Effeithiau Pedwar Dyfyniad Llysieuol Tsieineaidd ar Gelloedd Carsinoma Ysgyfaint Bach-gelloedd Sy'n Sensitif i Gyffuriau Ac Amlgyffuriau

David SadavaJulie Ahn Mei Zhan Mei-Lin PangJane DingSusan E. Kane

Pwrpas Haniaethol:Archwiliwyd ffarmacoleg, bioleg celloedd, a bioleg foleciwlaidd celloedd carcinoma'r ysgyfaint celloedd bach a gafodd eu trin â phedwar dyfyniad oMeddyginiaethau llysieuol Tsieineaidd. Mae llawer o gleifion canser yn cymryd y meddyginiaethau hyn, ond nid yw eu heffeithiau ar y lefel gellog yn hysbys i raddau helaeth. Roedd gennym ddiddordeb arbennig yn yr effeithiau ar gelloedd sy'n gallu gwrthsefyll cyffuriau, gan fod ymwrthedd yn broblem glinigol sylweddol ynddicans yr ysgyfaintr. Dulliau: Amlygwyd celloedd epithelial ysgyfaint sy'n sensitif i gyffuriau (H69), aml-gyffuriau (H69VP), a chelloedd epithelial ysgyfaint arferol (BEAS-2) i echdynion o ddau blanhigyn a ddefnyddir mewn meddygaeth lysieuol Tsieineaidd ar gyfercancr yr ysgyfaint: Glycyrrhiza glabra (GLYC) ac Olenandria diffusa (OLEN), ac i ddetholiadau o ddau gyfuniad oMeddyginiaethau llysieuol Tsieineaidd, SPES (15 perlysiau) a PC-SPES (8 perlysiau). Mesurwyd sytowenwyndra yn nhermau ataliad twf celloedd (IC50). Mesurwyd cineteg darnio DNA ar ôl dod i gysylltiad â'r darnau llysieuol gan labelu BudR ac yna ELISA. Mesurwyd apoptosis gan assay TUNEL ac yna cytometreg llif. Mesurwyd mynegiant genynnau sy'n gysylltiedig â chylchred celloedd apoptosis trwy drawsgrifiad gwrthdro o mRNA ac yna hybrideiddio hidlo i araeau o stilwyr a chanfod trwy gemoleuedd. Canlyniadau: Ym mhob achos, roedd y pedwar dyfyniad llysieuol yr un mor sytotocsig i H69 a H69VP ac yn llai sytotocsig i BEAS-2. Roedd pob un o'r pedwar dyfyniad yn achosi darnio DNA yng nghelloedd carcinoma'r ysgyfaint. Dangosodd y cineteg ddarnau DNA a ryddhawyd i'r cyfrwng (arwydd o necrosis) mewn diwylliannau agored i GLYC, ond y tu mewn i'r celloedd (arwydd o apoptosis) mewn diwylliannau agored i OLEN-, SPES- a PC-SPES. Cadarnhaodd dadansoddiad TUNEL fod dod i gysylltiad â'r tri dyfyniad olaf, ond nid i GLYC, wedi arwain at apoptosis. O'u cymharu â chelloedd heb eu trin a GLYC-drin, dangosodd celloedd H69 a H69VP a gafodd eu trin ag OLEN, SPES a PC-SPES fynegiant uchel o nifer o enynnau sy'n ymwneud â'r rhaeadru apoptotig, yn debyg i gelloedd a gafodd eu trin ag etoposide a vincristine.

Casgliad:Mae'rMeddygaeth lysieuol Tsieineaidddetholiadau Mae OLEN, SPES a PC-SPES yn sytotocsig i gyffuriau-ymwrthol a sensitif i gyffuriaucancr yr ysgyfaintcelloedd, sy'n dangos rhywfaint o benodolrwydd celloedd tiwmor o'u cymharu â'u heffaith ar gelloedd normal, ac maent yn proapoptotig fel y'u mesurir gan doriadau DNA a mynegiant genynnau. Roedd ymateb y celloedd tiwmor i'r darnau hyn yn debyg i'w hymateb i gyffuriau cemotherapiwtig confensiynol.

Cistanche, gwerthfawrMeddygaeth lysieuol Tsieineaidd, yn cael yr effaith o wella imiwnedd acancr yr ysgyfaint. Mae gan Cistanche hanes hir o ddefnydd meddyginiaethol. Fe'i cofnodwyd gyntaf yn "Shen Nong's Materia Medica". Roedd Shennong yn blasu pob math o berlysiau. Mae effeithiolrwydd a rôl Cistanche yn arwyddocaol o ran bywiogi'r aren a'r hanfod maethlon, lleddfu blinder, lleithio'r coluddion a'r ymgarthu, yang maethlon ac yin maethlon, ac ati, felly fe'i cofnodwyd yn y llyfr. Yn ystod y Brenhinllin ôl-Tang, rhestrwyd Cistanche fel un o'r naw math tylwyth teg Tsieineaidd o laswellt. Mae ymchwil modern arno wedi'i gynnal ers dros 60 mlynedd. , Gwrth-heneiddio, yn helpu i wella cof ac imiwnedd, ac ati.

Geiriau allweddol:Cancr yr ysgyfaint, ymwrthedd i gyffuriau,Meddyginiaethau llysieuol Tsieineaidd,cistanche

Cyswllt:joanna.jia@wecistanche.com

Rhagymadrodd

Bach-gellcancr yr ysgyfaint(SCLC) yn cyfrif am tua 20 y cant o'r cyfancanser yr ysgyfaintac mae'n ymosodol, gyda 5-cyfradd goroesi blwyddyn adeg diagnosis o lai na 10 y cant [19]. Mae cleifion yn gyffredin â chlefyd wedi'i ledaenu, ac felly triniaeth cemotherapi yw hwn, gyda chyfuniadau'n aml yn cynnwys cisplatin, etoposide, doxorubicin, 5-fluorouracil, a taxol [12]. Yn anffodus, mae'r driniaeth hon yn dod yn aneffeithiol yn y pen draw oherwydd bod y rhan fwyaf o diwmorau SCLC yn datblygu ymwrthedd amlgyffuriau [18]. Gan fod yna lawer o fecanweithiau ymwrthedd [15], mae goresgyn ymwrthedd yn her glinigol fawr.

Yn wyneb gofal lliniarol, mae llawer o gleifion canser yn defnyddio meddyginiaethau amgen, gan gynnwys therapïau llysieuol [6, 23]. Ymhlith y therapïau hyn, mae'n debyg mai meddygaeth Tsieineaidd draddodiadol yw'r un sydd wedi'i sefydlu a'i chodeiddio orau, sy'n dyddio'n ôl sawl mil o flynyddoedd. Mae sail ddamcaniaethol y system feddygol hon yn ymwneud â grymoedd gwrthwynebol yin ac yang, cylchoedd cynhyrchiol a dinistriol, a grym bywyd, neu qi [2]. Mae detholiadau llysieuol penodol, a chyfuniadau, wedi'u dyfeisio i drin clefydau penodol gan gynnwys canserau [11, 27]. Er bod rhywfaint o dystiolaeth empirig bod y perlysiau'n effeithiol wrth drin canser, nid yw eu mecanweithiau gweithredu ar y lefel gellog yn hysbys i raddau helaeth. Mae hyn yn cymryd mwy o bwys os yw cleifion yn cyfuno eu defnydd â chemotherapi confensiynol. Hefyd, ni adroddwyd am effeithiau echdynion llysieuol ar ymwrthedd i gyffuriau.

Fe wnaethom ymchwilio i effeithiau pedwarMeddyginiaethau llysieuol Tsieineaiddar dair llinell gell: SCLC, SCLC sy'n gwrthsefyll aml-gyffuriau, ac epitheliwm ysgyfaint arferol. Roedd dau o'r pedwar dyfyniad yn dod o blanhigion sengl a ragnodwyd yn aml ar gyfer canser yr ysgyfaint, Glycyrrhiza glabra (GLYC) ac Olenandria diffusa (OLEN). Daeth y ddau arall o gyfuniadau o berlysiau oedd ar gael yn fasnachol o'r enw SPES a PC-SPES. Mae gan OLEN (enw Tsieineaidd Bai Hua she cao) weithgareddau antitumor, antimutagenig, ac imiwn-ysgogol [1, 25, 29]. Mae GLYC (enw Tsieineaidd ‘car’) yn wrth-inflamatory, antitumorigenic, ac antimutagenic [7, 11]. Mae SPES, a ddatblygwyd gan BotanicLabs (Brea, Calif.), ar ffurf capsiwlau sy'n cynnwys darnau lyophilized o 15 perlysiau Tsieineaidd a dangoswyd ei fod yn lleihau poen mewn cleifion â chanserau datblygedig [14]. Ymhlith y perlysiau yn SPES mae'r symbylydd imiwnCistanchedeserticola, yr asiant antitumor Rabdosia rubescens, a'r asiant gwrthlidiol Zanthoxylum iridium [1, 11]. Mae PC- SPES, a baratowyd hefyd gan BotanicLabs, yn cynnwys wyth perlysiau, gan gynnwys y Serenoa repens antiandrogenic sy'n atal hyperplasia prostatig [21], yr atalydd protein kinase C Scutellaria baicalensis [13], yr asiant antitumor Panax ginseng [30], a Glycyrrhiza glabra ( gweler uchod). Er bod tystiolaeth drylwyr ar gyfer effeithiolrwydd gwrthtiwmor clinigol GLYC, OLEN, ac SPES yn brin, mae rhywfaint o dystiolaeth o effeithiolrwydd PC-SPES. Mewn celloedd canser y prostad a modelau anifeiliaid, mae PC-SPES yn proapoptotig a sytotocsig [8, 9, 10, 28]. Mae treialon clinigol wedi nodi ei fod yn effeithiol o ran gostwng lefelau antigen penodol i'r prostad ac atal twf tiwmor mewn canser y prostad sy'n ddibynnol ar androgen ac sy'n annibynnol ar androgen [4, 5, 17, 20, 26].

Er bod cleifion canser yn ddiau yn defnyddio detholiadau llysieuol, prin yw'r data rhag-glinigol neu glinigol ar effaith y darnau hyn ar SCLC. Ein nod oedd dechrau'r dadansoddiad hwn gydag archwiliad o'r ffarmacoleg (cytowenwyndra), bioleg celloedd (dull marwolaeth celloedd), a bioleg foleciwlaidd (mynegiant genynnau) mewn celloedd SCLC sy'n sensitif i gyffuriau ac sy'n gwrthsefyll cyffuriau.

Defnyddiau a dulliau

Detholiad a chemegau

Cafwyd GLYC ac OLEN fel planhigion sych gan Jen-On Medical Group (Monterey Park, Calif.). Ar gyfer paratoi echdynnyn, cafodd 0.5 g ei falu'n bowdr mân gyda morter a pestl a'i hongian mewn 30 ml o ddŵr distyll. Mewn meddygaeth Tsieineaidd, mae'r darnau planhigion yn cael eu bwyta fel te ar ôl gwresogi. Felly, cafodd yr ataliad ei ddeori gan ysgwyd ar 70 gradd am 18 h. Yn dilyn allgyrchu ar 1500 g am 10 munud, cafodd y supernatant ei sterileiddio trwy hidlo trwy hidlydd 0.45-lm gan ddefnyddio chwistrell. Addaswyd y dyfyniad canlyniadol â dŵr distyll i 17 mg/ml yn seiliedig ar y deunydd planhigion gwreiddiol. Cafodd y darnau eu storio ar 4 gradd am hyd at 1 wythnos nes eu defnyddio.

Cafwyd SPES a PC-SPES gan BotanicLabs (Brea, Calif.) fel capsiwlau. Defnyddiwyd y dull echdynnu a ddefnyddiwyd mewn astudiaethau blaenorol o'r paratoadau hyn [8, 9, 10]. Diddymwyd cynnwys un capsiwl (320 mg) mewn 1 ml 95 y cant ethanol a deorwyd yr ataliad trwy ysgwyd ar 37 gradd am 1 h. Ar ôl centrifugio ar 3000 g am 10 munud, cafodd y supernatant ei hidlo-sterileiddio fel uchod. Y crynodiad terfynol oedd 300 mg/ml yn seiliedig ar y deunydd planhigion gwreiddiol. Roedd y darnau'n cael eu storio ar -20 gradd am hyd at wythnos nes eu defnyddio.

Diwylliannau celloedd a mesur sytowenwyndra

Tyfwyd celloedd SCLC NCI-H69 ar 37 gradd mewn awyrgylch sy'n cynnwys 5 y cant CO2 fel ataliad mewn cyfrwng di-serwm AIM-V (Life Technologies, Grand Island, NY). Tyfwyd llinell gell sy'n gwrthsefyll amlgyffuriau (H69VP) a ddewiswyd yn etoposide [16] hefyd yn AIM-V a dangosodd groes-ymwrthedd i etoposide (9-plyg), doxorubicin (20- plyg), a vincristine (10-plyg) (data heb ei ddangos). Mae gan y celloedd hyn fecanweithiau lluosog o ymwrthedd i gyffuriau, gan gynnwys newidiadau i topoisomerase II a mynegiant pympiau'r bilen, MDR1 ac MRP. Tyfwyd celloedd epithelial ysgyfaint arferol BEAS [22] mewn DMEM-F12 wedi'i ategu â serwm buchol ffetws 10 y cant.

Ar gyfer profion sytowenwyndra, ychwanegwyd echdynion fel y dangoswyd at gelloedd sy'n tyfu'n logarithmig mewn 1-ml diwylliannau sy'n cynnwys 6000 o gelloedd/ml. Ar ôl 4 diwrnod o ddatguddiad parhaus, cafodd celloedd eu cyfrif mewn rhifydd Coulter Z-1. Dilyswyd cyfrifon yn ficrosgopig gan hemocytomedr ar ôl eu staenio â glas trypan. Cafodd yr holl arbrofion eu gwneud yn driphlyg a'u hailadrodd o leiaf deirgwaith. Cyfrifwyd y gwerthoedd IC50, a ddiffinnir fel y crynodiad o echdyniad a oedd wedi lleihau cyfrif celloedd ar ddiwrnod 4 50 y cant, o'i gymharu â rheolaethau toddyddion. Cyfrifwyd gwerthoedd cymedrig a'u cymharu gan ANOVA ar gyfer y tair llinell gell ar gyfer y darn hwnnw.

Profion marwolaeth celloedd

Ymchwiliwyd i fecanwaith cytotocsigedd gan cineteg darnio DNA cellog (cit Boehringer-Mannheim, Indianapolis, Ind.). Yn gryno, deorwyd 5·105 o gelloedd/ml am 16 awr ar 37 gradd mewn atmosffer sy'n cynnwys 5 y cant o CO2 mewn cyfrwng AIM-V sy'n cynnwys 10 lM BudR. Cafodd y celloedd eu golchi a'u haildynnu ar 105/ml mewn cyfrwng di-BudR, a chafodd 200 ll o'r meithriniad hwn ei ddeor â detholiad llysieuol yn 2·IC50 am yr amser a nodwyd, ac ar ôl hynny tynnwyd 100 ll o'r cyfrwng meithrin ar gyfer meintioli DNA darnau gan ELISA. Mae hwn yn fesur o necrosis celloedd. Mesurwyd darnau DNA o fewn y celloedd, a gynhyrchir gan apoptosis, yn dilyn lysis celloedd mewn albwmin serwm buchol (BSA) / Tween 20 ar 21 gradd am 30 munud. Yn dilyn centrifugio, defnyddiwyd y lysate ar gyfer ELISA.

Perfformiwyd ELISA mewn plât microtiter gwaelod crwn wedi'i orchuddio â gwrthgorff gwrth-DNA (llygoden monoclonaidd DNA gwrth-ddynol, clôn MCA-33) dros nos ar 4 gradd . Yn dilyn blocio gyda BSA, ychwanegwyd hydoddiant darn DNA wedi'i labelu 100 ll at y ffynhonnau wedi'u gorchuddio ac yna deor am 90 munud ar 21 gradd . Cafodd y DNA ei osod a'i ddadnatureiddio gan arbelydru microdon ar 500 W am 5 munud. Ychwanegwyd gwrth-BudR llygoden (llygoden monoclonaidd BMG 6HB) wedi'i gyfuno â peroxidase ac, yn dilyn deori yn y tywyllwch am 120 munud ar 21 gradd, stopiwyd yr adwaith trwy ychwanegu H2SO4 crynodedig 500 ll. Cafodd y lliw canlyniadol ei feintioli gan amsugnedd ar 450 nm. Cymharwyd samplau wedi'u trin â detholiad â rheolyddion heb eu trin fel cefndir.

Cadarnhawyd apoptosis gan ddadansoddiad TUNEL. Amlygwyd celloedd a oedd yn tyfu'n logarithmig i echdyniad llysieuol ar 1·IC50 am 3 h. Yna cawsant eu golchi ddwywaith mewn halwynog wedi'i glustogi â ffosffad (PBS) yn cynnwys 1 y cant o BSA a'u hailddarparu yn PBS/BSA ar 5·1{{05 cell/ml. I gelloedd 500 ll, ychwanegwyd paraformaldehyd 100 ll 4 y cant a gosodwyd y celloedd ar 21 gradd am 1 awr. Yn dilyn golchi yn PBS, cafodd y celloedd eu hailddarparu mewn byffer athreiddo oer 100 ll (0.1 y cant Triton X-100, 0.1 y cant sodiwm sitrad) am 2 funud ar 4 gradd . Cafodd y celloedd eu golchi ddwywaith mewn PBS ac yna eu hailddarparu mewn cymysgedd TUNEL 50 ll yn cynnwys deoxyribonucleotide- idyl transferase terfynol (TdT) a fluorescein-dUTP (cit Boehringer- Mannheim). Ar ôl deori yn y tywyllwch ar 37 gradd am 1 h, cafodd y celloedd eu gwrth-staenio â propidium ïodid a'u dadansoddi gan cytometreg llif.

Dadansoddiad mynegiant genynnau

Deorwyd diwylliannau (6 ml) o gelloedd a oedd yn tyfu'n logarithmig (5·155 cell/ml) mewn cyfrwng sy'n cynnwys echdyniad llysieuol yn 1·IC50 ar 37 gradd mewn atmosffer sy'n cynnwys 5 y cant o CO2 am 3 h. Ar ôl golchi ddwywaith mewn PBS, cafodd y pelenni celloedd eu rhewi ar -70 gradd dros nos. Cafodd RNA ei ynysu gan brotocol RNeasy Mini (Qiagen, Valencia, Calif.). Yn gyffredinol, rhoddodd y dull hwn 0.5 LG RNA. Cafodd y swm hwn o RNA ei drawsgrifio o chwith i cDNA a'i labelu â biotin-dUTP, a'i groesrywio i stilwyr dadnatureiddio i genynnau sy'n gysylltiedig â chylchred celloedd apoptosis ar hidlwyr. Hybridization ei ganfod trwy rwymo ffosffatase-streptavidin alcalïaidd i'r cDNA gan ddefnyddio swbstrad chemiluminescent, CDP-Star (SuperAr- ray, Bethesda, Md.), ac yna amlygiad i pelydr-X ffilm, yn gyffredinol am 1-2 munud.

Roedd targedau genynnau rheoli ar bob hidlydd yn cynnwys b-actin a GAP-DH fel rheolyddion positif, a pUC18 fel rheolydd negyddol. Targedau hybrideiddio oedd y genynnau cylchred celloedd a ganlyn a oedd yn gysylltiedig â apoptosis: drwg, bcl-2, BCL-w, BCL-x, caspases 1–10, c-myc, E2F, fas, fas ligand, gadd45, iNOS , mdm2, NFkB, t21Waf1, t53, mochyn7, mochyn8, Rb, DR5, llwybr, Casper, CRADD, DAXX, IAP-1, IAP-2, NIK, TNFR2, TRAF2, TRAF3, TRAF5, a DR5. Y dwystero hybrideiddio yn cael ei sgorio'n weledol mewn smotiau dyblyg tandem ar yr hidlydd mewn perthynas â'r rheolaethau positif.

Canlyniadau

Profodd ein harbrofion cychwynnol sytotocsigeddau darnau o berlysiau Tsieineaidd ar gelloedd SCLC sy'n sensitif i gyffuriau ac sy'n gwrthsefyll cyffuriau, yn ogystal â chelloedd epithelial arferol yr ysgyfaint. Fel y dangosir yn Nhabl 1, roedd y pedwar dyfyniad llysieuol yn sytotocsig ar grynodiadau isel. Mae'r canfyddiadau hyn yn debyg i'r rhai a geir ar gyfer SPES a PC-SPES mewn llinellau celloedd tiwmor eraill [8]. Ym mhob achos, nid oedd y gwerthoedd IC50 ar gyfer celloedd sy'n gwrthsefyll amlgyffuriau (H69VP) yn wahanol i'r rhai ar gyfer y celloedd sy'n sensitif i gyffuriau (H69). Hefyd, roedd y gwerthoedd IC50 ar gyfer celloedd epithelial ysgyfaint arferol yn sylweddol uwch na'r rhai ar gyfer llinellau celloedd tiwmor.

Yna fe wnaethom ymchwilio i fecanwaith sytowenwyndra gan ddefnyddio cineteg darnio DNA fel arwydd o apoptosis (darnau wedi'u ffurfio'n araf o fewn celloedd) neu necrosis (darnau'n cael eu ffurfio'n gyflym a'u rhyddhau o'r celloedd a ddifrodwyd). Deorwyd celloedd mewn detholiad llysieuol am rhwng 30 munud ac 8 h, ac yna amcangyfrifwyd y darnau DNA gan ELISA yn y cyfrwng diwylliant a'r lysates celloedd. Mae Ffigur 1 yn dangos data cynrychioliadol ar gyfer celloedd H69 sy'n agored i'r pedwar dyfyniad am 90 munud. Gyda thri o'r darnau (SPES, PC-SPES, OLEN), daeth y rhan fwyaf o'r darnau DNA o'r tu mewn i'r celloedd (lysates), gan nodi apoptosis. Fodd bynnag, gyda GLYC, rhyddhawyd y darnau i'r cyfrwng o gelloedd wedi'u difrodi, gan nodi necrosis. Cafwyd canlyniadau tebyg gyda H69VPcells (data heb ei ddangos).

Dilynwyd yr arbrofion sytowenwyndra hyn gan brofion TUNEL o doriadau DNA yn y fan a'r lle. O'u cymharu â rheolaethau heb eu trin (1-3 y cant o gelloedd apoptotig mewn pedwar arbrawf), dangosodd celloedd SCLC a gafodd eu trin â SPES (58-85 y cant), PC-SPES (63-77 y cant), ac OLEN (49-81 y cant) bositifrwydd TUNEL, tra celloedd trin â GLYC nid oedd (1-2 y cant) ( Ffig. 2 ). Cafwyd canlyniadau tebyg gydaH69VPcells (data heb ei ddangos).

Fe wnaethom ddadansoddi trawsgrifiad genynnau mewn ymateb i ddetholiadau llysieuol gan ddefnyddio GeneArrays. Mae gan yr araeau hyn genynnau wedi'u trefnu ar y cyd sy'n gysylltiedig â'r cylchred celloedd ac apoptosis. Gwnaethom yr arbrofion hyn ddwywaith gyda chanlyniadau tebyg. Mae Ffigur 3 yn dangos diagramau arrayautora cynrychioliadol o gelloedd H69 sy'n agored i etoposide orSPES. Crynhoir ein canlyniadau ar gyfer celloedd H69 yn Nhabl 2. Er bod gan reolaethau heb eu trin fynegiant canfyddadwy o ychydig yn unig o'r genynnau a astudiwyd, dangosodd celloedd a gafodd eu trin â chyffuriau cemotherapiwtig confensiynol (etoposide a vincristine) arwyddion cryf ar gyfer nifer o enynnau sy'n ymwneud â'r cylchred celloedd rheoleiddio ac apoptosis. Roedd celloedd a gafodd eu trin ag OLEN, SPES a PC-SPES yn dangos patrwm tebyg i'r rhai a gafwyd gyda'r ddau gyffur. Yn gyffredinol, nid oedd yn ymddangos bod celloedd a gafodd eu trin â GLYC yn dangos y patrwm trawsgrifio hwn, ac yn hytrach roeddent yn dangos mynegiant cryf o'r genyn gwrthiapoptosis, BCL-2.

Trafodaeth

Fe wnaethom gynnal yr astudiaethau hyn am ddau reswm. Yn gyntaf, mae traddodiad hynafol o feddyginiaeth lysieuol Tsieineaidd sy'n seiliedig ar ei ddamcaniaethau a'i hathroniaeth ei hun [2], ac roeddem am ddechrau deall yn nhermau meddygol y Gorllewin effeithiau'r meddyginiaethau llysieuol. Defnyddir y perlysiau hyn fel cymysgeddau, ac er y bu rhywfaint o gynnydd wrth eu torri i lawr i gyfansoddion cemegol unigol[11], canolbwyntiodd ein hastudiaethau arnynt gan eu bod yn cael eu defnyddio mewn arfer traddodiadol. Ein hail gymhelliant oedd bod llawer o gleifion canser yn defnyddio'r perlysiau hyn ynghyd â thriniaethau confensiynol [6, 23], a gallai deall effeithiau cellog y perlysiau ddarparu gwybodaeth bwysig ar gyfer gwneud penderfyniadau clinigol.

Dangosodd y data cytotoxicity (Tabl 1) fod y pedwar dyfyniad llysieuol yn wir yn sytotocsig i gelloedd tiwmor, yn fwy felly ar sail dos nag i gelloedd epithelial ysgyfaint arferol, gan nodi rhywfaint o benodoldeb tiwmor ac o bosibl mynegai therapiwtig ffafriol. Mae'r tebygrwydd yn IC50 rhwng celloedd sy'n sensitif i gyffuriau ac sy'n gwrthsefyll amlgyffuriau yn dangos nad yw'r mecanweithiau ymwrthedd i gyffuriau a ddangosir yn H69VPcells yn effeithio ar y darnau hyn, gan gynnwys gorfynegiant dau gludwr cyffuriau, MDR1 ac MRP.

Dangosodd cineteg darnio DNA fod darnau SPES, PC-SPES, ac OLEN yn proapoptotig, tra bod GLYC yn amlwg yn erotig (Ffig. 1). Cadarnhawyd hyn gan staenio TUNEL yn y fan a'r lle (Ffig. 2). Mae'r rhan fwyaf o gyffuriau cemotherapiwtig confensiynol yn proapoptotig [3], ac mae grŵp o enynnau rheoleiddio apoptotig a chylchred gell yn cael eu huwchreoleiddio yn y celloedd mewn ymateb i'r cyffuriau [24]. Canfuom fod patrwm mynegiant rhai o'r genynnau a fynegwyd mewn ymateb i'r tri app pro i echdynion llysieuol yn debyg i'r hyn a welwyd yn y celloedd hyn ar ôl dod i gysylltiad â chyffuriau cemotherapiwtig confensiynol (Ffig. 3, Tabl 2). Roedd yn ymddangos bod yr ymateb i GLYC yn unig yn wahanol, o leiaf ar yr amser a ddadansoddwyd yn yr arbrofion hyn. Yn ddiddorol, mae GLYC yn rhan o PC SPES, a oedd yn proapoptotig, tra nad oedd GLYC yn unig. Efallai bod cydrannau eraill PC-SPES yn gyfrifol am ei weithgaredd proapoptotig. Er nad yw'r canlyniadau hyn yn dangos sut mae'r darnau llysieuol yn niweidio celloedd, maent yn awgrymu bod celloedd H69 yn ymateb i'r difrod ar y lefelau moleciwlaidd (trawsgrifio) a cellog (apoptosis) mewn modd tebyg i'w hymateb i gemotherapi.

Mae ein hastudiaethau'n dangos pa mor ddefnyddiol yw'r darnau llysieuol Tsieineaidd hyn wrth drin SCLC, yn enwedig clefydau sy'n gwrthsefyll cyffuriau.

DiolchiadauDiolchwn i L. Brown am gymorth amhrisiadwy gyda chyd-sytometreg ac R. Lingeman am gymorth gyda phrotocolau bioleg foleciwlaidd. Cyflenwyd celloedd BEAS yn hael gan Dr. I. Laird-Offringa, Prifysgol Southern California, Canolfan Ganser Norris. SPES a PC-SPES yn anrheg gan Dr. S. Chen, Coleg Meddygol Efrog Newydd. Cefnogwyd yr ymchwil hwn gan Sefydliad Teulu Pritzker a Sefydliad WM Keck.

Gall Cistanche fel meddyginiaeth lysieuol Tsieineaidd wella imiwnedd ac ymladd canser, cliciwch yma i ddysgu mwy

Cyfeiriadau

1. Boik J (1996) Canser a meddygaeth naturiol: gwerslyfr o wyddoniaeth sylfaenol ac ymchwil glinigol. Gwasg Feddygol Oregon, Princeton, t 221

2. Chan K (1995) Cynnydd mewn meddygaeth draddodiadol Tsieineaidd. Tueddiadau Fferyllol Sci 16:182-187

3. Chu E, DeVita V Jr (2001) Egwyddorion rheoli canser: cemotherapi. Yn: DeVita V Jr, Hellman S, Rosenberg SA (golau) Canser: egwyddorion ac arferion oncoleg. Lippincott Williams a Wilkins, Philadelphia, tt 289–306

4. De la Taille A, Hayek NEU, Buttyan R, Bagiella E, Burchart M, Katz AE (1999) Effeithiau asiant ffytotherapiwtig, PC-SPES, ar ganser y prostad. BJU Int 84:845-850

5. DiPaola RS, Zhang H, Lambert G, Meeker R, Licitra E, Rafi M, Spaulding H, Goodin S, Toledano M, Gallo M (1998) Gweithgaredd clinigol a biolegol cyfuniad llysieuol estrogenig (PC-SPES) yn y prostad cancr. Eng Newydd J Med 339:785–791

6. Eisenberg DM, Davis RB, Ettner SL (1998) Tueddiadau yn y defnydd o feddyginiaethau amgen yn UDA: 1990–1997: canlyniadau arolwg cenedlaethol dilynol. JAMA 280: 1569-1575

7. Fenwick GR, Lutomski J, Nieman C (1990) Glycyrrhiza glabra: cyfansoddiad, defnyddiau a dadansoddiad. Cemeg Bwyd 38:119–143

8. Halicka HD, Ardelt B, Juan G, Mittleman A, Chen S, Traganos F, Darzynkiewicz Z (1997) Apoptosis ac effeithiau cylchred celloedd a achosir gan ddarnau o baratoad llysieuol Tsieineaidd PC-SPES. Int J Oncol 11:437-448

9. Hsieh T, Chen SS, Wang X, Wu J (1997) Rheoleiddio derbynnydd androgen a mynegiant antigen penodol i'r prostad mewn LNCaPcells prostad dynol sy'n ymateb i androgen gan ddarnau ethanolig o'r paratoad llysieuol Tsieineaidd PC-SPES. Biochem Mol Biol Int 42:535–544

10. Hsieh T, Ng C, Chang, C, Chen SS, Mittleman, A, Wu J (1998) Sefydlu apoptosis ac is-reoleiddio BCL-6 mewn celloedd Mutu wedi'u trin â darnau ethanolig o'r atodiad llysieuol Tsieineaidd PC-SPES. Int J Oncol 13:1199–1202

11. Huang KC (1999) Ffarmacoleg perlysiau Tsieineaidd, 2^ddedn. Gwasg CRC, Boca Raton

12. Meddyg Teulu Kalemkerian, Worden FP (2000) Datblygiadau therapiwtig yn SCLC. Arbenigwr Opin Invest Drugs 9:65-79

13. Kimura Y, Okuda H, Yokio K, Matsushita N (1997) Effeithiau baicalein wedi'u hynysu o Scutellaria baicalensis ar ysgogydd plasminogen meinwe a achosir gan TNF interleukin 1b-a ac atalydd actifadu plasminogen-1 cynhyrchu mewn celloedd endothelaidd gwythiennau bogail diwylliedig . Phytother Res 11:363-367

14. Lin C (1996) Sylw ar y defnydd cyfun o gemotherapi a meddygaeth Tsieineaidd draddodiadol i leddfu poen canser. J Tradit Chin Med 16:267–269

15. Mattern J, Volm M (1995) Mecanweithiau ymwrthedd mewn canser yr ysgyfaint dynol. Metastasis Goresgyniad 15:81-94

16. Minato K, Kanzawa F, Nishio K, Nakagawa K, Fujiwara Y, Saijo N (1990) Nodweddu llinell canser yr ysgyfaint celloedd bach dynol sy'n gwrthsefyll etoposide. Cancer Chemother Pharmacol 26:313–327

17. Moyad MA, Pienta KJ, Montie JE (1999) Defnyddio PC-SPES, atodiad sydd ar gael yn fasnachol ar gyfer canser y prostad, mewn claf â'r clefyd hormon-naïf. Wroleg 54:319-324

18. Nishio K, Nakamura T, Koh Y, Suzuki H, Fukumoto N, Saijo N (1999) Ymwrthedd i gyffuriau mewn canser yr ysgyfaint. Curr Opin Oncol 11:109–115

19. Pass H, Mitchell JB, Johnson DH, Turrisi AT, Minna J (2000) Canser yr ysgyfaint: egwyddorion ac ymarfer. Lippincott, Philadelphia

20. Pfeifer BL, Pirani JF, Hamann SR, Klippel KF (2000) PC SPES: atodiad dietegol ar gyfer trin canser y prostad sy'n anhydrin â hormonau. BJU Int 85:481-485