Effeithiau Cistanche Deserticola Deserticola A Kaempferol Ar Ddatblygiad Celloedd Granulosa mewn Ffoliglau Cyw Iâr

Crynodeb:Er mwyn archwilio effeithiau Cistanche deserticola a Kaempferol ar ddatblygiad ffoliglaidd cyw iâr, dadansoddodd yr arbrawf effeithiau crynodiadau gwahanol o Cistanche deserticola a Kaempferol ar weithgaredd celloedd granulosa cyw iâr wedi'u graddio ymlaen llaw gan y dull MTT a phenderfynodd y crynodiad gorau posibl. Defnyddiwyd PCR meintiol fflwroleuol amser real i ganfod effeithiau Cistanche deserticola a Kaempferol ar antigen niwclear celloedd lluosogi (PCNA), derbynnydd hormon sy'n ysgogi ffoligl (FSHR), a derbynnydd estrogen celloedd granulosa cyw iâr sydd wedi'u graddio ymlaen llaw (ER) Y effaith mynegiant mRNA; Dadansoddwyd effeithiau Cistanche deserticola a kaempferol ar ddatblygiad ffoliglaidd ofarïaidd gan ddiwylliant in vitro o feinwe ofarïaidd.Dangosodd y canlyniadau fod Cistanche deserticola a Kaempferol ar y crynodiad o 1 × Ar 10-4 môl/L , yn gallu hyrwyddo'n sylweddol nifer y celloedd granulosa, tra hefyd yn hyrwyddo PCNA, FSHR, ac ER mewn mynegiant mRNA celloedd granulosa (P<0.01); Cistanche deserticola and Kaempferol significantly increased the number of follicles in ovarian tissue, and granulosa cells proliferated from monolayer to multilayer. Studies have shown that Cistanche deserticola and Kaempferol can promote the proliferation of aggregate granulosa cells, and promote FSHR and ER α MRNA expression promoting the development of pre-grade follicles towards grade follicles.

Geiriau allweddol: Cistanche deserticola; Kaempferol; Cyw iâr; Celloedd gronynnog cyn gradd; Meinwe ofaraidd

cistanche perlysiau Tsieineaidd

Ar gyfer ffermydd ieir dodwy ar raddfa fawr, mae lefel y gyfradd cynhyrchu wyau yn effeithio ar ei fanteision economaidd, ac mae datblygiad ffoliglau ofarïaidd yn effeithio'n uniongyrchol ar berfformiad cynhyrchu ieir dodwy. Rhennir ffoliglau yn dri cham yn ôl eu statws swyddogaethol: ffoliglau cynradd, ffoliglau uwchradd, a ffoliglau aeddfed [1]. Bob dydd, dewisir ffoligl i ddatblygu i aeddfedrwydd, ac mae'r wy yn cael ei ddiarddel i'r tiwb ffalopaidd, gan basio trwy'r twndis, ehangiad, isthmws, groth, a fagina, gan ffurfio strwythur tebyg i wy [2-3]. Mae cychwyn ffoliglau cyntefig yn gysylltiedig â datblygiad celloedd granulosa ffoliglaidd. Mae hormon ysgogol ffoligl (FSH) yn rhwymo i dderbynnydd hormonau ysgogol ffoligl (FSHR) ar gelloedd granulosa, gan ysgogi ffurfio derbynnydd hormon luteinizing (LHR) ac ysgogi synthesis hormonau steroid [4-6]. Mae FSH a hormon luteinizing (LH) yn gweithredu'n synergyddol ar gelloedd granulosa i hyrwyddo datblygiad ffoliglaidd ac aeddfedu, gan gymryd rhan yn y dewis o ffoliglau dominyddol. Mae ymchwil wedi canfod, er bod ffoliglau primordial heb gelloedd granulosa wedi'u actifadu, maent i gyd yn y pen draw yn datblygu atresia [7]. Yn ystod datblygiad ffoliglaidd, gall estrogen hyrwyddo toreth o gelloedd granulosa ofarïaidd, tra'n cydweithredu â FSH a LH i hyrwyddo amlhau a gwahaniaethu celloedd granulosa ofarïaidd. Pan fydd cynnwys estrogen yn y plasma yn cynyddu, bydd yn cael ei fwydo'n ôl i'r hypothalamws yn negyddol trwy'r system gylchrediad ymylol, gan atal secretion hormon sy'n rhyddhau Gonadotropin (GnRH) o'r hypothalamws. Gall GnRH ysgogi'r adenohypophysis i syntheseiddio a secrete FSH a LH i hyrwyddo datblygiad ffoligl ofarïaidd. Pan fo secretion GnRH yn isel, gall atal secretion FSH a LH, gan arwain yn y pen draw at atal datblygiad ffoliglaidd [8-9].

Canfu astudiaethau blaenorol fod Cistanche deserticola a Cuscuta chinensis yn cael effaith atgyweirio da ar oviducts atroffig ac oviducts difrodi ar ôl adferiad, a gallent wella cyfradd dodwy ieir dodwy isel [10]. Mewn cynhyrchu hwsmonaeth anifeiliaid, gall cymhwyso Flavonoids wella perfformiad cynhyrchu anifeiliaid yn sylweddol, gwella ymwrthedd i glefydau anifeiliaid, a gwella swyddogaeth imiwnedd anifeiliaid.

Meddyginiaethau Tsieineaidd fel ginseng, Cistanche deserticola, ac astragalus

Gall cyfanswm flavonoidau Cistanche deserticola hyrwyddo'n sylweddol nifer y celloedd granulosa ffoliglaidd cyn-radd a gradd mewn vitro, lefel trawsgrifio protein rheoleiddio cyflym steroidogenig (StAR), ensym holltiad cadwyn ochr Cholesterol (CYP11A1) mRNA, a'r secretion o progesterone. Y gydran gynrychioliadol o gyfanswm flavonoidau Cistanche deserticola yw Cistanche deserticola. Mae ei bwysau moleciwlaidd yn fach, ac mae ganddo'r fantais o basio trwy'r rhwystr Gwaed-ymennydd. Ar yr un pryd, mae ganddo effeithiau gwrthlidiol, gwrth-tiwmor ac estrogen [11]. Prif gydran gemegol Cuscuta chinensis yw cyfanswm flavonoids Cuscuta chinensis. Ar hyn o bryd, mae amrywiaeth o flavonoidau wedi'u hynysu o Cuscuta chinensis, yn bennaf Quercetin a Kaempferol, sydd â gweithgaredd gwrthocsidiol uchel.

Mae cymhwyso echdyniad flavonoid hadau dodder mewn llygod mawr benywaidd yn arddangos gweithgaredd estrogenig, sy'n cael effaith benodol ar hyrwyddo gwella swyddogaeth derbynnydd hCG / LH ofarïaidd; Mae ganddo effaith Gonadotropin ar lygod ifanc a gall hyrwyddo datblygiad eu system atgenhedlu [12-14].

Yn yr arbrawf hwn, fe wnaethom ddewis celloedd granulosa ffoliglaidd cyn-radd cyw iâr, ac archwilio effaith hyrwyddo Cistanche deserticola a Kaempferol ar amlhau celloedd granulosa ffoliglaidd cyn-radd cyw iâr a mynegiant derbynnydd cysylltiedig trwy effaith Cistanche deserticola a Kaempferol ar ddatblygiad ffoliglaidd cyw iâr, i ddarparu cyfeiriad damcaniaethol ar gyfer ymchwil a datblygu ychwanegion bwyd anifeiliaid diogel, effeithiol a di-gweddillion i wella perfformiad cynhyrchu haenau.

Effeithiau Cistanche-Tonifying aren

1 Deunydd a Dulliau

1.1 Deunyddiau prawf

Prynwyd Cistanche deserticola (purdeb Mwy na neu'n hafal i 98 y cant) gan Shanghai Jizhi Biochemical Technology Co, Ltd; Prynwyd Kaempferol (purdeb Mwy na neu'n hafal i 98 y cant) gan Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co, Ltd.

1.2 Prif adweithyddion ac offerynnau

Prif adweithyddion: prynwyd Collagenase math II a DMEM gan Thermo Fisher Technology (China) Co, Ltd; Prynwyd DMSO oddi wrth Beijing Solebao Technology Co, Ltd; Prynwyd y pecyn M5 Super qPCR RT gyda'r pecyn trawsgrifio gwrthdroi gDNA oddi wrth Beijing Jumei Biotechnology Co., Ltd. Prif offeryn: BCM-1300Minc waith puro a brynwyd o Shanghai Boxun Industrial Co., Ltd. Ffatri Offer Meddygol; Prynwyd y centrifuge rhewi cyflym AXTGL20M gan Hunan Hexi Instrument Equipment Co, Ltd; Prynwyd deorydd tymheredd cyson Heracell 150i GP o Bingshan Songyang Biotechnology (Dalian) Co., Ltd; LightCycle ® Prynwyd yr offeryn PCR meintiol fflworoleuedd 96 math a’r offeryn labelu ensym math DR-200BS gan Bole Life Medical Products (Shanghai) Co., Ltd.

1.3 Ynysu ac echdynnu celloedd granulosa o ffoliglau cyn graddio cyw iâr

Dewiswyd ieir dodwy Hailan brown iach 30 diwrnod oed (a ddarparwyd gan Hebei Baoding Dingnong Company), eu lladd gan waedlif carotid, a chymerwyd eu hofarïau allan yn aseptigol (roedd profion ymchwil anifeiliaid in vivo yn unol â'r canllawiau a gymeradwywyd gan Pwyllgor Moeseg Anifeiliaid Prifysgol Amaethyddol Hebei). Gellir rhannu ffoliglau cyn-radd yn ffoliglau gwyn bach (SWF,<2 mm), large white follicles (LWF, 3-5 mm), small yellow follicles (SYF, 6-8 mm), and large yellow follicles (LYF, 9-12 mm). Collect granulosa cells from pre-graded follicles with a diameter of 6-8 mm and prior stages. The grading of follicles (see Figure 1). 

Sylwch: Mae SWF yn cynrychioli ffoliglau gwyn bach, mae LWF yn cynrychioli ffoliglau gwyn mawr, mae SYF yn cynrychioli ffoliglau melyn bach, mae LYF yn cynrychioli ffoliglau melyn mawr, ac mae F1, F2, F3, F4, a F5 yn cynrychioli pum ffoligl aeddfed.

Cafodd y ffoliglau a gasglwyd eu golchi deirgwaith gyda 75 y cant o alcohol ac yn olaf eu golchi unwaith gyda PBS. Defnyddiwyd y nodwydd di-haint i ryddhau'r hylif melynwy yn y PBS sy'n cynnwys penisilin 3 y cant a Streptomycin, tynnu'r haen cell bilen a gwahanu'r haen gell gronynnog. Cymerwyd 15mL o diwb EP i ychwanegu haen cell granulosa wedi'i dorri o'r ffoliglau a 4 mL o 0.1 y cant math II Collagenase ei ychwanegu. Cafodd ei ysgwyd mewn ysgydwr ar 37 gradd am 3 munud. Ar ôl i'r osgiliad gael ei gwblhau, ychwanegwch swm cyfartal o hydoddiant meithrin sy'n cynnwys 0.5 y cant FBS i derfynu treuliad. Hidlo gyda rhidyll 200 rhwyll a ridyll 400 rhwyll, yn y drefn honno. Allgyrchu'r hidlydd ar dymheredd ystafell ar 1200 r/munud am 5 munud ac ailadrodd y allgyrchiad ddwywaith. Gwaredwch y supernatant, ychwanegwch y cyfrwng diwylliant, chwythwch a dyhead yn gyfartal, a gwanwch yr ataliad cell i 5 × 106 darn / mL, a'i ychwanegu'n gyfartal i ddysgl Petri â diamedr o 100 mm, a'i feithrin ar 37 gradd a 5 y cant CO2 .

1.4 Effeithiau Cistanche deserticola a Kaempferol ar weithgaredd celloedd granulosa

Roedd celloedd gronynnog yn cael eu meithrin yn rheolaidd mewn cyfrwng DMEM sy'n cynnwys 10 y cant o serwm buchol ffetws. Cymerwyd celloedd yn y cyfnod twf logarithmig a'u treulio â 2.5 g/L trypsin. Roedd celloedd wedi'u gwasgaru'n gyfartal mewn 96 o blatiau ffynnon. Rhannwyd pob plât yn 10 grŵp gyda 6 thwll ailadroddus ym mhob grŵp. Ychwanegu 200 at y tyllau o amgylch y plât diwylliant μ L PBS yn gwasanaethu fel mandwll lleithio. Mae crynodiad Cistanche deserticola wedi'i osod i 1 × 10-4 mol/L, 1 × 10-5 mol/L, 1 × 10-6 mol/L, 1 × 10-7 mol/ L, 5 × 10-8 mol/L, 1 × 10-8 mol/L, 5 × 10-9 môl/L, 1 × 5 mol/L, 1 × {{ 24}} mol/L. Gosodwch grŵp rheoli gwag. Ar ôl cyd-ddiwylliant celloedd gyda Cistanche deserticola am 24 awr, ychwanegwch 10 y cant at bob ffynnon μ 5 mg/mL MTT o L. Ar ôl tyfu ymhellach am 4 awr, ychwanegwch 150 at bob ffynnon μ L DMSO, a'i osgiliwch am 3 munud i mewn sigiwr tymheredd cyson ar 37 gradd. Mesurwch yr amsugnedd ar 450 nm. Ailadroddwyd yr arbrawf dair gwaith, ac roedd y broses o sgrinio'r dos diogel gorau posibl o Kaempferol ar gyfer celloedd granulosa yr un fath â'r uchod.

Anial byw cistanche-Tonifying aren

1.5 Effeithiau Cistanche deserticola a Kaempferol ar antigen niwclear celloedd amlhau, derbynnydd hormon sy'n ysgogi ffoligl, a derbynnydd estrogen mewn celloedd granulosa

Gwelwyd effaith mynegiant mRNA mewn celloedd granulosa o'r cyfnod twf logarithmig, wedi'i frechu'n dri dysgl diwylliant gyda dwysedd celloedd o 5 × 106 darn / ml. Rhannwyd prydau Petri yn grŵp rheoli gwag; grŵp Cistanche deserticola, hynny yw, ar ôl 24 awr o feithriniad celloedd, ychwanegwch 1 × 10-4 mol/L Cistanche deserticola; Yn y grŵp Kaempferol, ychwanegwch 1 ar ôl 24 awr o feithriniad celloedd × 10-4 mol/L Kaempferol; Grŵp estrogen, ychwanegwch 5 ar ôl 24 awr o feithriniad celloedd × Triniwch â 10 i 8 mol/L o estrogen. Ar ôl 24 awr o drin y tir, taflwch yr holl gyfrwng diwylliant, rinsiwch â PBS, ychwanegwch 1 ml o ensym pancreatig i'w dreulio, ac ar ôl ychydig funudau, ychwanegwch yr un faint o gyfrwng diwylliant i derfynu treuliad. Allgyrchu daliant y gell ar 1000 r/munud am 5 munud, taflu'r supernatant, ac ychwanegu adweithydd Trizol mewn blwch iâ. Yn dilyn hynny, ychwanegwyd clorofform a'i ysgwyd yn egnïol, ei roi mewn blwch iâ am tua 3 munud, a'i allgyrchu ar 4 gradd ar 12000 r / min am 10 munud. Trosglwyddwch RNA i diwb EP newydd, ychwanegwch gyfaint cyfartal o isopropanol, cymysgwch yn ysgafn yn dda, a gadewch i sefyll mewn blwch iâ am 10 munud. Ar ôl centrifugio ar 4 gradd am 10 munud ar 12 000 r/mun, taflwch y supernatant a golchwch y gwaddod gyda 80 y cant ethanol. Centrifuge ar 10 000 r/min a 4 gradd am 5 munud, taflu ethanol, aer sych am 5-10 munud, ac ychwanegu dŵr DEPC ar gyfer chwythu a sugno i hydoddi'r gwaddod. Mesur crynodiad RNA gan ddefnyddio sbectrophotometer UV.

Defnyddiwch y pecyn M5 Super plus qPCR RT gyda'r pecyn tynnu gDNA ar gyfer trawsgrifio o chwith i gael cDNA. Canfod antigen niwclear celloedd amlhau, derbynnydd hormon sy'n ysgogi ffoligl, a derbynnydd estrogen mewn celloedd granulosa trwy lefel trawsgrifio cymharol meintiol PCR MRNA amser real. Dangosir y wybodaeth paent preimio yn Nhabl 1, a dyluniwyd a syntheseiddiwyd y paent preimio gan Shenggong Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd. Grŵp cyfeirio mewnol - Actin, mae lefel trawsgrifio cymharol mRNA ar gyfer pob genyn yn cael ei bennu gan 2- ΔΔ Wedi'i gyfrifo gan Ct.

Tabl 1 Gwybodaeth Primer

1.6 Meithriniad in vitro ac arsylwi morffolegol o feinwe ofarïaidd

Cymerwch feinwe ofarïaidd 30 40-ieir dodwy Hailan brown undydd a'i rinsio deirgwaith gyda 75 y cant o alcohol. Torrwch feinwe'r ofari yn ddarnau bach o 1-2 mm3 mewn bwrdd tra-lân, gyda chyfradd o 500 fesul ffynnon μ L wedi'i ychwanegu at gyfrwng DMEM a ITS (10 μ G/mL inswlin, 5 μ G/mL transferrin , a 30 nmol/L Sodiwm selenit). Ar ôl 72 awr o drin y tir yn y deorydd, triniwch yn ôl y sefyllfa grwpio. Rhannwyd meinwe ofarïaidd yn grŵp rheoli gwag, grŵp Cistanche deserticola, grŵp Kaempferol, a grŵp estrogen. Ar ôl 72 awr o drin y tir, gosodwyd meinwe'r ofari â 4 y cant o fformaldehyd, a pharatowyd adrannau meinwe yn rheolaidd i'w harsylwi o dan ficrosgop optegol.

1.7 Ystadegau a Dadansoddi

Dadansoddwyd y data qPCR gan ddefnyddio meddalwedd Biorad CFX Manager 2.0 a meddalwedd Microsoft Excel, a meddalwedd SPSS 21.0 a ddefnyddiwyd ar gyfer ANOVA unffordd. Defnyddiwyd dull Duncan ar gyfer cymariaethau lluosog. Cynrychiolir y canlyniadau fel "gwyriad safonol ± cymedrig" a'u plotio gan ddefnyddio meddalwedd GraphPad Prism 5.0. P<0.05 indicates significant differences, while P<0.01 indicates extremely significant differences.

2 Canlyniadau a Dadansoddiad

2.1 Effeithiau Cistanche deserticola a Kaempferol ar ymlediad celloedd granulosa

Gellir gweld o Ffigurau 2 a 3 y gall Cistanche deserticola a Kaempferol hybu twf celloedd granulosa. Ar 1 × 10-4~1 × O fewn graddiant crynodiad o 10-10 môl/L, o'i gymharu â'r grŵp rheoli gwag, y crynodiad yw 1 × 10-4 môl/L, 1 × {{ 9}} mol/L, 1 × 10-6 mol/L, 1 × Ar 10-7 mol/L, roedd y gwahaniaeth yn hynod arwyddocaol (P<0.01), with a concentration of 5 × The difference was significant at 10-8 mol/L (P<0.05).

Nodyn: Mae "* *" yn nodi gwahaniaeth sylweddol o'i gymharu â'r grŵp rheoli gwag (P<0.01), and "*" indicates a significant difference compared to the blank control group (P<0.05), the same below.

Ffig. 2 Gwerthoedd amsugno celloedd granulosa sy'n agored i Cistanche deserticola mewn crynodiadau gwahanol am 24 awr

Ffig. 3 Gwerthoedd amsugno celloedd granulosa sy'n agored i Kaempferol mewn crynodiadau gwahanol am 24 awr

2.2 Effeithiau Cistanche deserticola a Kaempferol ar amlhau antigen celloedd niwclear, derbynnydd hormon sy'n ysgogi ffoligl, a derbynnydd estrogen celloedd pregranulosa cyw iâr Effaith mRNA ar lefelau trawsgrifio cymharol

Gellir gweld o Dabl 2 bod grwpiau Cistanche deserticola a Kaempferol yn cael effeithiau ar amlhau antigen celloedd niwclear, derbynnydd hormon sy'n ysgogi ffoligl a derbynnydd estrogen celloedd granulosa cyw iâr wedi'u graddio ymlaen llaw Roedd lefel trawsgrifiadol cymharol mRNA yn sylweddol uwch na lefel y gwag. grŵp rheoli a grŵp estrogen (P<0.05 or P<0.01), and the follicle-stimulating hormone receptor and estrogen receptor of chicken pre aggregate cells in the Kaempferol group α The transcription level of mRNA is the highest (P<0.01).

Tabl 2 Effeithiau Cistanche deserticola a Kaempferol ar amlhau antigen celloedd niwclear, derbynnydd hormon sy'n ysgogi ffoligl, a derbynnydd estrogen celloedd pregranulosa cyw iâr Effaith mRNA ar lefelau trawsgrifio cymharol

2.3 Arsylwi histolegol o ofarïau

Gellir gweld o Ffigur 4, o gymharu â'r grŵp rheoli, fod nifer y ffoliglau mewn meinwe ofarïaidd a gafodd eu trin â Cistanche deserticola a Kaempferol wedi cynyddu'n sylweddol, a bod celloedd granulosa wedi cynyddu o un haen i haenen aml. O'i gymharu â'r grŵp estrogen, mae gan grŵp deserticola Cistanche a grŵp Kaempferol allu mwy amlwg i hyrwyddo aeddfedu a datblygiad meinwe ofarïaidd, ac mae grŵp deserticola Cistanche a grŵp Kaempferol yn cael effaith fwy amlwg na grŵp Kaempferol.

3 Trafodaeth

3.1 Effaith Cistanche deserticola a Kaempferol

Ynghyd â'r broses gyfan o ddatblygiad ffoliglaidd mae toreth o gelloedd granulosa, sydd o arwyddocâd mawr ar gyfer datblygiad ffoliglaidd. Maent yn cychwyn twf ffoliglau cyntefig trwy adeiladu micro-amgylcheddau moleciwlaidd ffafriol. Yn ystod datblygiad ffoliglaidd, mae apoptosis o gelloedd granulosa yn chwarae rhan bwysig wrth reoleiddio twf ffoliglaidd, aeddfedu celloedd wyau, a secretion estrogen [15-16]. Mae Cistanche deserticola, meddygaeth lysieuol Tsieineaidd, yn cael effaith tebyg i hormon rhyw, a all hyrwyddo datblygiad ffoliglau anifeiliaid a chynhyrchu sberm, hyrwyddo dyfodiad arferol estrus, gwella swyddogaeth a gweithgaredd ofarïaidd, a gwella swyddogaeth atgenhedlu. Mae Cuscuta chinensis, fel meddygaeth Tseiniaidd tonifying aren traddodiadol, yn cael effeithiau gwrthocsidiol, atgenhedlol a gwrth-heneiddio fel ei flavonoids cydran effeithiol. Mae astudiaethau wedi dangos bod dos penodol o flavonoidau o Cuscuta chinensis yn cael effaith gynyddol ar gelloedd rhyng-rhannol ceilliau llygoden [17-18]. Yn yr arbrawf hwn, dewiswyd Cistanche deserticola a Kaempferol, fel prif gydrannau meddyginiaethau traddodiadol Tsieineaidd Cistanche deserticola a dodder, i astudio eu heffeithiau ar allu mynegiant celloedd granulosa ffoliglaidd cyw iâr a'u derbynyddion cysylltiedig, a meinwe ofarïaidd, i gadarnhau'r effeithiau o Cistanche deserticola a Kaempferol ar ddatblygiad system atgenhedlu dofednod.

Effeithiau Cistanche-Tonifying aren

Cliciwch yma i weld Cistanche ar gyfer cynhyrchion clefyd yr arennau

【Gofyn am fwy】 E-bost:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

3.2 Antigen niwclear celloedd lluosogi, derbynnydd hormon sy'n ysgogi ffoligl, a derbynnydd estrogen Rôl

Mae PCNA yn antigen niwclear celloedd amlhau, sy'n chwarae rhan bwysig wrth gychwyn amlhau celloedd ac mae'n ddangosydd da o amlhau celloedd. Felly, cadarnhaodd y cynnydd o PCNA yn y canlyniadau prawf fod Cistanche deserticola a Kaempferol yn hyrwyddo amlhau celloedd pan fyddant yn gweithredu ar gelloedd granulosa. FSH yw'r prif hormon sy'n hyrwyddo datblygiad ffoliglaidd [19], ac mae safle mynegiant y derbynnydd hormon sy'n ysgogi ffoligl (FSHR) wedi'i grynhoi'n bennaf yn yr ofari a'r ffoliglau. Y brif ffordd y mae FSH yn cymryd rhan yng ngweithgareddau atgenhedlu ieir yw trwy reoleiddio datblygiad ffoliglau. Pan fydd secretion FSH yn cynyddu, gall hyrwyddo cynnydd FSHR mewn celloedd granulosa, a gall y cyfuniad o'r ddau gymell synthesis LHR trwy actifadu Aromatase. Gall y cyw iâr gymell ofyliad o dan effaith synergaidd FSH a LH [20-22]. Cyn dewis ffoligl, dim ond lefelau gwaelodol o FSHR y mae celloedd granulosa yn eu mynegi, a ddefnyddir i dderbyn signalau FSH a chynhyrchu lefelau isel o ffosffad adenosine cylchol i gynnal gweithgaredd celloedd. Pan fydd mynegiant FSHR wedi'i uwchreoleiddio'n sylweddol mewn celloedd granulosa o ffoligl cyn-radd, mae'n awgrymu y bydd y ffoligl yn cael ei ddewis i ddod yn follicle gradd [23-24]. Yn yr astudiaeth hon, o'i gymharu â'r grŵp rheoli, cynyddwyd mynegiant mRNA FSHR yn y grwpiau Cistanche deserticola a Kaempferol yn sylweddol, gan nodi y gall Cistanche deserticola a Kaempferol hyrwyddo trawsgrifio mRNA FSHR, cynyddu secretion FSH, a hyrwyddo'r dewis o ffoliglau fel ffoliglau gradd. Mae E2 yn fath o hormon steroid sy'n cael ei secretu gan gelloedd theca. Ei swyddogaeth yw hyrwyddo Aeddfedrwydd Rhywiol anifeiliaid benywaidd a dangos yr ail nodwedd rywiol. O dan weithred FSH, mae aromatase a gynhyrchir gan gelloedd granulosa ofarïaidd yn trosi androgen yn E2, sy'n cael ei reoleiddio gan ddau dderbynnydd estrogen (ER Ac ER） Mae'n cael effeithiau ar wahanol organau anifeiliaid benywaidd ac mae'n chwarae rhan bwysig mewn atgenhedlu anifeiliaid, yn enwedig mewn ffisiolegol. gweithgareddau megis datblygiad ffoliglaidd Yn ystod twf ffoliglaidd, mae estrogen yn foleciwl rheoleiddio mewngellol allweddol sy'n cyflymu toreth o gelloedd granulosa ac yn gwella effeithiau FSH a LH ar amlhau a gwahaniaethu celloedd ofari. ER Y prif addasiad yw adborth negyddol, ER Mae datblygiad ffoliglau yn cael ei reoleiddio trwy lwybrau mewnol ac allanol yr ofari [26]. ER Fe'i mynegir yn bennaf mewn meinweoedd ac organau megis y chwarren smonaidd, y groth, a fagina anifeiliaid, tra bod ER yn cael ei fynegi'n bennaf yn y ceilliau , ofarïau, prostad, a hypothalamws [27].

Yn yr astudiaeth hon, ER Cafodd lefelau mynegiant Cistanche deserticola a Kaempferol eu huwchreoleiddio'n sylweddol yn y grwpiau Cistanche deserticola a Kaempferol, gan awgrymu bod cistanche a kaempferol yn cael effeithiau cadarnhaol ar ddatblygiad, aeddfedrwydd ac ofyliad ofarïau cyw iâr. Canfu canlyniadau'r astudiaeth hon fod ER wedi'i fesur Mae'r lefel mynegiant yn gymharol isel. Mae hyn yn gyson â chanfyddiadau ymchwil Guo Miao [28] bod gan ofarïau ieir cynnar safleoedd rhwymo penodol ar gyfer ER yn natblygiad embryonig ieir. Yn y ffoliglau gwyn, ffoliglau melyn, a chelloedd granulosa ieir, ER Mae'r mynegiant yn sylweddol uwch nag ER . Gall flavonoidau ffa soia, fel estrogen sy'n seiliedig ar blanhigion, gynyddu cyfradd cynhyrchu wyau ieir dodwy pan gânt eu hychwanegu at y diet [29], gan nodi perthynas uniongyrchol rhwng lefelau hormonau estrogen a chyfradd cynhyrchu wyau.

Ffigur 4 Meinwe ofari ar ôl staenio AU (10 ×）

3.3 Effeithiau Cistanche deserticola a Kaempferol ar feinwe ofarïaidd

Yn yr arbrawf hwn, trwy gyd-ddiwyllio Cistanche deserticola a Kaempferol â meinwe ofarïaidd yn y drefn honno, canfuwyd bod nifer y ffoliglau mewn meinwe ofarïaidd yr effeithiwyd arnynt gan Cistanche deserticola a Kaempferol wedi cynyddu'n sylweddol, a bod celloedd granulosa wedi cynyddu o un haen i haenen. Mae hyn yn profi ymhellach y gall Cistanche deserticola a Kaempferol hyrwyddo datblygiad ofarïaidd o safbwynt histolegol. Yr antigen celloedd amlhau, derbynnydd hormon sy'n ysgogi ffoligl, a derbynnydd estrogen a fesurwyd yng nghanlyniadau'r arbrawf hwn Cadarnhaodd y newidiadau mewn dangosyddion fod gan Cistanche deserticola a Kaempferol effeithiau tebyg i estrogen, sy'n darparu sail arbrofol ar gyfer archwilio targed y prif gydrannau o Cistanche deserticola a dodder.

4 Casgliad

Cadarnhaodd yr astudiaeth hon y gall Cistanche deserticola a Kaempferol hyrwyddo toreth o gelloedd granulosa cyw iâr-pregraded a chynyddu PCNA, FSHR, ac ER Gall lefel trawsgrifio mRNA hyrwyddo datblygiad ffoliglau yn sylweddol.

Cyfeirnod:

［1］Yang Pengyun, Song Beibei, Ma Jinrui, et al Rôl celloedd granulosa wrth ffurfio wyau [J] Dofednod Gwyddoniaeth, 2021 (11): 50-54

［2］ HUO SY,LI YR,GUO Y,et al. Gwella effeithiau flavonoids Epimedi⁃ um ar y nodweddion atgenhedlu dethol mewn ieir haen ar ôl toddi gorfodol［J］. Gwyddor dofednod, 2020,99 （5）: 2757-2765.

［3］ HUO SY, LI YR, ZHANG S, et al. Swyddogaethau Epimedium ar ofiduct atchweledig a ffoliglau ieir haen wedi'i doddi â grym ［J］. Cylchgrawn ymchwil dofednod y byd, 2020, 10 （2）:326- 335.

［4］ RAJU GR, CHAVAN R, DEENADAYAL M,et al. Synergedd hormon ysgogol hormon luteinizing a ffoligl: adolygiad o rôl mewn gor-ysgogiad ofarïaidd rheoledig［J］. Journal of hu⁃ dyn atgenhedlu ences, 2013,6 ​​(4):227-234.

［5］ SCHMIDT D. Mae angen y ffactor trawsgrifio helics murine asgellog Foxl2 ar gyfer gwahaniaethu celloedd granulosa a chynnal a chadw ofari［J］. Datblygiad, 2004,131 （4）:933-942.

［6］ SULLIVAN MW, STEWART-AKERS A, KRASNOW JS, et al. Ymatebion ofarïaidd mewn merched i hormon lating ailgyfunol ffoligl-ysgogi a hormon lwteineiddio (LH): rôl i LH yng nghamau olaf aeddfedu ffoliglaidd［J］. Cyfnodolyn clinig endocrinoleg a metaboledd cal, 1999,84 （1）:228-232.

［7］ GUO Y,LI YR,ZHANG S,et al. Effaith cyfanswm flavonoidau epimedium ar ddatblygiad celloedd granulosa mewn ieir dodwy ［J］. Gwyddor dofednod, 2020,99 （9）:4598-4606.

［8］ ZHANG WD, LI N, DU ZR, et al. Mae derbynnydd IGF-1 yn ymwneud ag effeithiau rheoleiddiol icariin ac icaritin mewn astrocytes o dan amodau gwaelodol ac ar ôl her ymfflamychol［J］. Cylchgrawn ffarmacoleg Ewropeaidd, 2021,906 (5）:174269- 174278.

［9］ FREDERIQUE RZ, MIGUEL F, GE Y, et al. Darlun rheoleiddiol y gell gonadotropin L T2 sy'n sail i'r ymateb i hormon sy'n rhyddhau gonadotropin［J］. Ffiniau mewn endocrinol⁃ ogy, 2018,9:34.

［10］ Huo Shuying, Kang Jingmin, Li Yurong, et al Effaith "Yimu Powder" ar atgyweirio tiwbiau ffalopaidd a pherfformiad dodwy mewn ieir dodwy [J] Dofednod Tsieineaidd, 2018, 40 (19): 4

［11］ WAN S, WAN Q, WAN H, et al. Mae sefydlu ROS a heneiddedd DNA sy'n ddibynnol ar ddifrod gan icaritin yn cyfrannu at ei weithgaredd gwrth-tiwmor mewn celloedd carcinoma hepatogellog［J］. Bioleg fferyllol, 2019,57 (1）:424-431.

［12］ Wang Jianhong, Wang Minzhang, Wu Qinghua, et al Effaith flavonoids o Cuscuta chinensis ar swyddogaeth endocrin ofarïaidd mewn llygod mawr dan straen [J] meddygaeth lysieuol Tsieineaidd, 2002 (12): 46-48

［13］Miao Jiangxia Cynnydd mewn ymchwil ar gydrannau gweithredol a mecanwaith gweithredu hadau colfran wrth reoleiddio atgenhedlu//Trafodion cynhadledd Academaidd ar Ffytocemeg Fferyllol a Datblygiad Cynaliadwy Adnoddau Meddygaeth Tsieineaidd Traddodiadol (I), 2009: 323-325

［14］ TAO CC, WU Y, GAO X, et al. Mae effeithiau antitumor tun Icari⁃ yn erbyn canser y fron yn gysylltiedig â derbynyddion estrogen ［J］. Meddygaeth foleciwlaidd gyfredol, 2020,21 （1）:73-85.

［15］ MONNIAUX, DANIELLE. Gyrru ffoligulogenesis gan y dialog cell cyte-somatig: gwersi o fodelau genetig［J］. The⁃ riogenology,2016,86（1）:41-53.

［16］TAKASHI SHIMIZU A,NAOMICHI KOSAKA A,CHIAKIMU⁃ RAYAMA A,et al. Mynegiant derbynnydd Apelin ac APJ mewn celloedd granulosa a theca yn ystod gwahanol gamau o ddatblygiad ffoliglaidd yn yr ofari buchol: ymwneud apoptosis a rheoleiddio hormonaidd - gwyddoniaethdirect［J］. Gwyddoniaeth atgenhedlu anifeiliaid, 2009,116 (1-2):28-37.

［17］ Lin Siwen, Chen Shaobo, Yin Changchang, et al Effaith estrogenig cyfanswm flavonoids Cistanche deserticola deserticola ar hyrwyddo gwahaniaethu osteogenig ［ J ］ Ymchwil a Datblygu Cynnyrch Naturiol, 2020, 32 (3): 373-378

［18］ Tao Jinliang, Wang Xiao, Wei Yuanyuan, et al Effaith amddiffynnol flavonoids o Cuscuta chinensis ar secretiad annormal a achosir gan BPA o hormonau gwrywaidd mewn celloedd rhyng-raniadol ceilliau llygoden [J] Cynnydd mewn Meddygaeth Anifeiliaid 2019, 40 (5): { {4}}

［19］ Wang Peng, Hou Deyu, Shi Liguang, et al Danzhou Cyw Iâr FSH Astudiaeth ar polymorphism Sengl-niwcleotid o genyn ［ J ］ Hwsmonaeth Anifeiliaid a Meddygaeth Milfeddygol Heilongjiang, 2018, 10 (19): 19-22

［20］ ZHANG M, SHI H, SEGALOFF DL, et al. Mynegiant a lo⁃ y derbynnydd hormon luteinizing yn llwybr atgenhedlu'r llygoden benywaidd［J］. Bioleg atgynhyrchu, 2001,64 （1）: 179-187.

［21］ Li Qin, Wang Qigui TGF- Cynnydd ymchwil a rhagolygon aelodau'r teulu yn rheoleiddio datblygiad ffoliglaidd mewn dofednod ［ J ］ Dofednod Tsieineaidd, 2019, 41 (19): 1-5

［22］Guan Hongbin, Li Qingzhang Cynnydd ymchwil ar hormon ysgogol ffoligl [J] Journal of Northeast Agricultural University, 2002, 8 (3): 306-311

［23］ Wu Xinpei, Wang Shuying Imiwnohistocemegol lleoleiddio FSHR a LHR yn ofarïau Laiwu Black Goat ［ J ］ Ymchwil Gwyddor Bywyd, 2006, 25 (4): 367-371

［24］ TISCHKAU SA, HOWELL RE, HICKOK JR, et al. Mae'r ymchwydd hormon teinizing lu⁃ yn rheoleiddio mynegiant genyn cloc circadian yn ofari'r ieir［J］. Cronobioleg ryngwladol, 2011,28 (1):10-20.

［25］Tang Haifei, Wang Zhiwen, Zheng Xuesong, et al Cynnydd mewn ymchwil swyddogaeth estrogen [J] Atgenhedlu ac Atal Cenhedlu, 2019, 39 (4): 334-340

［26］ Liu Lingbin Effaith golau ymbelydredd monocromatig ar dderbynnydd estrogen (ER , ER ）, Effaith mynegiant derbynnydd Progesterone (PR-A, PR-B) mewn meinwe ofarïaidd Ya'an: Prifysgol Amaethyddol Sichuan, 2013

［27］ COUSE JF, LINDZEY J, GRANDIEN K, et al.Tissue dosraniad⁃ a dadansoddiad meintiol o estrogen receptor-alpha (cyfnod ERal⁃) a derbynnydd estrogen-beta (ERbeta) cennad-asid ribonucleic math a llygoden ERalpha-knockout［J］. En⁃ docrinoleg,1997,138 (11):4613-4621.

［28］Guo Miao ER mewn meinwe ofari o ieir dodwy Rheoleiddio ymddangosiadol o newidiadau deinamig a sgrinio genyn Rheoleiddiwr Tai'an: Prifysgol Amaethyddol Shandong, 2017. [ Zhao Biqian Cynnydd ymchwil ar gymhwyso daidzein wrth gynhyrchu ieir dodwy [J ] Feed Guangdong, 2017, 26 (8): 31-33