Mahanimbine Gwell Diffygion Cof sy'n Gysylltiedig â Heneiddio mewn Llygod Trwy Drosglwyddiad Colinergig Gwell A Straen Ocsidiol Ataliedig, Lefelau Amyloid, A Niwro-lid Rhan 2

2.6. Gwerthusiad o Lefelau Malondialdehyde (MDA) a Glutathione (GSH).

Gan ddefnyddio citiau sydd ar gael yn fasnachol, dadansoddwyd y lefelau MDA a GSH mewn samplau ymennydd (Cayman Chemical Company, Ann Arbor, MI, USA).

Wrth i wyddoniaeth a thechnoleg barhau i ddatblygu, mae gwyddonwyr yn ceisio datgelu dirgelion gweithgareddau seicolegol dynol dirgel a phwysig fel cof, meddwl ac ymwybyddiaeth. Yn eu plith, mae astudio samplau ymennydd yn cael ei ystyried yn faes sy’n peri pryder mawr oherwydd gall ein helpu i ddeall y berthynas rhwng y cof a’r ymennydd yn ddyfnach.

Cliciwch gwybod atchwanegiadau i hybu cof

Yn gyntaf oll, beth yw sampl ymennydd? Yn syml, mae'n cyfeirio at ddull o ddal, cadw, a dadansoddi niwronau (celloedd yr ymennydd) a'u cysylltiadau yn yr ymennydd. Yn nhermau lleygwr, mae fel map o'r ymennydd sy'n gallu dangos y cysylltiadau a'r swyddogaethau rhwng gwahanol ardaloedd.

Nesaf, gadewch i ni siarad am y berthynas rhwng samplau ymennydd a'r cof. Mae ymchwil wyddonol wedi dangos bod cysylltiad agos rhwng ein cof a strwythur yr ymennydd. Pan fyddwn yn dysgu gwybodaeth newydd, mae cysylltiadau niwronaidd newydd yn cael eu ffurfio yn yr ymennydd, ac mae'r cysylltiadau hyn yn dod yn gryfach dros amser. Trwy astudio samplau o'r ymennydd, mae gwyddonwyr yn gweithio'n galed i astudio'r cysylltiadau ymennydd hyn a cheisio deall sut i wella dysgu a chof trwyddynt.

Yn ogystal, trwy ddadansoddi samplau ymennydd, gall gwyddonwyr hefyd ddod o hyd i rai pethau diddorol. Er enghraifft, canfuwyd bod yr hippocampus yn yr ymennydd dynol yn faes sydd â chysylltiad agos â'r cof. Mae hyn oherwydd bod gan yr hippocampus swyddogaeth bwysig yn yr ymennydd dynol i drosi gwybodaeth o gof tymor byr i gof hirdymor.

Felly, mae gwerth ymchwil sampl ymennydd nid yn unig i'n helpu i ddeall y berthynas rhwng yr ymennydd a'r cof yn well ond hefyd i'n helpu i ddarganfod achosion sylfaenol anhwylderau cof neu glefydau gwybyddol, a thrwy hynny hyrwyddo trin ac atal clefydau cysylltiedig.

Yn olaf, dylem gymryd golwg gadarnhaol ar gymorth ymchwil sampl ymennydd ar y cof. Er bod llawer o broblemau gwyddonol i'w datrys o hyd, gyda gwelliant parhaus gwyddoniaeth a thechnoleg, credwn y bydd mwy o ddatblygiadau arloesol yn y dyfodol. Gadewch inni edrych ymlaen at y dyfodol gyda'n gilydd ac edrych ymlaen at wneud ein hymennydd yn ddoethach trwy ymchwil wyddonol! Gellir gweld bod angen i ni wella cof. Gall Cistanche wella cof yn sylweddol oherwydd bod gan Cistanche effeithiau gwrthocsidiol, gwrthlidiol a gwrth-heneiddio, a all helpu i leihau adweithiau ocsideiddiol a llidiol yn yr ymennydd, a thrwy hynny amddiffyn iechyd y system nerfol. Yn ogystal, gall Cistanche hefyd hyrwyddo twf ac atgyweirio celloedd nerfol, a thrwy hynny wella cysylltedd a swyddogaeth rhwydweithiau niwral. Gall yr effeithiau hyn helpu i wella cof, gallu dysgu, a chyflymder meddwl, a gallant hefyd atal camweithrediad gwybyddol a chlefydau niwroddirywiol rhag digwydd.

Mesurwyd lefelau MDA a GSH mewn nanomolau / miligramau o brotein a micromolau / miligramau o brotein, yn gyfatebol. Dilynwyd techneg Bradford i amcangyfrif y cynnwys protein ym meinweoedd yr ymennydd.

2.7. Amcangyfrif o Weithgareddau Acetylcholine (ACh) ac Acetylcholinesterase (AChE).

Dadansoddwyd y lefelau ACh ac AChE yn homogenad yr ymennydd gan ddefnyddio citiau masnachedig (System BioAssay, Hayward, CA, UDA), sef pecyn EnzyChromTM AcetylcholineAssay a phecyn Assay Acetylcholinesterase QuantiChromTM, yn y drefn honno.

Canfuwyd dwyster ffurfiant lliw mewn darllenydd microplate ar 570 a 412 nm, yn y drefn honno. Mynegwyd lefel yr ACh a gafwyd fel µM, tra mynegwyd gweithgaredd AChE fel U/L.

2.8. Mesur Lefelau -Amyloid

Defnyddiwyd pecynnau ELISA gan Cloud Clone Corp (Katy, TX, UDA) i werthuso lefelau A 1-40 ac A 1-42 mewn homogenadau ymennydd. Defnyddiwyd darllenydd microplate wedi'i osod i 450 nm i fesur ffurfiant y lliw.

Roedd y crynodiad o A 1-40 ac A 1-42 yn y sampl yn ymwneud yn wrthdro â dwyster y lliw. Cynrychiolwyd y canlyniadau yn nhermau cyfanswm protein pg/mLof.

2.9. Asesiad o -Secretase (BACE-1) Activity yn Mouse Brain

Mesurwyd gweithgaredd BACE-1 yn y homogenad gan ddefnyddio pecyn wedi'i fasnacheiddio (SensoLyte® -Secretase Assay Kit o AnaSpec, Fremont, CA, UDA). Mae canfod y pecyn yn seiliedig ar peptid, sy'n cael ei hollti gan BACE-1, ac mae'r signal yn cael ei ganfod gan ddefnyddiospectroffotomedr gyda chyffro/allyriad ar 490/520 nm.

2.10. Mesur Cyfanswm Gweithgaredd Cyclooxygenase (COX).

Amcangyfrifwyd gweithgaredd cyfanswm COX yn homogenad yr ymennydd gan ddefnyddio pecyn ELISA (Cwmni Cemegol Cayman, Ann Arbor, MI, UDA). Roedd y ffurfiant lliw mewn cyfrannedd union â chyfanswm gweithgaredd COX. Defnyddiwyd darllenydd microplate i ddarllen yr amsugnedd ar 590 nm.

2.11. Mynegiant Gene o BACE-1 a COX-2

Dadansoddwyd mynegiant BACE-1 a COX-2 mewn RNA ymennydd ynysig gan ddefnyddioRT-PCR. Y tri phrif gam dan sylw oedd: echdynnu RNA, trosi RNA tocDNA, ac adwaith cadwyn polymeras amser real (RT-PCR).

Mae'r holl gamau dan sylw wedi'u darparu gan Qiagen Valencia, CA, UDA. Yn gyntaf, echdynnwyd RNA o sampl yr ymennydd a gadwyd yn yr RNA. Yn y cam hwn, golchomogeneiddiwyd tua 100 mg o sampl meinwe'r ymennydd gan ddefnyddio TissueRuptor mewn 1 ml o adweithydd lysis QIAzol a'i ddeor am 5 munud ar dymheredd ystafell.

Ychwanegwyd y cymysgedd o lysate ymennydd ac adweithydd lysis QIAzol â chlorofform a'i ysgwyd yn egnïol am 15 s, ac yna deoriad ar dymheredd ystafell am 2-3 munud.

Cafodd y cymysgedd ei allgyrchu ar 12,000 × g am 15 munud ar 4 ◦C, ac roedd y tri cham yn ffurfio cyfnod di-liw (cyfnod uchaf), a oedd yn cynnwys RNA a chasglwyd gydag 1 cyfaint o 70% ethanol wedi'i ychwanegu ato mae'n.

Nesaf, trosglwyddwyd 700 µL o'r sampl i golofn sbin a'i allgyrchu ar dymheredd ystafell ar 8000 × g am 15 s; cafodd y llif-drwodd ei daflu. Yn dilyn ychwanegu 700 µL o glustogfa RW1 (a ddarperir yn y pecyn) a centrifugio am 15 s ar 8000 × g, taflwyd y llif drwodd. Parhawyd â'r cam gan ychwanegu RPE byffer 500 µL (a ddarperir yn y pecyn) a centrifugation am 15 s ar 8000 × g.

Ailadroddwyd y cam hwn ddwywaith i olchi unrhyw halogiad organig yn yr RNA. Yn olaf, cafodd RNA ei osgoi trwy ychwanegu 50 µL o ddŵr di-RNAse a'i allgyrchu am 1 munud ar 8000 × g.

Mesurwyd crynodiad RNA gan ddefnyddio anodrop (nanodrop 2000c, Thermofisher Scientific, Waltham, MA, UDA). Yna troswyd yr RNA a echdynnwyd yn cDNA, a ddefnyddiwyd i berfformio RT-PCR.

Yn gyntaf, ychwanegwyd RNA templed 14 µLof gyda'r prif gymysgedd trawsgrifio gwrthdro 6 µL (1 µL o Quantiscript reverse transcriptase, 4 µL o byffer Quantiscript RT, 1 µL o gymysgedd preimio RT). Wedi cymysgu, cafodd ei ddeor am 15 munud ar 42 ◦C, ac yna deoriad ar 95 ◦C am 3 minto anactifadu'r Quantiscript reverse transcriptase.

Y cynnyrch a ffurfiwyd oedd cDNA, ac yn olaf, cynhaliwyd RT-PCR. Pennwyd yr amodau RT-PCR fel 95 ◦C am 5 munud ac yna 40 cylch ar 95 ◦C am 10 munud a 60 ◦C am 30 munud.

Cafodd mynegiant genynnau BACE-1 aCOX-2 ei feintioli a'i normaleiddio yn erbyn y ddau enyn cadw tŷ ( -actinand GAPDH). Roedd preimwyr dilyniannau niwcleotid yn seiliedig ar BACE llygoden-1 (blaen50-GCATGATCATTGGTGGTATC-30: cefn 50-CCATCTTGATCTTGAC-CA-30) ​​aCOX-2 (ymlaen 50-GTGTGCGACATACTCAAGCAGGA) dilyniannau cDNA. -30: gwrthdroi 50-TGAAGTGGTAACCGCTCAGGTG-30), GAPDH (ymlaen 50-TGACAGGATGCAGAAGGAGA-30: cefn 50-GCTGGAAGGTGGACAGTGAG-30), a -actin (ymlaen 50-TGACAGATGCAGAAGGAGA-30: cefn 50-GCTGGAAGGTGGACAGTGAG-30).

Cafwyd mesuriadau fflworoleuedd, a defnyddiwyd meddalwedd Rotor-Gene 6000 i'w gwerthuso (Qiagen, Hilden, yr Almaen).

Cyflwynwyd canlyniadau fel y lefelau mynegiant yn dilyn normaleiddio i'r genyn cadw tŷ, sef B-actin a GAPDH gan ddefnyddio'r dull CT cymharol (cylch trothwy). Defnyddiwyd hafaliad (1) i gyfrifo mynegiant genynnau'r sampl.

Cafwyd gwerth CT pob sampl yn seiliedig ar y gromlin safonol a gynhyrchwyd ar gyfer pob genyn (genyn targed a genyn cyfeirio).

∆∆CT=∆ sampl CT − ∆ rheolaeth CT (1)

lle

∆Sampl CT: gwerth CT y genyn targed − CT gwerth genyn cyfeirio

∆ Rheolaeth CT: gwerth CT y genyn targed − CT gwerth genyn cyfeirio

2.12. Dadansoddiad Ystadegol

Cyflwynwyd data arbrofol fel cymedr ± SEM. Defnyddiwyd gweithdrefn ANOVA unffordd (fersiwn Graff Pad 9, GraphPad Software Inc., La Jolla, CA, UDA) a phrawf hoc Tukey-Kramerpost i gategoreiddio amrywiadau ystadegol. Diffiniwyd Sylweddol fel gwerth tebygolrwydd o 0.05.

3. Canlyniadau

3.1. Cof Gwell Mahanimbine mewn Llygod Henoed

Archwiliwyd dysgu gofodol a gallu cof mahanimbine yn y model llygoden gan ddefnyddio'r prawf MWM. Mesurwyd hwyrni dianc (EL), pellter dianc (ED), a'r amser a dreuliwyd yn y cwadrant targed.

Ar ben hynny, ystyriwyd gweithgaredd locomotor hefyd yn seiliedig ar gyflymder nofio cyfartalog llygod. Mae Ffigur 2A yn dangos bod gan y grŵp rheoli oedrannus EL dipyn hirach o ddiwrnod 1 heddiw 3 (22.05 ± 1.70 s, 21.35 ± 1.85 s, 19.96 ± 2.34 s; p < 0.001;

Datgelodd bod llygod mawr wedi sefydlu diffyg sylweddol mewn dysgu a swyddogaeth cof yn yr MWMtest. Fodd bynnag, dangosodd triniaeth lafar gyda gwahanol ddosau (1 a 2 mg / kg) o mahanimbine wrthdroi'r newidiadau uchod yn EL o lygod oedrannus.

Y gwerthoedd EL ar gyfer y grŵp mahanimbin 1 mg/kg oedd 22.01 ± 1.60 s, 15.88 ± 1.54 s (p < 0.01), a8 .26 ± 0.93 s (p < 0.001) ar gyfer dyddiau 1, 2, a 3, yn gyfatebol â'r agedcontrol, tra bod yr EL gwerthoedd ar gyfer y grŵp mahanimbin 2 mg/kg oedd 16.09 ± 0.33 s(p < 0.05), 17.14 ± 0.57 s (p < 0.05), 10.57 ± 0.86 s (p < 0.01), yn y drefn honno, o'u cymharu â'r hen reolaeth. Ar ddiwrnod 3, nid oedd yr EL o'r ddau grŵp (1 a 2 mg/kg) o mahanimbine yn sylweddol wahanol i'r rheolydd ifanc.

Ffigur 2. Effaith mahanimbine ar (A) cuddni dianc, yr amser a gymerir i ddod o hyd i'r llwyfan cudd. (B) Pellter dianc, pellter a deithiwyd o'r man cychwyn hyd nes dod o hyd i'r llwyfan cudd; (C) cyflymder cyfartalog, cyflymder nofio anifail i ddod o hyd i'r llwyfan cudd; (D) prawf stiliwr, oedran llygod'scanran yr amser a dreuliwyd yn y cwadrant targed gan ddefnyddio prawf drysfa ddŵr Morris. Cafwyd gwelliannau sylweddol mewn cuddni dianc a phellter dianc gyda mahanimbine mewn llygod oedrannus.

Yn ogystal, cynyddodd y driniaeth yr amser a dreuliwyd yn y cwadrant targed o lygod oedrannus. Mynegwyd yr holl ddata fel cymedr ± SEM (n {0}}). ANOVA unffordd (diwrnod 1: F(3,2{0)=11.74, p < 0.001, diwrnod 2: F(3,20)=17.38,p < 0.001 a diwrnod 3: F(3,2{{69) }})=14.88, p < 0.001 ar gyfer cuddni dianc diwrnod 1: F(3,20) {{ 26}}.22, p < 0.001, diwrnod 2: F(3,20)=28.62, p < 0.001, a diwrnod 3: F(3,20) {{40 }}.15, p < 0.001 ar gyfer pellter dianc; diwrnod 1:F(3,20)=1.939, p > 0.05, diwrnod 2: F(3,20)=3.467, p > 0.05, a diwrnod 3: F(3,20)=2.497, p > 0.05 ar gyfer cyfartaledd cyflymder; Prawf cymariaethau lluosog Tukey-Kramer.** p < 0.01 ac *** p < 0.001 mewn cymhariaeth â rheolaeth ifanc, # p < 0.05, ## p < 0.01, a ### p < 0.001 mewn cymhariaeth â rheolaeth oedrannus.

Mae Ffigur 2B yn cynrychioli effaith mahanimbine ar y pellter a deithiwyd o'r man cychwyn nes dod o hyd i'r llwyfan cudd. Teithiodd y grŵp rheoli oed y pellter hiraf cyn dod o hyd i'r platfform cudd ar ddiwrnodau 1, 2, a 3 (4.79 ± 0.73 m,4.34 ± {{10}}.11 m, a 4.38 ± 0.59 m; p < {{20}}.001; 0.24 m, a 0.78 ± 0.14 m yn y drefn honno).

Fe wnaeth llygod oedrannus a gafodd 1 mg/kg o mahanimbine leihau'r ED yn sylweddol (2.17 ± 0.11 m (p < 0.01),2.10 ± { {13}}.24 m (p < 0.001), 0.89 ± 0.18 (p < 0.001);

Gwelwyd gostyngiad cyfochrog sylweddol mewn ED mewn llygod a weinyddir 2 mg/kg o mahanimbine ar gyfer diwrnodau 1, 2, a 3 (2.43 ± 0.28 (p < 0.01) , 2.78 ± 0.32(p < 0.001), 1.47 ± 0.30 (p < 0.001);

O ran cyfartaledd cyflymder nofio yn ystod y dasg, ni welwyd unrhyw wahaniaethau rhwng y grwpiau (Ffigur 2C). Mae hyn yn dangos na newidiodd mahanimbine unrhyw weithgaredd locomotor yn ymwneud â gweithrediad modur mewn llygod oedrannus.

Ar ôl 24 awr o'r dasg wirioneddol, cynhaliwyd sesiwn prawf archwilio (diwrnod 30) i werthuso cadw cof anifeiliaid. Treuliodd y grŵp rheoli oed (Ffigur 2D) lai o amser yn y cwadrant targed (10.10 ± 1.14% (p < 0.001)) a dangosodd ostyngiad sylweddol o amser yn y cwadrant targed o gymharu â'r rheolaeth ifanc (19.53 ± 2.56%), tra bod llygod oed a gafodd eu trin â 1 mg/kg (20.27 ± 4.84%, p <0.01) a 2 mg/kg (17.85 ± 1.56%, p < 0.05) o mahanimbine trwy gavage llafar yn dangos yn sylweddol treulio mwy o amser yn y cwadrant targed o gymharu â'r hen ystafell reoli.

3.2. Effaith Mahanimbine ar Lefelau MDA a GSH yn Ymennydd Llygoden Henoed

Roedd y lefelau MDA yn y rheolydd oedrannus (Ffigur 3A) yn sylweddol uwch (11.54 ± 0.88 µM;p < 0.001) yn ymwneud â rheolaeth yr ifanc (4.37 ± 0.09 µM). Roedd y cynnydd yn lefel MDA yn homogenad yr ymennydd o lygod oedrannus yn adlewyrchu gweithgaredd LPO uwch, a ddangosodd straen ocsideiddiol drychiad ym meinwe'r ymennydd.

I'r gwrthwyneb, gostyngodd gweinyddu mahanimbine(1 mg/kg, po) lefelau MDA yr ymennydd yn sylweddol mewn llygod oedrannus (7.56 ± 0.35 µM;p < 0.001) o gymharu i'r hen reolaeth. Ni nodwyd unrhyw newidiadau sylweddol gyda 2 mg/kgof mahanimbine (9.65 ± 0.51 µM).

Roedd maint y glutathione (GSH) yn homogenad yr ymennydd yn awgrymu potensial gwrthocsidiol mahanimbine. Dangosodd dadansoddiad ystadegol o GSH (Ffigur 3B) wanhad sylweddol rhwng yr oedran grŵp rheoli (0.0028 ± 0.0004 µmoles/ mg; p < 0.001) pan yn gysylltiedig â'r rheolydd ifanc (0.0447 ± 0.0029 µmoles/mg).

Canfu'r astudiaeth bresennol hefyd fod triniaeth gyda mahanimbine (1 a 2 mg/kg, po) wedi gwrthdroi'r lefel GSH, a oedd yn sylweddol uwch (0.{4}}372 ± 0.{{8} }{{10}}38 µmoles/mg, p < 0.001 a 0.0282 ± 0.0041 µmoles/mg,p < 0.001;

3.3. Fe wnaeth Mahanimbine Wella'r Gweithgaredd Cholinergic yn Ymennydd Llygoden Henoed

Mae Ffigur 4A yn dangos y lefelau ACh yn ymennydd y llygoden. Gostyngwyd ACh yn gymharol (p < 0.001) yn yr hen reolydd (17.79 ± 1.54 µM) fel y'i cyfatebwyd i'r rheolydd ifanc(34.82 ± {0. 31 µM). Fodd bynnag, cynyddodd gweinyddu mahanimbine (1 a 2 mg/kg) yn sylweddol (35.61 ± 0.85 µM, (p < 0.001); 39.42 ± 0.88 µM (p < 0.001); yn y drefn honno) lefel ACh yn yr ymennydd sy'n gysylltiedig â rheolaeth oedrannus.

Mae Ffigur 4B yn cynrychioli effaith mahanimbine yn erbyn gweithgaredd ACHE yn yr ymennydd. Roedd gweithgarwch AChE yn y grŵp rheoli oed (204.80 ±1.55 U/L) wedi'i ddyrchafu'n sylweddol (p < 0.001) yn debyg i'r rheolydd ifanc (51.06 ± 1.36 U/L).

Serch hynny, awgrymwyd bod yr AChElevel wedi'i atal â thriniaeth 1 mg/kg (62.03 ± 4.64 U/L; p < 0.001)a 2 mg/kg (43.73 ± 4.76 U /L; p < 0.001) mahanimbine pan fydd yn gysylltiedig â'r rheolaeth oed. Yn gyffredinol, cynhyrchodd gweinyddu dos uchel o mahanimbine (2 mg/kg, po) ganlyniadau gwell ar gyfer gweithgaredd colinergig gan ei fod yn gwella lefel ACh ac yn atal gweithgareddAChE.

For more information:1950477648nn@gmail.com