Glycosidau Monoterpene Iridoid Ac Acyclic, Kankanosides L, M, N, O, a P O Cistanche Tubulosa
Mar 06, 2022
Cyswllt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-bost:audrey.hu@wecistanche.com
Cistanche tubulosa(SCHRENK) R. WIGHT (Orobanchaceae)yn blanhigyn parasitig lluosflwydd sy'n tyfu ar wreiddiau o rywogaethau Salvadora neu Calotropis, a ddosberthir yng Ngogledd Affrica, Arabia, a gwledydd Asia.1) Mae coesynnau'r planhigyn hwn (Kanka-nikujuyou yn Japaneaidd) wedi bod yn draddodiadol a ddefnyddir ar gyfer trin analluedd, anffrwythlondeb, lumbago, a gwendid y corff yn ogystal ag asiant hyrwyddo cylchrediad y gwaed.1,2) Yn ystod ein hastudiaethau ar gyfansoddion bioactif o goesynnau Cistanche tubulosa,3-6) adroddwyd gennym yn flaenorol pedwar ar hugain o aminoglycosidau ffenylethanoid gan gynnwys kankanosides H1, H2, I, J1, J2, K1, a K2, a dau oligosiwgr asetig o goesynnau ffres Cistanchetubulosa.5,6) Ar ben hynny, prifglycosidau ffenylethanoid,echinacoside, acteoside,ac isoacteoside, canfuwyd eu bod yn atal y cynnydd mewn lefelau serwm aspartate aminotransferase (sAST) ac alanine aminotransferase (sALT) yn iau anafedig y llygod a achosir gan D-galactosamine (D-GalN) / lipopolysaccharide ar ddosau o 25-100 mg / kg fesul os ( po).Eglurwyd hefyd ofynion strwythurol y glycosidau ffenylethanoid ar gyfer y gweithgaredd hepatoprotective.5) Yn yr astudiaeth barhaus hon ar gyfansoddion yn y coesau ffres o Cistanchetubulosa, rydym yn ynysu ymhellach un ar ddeg glycosidau iridoid gan gynnwys kankanosides L (1), M (2), ac N (3), saith glycosid monoterpene acyclic gan gynnwys kankanosides O (4) a P(5), tri ffenylpropanoid, a phedwar lignans. Mae'r papur hwn yn ymdrin ag ynysu ac egluro strwythur pum cyfansoddyn newydd (1-5).
Echdynnwyd coesynnau ffres o C. tubulosa (wedi'i drin yn Urumuqi, Talaith Xin jiang, Tsieina) â methanol o dan adlif i gynhyrchu echdyniad methanolig (8.36 y cant o'r coesynnau ffres). O'r dyfyniad methanolig, cafwyd ffracsiynau eliwiedig H2O- a MeOH (5.63 y cant a 2.73 y cant, yn y drefn honno) gan gromatograffaeth colofn Diaion HP (H2O → MeOH) fel y disgrifiwyd yn flaenorol.5) Y ffracsiwn eliwiedig MeOH oedd yn ddarostyngedig i gromatograffeg colofnau SiO2 ac ODS ac yn olaf HPLC i ddodrefnu kankanosides L (1, 0.0026 y cant ), M (2, 0.{{ 27}}001 y cant ), N (3, 0.00{{60}7 y cant ) , O (4, 0.0{{90}}2{{105}} y cant ), a P (5, {{118} }.0002 y cant ), 6-deoxycatalpol3,7) (6, 0.197 y cant ), bartsioside3,7) (7, 0.0583 y cant ), gluroside3,7) (8, 0.0443 y cant ), kankanoisid A3) (9, 22.3 mg, 0.0010 y cant ), mussaenosidic acid3,7) (10, 0.0056 y cant ), 8- asid epiloganig3,8) (11, 0.0023 y cant ), 8-asid epideoxyloganic3,7) (12, 0.0004 y cant ), asid geniposidig3,7) (13, 0.0040 y cant ), kkanoside E3) (14, 0.0026 y cant ), (2E,6Z)-8-b D-glucopyranosyloxy-2,6-di methyl-2,6-asid octadienoig3,9) (15, 31.0 mg, 0.0014 y cant), (2E,6E){{95 }},7-dimethyl-8-hydroxyoctadien-1-yl-ObD-glu copyranoside10) (16, 0.0082 y cant ), 8-hydroxygeraniol 8-Ob- D-glucopyranoside11 ) (17, 0.0044 y cant ), betulalbuside A12) (18, 0.0004 y cant ), conwyddin13) (19, 0.0002 y cant ), syringin13) (20, 0.0015 y cant ), aldehyde sinapic {{ D-gluano ( 128} copyrside ) 0.0001 y cant ), ( ) - pinoresinol ObD-glucopyranoside4,8,15) (22, 0.0010 y cant ), eucommin A16) (23, 0.0002 y cant ), isoeucommin A17) (24, 0.0010 y cant ), a ( Obare - ringing ) glwcopyra noside4,8,18) (25, 0.0044 y cant ).
Cistanche tubulosagwella swyddogaeth rywiol
Adeileddau Kankanosides L (1), M (2), ac N (3)
Cafwyd Kankanoside L (1) fel powdr gwyn gyda chylchdroi optegol negyddol ([a]D 26 45.7 yn MeOH). Roedd ei sbectrwm IR yn dangos band amsugno cryf ar 3433 ac 1{{20}}80 cm 1 yn awgrymu moiety glycosid. Dangosodd y bomio atom cyflym (FAB)-MS o rediad 1 yn y moddau ïon positif- a negatif gopaon ïon lled-foleciwlaidd ar m/z 371 [M Na] a 347 [MH], yn y drefn honno, a phennwyd y fformiwla moleciwlaidd fel C15H24O9 trwy fesuriad FAB-MS cydraniad uchel. Hydrolysis asid o 1 gyda 1.0 M asid hydroclorig (HCl) rhyddhau D-glwcos, a nodwyd gan ddadansoddiad HPLC gan ddefnyddio synhwyrydd cylchdro optegol.3-6) Y sbectra 1 H- a 13C-NMR o 1 (CD3OD, Tablau 1, 2), a neilltuwyd gan arbrofion NMR amrywiol, 19) yn dangos bod signalau yn arwyddadwy i bedwar methylen [d 1.43 (1H, br dd, J ca. 5, 13 Hz, 4a-H), 1.73 (1H, br dd, J ca. 12, 14 Hz, 6a-H), 1.85 (1H, m, 4b-H), 1.93 (1H, br dd, J= ca. 8, 14 Hz, 6b-H), 3.50 ( 1H, dddd, J 2.4, 12.5, 13.0 Hz, 3a-H), 3.83 (1H, br dd, J=ca. 5, 13 Hz, 3b-H), 3.78, 4.12 (1H yr un, y ddau d, J 13.1 Hz, 10-H2)], dau fethine [d 2.15 (1H, dd, J 7.2, 8.9 Hz, 9-H) a 2.23 (1H, m, 5- H)], a grŵp asetal [d 4.81 (1H, d, J 8.9 Hz, 1-H)] ynghyd â moiety b-glucopyranosyl [d 4.70 (d, J 7.9 Hz, 1 - H)]. Fel y dangosir yn Ffig. 1, dangosodd yr arbrawf sbectrosgopeg cydberthynas 1 H–1H (1 H–1 H COSY) ar 1 bresenoldeb strwythurau rhannol wedi'u hysgrifennu mewn llinellau trwm. Yn yr arbrawf cydberthynas aml-bond heteroniwclear (HMBC) ar 1, sylwyd ar gydberthynas hirdymor rhwng y protonau a'r carbonau canlynol (1-H a 3-C, 8-C; {{). 124}}H a 1-C; 7-H a 8-C, 10-C; 9-H a 8-C; {{131} }}H2 a 7-C, 8-C; 1 -H a 1-C) fel y dangosir yn Ffig. 1. Nesaf, nodweddwyd stereostrwythur cymharol 1 gan niwclear cyfnod-sensitif Arbrawf sbectrosgopeg gwella ailwampio (NOESY sy'n sensitif i gyfnod), a ddangosodd gydberthynas NOE rhwng y parau proton canlynol (1-H a 3a H; 3a-H a 4a-H; 3b-H a 4b-H; 4b-H; a 5-H, 9-H; 5- H a 6b-H, 9-H; 6a-H a 7-H; 7-H; 7-H a 10-H2), fel y dangosir yn Ffig. 1. Roedd sbectra 1 H- a 13C-NMR o 1 yn orosodadwy ar y rheini o brif gyfansoddyn iridoid 6-deoxycatalpol (6), ac eithrio'r signalau dyledus i'r moiety d-lactol dirlawn. Yn olaf, rhoddodd hydrogeniad 6 1, fel bod stereostrwythur kkananoside L wedi'i egluro i fod yn 3,4- dihydro-6-deoxycatalpol(1).
Cafwyd Kankanoside M (2) fel powdr gwyn gyda chylchdroi optegol negyddol ([a]D 26 18.7 yn MeOH). Roedd y sbectrwm IR o 2 yn dangos bandiau amsugno ar 3433, 1736, 1655, ac 1076 cm 1 y gellir ei briodoli i hydroxyl, d-lactone, olefin, ac ether moieties. Roedd y sbectrwm FAB-MS ïon positif o 2 yn dangos uchafbwynt ïon lled-foleciwlaidd ar m/z 353 [M Na] , a phennwyd y fformiwla moleciwlaidd fel C15H22O8 trwy fesur FAB-MS ïon positif cydraniad uchel. Hydrolysis asid o 2 gyda 1.0 M HCl rhyddhau D-glwcos. Roedd sbectra 1 H- a 13C NMR o 2 (CD3OD, Tablau 1, 2) yn dangos signalau y gellir eu priodoli i bedwar methylen [d 1.66, 2.11 (1H yr un, y ddau m, 4-H2), 2.15, 2.75 (1H yr un , y ddau m, 6-H2), 4.29 (1H, dddd, J 2.8, 8.4, 14.3 Hz, 3b-H), 4.32, 4.51 (1H yr un, y ddau d, J 13.1 Hz, 10- H2), 4.35 (1H, dddd, J 3.1, 6.7, 14.3 Hz, 3a-H)], dau methines [d 2.97 (1H, m, 5-H), 3.82 (1H, br s, {{ 84}}H)], olefin [d 5.94 (1H, m, 7-H)], a grŵp lacton dirlawn (d C 174.9) ynghyd â moiety bD-glucopyranosyl [d 4.32 (1H, d , J 7.9 Hz, 1 -H)]. Fel y dangosir yn Ffig. 1, dangosodd yr arbrawf COZY 1 H–1H ar 2 bresenoldeb adeileddau rhannol wedi'u hysgrifennu mewn llinellau trwm ac, yn arbrawf HMBC, arsylwyd cydberthnasau amrediad hir rhwng y parau proton a charbon canlynol ({{105) }}H a 1-C; 7-H a 9-C; 9-H a 1-C, 8-C; {{112} }H2 a 7-C, 8-C, 9-C; 1 -H a 10-C). Nodweddwyd stereostrwythur cymharol 2 gan arbrawf NOESY sy'n sensitif i gyfnod, a ddangosodd gydberthynas NOE rhwng y parau proton canlynol (3a-H a 4a-H; 3b-H a 4b-H; 4b-H a 5- H; 5-H a 6b-H, 9-H) fel y dangosir yn Ffig. 1. Felly, eglurwyd stereostrwythur 2 fel y dangosir.
Cafodd Kankanoside N (3) ei ynysu fel powdr gwyn gyda chylchdroi optegol negyddol ([a]D 25 24.6 yn MeOH). Yn y FAB-MS ïon positif o 3, gwelwyd uchafbwynt ïon lled-leciwlaidd ar m/z 371 [M Na] . Penderfynwyd ar y fformiwla moleciwlaidd C16H28O8 gan fesuriad FAB-MS cydraniad uchel. Hydrolysis asid o 3 ag 1.0 M HCl rhyddhau D-glwcos. Dangosodd y data 1 H- a 13C-NMR (CD3OD, Tablau 1, 2) signalau y gellir eu neilltuo i methyl [d 1.07 (3H, d, J 7.2 Hz, 10-H3)] , pedwar methylen {d 1.37, 1.87 (1H yr un, y ddau m, 7-H2), 1.65, 1.81 (1H yr un, y ddau m, 6-H2), [3.65 (1H, dd, J 9.1 , 9.8 Hz), 3.90 (1H, dd, J 5.9, 9.8 Hz), 11-H2], a [3.70 (1H, dd, J 3.3, 12.0 Hz), 3.88 (1H, m), {{ 71}}H2]}, pedwar methine [d 1.69 (1H, m, 4-H), 1.75 (1H, m, 9-H), 2.06 (1H, m, 8- H), 2.16 (1H, m, 5-H)], a grŵp hemiacetal [d 4.67 (1H, d, J 7.4 Hz, 1-H)] ynghyd â moiety bD-glucopyranosyl [ d 4.26 (1H, d, J 7.9 Hz, 1 -H)]. Mae strwythur iridoid o 3 ei egluro gan 1 H - 1 H COZY a HMBC arbrofion a'r stereostructure cymharol ei nodweddu gan cyfnod-sensitif arbrawf NOESY fel y dangosir yn Ffig. 1. O ganlyniad, y sterostructure o 3 ei egluro fel y dangosir.
Adeileddau Kankanosides O (4) a P (5)
Cafwyd Kankanosides O (4) a P (5), C16H26O8, hefyd fel powdrau gwyn gyda chylchdroadau optegol negyddol (4: [a]D 23 26.1; 5: [a]D 21 32.7 y ddau yn MeOH). Roedd y sbectra IR o 4 a 5 yn dangos bandiau amsugno yn 3433, 1696, 1647, ac 1076 cm 1 ar gyfer 4, ac yn 3434, 1701, 1647, ac 1{{{96} }76 cm 1 am 5, y gellir ei briodoli i swyddogaethau glycosidig, carboxyl, ac olefin. Roedd eu sbectra UV yn dangos uchafswm amsugno cyffredin ar 217 nm sy'n dangos presenoldeb moiety asid carbocsilig b-annirlawn yn y ddau ohonynt. Mae hydrolysis asid o 4 a 5 yn rhyddhau D-glwcos, ond trwy hydrolysis ensymatig â b glucosidase, rhoddodd 4 a 5 (2E,6E)-8-hydroxy-2,6-dimethyl{39) }},{{40}}asid octadecenoic20) (4a) a (2E,6E)-8-hydrocsi-3,{47}} deumethyl{{ 48}},6-asid octadecenoic21) (5a), yn y drefn honno. Dangosodd data 1 H- a 13C-NMR o 4 (CD3OD, Tablau 2, 3) signalau y gellir eu neilltuo i ddau methyl [d 1.71 (3H, br s, 10-H3), 1.81 (3H, d, J 1.0 Hz , 9-H3)], tri methylen {d 2.19 (2H, br t, J ca. 7 Hz, 5-H2), 2.36 (2H, m, 4-H2), [ 4.24 (1H, dd, J 7.6, 12.0 Hz), 4.33 (1H, dd, J 6.2, 12.0 Hz), 8-H2]}, a dau olefinau trisubstituted [d 5.41 (1H, dddd, J 1.2, 6.2, 7.6 Hz, 7- H), 6.75 (1H, tq, J 7.2, 1.0 Hz, 3-H)] ynghyd â rhan bD glucopyranosyl [d 4.34 (d, J 7.8 Hz, 1 -H)]. Trwy gymharu signalau carbon yn y sbectrwm 13C-NMR o 4 â rhai 4a, gwelwyd symudiad glycosyleiddiad yn y safle 8- (d C 4: 65.5; 4a: 59.4). Cadarnhawyd lleoliad y cysylltiad glwcosid hefyd gan arbrofion HMBC fel y dangosir yn Ffig. 2. O ganlyniad, eglurwyd stereostrwythur 4 i fod yn (2E,6E) bD-glucopyranosyloxy-2,{{{). 143}}dimethyl-2,{6-asid octadecenoic. Ar y llaw arall, roedd data 1 H- a 13C-NMR o 5 (CD3OD, Tablau 2, 3) yn dangos presenoldeb (2E,6E)-8-hydroxy-3,{{158}). }dimethyl-2,6-moiety asid octadecenoic [d 1.70 (3H, br s, 10-H3), 2.14 (3H, br s, 9-H3), 2.24 ( 2H, m, 4-H2), 2.27 (2H, m, 5-H2), 4.05, 4.20 (1H yr un, y ddau br d, J ca. 12 Hz, 8-H2) , 5.47 (1H, tq, J 7.1, 0.9 Hz, 6-H), 5.67 (1H, br s, 1-H)] ynghyd â rhan bD-glucopyranosyl [d 4.23 (d, J 7.7 Hz, 1 -H)]. Eglurwyd cysylltedd y moiety bD-glucopyranosyl yn 5 ar sail arbrofion HMBC fel y dangosir yn Ffig. 2. Ar ben hynny, gwelwyd symudiad glycosyleiddiad nodweddiadol ar gyfer y signalau yn 8-safle (d C 5: 75.6; 5a: 68.8). Ar sail y dystiolaeth a grybwyllwyd uchod, penderfynwyd mai stereostrwythur 5 oedd (2E,6E)-8-bD-glucopyranosyloxy-3,7-dimethyl-2),{ {230}}octa asid dienoig.
Effeithiau'r Cyfansoddion ar Sytowenwyndra a achosir gan Tiwmor Necrosis Ffactor-a (TNF-a) mewn Celloedd L929
Mae'n hysbys bod TNF-a yn cyfryngu amrywiaeth o anafiadau organau trwy ei sefydlu o apoptosis cellog. Yn achos yr afu, mae effeithiau biolegol TNF-a wedi'u cysylltu ag anaf hepatig a achosir gan docsinau hepatig, isgemia/atlifiad, hepatitis firaol, ac alcohol.22-24) Felly, ystyrir bod TNF-a yn ffactor pwysig. targed i ddarganfod asiantau gwrthlidiol a hepatoprotective. Ar sail y cysyniad uchod, fe wnaethom ymchwilio i gyfansoddion amddiffynnol rhag cynhyrchion sy'n digwydd yn naturiol ar farwolaeth celloedd TNF-a-achosir mewn celloedd L929, llinell gell TNF-a-sensitif.25) Yn flaenorol, rydym wedi adrodd bod nifer o etholwyr o Canfuwyd bod Piper Chaba, 26—29) Boesenbergia rotunda, 30,31) Punica granatum, 32) Helichrysum arenarium, 33—35) a Sapindus rarak, 36-38) yn dangos yn effeithiau hibitory TNF-a -cytowenwyndra a achosir mewn celloedd L929. Gan fod cyfansoddion ffenylethanoid C. tubulosa (ee echinacoside, acteoside, ac isoacteoside, ac ati) 5) hefyd yn atal y cytotoxicity hwn, gwnaethom archwilio ymhellach iridoid, ffenylpropanoid, a chyfansoddion lignan fel y dangosir yn Nhabl 4. O ganlyniad, kankanoside A (9, ataliad: 16.3 2.0 y cant ar 100 mM), asid mussaenosidic (10, 44.7 8.7 y cant ), 8-asid epiloganic (11, 10.7 0.4 y cant), 8-hydroxygeraniol 8-Darganfuwyd bod ObD-glucopyranoside (17, 21.3 2.4 y cant), a ( ) - pinoresinol ObD-glucopyranoside (22, 22.3 1.6 y cant ), yn dangos gweithgaredd signifies- cant. Er bod eu gweithgareddau yn wannach na rhai echinacoside (IC50 31.1 mM), acteoside (17.8 mM), ac isoaceteoside (22.7 mM), mae'r egwyddor phenylethanoid con stituents.5)
Arbrofol
Defnyddiwyd yr offerynnau canlynol i gael data sbectrol a ffisegol: cylchdroadau penodol, Horiba SEPA-300 polarimedr digidol (l 5 cm); sbectra UV, sbectromedr Shimadzu UV-1600; sbectra IR, sbectromedr Shimadzu FTIR-8100; sbectra 1 H- a 13C-NMR, sbectromedrau JEOL JNM-ECA600 (600, 150 MHz) a JEOL JNM-ECS400 (400, 100 HMz) gyda tetramethylsilane fel safon fewnol; FAB-MS a chydraniad uchel FAB-MS, sbectromedr màs JEOL JMS-SX 102A; Synhwyrydd HPLC, Shimadzu RID-10Mynegai plygiannol, Shimadzu SPD{22}A UV-VIS, a synwyryddion cylchdro optegol Shodex OR-2. Defnyddiwyd colofnau HPLC, Cosmosil 5C18-MS-II, a pNAP (Nacalai Tesque Inc., 250 4.6 mm id) a (250 20 mm id) at ddibenion dadansoddol a pharatoadol, yn y drefn honno.
Defnyddiwyd yr amodau arbrofol canlynol ar gyfer cromatograffaeth: cromatograffaeth colofn gel silica cyfnod arferol (CC), gel silica 60N (Kanto Chemical Co., Ltd., 63-210 rhwyll, sfferig, niwtral); gel silica cyfnod gwrthdroi CC, Diaion HP-20 (Nippon Rensui), a Chromatorex ODS DM1020T (Fuji Silysia Chemical, Ltd., 100-200 rhwyll); TLC cyfnod arferol, platiau TLC wedi'u gorchuddio ymlaen llaw â gel silica 60F254 (Merck, 0.25 mm); TLC cyfnod gwrthdroi, platiau TLC wedi'u gorchuddio ymlaen llaw gyda gel silica RP-18 F254S (Merck, 0.25 mm); HPTLC cyfnod gwrthdroi, platiau TLC wedi'u gorchuddio ymlaen llaw gyda gel silica RP-18 WF254S (Merck, 0.25 mm), cyflawnwyd y darganfyddiad trwy chwistrellu gyda 1 y cant Ce (SO4)2 - 10 y cant dyfrllyd H2SO4, ac yna gwresogi .
Deunydd Planhigion
Disgrifiwyd yr eitem hon mewn adroddiad blaenorol.
Echdynnu ac Ynysu
Cafodd coesynnau ffres o C. tubulosa (2.98 kg) eu torri'n fân a'u tynnu dair gwaith gyda methanol o dan adlif am 3 h. Darparodd anweddiad y toddydd o dan bwysau llai echdyniad methanolig (249.1 g, 8.36 y cant ). Roedd y dyfyniad methanolig yn destun Diaion HP-20 CC (5.0 kg, H2O→MeOH) i roi ffracsiynau eliwiedig H2O- a MeOH (167.84 g, 5.63 y cant a 81.21 g, 2.73 y cant, yn y drefn honno). Bu'r ffracsiwn elifiedig MeOH (61.00 g) yn destun i gel silica cyfnod arferol CC [1.8 kg, CHCl3– MeOH–H2O (15 : 3 : 0.4→1{{ 36}} : 3 : 0.5→6 : 4 : 1, v/v/v)→MeOH] i roi saith ffracsiwn [Fr. 1 (1.12 g), 2 (9.56 g), 3 (0.89 g), 4 (10.69 g), 5 (8.84 g), 6 (12.52 g), a 7 (4.6{{104}}g)], fel y disgrifiwyd yn flaenorol.5) Gwahanwyd y ffracsiwn 1 (1.12 g) gan gel silica cam gwrthdro CC [55 g, MeOH–H2O (4 0 : 60, v/v)→MeOH] i roi pum ffracsiwn [Fr. 1-1 (132.8 mg), 1-2 (267.0 mg), 1-3 (182.8 mg), {{80}} (31{{ 156}}.9 mg), a 1-5 (91.4 mg)]. Cafodd y ffracsiwn 1-1 (132.8 mg) ei buro ymhellach gan HPLC [Cosmosil 5C{{9{{160}}}}MS-II, CH3CN–1 y cant AcOH dyfrllyd (1{{166}) } : 90, v/v)] i roi kkanoside M (2, 2.8 mg, 0.{{203}}{{22{{240 }}}}}}01 y cant ), bartsioside (7, 5.2 mg, 0.0002 y cant ), aldehyde sinapig {{1{{295) }}6}}O- bD-glucopyranoside (21, 1.4 mg, {{3{{3{3{{310}}9}}5}}{{320} }}}.0001 y cant ). Cafodd y ffracsiwn 1-2 (267.{{350}} mg) ei buro ymhellach gan HPLC [Cosmosil 5C18-MS-II, CH3CN–1 y cant AcOH dyfrllyd (7 : 93, v/v)] i roi (2E,6E)-3,7-dimethyl-8-hydroxyoctadien{{13{{360}}}}yl-O- bD -glucopyranoside (16, 15.8 mg, {{370}}.{406}}007 y cant ), 8-hydroxygeraniol 8-ObD glucopyranoside (17, 5.2 mg, 0.0002 y cant), ( ) - pinoresinol ObD-glucopyra noside (22, 22.0 mg, 0.0010 y cant), eucommin A (23, 5.0 mg, 0.0002 y cant), iso (24, 21.3 mg, 0.0010 y cant ), a ( ) - syringaresinol ObD-glwcopi ranoside (25, 98.0 mg, 0.0044 y cant ). Gwahanwyd y ffracsiwn 2 (9.56 g) gan gel silica cyfnod gwrthdro CC [400 g, MeOH–H2O (10 : 90, v/v)→MeOH→ aseton] i roi pum ffracsiwn [Fr. 2-1 (55.9 mg), 2-2 (4.48 g), 2-3 (3.42 g), 2-4 (1.16 g), a 2-5 (31.9 mg) ], fel y disgrifiwyd yn flaenorol.5) Roedd y ffracsiwn 2-2 (500.0 mg) yn destun HPLC [Cosmosil 5C18-MS-II, CH3CN–1 y cant AcOH dyfrllyd (5 : 95, v/v )] i roi kkanoside L (1, 6.6 mg, 0.0026 y cant ) a 6-deoxycatalpol (6, 455.5 mg, 0.182 y cant ). Rhoddwyd y ffracsiwn 2-3 (1.00 g) i HPLC [Cosmosil 5C18-MS-II, CH3CN–1 y cant AcOH dyfrllyd (7 : 93, v/v)] i roi saith ffracsiwn [Fr. . 2-3-1 (66.5 mg), 2-3-2 (20.4 mg), 2-3-3 (26.0 mg), 2-3-4 (136.6 mg), 2-3-5 [ 7 (380.6 mg), 2-3-5 [ 7 (380.6 mg) , 0.0581 y cant )], 2-3-6 [ gluroside (8, 285.1 mg, 0.0435 y cant )], a 2-3-7 (84.9 mg)]. Cafodd y ffracsiwn 2-3-4 (106.6 mg) ei buro ymhellach gan HPLC [Cosmosil pNAP, CH3CN-1 y cant AcOH dyfrllyd (5 : 95, v/v)] i roi 6 (68.4 mg, 0.0134 y cant) ynghyd â salidroside5) (13.7 mg, 0.0027 y cant ). Roedd y ffracsiwn 2-4 (1.16 g) yn destun HPLC [Cosmosil 5C18-MS-II, CH3CN-1 y cant AcOH dyfrllyd (15 : 85, v/v) a Cosmosil pNAP, CH3CN-1 y cant AcOH dyfrllyd (10 : 90 neu 15 : 85, v/v)] i roi kankanosides N (3, 15.6 mg, 0.0007 y cant), O (4, 44.1 mg, 0.0020 y cant), a P (5, 4.2 mg, 0.0002 y cant ), 6 (24.0 mg, 0.0011 y cant ), 8 (17.7 mg, 0.0008 y cant), kankanoiside A (9, 22.3 mg, 0.0010 y cant), 8-asid epideoxyloganic (12, 8.1 mg, 0.004), kankanoside E (14, 58.1 mg, 0.0026 y cant ), (2E,6Z)-8-bD-glwcopi ranosyloxy-2,6-dimethyl-2,6-octadienoig asid (15, 31.0 mg, 0.0014 y cant ), 16 (168.6 mg, 0.0075 y cant ), 17 (94.3 mg, 0.0042 y cant), betulalbuside A (18, 8.1 mg, 0.0004 y cant), conwydd (80, 2% ), conwydd ), a syringin (20, 33.9 mg, 0.0015 y cant ). Gwahanwyd y ffracsiwn 4 (10.69 g) gan gel silica cyfnod gwrthdro CC [500 g, MeOH–H2O (30 : 70, v/v) → MeOH → aseton] i roi pedwar ffracsiwn [Fr. 4-1 (878.2 mg), 4-2 (7.06 g), 4-3 (1.57 g), a 4-4 (792.8 mg)], fel y disgrifiwyd yn flaenorol.5) Mae'r ffracsiwn 4-1 (500.0 mg) ei buro gan HPLC [Cosmosil 5C18-MS-II, CH3CN–1 y cant AcOH dyfrllyd (10 : 90, v/v)] i roi asid mussaenosidig (10, 39.1) mg, 0.0031 y cant ) ac asid geniposidig (13, 51.2 mg, 0.0040 y cant ). Gwahanwyd y ffracsiwn 5 (8.84 g) gan gel silica cyfnod gwrthdro CC [400 g, MeOH–H2O (20 : 80 → 30 : 70, v/v) → MeOH → aseton] i roi saith ffracsiwn [Fr. 5-1 (870.2 mg), 5-2 (478.9 mg), 5-3 (3.72 g), 5-4 (979.9 mg), 5-5 (1.19 g), 5-6 (1.27 g), a 5-7 (130.1 mg)], fel y disgrifiwyd yn flaenorol.5) Cafodd y ffracsiwn 5-1 (870.2 mg) ei buro ymhellach gan HPLC [Cosmosil pNAP, CH3CN –1 y cant AcOH dyfrllyd (5 : 95, v/v)] i roi 10 (55.3 mg, 0.0025 y cant ) a 8-asid epiloganig (11, 51.5 mg, 0.0023 y cant ).
Kankanoside L (1): A powdr gwyn, [a]D 26 45.7 (c 0.48, MeOH). Cydraniad uchel positif-ion FAB-MS: Calcd ar gyfer C15H24O9Na [M Na] 371.1318; Wedi dod o hyd i 371.1309. IR (KBr, cm 1 ): 3433, 2928, 1080. 1 H-NMR (600 MHz, CD3OD) d: a roddir yn Nhabl 1. 13C-NMR (150 MHz, CD3OD) d C: a roddir yn Nhabl 2. Cadarnhaol- ion FAB-MS m/z: 371 [M Na] . Negyddol-ion FAB-MS m/z: 347 [MH] .
Kankanoside M (2): A powdr gwyn, [a]D 26 18.7 (c 0.11, MeOH). Cydraniad uchel positif-ion FAB-MS: Calcd ar gyfer C15H22O8Na [M Na] 353.1212; Wedi dod o hyd 353.1208. IR (KBr, cm 1 ): 3433, 2924, 1736, 1655, 1076. 1 H-NMR (600 MHz, CD3OD) d: a roddir yn Nhabl 1. 13C-NMR (150 MHz, CD3OD) d C: a roddir yn Nhabl 2. Positif-ion FAB-MS m/z: 353 [M Na] .
Kankanoside N (3): Powdwr gwyn, [a]D 25 24.6 (c 1.00, MeOH). Cydraniad uchel positif-ion FAB-MS: Calcd ar gyfer C16H28O8Na [M Na] 371.1682; Wedi dod o hyd 371.1686. IR (KBr, cm 1 ): 3415, 2874, 1076, 1028. 1 H- NMR (600 MHz, CD3OD) d: a roddir yn Nhabl 1. 13C-NMR (150 MHz, CD3OD) d C: a roddir yn Nhabl 2. Positif-ion FAB-MS m/z: 371 [M Na] .
Kankanoside O (4): Powdwr gwyn, [a]D 23 26.1 (c 2.30, MeOH). Cydraniad uchel positif-ion FAB-MS: Calcd ar gyfer C16H26O8Na [M Na] 369.1525; Wedi dod o hyd 369.1528. UV [l max (log e), MeOH, nm]: 217 (4.04). IR (KBr, cm 1 ): 3433, 2926, 1696, 1647, 1076. 1 H-NMR (600 MHz, CD3OD) d: a roddir yn Nhabl 3. 13C-NMR (150 MHz, CD3OD) d C: a roddir yn Nhabl 2. Pos itive-ion FAB-MS m/z: 369 [M Na] .
Kankanoside P (5): A powdr gwyn, [a]D 21 32.7 (c 0.18, MeOH). Cydraniad uchel positif-ion FAB-MS: Calcd ar gyfer C16H26O8Na [M Na] 369.1525; Wedi dod o hyd 369.1520. UV [l max (log e), MeOH, nm]: 217 (4.08). IR (KBr, cm 1 ): 3434, 2926, 1701, 1647, 1076. 1 H-NMR (600 MHz, CD3OD) d: a roddir yn Nhabl 3. 13C-NMR (150 MHz, CD3OD) d C: a roddir yn Nhabl 2. Pos itive-ion FAB-MS m/z: 369 [M Na] .
Hydrolysis Asid o Kankanosides L—P (1-5): Atebion o 1—5 (yr un 1.0 mg) mewn 1.0 M HCl (1.0 ml) oedd wedi'i gynhesu ar 80 gradd am 3 h. Ar ôl cael ei oeri, cafodd cymysgedd yr adwaith ei niwtraleiddio â Amberlite IRA-400 (ffurflen OH), a chafodd y resinau eu tynnu trwy hidlo. Ar ôl tynnu'r toddydd o dan bwysau llai, gwahanwyd y gweddillion gan golofn cetris Sep-Pak C18 (H2O→MeOH). Bu'r ffracsiwn H2O-eluted yn destun dadansoddiad HPLC o dan yr amodau a ganlyn: colofn HPLC, Kaseisorb LC NH2-60-5, 4.6 mm id 250 mm (Tokyo Kasei Co., Ltd., Tokyo, Japan); canfod, cylchdroi optegol [Shodex OR-2 (Showa Denko Co, Ltd., Tokyo, Japan); cyfnod symudol, CH3CN–H2O (85: 15, v/v); cyfradd cymrawd 0.8 ml/mun]. Cyflawnwyd adnabyddiaeth o glwcos-D sy'n bresennol yn y ffracsiynau H2O-eluted o 1-5 trwy gymharu eu hamseroedd cadw a chylchdroi optegol gyda sampl dilys [tR 17.9 min (cadarnhaol)].
Hydrogeniad {{0}}Deoxycatalpol (6) Ataliad o 6 (12.0 mg) ac 10 y cant o garbon palladiwm (5.0 mg) mewn Cafodd MeOH (2.0 ml) ei droi ar dymheredd ystafell o dan awyrgylch H2 am 2 h. Cafodd y catalydd ei hidlo i ffwrdd, a chafodd y hidlydd ei gyddwyso o dan bwysau llai i roi 1 (12.0 mg, quant.).
Hydrolysis Ensymatig o Kankanosides O (4) a P (5) gyda b-Glucosidase I hydoddiant o 4 (8.0 mg) yn H2O (1.5 ml) ychwanegwyd b-glucosidase (4.7 mg, o almon, Oriental Yeast Co., Tokyo, Japan), a chafodd yr ateb ei droi ar 37 gradd am 24 h. Cafodd yr adwaith ei ddiffodd trwy ychwanegu EtOH (5.0 ml), cafodd y cymysgedd ei gyddwyso dan bwysau llai. Echdynnwyd y gweddillion ag EtOAc a rhoddodd anweddiad y toddydd (2E,6E)-8-hydroxy-2,{{20}}dimethyl-2,{{22}) }asid octadecenoic20) (4a, 3.9 mg, 92 y cant ). Trwy weithdrefn debyg, (2E,6E)-8-hydroxy-3,7-dimethyl-2,6-octadecenoic acid21) (5a, 0.9 mg, 94 y cant ) a gafwyd o kkanoside P (5, 1.8 mg).
Dull Bioassay Profwyd effaith ataliol ar sytowenwyndra a achosir gan TNF-a-achosir mewn celloedd L929 gan y dull a ddisgrifiwyd mewn papur blaenorol.5)
Ystadegau Mynegir gwerthoedd fel moddion SEM Defnyddiwyd dadansoddiad unffordd o amrywiant (ANOVA) ac yna prawf Dunnett ar gyfer dadansoddiad ystadegol. Ystyriwyd gwerthoedd tebygolrwydd (p) llai na 0.05 yn arwyddocaol.
llysieuyn cistanche
