Effaith Ataliol Ffracsiynau Elaeagnus Umbellata Ar Felanogenesis mewn Celloedd Melanoma B16-F10 wedi'u Hysgogi -MSH

Crynodeb:

Pan fydd croen yn agored i ymbelydredd UV, mae melanocytes yn cynhyrchu melanin. Mae cynhyrchu melanin gormodol yn arwain at bigmentiad croen, sy'n achosi problemau cosmetig ac iechyd amrywiol. Felly, mae angen datblygu therapiwteg naturiol, diogel sy'n atal cynhyrchu melanin. Mae Elaeagnus umbellata (UE) wedi cael ei ddefnyddio'n helaeth fel planhigyn meddyginiaethol gwerin ers tro oherwydd priodweddau ffarmacolegol sy'n cynnwys priodweddau gwrth-wlser, gwrthocsidiol a gwrthlidiol.

Yn yr astudiaeth hon, fe wnaethom ymchwilio i weithgarwch gwrthocsidiol ac effeithiau ataliol melanogenesis ffracsiynau UE mewn celloedd melanoma B16-F10. Dangosodd ffracsiynau'r UE gynnydd dos-ddibynnol mewn gweithgaredd gwrthocsidiol mewn gweithgaredd sborionu radical. Yn ogystal, gwnaethom werthuso effaith ffracsiynau'r UE ar weithgarwch tyrosinase a melanogenes mewn celloedd melanoma B16-F10 a achosir gan hormonau sy'n ysgogi melanocyte. Roedd yr UE yn noncytotoxic ar 12.5–50 µg/mL. Roedd ffracsiynau'r UE i bob pwrpas yn atal gweithgaredd tyrosinase a melanogenesis, yn atal ffosfforyleiddiad CREB ac ERK sy'n ymwneud â'r llwybr melanogenesis, a mynegiant wedi'i reoleiddio'n is o broteinau sy'n gysylltiedig â melanogenesis. Yn ddiddorol, roedd yr effaith gwrth-melanogenesis yn fwyaf effeithiol mewn crynodiad o 50 µg/mL EU, ac roedd effeithiau'r ffracsiynau'n well na rhai'r dyfyniad. Felly, mae ein hastudiaeth yn awgrymu bod gan yr UE y potensial fel triniaeth ddiogel ar gyfer pigmentiad gormodol neu fel cynhwysyn naturiol mewn colur.

Mae cyfradd twf croen dynol a chelloedd newydd yn ein corff yn arafu, mae metaboledd croen yn arafu, ni ellir metaboleiddio celloedd heneiddio mewn pryd ac yn llyfn, ac mae'n anodd i melanin ddiflannu. Ynghyd â cholli ffactorau lleithio naturiol yn raddol ar wyneb y croen, mae'r stratum corneum yn tewhau ac yn cronni, mae'r melanin yn cynyddu, ac mae smotiau tywyll diflas yn ymddangos yn raddol ar y croen. Ni waeth faint o gynhyrchion gofal croen gwynnu sy'n cael eu cymhwyso, mae'n anodd amsugno'r croen. Felly, yn ystod ein hymchwil, canfuom y gall cyfanswm glycosidau Cistanche deserticola, y cynhwysyn swyddogaethol yn Cistanche tubulosa, gael gwared ar radicalau rhydd ocsigen gweithredol amrywiol (O2·-, OH·, H2O2, 1O2), ac amddiffyn rhag difrod DNA a achosir gan Gall radicalau rhydd o OH a polysacaridau Cistanche deserticola ohirio dirywiad ffisiolegol organau a thrawsnewidiad morffolegol celloedd. Gall y cynhwysion uchod i gyd chwarae effaith gwrth-ocsidiol a gwrth-heneiddio. Ar yr un pryd, gall Cistanche deserticola hefyd atal gweithgaredd tyrosinase i gael effaith gwynnu.

Cliciwch cistanche tubulosa echdynnu cynnyrch powdr

Geiriau allweddol:

Elaeagnus umbellata; croen-gwyno; gwrthocsidiol; melanogenesis; -MSH.

1. Rhagymadrodd

Mae lliw croen mewn bodau dynol yn dibynnu ar faint o melanosomau sy'n bresennol yn enetig, a'r graddau y mae'r melanosomau hyn yn cael eu gwasgaru yn y croen ac yn cael eu heffeithio hefyd gan faint o amlygiad golau haul a llygredd amgylcheddol [1]. Mae melanin yn gyfansoddyn pwysau moleciwlaidd uchel a geir mewn anifeiliaid a phlanhigion ac mae'n pigment pwysig sy'n pennu lliw llygaid, croen a gwallt bodau dynol. Mae melanogenesis yn cyfeirio at broses gynhyrchu melanin, un o brif achosion pigmentiad mewn croen dynol. Gall melanin amddiffyn y croen rhag ymbelydredd UV niweidiol, ond gall cynhyrchu melanin gormodol arwain at broblemau esthetig, gan gynnwys melasma a brychni haul, yn ogystal â phroblemau iechyd, gan gynnwys hyperbigmentation ôl-lid [2].

Mae melanin yn chwarae rhan hanfodol wrth amddiffyn y croen rhag ysgogiadau amrywiol, megis UV, rhywogaethau ocsigen adweithiol (ROS), a hormon ysgogol -melanocyte (-MSH) [3]. Pan fydd y croen yn agored i ymbelydredd UV, cynhyrchir ROS, ac mae'r celloedd croen yn cynhyrchu melanin gormodol. Mae'r ROS hwn a gynhyrchir yn dinistrio DNA sengl a dwbl ac yn ymosod ar moleciwlau protein a lipid [4]. Mae melanin ac ensymau gwrthocsidiol, megis peroxidase, glutathione, a catalase, yn niwtraleiddio'r ROS a gynhyrchir i gynnal lefel benodol [5,6]. Fodd bynnag, mae cynhyrchu ROS gormodol na ellir ei reoli yn arwain at amrywiaeth o broblemau, megis canser [7]. Mae melanocytes wedi'u lleoli yn haen waelodol yr epidermis ac yn cael eu modiwleiddio gan tyrosinase. Mae'r celloedd hyn yn cynhyrchu melanin trwy melanogenesis, ac mae ffactorau fel ffactor trawsgrifio sy'n gysylltiedig â microffthalmia (MITF) a phrotein sy'n gysylltiedig â thyrosinase (TRP-1) yn rhan o'r broses hon [8]. Mae Tyrosinase yn ymwneud â'r llwybr y mae L-tyrosine yn dod yn 3,4-dihydroxyphenylalanine (DOPA), sydd wedyn yn cael ei drawsnewid yn dopaquinone y mae melanin yn cael ei syntheseiddio ohono. Felly, mae tyrosinase yn ffactor pwysig sy'n rheoleiddio melanogenesis mewn celloedd croen.

Yn ddiweddar, i ddatrys y problemau esthetig a achosir gan bigmentiad ac anhwylder pigmentaidd a achosir gan ormodedd o melanogenesis, mae llawer o ddiwydiannau meddygol a chosmetig wedi canolbwyntio ar atalyddion gweithgaredd tyrosinase [9]. Defnyddir cemegau amrywiol fel arbutin, asid kojic, hydroquinone, ac asid ascorbig, sy'n atalyddion synthesis melanin, fel asiantau gwynnu croen [10]. Fodd bynnag, nid yw'r sylweddau hyn yn treiddio'r croen yn dda a thros gyfnod estynedig o ddefnydd gallant gael sgîl-effeithiau megis llid y croen, llid, cosi, a phigmentiad [11]. Felly, mae angen datblygu cyfryngau gwynnu effeithiol a all drin ac atal gorbigmentu croen dynol yn ddiogel heb lid.

Mae Elaeagnus umbellata (UE) yn blanhigyn sydd wedi'i ddosbarthu'n eang ledled Asia ac sydd wedi'i ddefnyddio ers amser maith fel planhigyn meddyginiaethol gwerin oherwydd ei effeithiau ffarmacolegol cysylltiedig. Yn draddodiadol, mae blodau a hadau'r UE wedi'u defnyddio i drin clefydau anadlol, gan gynnwys y rhai sy'n effeithio ar y galon a'r ysgyfaint, tra bod y dail wedi'u defnyddio fel tonig ac ar gyfer trin afiechydon berfeddol [12,13]. Yn ogystal, defnyddir UE fel ymlaciwr cyhyrau, analgesig, gwrth-wlser, gwrth-diabetig, ac asiant antipyretig [14]. Mae gan gynhwysion yr UE effeithiau gwrth-ganser [15], gwrthocsidiol, a gwrthlidiol [16], ac mae detholiad o'r UE yn effeithio ar wynnu croen a gwella wrinkle [17]. Fodd bynnag, nid yw astudiaethau ynghylch effaith gwynnu croen gan ganghennau a dail yn ffracsiynau'r UE wedi'u cynnal eto. Felly, pwrpas yr astudiaeth hon oedd arsylwi gweithgaredd gwrthocsidiol in vitro ac ataliad melanogenesis o ffracsiynau UE sy'n deillio o ganghennau a dail ar gelloedd melanoma murine B16-F10 sy'n cynhyrchu melanin ac i gadarnhau potensial cangen a dail-. deillio o'r UE fel asiant croen-gwyno cosmetig.

2. Defnyddiau a Dulliau

2.1. Deunyddiau ac Adweithyddion

2.2. Paratoi Dyfyniad a Ffracsiynau'r UE yn ogystal â Pharatoi Sampl

Darparwyd canghennau a dail (1:1) yr UE gan Sefydliad Jeonbuk ar gyfer Bioddiwydiant Bwyd (Jeonju, Jeonbuk, Korea). Cafodd EU (50 g) ei falu gan ddefnyddio cymysgydd, ac echdynnwyd powdrau UE gyda 70 y cant ethanol am 24 h ar dymheredd ystafell. Cafodd y toddydd ei hidlo'n ddi-haint trwy ridyll safonol (Advantec MFS, Taipei, Taiwan) a'i anweddu dan bwysau llai gan ddefnyddio anweddydd cylchdro (EYELA, N-1110, Tokyo, Japan). Cafodd y dyfyniad ei lyophilized gan ddefnyddio sychwr rhewi (OPERON, FDU-8606, Gimpo, Korea) i gael gwared ar ethanol gweddilliol a chael 2.4 g (cynnyrch, 4.8 y cant) o bowdr echdynnu ethanol (EUEE) UE 70 y cant. Ataliwyd EUEE (2.4 g) mewn dŵr distyll a chafodd ei rannu â ffracsiynau ethyl asetad (EUEA, 0.19 g) neu butanol (EUBu, 0.91 g). Roedd yr holl echdynion a ffracsiynau'n cael eu storio ar 4 ◦C nes eu defnyddio.

2.3. Dadansoddiad Cromatograffaeth Hylif Perfformiad Uchel (HPLC).

Cynhaliwyd dadansoddiadau cromatograffig gan ddefnyddio system Elite Lachrom HPLC-DAD gyda synhwyrydd UV (Hitachi HighTechnologies Co., Tokyo, Japan). Defnyddiwyd y synhwyrydd UV ar 260 nm a cholofn ddadansoddol YMC ODS-AM (5 mM, 4.6 × 250 mM) (Kyoto, Japan) ar gyfer meintioli yn seiliedig ar y dull safonol mewnol. Tymheredd y golofn oedd 35 ◦C, a chyfradd llif y cyfnod symudol oedd 1 mL/munud. Yr eluent oedd graddiant o hydoddydd (A)=0.1 y cant asid asetig mewn dŵr a thoddydd (B)=0.1 y cant asid asetig mewn asetonitrile. Yr amser rhedeg oedd 35 munud, ac roedd y graddiant fel a ganlyn: (A)/(B)=88/12 (0 mun) → (A)/(B)=78/22 (0– 18 mun) → (A)/(B)=72/28 (18–28 mun) → (A)/(B)=62/38 (28–35 mun). Dangosir dadansoddiad HPLC yn Ffigur 1.

2.4. Diwylliant Cell

Prynwyd llinell gell murine melanoma B16-F10 (CRL-6475) o'r American Type Culture Collection (ATCC, VA, USA). Cafodd celloedd eu meithrin mewn DMEM wedi'u hategu gan FBS wedi'i ysgogi gan wres o 10 y cant ac 1 y cant streptomycin (100 µg / mL) / penisilin (100 uned / mL). Deorwyd celloedd B16-F10 mewn 5 y cant o CO2 llaithedig ar 37 ◦C.

2.5. Assay Hyfywedd Celloedd

Gwerthuswyd sytowenwyndra'r samplau gan ddefnyddio'r assay MTT. Cafodd celloedd melanoma B{0}F10 (1 × 104 cell/ffynnon) eu meithrin mewn 96-plât ffynnon a’u deor â chrynodiadau amrywiol o echdyniad a ffracsiynau (12.5, 25, 50, a 100 µg/mL) neu arbutin (100 µg/mL) am 24 h ar 37 ◦C. Ar ôl deori, ychwanegwyd hydoddiant MTT 500 µg/mL at y ffynhonnau, a deorwyd y plât ymhellach am 4 h ar 37 ◦C. Yna, tynnwyd cyfryngau pob ffynnon, ac ychwanegwyd 200 µL dimethyl sulfoxide (DMSO) i hydoddi'r crisialau formazan. Canfuwyd amsugnedd y plât ar 570 nm ar ddarllenydd microplate (Darllenydd Aml-Ddelw Synergy HTX, BioTek, Winooski, VT, UDA).

2.6. Gweithgarwch Sborion Radical DPPH

Cadarnhawyd gweithgaredd sborionu radical DPPH dyfyniad a ffracsiynau'r UE trwy fesur pŵer lleihau radicalau DPPH ym mhob sampl. Ychwanegwyd crynodiadau amrywiol (12.5, 25, a 50 µg/mL) o echdyniad UE a ffracsiynau neu 20 µg/mL o asid asgorbig (rheolaeth gadarnhaol) ar 500 µL at 2 mL o hydoddiant DPPH 0.15 mM. Cafodd yr hydoddiant ei vortecs am 10 s i sicrhau ei fod yn cael ei gymysgu'n drylwyr a'i ddeor am 30 munud ar dymheredd ystafell yn y tywyllwch. Yna mesurwyd amsugnedd y cymysgedd ar 517 nm gan ddefnyddio darllenydd microplate (Biotek, Winooski, VT, UDA).

2.7. Assay Sialens Radical ABTS

Paratowyd hydoddiant sborionu radical ABTS trwy gymysgu 7.4 mM o hydoddiant ABTS a 2.6 mM o bersylffad potasiwm ar gymhareb o 1:1 (pH 7.4) ac adweithio'r hydoddiant ar dymheredd ystafell am 24 h. Yna addaswyd hydoddiant ABTS i amsugnedd o 0.70 ± 0.03 ar 732 nm. Adweithiwyd pob sampl 10 µL â 190 µL o hydoddiant ABTS am 10 munud ar dymheredd ystafell, a mesurwyd amsugnedd ar 732 nm gan ddefnyddio darllenydd microplate (Biotek, Winooski, VT, UDA).

2.8. Gweithgaredd Atal Tyrosinase Madarch

I ddadansoddi gweithgaredd ataliol tyrosinase, sy'n chwarae rhan hanfodol mewn melanogenesis, defnyddiwyd tyrosinase madarch, a swbstrad L-DOPA. Yn gyntaf, ychwanegwyd yn ddilyniannol 150 µL o glustogfa ffosffad 0.1 M (pH 6.8), 20 µL o hydoddiant L-DOPA 5 mM, ac 20 µL o grynodiadau amrywiol echdynnu a ffracsiynau UE, a 100 µL o 250 Ychwanegwyd tyrosinase madarch U/ml i gychwyn yr adwaith. Deorwyd y cymysgeddau ar 37 ◦C am 10 munud a mesurwyd yr amsugnedd ar 475 nm gan ddefnyddio darllenydd microplate (Biotek, Winooski, VT, UDA). Cyfrifwyd y gweithgaredd atal tyrosinase gan ddefnyddio'r fformiwla ganlynol:

2.9. Penderfynu Gweithgaredd Tyrosinase Cellog

B16-Cafodd celloedd melanoma F10 eu hadu ar ddwysedd o 1 × 105 o gelloedd/ffynnon mewn platiau chwe ffynnon yn cynnwys 2 mL o DMEM. Sefydlwyd chwe grŵp: grŵp rheoli, heb ei drin; -MSH grŵp, 100 nM -MSH yn unig; grŵp arbutin, -MSH ac arbutin (10 mM); Grŵp EUEE, -MSH a dyfyniad EUEE (12.5, 25, a 50 µg/mL); Grŵp EUEA, -MSH a ffracsiynau EUEA (12.5, 25, a 50 µg/mL); a ffracsiynau grŵp EUBu, -MSH ac EUBu (12.5, 25, a 50 µg/mL). Deorwyd platiau chwe ffynnon dros nos ar 37 ◦C mewn deorydd CO2 5 y cant. Yna, roedd celloedd yn agored i -MSH (100 nM) am 48 h a'u trin â chrynodiadau amrywiol o EUEE, EUEA, ac EUBu neu arbutin (10 mM) am 24 h. Golchwyd celloedd â halwynog wedi'i glustogi â ffosffad (PBS) deirgwaith a'i lysu. Cafodd y lysate ei allgyrchu ar 16,000× g am 20 munud.

Nesaf, pennwyd cynnwys protein pob lysate gan ddefnyddio Pecyn Assay Protein BCA (Thermo Scientific, Vantaa, Y Ffindir). Yna addaswyd lefelau protein i 20 µg ym mhob sampl. Trosglwyddwyd lysates (100 µL) yn cynnwys 2.5 mM o L-DOPA mewn byffer ffosffad 0.1 M i ffynhonnau mewn 96-plât ffynnon a'u deor am 1 h ar 37 ◦C. Mesurwyd amsugnedd y lysates ar 475 nm gan ddefnyddio darllenydd microplate (Biotek, Winooski, VT, UDA). Cyfrifwyd y gweithgaredd tyrosinase rhynggellog gan ddefnyddio'r fformiwla ganlynol:

Mae ODs yn cynrychioli amsugnedd y sampl ac mae ODb yn cynrychioli amsugnedd y rheolydd. Defnyddiwyd Arbutin fel y safon.

2.10. Mesur Cynnwys Melanin

Er mwyn pennu faint o melanin sydd mewn celloedd B16-F10, cafodd y rhain eu hadu mewn 24-plât ffynnon ar ddwysedd o 2 × 104 o gelloedd/ffynnon a'u deor am 24 h yn DMEM gyda 10 y cant FBS. Cafodd celloedd B{7}}F10 eu trin ymlaen llaw gyda chrynodiadau amrywiol o EUEE, EUEA, ac EUBu (12.5, 25, a 50 µg/mL) ac arbutin rheoli positif (10 mM) am 1 h, yna adweithio gyda 100 nM o - MSH am 72 h ychwanegol. Wedi hynny, cynaeafwyd celloedd ar ôl eu golchi â PBS. Cafodd y belen a gafwyd trwy allgyrchu (12,000 × g, 10 munud) ei rhoi mewn 1N NaOH yn cynnwys 10 y cant DMSO ar 90 ◦C am 30 munud. Mesurwyd cynnwys melanin pob ffynnon ar 405 nm gan ddefnyddio darllenydd microplate (Biotek, Winooski, VT, UDA). Er mwyn pennu faint o melanin, ystyriwyd bod y cyfanswm a gynhyrchwyd yn ystod yr arbrawf yn safonol (100 y cant), a phenderfynwyd cyfradd ataliad pob grŵp trin echdynnu a ffracsiynau yn gymesur â'r safon hon.

2.11. Dadansoddiad Blotiau Gorllewinol

Cafodd celloedd melanoma murine B{{{{0}}F10 (1 × 106 cell/ffynnon) eu meithrin mewn dysglau 6 cm a'u deor dros nos ar 37 ◦C, a chafodd celloedd eu trin ymlaen llaw â -MSH (10 µM) ar gyfer 24 h. Yna, cafodd celloedd eu trin â chrynodiadau amrywiol (12.5, 25, a 50 µg/mL) o echdyniad a ffracsiynau UE neu 100 µg/mL arbutin am 24 h. Cynaeafwyd celloedd gyda PBS ac yna eu centrifugio ar 12,000× g am 15 munud ar 4 ◦C. Ar ôl cael gwared ar y supernatant, celloedd eu lysed gan ddefnyddio iâ-oer Pro-prep protein lysis byffer gan ychwanegu atalyddion proteas a phosphatase 1 y cant a'u cadw ar iâ am 40 munud. Cafodd y proteinau ffracsiynol eu mesur gan ddefnyddio assay protein Bradford. Cafodd symiau cyfartal o broteinau (25 µg) eu llwytho a'u gwahanu gan electrofforesis gel dodecyl sylffad-polyacrylamid 8 y cant neu 10 y cant a'u trosglwyddo i bilen fflworid polyvinylidene (PVDF). Cafodd y pilenni PVDF eu rhwystro â llaeth sgim 5 y cant mewn halwynog wedi'i glustogi Tris (TBS) gyda byffer Tween 20 (TBS-T) o 0.1 y cant am 1 h ar dymheredd ystafell, a'i ddeor â gwrthgyrff cynradd penodol yn erbyn p-CREB, CREB, t. -ERK, ERK, MITF, TRP-1, TRP-2, tyrosinase, a -actin dros nos am 4◦C.

Wedi hynny, rinsiwyd y pilenni â byffer TBS-T dair gwaith am 10 munud ac yn adweithio am 2 awr gyda gwrthgorff eilaidd wedi'i gyfuno â marchruddygl peroxidase ar dymheredd ystafell. Cafodd pilenni eu rinsio â byffer TBS-T bum gwaith a chanfuwyd proteinau gyda hydoddiant cemiluminescence gwell. Cafwyd y delweddau band gan ddefnyddio system ddelweddu Davinch-In vivo a gorllewinol (Davinch-K, Seoul, Korea).

2.12. Dadansoddiad Ystadegol

Cyflwynir yr holl werthoedd fel modd ± SEM (gwall safonol cymedr) o leiaf dri arbrawf annibynnol a defnyddiwyd meddalwedd GraphPad Prism 5.0 (GraphPad, San Diego, CA, UDA) ar gyfer dadansoddiad ystadegol. Defnyddiwyd dadansoddiad un ffordd o amrywiant a ddilynwyd gan ddadansoddiad post hoc Bonferroni i gymharu'r gwahaniaethau ystadegol rhwng grwpiau. Ystyriwyd bod gwerth-p llai na 0.05 (p < 0.05) yn ystadegol arwyddocaol.

3. Canlyniadau

3.1. Dadansoddiad HPLC o'r UE

Roedd y cynnyrch terfynol ( y cant ) o EUEE , EUEA , ac EUBu yn 4.8 y cant , { { }} .18 y cant , a 1.82 y cant , yn y drefn honno yn seiliedig ar y pwysau ffres. Defnyddiwyd HPLC i ddadansoddi cynnwys luteolin, cyfansoddyn dangosydd o echdynnu a ffracsiynau UE. O'i gymharu â brig y gydran safonol, cadarnhawyd uchafbwynt luteolin yn echdyniad a ffracsiynau'r UE. Y crynodiad o luteolin yn EUEE, EUEA, ac EUBu oedd 499.03, 1948.05, a 994.00 mg/mL, yn y drefn honno (Ffigur 1).

3.2. Effaith yr UE ar Weithgaredd Gwrthocsidiol a Gweithgaredd Atal Tyrosinase

Mesurwyd gweithgareddau gwrthocsidiol y crynodiadau amrywiol o EUEE, EUEA, ac EUBu gan ddefnyddio assay DPPH/ABTS. Cynyddodd gweithgareddau sborionu radical DPPH ac ABTS EUEE, EUEA, ac EUBu mewn modd dibynnol ar ddos ​​(Ffigur 2A, B), gydag asid ascorbig fel rheolaeth gadarnhaol. Roedd gweithgareddau sborionu radical DPPH ac ABTS ar 50 ug/mL o echdyniad a ffracsiynau'r UE yn uwch, gan ddangos canlyniadau tebyg i'r rheolaeth gadarnhaol, asid asgorbig. Er mwyn mesur effaith ataliol ensymau melanogenesis cyfryngol yn echdyniad a ffracsiynau'r UE, perfformiwyd assay ataliad tyrosinase madarch (Ffigur 2C) gyda L-DOPA fel swbstrad o dan amodau di-gell. Dangosodd y canlyniadau fod gweithgaredd tyrosinase yn cael ei atal gan y dyfyniad UE a ffracsiynau mewn modd dos-ddibynnol. Yn benodol, dangosodd gweithgaredd ataliol tyrosinase o 50 ug/mL o EUextract a ffracsiynau ganlyniadau tebyg i arbutin,

Felly, mae effaith atalydd tyrosinase yr UE yn gysylltiedig ag ocsidiad L-DOPA i DOPA quinone mewn melanogenesisYn gyffredinol, roedd gan ffracsiynau'r UE fwy o effaith ataliol gwrthocsidiol a thyrosinase na'r dyfyniad. Yn ogystal, dechreuodd ffracsiynau'r UE, yn enwedig EUBu, ddangos effeithiau tebyg i'r grŵp rheoli cadarnhaol ar ddogn o 25 ug/mL.

Ffigur 2. Gweithgareddau gwrthocsidiol a gweithgaredd atal tyrosinase madarch yr UE. Gweithgaredd sborionu radical DPPH (A) ac ABTS (B) o echdyniad a ffracsiynau UE. Defnyddiwyd asid asgorbig (20 µg/mL) fel rheolydd positif. Effaith ataliol tyrosinase gan ddefnyddio L-DOPA o echdynnu a ffracsiynau UE (C). Defnyddiwyd Arbutin (10 mM) fel rheolydd positif. Mae pob graff yn dangos canrannau rheolaeth, a mynegir data fel cymedrau ± SEM (n=3). Gosodwyd arwyddocâd ystadegol ar * p < 0.05, ** p < 0.01, ac *** p < 0.001 o gymharu â'r grŵp asid ascorbig neu arbutin.

3.3. Effaith yr UE ar Hyfywedd Celloedd B16-F10

I asesu sytowenwyndra celloedd yr UE, cafodd celloedd melanoma B16-F10 eu trin â chrynodiadau amrywiol (12.5, 25, 50, a 100 ug/mL) o echdynnu a ffracsiynau UE am 24 h, a dadansoddwyd hyfywedd celloedd gan Assay MTT. Dangosir y canlyniadau fel canran hyfywedd celloedd o'i gymharu â'r rheolaeth. Nid oedd echdyniad a ffracsiynau'r UE yn sytotocsig yn yr ystod crynodiad a brofwyd o 12.5 50 ug/mL i gelloedd B16-F10. Fodd bynnag, cadarnhawyd sytowenwyndra mewn celloedd B16-F10 ar grynodiad o 100 ug/mL o ffracsiynau'r UE (EUEA acEUBu) (Ffigur 3). Felly, cynhaliwyd arbrofion dilynol gan ddefnyddio crynodiadau o 12.5, 25, a 50 ug/mL o echdyniad a ffracsiynau UE.

3.4. Effaith yr UE ar Synthesis Melanin

Er mwyn pennu effaith gwrth-melanogenig yr UE, archwiliwyd effaith ataliol echdyniad yr UE a ffracsiynau ar synthesis melanin mewn celloedd B16-F10. Cafodd y celloedd B16-F10 eu trin â dyfyniad a ffracsiynau'r UE yn 12.5, 25, a 50 µg/mL neu gydag arbutin ar 10 mM am 1 h ac yna cawsant eu hysgogi â -MSH (100 mM) am 72 h. . Cynyddodd y cynnwys melanin 305.44 y cant o'i ysgogi gyda -MSH o'i gymharu â chynnwys y rheolaeth (Ffigur 4A). Fodd bynnag, roedd y grwpiau a gafodd eu trin gan yr UE ar grynodiad o 50 µg/mL wedi lleihau’n sylweddol y cynnwys melanin o gymharu â’r grŵp a ysgogwyd gan -MSH yn unig, ac roedd y canlyniadau’n debyg i rai’r grŵp rheoli. Yn ogystal, o gymharu â rheolaeth arbutin-positif, roedd ffracsiynau'r UE mewn crynodiad o 50 µg/mL yn dangos lefel is o gynhyrchu melanin. Yn gyson â'r canlyniadau hyn, wrth i'r crynodiadau o echdynnu a ffracsiynau o'r UE gynyddu, cynyddodd cyfradd atal synthesis melanin mewn celloedd B16-F10 (Ffigur 4B).

Yn benodol, roedd cyfradd atal synthesis melanin yn ffracsiynau'r UE ar grynodiad o 50 µg/mL yn sylweddol uwch na chyfradd arbutin. Felly, cafodd ffracsiynau’r UE effaith ataliol sylweddol a oedd yn ddibynnol ar ddos ​​ar synthesis melanin mewn celloedd melanoma B16-F10.

3.5. Effaith yr UE ar Synthesis Melanin a Gweithgaredd Cellog Tyrosinase

Gwnaethom gadarnhau effaith echdynnu a ffracsiynau'r UE ar weithgarwch tyrosinase mewngellol sy'n ymwneud â mecanwaith melanogenesis mewn celloedd melanoma B16-F10. Ysgogwyd pob grŵp, ac eithrio'r rheolaeth, ag a-MSH (100 nM) am 48 h ac yna eu trin â chrynodiadau amrywiol o echdynnu a ffracsiynau UE (12.5, 25, a 50 ug / mL) neu arbutin ( 10 mM) am 24 awr. O ganlyniad, roedd echdyniad a ffracsiynau'r UE yn atal gweithgarwch tyrosinase a achosir gan MSH yn sylweddol mewn celloedd B16-F10 mewn modd sy'n dibynnu ar ddos ​​(Ffigur 4C). Cynyddodd gweithgaredd tyrosinase mewngellol 251.00 y cant o'i ysgogi ag MSH o'i gymharu â gweithgaredd y rheolaeth. Fodd bynnag, gostyngodd y grwpiau a gafodd eu trin gan yr UE ar grynodiad o 50 ug/mL weithgaredd tyrosinase yn sylweddol o gymharu â grŵp a ysgogwyd gan a-MShonly.

Felly, roedd gweithgaredd tyrosinase yn cael ei atal mewn modd a oedd yn dibynnu ar ddos ​​gan driniaeth yr UE mewn celloedd B16-F10, ac roedd yr effaith yn arbennig o gryf ar con. crynodiad o 50 ug/mL. Roedd ataliad gweithgaredd tyrosinase gan EUEE ar grynodiad o 50 ug / ml yn is nag un arbutin (85.13 y cant), tra bod ataliad gweithgaredd tyrosinase o ffracsiynau'r UE (EUEA ac EUBu) yn uwch nag arbutin (121.99 a 128.11 y cant). , yn y drefn honno). Yn gyson â'r canlyniadau hyn, wrth i'r crynodiadau o echdyniad a ffracsiynau'r UE gynyddu, cynyddodd cyfradd atal gweithgaredd tyrosinase mewngellol yng nghelloedd B16-F10 (Ffigur 4D).

Ffigur 4. Synthesis melanin a gweithgareddau tyrosinase cellog yr UE. Cynnwys melanin echdyniad UE a ffracsiynau yng nghelloedd melanoma B16-F10 (A). Cyfradd atal synthesis melanin o echdyniad UE a ffracsiynau mewn celloedd melanoma B16-F10 (B). Gweithgaredd tyrosinase mewngellol o echdyniad UE a ffracsiynau mewn celloedd melanoma B16-F10 (C). Cyfradd atal gweithgaredd tyrosinase mewngellol o echdyniad UE a ffracsiynau mewn celloedd melanoma B16-F10 (D). Cyflwynir canlyniadau (A, C) fel canrannau yn seiliedig ar y grŵp -MSH. Cyflwynir canlyniadau (B, D) fel canrannau yn seiliedig ar y grŵp rheoli. Mynegir data fel y modd ± SEM (n=3). Gosodwyd arwyddocâd ystadegol ar *** p < 0.001 o'i gymharu â chelloedd B16-F10 a symbylwyd gan -MSH, a # p < 0.05, ## p < 0.01, a ### p < 0.001 o gymharu â'r grŵp arbutin.

3.6. Effaith yr UE ar Fynegiant Proteinau CREB sy'n Gysylltiedig â Melanogenesis ac ERK

Mae melanogenesis yn amddiffyn croen dynol rhag ysgogiadau allanol amrywiol, ac mae gwahanol fecanweithiau yn rhan o'r broses hon. -MSH, hormon sy'n ymwneud â cham cyntaf melanogenesis, yn ysgogi melanocytes i ffosfforyleiddio CREB ac ERK, gan ysgogi synthesis proteinau signal i lawr sy'n gysylltiedig â melanogenesis [18]. Yn yr astudiaeth hon, gwnaethom ymchwilio i'r proteinau a reoleiddir gan melanogenesis, gan gynnwys CREB ac ERK, i bennu mecanwaith ataliol melanogenesis o synthesis melanin a achosir gan yr UE ar -MSH mewn celloedd melanoma B16-F10. O ganlyniad, gwnaethom gadarnhau bod ffosfforyleiddiad CREB ac ERK wedi cynyddu'n sylweddol pan gafodd celloedd B16-F10 eu hysgogi â -MSH. Fodd bynnag, pan gafodd celloedd eu trin â detholiad a ffracsiynau UE, cafodd ffosfforyleiddiad a achosir gan MSH ei atal mewn modd a oedd yn dibynnu ar ddos. Yn benodol, gellir gweld mai dyfyniad yr UE a ffracsiynau o grynodiad 50 µg/mL yw'r rhai mwyaf effeithiol ymhlith crynodiadau triniaeth amrywiol (Ffigur 5A–D).

3.7. Effaith yr UE ar MITF sy'n Gysylltiedig â Melanogenesis, TRP-1, TRP-2, a Mynegiant Proteinau Tyrosinase

Er mwyn ymchwilio i weld a yw dyfyniad a ffracsiynau'r UE yn effeithio ar fynegiant proteinau sy'n gysylltiedig â melanogenesis a achosir gan -MSH, perfformiwyd blotio gorllewinol i asesu mynegiant proteinau MITF, TRP-1, TRP-2, a thyrosinase. Cynyddwyd lefelau'r holl broteinau cysylltiedig â melanogenesis yn sylweddol gan symbyliad -MSH, ond roedd echdyniad a ffracsiynau'r UE i bob pwrpas yn atal mynegiant MITF, TRP-1, TRP-2, a phroteinau tyrosinase mewn -MSH-ysgogwyd B16-celloedd F10 (Ffigur 6). Yn gyson â'r canlyniadau blaenorol, yn enwedig gyda'r rhan fwyaf o echdynion a ffracsiynau'r UE ar 50 µg/mL, roedd mynegiant y proteinau hyn yn fwy rhwystredig na'r hyn a ganfuwyd yn dilyn triniaeth ag arbutin rheolaeth gadarnhaol. Yn ogystal, mae'r driniaeth â ffracsiynau UE wedi achosi mwy o effaith ar yr un crynodiad o'i gymharu â'r dyfyniad o'r UE.

Ffigur 6. Effaith ataliol yr UE ar fynegiant proteinau sy'n gysylltiedig â melanogenesis MITF, TRP-1, TRP-2, a thyrosinase. Delwedd band blotio gorllewinol cynrychioliadol o MITF, TRP-1, TRP-2, a tyrosinase o EUEE (A), EUEA (B), ac EUBu (C). Gan ddefnyddio rhaglen GelQuantNET, dangosir dwyster cymharol y band blotio gorllewinol fel y graff bar canlynol; MITF/ -actin, TRP-1/ -actin, TRP-2/ -actin, a tyrosinase/ -actin. -defnyddiwyd actin fel rheolaeth fewnol ar blotio gorllewinol. Mynegir data fel y modd ± SEM (n=3). Gosodwyd arwyddocād ystadegol ar * p < 0.05, **p < 0.01, ac *** p < 0.001 o'i gymharu â'r -MSH-symbylu B{ {22}}F10 celloedd.

4. Trafodaeth

Mae melanocytes wedi'u lleoli yn haen waelod y croen, ac mae graddau synthesis melanin mewn melanocytes yn pennu lliw croen dynol [19]. Pigment croen yw melanin sy'n amddiffyn y croen trwy leihau faint o ROS a gynhyrchir gan belydrau uwchfioled niweidiol. Pan fydd y croen yn agored i ymbelydredd UV, mae a-MSH, sy'n ysgogi melanocytes, yn cael ei actifadu, ac mae melanocytes yn cynhyrchu melanin (20]. Fodd bynnag, gall cynhyrchu melanin gormodol achosi pigmentiad ar y croen, gan achosi problemau esthetig.

Mae rhwymo derbynnydd melanocortin -1 melanocyte-benodol (MC1R) a-MSH i melanocyte yn actifadu cyclase adenylate protein signaling ac yn cynyddu lefelau mewngellol cAMP 121]. Wrth i lefel y cAMP mewn melanocytes gynyddu, mae llwybrau signalau CREB ac ERK sy'n hyrwyddo cynhyrchu proteinau sy'n ymwneud â melanocytes yn cael eu gweithredu. 18,22]. Mae'r llwybr signalau CREB ac ERK actifedig hwn yn uwch-reoleiddio mynegiant MITF ac wedi hynny yn hyrwyddo mynegiant TRP-1, TRP-2, a tyrosinase (mae 23MITF yn ffactor trawsgrifio ar gyfer rheoleiddio tyrosinase ac mae'n chwarae rhan ganolog wrth reoleiddio synthesis melanin, gan gynnwys rheoleiddio amlhau, gwahaniaethu a goroesiad melanocytes (24).Mae'r protein hwn nid yn unig yn rheoleiddio melanogenesis trwy reoleiddio is-broteinau, gan gynnwys TRP-1, TRP-2, a tyrosinase, ond mae hefyd yn ymwneud â rheoleiddio dilyniant cylchred celloedd (25]. Gyda'i gilydd, mae rhwymiad a-MSH-MC1R a achosir gan ysgogiad allanol, megis ymbelydredd UV, yn actifadu llwybrau signalau CREB ac ERK yn bennaf mewn melanocytes, a thrwy hynny gynyddu mynegiant MITF, TRP). -1, TRP-2, a thyrosinase proteinau i gymell cynhyrchu melanin.Felly, gall atal y broses hon arwain at atal synthesis melanin mewn melanocytes.

Ar hyn o bryd, mae'r gwahanol gyfryngau gwynnu croen gan gynnwys hydroquinone a hydrocortisone sy'n cael eu defnyddio yn gemegau niweidiol yn bennaf, a gall defnydd hirdymor achosi sgîl-effeithiau, gan gynnwys llid y croen, a chosi [1,26-28]. Felly, mae angen canolbwyntio ar ddatblygu asiantau gwynu croen naturiol diogel ac effeithiol gyda sgîl-effeithiau lleiaf posibl fel yr UE [29].

Yn yr astudiaeth hon, fe wnaethom ymchwilio i sut mae ffracsiynau'r UE yn atal prosesau synthesis melanin ac yn lleihau cynhyrchiant melanin, gan arwain at effaith gwynnu croen mewn celloedd melanoma B16-F10.

Gan fod straen ocsideiddiol a achosir gan ymbelydredd UV yn achosi dyddodiad pigmentau melanin, mae gweithgaredd sborionu radical ac atal gweithgaredd ROS yn effeithiol wrth atal melanogenesis, a gall cynhyrchion naturiol â gweithgaredd gwrthocsidiol o'r fath gael effeithiau gwynnu rhagorol [30,31]. Felly, fe wnaethom ymchwilio yn gyntaf i weithgaredd gwrthocsidiol echdynnu a ffracsiynau UE mewn celloedd melanoma B16/F10 gan ddefnyddio profion DPPH ac ABTS, sy'n ddulliau cyffredin a syml ar gyfer dadansoddi gweithgaredd gwrthocsidiol planhigion in vitro. Mae DPPH yn radical rhydd sefydlog ac fe'i defnyddir i ddadansoddi gweithgaredd sborionu radical cyfansoddion hydroffobig gan ddefnyddio cyfryngau lleihau, megis asid ascorbig a tocopherol. Gall assay ABTS fesur gweithgaredd sborionu radical ar gyfer cyfansoddion hydroffobig a hydroffilig, gwrthocsidyddion torri cadwyn, a gwrthocsidyddion sy'n rhoi hydrogen [24]. Fe wnaethom gadarnhau gweithgareddau sborion radical uchel DPPH ac ABTS o echdynion a ffracsiynau'r UE. Yn benodol, roedd yr effeithiau ar eu cryfaf gyda chrynodiad o 50 µg/mL, ac roedd gan ffracsiynau'r UE weithgaredd gwrthocsidiol uwch o gymharu â'r dyfyniad.

Mae tyrosinase yn ensym mawr sy'n ymwneud â melanogenesis, ac mae llawer o gyfryngau gwynnu croen yn atalyddion tyrosinase yn bennaf. Felly, archwiliwyd effaith ffracsiynau'r UE ar weithgarwch tyrosinase, sy'n hyrwyddo melanogenesis. Fe wnaethom gadarnhau effaith ataliol L-DOPA ar weithgaredd tyrosinase cellog i benderfynu a yw echdynnu a ffracsiynau'r UE yn atal gweithgaredd tyrosinase yn uniongyrchol. O ganlyniad, profodd dyfyniad a ffracsiynau'r UE gynnydd yn yr effaith ataliol tyrosinase mewn modd sy'n dibynnu ar ddos. Yn ogystal, yn gyson â'r canlyniadau uchod, yr UE oedd fwyaf effeithiol ar grynodiad o 50 µg/mL, a chafodd ffracsiynau'r UE fwy o effaith nag un y dyfyniad. Yn benodol, cafodd crynodiad EUBu (50 µg/mL) fwy o effaith nag arbutin, sef rheolaeth gadarnhaol.

Nesaf, buom yn ymchwilio i effaith gwynnu croen echdynnu a ffracsiynau'r UE ar felanogenesis mewn celloedd melanoma B16-F10 a achosir gan -MSH. Fe wnaethom ddefnyddio'r assay MTT yn gyntaf i sefydlu ystod crynodiad lle nad oedd echdyniad a ffracsiynau'r UE yn sytotocsig i gelloedd B16-F10. Cadarnhaodd ein canlyniadau nad oedd unrhyw sytowenwyndra yn yr ystod crynodiad o 12.5 i 50 µg/mL.

Ar ôl ysgogi celloedd B16-F10 gyda -MSH i gymell synthesis melanin, nodwyd effaith gwynnu croen echdynnu a ffracsiynau'r UE ar gynnwys melanin a gweithgaredd tyrosinase mewngellol. Dangosodd patrymau echdynnu a ffracsiynau'r UE ar gynnwys melanin a gweithgaredd tyrosinase mewngellol ganlyniadau tebyg. Dangosodd triniaeth gyda holl echdynion a ffracsiynau'r UE fod cynnwys melanin a gweithgaredd tyrosinase mewngellol yn cael eu hatal yn ddibynnol ar ddos. Yn benodol, mewn crynodiad o 50 µg/mL o ffracsiynau'r UE, sylwyd bod mwy na 50 y cant o golli cynnwys melanin a gweithgaredd tyrosinase mewngellol o'i gymharu â'r grŵp a ysgogwyd -MSH yn unig (Ffigur 4A, C).

Mae llwybrau signalau CREB ac ERK yn llwybrau signalau mawr sy'n cael eu hysgogi gan symbyliad -MSH mewn melanogenesis. Felly, mae CREB ac ERK, sy'n ymwneud â gwahanol fecanweithiau, yn chwarae rhan allweddol yn y broses synthesis melanin. Cynyddodd ysgogiad -MSH mewn celloedd melanoma B16-F10 fynegiant MITF a'r teulu genynnau tyrosinase cysylltiedig â melanogenesis (TRP-1, TRP-2, a tyrosinase) trwy actifadu CREB ac ERK. Yn yr astudiaeth hon, rydym yn darparu tystiolaeth bod echdyniad a ffracsiynau'r UE yn atal synthesis melanin yn ogystal â'r llwybrau signalau i fyny'r afon dan sylw, CREB ac ERK.

Pan gynyddwyd lefelau TRP-1 a TRP-2 gan fynegiant uwch-reoledig o MITF, hyrwyddwyd mynegiant tyrosinase a chynhyrchodd yr ensymau sy'n gysylltiedig â melanogenesis melanin [18,32]. Gwelwyd mynegiant proteinau wedi'u cyfryngu gan melanogenesis gan ddefnyddio blotio gorllewinol i bennu effaith gwrth-melanogenig echdynnu a ffracsiynau'r UE mewn celloedd melanoma B16-F10. Cadarnhaodd ein canlyniadau fod mynegiant proteinau MITF, TRP-1, TRP-2, a thyrosinase wedi cynyddu'n sylweddol yn y grŵp a symbylwyd gan -MSH.

Fodd bynnag, roedd triniaeth gyda detholiad UE a ffracsiynau yn is-reoleiddio mynegiant o'r proteinau hyn sy'n gysylltiedig â melanogenesis mewn modd sy'n dibynnu ar ddos. Yn benodol, gwelwyd gostyngiad sylweddol mewn mynegiant mewn crynodiad o 50 µg/mL o ffracsiynau UE. Mae ein canlyniadau'n dangos bod 50 µg/mL o ffracsiynau'r UE wedi atal mynegiant MITF, ffactor trawsgrifio pwysig, gan atal mynegiant tyrosinase yn sylweddol, a thrwy hynny atal cynhyrchu melanin.

Yn seiliedig ar y canlyniadau hyn, canfuom fod 50 µg/mL o ffracsiynau'r UE yn atal cynhyrchu melanin wedi'i ysgogi gan -MSH mewn celloedd melanoma B16-F10 trwy is-reoleiddio'r signalau sy'n gysylltiedig â melanogenesis yn seiliedig ar yr effaith gwrthocsidiol ardderchog. Felly, mae ein canlyniadau'n awgrymu y gallai ffracsiwn yr UE fod yn ymgeisydd posibl ar gyfer triniaeth gwynnu sy'n rheoli melanogenesis yn effeithiol.5. Casgliadau

Yn yr astudiaeth hon, gwnaethom werthuso'r effeithiau gwrthocsidiol a gwrth-melanogenig ar felanogenesis a achosir gan MSH mewn celloedd melanoma B16- F10 i gadarnhau swyddogaeth ffracsiynau'r UE fel cyfryngau gwynnu croen. I gloi, canfuom fod ffracsiynau'r UE yn cael effeithiau gwrthocsidiol cryf ac yn atal proteinau sy'n gysylltiedig â melanogenesis, megis TRP-1, TRP-2, a tyrosinase, trwy reoleiddio MITF ac felly maent yn atalyddion naturiol gwerthfawr o melanogenesis.

Yn nodedig, roedd angen crynodiad (50 µg/mL) o echdyniad a ffracsiynau UE i atal synthesis melanin mewn celloedd B16F10 a symbylwyd gan -MSH. Yn ogystal, cadarnhawyd bod ffracsiynau'r UE yn cael effeithiau gwrthocsidiol ac ataliol uwch ar gynhyrchu melanin. O ganlyniad, gallai'r UE fod yn ddefnyddiol ar gyfer asiantau therapiwtig naturiol ar gyfer trin clefydau croen ac fel cyfryngau croen-gwyno yn y diwydiant colur.

Cyfraniadau Awdur:

Cysyniadoli, J.-HL, a D.-KK; Curadu data, BL; Dadansoddiad ffurfiol, J.-HL; Caffael cyllid, Y.-ML; Ymchwiliad, J.-HL, ac Y.-DJ; Methodoleg, BL, H.-WS, a B.-JS; Gweinyddu prosiect, Y.-ML, a D.-KK; Meddalwedd, D.-KK; Goruchwyliaeth, Y.-ML, a D.-KK; Delweddu, J.-HL; Ysgrifennu — drafft gwreiddiol, J.-HL; Ysgrifennu — adolygu a golygu, J.-HL, ac Y.-DJ Mae pob awdur wedi darllen a chytuno i fersiwn cyhoeddedig y llawysgrif.

Ariannu:

Cefnogwyd yr ymchwil hwn gan y Weinyddiaeth Masnach, Diwydiant ac Ynni (MOTIE), Sefydliad Hyrwyddo Technoleg Corea (KIAT) trwy'r Rhaglen Anogaeth ar gyfer Rhanbarth Diwydiannau Cydweithrediad Economaidd (P0004749).

Gwrthdaro Buddiannau:

Mae'r awduron yn datgan nad oes ganddynt unrhyw fuddiannau cystadleuol.

Argaeledd Sampl:

Nid yw samplau o'r cyfansoddion ar gael gan yr awduron.

Byrfoddau

-MSH -melanocyte-ysgogol hormon

Elfen ymateb cAMP CREB protein rhwymo

DOPA 3,4-dihydroxyphenylalanine

EU Elaeagnus umbellata

EUEE EU 70 y cant ethanol dyfyniad

Ffracsiwn asetad ethyl EUEA UE

EUBu EU ffracsiwn butanol

Derbynnydd MC1R melanocyte-benodol melanocortin-1

MITF Ffactor trawsgrifio sy'n gysylltiedig â microffthalmia

ROS Rhywogaethau ocsigen adweithiol

TRP protein sy'n gysylltiedig â Tyrosinase

Cyfeiriadau

1. Desmedt, B. ; Courselle, P.; De Beer, JO; Rogerers, V. ; Grosber, M.; Deconinck, E.; De Paepe, K. Trosolwg o asiantau gwynnu croen gyda chipolwg ar y farchnad cosmetig anghyfreithlon yn Ewrop. J. Eur. Acad. Dermatol. Venereol. 2016, 30, 943–950. [CrossRef] [PubMed]

2. Costin, GE; Clyw, VJ Pigmentiad croen dynol: Mae melanocytes yn modiwleiddio lliw croen mewn ymateb i straen. Faseb J. 2007, 21, 976–994. [CrossRef]

3. Lin, YS; Wu, toiled; Lin, SY; Hou, WC Mae Glycine hydroxamate yn atal gweithgaredd tyrosinase a chynnwys melanin trwy is-reoleiddio llwybrau signalau cAMP / PKA. Asidau Amino 2015, 47, 617–625. [CrossRef]

4. Fernandez-Garcia, E. Diogelu croen yn erbyn golau UV gan gwrthocsidyddion dietegol. Bwyd. Funct. 2014, 5, 1994–2003. [CrossRef]

5. Kowalska, J.; Banach, K. ; Rok, J.; Beberok, A.; Rzepka, Z.; Wrze’sniok, D. Sail Foleciwlaidd a Biocemegol Ffotowenwyndra a Achosir gan Fflworoquinolones—Astudiaeth o System Wrthocsidiol mewn Melanosytau Dynol sy'n Agored i Ymbelydredd UV-A. Int. J. Mol. Sci. 2020, 21, 9714. [CrossRef] [PubMed]

6. MatÉs, JM; Pérez-Gómez, C.; Castro, IND Ensymau gwrthocsidiol a chlefydau dynol. Clin. Biocemeg. 1999, 32, 595–603. [CrossRef]

7. Bickers, DR; Athar, M. Straen Oxidative yn Pathogenesis Clefyd y Croen. J. Ymchwilio. Dermatol. 2006, 126, 2565–2575. [CrossRef]

8. Kim, YJ; Uyama, H. Atalyddion Tyrosinase o ffynonellau naturiol a synthetig: Strwythur, mecanwaith atal a phersbectif ar gyfer y dyfodol. Cell. Mol. Gwyddor Bywyd. 2005, 62, 1707–1723. [CrossRef]

9. Pillaiyar, T. ; Manickam, M.; Namasivayam, V. Asiantau gwynnu croen: Persbectif cemeg feddyginiaethol o atalyddion tyrosinase. J. Ensym Inhib. Med. Cemeg. 2017, 32, 403–425. [CrossRef]

10. Smit, N. ; Vilanova, J.; Pavel, S. Yr helfa am gyfryngau naturiol gwynnu croen. Int. J. Mol. Sci. 2009, 10, 5326–5349. [CrossRef]

11. Draelos, ZD Paratoadau ysgafnhau'r croen a'r ddadl hydroquinone. Dermatol. Ther. 2007, 20, 308–313. [CrossRef]

12. Anna, MI; Chiara, G. ; Marinella, DL; Deborah, P.; Fabiano, C.; Nunziatina, DT; Claudia, M.A.; Maria, LT; Alessandra, B. Mae gweithgaredd gwrthocsidiol cyfansoddion wedi'u hynysu o Elaeagnus umbellata yn hyrwyddo lles ffibroblast gingival dynol. J. Nat. Prod. 2020, 83, 626–637.

13. Sabir, SM; Dilnawaz, A.S.; Imtiaz, A. ; Hussain, M.A.; Kaleem, MT Gweithgaredd gwrthfacterol Elaeagnus umbellata (Thunb.) planhigyn meddyginiaethol o Bacistan. Saudi. Med. J. 2007, 28, 259–263.

14. Nazir, N. ; Zahoor, M.; Nisar, M.; Khan, I. ; Karim, N.; Abdel-Halim, H.; Ali, A. Dadansoddiad ffytocemegol a photensial gwrthdiabetig Elaeagnus umbellata (Thunb.) mewn llygod mawr diabetig a achosir gan streptozotocin: Ymagwedd ffarmacolegol a chyfrifiannol. Ategiad BMC. Altern. Med. 2018, 18, 332. [CrossRef]

15. Wang, SY; Bowman, L.; Ding, M. Amrywiadau yn y Gallu Sborion Radical Rhad ac Am Ddim a Gweithgarwch Gwrth-ymledol Ymhlith y Gwahanol Genoteipiau o Olewydd yr Hydref (Elaeagnus umbellate). Planta. Med. 2007, 73, 468–477. [CrossRef] [PubMed]

16. Nazir, N. ; Zahoor, M.; Nisar, M.; Karim, N.; Latif, A. ; Ahmad, S.; Uddin, Z. Gwerthusiad o effeithiau niwro-amddiffynnol ac anamnestig Elaeagnus umbellate Thunb. Ar nam cof a achosir gan scopolamine mewn llygod. Ategiad BMC. Altern. Med. 2020, 20, 143.

17. Parc, SH; Jhee, KH; Yang, SA Effeithiau amddiffynnol echdyniad ethanol o ddail Elaeagnus umbellata ar gynhyrchu melanin a achosir gan -MSH mewn Celloedd B16-F0 a difrod a achosir gan UVB mewn Celloedd CCD-986sk. J. Bywyd Sci. 2019, 29, 555–563.

18. Qian, W. ; Liu, W. ; Zhu, D.; Cao, Y.; Tang, A. ; Gong, G. ; Su, H. Cyfansoddion gwynnu croen naturiol ar gyfer trin melanogenesis (Adolygiad). Exp. Ther. Med. 2020, 20, 173–185. [CrossRef]

19. Gillbro, JM; Olsson, MJ Melanogenesis a mecanweithiau cyfryngau ysgafnhau'r croen - dulliau presennol a newydd. Int. J. Cosmet. Sci. 2011, 33, 210–221. [CrossRef]

20. Saba, E. ; Kim, SH; Lee, YY; Parc, CK; O, JW; Kim, TH; Kim, HK; Roh, SS; Rhee, MH Mae dyfyniad Ginseng Coch Corea yn lleddfu melanogenesis mewn bodau dynol ac yn achosi effeithiau gwrth-ffotograffu mewn llygod di-flew uwchfioled Beirbelydredig. J. Ginseng. Res. 2020, 44, 496–505. [CrossRef] [PubMed]

21. Bertolotto, C. ; Abbe, P.; Hemesath, TJ; Bille, K. ; Fisher, DE; Ortonne, YH; Ballotti, R. Cynnyrch genynnau microffthalmia fel trawsddygiadur signal mewn gwahaniaethu melanocytes a achosir gan cAMP. J. Cell. Biol. 1998, 142, 827–835. [CrossRef]

22. Lee, HJ; Lee, WJ; Chang, SE; Mae Lee, GY Hesperidin, gwrthocsidydd poblogaidd yn atal melanogenesis trwy ddiraddiad MITF cyfryngol erk1/2. Int. J. Mol. Sci. 2015, 16, 18384–18395. [CrossRef]

23. Pris, ER; Horstmann, MA; Wells, AG; Weilbaecher, KN; Takemoto, CM; Landis, MW; Fisher, DE Mae signalau hormonau ysgogol alffa-Melanocyte yn rheoleiddio mynegiant microffthalmia, genyn sy'n ddiffygiol yn syndrom Waardenburg. J. Biol. Cemeg. 1998, 273, 33042–33047. [CrossRef]

24. Vance, KW; Goding, CR Y rhwydwaith trawsgrifio sy'n rheoleiddio datblygiad melanocyte a melanoma. Pigment. Cell. Res. 2004, 17, 318–325. [CrossRef]

25. Bondurand, N.; Pingault, V. ; Goerich, DE; Lemort, N.; Hosan, E. ; Le Caignec, C.; Wegner, M.; Goossens, M. Rhyngweithio ymhlith SOX10, PAX3 a MITF, newidiwyd tri genyn yn syndrom Waardenburg. Hum. Mol. Genet. 2000, 9, 1907–1917. [CrossRef]

26. McGregor, D. Hydroquinone: Gwerthusiad o'r Risgiau Dynol o'i Nodweddion Carsinogenig a Mutagenig. Crit. Parch. Toxicol. 2007, 37, 887–914. [CrossRef]

27. Kolbe, L.; Kligman, AC; Schreiner, V. ; Stoudemayer, T. Atroffi a achosir gan corticosteroid, a nam rhwystr wedi'i fesur gan ddulliau anfewnwthiol mewn croen dynol. Croen. Res. Technol. 2001, 7, 73–77. [CrossRef] [PubMed]

28. Huang, HC; Chang, SJ; Wu, CY; Ke, HJ; Chang, TM [6] -Mae Shogaol yn atal -melanogenesis a achosir gan MSH trwy gyflymu diraddiad MITF a ysgogwyd gan ERK a PI3K / Akt. Biomed. Res. Int. 2014, 2014, 842569. [CrossRef]

29. Ozen, T. ; Yenigun, S.; Altun, M.; Demirtas, I. Cyfansoddion Ffytocemegol, Ches a Gwaharddiadau Wrease, Priodweddau Gwrthymledol a Gwrthocsidiol Elaeagnus umbellata Thunb. Crib. Cemeg. Uchel. Trwybwn. Sgrin. 2017, 20, 559–578. [CrossRef]

30. Floegel, A. ; Kim, DO; Chung, SJ; Koo, OS; Chun, Iawn Cymhariaeth o brofion ABTS/DPPH i fesur gallu gwrthocsidiol mewn bwydydd UDA poblogaidd sy'n llawn gwrthocsidyddion. J. Cyfansoddion Bwyd. Rhefrol. 2011, 24, 1043–1048. [CrossRef]

31. Hseu, YC; Chen, XZ; Gowrisankar, YV; Yen, AD; Chuang, JY; Yang, HL Effeithiau Ectoine sy'n Gwyno'r Croen trwy Atal Melanogenesis wedi'i Ysgogi gan -MSH ac Ysgogi Llwybrau Nrf2 Gwrthocsidiol mewn Ceratinocytes Arbelydredig UVA. Gwrthocsidyddion 2020, 9, 63. [CrossRef] [PubMed]

32. Jang, EJ; Shin, Y. ; Parc, HJ; Kim, D.; Jung, C. ; Hong, JY; Kim, S.; Lee, SK Gweithgaredd gwrth-melanogenig ffytosffingosine trwy fodiwleiddio'r llwybr signalau ffactor trawsgrifio sy'n gysylltiedig â microffthalmia. J. Dermatol. Sci. 2017, 87, 19–28. [CrossRef] [PubMed]

Ji-Hyun Lee 1,†, Bori Lee 2,†, Yong-Deok Jeon 3 , Hyun-Woo Song 2 , Young-Mi Lee 2 , Bong-Joon Song 4 a Dae-Ki Kim 1,*

1 Department of Immunology and Institute of Medical Science, Jeonbuk National University Medical School, 20, Geonji-ro, Deokjin-gu, Jeonju-si 54907, Jeollabuk-do, Korea; jihyunsh1211@naver.com

2 Adran Fferylliaeth Oriental, Coleg Fferylliaeth a Sefydliad Ymchwil Meddyginiaethau Wonkwang-Dwyreiniol, Prifysgol Wonkwang, Iksan 54538, Jeonbuk, Korea; leebori1004@naver.com (BL); cristblack@naver.com (H.-WS); ymlee@wku.ac.kr (Y.-ML)

3 Adran Fferylliaeth Corea, Prifysgol Woosuk, 443 Samnye-ro, Samnye-up, Wanju-Gun 55338, Jeollabuk-do, Korea; ydjeon1211jh@woosuk.ac.kr

4 Department of Food Science and Biotechnology, Wonkwang University, Iksan 54538, Jeonbuk, Korea; twinf1@hanmail.net

Gohebiaeth: daekim@jbnu.ac.kr; Ffôn.: ynghyd â 82-63-2703080

Cyfrannodd yr awduron hyn yn gyfartal at y gwaith hwn.

For more information:1950477648nn@gmail.com