 4 â'r safonau, maent felly'n cael eu nodi felacteosidac isoacteoside, yn y drefn honno.

Dangosir data LC-ESI-MS o frig 5 yn Nhabl 2. ïon moleciwlaidd dadprotonedig [MH]— (m/z 665) oedd yr unig ïon a ddarganfuwyd yn y modd negatif, sy'n awgrymu màs moleciwlaidd o 666. Tri merch ïon arsylwyd m/z 623, 503, a 461 yn yr arbrawf MS2 (Tabl 2). Ffurfiwyd yr ïonau merch ar m/z 623 a 503 yn uniongyrchol o'r rhiant ïon trwy golli grŵp COCH2 a moiety caffeoyl, yn y drefn honno. Daeth yr ion yn m/z 461 o golli'r caffeoyl a'r COCH2 moiety [M 162 42 H]— o'r rhiant ion. Yn yr arbrawf MS, cynhyrchodd m/z 623 m/z 461, a chynhyrchodd m/z 503 dri ïon ar m/z 485, 461, a 315. Roedd sbectrwm MS3 yr ïon merch m/z 461 yn rhoi dau ïon ar 443 a 315. Drwy gymharu patrwm darnio LC- MSN o frig 5 â chyfansoddion eraill a adroddwyd yn yr astudiaeth hon a chydag eraill a adroddwyd (Li et al., 2005; Wang et al., 2000), daethom i'r casgliad bod cysylltiad strwythurol uchel rhwng brig 5 i acteoside a'r unig wahaniaeth yw'r uned COCH3 ar safle R3. Felly rhoddwyd hunaniaeth betrus i uchafbwynt 5 fel 20-asetylacteoside (Ffig. 1).

Cadarnhawyd strwythurau'r ddau gyfansoddyn a nodwyd yn betrus, brig 2 (fel cistanoside A) a brig 5 (fel 20- acetyl-acteoside) o'u strwythurau gan 1H NMR. Mae sifftiau cemegol a chysonion cyplu'r holl brotonau yng nghyfansoddion 2 a 5, fel y dangosir yn Nhabl 3., yn cyd-fynd â'r data NMR a adroddwyd ar gyferochr cistano Aa 20-acetylacteoside, yn y drefn honno (Kobayashi et al., 1984, 1987). Cynhaliwyd arbrofion 2D NMR (cydberthynas hir-amrediad COSY, ROESY, a CH) yn yr astudiaeth bresennol hefyd ac fe wnaethant gadarnhau'r adnabyddiaeth ymhellach (data heb ei ddangos).

ffenylethanoidglycosidau mewn cistanche

4. Casgliadau

Yn y papur presennol, defnyddiwyd HSCCC yn llwyddiannus ar gyfer ynysu a phuro echinacoside,ochr cistano A, acteoside, isoacteoside, a 20-acetylacteoside o'r dyfyniad n-butanol o C. deserticola. Felly mae'n fodd profedig ar gyfer gwahanu bioactif yn lled baratoadol. Yn y cyfamser, ymchwiliwyd i strwythurau'r pum PhG yn Cistanche deserticola trwy gyfrwng LC-ESI-MSN; Darganfuwyd rhai nodweddion nodweddiadol o PhGs, a oedd yn caniatáu i ni bennu'r grwpiau swyddogaethol yn y strwythurau. Mae'r dull LC-ESI-MSN felly yn arf pwerus ar gyfer adnabod yn gyflymffenylethanoidaua'u glycosidau ynCistanche deserticoladyfyniadau, yn enwedig pan gaiff ei gadarnhau gan ddata NMR.

Cydnabyddiaeth

Hoffai'r awduron ddiolch i Jun Gu o'r Ganolfan Cyseiniant Magnetig Niwclear, Prifysgol Guelph, Ontario, Canada am ei chymorth gydag arbrofion NMR. Cefnogwyd y prosiect hwn yn rhannol gan gyllid o Dalaith Jilin, Tsieina (Rhif 20060904).

Cyfeiriadau

Chen, LJ, Gemau, DE, & Jones, J. (2003). Ynysu ac adnabod pedwar cyfansoddyn flavonoid o hadau Oroxylum Indicum trwy gromatograffaeth gwrth-gyfredol cyflym. Cylchgrawn Cromatograffaeth A, 988, 95–105.

Cheng, XY, Wei, T., Guo, B., Ni, W., & Liu, CZ (2005).Cistanche deserticoladiwylliannau ataliad celloedd:Phenylethanoidbio-synthesis glycosidau a gweithgaredd gwrthocsidiol. Biocemeg Proses , 40, 3119–3124.

Foucault, AP, & Chevolot, L. (1998). Cromatograffaeth gwrth-gyfredol: offeryniaeth, dewis toddyddion, a rhai cymwysiadau diweddar i buro cynnyrch naturiol. Cylchgrawn Cromatograffaeth A, 808, 3–22.

Gross, G.-A., Lahloub, MF, Anklin, C., Schulten, H.-R., & Sticher, O. (1988). Teucrioside, glycosid ffenylpropanoid o Teucrium Chamaedrys. Ffytocemeg , 27, 1459–1463.

Ef, ZD, Lau, KM, Xu, HX, Li, PC, & But, PPH (2000).

Gweithgaredd gwrthocsidiol offenylethanoidglycosidau o siawns Brandisia. Journal of Ethnopharmacology , 71, 483–486.

Kobayashi, H., Karasawa, H., & Miyase, T. (1984). Astudiaethau ar gyfansoddion Cistanchis Herba. III. Ynysu a strwythurau glycosidau ffenylpropanoid newydd,Cistanoside Aa B. Bwletin Cemegol a Fferyllol, 32, 3009–3014.

Kobayashi, H., Oguchi, H., Takizawa, N., Miyase, T., Ueno, A., Usmanghani, K., et al. (1987). Newyddffenylethanoidglycosidau oCistanchetubulosa (Schrenk) Bachyn. Bwletin Cemegol a Fferyllol FI, 35, 3309–3314.

Lei, L., Yang, FQ, Zhang, TY, Tu, PF, Wu, LJ, & Ito, Y. (2001).

Arwahanrwydd paratoadol a puroacteosida acteosid 2'-acetyl o Cistanches salsa (CA Mey) G. Beck trwy gromatograffeg gwrthgyfredol. Cylchgrawn Cromatograffaeth A, 912, 181–185.

Li, L., Tsao, R., Liu, ZQ, Liu, SY, Yang, R., Young, JC, et al. (2005). Ynysu a phuroacteosidac isoacteoside o Plantago psyllium L. trwy gromatograffaeth gwrthgyfredol cyflym. Cylchgrawn Cromatograffaeth A, 1063, 161–169.

Li, LL, Wang, XW, & Wang, XF (1997). Perocsidiad antilipid a gweithrediad gwrthradical glycosidau mewn Cistanches perlysiau. Tsieina Journal of Chinese Materia Medica , 22, 364–367.

Li, J., Wang, PF, Zheng, RL, Liu, ZM, & Jia, ZJ (1993). Amddiffyn glycosidau ffenylpropanoid rhag Pedicularis rhag hemolysis ocsideiddiol in vitro. Planta Medica , 59, 315–317.

Lu, MC (1998). Astudiaethau ar effaith tawelyddolCistanche deserticola.Journal of Ethnopharmacology , 59, 161–165.

Nishimura, H., Sasaki, H., Inagaki, N., Chin, M., & Mitsuhashi, H. (1991). Naw glycosid alcohol phenethyl o Stachys szeboldzz. Ffytocemeg , 30, 965–969.

Oka, F., Oka, H., & Ito, Y. (1991). Chwiliad systematig am systemau toddyddion dau gam addas ar gyfer cromatograffaeth gwrth-gyfredol cyflym. Cylchgrawn Cromatograffaeth , 538, 99–108.

Ravn, H., Nishibe, S., Sasahara, M., & Li, X. (1990). Cyfansoddion ffenolig o Plantago Asiatica. Ffytocemeg , 29, 3627–3631.

Schapoval, EES, Winter de Vargas, MR, Chaves, CG, Bridi, R., Zuanazzi, JA, & Henriques, AT (1998). Gweithgareddau gwrth-ymfflamychol ac antinociceptive echdynion a chyfansoddion ynysig o Stachytarpheta cayennensis. Journal of Ethnopharmacology , 60, 53–59. Shoyama, Y., Matsumoto, M., & Nishioka, I. (1987). Glycosidau ffenolig o wreiddiau afiach Rehmannia glutinosa Var. Purpurea. Ffytocemeg , 26, 983–986.

Wang, XW, Jiang, XY, Wu, LY, & Wang, XF (2001). Effaith chwilota glycosidau oCistanche deserticolaar radicalau rhydd a'i amddiffyniad rhag difrod DNA a achosir gan OH in vitro. Journal of Chinese Pharmacology , 36, 29–31.

Wang, YM, Zhang, SJ, Luo, GA, Hu, YN, Hu, JP, Liu, L., Zhu,

Y., & Wang, HJ (2000). Dadansoddiad offenylethanoidglycosidau mewn echdyniad o berlysiau Cistanchis gan LC/ESI-MS/MS. Acta Pharmaceutica Sinica, 35, 839–842.

Wong, C.-C., Li, H.-B., Cheng, K.-W., & Chen, F. (2006). Arolwg systematig o weithgaredd gwrthocsidiol o 30 o blanhigion meddyginiaethol Tsieineaidd gan ddefnyddio assay pŵer lleihau gwrthocsidiol ferric. Cemeg Bwyd , 97, 705–711. Xie, JH, & Wu, CF (1993). Effaith echdyniad ethanolig oCistanche deserticolaar gynnwys niwrodrosglwyddyddion monoamine mewn llygod mawr

ymenydd. Cyffuriau Traddodiadol a Llysieuol Tsieineaidd, 24, 417–419.

Xiong, Q., Hase, K., Tezuka, Y., Tani, T., Namba, T., & Kadota, S. (1998). Gweithgaredd hepatoprotective offenylethanoidaurhagCistanche deserticola. Planta Medica , 64, 120–125.

Xiong, QB, Kadota, S., Tani, T., & Namba, T. (1996). Effeithiau gwrthocsidiol ffenylethanoidau oCistanche deserticola. Bwletin Biolegol a Fferyllol, 19, 1580–1585.

Zong, G., He, W., Wu, GL, & Chen, LH (1996). Cymariaethau rhwngCistanche deserticolaYC Ma aCistanchetiwbaidd (Schenk) Wight ar rai gweithgareddau ffarmacolegol. Journal of Traditional Chinese Medicine , 21, 436–438.