Mae FGIN{0}} yn dderbynnydd atalydd rhwymo diazepam mitocondriaidd synthetig (MDR)agonist sydd wedi dangos gweithgaredd pro-apoptotig, gwrth-bryder, a steroidogenigmewn astudiaethau amrywiol. Yma yr ydym yn adrodd, am yyn gyntafamser, yr effeithiolrwydd gwrth-melanogenigoFGIN{0}}in vitroayn vivo. FGIN{0}} yn arwyddocaolgwaelodol rhwystredig a hormon sy'n ysgogi melanocyte ( -MSH)-, 1-Oleoyl-2-acetyl-sn-glyserol (OAG)-a melanogenesis a achosir gan Endothelin-1 (ET-1) heb wenwyndra cellog.Dangosodd assay gweithgaredd tyrosinase madarch nad oedd FGIN{0}} yn atal yn uniongyrcholgweithgaredd tyrosinase, sy'n awgrymu nad oedd FGIN{0}} yn atalydd tyrosinase uniongyrchol. Er na allai fodiwleiddio gweithgaredd catalytig otyrosinase madarchin vitro, is-reolodd FGIN-1-27 lefelau mynegiantproteinau allweddol sy'n gweithredu mewn melanogenesis. Chwaraeodd FGIN{0}} y ffwythiannau hyntrwy atal y PKA/CREB, PKC- , a llwybrau MAPK. Unwaith y bydd yn anactifadu, mae'nlleihau mynegiant MITF, tyrosinase, TRP-1, a TRP-2, ac atal ygweithgaredd tyrosinase,yn olafatal melanogenesis. Yn ystodyn vivoarbrofion,Roedd FGIN{0}} yn atal pigmentiad corff pysgodyn sebraa llai a achosir gan UVBhyperpigmentation mewn croen mochyn cwta, ond nid gostyngiad o nifer o melanocytes.Eincanfyddiadaunodi nad oedd FGIN{0}} yn arddangos unrhyw sytowenwyndra ac yn atalmelanogenesis yn y ddauin vitroayn vivomodelau. Gall fod yn eithaf defnyddiol fel aasiant gwynnu croen mwy diogel.

Yn ôl astudiaethau perthnasol,cistancheyn llysieuyn cyffredin sy'n cael ei adnabod fel "y llysieuyn gwyrthiol sy'n ymestyn bywyd". Ei brif gydran yw cistanoside, sydd ag effeithiau amrywiol megisgwrthocsidiol, gwrthlidiol, a hybu swyddogaeth imiwnedd. Y mecanwaith rhwng cistanche agwynnu croenyn gorwedd yn effaith gwrthocsidiol glycosidau cistanche.Melaninmewn croen dynol yn cael ei gynhyrchu gan y ocsidiad tyrosine catalyzed gantyrosinase, ac mae'r adwaith ocsideiddio yn gofyn am gyfranogiad ocsigen, felly mae'r radicalau di-ocsigen yn y corff yn dod yn ffactor pwysig sy'n effeithio ar gynhyrchu melanin. Mae cistanche yn cynnwys cistanoside, sy'n gwrthocsidydd a gall leihau'r genhedlaeth o radicalau rhydd yn y corff, fellyatal cynhyrchu melanin.

Cliciwch ar Cistanche Tubulosa

Am ragor o wybodaeth: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

RHAGARWEINIAD

Melanogenesis yw swyddogaeth bwysicaf melanocytes yn y croen. Mae nifer o ffactorau hanfodol sy'n ymwneud â melanogenesis wedi'u hegluro (Raposo a Marks, 2007; Noguchi et al., 2014). Yr ensym allweddol sy'n rheoleiddio melanogenesis yw tyrosinase ac mae'n gweithredu gyda phrotein sy'n gysylltiedig â tyrosinase 1 (TRP1) a phrotein sy'n gysylltiedig â tyrosinase 2 (TRP2) i hyrwyddo synthesis melanin (Zhu et al., 2015). Ffactor pwysig arall sy'n ymwneud â pigmentiad yw ffactor trawsgrifio sy'n gysylltiedig â microffthalmia (MITF), sydd nid yn unig yn rheoleiddio amlder a goroesiad melanocytes ond sydd hefyd yn rheoleiddio mynegiant tyrosinase, TRP1, a TRP2 (Kawasaki et al., 2008; Levy a Fisher, 2011 ). Mae ysgogiadau amgylcheddol, fel arbelydru uwchfioled (UV), yn chwarae rhan hanfodol mewn melanogenesis (Abdel-Naser et al., 2003). Wrth ddod i gysylltiad ag ymbelydredd UV, mae keratinocytes actifadu a melanocytes yn cynhyrchu hormon sy'n ysgogi -melanocyte (-MSH), diacylglycerol (DAG), ac endothelin-1 (ET-1) (D'Mello et al., 2016; Bae Harboe a’r Parc, 2012). Pan fydd hormon sy'n ysgogi -melanocyte ( -MSH) yn clymu i dderbynnydd melanocortin (MC1R) mewn melanocytes, gallai gynyddu lefelau mewngellol monoffosffad adenosine cylchol (cAMP) ac actifadu'r protein kinase A (PKA) / (CREB). ) llwybr, yn olaf yn hyrwyddo melanogenesis (Corre et al., 2004; Rzepka et al., 2016). Mae Diacylglycerol (DAG) yn hanfodol ar gyfer actifadu protein kinase C- (PKC- ) mewn melanocytes, sy'n cynyddu gweithgaredd tyrosinase ac yn achosi pigmentiad (Kim et al., 2006; Kawaguchi et al., 2012; Yuan a Jin, 2018 ). Mae 1-Oleoyl-2- acetyl-sn-glyserol (OAG) yn analog DAG synthetig, athraidd pilen sydd wedi'i ddefnyddio'n helaeth fel actifydd ffarmacolegol PKC- (Rainbow et al., 2011). Mae Endothelin-1 (ET- 1) yn achosi melanogenesis mewn melanocytes trwy actifadu'r llwybr protein kinase a weithredir gan mitogen (MAPK) (Park et al., 2015; Regazzetti et al., 2015).

Mae melanin yn chwarae rhan bwysig wrth amddiffyn croen rhag effeithiau niweidiol ymbelydredd uwchfioled, megis canser y croen a heneiddio (Slominski et al., 2004). Serch hynny, mae cynhyrchu gormodol a chroniad annormal o felanin yn arwain at drafferthion esthetig croen, megis melasma, brychni haul, a smotiau tywyll (Jadotte a Schwartz, 2010). Mae nifer o'r cyfansoddion gwynnu gweithredol, gan gynnwys asid kojic ac arbutin, eisoes wedi'u cymeradwyo fel ychwanegion cosmetig (Kim et al., 2008). Ond adroddwyd bod gan arbutin effeithiau sytotocsig a gall asid kojic gymell canser (Singh et al., 2016). Felly, mae darganfod asiantau gwynnu croen mwy effeithlon a mwy diogel yn hollbwysig.

Mae derbynnydd atalydd rhwymo diazepam mitochondrial (MDR) yn chwarae rhan ganolog wrth reoleiddio synthesis lipid a steroid ac fe'i dosbarthir yn eang mewn meinweoedd ymylol gan gynnwys croen (Alho et al., 1993). Yn ein hastudiaethau blaenorol, rheolodd diazepam, un gweithydd MDR, bigmentiad trwy'r llwybr PKA/CREB (Lv et al., 2019). At hynny, roedd canfyddiadau diweddar yn awgrymu bod actifadu MDR wedi cynyddu ychydig ar nifer y melanocytes newydd mewn pysgod sebra (Allen et al., 2020). Mewn cymhariaeth â diazepam, mae FGIN-1-27 (N, N-Dihexyl-2-(4-fluorophenyl)indole-3- acetamid) yn dangos affinedd a phenodoldeb cymharol uwch ar gyfer yr MDR (Freeman a Young, 2000). Mae FGIN-1–27 wedi dangos gweithgarwch pro-apoptotig a steroidogenig (Lacapère a Papadopoulos, 2003). Yn ddiweddar, adroddwyd bod FGIN-1-27 wedi cynhyrchu effeithiau gwrth-bryder a gwrth-banig in vivo (Lima-Maximino et al., 2018). Fodd bynnag, ni adroddwyd am effaith FGIN-1-27 ar bigmentiad in vitro ac in vivo.

DEUNYDDIAU A DULLIAU

Defnyddiau

FGIN-1-27(N, N-Dihecsyl-2-(4-fflworophenyl)indole-3-acetamid), OAG (1-Oleoyl-2-acetyl-sn -glyserol), a'r gwrthgyrff yn erbyn PKC- (1:200), cath p-PKA (phospho T197)(1:200), cath PKA (1:500), p-CREB (1:200), CREB(1:200), p-ERK(1:200), ERK (1:200), p-p38 (1:200), t38 (1:200), p-JNK (1:200),a JNK (1:200) a gafwyd gan Santa Cruz Biotechnology(CA, UDA). Tyrosinase o fadarch, -MSH, ET-Cafwyd 1(Endothelin-1), a PTU(N-Phenylthiourea)o Aladdin (Shanghai, Tsieina). Mae'r gwrthgyrff yn erbyntyrosinase (1:1,000), TRP-1(1:1,000), TRP{7}} (1:1,{10}}), MITF(1:2000), a Cafwyd -actin (1:3,000) gan Abcam(Caergrawnt, DU). toddiant staenio melanin Masson-Fontanaprynwyd gan SenBeiJia Biological Technology (Nanjing,Tsieina). Prynwyd citiau RT-qPCR gan Takara BiomedicalTechnoleg (Beijing, Tsieina). Clustog lysis celloedd a phrotein BCAcafwyd pecyn assay gan Beyotime Biotechnology (Shanghai,Tsieina).

Diwylliant Celloedd

Assay Hyfywedd Celloedd

Mesurwyd hyfywedd celloedd SK-MEL-2 a HEM drwy'r assay MTT (Zhou et al., 2014). Cafodd celloedd SK-MEL-2 a HEM eu plât mewn 96-blatiau ffynnon ar ddwysedd o 2 × 104 o gelloedd fesul ffynnon. Cymhwyswyd FGIN-1-27 (0, 1, 2, 4, 8, 16 μM) i gelloedd SK-MEL-2 a HEM am 48 h. Ychwanegwyd hydoddiant MTT (20 μL) at bob ffynnon o 96-blat ffynnon am 4 awr arall. Ar ôl tynnu'r hydoddiant, ychwanegwyd DMSO (200 μL) at bob ffynnon ac archwiliwyd yr amsugnedd ar 570 nm gan ddefnyddio sbectrophotometer microplate (BioTek Instruments).

Assay Melanin

Cafodd celloedd SK-MEL-2 a HEM eu plât mewn 6-blatiau ffynnon ar grynodiad o 5×105 cell y ffynnon. Ar ôl deoriad 24 h ar 37 gradd , rhoddwyd FGIN-1-27 (0, 1, 2, 4 μM) ar gelloedd SK-MEL-2 a HEM. Deorwyd y celloedd am 48 h arall, eu golchi â PBS, ac yna lysis gyda byffer lysis cell am 20 munud ar 4 gradd C, a chafodd y lysates eu hallgyrchu ar 13,000 rpm am 10 munud ar 4 gradd C. Diddymwyd cyfanswm y melanin yn y belen gell mewn hydoddiant 100 μL NaOH (1 mol / L, yn cynnwys 10 y cant DMSO) ar 80 gradd C am 1 h (Lv et al., 2015). Mesurwyd amsugnedd optegol ar 405 nm gan ddefnyddio sbectrophotometer microplate (BioTek Instruments).

Assay Gweithgaredd Tyrosinase

Cynhaliwyd y gweithgaredd tyrosinase cellog fel y disgrifiwyd eisoes (Lv et al., 2020). Cafodd celloedd SK-MEL-2 eu deor â chrynodiadau gwahanol o FGIN-1-27 (0, 1, 2, 4 μM) neu OAG (200 μM) am 12 h neu 48 h ac yna wedi'u lysu gyda byffer lysis cell. Cafodd lysates celloedd eu centrifugio ar 13,000 rpm am 10 munud ar 4 gradd C i gael yr uwchnatur ar gyfer assay gweithgaredd tyrosinase. Pennwyd crynodiadau protein gan becyn BCA gyda albwmin serwm buchol (BSA) fel safon.100 μL PBS (0.1 M, pH 6.5) sy'n cynnwys 30 ug o broteinau wedi'u cymysgu â 100 μL L-DOPA (0.1 y cant) ac yna'n cael eu deor ar 37 gradd C am 1 awr. Mesurwyd amsugnedd optegol ar 475 nm gan ddefnyddio sbectrophotometer microplate (BioTek Instruments).

Cynhaliwyd effaith uniongyrchol FGIN{{{0}} ar weithgarwch tyrosinase yn unol â dull blaenorol (Tomita et al., 2010; Lv et al., 2020). 100 μL PBS (0.1 M, pH 6.5) yn cynnwys crynodiadau gwahanol o FGIN-1-27 wedi'i gymysgu â tyrosinase madarch (10 uned) a 50 μL L-tyrosine (0.05 y cant) ac yna'n cael ei ddeor ar 37 gradd am 10 munud. Mesurwyd amsugnedd optegol ar 475 nm gan ddefnyddio sbectrophotometer microplate (BioTek Instruments).

Masson-Fontana Lliw Amoniacal Arian

Ar gyfer canfod pigment melanin, cafodd celloedd SK-MEL-2 eu platio ar 6-blat ffynnon sy'n cynnwys 13-mm o orchuddion gwydr mewn 2.0 ml o gyfrwng meithrin (10 cant serum buchol ffetws) ym mhob ffynnon. Ar 48 h ar ôl y weinyddiaeth, gosodwyd celloedd gyda Formalin (10 y cant yn glustog niwtral) am 20 munud.

Cafodd celloedd a sleidiau croen eu staenio yn ôl dull staenio arian amoniacal Masson-Fontana (Lee et al., 2013). Deorwyd celloedd a sleidiau croen â thoddiant staenio melanin Masson-Fontana am 16 awr ar dymheredd ystafell. Yna cafodd celloedd a sleidiau croen eu rinsio mewn dŵr distyll 3 gwaith a'u deor â hydoddiant hypo am 7 munud. Ar ôl golchi'r dŵr distyll yn drylwyr, cafodd celloedd a sleidiau croen eu gwrth-staenio â staen coch niwtral am 7 munud. Arsylwyd celloedd a sleidiau croen gan ddefnyddio microsgop Nikon Ti2-U.

Imiwnohistocemeg ar gyfer S-100

Cynhaliwyd S-100 imiwn-histochemistry fel y disgrifiwyd yn flaenorol (Lee et al., 2013). Cafodd sleidiau eu rhwystro gyda 5 y cant BSA am 1 h ar dymheredd yr ystafell ac yna eu deor mewn gwrthgorff cynradd gwrth-S-100 (Dako, Carpentaria, CA) wedi'i wanhau mewn hydoddiant blocio dros nos ar 4 gradd C. Y diwrnod wedyn, y Sleidiau eu golchi â TBST 4 gwaith, a'u deor â gwrthgorff eilaidd (Dako, Carpentaria, CA). Yna, cafodd sleidiau eu trin ag aminoethyl carbazole i ddatblygu'r adrannau. Arsylwyd sleidiau croen gan ddefnyddio microsgop Nikon Ti2-U.

PCR Meintiol Trawsgrifiad Gwrthdro (RT-qPCR)

Cynhaliwyd RT-qPCR fel y disgrifiwyd yn flaenorol (Lv et al., 2020). Yn gryno, echdynnwyd RNA cyfanswm celloedd SK-MEL-2 gan ddefnyddio adweithydd TRIzol a'i feintioli'n sbectroffotometrig. Cafodd cDNA un llinyn ei syntheseiddio gan ddefnyddio SuperScript II Reverse transcriptase yn unol â chyfarwyddiadau'r gwneuthurwr. Perfformiwyd dadansoddiad PCR meintiol SYBR-Green gyda System Canfod Dilyniant ABI PRISM (Biosystemau Cymhwysol) a setiau paent preimio a ddilyswyd ymlaen llaw. Cafodd yr holl samplau eu rhedeg yn driphlyg. Gosodwyd cylchoedd trothwy yn rhan logarithmig y gromlin ymhelaethu, a normaleiddiwyd y canlyniadau i GAPDH. Penderfynwyd ar y gwahaniaeth plygu rhwng y ddau sampl gan y dull delta-delta Cq. Dilyniannau preimwyr y genyn Mitf yw 5′-AGAGCAGGGCAGAGAGTGAGTG-3′, 5′-AACTTGATT CCAGGCTGATGATGTC-3′.

Dadansoddiad Blotiau Gorllewinol

Cafwyd yr ataliad protein fel y dull a grybwyllir uchod. Cafodd y proteinau mewngellol a echdynnwyd (30 ug) eu gwahanu gan SDS-PAGE (10 y cant) ac yna eu trosglwyddo i bilen fflworid polyvinylidene L (PVDF), yn dilyn protocol safonol trosglwyddo gwlyb. Cafodd y bilen ei rhwystro gan ddefnyddio 2.5 y cant BSA ar dymheredd ystafell am 1 h, yn agored i wrthgyrff cynradd priodol ar 4 gradd C dros nos, a'i golchi â TBST 4 gwaith. Cafodd y pilenni eu hamlygu i IgG Gwrth-Cwningod Gafr â label HRP (1:1,000) neu IgG Gwrth-Llygoden Gafr (1:1,000) ar dymheredd ystafell am 1 awr a'u golchi â TBST 4 gwaith (Liao et al., 2017). Yna cafodd y pilenni eu delweddu gan ddefnyddio system delweddu cemioleuedd amlswyddogaethol (Tanon 4600). Archwiliwyd rheolaethau mewnol o'r un blot â gwrth-actin.

Gwerthusiad Seiliedig ar Ffenoteip a Phenderfynu Cynnwys Melanin mewn Sebrafish

Roedd sebrafifishes oedolion yn cael eu cadw mewn tanc gyda'r amodau canlynol: 28.5 gradd , gyda chylchred golau/tywyll 14/1{5 h. Cafwyd embryonau o silio naturiol a ysgogwyd yn y bore trwy droi'r golau ymlaen. Cwblhawyd y casgliad o embryonau o fewn 30 munud. Cynhaliwyd y gwerthusiad ar sail ffenoteip fel y disgrifiwyd yn flaenorol (Choi et al., 2007). Yn gryno, casglwyd embryonau cydamserol a'u gosod gyda phibed (3-4 embryonau fesul ffynnon mewn 96-platiau ffynnon yn cynnwys 200 ul o gyfrwng embryo). Diddymwyd FGIN-1-27 a PTU mewn 0.1 y cant DMSO, yna eu hychwanegu at y cyfrwng embryo o 35 i 60 h (amlygiad 25 h). Gwelwyd yr effeithiau ar melanogenesis pysgod sebra o dan y stereomicrosgop.

Model Moch Gini Gorbigmentation a Achosir gan UVB

Cafwyd wyth mochyn cwta brown (6 wythnos, tua 300 g) gan y Sefydliad Labordy Gwyddor Anifeiliaid (Beijing, Tsieina). Roedd y moch cwta yn cael eu cartrefu'n unigol mewn ystafell a reolir gan dymheredd o dan amodau labordy safonol, gyda chylch tywyll 12 h golau/12 awr (goleuadau ar 9:00 AM i 9:00 PM) gyda tymheredd cyson (23 ± 3 gradd) a lleithder (50 ± 10 y cant). Roedd yr ardaloedd ar wahân (cylch diametrig 1 cm) o gefn pob anifail yn agored i 500 mJ/ cm2 UVB (Sigma SH-4, Shanghai, China) unwaith y dydd am 1 wythnos (Fujimoto et al., 1988; Lee et al., 2013). Yna rhoddwyd y cerbyd (PEG400/ EtOH 7:3) a FGIN-1-27 (1 y cant ) i'r ardaloedd hyperbigment (hydoddiant 20 ul y cylch) ddwywaith y dydd am 3 wythnos. Mesurwyd gradd y pigmentiad gan y Spectrophotometer (YS3010, 3nh, Shenzhen, China). Pennwyd y gwerth ΔL yn ôl y gwerth L a fesurwyd gan y sbectroffotomedr, fel a ganlyn: ΔL L (pob dydd wedi'i fesur) -L (ar ddiwrnod 0). Cynhaliwyd yr holl weithdrefnau anifeiliaid ar gyfer yr astudiaeth hon yn unol â "Canllaw NIH ar gyfer Gofalu a Defnyddio Anifeiliaid Labordy" ac fe'i cymeradwywyd gan bwyllgor gofal a defnydd anifeiliaid Prifysgol Changzhou.

Dadansoddiad Ystadegol

CANLYNIADAU

FGIN{0}} Wedi'i rwystro -MSH, OAG neu ET-1-Synthesis Melanin Anwythol mewn Celloedd SK-MEL-2

Cyn ymchwilio i effeithiau FGIN{0}} (Ffigur 1A) ar bigmentiad, cynhaliwyd asesiad hyfywedd celloedd i archwilio effeithiau FGIN-1-27 ar dwf celloedd SK-MEL-2. Fel y dangosir yn Ffigur 1B, ni chafodd FGIN-1-27 unrhyw effeithiau ar dwf celloedd SK-MEL- 2 ar ystod dosio o 1–16 μM ar ôl 48 h. Yn yr assay cynnwys melanin, rhwystrodd FGIN-1-27 felanogenesis gwaelodol (Ffigur 1C). -MSH yn elevator o cAMP mewngellol, sy'n cymell melanogenesis sylweddol (Rzepka et al., 2016; Corre et al., 2004; Lee et al., 2013). Roedd FGIN-1-27 hefyd yn atal synthesis melanin a achosir gan MSH (Ffigur 1C). Yn gyson, roedd staen arian amoniacal Masson-Fontana yn dangos bod FGIN-1-27 wedi lleihau cryn dipyn ar y crynodiad melanin mewn celloedd SK-MEL-2 gyda neu heb -MSH (Ffigur 1D). Ar ben hynny, mae OAG yn elevator o PKC ac mae ET-1 yn ysgogydd y llwybr MAPK, a gall y ddau ohonynt hyrwyddo synthesis melanin (Kim et al., 2006; Park et al., 2015; Regazzetti et al., 2015). Fel y dangosir yn Ffigurau 1E ac 1F, roedd FGIN-1-27 hefyd yn rhwystro melanogenesis a achosir gan OAG neu ET yn sylweddol.

FGIN{0}} Wedi Atal Tyrosinase, TRP-1, TRP-2 Mynegiant a Lleihau'r Gweithgaredd Cellog Tyrosinase

Rheolir melanogenesis gan dri ensym critigol: tyrosinase, TRP-1, a TRP-2 (Zhu et al., 2015). -MSH ac ET-1 hyrwyddo synthesis melanin trwy gynyddu mynegiant tri ensymau melanogenig hanfodol (Regazzetti et al., 2015; Lee et al., 2013). Er mwyn ymchwilio a yw effeithiau gwynnu FGIN-1-27 yn gysylltiedig â mynegiant y proteinau hyn, astudiwyd effaith FGIN-1-27 ar fynegiant tyrosinase, TRP-1, a TRP{{10} }} trwy ddadansoddiad blotiau gorllewinol. Fel y dangosir yn Ffigur 2A, mae FGIN-1-27 wedi atal mynegiant tyrosinase, TRP-1, a TRP-2 gyda neu heb -MSH. Roedd FGIN-1-27 hefyd yn gwrthdroi cynnydd mynegiant ET-1- anwythol tyrosinase, TRP-1, a TRP-2 yn gyson (Ffigur 2B). Yn wahanol i -MSH ac ET-1, roedd OAG yn hyrwyddo melanogenesis trwy gynyddu gweithgaredd tyrosinase cellog yn uniongyrchol (D'Mello et al., 2016). Fel y dangosir yn Ffigurau 2C a 2D, roedd triniaeth FGIN-1-27 12 h yn atal cynnydd mewn gweithgaredd tyrosinase cellog a achosir gan OAG ac nid oedd yn effeithio ar fynegiant tyrosinase. Yn ogystal, cynhaliwyd asesiad gweithgaredd tyrosinase madarch i archwilio effeithiau uniongyrchol FGIN-1-27 ar weithgaredd tyrosinase. Fel y dangosir yn Ffigur 2E, nid oedd FGIN-1-27 yn effeithio ar weithgareddau ensymatig tyrosinase madarch. Roedd y canlyniadau hyn yn awgrymu bod FGIN-1-27 yn atal mynegiant tyrosinase, TRP-1, a TRP-2, ac yn lleihau gweithgarwch tyrosinase cellog, ond heb gael unrhyw effaith uniongyrchol ar weithgareddau ensymatig tyrosinase.

FGIN{0}} Wedi lleihau'r Mynegiad MITF

MITF yw'r prif ffactor trawsgrifio sy'n ysgogi mynegiant tyrosinase, TRP{0}}, a TRP-2 (Kawasaki et al., 2008; Levy a Fisher, 2011). Fel y dangosir yn Ffigur 3A, rhwystrodd FGIN-1-27 y trawsgrifiad MITF. Fe wnaethom hefyd fesur mynegiant MITF ar ôl i gelloedd SK-MEL-2 gael eu trin â -MSH ym mhresenoldeb neu absenoldeb FGIN-1-27. Fel y dangosir yn Ffigur 3B, roedd -MSH yn hyrwyddo mynegiant MITF yn sylweddol. Yn ddiddorol, mae mynegiant MITF wedi gostwng yn sylweddol ym mhresenoldeb FGIN-1-27. Roedd FGIN-1-27 hefyd yn atal y cynnydd mynegiant MITF a achoswyd gan ET yn gyson (Ffigur 3C). Roedd y canlyniadau hyn yn awgrymu bod FGIN-1-27 yn atal mynegiant MITF.

FGIN-1-27 Wedi lleihau Mynegiant PKC- , p-PKA Cat, p-CREB, p-p38, a p-ERK

Mae PKA, PKC, a MAPK yn llwybrau trawsgludo hanfodol mewn melanogenesis (D'Mello et al., 2016). Gallai'r ail negesydd cAMP actifadu PKA, sy'n ffosfforyleiddio CREB, gan hyrwyddo mynegiant MITF yn olaf (Corre et al., 2004; Rzepka et al., 2016). Mae llwybr dibynnol PKC- -yn rheoleiddio melanogenesis trwy actifadu tyrosinase (Kim et al., 2006; Kawaguchi et al., 2012; Yuan a Jin, 2018). Adroddwyd bod MAPK, gan gynnwys t38, kinase protein allgellog a reoleiddir gan signal (ERK), a c-jun N-terminal kinase (JNK), yn rheoleiddio pigmentiad (Zhou et al., 2014). Er mwyn deall ymhellach fecanweithiau moleciwlaidd rheoleiddio melanogenesis gan FGIN-1-27, fe wnaethom fesur y llwybrau trawsgludo sy'n gysylltiedig â phigmentiad. Fel y dangosir yn Ffigur 4, mae FGIN-1-27 wedi lleihau mynegiant PKC- , p-PKA cat, p-CREB, p-p38, a p-ERK yn sylweddol.

FGIN{0}} Melanogenesis wedi'i rwystro mewn Melanosytau Dynol

Aseswyd ataliad FGIN-1-27 ar felanogenesis mewn melanocytes epidermis dynol (HEM). Fel y dangosir yn Ffigur Atodol S1, ni chafodd FGIN-1-27 unrhyw effeithiau ar dwf HEM ar ystod dosio o 1–16 μM ar ôl 48 h. Fel y dangosir yn Ffigur 5A, rhwystrodd FGIN-1-27 melanogenesis yn sylweddol mewn HEM. Awgrymodd dadansoddiad blotio gorllewinol fod FGIN-1-27 wedi lleihau lefelau mynegiant tyrosinase, TRP-1, a TRP-2 yn HEM (Ffigur 5B). Fel y dangosir yn Ffigur Atodol S2, roedd triniaeth FGIN- 1-27 12 h yn atal cynnydd mewn gweithgaredd tyrosinase cellog a achosir gan OAG mewn HEM. Yn ogystal, fe wnaethom fesur mynegiant MITF ar ôl i HEM gael ei drin â -MSH ym mhresenoldeb neu absenoldeb FGIN-1-27. Fel y dangosir yn Ffigur 5C, gostyngodd mynegiant MITF yn sylweddol ym mhresenoldeb FGIN-1-27. Ymhellach, fel yng nghelloedd SK-MEL-2, cadarnhawyd cyfranogiad PKC- , PKA, a MAPK yn FGIN-1-27-gyfryngol gwrth-melanogenig hefyd yn HEM (Ffigur 5D).

Am ragor o wybodaeth: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501