Dylanwad Efelychu Treuliad Dynol In Vitro Ar Y Ffenolig Cynnwys A Gweithgareddau Biolegol Y Detholiad Dyfrllyd O Rywogaeth Cistws Twrcaidd Rhan 2
Apr 19, 2022
Cysylltwchoscar.xiao@wecistanche.comam fwy o wybodaeth
I grynhoi
Roedd echdynnyn dyfrllyd C.salvifolius yn arddangos gwell gweithgaredd atal ensymau treulio na darnau o rywogaethau eraill. Yn ogystal, datgelodd samplau MEWN o'r holl echdynion dyfrllyd weithgareddau atal ensymau is o gymharu â samplau ND.
2.4.AGEs Gweithgaredd Ataliol
Fel y cyflwynir yn Nhabl 4, gwelwyd gweithgaredd ataliol AGE sy'n ddibynnol ar grynodiad ym mhob echdynnyn dyfrllyd. Dangosodd samplau ND o CCA, CPA, a CSA well gweithgaredd ataliol na'r quercetin cyfansawdd cyfeirio mewn crynodiadau 0.5 ac 1mg/mL. Fodd bynnag, dim ond dyfyniad C.saluifolius oedd yn dangos gwell gweithgaredd ataliol na quercetin ymhlith samplau IN o'r darnau. Roedd samplau bio-ar gael o echdynion dyfrllyd yn dangos gweithgareddau ataliol AGE is o gymharu â samplau heb eu treulio. Yn ôl y canlyniadau, roedd gan y sampl ND o echdyniad dyfrllyd o C.salvifolius y gweithgaredd ataliol AGE uchaf. Fodd bynnag, dangosodd sampl IN o echdynnyn dyfrllyd C.monspeliensis y potensial ataliad OED gwannaf mewn crynodiadau a brofwyd.
3. Trafodaeth
Gallai radicalau rhydd ymosod ar broteinau, lipidau, neu DNA i gaffael electron, gan arwain at broblemau iechyd amrywiol. Am y rheswm hwn, mae'n hanfodol cydbwyso system gwrthocsidiol y corff a'r radicalau rhydd a ffurfiwyd gan ocsidiad. Rhag ofn y bydd y cydbwysedd hwn yn dirywio, mae straen ocsideiddiol yn codi [29]. Straen ocsideiddiol yw un o'r prif ffactorau sy'n arwain at anhwylderau cronig amrywiol megis canser, diabetes, clefydau cardiofasgwlaidd, clefyd Alzheimer, ac ati Er bod systemau hunan-wrthocsidiol yn y corff dynol i frwydro yn erbyn yocsidioldifrod i feinweoedd ac organau, gall y systemau amddiffyn hyn golli eu heffeithlonrwydd oherwydd gwahanol amodau megis gor-yfed alcohol, ysmygu, straen, defnydd cronig o gyffuriau, ac ymbelydredd, ac ati [30]. Mae adroddiadau gwyddonol amrywiol wedi nodi bod metabolion planhigion eilaidd yn chwarae rhan arwyddocaol wrth atal straen ocsideiddiol a'i effeithiau niweidiol [13,14,31] Er bod bio-argaeledd yn baramedr pwysig sy'n effeithio ar fioactifedd y cyfansoddion hyn, nid yw wedi'i ystyried yn y rhan fwyaf o astudiaethau. Fodd bynnag, mae'n hysbys bod y metabolion eilaidd yn destun trawsnewidiadau strwythurol oherwydd gwahanol amodau pH, gweithgaredd ensymatig, a thymheredd y corff yn y system gastroberfeddol. Yn ogystal, mae nodweddion cemegol y metabolion eilaidd megismoleciwlaiddmae pwysau, polaredd, a graddau'r rhwymiad i macromoleciwlau yn y matrics planhigion hefyd yn ffactorau arwyddocaol sy'n effeithio ar eu bioargaeledd [13]. Yn unol â hynny, mae'n hanfodol amsugno'r cyfansoddion neu eu metabolion i'r llif gwaed ar ôl eu hamlyncu er mwyn cyflawni eu heffeithiau ffisiolegol systemig. Gall modelau efelychu treuliad in vitro ddarparu tystiolaeth ar gyfer asesu nodweddion bio-argaeledd posibl sylweddau. Er bod angen cadarnhad mewn treialon dynol i hawlio unrhyw eiddo swyddogaethol, defnyddir modelau efelychu in vitro yn fras fel dewisiadau amgen i astudiaethau in vivo neu dreialon dynol, sy'n aml yn ddadleuol yn foesegol, yn ddwys o ran adnoddau, yn ddrud ac yn cymryd llawer o amser [32].
Gall cistanche wella imiwnedd
Mae sawl ymchwilydd hefyd wedi ymchwilio i botensial gwrthocsidiol echdynion a baratowyd o wahanol organau o rywogaethau Cistus. Yn ôl yr arolwg llenyddiaeth, dyma'r astudiaeth gyntaf ar rywogaethau Cistus ynghylch bio-argaeledd sylweddau ffenolig a'u heffaith ar weithgarwch gwrthocsidiol trwy ddefnyddio model efelychu treuliad in vitro. Mae Karas et al. [33] awgrymu bod 10 y cant o'r cydrannau polyphenolic yn parhau heb ei dreulio yn y matrics planhigion a 90 y cant ohonynt yn destun treuliad yn y cyfnod gastrig neu berfeddol (tua 48 y cant a 52 y cant, yn y drefn honno). Fel y soniwyd yn gynharach, effeithiwyd yn negyddol ar yr holl symiau ffenolig mewn echdynion dyfrllyd gan y weithdrefn efelychu treulio dynol in vitro. Felly, canfuwyd colledion sylweddol yng nghynnwys ffenolig y samplau bio-ar gael o'r holl echdynion. At hynny, roedd cyfanswm crynodiadau proanthocyanidin o samplau IN yn is na'r terfyn canfod ym mhob echdynnyn dyfrllyd. Ysgogodd astudiaethau amrywiol hefyd ddylanwad negyddol gweithdrefn dreulio ar gyfansoddion ffenolig yn y darnau planhigion ac felly bioweithgareddau cysylltiedig. Er enghraifft, fe wnaethom adrodd ar gyfanswm cynnwys ffenolig Salvia virgata Jacq. effeithiodd y weithdrefn dreulio yn ein hastudiaeth flaenorol yn andwyol hefyd. Yn ogystal, roedd symiau metabolion mawr y dyfyniad, hy, rutin ac asid rosmarinig, yn tueddu i ostwng [13]. Mewn cyferbyniad, mae sawl astudiaeth wedi nodi canlyniadau gwrthgyferbyniol. Yn yr astudiaeth gan Celeb et al. [34], fe wnaethant arsylwi cynyddiad cyfanswm y symiau asid ffenolig, flavonoid, a ffenolig yn y samplau bio-ar gael o echdyniad methanolig o Hypericum perfoliatum L. Mewn gwirionedd, roedd gan y prif fetabolion, quercitrin, clorogenic a gallic acid, gymarebau biohygyrchedd dros 100 y cant . Dangosodd yr astudiaethau hyn y gallai effeithiau'r weithdrefn dreulio amrywio yn ôl deunyddiau planhigion. Er mwyn egluro'r gwahaniaethau hyn, mae'n hanfodol ystyried mecanwaith gweithredu'r system dreulio ar sylweddau ffenolig. Serra et al. [35] awgrymu bod cyfansoddion ffenolig i'w cael yn bennaf mewn glycosides, polymerau, a ffurflenni ester yn y matrics planhigion ac yn cael eu hydrolyzed yn y system dreulio cyn amsugno. Gall ffactorau amrywiol ddylanwadu ar drawsnewidiadau strwythurol y cyfansoddion ffenolig yn y llwybr gastroberfeddol. Er enghraifft, mae angen i gyfansoddion â phwysau moleciwlaidd uwch, fel proanthocyanidins neu procyanidins, gael eu hydrolysu cyn amsugno yn y perfedd. Mae strwythur y matrics planhigion hefyd yn ffactor amlwg o ran bioargaeledd ffenolig; gall cyfansoddion ffenolig rwymo i macromoleciwlau yn y matrics planhigion, megis ffibrau, proteinau, a moleciwlau lipid. Felly, dim ond y cydrannau ffenolig a ryddhawyd o'r matrics a all ddod yn amsugnadwy o'r llwybr gastroberfeddol. Ar ben hynny, mae gwahanol werthoedd pH a gweithredoedd ensymatig y microbiota berfeddol ymhlith y ffactorau hanfodol eraill sy'n effeithio ar drawsnewid strwythur cemegol cyfansoddion ffenolig [36]. Yng ngoleuni'r data hyn, gallwn ddamcaniaethu y gall canlyniadau gwahanol a gafwyd o fathau tebyg o astudiaethau arbrofol fod oherwydd cymhlethdod y system dreulio a chyfansoddiad y matrics planhigion. Fel y cyflwynir yn Nhabl 3, roedd y samplau bio-argaeledd o echdynion Cistus yn arddangos gweithgaredd gwrthocsidiol gwannach na'r cymheiriaid heb eu treulio ac ôl-gastrig oherwydd eu cynnwys ffenolig is.
At hynny, roedd y ddau ddarn o C. saluifolius yn dangos gwell gweithgaredd gwrthocsidiol mewn profion DPPH, CUPRAC, FRAP, a TOAC o'u cymharu â rhywogaethau eraill. Yn ogystal, roedd y ddau ddarn o C.paroiflorus yn dangos gweithgaredd sborion radical DMPD uwch na darnau o rywogaethau eraill. Fel y nodir yn Nhabl 1, roedd cyfanswm cynnwys ffenolig, flavonoidau, ac asid ffenolig C. salviifolius yn uwch nag yn y samplau eraill. Felly, gall potensial gwrthocsidiol uwch y darnau C. saloiifolius fod yn gysylltiedig â'i gynnwys ffenolig.
Ar ben hynny, mae'n bosibl bod y gostyngiad mewn potensial gwrthocsidiol, gweithgareddau ataliol ar ensymau sy'n gysylltiedig â charbohydradau, ac AGEs y samplau bio-ar gael yn gysylltiedig â'r dirywiad mewn glycosidau flavonoid marciwr. Fodd bynnag, roedd darnau Cistus hefyd yn cynnwys sylweddau ffenolig eraill, fel y nodir yn Ffigur 1. Felly, mae angen dadansoddiad cromatograffig manwl o'r darnau i fonitro dylanwad treuliad ar weithgaredd biolegol.
Yn ddiweddar, mae potensial ataliol echdynion planhigion ar ensymau treulio wedi denu mwy o sylw oherwydd pryder diogelwch atalyddion synthetig. Felly, penderfynwyd effaith ataliol echdynion planhigion mewn sawl astudiaeth, ac roedd yr effaith hon yn gysylltiedig yn gyffredinol â sylweddau ffenolig fel flavonoidau, asidau ffenolig, proanthocyanidins, ac ati Sun et al. [37] awgrymu bod cyfansoddion polyphenolic yn arddangos eu heffeithiau ataliol trwy rwymo â'r ensymau a grybwyllir uchod gyda chymorth grymoedd hydroffobig a bondiau nad ydynt yn cofalent. Felly, mae ataliad o weithgaredd ensymau -amylase a -glucosidase gan polyffenolau yn gysylltiedig â'u strwythurau moleciwlaidd. Er bod y mecanwaith rhyngweithio hwn wedi'i astudio gan ddefnyddio gwahanol dechnegau megis cineteg ataliad, diffodd fflworoleuedd tocio moleciwlaidd, ac ati, ni chafwyd unrhyw gasgliad penodol eto [38]. Fodd bynnag, mae nifer o astudiaethau wedi nodi bod ataliadau ensymau treulio o'r darnau planhigion yn uniongyrchol gysylltiedig â'u cynnwys ffenolig. Mae astudiaethau tebyg ar weithgareddau atal ensymau rhywogaethau Cistus hefyd wedi'u hadrodd yn flaenorol. Dywedodd Sayah et al. [39] ymchwilio i weithgareddau ataliol -amylase ac a-glucosidase o'r 80 y cant o echdynion methanolig a dyfrllyd o C. monspeliensis a C. saluifolius. Roedd eu canlyniadau yn unol â'r astudiaeth bresennol, gan ddatgelu bod dyfyniad dyfrllyd C. salvijfolius yn dangos uwch -glucosidase （IC50 ug/mL∶0.95±0.14) ac o -amylase (IC50 ug/mL∶217.1±0.15) gweithgaredd rhwystrol na'r dyfyniad dyfrllyd C.monspeliensis （IC50 ug/mL∶14.58±1.26） a （ICsn ug.0.1:80.1, yn y drefn honno Roedd cyfraddau ataliol y ddau echdynnyn dyfrllyd ar yr ensymau hyn yn uwch na'r cyfansoddyn cyfeirio acarbose (ICso ug/mL: 18.01±2.00) Yn debyg i'n hastudiaeth ni, canfuwyd cydberthynas â'r cyfraddau ataliol ensymau a'r cyfanswm symiau ffenolig a flavonoid. Roedd cyfanswm cynnwys ffenolig a chyfanswm flavonoid echdyniad dyfrllyd C. salvijfolius (408.43 ±1.09mg GAE a 140.00±1.15 RE, yn y drefn honno) yn uwch na dyfyniad dyfrllyd C.monspeliensis (261.76 ±1.9mg GAE a 1.9mg GAE). 78.00±1.15 RE). Roedd Orhan et al. [40] ymchwiliodd hefyd i botensial atal ensymau treulio 80 y cant o echdynion dyfrllyd ac ethanolig o ddail C.laurifolius. Yn ôl eu canlyniadau, dangosodd dyfyniad ethanolig 80 y cant (71.7 y cant ± 0.6) weithgaredd ataliol -amylase cryf o'i gymharu â dyfyniad dyfrllyd (39.3 y cant ± 2.2) ar grynodiad 1 mg / mL. Fe wnaethant awgrymu bod cyfansoddion ffenolig, yn enwedig flavonoidau, yn effeithio'n uniongyrchol ar secretion inswlin trwy atal apoptosis beta-gell a chefnogi gweithgaredd gwrth-diabetig. Mae'r ddamcaniaeth hon, sy'n cyd-fynd â'n canlyniadau, yn nodi mai'r sampl ND o echdynion dyfrllyd o C. salviifolius a roddodd y cyfanswm uchaf o gynnwys flavonoid a ffenolig a'r gweithgareddau ataliol o-amylase ac o-glucosidase mwyaf. Fel y nodir yn Nhabl 4, dangosodd echdyniad dyfrllyd C. salviifolius well gweithgareddau ataliol ar ensymau treulio na'r echdynion eraill.
Yn ogystal, roedd samplau MEWN o'r echdynion dyfrllyd yn cynnwys symiau ffenolig a flavonoid is na samplau ND ac felly datgelodd weithgareddau atal ensymau is yn y gwaith presennol. Er bod y weithdrefn dreulio wedi effeithio'n negyddol ar gynnwys ffenolig y darnau, roeddent yn dal i arddangos gweithgarwch atal ensymau treulio sylweddol. Mewn sawl astudiaeth, adroddwyd bod glycosidau flavonoid yn brif fetabolion o echdynion planhigion gyda chryfa-amylasa photensial ataliol -glucosidase [41-43]Er nad yw mecanwaith ataliol cyfansoddion ffenolig ar yr ensymau treulio wedi'i ddatgelu eto, mae astudiaethau perthynas strwythur-gweithgaredd wedi'u cynnal ar rai cydrannau ffenolig megis flavonoidau, asidau ffenolig, proanthocyanidins a thaninau Dangosodd astudiaethau perthynas strwythur-gweithgaredd am flavonoidau fod bond dwbl C2=C3 o gylch C yn gwella potensial ataliad ensymau treulio cyfansoddion o'r fath. Gan fod y bond hwn yn codi'r dwysedd electronau, mae cryfder y rhyngweithio rhwng y flavonoid a'r ensym yn cynyddu [44]. Yn ogystal, mae grwpiau hydrocsyl ar C-5 a C-7 yn hwyluso potensial ataliol o-amylase o flavonoidau. Awgrymwyd hefyd bod hydroxylation sgerbwd flavonoids yn effeithio'n gadarnhaol ar eu a-amylase a- glwcosidase ensympotensial ataliol[45]. Fel y nodwyd yn gynharach, roedd yr holl flavonoidau marcio yn yr astudiaeth bresennol yn glycosidau flavonol yn dwyn y gofynion strwythurol hyn a ddisgrifir uchod. Fodd bynnag, ar ôl y weithdrefn dreulio in vitro, dirywiodd eu gweithgareddau cysylltiedig yn sylweddol mewn samplau bioargaeledd o'r echdynion dyfrllyd.
Yn gyffredinol, mae potensial ataliol y darnau planhigion ar AGEs yn gysylltiedig â sawl ffactor, hy, eu cynnwys ffenolig, potensial gwrthocsidiol, galluoedd chelating metel, rhyngweithiadau protein, a gweithgareddau blocio derbynyddion AGE[13]. Fel y cyflwynir yn Nhabl 4, dangosodd samplau bioargaeledd o'r echdynion dyfrllyd weithgareddau ataliol AGE is o gymharu â samplau ND gan fod gweithdrefn dreulio in vitro wedi effeithio'n andwyol ar gynnwys ffenolig y darnau. Yn ôl canlyniadau'r astudiaeth gyfredol, roedd gan y sampl ND o echdyniad dyfrllyd o C.salvifolius y gweithgaredd ataliol AGE uchaf yn ogystal â chyfanswm y cynnwys ffenolig a flavonoid. Mewn cymhariaeth, MEWN sampl o echdynnyn dyfrllyd o C.monspeliensis ddangosodd y potensial ataliad OEDRAN gwannaf, y gellir ei briodoli i'w gyfanswm isaf o gynnwys flavonoid a ffenolig. Gan fod gan flavonoidau ddosbarthiad eang mewn darnau planhigion, ffrwythau, llysiau a diodydd, mae sawl astudiaeth wedi dwysáu ar botensial ataliad flavonoidau ar ffurfiannau AGE. Adroddwyd hefyd am yr un flavonoidau a neilltuwyd â'r ffenoligau marcio yn yr astudiaeth hon fel y cyfansoddion marcio mewn astudiaethau eraill[46-48].
Yn debyg i ataliad ensymau treulio, ysgogwyd gweithgareddau ataliol AGE o flavonoidau gan fond dwbl C2=C3 a hydroxylation cylchoedd A ac C. Fodd bynnag, mae ymlyniad siwgr i'r sgerbwd flavonoid yn arwain at lai o weithgaredd ataliol [49]. Ar y llaw arall, mae Cervantes-Lauren et al. [50] awgrymodd fod gan fflafon-3-o glycosidau botensial ataliad AGE uwch na'r glycosidau flavonoid eraill. Gall y ddamcaniaeth hon fod yn esboniad am y lleihad mewn ataliad AGE mewn samplau bioar gael. Er enghraifft, ni chanfuwyd quercitrin a hyperoside mewn samplau bioargaeledd o echdyniad dyfrllyd C.monspeliensis, sef y rheswm dros actifedd is mewn samplau IN o C.monspeliensis o'i gymharu â'r darnau o rywogaethau eraill. Er na chanfuwyd quercitrin yn echdyniad dyfrllyd C. saloifolius, gall symiau sylweddol uwch o hyperosid a salidroside fod yn achos ei weithgarwch atal AGE uchel. Yn gyffredinol, gwelwyd cydberthynas gadarnhaol rhwng cynnwys flavonoid marciwr y samplau a'u potensial ataliol ar AGEs.
4. Deunydd a Dulliau
4.1.Cemegol
Prynwyd yr holl gyfeiriadau, ensymau a chemegau a ddefnyddiwyd yn yr arbrofion gan Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, UDA). Defnyddiwyd deunyddiau gradd dadansoddol yn yr arbrofion.
Samplau 4.2.Plant
Casglwyd rhannau o'r awyr o C.creticus a C.saloifolius o gampws Prifysgol Yeditepe (Kayisdagi, Istanbul) yn ystod wythnos olaf Ebrill 2018. Casglwyd rhannau o'r awyr o C.mon-speliensis a C.paroiflorus o ger AlacatI Kutlu Aktas Balaji, Cesme, Izmir yn ail wythnos Mai 2018. Casglwyd rhannau o'r awyr o C. laurifolius o ffordd Kemer-Doganhisar, Konya, yn ystod wythnos gyntaf mis Mehefin 2018. Dilysodd yr Athro Dr Erdem Yesilada ddeunyddiau planhigion. Roedd sbesimenau talebau ar gyfer C.creticus (YEF18013), C.lauri-folios (YEF18017), C.monspeliensis(YEF18015),C.paroifforus(YEF18016)a C.salvifolus (YEF18014) yn cael eu storio yn Herbariwm yr Adran Pharmacognosy Cyfadran Fferylliaeth, Prifysgol Yeditepe, Istanbul, Twrci.
4.3.Gweithdrefn Echdynnu
Dewiswyd echdynnu dyfrllyd gan ei fod yn cael ei ddefnyddio'n gyffredin fel techneg baratoi mewn meddygaeth draddodiadol. Mae'r rhannau o'r awyr wedi'u sychu'n fras ac wedi'u powdro oCistancheechdynnwyd rhywogaethau (100 g) â dŵr distyll poeth (80 gradd , 1.5L) trwy ddefnyddio dyfais ysgwyd am 15 munud. Yna, cafodd darnau dyfrllyd eu hidlo trwy bapur hidlo a'u hanweddu i sychder o dan bwysau llai. Ar ôl cwblhau'r weithdrefn lyoffileiddio, toddwyd echdynion mewn dŵr distyll i'w prosesu ymhellach (sampl heb ei dreulio: ND) (cynnyrch echdynion: 13.04 y cant ar gyfer C.creticus, 15.7 y cant ar gyfer C.laurifolius, 12.8 y cant ar gyfer C.monspeliensis ,14.94 y cant ar gyfer C.parviflorus, 14.74 y cant ar gyfer C.salvifolius).
4.4.In Vitro Dull Efelychu Treuliad Dynol
Cymhwyswyd y model efelychiad treuliad dynol i samplau Cistus in vitro, gan ddilyn y dull a nodwyd yn gynharach gan Celeb et all. (SGF). Yn ddiweddarach, trefnwyd pH yr hydoddiant SGF i 2 gyda HCl (5 M); cymysgwyd 17.5 mL o'r hydoddiant hwn â 2.5 mL o samplau planhigion, a gosodwyd y cymysgedd hwn yn y baddon dŵr ysgwyd ar 37 gradd am 2 awr i dynwared symudiadau peristaltig y system dreulio. Ar ôl 2 h, rhoddwyd y samplau mewn baddon iâ i anactifadu'r adweithiau ensymatig; neilltuwyd 2 ml o'r samplau fel sampl "ôl-gastrig" (P) ar gyfer arbrofion pellach. Roedd pilen dialysis cellwlosig wedi'i llwytho â swm cywir o NaHCO3(1 M, pH7) wedi'i lleoli yn yr hydoddiannau sampl oer; felly, dynwared amsugno gastroberfeddol. Yna, cyfunwyd 4.5 ml o asidau bustl / hydoddiant pancreatin gyda'r hydoddiannau, a deorwyd y gymysgedd am 2 awr arall ar 37 gradd. Yn olaf, cafodd yr hylif y tu mewn i'r bilen dialysis ei gaffael fel y sampl "bio-argaeledd" (IN). Ar ôl i'r driniaeth ddod i ben, cadwyd yr holl samplau ar -20 gradd ar gyfer arbrofion pellach. 4.5.In Vitro Amcangyfrif o'r Proffil Ffenolig
4.5.1.Cyfanswm o Gynnwys Ffenolig Assay
Gwnaed penderfyniad sbectrophotometrig o gyfanswm cynnwys ffenolig y samplau mewn 96-patrymlun plât ffynnon yn ôl y dull a nodwyd yn gynharach gan Barak et al.【32】; ychwanegwyd 75 uL o NagCO3 (20 y cant yn H2O) at 20 μL o atebion sampl a chyfeirio wedi'u paratoi'n ffres. Yna, cyfunwyd 100 μL o adweithydd Folin-Ciocalteu gyda'r cymysgedd. Ar ôl cyfnod deori o 30 munud ar dymheredd ystafell yn y tywyllwch, mesurwyd yr amsugnedd ar 690 nm. Defnyddiwyd asid galig fel hydoddiant cyfeirio mewn crynodiadau gwahanol i sefydlu cromlin graddnodi a mynegwyd cyfanswm y cynnwys ffenolig fel cywerthoedd asid galig (GAE).
4.5.2.Total Flavonoid Content Assay
Rheolwyd penderfyniad sbectrophotometrig o gyfanswm cynnwys flavonoid y samplau mewn templed plât ffynnon 96- yn unol â'r dull a eglurwyd yn flaenorol gan Bardakci et al.[51];150 uL o 75 y cant ethanol,10 uL o alwminiwm clorid , a chyfunwyd 10 uL o 1M sodiwm asetad trihydrate â 50 μL o atebion sampl a chyfeirio, ar wahân. Yna, deorwyd y cymysgeddau hyn ar dymheredd ystafell dywyll am 30 munud. Ar ôl y cyfnod deori, cyfrifwyd amsugnedd ar 405 nm.QuercetinFe'i defnyddiwyd fel datrysiad cyfeirio mewn crynodiadau gwahanol i sefydlu cromlin raddnodi a chynrychiolwyd cyfanswm y cynnwys flavonoid fel cyfwerthoedd quercetin (QE). 4.5.3.Assay Assid Cyfanswm Cynnwys Asid Ffenolig
Mesurwyd cyfanswm cynnwys asid ffenolig y samplau yn sbectroffotometrig yn dilyn y driniaeth a adroddwyd yn flaenorol gan Barak et al. [52]. Yn gyntaf, diddymwyd symiau priodol o sodiwm nitraid a sodiwm molybdate mewn dŵr distyll i gael adweithydd Arnow. Yna, cyfunwyd 1 ml o'r samplau ag 1 mL o adweithydd Arnow, 1 mL o 0.1 M HCl, ac 1 mL o 1M NaOH, ar wahân. Ar ôl hynny, addaswyd cyfaint y gymysgedd i 10 mL gyda dŵr distyll, a darllenwyd yr amsugnedd ar unwaith ar 490 nm. Defnyddiwyd asid caffeig fel hydoddiant cyfeirio mewn crynodiadau gwahanol i gael cromlin graddnodi, a rhoddwyd cyfanswm cynnwys asid ffenolig fel cyfwerth asid caffeic (CAE).
4.5.4.Total Proanthocyanidin Content Assay
Cyflawnwyd penderfyniad sbectrophotometrig o gyfanswm cynnwys proanthocyanidin y samplau mewn 96-templed plât ffynnon trwy ddilyn dull Barak et al. [1] Yn gryno, cymysgwyd 25 uL o'r atebion sampl gyda 150 μL o 4 y cant o fanillin a 75 μL o hydoddiannau HCl (32 y cant), yn y drefn honno. Ar ôl 15 munud o amser deori ar dymheredd ystafell dywyll, addaswyd yr amsugnedd i 492 nm. Defnyddiwyd catechin hydrate fel hydoddiant cyfeirio mewn crynodiadau gwahanol i gael cromlin graddnodi. Defnyddiwyd methanol fel datrysiad rheoli. Nodwyd bod cyfanswm cynnwys proanthocyanidin y samplau yn gyfwerth â catechin (CE).
4.6.Tystiadau Gweithgarwch Sborion Radical Rhad Ac Am Ddim 4.6.1.DPPH Assay Activity Scavening Radical
Canfuwyd gweithgaredd sborionu radical DPPH y samplau mewn 96-templed plât ffynnon yn dilyn y dull a addaswyd gan Celeb et al.[53]. Ar y dechrau, roedd 150 uM o hydoddiant DPPH wedi'i baratoi'n ffres. Yna, cymysgwyd 200 μL o hydoddiant DPPH â 25 μL o atebion sampl. Yna, deorwyd y gymysgedd hon ar dymheredd ystafell dywyll am 50 munud. Cyfrifwyd yr amsugnedd ar 540 nm. Defnyddiwyd hydroxytoluene biwtylaidd (BHT) fel datrysiad cyfeirio mewn crynodiadau gwahanol. Defnyddiwyd methanol fel ateb rheoli. Cyflwynwyd gweithgaredd samplau fel EC50, sy'n cyfateb i'r crynodiad sy'n dangos gweithgaredd 50 y cant.
4.6.2.Assay Gweithgaredd Sborion Radical DMPD
Cyflawnwyd gweithgaredd sborionu radical DMPD plus (N, N-dimethyl-p-phenylenediamine) o'r samplau mewn templed plât ffynnon 96- yn unol â'r dull a ddisgrifiwyd yn gynharach gan Inan et al. [13]. Yn gyntaf, 10{{10}} mM DMPD plws datrysiad, 0.05 M FeCl; Paratowyd datrysiad 6H2O a byffer asetad 0.01 M yn ffres. Yna, 1 ml o hydoddiant DMPD, 100 ml o glustogfa asetad, a 0.2mL o FeCl; Cymysgwyd hydoddiant 6H2O, ac yn ddiweddarach cyfunwyd 15 μL o atebion sampl â 210 μL o'r cymysgedd hwn. Ar ôl y cyfnod deori ar dymheredd ystafell dywyll am 50 munud, mesurwyd yr amsugnedd ar 492 nm. Defnyddiwyd Trolox fel ateb cyfeirio mewn crynodiadau gwahanol i gael cromlin graddnodi. Roedd crynodiadau'r datrysiadau sampl yn 1 mg/mL. Nodwyd gweithgareddau chwilota radical DMPD y samplau fel pethau cyfatebol Trolox(TE). 4.7.Prosesiadau Gweithgarwch Lleihau Metel
4.7.1.Assay Pŵer Lleihau Gwrthocsid Fferrig (FRAP)
Cyflawnwyd y broses o bennu gweithgaredd FRAP y samplau mewn templed 96 plât-ffynnon yn dilyn y weithdrefn a adroddwyd yn gynharach gan Bardakci et al.[54]. Ar ddechrau'r arbrawf, ffurfiwyd adweithydd FRAP trwy gymysgu byffer asetad, ferric-tripyridyltriazine, a FeCl; Atebion 6H2O. Ar ôl hynny, rhoddwyd yr adweithydd FRAP y tu mewn i'r popty 37 gradd am 30munud. Yna, cyfunwyd 10 uL o'r hydoddiannau sampl â 30 uL o ddŵr distyll a 260 μL o adweithydd FRAP, yn y drefn honno. Ar ôl amser deori ar 37 gradd am 30 munud, addaswyd yr amsugnedd i 593 nm. Adeiladwyd cromlin safonol trwy ddefnyddio molarities gwahanol o hydoddiant sylffad fferrus (0.25-2 mM) i werthuso'r canlyniadau. Defnyddiwyd BHT fel ateb cyfeirio mewn crynodiadau gwahanol. Cyflwynwyd gweithgareddau FRAP y samplau fel mM FeSO4 mewn 1 g echdyniad sych.
4.7.2.Assay Lleihau Cynhwysedd Gwrthocsidiol (CUPRAC)
Cafodd gweithgaredd CUPRAC y samplau ei bennu mewn templed plât ffynnon 96- gan ddilyn y dull a addaswyd gan Celeb et al. 【31】; Ychwanegwyd 85 μL o hydoddiannau CuSO4 (10 mM), neocupraine, ac amoniwm asetad a 51 uL o ddŵr distyll at 43 uL o hydoddiannau sampl, ar wahân. Yn dilyn cyfnod deori (20 munud) ar 50 gradd mewn baddon dŵr, mesurwyd yr amsugnedd ar 450 nm. Defnyddiwyd asid asgorbig fel hydoddiant cyfeirio mewn crynodiadau gwahanol i gaffael cromlin graddnodi. Cyflwynwyd gweithgareddau CUPRAC y samplau fel cyfwerth asid ascorbig (AAE). 4.8. Assay Cyfanswm Gweithgarwch Gwrthocsidiol(TOAC) Perfformiwyd penderfyniad cyfanswm gweithgaredd gwrthocsidiol y samplau mewn 96-templed plât ffynnon yn dilyn y weithdrefn gan Celeb et al. [55]. Ar y dechrau, cymysgwyd rhywfaint o sodiwm ffosffad monobasic, amoniwm molybdate tetrahydrate, ac asid sylffwrig i gaffael yr ateb TOAC. Yna, ychwanegwyd 300 μL o ateb TOAC at 30 μL o atebion sampl. Ar ôl y cyfnod deori ar 95 gradd mewn baddon dŵr am 90 munud, penderfynwyd bod yr amsugnedd yn 690 nm. Defnyddiwyd asid asgorbig fel hydoddiant cyfeirio mewn crynodiadau gwahanol i gaffael cromlin graddnodi. Cynrychiolwyd gweithgareddau TOAC y samplau fel cyfwerth asid ascorbig (AAE). 4.9.Amcangyfrif o Fynegai Bio-argaeledd
Cyfrifwyd y mynegai bio-argaeledd (BAvI) yn ôl yr hafaliad damcaniaethol a ddisgrifiwyd gan Inan et al.[13]: BAVI=CIN/CND Disgrifiwyd y "mynegai bio-argaeledd" (BAvI) fel cymhareb nifer y ffenoligau yn y sampl bio-ar gael (IN) i'r un yn y sampl heb ei dreulio (ND). 4.10. Meintioli Flavonoids Marciwr gan HPTLC
Cyflawnwyd y penderfyniad meintiol ar grynodiadau salidroside, hyperoside, a quercitrin ym mhob sampl efelychiad (ND, PG, IN) o'r darnau dyfrllyd o rywogaethau Cistus gan gromatograffeg haen denau perfformiad uchel (HPTLC) (CAMAG, Muttenz, y Swistir) gan ddilyn y dull a ddilyswyd gan Guzelmeric et al.[16]. Paratowyd hyperoside, salidroside, a quercitrin mewn crynodiadau 25,50 a 100 ug / mL, ac addaswyd y crynodiadau o atebion sampl a baratowyd yn ffres i 10mg / mL. Cymhwyswyd yr atebion hyn i blatiau gel silica â chefn gwydr cyfnod arferol (20 cm × 10 cm, Merck, Darmstadt, yr Almaen) gyda chyfeintiau penodol (1-5 hydoddiannau safonol μL a datrysiadau sampl 5 uL) trwy ddefnyddio chwistrelli 100 μL （ Hamilton, Bonaduz, y Swistir） Perfformiwyd y weithdrefn ymgeisio gyda chymhwysydd sampl Linomat 5. Perfformiwyd y broses ddatblygu yn y Siambr Datblygu Awtomataidd (ADC 2) ac asetad ethyl: dichloromethane. asid asetig. asid fformig: dŵr (10:25:10 :10:10:10me) wedi'i ddewis fel cyfnod symudol, yna, deilliwyd y platiau ag Adweithydd Cynnyrch Naturiol (NPR)(1g diphenylboricacid 2-aminoethylesterin 200mL o asetad ethyl) yn y ddyfais trochi (CAMAG).hyperosida dadansoddwyd quercitrin yn sbectroffotometrig ar 260 nm, mesurwyd swm y salidroside ar 330 nm gan sganiwr UV. Pennwyd gwerthoedd Rf y safonau fel hyperoside (≈0.35), quercitrin (≈{9}}.45), tiliroside (≈≈0.65).Darganfuwyd bod y cyfernodau cydberthynas (r2) 9 × × ar gyfer meintioli'r flavonoids marcio.
4.11.Gweithgarwch Ataliol ar Ensymau sy'n Gysylltiedig â Diabetes
4.11.1. -Gweithgaredd Atal Glucosidase
-archwiliwyd gweithgareddau ataliol glwcosidase o'r samplau nad ydynt yn cael eu treulio a'r bioargaeledd a gafwyd o'r echdynion dyfrllyd o rywogaethau Cistus yn dilyn y dull a eglurwyd yn gynharach gan Balan et al. [56]. Yn gyntaf, cymysgwyd symiau cywir o ffosffad monosodiwm a ffosffad deuodiwm â chaffael byffer ffosffad 100mM (pH7). o--Cafodd ensymau glwcosidase ei hydoddi mewn byffer ffosffad i gael hydoddiant a-glucosidase (0.2U/mL）). Yna cyfunwyd 170 uL o byffer ffosffad, 20 μL o'r hydoddiant -glucosidase, a 20 uL o hydoddiannau sampl a'u deor mewn popty 37 gradd am 15 munud. Ar ôl hynny, ychwanegwyd 20 μL o 2.5 mM p-nitrophenyl- -D-glucopyranoside hydoddiant mewn byffer potasiwm ffosffad 100 mM (pH7.0) at y cymysgedd, a chyflawnwyd cyfnod deori arall ar 37 gradd am 15 munud. Yna, cafodd 80 μL o hydoddiant sodiwm carbonad 0.2 M ei atodi i'r cymysgedd i derfynu'r adwaith. Mesurwyd amsugnedd ar 405 nm. Defnyddiwyd hydoddiant quercetin mewn crynodiadau gwahanol fel cyfeiriad. Amcangyfrifwyd y canlyniadau fel canran y gweithgaredd ataliol mewn crynodiadau 1 mg/mL a 0.5 mg/mL o samplau ND ac IN o echdynion dyfrllyd rhywogaethau Cistus. 4.11.2. -Gweithgarwch Atal Amylas Pennwyd gweithgaredd ataliol o-amylase o samplau nad ydynt yn cael eu treulio a bioargaeledd a gafwyd o echdynion dyfrllyd rhywogaeth Cistus trwy ddilyn y weithdrefn y manylwyd arni eisoes gan Balan et al.[56]. Perfformiwyd penderfyniad sbectroffotometrig o weithgareddau ataliol a-amylase yn y samplau trwy ddefnyddio adweithydd DNS (3,{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{}}}}}}}asid dinitrosalicy)) adweithydd). Fel y nodir yn y dull, mae maltos yn cael ei ffurfio o drawsnewid y startsh, ac mae lliw melyn DNS alcalïaidd yn cael ei droi i'r lliw oren-goch oherwydd maltos a gynhyrchir o startsh. Felly, paratowyd hydoddiant DNS 96 mM o'r cymysgedd o hydoddiant tartrad sodiwm potasiwm (wedi'i hydoddi mewn 2 M NaOH) a rhywfaint o DNS (wedi'i hydoddi mewn dŵr distyll). Yna, paratowyd byffer sodiwm ffosffad 20 mM gyda 6.7mM NaCl (cyd-ffactor ensym u-amylase) ar 20 gradd (pH: 6.9). toddwyd yr ensym a-Amylase (1U/mL) a startsh (10 mg/mL) yn y byffer hwn. Ar ôl hynny, cymysgwyd 50 μL o glustogfa sodiwm ffosffad a 10 μL o hydoddiant ensym a-amylase ag 20 μL o'r atebion sampl. Deorwyd y gymysgedd hon ar 37 gradd am 45 munud. Ar ôl y cyfnod deori, ychwanegwyd 20 μL o'r hydoddiant startsh at y cymysgedd. Dechreuwyd cyfnod deori arall ar 37 gradd am 45 munud. Cymhwyswyd yr un weithdrefn i'r samplau heb ychwanegu hydoddiant ensym w-amylase o'r enw "cefndir sampl". Astudiwyd y grŵp rheoli gyda'r un weithdrefn yn absenoldeb hydoddiannau sampl. Mesurwyd amsugnedd ar 540 nm. Defnyddiwyd Acarbose fel ateb cyfeirio mewn crynodiadau gwahanol. Cyflwynwyd canlyniadau fel canran o weithgarwch ataliol mewn crynodiadau 1 mg/mL a 0.5 mg/mL o samplau ND ac IN o echdynion dyfrllyd o rywogaethau Cistus. 4.11.3. OEDRAN Gweithgarwch Ataliol Penderfynwyd ar weithgarwch ataliol AGE o samplau heb eu treulio a bio-ar gael o echdynion dyfrllyd o rywogaethau Cistus gan ddilyn y dull a ddisgrifiwyd gan Starow-icz et al. [57]. Cyn unrhyw broses, roedd crynodiadau 1 mg/mL a 0.5 mg/mL o samplau ND ac IN wedi'u paratoi'n ffres. Yna, ychwanegwyd 1 ml o grynodiad 10 mg/ml o hydoddiant albwmin serwm buchol (BSA) at 1 ml o doddiannau sampl ND ac IN. Paratowyd samplau rheoli heb ychwanegu hydoddiannau sampl ND ac IN, a pharatowyd y samplau gwag heb ychwanegu 0.5 M o glwcos. Yna , yr holl samplau a baratowyd eu deor am 40 h mewn baddon dŵr ysgwyd ar 55 gradd . Ar ôl i'r cyfnod deori ddod i ben, defnyddiwyd darllenydd microplat amlfodd Thermo ScientificTM VarioskanTMLUX yn yr ystod allyriadau 370 nm excitation/440 nm i gyfrifo dwyster fflworoleuedd. Defnyddiwyd Quercetin fel ateb cyfeirio mewn crynodiadau gwahanol.
4.12.Dadansoddiad Ystadegol
Perfformiwyd pob arbrawf yn annibynnol dair gwaith gwahanol. Defnyddiwyd rhaglen feddalwedd GraphPad Prism (fersiwn 6.1) i bennu dosbarthiad parametrig neu heb fod yn barametrig o'r data. Defnyddiwyd adran dadansoddi cymariaethau Lluosog ANOVA Tukey i werthuso profion TPC, TFC, TPAC, TSC, TPACC, FRAP, CUPRAC, TOAC, DPPH, a DMPD. Ar y llaw arall, archwiliwyd canlyniadau arbrofion ataliad o-amylase, -glucosidase, ac AGE gan ddadansoddiad cymariaethau lluosog ANOVA Sidak dwy ffordd. Dangoswyd canlyniadau sylweddol gyda t<0.05. 5.="">
Yn yr astudiaeth bresennol, ymchwiliwyd i'r echdynion dyfrllyd o holl rywogaethau Cistus a gofnodwyd mewn fflora Twrcaidd am eu proffiliau ffenolig a'u potensial gwrthocsidiol a gwrth-diabetig in vitro. Gan mai decoction neu drwyth yw'r ffurf gyffredin mewn meddyginiaethau traddodiadol, mae defnyddio echdynion dyfrllyd ar gyfer asesiad gweithgaredd mewn astudiaethau arbrofol yn arbennig o bwysig. Ar y llaw arall, mae cyfansoddion hydroffilig yn y dyfyniad dyfrllyd yn destun cyfres o drawsnewidiadau metabolaidd yn y system gastroberfeddol ar ôl eu llyncu. Felly, ar gyfer gwerthuso gweithgaredd cywir o fformwleiddiadau traddodiadol, dylid hefyd ymchwilio i weithgareddau'r metabolion bioargaeledd.
Dyma'r astudiaeth gyntaf i archwilio canlyniadau'r dull efelychu treuliad dynol in vitro ar rywogaethau Cistus Twrcaidd. Yn ogystal, astudiwyd potensial ataliad rhywogaethau Cistus Twrcaidd ar AGEs yn yr astudiaeth hon am y tro cyntaf. At hynny, neilltuwyd marciwr i salidroside, hyperoside, a quercitrinflavonoidau, a chafodd newidiadau yn eu crynodiadau eu monitro yn y weithdrefn dreulio in vitro. Er bod gweithdrefnau treulio gastroberfeddol wedi effeithio'n negyddol ar gynnwys ffenolig a gweithgareddau gwrthdiabetig a gwrthocsidiol y darnau, roeddent yn dal i arddangos bioactifedd sylweddol. Yn ôl y canlyniadau, canfuwyd dyfyniad C.saloifolius fel y planhigyn mwyaf grymus o ran cynnwys ffenolig a gweithgareddau gwrthocsidiol a gwrth-diabetig. I gloi, mae gan rannau o'r awyr o rywogaethau Cistus Twrcaidd gynnwys ffenolig cyfoethog a gweithgareddau gwrthocsidiol a gwrth-diabetig posibl. Er bod y dull efelychu treuliad in vitro wedi'i ddefnyddio i werthuso bio-argaeledd, efallai na fyddai'n dynwared yn llawn y llwybrau metabolaidd sy'n digwydd yn yr organeb. Felly, mae angen astudiaethau in vivo a chlinigol pellach i asesu bio-argaeledd y cyfansoddion ffenolig a'u cyfraniad at yr effeithiau ffarmacolegol a adroddwyd yn fanwl.
Daw'r erthygl hon o Molecules 2021, 26, 5322