Mae Dyfyniad Herba Cistanche yn Gwella Cynhyrchu ATP Mitocondriaidd mewn Calonnau Llygoden Fawr A Chelloedd H9c2
Mar 04, 2022
Cyswllt: Audrey Huaudrey.hu@wecistanche.com
Hoi Yan Leung a Kam Ming Ko
I ddyfynnu'r erthygl hon: Hoi Yan Leung & Kam Ming Ko (2008) Detholiad Herba Cistanche yn Gwella Cynhyrchu ATP Mitocondriaidd yng Nghelloedd Llygoden Fawr a Chelloedd H9c2, Bioleg Fferyllol, 46:6, 418-424, DOI: 10.1080/13880205802
Haniaethol
Er mwyn ymchwilio i sail ffarmacolegol gweithred "Yang- invigorating" Herbal Cistanche [planhigyn cyfan sych Cistanche deserticola YC Ma (Orobanchaceae)], mewn meddygaeth Tsieineaidd, effeithiau dyfyniad methanol Herba Cistanche ar gapasiti cynhyrchu ATP mitocondriaidd oedd yn cael ei archwilio gan ddefnyddio model calon llygoden fawr ex vivo a assay cell H9c2 in situ. Cynyddodd triniaeth â detholiad Herba Cistanche gapasiti cynhyrchu ATP mitocondriaidd myocardaidd mewn modd sy'n dibynnu ar ddosau mewn llygod mawr, fel yr aseswyd gan fesuriad in vitro. Roedd symbyliad cynhwysedd cynhyrchu ATP yn gysylltiedig â gwelliant cyfochrog mewn trafnidiaeth electronau mitocondriaidd wedi'i gefnogi gan pyruvate ond nid succinate. Cynyddodd triniaeth Herba Cistanche hefyd y gweithgareddau cymhleth mitocondriaidd myocardaidd I a chymhleth III, gyda maint yr ysgogiad ar weithgaredd cymhleth I yn fwy. Cynhyrchodd triniaeth Herba Cistanche gynnydd dos ac amser-ddibynnol yng nghapasiti cynhyrchu ATP mitocondriaidd mewn celloedd H9c2. Mae'r canlyniadau'n dangos y gall triniaeth Herba Cistanche gynyddu cenhedlaeth ATP mitocondriaidd mewn celloedd llygod mawr ex vivo a H9c2 yn y fan a'r lle, o bosibl trwy wella ffosfforyleiddiad ocsideiddiol.
Geiriau allweddol:ATP, Cistanche deserticola, celloedd H9c2, calon, mitocondria.
Rhagymadrodd
Mae "Yang invigoration", sy'n ymgorffori gwelliant cyffredinol o swyddogaeth y corff mewn meddygaeth Tsieineaidd, yn cynnwys defnyddio ynni wrth yrru prosesau biocemegol amrywiol. Yn hyn o beth, mae ATP, sef yr arian cyfred cyffredinol o ynni i danio swyddogaeth gellog, yn cael ei gynhyrchu'n bennaf trwy ffosfforyleiddiad ocsideiddiol mewn mitocondria. Rydym wedi rhagdybio bod perlysiau "Yang bywiog" yn meddu ar y gallu i gynyddu gallu cynhyrchu ATP mitocondriaidd (Ko et al., 2004). Ategir hyn gan ein canfyddiad diweddar y gallai perlysiau tonyddu Tsieineaidd "Yang- invigorating" ond nid "Yin-maethlon" wella gallu cynhyrchu ATP myocardaidd yng nghalonnau llygoden ex vivo (Ko et al., 2006). Mae Herba Cistanche, y planhigyn parasitig cyfan sych (ac eithrio'r blodyn) o Cistanche deserticola YC Ma (Orobanchaceae), yn cael ei ddosbarthu fel perlysieuyn toneiddio 'Yang-bywiog' mewn meddygaeth Tsieineaidd draddodiadol (Chen, 1998), ac mae'n ymddangos fel y mwyaf poblogaidd. cynhwysyn mewn nifer o fformiwleiddiadau patent Tsieineaidd a ddefnyddir ar gyfer Yang-invigoration'. Yn Tsieina a Japan, defnyddir Herba Cistanche yn eang ar gyfer trin llu o symptomau diffyg Yang. Dangosodd astudiaethau ffarmacolegol y gallai Herba Cistanche ysbeilio radicalau rhydd (Xiong et al., 1996), cynhyrchu tawelydd (Lu, 1998), gwrth-heneiddio (Lee et al., 1990), effeithiau gwrthnociceptive a gwrthlidiol (Lin et al., 2002 ), a gwella swyddogaeth imiwnedd (Wu et al., 2005). Prif gynhwysyn gweithredol Herba Cistanche yw glycosidau ffenylethanoid (Ouyang et al., 2003), y canfuwyd bod ganddynt briodweddau gwrthfacterol, gwrth-stress, a gwrthocsidiol (Xiong et al., 1998), yn ogystal ag effeithiau gwrth-apoptotic ar ddiwylliedig. niwronau (Tian a Pu, 2005). Yn yr astudiaeth gyfredol, er mwyn ymchwilio i sail ffarmacolegol gweithred Herba Cistanche sy'n ysgogi Yang, archwiliwyd effeithiau triniaeth Herba Cistanche ar gapasiti cynhyrchu ATP mewn mitocondria wedi'i ynysu o galon llygod mawr ex vivo a chardiomyocytes H9c2 diwylliedig in situ. Er mwyn archwilio'r mecanwaith biocemegol sy'n sail i'r camau gwella cenhedlaeth ATP, archwiliwyd effeithiau triniaeth Herba Cistanche ar gludiant electronau mitocondriaidd a gweithgareddau I-IV cymhleth hefyd mewn calonnau llygod mawr.
Dyfyniad Cistanche deserticola
Defnyddiau a Dulliau
Cemegau, meithriniad celloedd, a deunyddiau llysieuol ATP, ADP, a 3-[4,5-dimethylthiozol-2-yl]-2,5-deuffenyl-tetrazolium bromid ( MTT) eu prynu oddi wrth Sigma Chemical Co (St. Louis, MO, UDA). Cafwyd ateb Luciferase (ATPlite) gan PerkinElmer (Boston, MA, UDA). Prynwyd cyfrwng addasedig Eagle's (DMEM) a serwm buchol ffetws (FBS) Dulbecco oddi wrth GIBCO BRL Life Technologies (Grand Island, NY, UDA). Prynwyd llinell gell H9c2 gan ATTC (Rockville, MD, UDA). Cyflenwyd Herba Cistanche gan ddeliwr llysieuol lleol (Lee Hoong Kee). Dilyswyd y perlysiau gan y cyflenwr, a chafodd sbesimen taleb (HKUSTY00301) ei adneuo yn Adran Biocemeg, Prifysgol Gwyddoniaeth a Thechnoleg Hong Kong (HKUST).
Echdynnu llysieuol
Torrwyd Herba Cistanche (100 g) yn ddarnau bach ac yna ei dynnu trwy wresogi o dan adlif mewn methanol 300 mL
ar 65◦C am 2 awr. Ailadroddwyd y weithdrefn ddwywaith. Sychwyd y detholiad cyfun trwy anweddu'r toddydd dan bwysau llai, a chafwyd echdyniad methanol o Herba Cistanche ar gynnyrch o 39 y cant (w / w). Dangosodd dadansoddiad cemegol fod y dyfyniad methanol o Herba Cistanche yn cynnwys cyfanswm saponins, cyfanswm flavonoidau, cyfanswm lignans, a polysacaridau mewn crynodiadau o 1.62 y cant (w/w), 0.08 y cant, 0.15 y cant , a 75.6 y cant , yn y drefn honno.
Gofal anifeiliaid
Roedd llygod mawr Sprague-Dawley gwrywaidd sy’n oedolion (8–10 wythnos; 250–300g) yn cael eu cynnal o dan gylchred tywyll/ysgafn 12-h mewn ystafell a reolir gan aer/lleithder tua 22◦C ac yn caniatáu bwyd a dŵr ad libitum yn y Cyfleusterau Gofal Anifeiliaid
yn HKUST. Cymeradwywyd protocolau arbrofol gan y Pwyllgor Ymarfer Ymchwil yn HKUST.
Triniaeth cyffuriau
Rhannwyd anifeiliaid ar hap yn grwpiau, gyda phump i chwe anifail ym mhob un. Yn y grwpiau triniaeth, cafodd llygod mawr eu rhoi'n fewngastrig gyda'r echdyniad methanol o Herba Cistanche (wedi'i hydoddi / ei atal mewn dŵr) mewn dosau dyddiol cynyddol ({{{0}}.031-0.5 g/kg) am 3 diwrnod. Roedd anifeiliaid rheoli yn derbyn dŵr yn unig. Pedair awr ar hugain ar ôl y dos olaf, cafwyd y galon o anifeiliaid ffenobarbital-anesthetized a bu'n destun dadansoddiad biocemegol.
Paratoi ffracsiynau mitocondriaidd a mesur gallu cynhyrchu ATP (ATP-GC) ex vivo
Cafodd samplau meinwe fentriglaidd chwith y galon eu tynnu allan a'u rinsio â byffer isotonig oer iâ (0.32 M swcros, EDTA 1 mM, 50 mM Tris/HCl, pH 7.4). Paratowyd ffracsiynau mitocondriaidd cardiaidd trwy allgyrchiad gwahaniaethol mewn byffer iso-tonig ar 4◦C. Paratowyd homogenad cardiaidd 10 y cant (w / v) trwy homogeneiddio'r feinwe fentriglaidd briwgig gyda homogenizer gwydr Teflon ar 4000 rpm ar gyfer 20-30 strôc cyflawn. Cafodd y homogenad ei allgyrchu ar 600 g am 10 munud i gael gwared ar niwclysau a malurion celloedd. Yna cafodd y supernatant ei allgyrchu ar 8000 g am 30 munud i waddodi'r mitocondria (Evan, 1992). Cafodd y pelenni eu hailddarlledu mewn 1 ml o'r byffer isotonig ac ailgyfansoddwyd y ffracsiynau mitocondriaidd. Mesurwyd ATP-GC mitocondriaidd anifeiliaid heb eu trin trwy ddull Leung et al. (2005).
Mesur trafnidiaeth electronau mitocondriaidd
Perfformiwyd mesur trafnidiaeth electronau mewn mitocondria ynysig, sy'n seiliedig ar ostyngiad mewn MTT, fel y disgrifiwyd gan Cohen et al. (1997). Paratowyd mitocondria ar grynodiad protein o 1 mg/mL gyda byffer deor (250 mM swcros, 50 mM HEPES, 10 mM KH2PO4, 2 mM MgCl2, 1 mM EGTA, pH 7.4) . Cymysgwyd aliquot (40 µL) o'r mitocondria gyda 100 µL yr un o 15 mM pyruvate neu 0.5 mM succinate a 0.42 mg/mL MTT. Deorwyd cymysgedd yr adwaith ar 37◦C am 10 munud gydag ysgwyd ysgafn. Ar ôl y deoriad, terfynwyd cymysgedd yr adwaith trwy ychwanegu byffer lysis 100 µL (10 y cant , w / v, sodiwm dodecyl sylffad, a 45 y cant dimethylformamide, wedi'i addasu i pH 4.7 gydag asid asetig rhewlifol). Ar ôl sefyll am 5 munud, cymerwyd darlleniadau amsugnedd o'r cymysgedd adwaith gyda darllenydd plât microtiter (Bio-Rad, Hercules, CA, UDA) ac adroddwyd fel y gwahaniaeth rhwng 570 nm a 630 nm. Mynegwyd data fel canran o werth cymedrig y grŵp rheoli (hy, Herba Cistanche-heb ei drin).
Diwylliant celloedd
Cafodd celloedd H9c2, llinell gell barhaol sy'n deillio o myoblastau cardiaidd (Hescheler et al., 1991), eu meithrin fel haenau mono yn DMEM wedi'u hategu â 10 y cant (v/v) FBS. Roedd y cyfrwng yn cynnwys glwcos (4.5 g/L) a glutamine (4.5 mM), wedi'i ategu â NaHCO3 (17 mM), penisilin (100 IU/mL), a streptomycin (100 µg/mL). Tyfwyd pob cell o dan awyrgylch o 5 y cant (v/v) CO2 mewn aer ar 37◦C. Disodlwyd y cyfrwng gan gyfrwng ffres bob 2 neu 3 diwrnod. Tyfwyd stoc o gelloedd mewn fflasg feithrin 75 cm2 a'i hollti cyn cydlifiad ar gymhareb is-amaethu o 1:10. Ar gyfer assay ATP-GC, cafodd celloedd H9c2 eu hadu ar ddwysedd o 2.5 104 cell/ffynnon i mewn i 24-blat ffynnon. Ar ôl atodiad y gell, cymhwyswyd dyfyniad Herba Cistanche (wedi'i hydoddi mewn halwynog wedi'i glustogi â ffosffad; PBS) yn y cyfrwng, a chafodd y celloedd eu deor am gyfnodau cynyddol (2-16 h) o amser. Dim ond y PBS a roddwyd i gelloedd rheoli (heb eu trin).
Mesur ATP-GC in situ
Ar ôl y cyfnodau deori a nodwyd gyda dyfyniad Herba Cistanche ar grynodiadau cynyddol (5{{10}}–300 µg/mL), cynhaliwyd y prawf ATP-GC. Allsugnwyd y cyfrwng a chafodd celloedd eu trin â digitonin (50 µg/mL) mewn byffer deor (120 mM KCl, 5 mM KH2PO4, 2 mM EGTA, 10 mM HEPES, 0.1 mM MgCl2, 0.5 y cant BSA, pH 7.4) ar gyfer 3 min ar 37◦C. Ar ôl allsugno'r digitonin, glutamad (5 mM), malate (5 mM), ac ADP (60µM) eu hychwanegu at y celloedd ar gyfer cynhyrchu ATP mitocondriaidd, a gafodd ei fonitro ar gyfnodau amser cynyddol yn amrywio o 0 i 15 munud. Terfynwyd yr adwaith trwy ychwanegu 60 µL o asid perchlorig (30 y cant , w / v), ac yna cafodd y cymysgeddau adwaith eu centrifugio ar 600g am 10 munud ar 4◦C. Cymysgwyd aliquot (120 µL) o'r uwchnatant gyda 90 µL o 1.4 M KHCO3 ar gyfer niwtraliad. Cafodd y cymysgeddau eu centrifugio eto ar 600 g ar 4◦C, a mesurwyd y supernatants ar gyfer cynnwys ATP fel y disgrifiwyd yn gynharach. Amcangyfrifwyd ATP-GC y celloedd heb eu trin trwy gyfrifo'r ardal o dan gromlin y graff (AUC1) gan blotio ATP a gynhyrchir (protein nmol / mg) yn erbyn amser (0-15 munud) a'i fynegi mewn unedau mympwyol. Ar gyfer celloedd a driniwyd gan Herba Cistanche, cafodd gwerthoedd AUC1 o amseroedd deori cynyddol (3, 5, 7, 10, a 15 mun) eu normaleiddio i werth rheoli cymedrig priodol o samplau heb eu trin a'u mynegi fel rheolaeth y cant. Yna, cafodd yr ardal o dan gromlin (AUC2) y graff sy'n plotio gwerthoedd rheoli canrannol yn erbyn amser deori (3-15 munud) ei chyfrifo a'i chyn-bwyso mewn unedau mympwyol. Mynegwyd data grwpiau a driniwyd gan Herba Cistanche fel canran o’r rheolaeth o’r hafaliad:
[AUC2(HerbaCistanche - wedi'i drin)/AUC2(heb ei drin)] × 100 y cant .
Mesuriadau I–IV cymhleth a gweithgareddau synthase sitrad
Mesurwyd gweithgareddau I– III cymhleth cadwyn trafnidiaeth electron mitocondriaidd (ETC) gan ddulliau sbectrophotometrig gan ddefnyddio swbstradau cymhleth-benodol (NADH ar gyfer cymhleth I, succinate ar gyfer cymhleth II, a decylubiquinol ar gyfer cymhleth III) fel y disgrifiwyd (Grad & Lemire, 2004; Hsu et al., 2005; Mark et al., 2001). Mesurwyd gweithgaredd IV cymhleth gan ddefnyddio pecyn assay c oxidase cytochrome gan Sigma. Mesurwyd gweithgaredd synthase sitrad mitocondriaidd gan ddefnyddio dull Srere (1969).
Assay protein
Pennwyd crynodiadau protein o ffracsiynau mitocondriaidd a lysadau celloedd gan ddefnyddio pecyn profi protein BioRad gan ddefnyddio albwmin serwm buchol fel safon ({{0}}.038-0.600 mg/mL).
Dadansoddiad ystadegol
Mynegwyd yr holl ddata fel gwall safonol cymedrig y cymedr (SEM). Cawsant eu dadansoddi gan ddadansoddiad un ffordd o amrywiant (ANOVA). Gwnaethpwyd cymariaethau lluosog post hoc gyda LSD. gwerthoedd P<0.05 were="" regarded="" as="" statistically="">
Canlyniadau
Effeithiau triniaeth Herba Cistanche ar ATP-GC mitocondriaidd myocardaidd mewn llygod mawr
Fel y dangosir yn Ffigur 1, cynyddodd triniaeth gyda detholiad Herba Cistanche ar ddosau hyd at 0.5 g/kg ATP-GC mitocondriaidd myocardaidd mewn modd dibynnol ar ddos mewn llygod mawr, gyda graddfa'r ysgogiad yn 89 y cant ar ddogn o 0.5 g/kg.
Effeithiau triniaeth Herba Cistanche ar gludo electronau mitocondriaidd mewn calonnau llygod mawr
Mesurwyd graddau cludiant electronau mewn mitocondria ynysig trwy fonitro gostyngiad MTT. Y swbstrad a ddefnyddiwyd ar gyfer y assay oedd naill ai pyruvate neu succinate. Fel y dangosir yn Ffigur 2a, cynyddodd dos triniaeth Herba Cistanche yn ddibynnol ar faint y cludo electronau mitocondriaidd a gefnogir gan pyrwfad mewn calonnau llygod mawr, gyda'r ysgogiad gorau posibl i'w weld mewn dosau o 0.5 g/kg. Fodd bynnag, ni chanfuwyd unrhyw newidiadau sylweddol yn y graddau y trafnidiaeth electron mitocondriaidd a gefnogir gan succinate yn Herba Cistanche-drin calonnau llygod mawr (Ffig. 2 b).
Effeithiau triniaeth Herba Cistanche ar weithgareddau cymhleth anadlol mitocondriaidd mewn calonnau llygod mawr
Fel y dangosir yn Ffigur 3, cynyddodd triniaeth Herba Cistanche ar y dos gorau posibl o 0.5 g/kg yn sylweddol weithgareddau cymhleth I (34 y cant) a chymhleth III (22 y cant) mewn calonnau llygod mawr. Mae'r ac- tivity o sitrad synthase, ensym allweddol ar gyfer y cylch asid tricarboxylic, nid oedd yn effeithio gan Herba Cistanche triniaeth (Ffig. 3). Dangosodd dadansoddiad blotiau gorllewinol nad oedd triniaeth Herba Cistanche yn effeithio ar lefelau protein I a III cymhleth (data heb ei ddangos).
Cwrs amser newidiadau a achosir gan Herba Cistanche mewn ATP-GC mitocondriaidd mewn celloedd H9c2
Archwiliwyd newidiadau mewn ATP-GC yng nghelloedd trin Herba Cistanche (50 a 150 µg/mL) yn dilyn 2 i 16 h o ddeoriad. Fel y dangosir yn Ffigur 4, cynyddodd triniaeth Herba Cistanche yr ATP-GC mewn modd dibynnol ar amser a deuphasig mewn celloedd H9c2, gyda'r ysgogiad mwyaf (44 y cant ac 89 y cant, yn y drefn honno) yn weladwy ar ôl deori 8 h ar gyfer y ddau grynodiad cyffuriau. Yna dychwelodd yr ATP-GC i werthoedd rheoli heb eu trin pan estynnwyd yr amser deori i 16 h. Digwyddodd ysgogiad cynharach pan gafodd y celloedd eu trin â chrynodiad uwch (150 µg/mL) o echdyniad Herba Cistanche.
Crynodiad-dibyniaeth Herba
Cynnydd a achosir gan Cistanche mewn ATP-GC mewn celloedd H9c2
Cafodd celloedd H9c2 eu trin â chrynodiadau cynyddol (50-300 µg/mL) o echdyniad Herba Cistanche am 4 h. Mae Ffigur 5 yn dangos bod triniaeth Herba Cistanche wedi cynyddu'r ATP-GC mewn modd sy'n dibynnu ar grynodiad, gyda'r ysgogiad mwyaf (82 y cant) yn weladwy ar y crynodiad o 300 µg/mL.
Cynnydd echdynnu Cistanche mewn cynhyrchiad ATP
Trafodaeth
Mae uwch-reoleiddio gweithgareddau cellog ar gyfer gwella swyddogaeth y corff fel crebachiad cyhyrau ac ymatebion imiwn gan fywiogrwydd Yang yn golygu bod angen cynyddu'r defnydd o ATP, sydd yn ei dro yn cael ei gefnogi gan ffosfforyleiddiad ocsideiddiol mitocondriaidd. Yn yr astudiaeth gyfredol, canfuwyd bod triniaeth Herba Cistanche yn dibynnu ar ddos i gynyddu gallu cynhyrchu ATP mitocondriaidd ex vivo mewn calonnau llygod mawr. Mae'r arsylwad hwn yn gyson â'n canfyddiad blaenorol bod triniaeth Herba Cistanche ymhlith perlysiau tonyddu Tsieineaidd sy'n bywiogi Yang, wedi cynhyrchu llawer mwy o ysgogiad ar genhedlaeth ATP mitocondriaidd yng nghalonnau llygoden (Ko et al., 2006). Ar yr un pryd â gwella'r broses o gynhyrchu ATP mitocondriaidd oedd y cynnydd mewn trafnidiaeth electronau mitocondriaidd a yrrwyd gan pyrwfad ond nid succinate, fel yr aseswyd gan leihad MTT. Roedd canlyniadau a gafwyd o fesur cinetig cymhleth mitocondriaidd I-IV yn dangos bod gweithgareddau'r ddau gymhlyg I a III wedi cynyddu mewn calonnau a driniwyd gan Herba Cistanche, gyda graddau'r ysgogiad ar weithgaredd cymhleth I yn fwy na'r hyn a geir yng nghymhlyg III. Gan na effeithiwyd ar weithgaredd citrate synthase, ensym allweddol o'r cylch asid tricarboxylic, gellir priodoli'n bennaf i wella gallu cynhyrchu ATP mitocondriaidd trwy driniaeth Herba Cistanche i ysgogi gweithgareddau cymhleth I a / neu III. Mae'r rhan fwyaf o ofynion ATP y galon yn cael eu bodloni gan mitocondria, sy'n dibynnu bron yn gyfan gwbl ar yr ocsidiad cymhleth sy'n gysylltiedig ag I (NADH) o asid brasterog a glwcos (Stanley et al., 1997; Taegtmeyer, 1998). Ystyrir bod cymhleth I, sy'n dangos gweithgaredd is na chymhlethdodau anadlol eraill, yn ffactor pwysig wrth reoleiddio ffosfforyleiddiad ocsideiddiol. Felly, gall ysgogi neu atal gweithgaredd cymhleth I gael effaith fawr ar egni cardiaidd. Er na ddatgelodd dadansoddiad blot y Gorllewin unrhyw newidiadau yn lefel protein y ddau gyfadeilad hyn (data heb ei ddangos), gall y cynnydd mewn gweithgaredd ensymau ddeillio o'r newidiadau mewn statws thiol protein a/neu amgylchedd lipid (Davey et al., 1998; Paradies et al., 2004).
Dyfyniad Herba Cistanchegallai gynhyrchu'r effaith gwella cenhedlaeth ATP mewn celloedd H9c2 diwylliedig yn y fan a'r lle. Mae dyfodiad cymharol gynnar y camau ysgogol a gynhyrchwyd gan driniaeth Herba Cistanche, yn enwedig ar ddogn uchel, yn gyson â'r arsylwi o'r astudiaethau ex vivo a nododd ei bod yn annhebygol y bydd synthesis proteinau I a III cymhleth yn rhan o'r broses o wella cenhedlaeth ATP. gweithred. Mae arddangosiad o welliant a achosir gan Herba Cistanche mewn cyflwr cynhyrchu ATP yn y fan a'r lle yn cefnogi'r syniad y gallai'r cynnydd mewn gallu cynhyrchu ATP mitocondriaidd, fel y'i aseswyd gan fesuriad ex vivo, adlewyrchu effaith gyfochrog a gynhyrchir gan y driniaeth cyffuriau cyflwr in vivo yn unig. Mae mesur cenhedlaeth ATP mewn mitocondria ynysig a chelloedd diwylliedig gan ddefnyddio malate a glwtamad fel swbstradau yn fesur anuniongyrchol o resbiradaeth mitocondriaidd cyflwr 3 (Chen et al., 2003). Gan ddefnyddio’r un assay ATP bioluminescent, roedd cyfradd cynhyrchu ATP mitocondriaidd mewn meinweoedd amrywiol o lygod mawr heb eu trin, fel yr adroddwyd yn gynharach yn ein labordy (Leung et al., 2005), yn cytuno’n dda â’r data a gyhoeddwyd yn ddiweddar (Drew & Leeuwenburgh, 2003 ). Amcangyfrifwyd cynhwysedd cynhyrchu ATP gan integreiddiad dau gam o newidiadau amser-ddibynnol yn lefel ATP mewn profion ex vivo ac in situ. Felly cafodd yr effaith symbylol a achosir gan gyffuriau ei chwyddo er mwyn cymharu. Roedd gwella gallu cynhyrchu ATP gan driniaeth Herba Cistanche mewn mitocondria calon llygod mawr ex vivo yn gyfochrog ag ysgogiad cynhyrchu ATP mewn celloedd H9c2 yn y fan a'r lle. O ystyried presenoldeb gweithgaredd sy'n gwella cenhedlaeth ATP mewn perlysiau tonhau Tsieineaidd sy'n bywiogi Yang, gan gynnwys Herba Cistanche, yng nghalonnau'r llygoden ex vivo (Ko et al., 2006), mae'r canlyniadau'n awgrymu y dylid mesur gallu cynhyrchu ATP mewn celloedd H9c2 mewn Gellir defnyddio situ fel prawf ffarmacolegol ar gyfer perlysiau tonyddu Tsieineaidd sy'n bywiogi Yang neu fformiwla lysieuol.
I gloi, gallai triniaeth gyda detholiad Herba Cistanche wella gallu cynhyrchu ATP mitocondriaidd mewn calonnau llygod mawr ex vivo ac mewn celloedd H9c2 yn y fan a'r lle. Mae'r canfyddiadau'n cefnogi ein rhagdybiad bod sail ffarmacolegol adfywio Yang yn cynnwys gwella swyddogaethau'r corff trwy ysgogi cynhyrchu ATP mitocondriaidd.
Mae detholiad Herba Cistanche yn gwella gallu cynhyrchu ATP mitocondriaidd
Cyfeiriadau
Chen P (1998): Perlysiau Tonic. Cyfres TCM Uwch. Beijing, Tsieina, Science Press, tt. 233–320.
Chen Q, Vazquez EJ, Moghaddas S, Hoppel CL, Lesnefsky EJ (2003): Cynhyrchu rhywogaethau ocsigen adweithiol gan mitocondria: rôl ganolog cymhleth III. J Biol Chem 278: 36027– 36031.
Cohen G, Farooqui R, Kesler N (1997): Clefyd Parkinson: Cyswllt newydd rhwng monoamine ocsidas a llif electronau mitocondriaidd. Proc Natl Acad Sci USA 94: 4890–4894.
Davey GP, Peuchen S, Clark JB (1998): Trothwyon egni mewn mitocondria ymennydd. Cymryd rhan bosibl mewn niwroddirywiad. J Biol Chem 273: 12753–12757.
Drew B, Leeuwenburgh C (2003): Dull ar gyfer mesur cynhyrchiant ATP mewn mitocondria ynysig: cynhyrchiad ATP mewn mitocondria ymennydd ac afu o lygod mawr Fischer-344 gydag oedran a chyfyngiad calorig. Am J Physiol Regul Integr Comp Phys- iol 285: R1259–R1267.
Evan WH (1992): Ynysu a nodweddu pilenni ac organynnau celloedd. Yn: Rickwood D, gol. Allgyrchu Paratoadol: Dull Ymarferol. Efrog Newydd, Gwasg Prifysgol Rhydychen, tt. 223–270.
Grad LI, Lemire BD (2004): Mae treigladau cymhleth mitochondrial I yn Caenorhabditis elegans yn cynhyrchu diffyg cytochrome c oxidase, straen ocsideiddiol, ac asidosis lactig sy'n ymateb i fitaminau. Geneteg Mol Dynol 13:303–314.
Hescheler J, Meyer R, Planhigion S, Krautwurst D, Rosenthal W, Schultz G (1991): Morffolegol, biocemegol, ac electroffisiolegol nodweddu llinell cell clonal (H9c2) o galon llygod mawr.Circ Res 69: 1476-1486.
Hsu M, Srinivas B, Kumar J, Subramanian R, Andersen J (2005): Mae disbyddiad Glutathione sy'n arwain at ataliad cymhleth mitocondriaidd I dethol mewn celloedd dopaminargig trwy lwybr NO-cyfryngol nad yw'n cynnwys perocsinitrit: Goblygiadau ar gyfer clefyd Parkinson. J Neurochem 92: 1091– 1103 .
Ko KM, Leon TYY, Mak DHF, Chiu PY, Du Y, Poon MKT (2006): Gweithred ffarmacolegol nodweddiadol o berlysiau toneiddio Tsieineaidd 'Yang- bywiogi': Gwella gallu cynhyrchu ATP myocardaidd. Ffytomeddygaeth 13:636–642.
Ko KM, Mak DH, Chiu PY, Poon MKT (2004): Sail ffarmacolegol 'Yang-invigoration' mewn meddygaeth Tsieineaidd. Tueddiadau Fferyllol Sci 25:3–6.
Lee CJ, Chuan S, Lee SL (1990): Astudiaeth ar effaith gwrth-heneiddio Cistanche deserticola Ma. Shanghai J Trad Chin Med 11:22–23.
Lei L, Song ZH, Tu PF, Li YZ, Wu LJ, Chen FK (2001): Rheoleiddio metabolaidd o glycosidau ffenylethanoid o gistanches Herba mewn gastroberfeddol cŵn. Yao Xue Xue Bao 36:432–435
Leung HY, Chiu PY, Poon MKT, Ko KM (2005): Mae fformiwla lysieuol Tsieineaidd fywiogi Yang yn gwella gallu swyddogaethol mitocondriaidd a gallu gwrthocsidiol mewn meinweoedd amrywiol llygod mawr gwrywaidd a benywaidd. Rejuven Res 8: 238–247.
Lin LW, Hsieh MT, Tsai FH, Wang WH, Wu CR (2002): Gweithgaredd antinociceptive a gwrthlidiol a achosir gan Cistanche deserticola mewn cnofilod. J Ethnopharmacol 83:177–182.
Lu MC (1998): Astudiaethau ar effaith tawelyddol Cistanche deserticola. J Ethnopharmacol 59: 161–165.
Mark A, Birch M, Douglass MT (2001): Assaying gweithgaredd anadlol cymhleth mitocondriaidd mewn mitocondria ynysu oddi wrth gelloedd dynol a meinweoedd. Meth Cell Biol 65:97–117.
Ouyang J, Wang X, Zhao B, Yuan X, Wang Y (2003): Effeithiau elfennau daear prin ar dwf celloedd deserticola Cistanche a chynhyrchu glycosidau ffenylethanoid. J Biotech 102: 129–134.
Paradies G, Petrosillo G, Pistolese M, Di Venosa N, Federici A, Ruggiero FM (2004): Gostyngiad mewn gweithgaredd cymhleth mitocondriaidd I mewn calon llygod mawr isgemig / atgyfnerthol: Cynnwys rhywogaethau ocsigen adweithiol a chardilipin. Cylch Res 94: 53–59.
Srere PA (1969): Citrate synthase. Cylchred asid citrig. ‘Ensymol 13:3–11.
Stanley WC, Lopaschuk GD, Hall JL, McCormack JG (1997): Rheoleiddio metaboledd carbohydrad myocardaidd o dan amodau arferol ac isgemig. Potensial ar gyfer ymyriadau ffarmacolegol. Cardiofasg Res 33: 243–257.
Taegtmeyer H (1998): Metabolaeth swbstrad egni fel targed ar gyfer ffarmacotherapi mewn isgemia ac atgyfnerthiad cyhyr y galon. Metab y Galon 1:5–9.
Tian XF, Pu XP (2005): Mae glycosidau ffenylethanoid o Cistanches salsa yn atal apoptosis a achosir gan 1-methyl{2}} ïon ffenylpyridiniwm mewn niwronau. J Ethnopharmacol 97:59–63.
Wu XM, Gao XM, Tsim KW, Tu PF (2005): Mae arabinogalactan sydd wedi'i ynysu oddi wrth goesynnau Cistanche deserticola yn achosi cynnydd mewn lymffocytau diwylliedig. Int J Biol Macromol 37: 278–282.
Xiong Q, Hase K, Tezuka Y, Tani T, Namba T, Kadota S (1998): Gweithgaredd hepatoprotective o ffenylethanoids o Cistanche deserticola. Planta Med 64:120–125.
Xiong Q, Kadota S, Tani T, Namba T (1996): Effeithiau gwrthocsidiol ffenylethanoidau o Cistanche deserticola. Biol Pharm Tarw 19: 1580–1585.
