Effeithiau Glycosidau Cyfanswm Cistanche Deserticola Ar Anafiadau Straen Ocsidiol Ac Apoptosis Cell mewn Llygod Mawr Gydag Isgemia Ymenyddol-atlifiad Ⅰ

Abstract

Amcan: Archwilio effeithiau a mecanweithiau posiblCyfanswm glycosidau Cistanche deserticola(GCs) ar niwed straen ocsideiddiol ac apoptosis celloedd nerfol mewn llygod mawr â ymennyddanaf atdarlifiad isgemia(CIRI).

Dulliau: Adeiladwyd y model occlusion rhydweli cerebral canol (MCAO) mewn llygod mawr model gan ddefnyddio'r dull embolization pwythau. Ar ôl sefydlu'r model yn llwyddiannus, rhoddwyd GCs 50 mg/(kg·d) i'r llygod mawr yn y grŵp cyffuriau (GCs) trwy fesurydd am 14 diwrnod yn olynol; rhoddwyd yr un faint o halwynog arferol i'r llygod mawr yn y grŵp llawdriniaeth ffug (Sham) a'r grŵp model (Model). Gweinyddiaeth lafar. Ar ôl y weinyddiaeth, defnyddiwyd dull sgôr Longa i werthuso'r diffyg niwrolegol; yna aberthwyd llygod mawr, a pherfformiwyd staenio TTC i gyfrifo canran arwynebedd cnawdnychiant yr ymennydd; Defnyddiwyd dull ELISA i ganfod serwmmalondialdehyde(MDA) cynnwys,superoxide dismutase(SOD) aGlutathione peroxidase (GSH-Px)gweithgaredd; Blot gorllewinol i ganfod ffactor niwclear E2-ffactor cysylltiedig 2 (Nrf2), heme oxygenase-1 (HO-1) a B ym meinwe'r ymennyddLymffoma cellog/lewcemia-2 (Bcl-2), Bcl-2-protein X cysylltiedig (Bax), a mynegiant caspase-3 (Caspase-3).

Canlyniadau: O gymharu â'r grŵp Sham, roedd gan y grŵp Model sgôr diffyg niwrolegol uwch, cynnydd yn y ganran o ardal cnawdnychiant yr ymennydd,cynyddu cynnwys MDA, llai o weithgareddau SOD a GSH-Px, a gostwng lefel mynegiant protein Nrf 2, HO -1 a Bc l-2 Cynyddodd lefelau mynegiant protein Bax a Caspase-3; o'i gymharu â'r grŵp Model, gostyngodd sgôr diffyg niwrolegol llygod mawr yn y grŵp GCs, gostyngodd canran ardal cnawdnychiant yr ymennydd, yGostyngodd cynnwys MDA, Mae gweithgaredd SOD a GS H-Px yn cynyddu, Cynyddodd lefelau mynegiant protein Nrf 2, HO -1 a Bcl - 2, a gostyngodd lefelau mynegiant protein Bax a Caspase - 3. Casgliad: Gall GCs leihau anaf isgemia-atlifiad cerebral yn effeithiol, a gall ei fecanwaith fod yn gysylltiedig ag actifadu llwybr Nrf 2 / HO - 1, a thrwy hynny leihau lefelau straen ocsideiddiol ac atal apoptosis celloedd nerfol.

[Geiriau allweddol]Cyfanswm glycosidau Cistanche deserticola; anaf isgemia cerebral-atlifiad; straen ocsideiddiol; apoptosis cell

DYFYNIAD NATURIOL ORGANIG CISTANCHE

Cliciwch i gael mwy o fanylion

Gwasanaeth Cefnogol Wecistanche - Yr allforiwr cistanche mwyaf yn Tsieina:

E-bost:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Ffôn:+86 15292862950

Siop Am Fwy o Fanylebau:

https://www.xjcistanche.com% 2fcistanche-siop

Atlifiad isgemia cerebral,

Mae CIS yn glefyd gyda hynod omorbidrwydd uchel, anableddacyfraddau marwolaethau. Mae celloedd yr ymennydd yn hynod sensitif i isgemia a hypocsia, felly ail-ganoli pibellau gwaed yr ymennydd cyn gynted â phosibl yw'r ffordd fwyaf effeithiol o ddelio â strôc isgemig acíwt. Mae thrombolysis mewnwythiennol a thrombectomi mecanyddol yn ddulliau a ddefnyddir yn helaeth ar hyn o bryd, ond oherwydd eu cymharol

Oherwydd y ffenestr amser gul a ffactorau na ellir eu rheoli eraill, dim ond<10% of stroke patients can achieve vascular recanalization within an effective time. Atlifiad isgemia cerebral, Mae CIRI yn fath o adferiad pibellau gwaed cerebral o stenosis Difrod patholegol arosodedig sy'n digwydd yn ystod llif y gwaed. Credir ar hyn o bryd y gallai ei fecanwaith patholegol fod yn gysylltiedig â gwenwyndra asid amino cyffrous, gorlwytho calsiwm, rhyddhau ffactorau llidiol, a chroniad radicalau rhydd o ocsigen a achosir gan ddifrod mitocondriaidd [1], gan arwain yn y pen draw at ddinistrio rhwystr gwaed-ymennydd, anhwylderau microcirculation. , apoptosis celloedd nerfol, a necrosis [1] 2] a chyfres o adweithiau, a thrwy hynny waethygu diffygion niwrolegol ymhellach.

Mae cyfanswm glycosidau Cistanche deserticola (glycosidau cistanche, GCs) yn deillio o'r feddyginiaeth draddodiadol Tsieineaidd Herba Cistanche Mae'r prif gynhwysyn gweithredol yn cael ei dynnu o goesynnau a gwreiddiau modfeddi). Mae astudiaethau blaenorol wedi dangos y gall GCs atal perocsidiad lipid yn effeithiol, gwella swyddogaeth mitocondriaidd, chwilota radicalau rhydd o ocsigen gormodol, atal rhyddhau cytocinau llidiol, lleihau cytotoxicity, agregu gwrthblatennau, atal amlhau celloedd, atal apoptosis niwronaidd, a Lleihau lefelau hormonau, a thrwy hynny gael gwrth-heneiddio, gwrth-tiwmor, gwrth-iselder, gwella imiwnedd, gwella clefydau cardiofasgwlaidd a serebro-fasgwlaidd isgemig, gwella galluoedd dysgu a chof a swyddogaethau gwybyddol, a gwella atgenhedlu [3].

Mae astudiaethau wedi dangos y gall GCs leihau difrod ocsideiddiol i gelloedd a chynnal uniondeb y rhwystr gwaed-ymennydd.

[4]; Gall GCs wella hyfywedd celloedd yn effeithiol a rhwystro llid ac apoptosis a achosir ar ôl isgemia-atlifiad [5]; Mae Nrf 2 yn chwarae rhan bwysig yn y prosesau gwrthlidiol a gwrthocsidiol [6]. Yn seiliedig ar y cefndir uchod, nod yr erthygl hon yw astudio ymhellach effeithiau a llwybrau posibl GCs ar straen ocsideiddiol ac apoptosis ar ôl CIRI trwy ddyblygu model CIRI.

1 Defnyddiau a dulliau

1. 1 Cyffuriau ac adweithyddion GCs (SN-5692, purdeb 98%, Gorllewinol

Anshenong Biotechnology Co, Ltd.), 2% triphenyltetrazolium clorid (TTC) ateb llifyn (Beijing Solebao Technology Co, Ltd), ELISA pecyn (Beijing Boosen Co, Ltd), pecyn dadansoddi meintiol protein BCA (UDA Signaling Cell Prynwyd y Cwmni Technoleg), gwrthgorff gwrth-lygoden cwningen Bcl-2, Bax, Gwrthgyrff Caspas megis e-3, Nrf 2, HO-1, a gwrthgyrff eilaidd gwrth-gwningen gafr oddi wrth Cwmni Proteintech yr Unol Daleithiau.

1. 2 offeryn

Centrifuge (Model: TDL-40B, Ffatri Offeryn Gwyddonol Shanghai Anheng), darllenydd Microplate (Model: Max-M5, Cwmni Dyfeisiau Moleciwlaidd America), offeryn electrofforesis SDS- PAGE (model: DYY-7C, Beijing Liuyi Biotechnology Co, Ltd Company), sganiwr gel (Model: 4466611, Cwmni BIO-RAD yr Unol Daleithiau).

1. 3 anifail

Llygod mawr Wistar gwrywaidd [SCXK (Beijing) 2019-0010], gradd lân, 8 wythnos oed, pwysau corff 250-280 g.

1. 3 dull

1. 3. 1 Grwpio a modelu

Rhannwyd llygod mawr yn grŵp ffug (Sham), grŵp model (Model), a grŵp cyffuriau (GCs) gan ddefnyddio dull hapio syml. Roedd 15 o lygod mawr ym mhob grŵp. Cawsant eu codi'n addasol am 1 wythnos ac yna eu modelu. Gan ymprydio ac ymprydio'n llym 12 awr cyn llawdriniaeth, defnyddiodd y grŵp Model a'r grŵp GCs y dull embolization pwythau [7] i greu achludiad rhydweli ymennydd canol (occlusion rhydweli ymennydd canol). occlusion, MCAO) model llygod mawr, tynnu embolws ei berfformio ar ôl 2 awr o isgemia i gyflawni atlifiad. , cofnodwch amser cychwyn yr atlifiad. Cafodd y clwyf ei sutured, diheintiwyd y croen ag iodophor, a dychwelwyd yr anifeiliaid i'r cawell a'u magu, ac yna eu darlifo am 24 h. Roedd y llawdriniaeth ar gyfer llygod mawr yn y grŵp Sham yr un peth â'r llawdriniaeth ar gyfer llygod mawr y model, ond ni pherfformiwyd plygio. Yn olaf, cadwyd 10 llygod mawr ym mhob grŵp ar gyfer arbrofion dilynol.

1. 3. 2. Dull gweinyddiad

Cymerwch bowdr GCs ac ychwanegu dŵr pur i baratoi hydoddiant 15 mg/ml. Mae astudiaethau rhagarweiniol wedi dangos bod y dos o 50 mg/(kg·d) yn well na grwpiau dos eraill [8], felly mae'r dos a ddewiswyd ar gyfer yr arbrawf hwn yr un peth ag o'r blaen. Rhoddwyd GCs i lygod mawr yn y grŵp GCs trwy gludydd ar ôl 24 awr o isgemia ac atlifiad, a rhoddwyd yr un faint o halwynog arferol i lygod mawr yn y grŵp Sham a'r grŵp Model am 14 diwrnod.

1. 3. 3 Sgôr diffyg niwrolegol

Defnyddiwyd dull sgorio Longa [7] i sgorio 24 awr ar ôl llawdriniaeth, a chadwyd llygod mawr model â sgoriau o 1 i 3 ar gyfer arbrofion dilynol. Sgôr ar ôl y dos olaf. 0 pwynt: Dim

Symptomau niwrolegol; 1 pwynt: diffyg niwrolegol bach, mae'r forelimb cyfochrog yn ystwytho ac yn codi pan fydd y gynffon yn cael ei chodi, ac mae'r ysgwydd yn adducts; 2 bwynt: diffyg niwrolegol cymedrol, mae'r forelimb cyfochrog yn ystwytho ac yn codi pan fydd y gynffon yn cael ei godi, adduction ysgwydd, gan droi mewn cylchoedd i ochr arall y briw wrth gerdded; 3 phwynt: diffyg niwrolegol difrifol, yn pwyso i ochr arall y briw wrth gerdded; 4 pwynt: gweithgareddau anymwybodol ac ymreolaethol.

1. 3. 4 Pennu canran arwynebedd cnawdnychiant yr ymennydd

Ar ôl y weinyddiaeth ddiwethaf, cafodd 4 llygod mawr o bob grŵp eu dewis ar hap, eu hanestheteiddio'n ddwfn, eu dadseinio, a chafodd eu hymennydd eu tynnu'n gyflym.

Rhewi meinwe'r ymennydd yn gyflym mewn oergell -20 gradd am 20 munud. Ar ôl i feinwe'r ymennydd fod yn gymharol sefydlog, tynnwch ef allan. Gan ddechrau o groestoriad polyn blaenorol yr ymennydd i'r chiasm optig, ac o'r talcen i'r occiput, torrwch ymennydd y llygoden fawr ar hyd yr awyren coronaidd. Torrwch yn 5 sleisen ymennydd gyda thrwch o 2 mm, trochwch nhw mewn toddiant TTC 2%, rhowch nhw mewn baddon dŵr 37 gradd i'w lliwio am 15 munud, trowch nhw drosodd, a'u lliwio am 15 munud arall. Yn olaf, cafodd y tafelli ymennydd eu trochi mewn hydoddiant paraformaldehyd 4% a'u gosod am 12 awr cyn tynnu llun. Dangoswyd meinwe ymennydd arferol mewn coch a dangoswyd meinwe ymennydd cnawdnychlyd mewn gwyn. Defnyddio meddalwedd delweddau i ddadansoddi a chyfrifo cyfradd cnawdnychiant pob tafell ymennydd. Cyfradd gnawdnychiant=arwynebedd cnawdnychiant/cyfanswm arwynebedd sleisen yr ymennydd × 100%.

1. 3. 5 Canfod dangosyddion sy'n gysylltiedig â straen ocsideiddiol

Anestheteiddiwch y llygoden fawr, cymerwch 4 ml o waed aorta abdomenol, rhowch ef mewn tiwbiau EP glân a'i roi mewn oergell 4 gradd am 0. Centrifuge ar 3 500 r/munud am 5 h ar 4 gradd am 15 munud, cymerwch y supernatant, ac yn olaf cadw'r serwm o 3 llygod mawr ym mhob grŵp. Penderfynwyd ar gynnwys malondialdehyde (MDA) a superoxide dismutase (superoxide dismutase) yn ôl dull gweithredu cit ELISA. e datgymalu,

SOD), gweithgaredd glutathione peroxidase (glutathione peroxidase, GSH-Px).

1. 3. 6 Canfod blot gorllewinol

Mesurwyd straen ocsideiddiol a phroteinau cysylltiedig â apoptosis i fesur mynegiant proteinau Nrf 2, HO -1, Bcl -2, Bax, a Caspase -3 ym meinwe'r ymennydd. Dewiswyd tri llygod mawr o bob grŵp, a chymerwyd swm priodol o cortecs cerebral o'r ardal heintiedig, ychwanegwyd hydoddiant lysis ato, a chyfrifwyd y crynodiad protein ar ôl echdynnu protein. Ar ôl electrofforesis gel protein, ei drosglwyddo i bilen, blocio gyda datrysiad blocio am 2 h, rinsio, ac yna ei ddeor â gwrthgorff cynradd ar 4 gradd dros nos, y diwrnod wedyn, tynnwyd y TBST, ei rinsio, ac ychwanegwyd gwrthgorff eilaidd ar gyfer deor am 2. h. Rhowch y band targed ar y dadansoddwr delweddu i ddadansoddi'r gwerth llwyd. Cyfrifwch y gwerth llwyd stribed cymharol, gwerth llwyd stribed cymharol=gwerth llwyd stribed targed / gwerth llwyd stribed cyfeirio mewnol.

1. 4 Dulliau dadansoddi ystadegol

Cymhwysiad data SPSS 25. 0 meddalwedd ar gyfer dadansoddi data, a lluniwyd y graffiau ystadegol yn yr erthygl hon gyda meddalwedd GraphPad Prism 8. Mae canlyniadau data sy'n gyson â dosbarthiad arferol yn cael eu mynegi fel cymedrig ± gwyriad safonol. Defnyddiwyd dadansoddiad un ffactor o amrywiant ar gyfer cymariaethau rhwng samplau lluosog, a defnyddiwyd LSD-t i gymharu dau sampl annibynnol. Prawf, gyda P < 0. Mae 05 yn nodi bod y gwahaniaeth yn ystadegol arwyddocaol.