Asesiad Pellach O Salvia Haenkei Fel Strategaeth Arloesol I Wrthweithio Ffoto-heneiddio'r Croen Ac Adfer Uniondeb y Rhwystr

Cysylltwchoscar.xiao@wecistanche.comam fwy o wybodaeth

crynodeb:Croen yw rhwystr hanfodol y corff dynol sy'n cyflawni swyddogaethau lluosog. Mae ffactorau mewndarddol, ar y cyd ag ymosodiadau allanol, yn effeithio'n barhaus ar gyfanrwydd y croen, gan arwain at newidiadau strwythurol amlwg sy'n dylanwadu nid yn unig ar ymddangosiad y croen ond hefyd ei swyddogaethau ffisiolegol amrywiol. Mae newidiadau i'r swyddogaethau rhwystr yn arwain at risg uwch o ddatblygu afiechyd ac adweithiau ochr, felly mae pwysigrwydd cynnal uniondeb y rhwystr epidermaidd ac arafu'r broses heneiddio croen yn amlwg.twf pidyn cistancheMae Salvia hankie (SH) wedi'i nodi'n ddiweddar fel asiant gwrth-heneiddedd posibl; mae ei ddyfyniad yn gallu lleihau lefel y celloedd senescent trwy effeithio ar y rhyddhau ll.1a a lleihau cynhyrchu rhywogaethau ocsigen adweithiol (ROS). Yn yr astudiaeth hon, profwyd dyfyniad SH ar linell gell keratinocyte dynol (HaCaT) a oedd yn agored i ffactorau straen yn ymwneud â heneiddio cynamserol celloedd fel radicalau rhydd ac ymbelydredd uwchfioled B. Gwnaethom gadarnhau bod SH yn gweithredu fel sborionwr ROS a chanfuwyd ei allu i adfer uniondeb rhwystr y croen trwy atgyfnerthu'r strwythur cytoskeleton, selio'r cyffyrdd tynn, a chynyddu cyfradd mudo celloedd. O ystyried y canlyniadau hyn, mae'r gwaith hwn yn dod yn berthnasol, gan nodi Salvia hankie fel cyfansoddyn sy'n ddefnyddiol ar gyfer triniaeth croen gwrth-heneiddio mewn perfformiad clinigol.

Cliciwch yma i wybod mwy

Rhagymadrodd

Mae croen iach a gweithredol yn hanfodol i amddiffyn diffyg hylif a threiddiad amrywiol yn erbyn 100 y cant , micro-organebau, alergenau, llidwyr ac ymbelydredd. Mae'r amlygiad dyddiol i gyfryngau anghynhenid ​​ynghyd â rhai ffactorau cynhenid, megis geneteg, metaboledd cellog, hormonau, a phrosesau metabolaidd, yn arwain at heneiddio naturiol y croen [1]. Yn benodol, mae ffenomen heneiddio'r croen yn gysylltiedig iawn ag ymbelydredd uwchfioled, llygredd, defnydd ailadroddus o gyhyrau, a disgyrchiant [2, 3]. Mae heneiddio croen, felly, yn deillio o newidiadau strwythurol a ffisiolegol cronnol a modiwleiddio cynyddol haenau croen [2, 4, 5]. Hyd yn oed os nad yw heneiddio yn cael ei ystyried yn gyflwr patholegol, ond yn hytrach yn broses fiolegol ac anochel, mae ei gydberthynas ag amrywiaeth o glefydau croen bellach wedi'i hen sefydlu. O ystyried mai'r clefyd croen sy'n gysylltiedig ag oedran mwyaf perthnasol yw anhwylderau dirywiol, neoplasmau anfalaen a malaen, ac ati, mae pwysigrwydd gofal croen i drin neu atal rhai anhwylderau croenol yn amlwg.[6-8]. Y dyddiau hyn, mae strategaethau gwrth-heneiddio croen yn gweithredu i wrthdroi arwyddion dermol ac epidermaidd o heneiddio lluniau / cronolegol. Yn seiliedig ar eu dulliau, gellir eu dosbarthu fel a ganlyn: gofal cosmetolegol, cyfryngau amserol, gweithdrefnau ymledol, cyfryngau systemig, osgoi heneiddio ffactorau alldarddol, cywiro ffordd o fyw ac arferion, a meddygaeth ataliol [9]. Mae dau brif grŵp o asiantau y gellir eu defnyddio fel cydrannau o fformwleiddiadau gwrth-heneiddio: 1. Rheoleiddwyr celloedd, megis retinol, peptidau, a ffactorau twf, sy'n gweithredu'n uniongyrchol ar metaboledd a chynhyrchiad colagen; 2. Mae gwrthocsidyddion, fel fitaminau, polyffenolau, a flavonoidau, yn gallu lleihau diraddiad colagen [9].

Mae tystiolaeth sylweddol yn cefnogi'r syniad bod heneiddio croen yn cael ei yrru'n bennaf gan ROS, a gynhyrchir yn ystod metaboledd celloedd ocsideiddiol mewndarddol [10,11]. Mae'n hysbys bod cronni ROS yn gyfrifol am ddifrod celloedd gan gynnwys perocsidiad lipid, difrod protein pilen, a threiglad DNA sy'n arwain at newidiadau strwythurol a swyddogaethol i'r croen. Dros amser, mae celloedd dynol yn sail i gynnydd naturiol o lefelau ROS, sy'n gysylltiedig â cholli'r amddiffynfeydd gwrthocsidiol yn rhannol. Mae'r cyflwr anochel hwn yn cael ei feithrin ymhellach gan arbelydru uwchfioled dyddiol (UVR) sy'n ysgogi synthesis metalloproteinases matrics (MMPs) ac, o ganlyniad, dinistrio colagen trwy gyfrwng MMP [12, 13]. Dangosodd astudiaethau in vivo y berthynas achosol rhwng difrod ocsideiddiol mitocondriaidd, heneiddedd cellog, a ffenoteipiau heneiddio [10, 14].

Diffinnir heneiddedd cellog fel ataliad sefydlog o dwf celloedd sy'n digwydd ym mhob cell ddynol yn ystod heneiddio [15-17]. O ganlyniad i ddigwyddiadau dirdynnol, megis gor-fynegiant oncogene, cynhyrchu ROS, a difrod DNA (er enghraifft a achosir gan UVR, yn enwedig gan olau UVB), gall celloedd ddod yn gynamserol yn gynamserol [18].manteision cistanche salsaYn y senario hwn, mae'n ymddangos yn amlwg pwysigrwydd datblygu strategaethau arloesol sy'n gallu atal celloedd seescent rhag cronni neu eu lladd yn ddetholus, gan felly wrthweithio heneiddio ac anhwylderau sy'n gysylltiedig â heneiddio. Yn ddiweddar, fe wnaethom nodi Salvia hankie (SH), planhigyn Bolivia sy'n gyfoethog mewn fitamin B ac eiddo gwrthocsidiol, fel asiant gwrth-heneiddedd posibl [18].

Mae'n hysbys bod cronni celloedd senescent dros amser yn un o'r mecanweithiau pwysicaf y mae meinweoedd yn mynd trwy'r broses heneiddio drwyddynt, sy'n ymddangos yn cael ei sbarduno'n bennaf gan barhad statws llidiol nodweddiadol. Mewn gwirionedd, er nad yw celloedd senescent yn gallu amlhau, mae ganddynt weithgaredd metabolig uchel ac maent yn cynhyrchu sawl moleciwlau pro-llidiol yn effeithlon [19]. Trwy ddefnyddio model o epidermis dynol croen (EpiSkin), dangoswyd yn wir bod detholiad SH yn lleihau lefelau celloedd senescent trwy effeithio ar ryddhad Illa a lleihau cenhedlaeth ROS [18].

O dan amodau homeostatig, mae'r croen yn rhwystr effeithlon sy'n amddiffyn rhag ymosodiadau allanol a ffactorau mewndarddol ac yn rheoleiddio colli hylif, electrolytau a phroteinau. Priodolir y dasg bwysig hon yn bennaf i'r epidermis, epitheliwm deinamig, haenog iawn. Y ddau gyfansoddyn epidermis mawr yw'r stratum corneum, yr haen allanol, a chyffyrdd tynn (TJs), cyffyrdd rhynggellog sy'n selio keratinocytes cyfagos yn y stratum granulosum [20]. Mae adlyniadau cell-gell yn angenrheidiol i gynnal cywirdeb rhwystr epidermal.dos cistanche tubulosa redditCyflawnir y swyddogaeth bwysig hon gan gyffyrdd cell-gell arbenigol: cyffyrdd glynu (AJs), desmosomau, a chyffyrdd tynn. Mae'r strwythurau hyn nid yn unig yn caniatáu cysylltiadau corfforol rhwng celloedd, ond yn gyffredinol yn trefnu elfennau sytosgerbydol, ac yn modiwleiddio llwybrau signalau sy'n ymwneud â datblygiad meinwe, strwythur a ffisioleg. Datgelodd astudiaethau genetig diweddar yn annisgwyl rôl an-ganonaidd proteinau cyffordd, gan amlygu pwysigrwydd crosstalk, rhyngddibyniaethau, ac iawndal i ganiatáu cadernid meinwe [21].

Yma buom yn astudio gweithgaredd dyfyniad Salvia haenkei i ddeall y mecanwaith moleciwlaidd sy'n gyfrifol am ei effeithiau amddiffynnol ar heneiddio croen lluniau / cronolegol. Gyda'r persbectif hwn, defnyddiwyd keratinocytes anfarwoledig dynol (HaCaT) fel model in vitro, a dadansoddwyd mecanwaith gweithredu SH o dan drefn waelodol yn ogystal ag o dan amodau dirdynnol a achosir gan arbelydru H202 a/neu UVB.

CANLYNIADAU

Proffil diogel o echdyniad SH ac eiddo gwrth-heneiddio Mae straen ocsideiddiol yn y croen yn chwarae rhan fawr yn y broses heneiddio ac yn pathogenesis sawl anhwylder croen [22]. Roedd Matic et al. eisoes wedi dangos bod gweithgaredd gwrth-heneiddedd Salvia haenkei hefyd yn cydberthyn â'i briodweddau sborion [18]. Gellid manteisio ar yr effeithiau amddiffynnol hyn i ddatblygu triniaeth atgyweirio croen newydd a all gadw cyfanrwydd y rhwystr. Gyda'r nod o ymchwilio'n ddwfn i eiddo SH, yn gyntaf dilyswyd y gweithgaredd echdynnu ar hyfywedd celloedd a chynhyrchu ROS yn y model celloedd HaCaT.

Gall Cistanche gwrth-heneiddio

Perfformiwyd y assay hyfywedd celloedd i fynd i'r afael ag effeithiau sytotocsig posibl dyfyniad Salvia haenkei ar keratinocytes. Cafodd celloedd HaCaT eu trin â dyfyniad SH (0.01-10 ug/ml) am 24 a 48 awr. Aseswyd hyfywedd celloedd gan Trypan blue Exclusion Assay. Mae Ffigur 1A ac 1B yn dangos nad yw triniaeth gyda detholiad SH yn effeithio ar hyfywedd celloedd gan gadarnhau proffil diogelwch y dyfyniad ar gelloedd HaCaT o dan yr amodau arbrofol a ddefnyddir.

Assayed gweithgaredd dyfyniad Salvia haenkei ar gynhyrchu ROS mewn celloedd HaCaT ar ôl 3-24 awr o driniaeth a chyn ac ar ôl amlygiad H2O2.

Mae canlyniadau Ffigur 2A yn dangos bod SH yn gallu lleihau lefelau ROS gwaelodol o fewn y celloedd, yn enwedig yn ystod yr 3-amseroedd triniaeth awr. Heblaw am gynnydd sylweddol mewn lefelau ROS ar ôl ysgogiad H-Oz (Ffigur 2C), mae SH yn gallu atal cynhyrchu ROS. Gostyngodd dyfyniad SH (0.01 ug/ml) yn sylweddol (-25 y cant ) genhedlaeth ROS a achosir gan yr ysgogiad ocsideiddiol (Ffigur 2B), gan ddangos effaith y gellir ei chymharu â NAC ar ôl 3 awr o driniaeth. Mae'n ymddangos bod 24 awr o driniaeth SH yn fwy effeithiol yn erbyn cynyddiad ROS, gan leihau lefelau ROS yn sylweddol ar 1 a 10 ug/ml (Ffigur 2B). Mae'r canlyniadau hyn yn cadarnhau Salvia haenkei

effeithiau gwrthocsidiol, fel y sylwyd yn flaenorol [18], yn dangos effaith gwaelodol gwrthocsidiol eisoes yn dechrau o driniaethau byr; mae'r effaith wrth atal cynnydd a achosir gan ysgogiad ocsideiddiol yn fwyaf perthnasol ar gyfer amseroedd triniaeth hirach.

Dywedir bod ymbelydredd uwchfioled yn achosi cynnydd yn lefelau mewngellol ROS mewn croen dynol gan achosi niwed a heneiddio cynamserol a phatholegau eraill [23-25]. Felly, mae effaith dyfyniad SH ar gynhyrchu ROS wedi'i gyfryngu gan UVB wedi'i werthuso. Yn ôl y disgwyl, mae canlyniadau Ffigur 3C yn dangos cynnydd sylweddol mewn lefelau ROS mewngellol yn dilyn ysgogiad UVB. Mae triniaeth gyda SH, sy'n achosi tueddiad i leihau lefelau ROS gwaelodol yn y celloedd (Ffigur 3A), yn gallu atal y cynnydd a achosir gan ysgogiad UVB (Ffigur 3B). 3 awr o driniaeth SH yn peri tuedd i leihau lefelau ROS; mae triniaeth SH hirach yn fwy effeithiol wrth wrthweithio'r straen ocsideiddiol, gan ddangos gostyngiad sylweddol fel yr adroddwyd yn Ffigur 3A. Mae'r data hyn yn tanlinellu gweithgaredd gwrthocsidiol Salvia haenkei hefyd mewn straen ocsideiddiol wedi'i gyfryngu gan UVB.

Fel y crybwyllwyd, mae tystiolaeth gynyddol yn awgrymu bod celloedd senescent yn cronni mewn croen yn gronolegol a chroen oed llun, gan gyfrannu at addasiadau a phatholegau croen sy'n gysylltiedig ag oedran [26]. Felly gwerthuswyd effaith Salvia hankie ar farcwyr heneiddio p21 a p27 (sy'n atal ffosfforyleiddiad y protein retinoblastoma (Rb) a chyda gweithgaredd ataliol ar CDK{5}}cyclin E, yn y drefn honno [27]) ar ôl straen ffoto a achosir gan ymbelydredd uwchfioled. Mae canlyniadau yn Ffigur 4 yn dangos bod arbelydru UVB yn achosi cynnydd sylweddol mewn lefelau mRNA p21 a p27 o gymharu â'r rheolaeth heb ei ysgogi.cistanche แอ ม เว ย์Gwelir tuedd debyg mewn atal cynnydd mewn celloedd sy'n cael eu trin â SH. Mae SH 1 ug/ml yn achosi gostyngiad sylweddol mewn lefelau p21 o gymharu â rheolaeth a ysgogwyd gan UVB, tra bod y crynodiadau eraill yn achosi tueddiad i leihau (Ffigur 4A). Mae lefelau P27 yn cael eu gostwng yn sylweddol gan ragdriniaeth gyda SH 0.01,0.1 a 10 ug/ml (Ffigur 4B).

Mae hefyd wedi'i sefydlu bod celloedd senescent yn effeithio'n negyddol ar y micro-amgylchedd trwy gyfrinachu cymysgedd pro-llidiol o chemocines, cytocinau, hormonau twf a phroteasau, a elwir yn ffenoteip secretory sy'n gysylltiedig â heneiddedd (SASP) [28]. Mae canlyniadau yn Ffigur 5 yn dangos bod ysgogiad UVB yn achosi cynnydd sylweddol mewn lefelau ILla (A), IL6(B), ac IL18(C) mRNA mewn perthynas â rheolaeth heb ei ysgogi. Mae cyn-driniaeth gyda SH yn cyflwyno gweithgaredd cryf i wrthweithio'r cynnydd mewn lefelau cytocin. Fel y dangosir yn Ffigur 5A, gostyngodd SH 10 ug/ml lefelau Illa yn sylweddol; mae'r cynnydd yn IL6 yn cael ei wrthweithio'n sylweddol gan SH 0.01,0.1 a 10 ug/ml (Ffigur 5B) tra bod yr holl grynoadau a brofwyd yn gallu lleihau lefelau IL18 yn sylweddol (Ffigur 5C). Cynnal a chadw rhwystr croen O ystyried y canlyniadau a adroddwyd uchod ar linell gell epithelial, gwerthuswyd effaith echdyniad SH ar nifer o broteinau a phrosesau sy'n ymwneud â chynnal a chadw rhwystrau croen ac atgyweirio difrod meinwe.

Mynegiant -1 Sirtuin

Nododd sawl astudiaeth in vitro fod ymbelydredd UVB yn achosi gostyngiad yn lefelau protein Sirtuinl (SIRT1) o ffibroblastau dynol, gan nodi bod SIRT1 yn cymryd rhan yn y difrod wedi'i gyfryngu gan UVB [29]. Felly, gwerthuswyd effaith dyfyniad Salvia haenkei ar fynegiant protein Sirtuinl gan assay blot gorllewinol (Ffigur 6). Yn ôl y disgwyl, arweiniodd ysgogiad UVB ostyngiad sylweddol mewn mynegiant protein SIRTI mewn celloedd HaCaT. Felly ymchwiliwyd i weithgaredd echdynnu SH ar lefelau SIRT1. Yn ddiddorol, mae'r canlyniadau'n dangos bod detholiad 1 ug/ml SH, o'i gymharu â rheolaeth, wedi achosi cynnydd mewn mynegiant SIRTl ( ynghyd â 4 { { { }} y cant ) o dan amodau gwaelodol, gan nodi effaith ysgogol bosibl ar lefelau SIRT1. Yn ôl y disgwyl, mae ysgogiad UVB yn arwain at ostyngiad sylweddol yn lefelau SIRT1. Mae'r canlyniadau'n dangos bod y rhag-driniaeth gyda detholiad SH 0.01 ug/ml yn arddangos effaith wella yn lefelau Sirtuin 1, o'i gymharu â'r rheolaeth a driniwyd gan UVB.

Assay iachâd clwyfau

Keratinocytes yw prif gyfansoddion yr epidermis, gan ddarparu rhwystr rhwng yr organeb a'r amgylchedd. Felly, mae eu lledaeniad a'u mudo yn chwarae rhan allweddol wrth gynnal rhwystr effeithiol ac wrth wella clwyfau yn dilyn anafiadau [30, 31]. Felly, gwerthuswyd effaith SH ar ymfudiad celloedd HaCaT. Mae delweddau yn Ffigur 7A yn dangos bod triniaeth gyda SH yn arwain at ostyngiad yn nhrwch y crafiad sy'n nodi effaith ar ymfudiad celloedd HaCaT. Mae Ffigur 7B yn adrodd am adeiladu kymogram o gyflymder mudo celloedd HaCaT; mae delweddau'n dangos cynnydd sy'n ddibynnol ar grynodiad mewn mudo celloedd. Mae'r graff yn Ffigur 7C yn dangos cynnydd sylweddol yng nghyflymder mudo celloedd ar ôl 4-8 awr o driniaeth gyda dyfyniad SH 0.01 ug/ml. Cyrhaeddir y cynnydd mwyaf yn yr egwyl 8-12 oriau, lle mae'r gyfradd mewn celloedd cyflymder mudo celloedd tua 165 y cant mewn perthynas â'r rheolaeth. Mae'r data hyn, fel y canlyniadau a gafwyd ar amlhau celloedd, yn dangos bod y crynodiad isaf o echdyniad SH yn gallu achosi cynnydd mewn cyflymder mudo celloedd nad yw'n gysylltiedig â ffenoteip hyperproliferative.

Cynnal a chadw cyffyrdd tynn

Yn ogystal â stratum corneum, mae cyffyrdd tynn (TJs) yn chwarae rhan bwysig mewn cyfanrwydd croen, gan weithredu fel rhwystr i ddŵr a hydoddion, a chymryd rhan mewn prosesau gwahaniaethu, amlhau, polaredd celloedd, a thrawsgludiad signal celloedd. Dangosodd astudiaethau diweddar fod golau UV yn newid mynegiant a lleoleiddio proteinau sengl o strwythur TJ, sydd yn ei dro yn amharu ar swyddogaeth rhwystr y croen [32].

Er mwyn gwerthuso effaith Salvia haenkei extract fel asiant amddiffynnol posibl yn erbyn aflonyddwch TJs, mesurwyd mynegiant occludin gan imiwnocytemeg ar ôl dod i gysylltiad ag ymbelydredd UVB. Mae delweddau yn Ffigurau 8A, ac 8B yn dangos bod triniaeth gyda'r ddau grynodiad o SH yn achosi cynnydd mewn mynegiant protein occludin, gan hyrwyddo ffurfio cyffordd sy'n ddefnyddiol i gynnal uniondeb y rhwystr epidermaidd. Yn ôl y disgwyl, ar ôl dod i gysylltiad ag ymbelydredd UVB, mae celloedd yn dangos cylch bilen afreolaidd heb ei ddiffinio (Ffigur 8A). Mae triniaeth SH, yn enwedig ar y crynodiad uwch, yn cadw morffoleg y bilen gan gynnal y strwythur sy'n debyg i'r rheolaeth heb ei symbylu. Mae dyfyniad SH yn hyrwyddo atgyfnerthu cyffordd ac yn atal y difrod a achosir gan amlygiad UVB, gan gynnal ymarferoldeb rhwystr y croen.

Filaggrin mynegiant

Gwerthuswyd effaith dyfyniad Salvia haenkei ar fynegiant protein filaggrin (FLG) gan imiwnocytemeg. Mae Filaggrin yn brotein strwythurol sy'n sylfaenol wrth ddatblygu a chynnal rhwystr y croen. Mae canlyniadau yn Ffigurau 9A, a 9B yn dangos cynnydd sy'n ddibynnol ar grynodiad mewn mynegiant protein ffilagrin yn dilyn triniaeth am 24h gyda dyfyniad SH. Ar ben hynny, mae mynegiant protein F-actin yn nodi dosbarthiad rheolaidd o gelloedd, yn dilyn y driniaeth â SH, sy'n arwain at barhad strwythurol trefnus y rhwystr epithelial. Mae'r data hyn yn dangos bod SH yn cael effaith fuddiol ar y rhwystr croen, gan wella mynegiant filaggrin, sy'n hanfodol ar gyfer ffurfio a swyddogaeth gywir y croen.

Mynegiant metalloproteinase

Mae amlygiad croen i ymbelydredd uwchfioled yn achosi namau yn y matrics allgellog (ECM) gan achosi crychau, sagio, a llacrwydd, sef prif nodweddion heneiddio croen. Metalloproteinases matrics (MMPs) yw'r rhai sy'n gyfrifol am ddiraddio'r cydrannau ECM fel colagen, elastin, ffibronectin, a proteoglycans [33].faint o cistanche i'w gymrydMae nifer fawr o astudiaethau'n tanlinellu bod amlygiad y croen i arbelydru UV yn achosi i wahanol MMPs gael eu dadreoleiddio, gan effeithio ar ymddangosiad ac iechyd y croen [34-37].

Mae canlyniadau yn Ffigur 10 yn dangos bod ymbelydredd UVB yn cynyddu mynegiant mRNA y MMP gelatinase-2 sy'n diraddio colagenau pilen islawr a cholagenau adeileddol dadnatureiddio [38]. Mae triniaeth gyda SH yn gallu lleihau'n sylweddol lefelau MMP-2 mRNA(SH 0.01-0.1-10 ug/ml) sy'n dynodi gweithgaredd echdyniad SH wrth gynnal cyfanrwydd adeileddol y croen, wedi'i niweidio gan ffoto-straen.

TRAFODAETH

Heneiddio croen yw effaith gronnus ffactorau cynhenid ​​ac anghynhenid ​​sy'n arwain at ddirywiad yn y croen, gan achosi teneuo, stiffio, a cholli hyblygrwydd. Croen yw'r rhwystr cyntaf rhwng yr organeb a'r amgylchedd, felly mae cynnal ei gyfanrwydd swyddogaethol ac anatomegol yn hanfodol. Ar wahân i brosesau heneiddio naturiol a chyflyrau sy'n gysylltiedig â heneiddio megis diabetes, menopos, ac ati, gall ffactorau anghynhenid ​​gyd-fynd ag effeithio ar strwythur y croen; yn arbennig gall ffoto-ddifrod, llygredd, neu ffactorau ffordd o fyw (ysmygu, diet, straen emosiynol, ac ati) rwystro strwythur a swyddogaethau'r croen [39,40]. Keratinocytes yw prif gyfansoddion yr epidermis, gan ddarparu'r sail gellog ar gyfer y rhwystr mwyaf allanol; yn y gwaith hwn, mae llinell gell keratinocyte dynol HaCaT wedi bod yn agored i ffactorau straen, megis radicalau rhydd ac ymbelydredd uwchfioled B, er mwyn dynwared heneiddio'r croen yn naturiol, gan newid y swyddogaeth rwystr. Mae Salvia hankie wedi'i nodi'n ddiweddar fel asiant gwrth-senescence posibl sy'n awgrymu y gellir ei gymhwyso mewn heneiddio croen ac anhwylderau sy'n gysylltiedig â heneiddio croen; felly, ymchwiliwyd yn ddwfn i effaith dyfyniad o'r planhigyn hwn ar baramedrau sy'n ymwneud â heneiddio croen, cynnal cyfanrwydd croen, a chyflyrau ffisiolegol. Credir bod cynhyrchu rhywogaethau ocsigen adweithiol neu radicalau rhydd trwy brosesau metabolaidd mewndarddol arferol neu UVR a llygredd yn cyfrannu at brosesau heneiddio'r croen. Mae croen yn agored i amrywiaeth o adweithiau rhydocs, ac mae'r cydbwysedd rhydocs yn hanfodol wrth gynnal homeostasis croen. Mae crynodiadau ROS isel yn cyflawni gweithgareddau ffisiolegol, ond mae lefelau uwch o'r rhywogaethau hyn yn ymwneud ag actifadu llwybrau sy'n arwain at ddiraddiad cynyddol o golagen, cronni elastin, actifadu metalloproteasau diraddiol matrics, ac ati [41]. Ar ben hynny, mae ROS yn chwarae rhan sylweddol mewn prosesau patholegol gan gynnwys heneiddio, llid, anafiadau, a pathogenesis sawl clefyd croen fel soriasis a fitiligo [42]. Yn ddiddorol, dangoswyd bod detholiad Salvia haenkei yn lleihau lefelau ROS mewn amodau gwaelodol, amodau straen ocsideiddiol, ac amodau straen a achosir gan arbelydru UVB, gan nodi effaith amddiffynnol bosibl yn erbyn newidiadau cyfryngol ROS [22].

I gefnogi effaith gwrth-heneiddio Salvia hankie a welwyd yn flaenorol, yn y gwaith hwn, gwelsom dystiolaeth o allu dyfyniad SH i leihau henebrwydd mewn keratinocytes a ysgogwyd gan ymbelydredd UVB. Mae canlyniadau'n dangos bod SH yn gallu lleihau mynegiant genynnau marcwyr heneiddio p21 a p27, sy'n cael eu hysgogi gan ymbelydredd UVB. Yn ddiddorol, mae dyfyniad SH yn dangos gweithgaredd addawol wrth leihau'r ymateb llidiol a feithrinir gan photodamage mewn celloedd, trwy ostwng trawsgrifiad interleukins. Ar ben hynny, rydym wedi dangos yn ddiddorol bod detholiad Salvia haenkei wedi ysgogi mynegiant protein Sirtuinl nid yn unig ar ôl straen ond hefyd o dan amodau gwaelodol, gan ddangos gweithgaredd addawol wrth arafu prosesau heneiddio. Dangoswyd bod teulu Sirtuin, ac yn arbennig SIRT1, yn chwarae rhan mewn tynnu lluniau heneiddio, yn enwedig trwy atal MMPs a diraddio colagen dilynol; tanlinellodd astudiaethau lluosog ei rôl amddiffynnol mewn ffotograffiaeth trwy gyfrwng UVB. Dangoswyd bod cyfansoddion naturiol fel jwglone (5-hydroxy-1,4-napthalenedione)) yn adfer SIRT1 i lefelau normal ar ôl triniaeth UVB, gan awgrymu y gallai SIRTI chwarae rhan mewn atal carcinogenesis a achosir gan UVB [29]. Mae ein canlyniadau hefyd yn dangos, cyfranogiad posibl sirtuins yn y broses atgyweirio ar ôl straen UVB a'u rôl wrth gynnal homeostasis epidermis.

Mae anhwylderau croen llidiol cyffredin, megis dermatitis atopig a soriasis, yn ogystal â phrosesau heneiddio, yn dangos llai o swyddogaeth rhwystr, a gall ymateb celloedd epidermaidd i aflonyddwch rhwystr waethygu, cynnal, neu hyd yn oed gychwyn amodau o'r fath. Datgelodd canlyniadau'r gwaith hwn allu cryf SH i adfer cyfanrwydd rhwystr y croen trwy fodiwleiddio nifer o broteinau sy'n ymwneud â'r prosesau hyn. Yn benodol, sylwyd bod ysgogiad occludin a thrawsgrifiad filaggrin yn dangos gweithred atgyfnerthu ar adlyniadau rhwng celloedd. Mae diffyg ffilagrin wedi'i etifeddu a'i gaffael yn effeithio ar y rhwystr epidermaidd, gan newid trefniadaeth

ffilamentau ceratin cytoskeleton a strwythur amlen cornified y croen [43]. Ar ben hynny, mae diffygion mewn mynegiant FLG yn achosi gostyngiad yn nifer y gronynnau keratohyalin, gostyngiad amlwg mewn crynodiad ffactor lleithio naturiol (NMF), ac alcalineiddio pH y croen [44]. Ar ben hynny, mae newidiadau mewn proteinau claudins ac occludin, sy'n perthyn i broteinau Cyffyrdd Tyn (TJs), wedi'u disgrifio'n dda ynghylch prosesau heneiddio. Mae TJs yn gyfrifol am selio'r gofod rhynggellog rhwng celloedd epithelial, i ffurfio rhwystr swyddogaethol, ac maent yn ymwneud ag amlhau a gwahaniaethu celloedd [45]. Dangoswyd bod detholiad Salvia haenkei yn gwella mynegiant filaggrin ac yn cadw'r lleoleiddiad occludin ar gellbilenni, y mae ymbelydredd UVB yn amharu arno. Mae gweithgaredd ychwanegol o echdyniad SH wrth gynnal croen iach wedi'i ddangos gan ei allu i leihau trawsgrifiad metalloproteinases matrics 2(MMP-2), wedi'i ysgogi gan ymbelydredd UVB. Mae uwch-reoleiddio MMPs yn hwyluso heneiddio a phatholegau croen, trwy ddiraddio colagen ac elastin yn achosi namau yn y matrics allgellog (ECM) [33, 38], felly mae lleihau'r proteinasau hyn yn werth chweil yng nghyd-destun heneiddio'r croen.

Cadarnhawyd effeithiau cadarnhaol triniaeth SH a welwyd yn yr astudiaeth hon dros y paramedrau moleciwlaidd croen mwyaf cyffredin hefyd gan dreial clinigol diweddar, a weithredwyd mewn carfan o hanner cant o ferched Cawcasws rhwng 45 a 60 oed [46]. Mae Salvia hankie wedi'i weinyddu mewn fformiwleiddiad hufen a gwerthuswyd sawl paramedr, megis cochni croen ac elastigedd, dyfnder wrinkle, a photensial gwrthocsidiol, gan werthusiadau clinigol ac offerynnol yn ogystal â hunanasesiad gan bynciau. Mae canlyniadau'r astudiaeth hon yn datgelu effeithiolrwydd SH wrth wella dirywiad y croen o'i gymhwyso bob dydd yng nghyd-destun heneiddio croen cymedrol. Mewn gwirionedd, ar ôl 84 diwrnod o gymhwyso, arweiniodd croen y merched i fod yn fwy elastig a chyflwynodd nifer is o ardaloedd coch a chrychau basach. Ar ben hynny, mae'r astudiaeth yn dangos cynnydd cynyddol yng ngallu gwrthocsidiol y croen yn dilyn cymhwyso'r hufen bob dydd [46].

Fel lloches amddiffynnol i'r corff rhag yr amgylchedd allanol, mae'r croen yn agored yn gyson i anaf posibl, ac felly mae gwella clwyfau yn broses hanfodol ar gyfer goroesiad pob organeb. O ystyried gallu SH profedig i gynnal croen iach a di-fai, tybiwyd y gallai'r darn hwn helpu hefyd i wella adfywiad croen trwy fod yn ddefnyddiol wrth atgyweirio briwiau croen. Felly, ystyriwyd yn olaf gweithgaredd SH ar ymfudiad keratinocytes, sef cam allweddol wrth adfer rhwystr y croen ar ôl anafiadau. Datgelodd triniaeth echdynnu SH weithgaredd diddorol yn gallu cynyddu cyflymder mudo HaCaT, gan ddangos effaith gref ar ailsefydlu anaf epithelial ar ôl briwiau. Gan fod mudo yn elfen hanfodol yn y broses iachau clwyfau, mae ein data, sydd hefyd yn ystyried gweithgaredd an-hyperproliferative y dyfyniad, yn nodi effaith bosibl darnau SH wrth wrthweithio'n gyflymach effaith anaf yn rhwystr y croen, gan leihau'r risg o heintiau.

Mae ein data yn nodi dyfyniad Salvia haenkei fel cyfansoddyn defnyddiol ar gyfer naill ai cynorthwyo ailsefydlu rhwystr neu leddfu'r ymateb straen epidermaidd. Ar yr un pryd â'r treial diweddar mewn bodau dynol, mae'r gwaith hwn yn rhoi mewnwelediad pellach i'r mecanweithiau sy'n gysylltiedig ag effaith gadarnhaol y darn ar heneiddio croen.

Mae'r gwaith hwn, i gefnogi'r gwaith blaenorol [18, 46], yn nodi mewn ffordd fwy rhyfedd fecanwaith moleciwlaidd sy'n gysylltiedig ag effeithiolrwydd Salvia hankie wrth fodiwleiddio paramedrau croen, gan danlinellu perthnasedd Salvia hankie fel asiant apelgar sy'n ddefnyddiol ar gyfer gwrth-heneiddio. ac anhwylderau croen sy'n gysylltiedig â heneiddio.

DEUNYDDIAU A DULLIAU Meithrin celloedd ac arbelydru UVB

Cafodd celloedd HaCaT (keratinocytes a anfarwolwyd yn ddigymell gan ddyn) eu meithrin mewn glwcos uchel, cyfrwng Eagle's (DMEM) wedi'i addasu gan Dulbecco ynghyd â serwm buchol ffetws 10 y cant (Technolegau Bywyd, Waltham, MA, UDA), glutamin 2 mM, penisilin 100 U/ml a 100 ug/ml streptomycin (Lonza, Basilea, y Swistir). Roedd celloedd yn cael eu cynnal o dan awyrgylch llaith o 5 y cant o CO2 yn yr awyr a'u deor ar 37 gradd.

Pan ofynnwyd amdano gan y protocol arbrofol, roedd celloedd yn agored i ymbelydredd 30 KJ/m²UVB, a gyflenwir gan lamp Philips Medical Narrowband UVB PL-S. Er mwyn atal amsugno golau trwy gyfrwng diwylliant meinwe, tynnwyd hwn cyn arbelydru, a'i ddisodli gan DMEM FBS a di-ffenol coch, yn dilyn y protocol arbelydru [47]. Ar ôl arbelydru UVB, cafodd celloedd eu bwydo â chyfrwng twf ffres neu eu defnyddio ar gyfer arbrofion yn dilyn y protocol.

Hyfywedd celloedd - Assay gwaharddiad glas Trypan 35 x10³ cafodd celloedd eu platio ar 12 plât ffynnon ac, yn dilyn deori dros nos, cawsant eu hamlygu i grynodiadau gwahanol o echdyniad hydroethanolig Salvia haenkei yn ôl protocolau arbrofol. Mae'r dyfyniad wedi'i ddarparu'n garedig gan IBSA Farmaceutici Italia (Lodi, yr Eidal) ac mae'n cyflwyno cynnwys asid rosmarinig marciwr o 0.6 y cant w/w gan HPLC. Ar ôl triniaeth, cafodd celloedd eu golchi, eu gwahanu â 0.25 y cant trypsin-0.2 y cant EDTA, a'u hatal mewn glas trypan (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, UDA) ar gymhareb l:I mewn datrysiad canolig. Roedd celloedd yn cael eu cyfrif gan ddefnyddio hemocytometer Burker siambr.

Assay fflworoleuedd ROS

Cafodd ROS ei feintioli gan ddefnyddio 2',7'-dichlorofluorescein-diacetate (Hz-DCF-DA, Sigma-Aldrich, St Louis, MO, UDA), fel y disgrifiwyd yn flaenorol [48]. Yn gryno, cafodd celloedd (5x10') eu hadu i mewn i 96-blatiau ffynnon, eu caniatáu i lynu dros nos, ac yna eu hamlygu i echdyniad SH am 3 neu 24 awr. Defnyddiwyd N-acetylcysteine ​​5mM (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, UDA) fel rheolaeth gadarnhaol.

Ar gyfer y cyflwr straen ocsideiddiol, mesurwyd lefel ROS ar ôl ychwanegu 50 μM Hz-DCF-DA yn absenoldeb neu bresenoldeb H2Oz [48]. Mesurwyd dwyster fflworoleuedd DCF ar gyffro o 485 nm—allyriad 535 nm, gan ddefnyddio Darllenydd Plât Aml-label VICTOR X3 (PerkinElmer, Waltham, MA, UDA).

Ar gyfer gwerthuso lefelau ROS mewn amodau straen UVB, addaswyd y protocol ychydig, trwy ddeor celloedd mewn triniaethau SH - 50 μM Hz-DCF-DA ateb yn PBS. Yn dilyn 25 munud o ddeori ar 37 gradd, roedd y plât yn agored i ymbelydredd UVB a mesurwyd dwyster fflworoleuedd DCF ar unwaith ar excitation 485 nm - allyriadau 535 nm, gan ddefnyddio Darllenydd Plât Multilabel VICTOR X3 (PerkinElmer, Waltham, MA, UDA).

Microsgopeg Immunofluorescence

Cafodd 1{7}}x104 o gelloedd eu hadu ar slipiau gorchuddion gwydr wedi'u rhag-orchuddio â cholagen mewn 24-platiau ffynnon, eu caniatáu i atodi dros nos, a'u trin â detholiad SH yn unol â'r protocol. Ar gyfer canfod proteinau -catenin ac occludin, roedd celloedd yn agored i ymbelydredd UVB, fel y disgrifir yn y protocol uchod. Ar ôl arbelydru, cafodd celloedd eu bwydo â chyfrwng twf ffres neu eu defnyddio ar gyfer arbrofi yn dilyn y protocol. Ar gyfer assay immunofluorescence, 4 awr ar ôl yr arbelydru UVB, cafodd celloedd eu golchi, eu gosod â 4 y cant o fformaldehyd, eu permeabileiddio â 0.1 y cant Triton X-100 yn PBS, a'u staenio am 1 awr ar 37 gradd gyda gwahanol wrthgyrff protein-benodol: gwrth-occludin monoclonaidd llygoden (Invitrogen Life Technologies, Waltham, MA, UDA), gwrth-filaggrin llygoden (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, UDA). Ar ôl golchiad PBS, deorwyd celloedd â gwrthgyrff eilaidd / fluorescein isothiocyanate (gwrth-lygoden Alexa Fluor 488 neu imiwnoglobwlin gwrth-gwningen Alexa Fluor 536 G, Probes Moleciwlaidd, Invitrogen Life Technologies, Waltham, MA, UDA) a gyda phalloidin am 1 awr yn tymheredd ystafell. Yn dilyn 10 munud o driniaeth ag RNase, cafodd y gorchuddion eu gosod ar sleidiau gwydr gan ddefnyddio Mowiol 40-88 (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, UDA) ac ychwanegwyd propidium ïodid. Cafwyd delweddau trwy ficrosgop confocal LSM 800, chwyddhad 60X, meddalwedd ZN 2.1 blue Edition (Carl Zeiss, Jena, yr Almaen) a'u meintioli gan ddefnyddio meddalwedd ImageJ.

Dadansoddiad ystadegol

Perfformiwyd y dadansoddiad ystadegol gan ddefnyddio fersiwn GraphPad Prism 7.02 ar gyfer Windows (GraphPad Software, San Diego, CA, UDA). Oni nodir yn wahanol, cyflwynir canlyniadau fel cymedr ynghyd â SEM. Defnyddiwyd prawf-t y Myfyriwr a gwerthoedd p<0.05 were="" considered="" statistically="">

Byrfoddau

AJ:yn glynu wrth gyffordd; ECM: matrics allgellog; FLG: ffilagrin; Hz-DCF-DA: 2',7'-dichlorofluorescein-diasetad; H2Oz: Perocsid Hydrogen; MMP: matrics metalloproteinase; NAC: N-acetylcysteine; NMF:ffactor; ROS: ocsigen adweithiol moisturizing naturiol

rhywogaethau; SIRTl: Sirtuinl ; SH: Salvia hankie; TJ: cyffordd dynn; UVB: Ymbelydredd uwchfioled B.

Daw'r erthygl hon o www.aging-us.com