Glycosidau Monoterpene Iridoid Ac Acyclic, Kankanosides L, M, N, O, a P O Cistanche Tubulosa

Cistanche tubulosa(SCHRENK) R. WGOLAU(Orobanchaceae) yn blanhigyn parasitig lluosflwydd sy'n tyfu ar wreiddiau oSalvadoraneuCalotropisrhywogaethau, wedi'u dosbarthu yng Ngogledd Affrica, Arabia, a gwledydd Asia.1) Yn draddodiadol, defnyddiwyd coesau'r planhigyn hwn (Kanka-nikujuyou yn Japaneaidd) ar gyfer ytrin analluedd, anffrwythlondeb, lumbago, a gwendid y corffyn ogystal ag asiant hyrwyddo cylchrediad y gwaed.1,2) Yn ystod ein hastudiaethau ar gyfansoddion bioactif o goesynnau oC tubulosa, 3-6) Adroddwyd gennym yn flaenorol bedwar ar hugain o aminoglycosidau ffenylethanoid gan gynnwys kankanosides H1, H2, I, J1, J2, K1, a K2, a dau oligosugars acylated o goesynnau ffres oC tubulosa. 5,6) Ar ben hynny, pennaethglycosidau ffenylethanoid, echinacoside, acteoside, ac isoacteoside, canfuwyd eu bod yn atal cynnydd mewn lefelau serwm aspartate aminotransferase (AST) ac alanine aminotransferase (halen) yn iau anafedig y llygod a achosir ganD- galactosamine (D-GalN)/ lipopolysaccharid mewn dosau o 25-100 mg/kgper os(p.o.). Eglurwyd hefyd ofynion strwythurol y glycosidau ffenylethanoid ar gyfer y gweithgaredd hepatoprotective.5) Yn yr astudiaeth barhaus hon ar gyfansoddion yn y coesau ffres oC tubulosa, fe wnaethom ynysu un ar ddeg glycosid iridoid ymhellach gan gynnwys kankanosides L (1), M (2), ac N (3), saith glycosid monoterpene acyclic gan gynnwys kankanosides O (4) a P (5), tri ffenylpropanoid, a phedwar lignan. Mae'r papur hwn yn ymdrin ag ynysu ac egluro strwythur pum cyfansoddyn newydd (1-5).

TUBULOSA CISTANCHE NATURIOL AR GYFER LLEIFIO ANGHOFIO RHYWIOL PHGS75% ECH 30% DEDDF 12%

Echdynnwyd coesynnau ffres o C. tubulosa (wedi'i drin yn Urumqi, Talaith Xinjiang, Tsieina) â methanol o dan adlif i gynhyrchu echdyniad methanolig (8.36% o'r coesynnau ffres). O'r dyfyniad methanolig, cafwyd ffracsiynau eliwiedig H2O- a MeOH (5.63% a 2.73%, yn y drefn honno) gan gromatograffeg colofn Diaion HP-20 (H2O→MeOH) fel y disgrifiwyd yn flaenorol.5) Y ffracsiwn eliwiedig MeOH oedd yn destun cromatograffi colofnau SiO2 ac ODS ac yn olaf HPLC i ddodrefnu cancanosidau L (1, 0.0026%), M (2, 0.{{27) }}001%), N (3, 0.00{{60}}7%), O (4, 0.0{{90}}2{{105}}%), a P (5, 0 .0002%), 6-deoxycatalpol3,7) (6, 0.197%), bartsioside3,7) (7, { {147}}.0583%), gluroside3,7) (8, 0.0443%), kankanoiside A3) (9, 22.3 mg, 0.0010%), asid mussaenosidig3,7) ( 10, 0.0056%), 8- asid epiloganig3,8) (11, 0.0023%), 8-asid epidooxyloganic3,7) (12, 0.0004%), asid geniposidig3,7) (13, 0.0040% ), kkananoside E3) (14, 0.0026%), (2E,6Z)-8-bD-glucopyranosyloxy-2,6-dimethyl-2,6-octadienoic acid3 ,9) (15, 31.0 mg, 0.0014%), (2E,6E)-3,7-dimethyl-8-hydroxyoctadien-1-yl-ObD-glucopyranoside10) (16, 0.0082%), 8-hydroxygeraniol 8-O-bD-glucopyranoside11) (17, 0.0044%), betulalbuside A12) (18, 0.0004%), conwydd 13) (19, 0.0003%), (chwistrellu) 20, 0.0015%), aldehyde sinapig 4-ObD-glucopyranoside14) (21, 0.0001%), ( )-pinoresinol ObD-glucopyranoside4,8,15) (22, 0.0010%), eucommin A16, (023,000), %), isoeucommin A17) (24, 0.0010%), a ( ) - syringaresinol ObD-glucopyranoside4,8,18) (25, 0.0044%).

Adeileddau Kankanosides L (1), M (2), ac N (3)

Cafwyd Kankanoside L (1) fel powdr gwyn gyda chylchdroi optegol negyddol ([a]D 26 - 45.7 yn MeOH). Roedd ei sbectrwm IR yn dangos band amsugno cryf ar 3433 ac 1{{20}}80 cm- 1 yn awgrymu moiety glycosid. Roedd peledu atom cyflym (FAB)-MS o rediad 1 yn y moddau ïon positif- a negatif yn dangos brigau ïon lled-foleciwlaidd ar m/z 371 [M Na] a 347 [M-H]-, yn y drefn honno, a'r fformiwla foleciwlaidd oedd a bennir fel C15H24O9 trwy fesuriad FABMS cydraniad uchel. Hydrolysis asid o 1 gyda 1.0 M asid hydroclorig (HCl) rhyddhau D-glwcos, a nodwyd gan ddadansoddiad HPLC gan ddefnyddio synhwyrydd cylchdro optegol.3-6) Y sbectra 1 H- a 13C-NMR o 1 (CD3OD, Tablau Dangosodd 1, 2), a neilltuwyd gan arbrofion NMR amrywiol,19) signalau y gellir eu neilltuo i bedwar methylen [d 1.43 (1H, br dd, J= ca. 5, 13 Hz, 4a-H), 1.73 ( 1H, br dd, J= ca. , 14 Hz, 6b-H), 3.50 (1H, dddd, J= 2.4, 12.5, 13.0 Hz, 3a-H), 3.83 (1H, br dd, J=

ca. 5, 13 Hz, 3b-H), 3.78, 4.12 (1H yr un, y ddau d, J= 13.1 Hz, 10-H2)], dau methines [d 2.15 (1H, dd, J=7.2, 8.9 Hz, 9-H) a 2.23 (1H, m, 5-H)], a grŵp acetal [d 4.81 (1H, d, J{{28 }}.9 Hz, 1-H)] ynghyd â moiety b-glucopyranosyl [d 4.70 (d, J= 7.9 Hz, 1 -H)]. Fel y dangosir yn Ffig. 1, dangosodd yr arbrawf sbectrosgopeg cydberthynas 1 H–1 H (1 H–1 H COSY) ar 1 bresenoldeb strwythurau rhannol wedi'u hysgrifennu mewn llinellau trwm. Yn yr arbrawf cydberthynas aml-bond heteroniwclear (HMBC) ar 1, gwelwyd cydberthnasau hirdymor rhwng y protonau a'r carbonau canlynol (1-H a 3-C, 8-C; {{). 49}}H a 1-C; 7-H a 8-C, 10-C; 9-H a 8-C; }}H2 a 7-C, 8-C; 1 -H a 1-C) fel y dangosir yn Ffig. 1. Nesaf, nodweddwyd stereostrwythur cymharol 1 gan gamsensitif Arbrawf sbectrosgopeg gwella Atgyweirio niwclear (NOESY sy'n sensitif i gyfnod), a ddangosodd gydberthynas NOE rhwng y parau proton canlynol (1-H a 3aH; 3a-H a 4a-H; 3b-H a 4b-H; 4b-H; a 5-H, 9-H; 5- H a 6b-H, 9-H; a 10-H2), fel y dangosir yn Ffig. 1. Roedd sbectra 1 H- a 13C-NMR o 1 yn orosodadwy ar y rheini o brif gyfansoddyn iridoid 6-deoxycatalpol (6), ac eithrio'r signalau dyledus i'r moiety d-lactol dirlawn. Yn olaf, rhoddodd hydrogeniad 6 1, felly eglurwyd stereostrwythur kkananoside L i fod yn 3,4- dihydro-6-deoxycatalpol (1).

TUBULOSA CISTANCHE NATURIOL AR GYFER LLINIARU ANHWYLDER CYFFROUS Y POST PHGS75% ECH 30% DEDDF 12%

Cafwyd Kankanoside M (2) fel powdr gwyn gyda chylchdroi optegol negyddol ([a]D 26 - 18.7 yn MeOH). Roedd y sbectrwm IR o 2 yn dangos bandiau amsugno ar 3433, 1736, 1655, ac 1076 cm- 1 y gellir eu priodoli i hydroxyl, d-lactone, olefin, ac ether moieties. Roedd y sbectrwm FAB-MS ïon positif o 2 yn dangos uchafbwynt ïon lled-foleciwlaidd ar m/z 353 [M Na] , a phennwyd y fformiwla moleciwlaidd fel C15H22O8 trwy fesuriad FAB-MS ïon positif cydraniad uchel. Hydrolysis asid o 2 gyda 1.0 M HCl rhyddhau D-glwcos. Dangosodd sbectra 1 H- a 13CNMR o 2 (CD3OD, Tablau 1, 2) signalau y gellir eu neilltuo i bedwar methylen [d 1.66, 2.11 (1H yr un, y ddau m, 4-H2), 2.15, 2.75 (1H yr un, y ddau m, 6-H2), 4.29 (1H, dddd, J= 2.8, 8.4, 14.3 Hz, 3b-H), 4.32, 4.51 (1H yr un, y ddau d, J{{61 }}.1 Hz, 10-H2), 4.35 (1H, dddd, J= 3.1, 6.7, 14.3 Hz, 3a-H)], dau methines [d 2.97 (1H, m, 5-H), 3.82 (1H, br s, 9-H)], olefin [d 5.94 (1H, m, 7-H)], a grŵp lacton dirlawn (d C 174.9) ynghyd â moiety bD-glucopyranosyl [d 4.32 (1H, d, J= 7.9 Hz, 1 -H)]. Fel y dangosir yn Ffig. 1, dangosodd yr arbrawf COZY 1 H–1 H ar 2 bresenoldeb adeileddau rhannol wedi'u hysgrifennu mewn llinellau trwm ac, yn arbrawf HMBC, arsylwyd cydberthnasau amrediad hir rhwng y parau proton a charbon canlynol ({{ 103}}H a 1-C; 7-H a 9-C; 9-H a 1-C, 8-C; }}H2 a 7-C, 8-C, 9-C; 1 -H a 10-C). Nodweddwyd stereostrwythur cymharol 2 gan arbrawf NOESY sy'n sensitif i gyfnod, a ddangosodd gydberthynas NOE rhwng y parau proton canlynol (3a-H a 4a-H; 3b-H a 4b-H; 4b-H a 5- H; 5-H a 6b-H, 9-H) fel y dangosir yn Ffig. 1. Felly, eglurwyd stereostrwythur 2 fel y dangosir.

Cafodd Kankanoside N (3) ei ynysu fel powdr gwyn gyda chylchdroi optegol negyddol ([a]D 25 - 24.6 yn MeOH). Yn y FAB-MS ïon positif o 3, gwelwyd uchafbwynt ïon lled-leciwlaidd ar m/z 371 [M Na] . Penderfynwyd ar y fformiwla moleciwlaidd C16H28O8 gan fesuriad FAB-MS cydraniad uchel. Hydrolysis asid o 3 ag 1.0 M HCl rhyddhau D-glwcos. Roedd data 1 H- a 13C-NMR (CD3OD, Tablau 1, 2) yn dangos signalau y gellir eu neilltuo i methyl [d 1.07 (3H, d, J= 7.2 Hz, {{ 28}}H3)], pedwar methylen {d 1.37, 1.87 (1H yr un, y ddau m, 7-H2), 1.65, 1.81 (1H yr un, y ddau m, 6-H2), [3.65 ( 1H, dd, J= 9.1, 9.8 Hz), 3.90 (1H, dd, J= 5.9, 9.8 Hz), 11-H2], a [3.70 (1H, dd, J= 3.3, 12.0 Hz), 3.88 (1H, m), 3-H2]}, pedwar methines [d 1.69 (1H, m, 4-H), 1.75 (1H, m, 9-H), 2.06 (1H, m, 8-H), 2.16 (1H, m, 5-H)], a grŵp hemiasetol [d 4.67 ( 1H, d, J= 7.4 Hz, 1-H)] ynghyd â moiety bD-glucopyranosyl [d 4.26 (1H, d, J= 7.9 Hz, {{101 }}H)]. Mae strwythur iridoid o 3 ei egluro gan 1 H - 1 H COZY a HMBC arbrofion a'r stereostructure cymharol ei nodweddu gan cyfnod-sensitif NOESY arbrawf fel y dangosir yn Ffig. 1. O ganlyniad, y sterostructure o 3 ei egluro fel y dangosir.

TUBULOSA CISTANCHE NATURIOL AR GYFER DATRYS PROBLEM RHYWIOL PHGS75% ECH 30% DEDDF 12%

Adeileddau Kankanosides O (4) a P (5)

Cafwyd Kankanosides O (4) a P (5), C16H26O8, hefyd fel powdrau gwyn gyda chylchdroadau optegol negyddol (4: [a]D 23 - 26.1; 5: [a]D 21 - 32. 7 ddau yn MeOH). Roedd y sbectra IR o 4 a 5 yn dangos bandiau amsugno yn 3433, 1696, 1647, ac 1076 cm- 1 ar gyfer 4, a 3434, 1701, 1647, ac 1{ {95}}76 cm- 1 ar gyfer 5, y gellir ei briodoli i ffwythiannau glycosidig, carboxyl, ac olefin. Dangosodd eu sbectra UV uchafswm amsugno cyffredin ar 217 nm sy'n nodi presenoldeb moiety asid carbocsilig annirlawn a,b yn y ddau ohonynt. Mae hydrolysis asid o 4 a 5 yn rhyddhau D-glwcos, ond trwy hydrolysis ensymatig â glwcosidase, rhoddodd 4 a 5 (2E,6E)-8-hydroxy-2,6-dimethyl{{37}) },6-asid octadienoig20) (4a) a (2E,6E)-8-hydroxy-3,7- deumethyl-2,{{ 47}}asid octadienoig21) (5a), yn y drefn honno. Dangosodd data 1 H- a 13C-NMR o 4 (CD3OD, Tablau 2, 3) signalau y gellir eu neilltuo i ddau methyl [d 1.71 (3H, br s, 10-H3), 1.81 (3H, d, J{{ 66}}.0 Hz, 9-H3)], tri methylen {d 2.19 (2H, br t, J= ca. 7 Hz, 5-H2), 2.36 (2H, m, 4-H2), [4.24 (1H, dd, J= 7.6, 12.0 Hz), 4.33 (1H, dd, J= 6.2, 12.0 Hz), { {96}}H2]}, a dau olefin trisubstituted [d 5.41 (1H, dddd, J= 1.2, 6.2, 7.6 Hz, 7- H), 6.75 (1H, tq, J{ {111}}.2, 1.0 Hz, 3-H)] ynghyd â rhan b-Dglucopyranosyl [d 4.34 (d, J= 7.8 Hz, 1 -H)]. Trwy gymharu signalau carbon yn y sbectrwm 13C-NMR o 4

gyda rhai 4a, arsylwyd sifft glycosylation yn y sefyllfa 8- (d C 4: 65.5; 4a: 59.4). Cadarnhawyd lleoliad y cysylltiad glwcosid hefyd gan arbrofion HMBC fel y dangosir yn Ffig. 2. O ganlyniad, eglurwyd stereostrwythur 4 i fod yn (2E,6E) bD-glucopyranosyloxy-2,{{{). 16}}dimethyl-2,6-asid octadienoig. Ar y llaw arall, roedd data 1 H- a 13C-NMR o 5 (CD3OD, Tablau 2, 3) yn dangos presenoldeb (2E,6E)-8-hydroxy{{3{0}} ,7-dimethyl-2,6-moiety asid octadienoig [d 1.70 (3H, br s, 10-H3), 2.14 (3H, br s, 9- H3), 2.24 (2H, m, 4-H2), 2.27 (2H, m, 5-H2), 4.05, 4.20 (1H yr un, y ddau br d, J= ca. 12 Hz, 8-H2), 5.47 (1H, tq, J= 7.1, 0.9 Hz, 6-H), 5.67 (1H, br s, 1-H )] ynghyd â rhan bD-glucopyranosyl [d 4.23 (d, J= 7.7 Hz, 1 -H)]. Eglurwyd cysylltedd y moiety bD-glucopyranosyl yn 5 yn seiliedig ar arbrofion HMBC fel y dangosir yn Ffig. 2. Ymhellach, gwelwyd symudiad glycosyleiddiad nodweddiadol ar gyfer y signalau yn 8-safle (d C 5: 75.6; 5a: 68.8). yn seiliedig ar y dystiolaeth a grybwyllwyd uchod, penderfynwyd mai stereostrwythur 5 oedd (2E,6E)-8-bD-glucopyranosyloxy-3,7-dimethyl-2),{103 }}asid octadienoig.

Effeithiau'r Cyfansoddion ar Sytowenwyndra a achosir gan Tiwmor Necrosis Ffactor-a (TNF-a) mewn Celloedd L929

Mae'n hysbys bod TNF-a yn cyfryngu amrywiaeth o anafiadau organau trwy ei sefydlu o apoptosis cellog. Yn achos yr afu, mae effeithiau biolegol TNF-a wedi'u cysylltu ag anaf hepatig a achosir gan docsinau hepatig, isgemia/atlifiad, hepatitis firaol, ac alcohol.22-24) Felly, ystyrir bod TNF-a yn targed pwysig i ddarganfod asiantau gwrthlidiol a hepatoprotective. Yn seiliedig ar y cysyniad uchod, fe wnaethom ymchwilio i gyfansoddion amddiffynnol rhag cynhyrchion sy'n digwydd yn naturiol ar farwolaeth celloedd TNF-a-achosir mewn celloedd L929, llinell gell TNF-a-sensitif.25) Yn flaenorol, rydym wedi adrodd

bod nifer o etholwyr o Piper chaba, 26-29) Boesenbergia rotunda, 30,31) Punica granatum, 32) Helichrysum arenarium, 33-35) a Sapindus rarak, 36-38) yn dangos effeithiau ataliol o sytowenwyndra a achosir gan TNF-a-mewn celloedd L929. Gan fod cyfansoddion ffenylethanoid C. tubulosa (eeechinacoside, acteoside, ac isoacteoside, ac ati) 5) hefyd yn atal y cytotoxicity hwn, fe wnaethom archwilio ymhellach iridoid, ffenylpropanoid, a chyfansoddion lignan fel y dangosir yn Nhabl 4. O ganlyniad, mae kkanoside A (9, ataliad: 16.3± 2.0% yn 1 00 mM), asid mussaenosidig (10, 44.7± 8.7%), 8-asid epigamig (11, 10.7± 0.4%), 8-hydroxy geraniol 8-ObD- canfuwyd bod glucopyranoside (17, 21.3± 2.4%), a ( )-pinoresinol ObD-glucopyranoside (22, 22.3 ± 1.6%), yn dangos gweithgaredd sylweddol. Er bod eu gweithgareddau yn wannach na gweithgareddau echinacoside (IC50= 31.1 mM), acteoside (17.8 mM), ac isoaceteoside (22.7 mM), y prif gyfansoddion ffenylethanoid.5)

TUBULOSA CISTANCHE NATURIOL AR GYFER GWELLA SWYDDOGAETH RHYWIOL PHGS75% ECH 30% DEDDF 12%