Astudiaeth Arbrofol Ar Effaith Amddiffynnol Glycosidau Cyfanswm Cistanche (CTG) Ar Anaf Atdlifiad Isgemig Arennol
Mar 09, 2022
Cyswllt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-bost:audrey.hu@wecistanche.com
ZHU Mehefin, ZHAO Xi
Crynodeb:Amcan Sefydlu'r model llygod mawr o sioc hemorrhagic a dadebru er mwyn arsylwi effaith amddiffynnolcyfanswm glycosidau cistanche( CTG)ar yr arennolanaf atdarlifiad isgemig. Cafodd llygod mawr SD eu haposod yn grŵp llawdriniaeth ffug, grŵp sioc, a dadebru (grŵp arbrofi), a grŵp CTG, gyda 10 llygod mawr ym mhob un. Ar ôl modelu, derbyniodd y llygod mawr yn y grŵp CTG chwistrelliad mewnperitoneol o CTG 400 mg / kg. Yn y grŵp arbrofol a'r grŵp llawdriniaeth ffug, chwistrellwyd saline corfforol 3 ml. Roedd lefelau Cr, BUN, a Cys － C yn benderfynol o ganfod gweithrediad yr arennau ym mhob grŵp. Defnyddiwyd y cytometreg llif i ganfod cyfradd apoptosis celloedd arennol. Defnyddiwyd ELISA i ganfod mynegiant XIAP ym meinwe'r arennau. Canlyniadau O gymharu â'r grŵp arbrawf, mae'n debyg bod lefelau Cr, BUN, a Cys － C wedi gostwng yn yCTGgrŵp( P ＜ {{0}}.01), a gostyngwyd apoptosis celloedd arennol( P ＜ 0.01). Gwellodd CTG fynegiant XIAP yn sylweddol (P<0.05). conclusion="">CTGyn dod â'r effaith amddiffynnol ymlaenatlifiad isgemiganaf i'r arennau yn y llygod mawr, sydd o bosibl yn gysylltiedig â hyrwyddo mynegiant XIAP.
【Geiriau allweddol】 Arennau; Anaf Atlifiad Isgemig; Glycosidau Cyfanswm Cistanche; XIAP; Apoptosis Cell
Anaf at isgemia-atlif (I/R).yn ffenomen pathoffisiolegol cyffredin o niwed arennol yn y broses o sioc hemorrhagic, trawma difrifol, trawsblannu aren, a llawdriniaeth tiwmor arennol. Mae astudiaethau wedi dangos bod apoptosis yn gyswllt pwysig mewn difrod swyddogaeth arennol a achosir gan anaf I / R [1]. Atalydd protein apoptosis sy'n gysylltiedig â chromosomau-X (XIAP) yw un o'r atalyddion mewndarddol cryfaf o apoptosis a ddarganfuwyd hyd yn hyn [2]. Ychydig o astudiaethau sydd ar effaith gwrth-apoptotig XIAP mewn meinwe arennol ar ôl anaf I / R.Cyfanswm glycosidau Cistanche(CTG) o'r rhestr cyfansoddion glycosid Phenylethanol a dynnwyd oCistancheâ swyddogaethau biolegol amrywiol. Ychydig o astudiaethau sydd ar ei amddiffyniad arennol ar ôl anaf I/R. Yn yr arbrawf hwn, sefydlwyd model llygod mawr o adfywio sioc hemorrhagic, a sefydlwyd model anaf I/R systemig i archwilio effaith amddiffynnol rhag-drin CTG ar yr aren rhag anaf I/R ac archwilio ei fecanwaith posibl.
Effeithiau cistanche: atalAnaf at isgemia-atlif (I/R).
1 Deunydd a dulliau
1.1 Deunyddiau arbrofol
1.1.1 Anifeiliaid labordy 30 o lygod mawr SD gwrywaidd iach gradd glân, a ddarperir gan Ganolfan Arbrofol Prifysgol Meddygaeth Tsieineaidd Traddodiadol Shanghai, rhif tystysgrif anifeiliaid: SYXK (Shanghai) 2009-0069, pwysau corff (320 ± 30) g.
1.1.2 Adweithydd arbrofolCTG(a brynwyd o Zhejiang Hangzhou Xinghui Tianli Pharmaceutical Co, Ltd., rhif swp: 20081516); sodiwm pentobarbital (rhif swp: P3761), ïodid propidium (PI), Rhodamin123 (y ddau wedi'u prynu (O Sigma, UDA); Pecyn penderfynu Rat XIAP ELISA Kit (a brynwyd o Shanghai Kemin Biotechnology Co., Ltd., rhif swp CSB-ELO26172MO) .
1.1.3 Offeryn labordy darllenydd microplate (American Thermo Company); Synhwyrydd ffisiolegol aml-baramedr (wedi'i brynu gan Gwmni NIHON KOHDEN, Japan); Llif Cytomedr (prynwyd gan Gwmni Becton-Dickinson, UDA); 24 G trocar (Cwmni Offer Meddygol Shandong Jierui).
1.2 Dulliau arbrofol
1.2.1 Paratoi model anifeiliaid SD Cafodd llygod mawr eu cyflymu 12 awr cyn yr arbrawf a'u hanestheteiddio trwy chwistrelliad mewnperitoneol o sodiwm pentobarbital (50 mg/kg). Gosodwyd y llygod mawr yn y safle supine, a gwnaed toriad 3 cm yn yr abdomen isaf chwith a'i wahanu. Yn y rhydweli femoral, mae trocar 24 G yn cael ei fewnosod, mae profwr ffisiolegol aml-baramedr wedi'i gysylltu, mae chwistrell 20 ml yn cael ei heparineiddio, ac mae'r pwysedd gwaed yn gostwng i 40 mm Hg. Mae'r pwysedd gwaed yn disgyn i 40 mm Hg. Ystyrir bod y sioc wedi dechrau, a chynhelir y pwysedd gwaed am 90 munud. Mae'n (13 ± 3) ml, ac yna mae'r gwaed awtologaidd yn y chwistrell yn cael ei ddychwelyd yn araf. Mae'n cymryd tua 30 munud i adfer y pwysedd gwaed i fwy na 90 y cant o'r gwerth sylfaenol. Ystyrir bod y dadebru yn llwyddiannus [3]. Tynnwch y nodwydd trocar allan, clymu'r rhydweli femoral, a gwnïo'r toriad. Ar ôl i'r llygod mawr fod yn effro, fe'u dychwelwyd i'r cawell i'w harsylwi, ac roedd ganddynt fynediad rhydd at fwyd a dŵr. 24 awr ar ôl dadebru, anestheteiddiwyd y llygod mawr â sodiwm pentobarbital (50 mg / kg) trwy chwistrelliad intraperitoneol, laparotomi, a chasglwyd 5 ml o waed o'r vena cava israddol. Lladdwyd y llygod mawr ar unwaith, a chymerwyd yr arennau chwith a dde allan i'w defnyddio.
1.2.2 Grŵpio a gweinyddu anifeiliaid Rhannwyd 30 o lygod mawr ar hap yn grŵp llawdriniaeth ffug, grŵp adfywio sioc (grŵp arbrofol), a grŵp CTG, gyda 10 llygod mawr ym mhob grŵp.
Chwistrellwyd y grŵp arbrofol yn fewnberitoneol â 3 ml o halwynog arferol 2 awr cyn gollwng gwaed. Yn yCTGgrŵp, rhoddwyd CTG 2 awr cyn gollwng gwaed y llygod mawr, a chwistrellwyd y dos i geudod yr abdomen ar ddogn o 400 mg / kg. Dim ond anesthesia, laparotomi a gwahaniad lleoliad trocar rhydweli femoral a thoriadau pwythau a gafodd y grŵp llawdriniaeth ffug, ac ati, ni pherfformiwyd gwaedlif a dadebru, ac roedd y gweddill yr un peth â'r grŵp arbrofol.
1.3 Dangosyddion a dulliau profi
1.3.1 Mae labordy ein hysbyty yn pennu creatinin gwaed (Cr), wrea nitrogen (BUN), cystatin C Cr, BUN, a cystatin C. Mae Cystatin C yn farciwr mewndarddol o newidiadau yn y gyfradd hidlo glomerwlaidd. Pan fydd swyddogaeth arennol yn cael ei amharu, mae'r gyfradd hidlo glomerwlaidd yn gostwng a gall crynodiad cystatin C yn y gwaed gynyddu fwy na 10 gwaith. Mae cywirdeb diagnostig cystatin C yn sylweddol well na chywirdeb creatinin serwm.
1.3.2 Pennu cyfradd apoptosis celloedd Defnyddiwyd cytometreg llif i ganfod cyfradd apoptosis celloedd yr arennau. Cymerwch yr aren a'i dorri â llafn, ychwanegwch ychydig o PBS a'i drosglwyddo i diwb profi. Ychwanegu 0.3 y cant trypsin ar gyfer treuliad mewn baddon dŵr 37 gradd, a deor am 20 mun. Pan fydd y sylwedd yn y tiwb profi'n troi'n gymylog, ychwanegwch ddwywaith y PBS i atal y treuliad, ei hidlo â rhwyll neilon 300 rhwyll, taflu amhureddau, a defnyddio Centrifuge centrifuge tymheredd isel ar 1500 g / s ar gyfer 5 munud, taflu'r supernatant, addasu crynodiad y gell i 1 × 106 ~ 1.5 × 106 / ml, cymryd 0.4 ml o'r ataliad cell uchod, ac ychwanegu 10 ul / ml Rhodamin123 0 ．4 ml, deor mewn a Baddon dŵr 37 gradd wedi'i amddiffyn rhag golau, capiwch y tiwb profi, rinsiwch â PBS ddwywaith ar ôl 30 munud, yna centrifuge ar 1500 g/s am 5 munud, taflu'r supernatant, a rinsiwch eto yn yr un modd. Ychwanegu DP 0.4 ml, staen am 15 munud, a gwirio canran y celloedd arferol, necrotig ac apoptotig yn yr aren. Yn ôl affinedd y ddau liw hyn mewn gwahanol fathau o gelloedd, mae'n hysbys mai dim ond celloedd lliw PI sy'n gelloedd marw, dim ond celloedd lliw Rhodamin123 sy'n gelloedd byw, ac mae'r ddau gell lliw yn gelloedd apoptotig.
1.3.3 Defnyddiwyd prawf imiwn yn gysylltiedig ag ensymau (ELISA) i ganfod mynegiant XI-AP ym meinweoedd arennau llygod mawr. Cymerwyd arennau o bob grŵp, a chafodd meinweoedd arennau ffres eu trin â lysate meinwe. Centrifuge ar 1500 g/s mewn centrifuge tymheredd isel am 5 munud. Cymerwch y supernatant a gweithredu yn unol â chyfarwyddiadau'r XI-AP ELISA Kit. Mae Shanghai Jiaoda Fenghe Technology Co, Ltd yn gyfrifol am brofi.
1.4 Prosesu ystadegol
Dadansoddwyd yr holl ddata yn ystadegol gan ddefnyddio meddalwedd SPSS17.0, a mynegwyd y data fel cymedr ± gwyriad safonol (x ± s), a P<0.05 indicated="" that="" the="" difference="" was="" statistically="">
cyfanswm glycosidau cistanche
2 ganlyniad
2.1 Mynegeion swyddogaeth yr arennau Cr, BUN, Cystatin C Roedd cymhariaeth o Cr, BUN, Cystatin C yn y grŵp arbrofol yn sylweddol uwch na'r rhai yn y grŵp gweithredu ffug (P<0.01), indicating="" that="" the="" rat="" kidney="" i/r="" model="" was="" prepared="">
O'u cymharu â'r grŵp arbrofol, mae gwerthoedd Cr, BUN, a Cystatin C yn yCTGGostyngwyd y grŵp yn sylweddol, ac roedd y gwahaniaeth yn ystadegol arwyddocaol (P<0.01). the="" results="" are="" shown="" in="" table="">
Tabl 1 Cymhariaeth o'r mynegeion swyddogaeth arennol Cr, BUN, a Cystatin C llygod mawr ym mhob grŵp (x ± s)
Nodyn: O'i gymharu â'r grŵp gweithredu ffug, mae P＜{{0}.01; o'i gymharu â'r grŵp arbrofol, bP＜0.01
2.2 Cyfradd apoptosis celloedd arennol a mynegiant XIAP yn y meinwe arennol. Dim ond ychydig o gelloedd ym meinwe arennol y grŵp llawdriniaeth ffug sy'n cael apoptosis.
Cynyddwyd nifer yr apoptosis yn y grŵp arbrofol yn sylweddol, ac roedd y gwahaniaeth yn ystadegol arwyddocaol o'i gymharu â'r grŵp llawdriniaeth ffug (P<0.01); the="" number="" of="" apoptosis="" in="" the="" ctg="" group="" was="" decreased="" compared="" with="" the="" experimental="" group,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.01)>
Dim ond mynegiant XIAP gwan oedd gan y grŵp llawdriniaeth ffug, tra bod gan y grŵp arbrofol gynnydd sylweddol mewn mynegiant XIAP (P<0.01). compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" ctg="" group="" can="" significantly="" increase="" the="" expression="" of="" xiap=""><0.05). the="" results="" are="" shown="" in="" table="">
Tabl 2 Cymhariaeth o gyfradd apoptosis a mynegiant XIAP o gelloedd arennau llygod mawr ym mhob grŵp (x± s)
Nodyn: O'i gymharu â'r grŵp gweithredu ffug, aP＜{{0}}. 01; O'i gymharu â'r grŵp arbrofol, b P＜0. 05, cP<0.>
3 Trafodaeth
Mae mecanwaith anaf I/R arennau yn gymhleth iawn. Mae'n broses patholegol sy'n digwydd trwy lawer o lwybrau o dan weithrediadau amrywiol ffactorau, megis gorlwytho ïon calsiwm, difrod perocsidiad lipid, apoptosis, a necrosis, ymhlith y mae caspasau mewndarddol apoptosis sy'n ddibynnol ar caspase yw un o'r prif fathau o epithelial tiwbaidd arennol. difrod celloedd a achosir gan anaf i'r arennau I/R [4]. Teulu atalydd protein apoptosis (IAP) yw'r unig atalydd caspase a geir mewn celloedd mamalaidd hyd yn hyn, a all atal apoptosis rhag digwydd yn effeithiol. XIAP yw'r aelod ataliol caspase cryfaf o'r teulu IAP, a all atal apoptosis celloedd a achosir gan amrywiaeth o ysgogiadau patholegol a chwarae effaith amddiffynnol ar organau sydd wedi'u difrodi [5].
Ar hyn o bryd, y dull o sefydlu modelau anifeiliaid anaf I/R arennol yn bennaf yw tynnu un ochr i'r aren a chlampio ochr arall y pedicle arennol neu'r rhydweli arennol [6] i efelychu cyflwr trawsblannu aren. Defnyddiodd yr awdur y model sioc hemorrhagic/dadebru yn yr astudiaeth hon, sy'n agosach at y broses pathoffisiolegol o atlifiad isgemia systemig sy'n digwydd mewn sioc drawmatig glinigol. Yn yr arbrawf hwn, gwaed BUN, Cr, a cystatin llygod mawr SD Mae swm C yn cynyddu'n sylweddol ac mae swyddogaeth arennol yn cael ei amharu'n ddifrifol. Mae'n fodel anifail delfrydol ar gyfer astudio anaf arennol I/R.
Mae CTG yn elfen feddyginiaethol bwysig o'r feddyginiaeth Tsieineaidd draddodiadolCistanche. Cistanche, sy'n gynnes ei natur, yn felys ac yn hallt, yn perthyn i'r arennau a'r meridian coluddyn mawr ac fe'i cynhwyswyd yn wreiddiol yn Materia Medica Shennong. "Ben Jing," meddai: "Mae'n cynnal pum llafur a saith anaf, yn maethu'r canol, yn maethu'r pum organ fewnol, yn cryfhau yin, ac yn maethu hanfod a qi." Hefyd."Cistanchewedi cael ei ddefnyddio yn fy ngwlad am ddwy fil o flynyddoedd. Mae'n safle cyntaf mewn fformiwlâu cynyddu cryfder yn y gorffennol, ac yn ail yn unig i ginseng mewn fformiwlâu maethlon.Cistanchecangwella swyddogaeth rywiol, rheoleiddio niwroendocrin, a gwella swyddogaeth imiwnedd y corff. Gwrthocsidyddion, hyrwyddo metaboledd deunydd, amddiffyn myocardiwm isgemig a swyddogaethau eraill. Fel y prif gynhwysyn meddyginiaethol oCistanche, Mae gan CTG lawer o swyddogaethau. Ymchwil ar yr ymennyddisgemia-atlifiadmodel
Mae astudiaethau wedi canfod hynnyCTGyn gallu lleihau'r asidau amino excitatory ym meinwe'r ymennydd ar ôl isgemia-atlifiad a diogelu meinwe ymennydd llygod mawr SD [7]. Mae gan CTG effaith gwrthocsidiol ar feinweoedd llygoden ac mae ganddo effaith amddiffynnol benodol ar hypocsia cerebral acíwt mewn llygod a difrod cyhyrau cardiaidd mewn llygod [8]. Gall CTG wella niwro-ymddygiad llygod model Parkinson's yn sylweddol ac atal y gostyngiad yn nifer y niwronau dopamin yn y substantia nigra [9]. Trwy wella gweithgaredd ensymau chwilota radical rhad ac am ddim, atal perocsidiad lipid, atal dyddodiad peptid -amyloid yn yr ymennydd, ac atal apoptosis celloedd yr ymennydd, cynyddodd CTG yn sylweddol -amyloid llygod a achosir gan peptid â chlefyd Alzheimer Gallu dysgu a chof [10]. Dangosodd yr astudiaeth hon, ar ôl cymhwyso rhag-drin CTG, bod cynnwys gwaed BUN, Cr, a cystatin C llygod mawr SD wedi gostwng yn sylweddol, a bod difrod swyddogaeth arennol wedi'i leihau. Cynyddodd CTG y protein sy'n atal apoptosis XIAP ym meinweoedd arennol anaf I / R a rhwystro'r celloedd. Mae digwyddiad apoptosis yn chwarae rhan amddiffynnol wrth niweidio'r aren.
cyfeiriadau
[1] Cassis P, Azzollini N, Solini S, et al. Mae darbepoetin alfa ac erythropoietin carbamylated yn atal camweithrediad impiad arennau oherwydd isgemia/atlifiad mewn llygod mawr ［J］. Trawsblannu, 2011, 92 (3): 271-279.
[2] Gorllewin T, Stump M, Lodygensky G, et al. Mae diffyg atalydd protein apoptosis sy'n gysylltiedig â X yn arwain at fwy o apoptosis a cholli meinwe yn dilyn anaf i'r ymennydd newyddenedigol. Neuro ASN, 2009, 1 (1). PII: e00004. doi: 10. 10421AN20090005.
[3] Fu X, Tian H, Wang D, et al. Anafiadau organau lluosog a methiannau a achosir gan sioc ac atlifiad ar ôl clwyfau ergyd gwn［J］. J Trauma, 1996, 40 (3 Cyflenwad): S135-139.
[4] Padanilam BJ. Marwolaeth celloedd a achosir gan anaf arennol acíwt: persbectif ar gyfraniadau apoptosis a necrosis［J］. Am J Physol Arennol Physiol, 2003, 284 (4): F608-F627.
[5] Galbán S, Hwang C, Rumble JM, et al. Effeithiau sytoprotective IAPs a ddatgelir gan antagonist moleciwl bach［J］. Biochem J, 2009, 417 (3): 765-771.
[6] Wu Jianguo, Zhang Dan, Wu Xinsheng, ac ati, Sefydlu a phrofiad o fodel anaf arennau acíwt isgemia-atlifiad mewn llygod [J]. Gwybodaeth Feddygol: Llawlyfr Llawfeddygaeth, 2007, 20 (12): 1103-1105.
[7] Zhu Zheng. Effeithiau Glycosidau Cistanche ar Asidau Amino Cyffrous mewn Meinwe'r Ymennydd Llygod Mawr ar ôl Isgemia Cerebral ac Atlifiad [J]. Meddygaeth Anhui, 2010, 14 (12): 1393 -1394.
[8] Julia Y, Wang XW, Wubuli AS, et al. Effaith amddiffyn cyfanswm glycosidau cistanche deserticola ar ddiffyg ocsigen ［J］. Cynrychiolydd Chin Pharm, 2003, 20 (1): 73-76.
[9] Li Wenwei, Yang Ru, Cai Dongfang, et al. Effaith amddiffynnol cyfanswm glycosidau cistanche ar niwronau dopaminergig yn substantia nigra llygod model clefyd Parkinson MPTP
[10] Liu Fengxia, Wang Xiaowen, Luo Lan, ac ati Effaith a mecanwaith cyfanswm glycosidau cistanche ar ddysgu a chof model llygoden clefyd Alzheimer a achosir gan -amyloid peptid [J]. Bwletin Ffarmacoleg Tsieineaidd, 2006, 22 (5): 595-599.
