Mae Rhyngweithiadau Rhwng Gwrthocsidyddion Polyphenolig Quercetin A Naringenin yn Pennu'r Ymddygiad Cemegol a Biolegol Nodedig sy'n Gysylltiedig â Redox o'u Cymysgeddau Rhan 2
Mar 14, 2022
Cysylltwchoscar.xiao@wecistanche.comam fwy o wybodaeth
Roedd Q mewn crynodiad o 1 μM hefyd yn tueddu i leihau mynegiant ALOX12 a MT3 (0.05<><0.09) as="" well="" as="" sod2="" and=""><><0.09).the latter="" gene="" codes="" for="" a="" protein="" that="" belongs="" to="" the="" family="" of="" thioredoxins="" and="" acts="" as="" an="" endogenous="" antioxidant="" facilitating="" the="" reduction="" of="" other="" proteins8.in="" contrast,="" to="" n-,o="" at="" 1="" um="" up-regulated="" gtf2i=""><0.05).the other="" genes="" whose="" expression="" was="" significantly="" elevated="" by="" q="" at="" l="" μm="" were="" gsr,="" hspa1a,="" ptgsi,="" and="" txnrd1;="" all="" play="" key="" roles="" in="" building="" cellular="" defenses="" against="" oxidants.="" up-regulation="" of="" gsr="" is="" crucial="" for="" maintaining="" redox="">cartrefostasismewn celloedd oherwydd bod y protein wedi'i amgodio yn cynnal lefelau uchel o lai o glutathione yn y cytosol39. Yn ei dro, mae angen gwarchodwr HSPAlA i gywiro unrhyw gamblygu sy'n digwydd, hefyd y rhai sy'n deillio o ddod i gysylltiad âgwrthocsidyddion. Gall yr olaf symud y cydbwysedd rhydocs tuag at gyflwr llai, gan arwain at ostyngiad mwy tebygol mewn pontydd disulfide isylffhydryl
grwpiau a thrwy hynny newid y strwythur protein ac felly swyddogaeth0. Mae genyn PTGS1 yn amgodio protein sy'n filfeddyg i aelod arall o'r teulu ensymau gwrthocsidiol, sef prostaglandin synthase-241, Soniodd y pedwerydd genyn-TXNRD{{4} }} codau ar gyfer thioredoxin reductase sy'n cadw thioredoxin (TXN) yn y cyflwr gostyngedig2.
Yn yr un modd ag 1 μM, roedd Q ar grynodiad uwch (10 μM) hefyd yn lleihau mynegiant TXN (p<0.05） and="" sod2=""><><0.09). furthermore,="" a="" drop="" in="" expression="" was="" observed="" for="" sod1=""><><0.09). the="" investigated="" flavonol="" at="" 10μm="" influenced="" the="" expression="" of="" also="" 4="" genes="" up-regulated="" by="" its="" lower="" concentration∶="" gsr,="" hspa1a,="" ptgs1,="" and="" txnrd2=""><0.05). the="" additional="" up-regulated="" genes="" by="" the="" higher="" q="" concentration="" included="" gstz1="" and="" stk25=""><0.05) as="" well="" as="" gpx4="" and="" sirt2=""><><0.09). the="" protein="" encoded="" by="" gstz1="" is="" a="" member="" of="" the="" glutathione="" s-transferase="" family="" that="" are="" key="" enzymes="" implicated="" in="" the="" detoxification="" of="" electrophilic="" molecules="" by="" conjugation="" with="" gsh4,="" while="" stk25="" codes="" for="" serine/threonine="" kinase="" 25,="" a="" protein="" activated="" by="" oxidative="" stress="" that="" induces="" apoptotic="" cell="" death.="" in="" turn,="" gpx4="" codes="" for="" glutathione="" peroxidase="" 4,="" which="" supports="" the="" antioxidant="" barrier="" of="" the="" cell="" by="" catalyzing="" the="" reduction="" of="" peroxides="" by="" glutathione="" the="" up-regulation="" of="" sirt2,="" encoding="" nad-dependent="" protein="">deacetylas, sy'n dadaseylu lysinau mewnol sy'n bresennol mewn, ee histones neu ffactorau trawsgrifio, yn chwarae rhan yn y gwaith o fodiwleiddio prosesau biolegol allweddol, megis rheoli cylchred celloedd, gwahaniaethu celloedd neu gyfanrwydd genomig,46.
Gall cistanche wella'r imiwnedd
Gostyngodd y cymysgedd o aglyconau ar l μM fynegiant APOE, CCL5, MT3, ac MSRA i'r graddau eu bod yn cyrraedd arwyddocâd ystadegol (t<0.05). the="" apolipoprotein="" encoded="" by="" apoe="" is="" a="" core="" component="" of="" plasma="" lipoproteins="" and="" is="" involved="" in="" their="" production,="" conversion,="" and="" clearance47.="" the="" protein="" encoded="" by="" msra="" carries="" out="" the="">ensymatiglleihau methionin sulfoxide i fethionin, felly mae'r protein hwn yn gweithio i atgyweirio proteinau sydd wedi'u niweidio'n ocsidol i adfer gweithgaredd biolegol8. Roedd y cymysgedd QN ar 10 μM, yn debyg i ddos is, yn lleihau mynegiant APOE, MT3, ac MSRA(p<0.05). however="" at="" a="" higher="" concentration.="" the="" set="" of="" down-regulated="" genes="" was="" extended="" to="" incorporate="" cygb="" and=""><0.05). the="" latter="" gene="" sepp1="" encodes="" selenoprotein="" p="" the="" extracellular="">glycoproteinsydd â rôl gwrthocsidiol ac mae'n ymddangos ei fod yn gysylltiedig â chelloedd endothelaidd49. Roedd y cymysgedd QN yn unig yn cryfhau mynegiant y genyn PRDX5 sy'n codio ar gyfer aelod o'r teulu peroxiredoxin o ensymau gwrthocsidiol, a'i rôl yw lleihau hydrogen perocsid ac alcylhydroperocsidau50.
Trafodaeth
Nid yw sail wyddonol arsylwadau epidemiolegol sy'n nodi bod ffrwythau a llysiau cyfan yn fwy effeithlon wrth atal clefydau cronig nad ydynt yn heintus na chyfansoddion bioactif sydd wedi'u hynysu oddi wrthynt yn cael ei ddeall yn wael. Mae'r cysyniad synergedd bwyd, sy'n rhagdybio dylanwad ychwanegyn neu hyd yn oed synergaidd gwahanol gynhwysion bwyd ar iechyd pobl, wedi'i gynnig fel esboniad posibl. Fodd bynnag, tanseiliwyd rhesymu o'r fath i raddau gan ein hymchwil blaenorol lle gwnaethom gymharu bioactifedd llysiau â phigmentau gwahanol (brasica) yn ogystal â ffrwythau aeron, gwyn yn erbyn anthocyaninau sy'n cynnwys, ac ni chanfuwyd unrhyw batrwm gweithgaredd y gellid ei briodoli i fathau lliw, gyda ac eithrio gweithgaredd gwrthocsidiol uwch mewn profion cemegol51. Ni chafodd yr effeithiau biolegol ychwaith eu paru â rhai cyanidin ynysig-3-O-glucoside wedi'u harchwilio yn y crynodiad sy'n digwydd mewn deunydd planhigion a astudiwyd12. Ni ddangosodd ymchwiliadau mecanistig pellach ar ailgyfansoddi coco unrhyw effeithiau biolegol ychwanegyn/synergaidd cymysgeddau o gydrannau fel y rhagfynegwyd gan y cysyniad synergedd bwyd, ond yn hytrach bioactifedd wedi'i newid yn llwyr3. Roedd yn ymddangos bod y cymysgeddau dilynol o polyffenolau coco yn ymddwyn fel sylweddau newydd. Tybiwyd gennym y gallai'r rhyngweithiadau rhwng cydrannau unigol yn y cymysgedd greu endid newydd sy'n arddangos priodweddau ffisiocemegol wedi'u haddasu gan arwain at weithgareddau biolegol newydd. Yn wir, dangoswyd bod yr amrywiaeth o ryngweithiadau posibl rhwng polyffenolau (hydrogen, n, hydroffobig, chelating, cofalent, ac electrostatig), a ddarganfuwyd yn ystod ymchwiliadau i'w cymhwyso fel sefydlogwyr nanoronynnau hunan-gynnull, yn cynhyrchu ystod o strwythurau sy'n amrywio o ran ymarferoldeb. Sylwyd hefyd bod y ffytogemegau hyn fel arfer yn rhoi mwy nag un math o rymoedd deniadol sefydlogi. Yn yr ymchwil gyfredol, fe wnaethom ymchwilio i sut roedd cydadwaith cystadlu'n aml am ryngweithiadau mewn cymysgedd o ddau wrthocsidydd polyphenolig yn unig yn effeithio ar ei weithgareddau cysylltiedig â rhydocs o'i gymharu â chydrannau unigol.
Roedd y gyfres gyntaf o arbrofion yn canolbwyntio ar benderfyniadau cemegol ac electrocemegol o baramedrau sy'n nodweddu ocsidiad flavonoidau cymysg unigol a 1:1 (cynrychiolwyr grŵp flavonol a flavanone), ar wahân mewn ffurf aglycone (Q N-) a glycoside (R, N plws). . Rhoddir y cydberthynas rhwng canlyniadau'r mesuriadau hyn yn Ffig, 8. Dangosodd yr asesiadau cychwynnol a gynhaliwyd gan y swp-brawf DPPH mwyaf poblogaidd, er bod y ddau flavanones (N-, N plus) yn ymddangos yn wrthocsidyddion gwan iawn, eu bod yn cynyddu gweithgaredd gwrthocsidiol cymysgeddau, QN ac RN plus , mewn modd synergaidd (Ffig. 2A). Darparodd dadansoddiad DPV esboniad dyfnach o'r effaith hon a thynnodd sylw at effaith bendant cineteg yr adwaith. Mae'n troi allan bod y flavanones a astudiwyd yn rhyddhau electronau yn hawdd yn ôl gwerth uchel paramedr thermodynamig E, (Ffig.2C). Eto i gyd, roedd cineteg y broses hon yn rhy araf i fod yn weladwy gan brofion DPPH a PT. Roedd y flavanols, gwrthocsidyddion cryf yn y prawf DPPH a PT, yn arddangos yn DPV yr eiddo arall - thermodynameg anffafriol rhyddhau electronau, ond cyfradd uchel o'r broses ocsideiddio. Mae cymhariaeth strwythurau radicalau canolradd yn awgrymu bod radical lledquinone flavonol yn fwy sefydlog na radical ffenocsyl flavanone oherwydd y nifer o fecanweithiau sefydlogi (Ffig.1). Mae'n dilyn bod sefydlogi'r canolradd radical yn hollbwysig ar gyfer cineteg yr adwaith ocsideiddio ac, o ganlyniad, ar gyfer gweithgaredd gostyngol y cyfansoddion yr ymchwiliwyd iddynt.
Mae gweithgaredd gwrthocsidiol terfynol y cymysgeddau a astudiwyd yn cael ei chwyddo trwy'r ffactorau thermodynamig, gan effeithio'n ffafriol ar y broses ocsideiddio, a oedd wedi gwella cineteg yr adwaith (Ffig. 2B-F). Mae mecanwaith manylach o'r gwelliant hwn yn parhau i fod heb ei esbonio ar hyn o bryd, mae'n debyg ei fod yn ymwneud â rhyngweithiadau flavonol/flavanone penodol. Gwelwyd y gwelliant hwn nid yn unig mewn tiwb profi ond hefyd o dan amgylchiadau cellog fel y dangoswyd gan assay CAA lle roedd gweithgaredd gwrthocsidiol y ddau gymysgedd, ON ac RN plus , yn dadleoli gweithgaredd gwrthocsidiol yn uwch na gweithgaredd cydrannau unigol (Ffig.4). Datgelodd rhan gemegol ein hymchwiliadau yr anghysondeb mewn gweithgaredd gwrthocsidiol rhwng cyfansoddion unigol a'u cymysgeddau. Gall un
tynnu sylw at bwysigrwydd cineteg yr adwaith ocsideiddio ar gyfer y gweithgaredd gwrthocsidiol cyffredinol ac awgrymu bod rhyngweithio rhwng cydrannau unigol yn dylanwadu ar briodweddau rhydocs y cymysgedd. Rhaid iddo fod yn gywir o leiaf yn yr achos hwn pan oedd presenoldeb flavonols (Q, R) yn y cymysgedd yn cynyddu gallu flavanones (N-, N plws ) i roi electronau.
Roedd rhan ddilynol yr ymchwil yn canolbwyntio ar gymharu priodweddau biolegol cysylltiedig â rhydocs a arddangosir gan flavonoidau unigol (O, R, N-, N plws ) a'u cymysgeddau (ON- ac RN plus ). Roedd celloedd canser y colon dynol HT29 yn gweithredu fel model a argymhellir ar gyfer astudiaethau maethol o'r llwybr bwyd anifeiliaid dynol3, fodd bynnag, yn yr astudiaeth hon, mae rhai dehongliadau data hefyd yn cyfeirio at natur neoplastig y llinell gell hon. Derbyniwyd yn gyffredinol y dyddiau hyn fod cydbwysedd rhydocs yn hanfodol ar gyfer goroesiad a gweithrediad celloedd; felly, gall dod i gysylltiad â gwrthocsidyddion alldarddol yn ogystal â ROS fodiwleiddio llawer o brosesau cellog. Ar ôl straen gostyngol, gall digonedd ROS annigonol newid signalau celloedd trwy lwybrau sy'n dibynnu ar redox6. Mae gormodedd o ROS, ar y llaw arall, yn arwain at straen ocsideiddiol a risg uwch o niwed ocsideiddiol i gydrannau cellog. Man cychwyn biolegol y gre hon oedd yr asesiad o effaith gwrthocsidyddion, unigol ac yn y cymysgedd, ar dwf cellog; y gweithgaredd sy'n dibynnu ar homeostasis rhydocs cellog, gan fod y crynodiad cywir o ROS yn allweddol ar gyfer actifadu signalau sy'n sbarduno amlhau celloedd. Datgelodd canlyniadau'r prawf hyfywedd celloedd MTT wahaniaethau sylweddol rhwng triniaethau. Nid oedd cyfansoddion pur yn effeithio'n sylweddol ar amlhau celloedd o'u cymharu â chelloedd rheoli nad ydynt yn cael eu trin; cyrhaeddodd twf celloedd lefel gyson ar yr ystod eang o grynodiadau. Mewn cyferbyniad, roedd y ddau gymysgedd (QN-, RN a mwy) yn ysgogi amlhau celloedd yn sylweddol. Efallai na fydd yr effaith olaf hon o reidrwydd yn gysylltiedig â phriodweddau gwrthocsidiol cymysgeddau yn unig, oherwydd roedd canlyniadau assay CAA ar gyfer O yn debyg i'r rhai ar gyfer cymysgedd ON. Serch hynny, mae'n ymddangos bod y cymysgeddau, ond nid cydrannau unigol, yn cefnogi celloedd HT29 yn well i ddelio â'r straen ocsideiddiol gweddilliol, ee trwy adfer y statws rhydocs gorau posibl; yr effaith a welwyd yn flaenorol ar gyfer gwrthocsidyddion mor gryf â catechins55. Er y gellir gweld y cynnydd synergaidd o weithgaredd gwrthocsidiol a welwyd ar gyfer cymysgeddau fel effaith fuddiol, nid yw'r ffaith bod cyfuniadau o'r fath o gwrthocsidyddion yn ysgogi twf celloedd canser yn ddymunol. Mae manteision ac anfanteision gwrthocsidyddion a ROS mewn canser wedi bod yn destun dadl ers peth amser ac wedi arwain at y casgliad y gallai gwrthocsidyddion hybu canser trwy fecanweithiau cymhleth56 a welir yma hefyd.
Canfyddiad diddorol arall oedd bod effeithiau annymunol triniaethau, megis gweithgaredd pro-ocsidiol N a ddatgelwyd gan assay CAA yn ogystal â genowenwyndra Q a welwyd mewn assay comet, wedi'u llyfnhau ar gyfer y cymysgeddau. Datgelodd yr assay olaf fod difrod DNA a achoswyd gan y crynodiad uchaf a astudiwyd (100 uM) o O pur wedi'i ostwng i lefel reoli ar gyfer crynodiad hafalaidd y cymysgedd QN- (Ffig. 5) a allai fod yn gysylltiedig â gweithgaredd gwrthocsidiol gwell ON -arsylwyd mewn profion electrocemegol. Yn achos asesiad gweithgaredd gwrthocsidyddion cellog, roedd aglycones yn arddangos mwy o eiddo gwrthocsidiol (O) neu prooxidant (N-) clir na glycosidau cyfatebol (Ffig.4). Nid oedd N- mewn crynodiadau ffisiolegol yn diystyru gallu byffro rhydocs celloedd HT29 normocsig, tra bod crynodiadau uwch na'r rhai a geir mewn plasma dynol yn arddangos effaith pro-ocsidiol sy'n dibynnu ar grynodiad a ostyngodd gydag amser datguddiad. Yn gyffredinol, gostyngodd aglycones eu heffaith gychwynnol ar statws rhydocs cellog dros y cwrs amser (Ffig.4). Roedd y ddau gymysgedd yn dangos gweithgaredd gwrthocsidiol gwell, nad yw'n cael ei ddylanwadu gan yr effaith pro-ocsidiol a welir ar gyfer cyfansoddion unigol yn ôl pob golwg.
Gwelwyd effaith wahaniaethol cymysgeddau o gymharu â chydrannau unigol hefyd yn y fersiwn epigenetig o'r assay comet a ddefnyddiwyd i fonitro newidiadau mewn methylation DNA. Dangosodd flavonoidau unigol y duedd i leihau methylation DNA byd-eang mewn modd sy'n dibynnu ar ganolbwyntio, ac eithrio R, nad oedd yn dylanwadu ar yr addasiad epigenetig hwn (Ffig.6). Roedd y ddau gymysgedd hefyd yn lleihau lefel methylation DNA byd-eang, ond ni sylwyd ar unrhyw gydberthynas â'r crynodiad. Mae'n werth nodi, nid yn unig y gall statws rhydocs chwarae rhan wrth gyfuno polyffenolau ers hynny, yn achos methylation DNA, ond nid oedd yn ymddangos bod effaith flavonoidau a astudiwyd hefyd yn gysylltiedig â'u priodweddau lleihau. Mae'n hysbys bod demethylation gweithredol yn cynnwys ocsidiad ailadroddol o grŵp methyl yn 5-methylcytosine i carboxy form5758, felly byddai disgwyl i gwrthocsidyddion rwystro'r broses hon. Yn ein harbrofion, gwelsom yr effaith groes. Felly, mae'n debyg bod mecanwaith arall yn gysylltiedig â hyn, sef ataliad DNA methyltransferase (DNMT1) - yr ensym sy'n cataleiddio trosglwyddiad grwpiau methyl i strwythurau CpG dinucleotid mewn DNA. Mae'r rhwystr o gynnal patrwm methylation yn arwain at ddadmethylation goddefol dros rowndiau olynol o ddyblygu DNA. Mae ein canlyniadau yn unol ag astudiaethau eraill a ddangosodd ataliad DNMT1 gan quercetin9. Hefyd dangoswyd bod rhai flavanones, gan gynnwys N-yn atal gweithgaredd DNMT1 mewn echdynion niwclear o gelloedd carcinoma celloedd cennog yr oesoffagws dynol KYSE-510. Dangosodd ein hastudiaeth hefyd fod cymysgu Q gyda N-wedi achosi gostyngiad rhyfeddol yn lefel methylation DNA ym mhob crynodiad a brofwyd o'r cymysgedd hwn. Gwelwyd canlyniad tebyg ar gyfer RN a mwy; fodd bynnag, digwyddodd hypomethylation DNA i raddau llai. Gall yr holl arsylwadau hyn fod o ddiddordeb o safbwynt therapiwtig Nodweddir patrwm methylation DNA mewn canser ar un llaw gan golli methylation byd-eang mewn cyrff genynnau a rhanbarthau rhynggenig sy'n arwain at wanhau sefydlogrwydd y genom!, Ar y llaw arall, gan hypermethylation rhanbarthau cyfoethog CpG mewn hyrwyddwyr a thawelu trawsgrifiadol o fynegiant genynnau atal tiwmor (TSGs)! Felly, gall hypomethylation DNA a achosir gan polyffenolau adfer mynegiant genynnau TSGs tawel a hefyd gynyddu ansefydlogrwydd genom canser yn raddol i'r pwynt sy'n arwain at farwolaeth celloedd.
Dangosodd effeithiau cellog disgrifiedig polyffenolau a astudiwyd fod nid yn unig cynnwys neu gyfansoddiad neu fio-argaeledd, ond hefyd rhyngweithio rhwng cydrannau yn modiwleiddio electrocemegol yn ogystal â phriodweddau biolegol cymysgeddau. Cefnogwyd y casgliad hwn yn amlwg hefyd gan y gweithgaredd diwethaf a ddadansoddwyd yn yr astudiaeth hon, hy, modiwleiddio mynegiant sbectrwm eang o enynnau sy'n gysylltiedig â'r amddiffyniad gwrthocsidiol ac ymateb straen ocsideiddiol. Mae'r diagram Venn (Ffig. 7C) yn crynhoi effaith aglyconau flavonoid yr ymchwiliwyd iddynt ar fodiwleiddio mynegiant genynnau. Yn achos cyfansoddion pur (O, N-) ar 1 uM, canfuwyd mai dim ond un genyn (GTFZI) yr effeithiwyd arno gan y ddau flavonoid. Fodd bynnag, achosodd N is-reoleiddio'r genyn hwn, tra cynyddodd Q ei fynegiant. Ni chynhaliwyd yr effaith hon ar grynodiadau uwch o gyfansoddion pur ac ni welwyd ychwaith ar gyfer eu cymysgedd ar unrhyw ddos. N a'r cymysgedd QN-lawr-reoledig hefyd ddau enyn arall, CCL5 a MT3, ar l μM a thri genyn cofleidio CYGB, MT3, ac MSRA ar 10uM. Yn fwyaf syndod, ni chanfuwyd unrhyw debygrwydd mewn rheoleiddio mynegiant genynnau rhwng Q a QN-na rhwng Q, N-a QN-yn unrhyw un o'r crynodiadau a archwiliwyd. Ar ben hynny, mae'r cymysgedd QN-newid yn sylweddol fynegiant tri genyn arall (APOE a SEPPI is-reoleiddio, PRDX5 i fyny-rheoliad) nad oedd eu gweithgaredd trawsgrifio ei effeithio gan unrhyw un o'r cydrannau unigol. I gloi, mae ein hastudiaeth yn dangos nad yw priodweddau biolegol cymysgeddau polyphenol yn gyfuniad o weithgareddau gwell neu wan a ddangosir gan gydrannau unigol yn unig. Mae'r arsylwadau hyn yn nodi bod yn rhaid i fioactifedd ffytocemegol mewn cymysgeddau fod o ganlyniad i ryngweithio rhwng cydrannau sy'n arwain at ymddangosiad sylwedd newydd gyda phriodweddau cemegol a biolegol newydd sy'n anodd eu rhagweld. Nid yw canlyniadau'r penderfyniadau a wnaed yn ein hastudiaeth yn cefnogi'n unig. , ond mewn gwirionedd, ehangu’r syniad o gysyniad synergedd bwyd gan bwysleisio’r ffaith bod hyd yn oed mân addasiadau yng nghyfansoddiad cymysgedd o ffytogemegau a gludir gan fwyd (cynhwysion bwyd o darddiad eraill hefyd yn ôl pob tebyg) yn creu endid newydd nad yw ei effaith ar iechyd dynol o reidrwydd yn debyg i hynny o gydrannau unigol. Mae'r syniad hwn yn tanseilio'r ffordd bresennol o ddylunio atchwanegiadau dietegol, sy'n adeiladu ar honiadau iechyd a sefydlwyd o ymchwil ar gyfansoddion ynysig. O safbwynt atal cemotherapi dietegol, mae'r astudiaeth a gyflwynwyd yn esbonio pam nad oedd y dull presennol o bwysleisio'r defnydd o gydrannau bwyd bioactif ynysig yn gallu cyfateb i'r arsylwadau epidemiolegol a wnaed ar gyfer y bwydydd cyfan y mae pobl yn eu bwyta. Os yw atchwanegiadau bwyd am gynnig manteision iechyd hirdymor gwirioneddol i unigolion, mae'n hanfodol bod cyfuniadau o gyfryngau tybiedig yn cael eu hastudio gyda'i gilydd ac o fewn cyd-destun biolegol.
Defnyddiau a dulliau
Cemegau, adweithyddion. Defnyddiwyd y cyfansoddion bioactif canlynol ar gyfer yr astudiaeth: quercetin(Q), rutin (R), naringin (N plus ), a naringenin (N-) o Sigma-Aldrich (UDA). Defnyddiwyd methanol gradd ddadansoddol a methanol o POCH (Gwlad Pwyl) yn ogystal â DMSO o Sigma-Aldrich (UDA). Defnyddiwyd system QPLUS185 o Millipore (UDA) i buro dŵr. Ar gyfer asesiadau gweithgaredd gwrthocsidiol trwy brawf sbectroffotometrig, defnyddiwyd 1-diffenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH) o Sigma-Aldrich (UDA).0.1 M byffer ffosffad sodiwm a baratowyd trwy hydoddi Na, HPO12H , O a NaH, PO2H, O (Sigma-Aldrich, UDA) mewn dŵr deionized yn cael ei ddefnyddio mewn astudiaethau electrocemegol. Cafodd yr electrod sy'n gweithio a'r gell electrocemegol eu glanhau â hydoddiant o permanganad potasiwm 10 mM (Sigma-Aldrich, UDA) yn 95 y cant H, SO, (y / y)(POCH, Gwlad Pwyl). Mae'r electrod cyfeirio ei storio mewn 3 M KCl (Sigma-Aldrich, UDA) hydoddi mewn dŵr deionized. Prynwyd yr holl adweithyddion a ddefnyddir yn y meithriniad celloedd (PBS, cyfrwng 5A McCoy, trypsin, serwm buchol ffetws, gwrthfiotigau) o Sigma-Aldrich (UDA). Paratowyd hydoddiant PBS trwy hydoddi un dabled mewn 200 ml o ddŵr wedi'i buro, Thiazolyl glas tetrazolium bromid (MTT) o Sigma-Aldrich (UDA) ei gymhwyso yn y prawf MTT. Mae'r OxiSelect Cellog Antioxidant Assay
Prynwyd y pecyn oddi wrth Cell Biolabs, Inc.(UDA). Defnyddiwyd yr adweithyddion canlynol ar gyfer assay comet: asid hydroclorig (HCl), agarose ymdoddbwynt isel (LMP agarose), sodiwm clorid (NaCl, sodiwm hydrocsid (NaOH), asid ethylenediaminetetraasetig (EDTA),2-amino{1 }}(hydroxymethyl)-1,3-propanediol (Trizma-Base), Sybr Green I staen asid niwclëig gel a Triton X-100 o Sigma-Aldrich(UDA) yn ogystal â thoddi arferol pwynt agarose (NMP agarose) o Bioline(UK) Yn ogystal, yn y assay comet methylation-sensitif, proteinase K (Merck, UDA), ensymau cyfyngu (HpalI/MspI), a byffer Tango (Promega, UK) eu cymhwyso. , RNeasy Mini Kit, set DNase-Free RNase, RT² First Strand Kit, RT²SybrGreen qPCR Mastermix, RT2Profiler Defnyddiwyd Araeau PCR ar gyfer Straen Ocsidyddol (PAHS 0065) o Qiagen (yr Almaen) mewn astudiaethau genomig.
Mae'r erthygl hon yn cael ei dynnu owww.nature.com/scientificreports
