Cyfansoddion Monoterpene O Cistanche Tubulosa — Adeileddau Cemegol Kankanosides A—E a Kankanol—

Cyswllt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-bost:audrey.hu@wecistanche.com

Haihui XIE, Toshio MORIKAWA, Hisashi MATSUDA, Seikou NAKAMURA, Osamu MURAOKA, a Masayuki YOSHIKAWA

Haniaethol

Cafodd pedwar glycosid iridoid newydd, kankanosides A (1), B (2), C (3), a D (4), iridoid clorinedig, kankanol (5), a glycosid monoterpene acyclic, kankanoside E (6), eu hynysu o echdyniad methanolig coesynnau sych Cistanche tubulosa (SCHRENK) R. WIGHT (Orobanchaceae) ynghyd ag 16 o gyfansoddion hysbys. Penderfynwyd ar strwythurau'r cyfansoddion newydd hyn (1-6) yn seiliedig ar dystiolaeth gemegol a ffisiogemegol.

Geiriau allweddol:Cistanche tubulosa; kankanoside; kankanol; iridoid; monoterpene; Orobanchaceae

Cistanche tubulosa(SCHRENK) R. WIGHT (Orobanchaceae)yn blanhigyn parasitig lluosflwydd sy'n tyfu ar wreiddiau rhywogaethau Salvadora neu Calotropis, ac wedi'i ddosbarthu yng Ngogledd Affrica, Arabia, a gwledydd Asiaidd.1) Mae coesynnau'r planhigyn hwn (Kanka-nikujuyou yn Japaneaidd) wedi'u defnyddio'n draddodiadol ar gyfer trin analluedd, anffrwythlondeb , lumbago, a gwendid y corff.2) Yn flaenorol, roedd nifer o iridoidau, monoterpenoidau, ffenylethanoidau, a lignans wedi'u hynysu o C. tubulosa Tsieineaidd a Phacistanaidd. 1,3-7) Yn ystod ein hastudiaethau cyfresol ar gyfansoddion bioactif o feddyginiaethau naturiol Tsieineaidd, 8-18) pedwar glycosidau iridoid newydd, kankanosides A (1), B (2), C (3), a D (4). ), roedd iridoid clorinedig, kankanol (5), a glycoside monoterpene acyclic, kkanoside E (6), wedi'u hynysu o echdyniad methanolig y feddyginiaeth lysieuol hon ynghyd ag 16 o gyfansoddion hysbys gan gynnwys 12 monoterpenes (7-18). Mae'r papur hwn yn ymdrin ag ynysu ac egluro strwythur cyfansoddion monoterpene newydd (1-6).

Cistanche tubulosa

Y dyfyniad methanolig o goesynnau sych oCistanche tubulosa(26.8 y cant o'r feddyginiaeth lysieuol hon) yn destun cromatograffaeth colofn gel silica cyfnod arferol a gwrthdroi ac ailadroddodd HPLC i roi cancanosidau A (1, 0.0{{10). }}54 y cant ), B(2, 0.030 y cant ), C (3, 0.00 27 y cant ), a D (4, {{40}}.0015 y cant ), kankanol (5, 0.0} {66}}34 y cant ), a kkanoside E (6, 0.027 y cant ) ynghyd ag asid mussaenosidig19) (7, 0.020 y cant ) , asid geniposidic19) (8, 0.030 y cant), 8-asid epiloganic7) (9, 0.033 y cant ), gluroside19) (10, 0.14 y cant ), antirrhide20) (11, 0.0079 y cant), ajugol19) (011, 19). y cant ), bartsioside19) (13, 0.21 y cant ), 6-deoxycatalpol19) (14, 0.11 y cant ), argyol21) (15, 0.0030 y cant ), cistanin22,23) (16, 0.0040 y cant ), cis) lorin22 17, 0.0035 y cant ), (2E,6Z)-8-bD-glucopyranosyloxy-2,6-dimethyl{75}},6-asid octadienoig24) (18,0.0028 y cant ), D mannitol25) (4.19 t ercent ), wridin25) (0.0069 y cant), (3R)-3-hydroxy-2- pyrrolidinone26,27) (0.0020 y cant), a (3R)-3-hydroxy-1-methyl{ {97}}pyrrolidinone27) (0.0059 y cant ).

Strwythur Kankanoside A (1) Cafwyd Kankanoside A (1) fel powdr amorffaidd ac roedd yn arddangos cylchdro optegol negyddol ([a] D 25 10 gradd 7.4 yn MeOH). Dangosodd sbectrwm IR 1 fand amsugno ar 1647 cm 1 y gellir ei neilltuo i swyddogaeth olefin yn ogystal â bandiau amsugno cryf ar 3410 a 1076 cm 1 sy'n awgrymu lleithder glycosid. Yn y bomio atom cyflym ïon positif a negyddol (FAB)-MS o 1, gwelwyd brigau ïon lled-leciwlaidd yn m/z 369 (M Na) a 345 (MH), a datgelodd dadansoddiad FAB-MS cydraniad uchel y moleciwlaidd fformiwla o 1 i fod yn C16H26O8. Hydrolysis asid o 1 gydag asid hydroclorig 1.0 M (HCl) rhyddhau D-glwcos, a nodwyd gan ddadansoddiad HPLC gan ddefnyddio synhwyrydd cylchdro optegol.8,10-12,15-18) Yr 1 H- (CD3OD, Tabl 1) a Dangosodd sbectra 13C-NMR (Tabl 2) o 1, a neilltuwyd gan arbrofion NMR amrywiol,28) signalau y gellir eu neilltuo i ddau methyl [d 1.31 (s, 10-H3), 1.51 (br s, {{47} }H3)], dau methylen [d 1.49, 2.02 (m, 6a- a 6b-H), 1.64, 1.67 (y ddau m, 7b- a 7a-H)], dau fethine [d 2.21 (dd, J 2.7 , 9.5 Hz, 9-H), 2.71 (m, 5-H)], a grŵp a,b-annirlawn acetal [d 5.33 (d, J 2.7 Hz, 1-H ), 5.95 (br s, 3-H)] ynghyd â moiety b-glucopyranosyl [d 4.62 (d, J 7.9 Hz, 1 -H)]. Fel y dangosir yn Ffig. 1, dangosodd yr arbrawf sbectrosgopeg cydberthynas 1 H–1H (1 H–1 H COSY) ar 1 bresenoldeb strwythurau rhannol wedi'u hysgrifennu mewn llinellau trwm. Yn yr arbrawf cydberthyniadau bond lluosog heteroniwclear (HMBC) ar 1, sylwyd ar gydberthnasau hirdymor rhwng y protonau a'r carbonau canlynol (3-H, 1 -H a 1-C; 11- H3 a 3-C; 3-H, 5-H, 6-H2, 9-H, 11-H3 a 4- C ; 11-H3 a 5-C; 10-H3 a 7-C; 1-H, 7-H2, 9-H, 10-H3, a 8-C; 10-H3 a 9-C; 7-H2 a 10-C) fel y dangosir yn Ffig. 1. Rhoddodd hydrolysis ensymatig o 1 gyda b-glucosidase aglycon, kankagenin a (1a) fel y dangosir yn Ffig. 3. Wrth gymharu'r sbectrwm 13C NMR ar gyfer 1 â'r rheini ar gyfer 1a, datgelwyd y symudiad glycosyleiddiad o amgylch y safle 1- yn 1 [1: dC 94.1 ({1-C), 134.6 (3-C), 53.3 (9-C); 1a: dC 92.9 ({1-C), 135.3 (3-C), 54.7 (9-C)]. Felly, eglurwyd hefyd fod cysylltedd y moiety bD-glucopyranosyl yn 1 yn 1-safle 1a. Nesaf, nodweddwyd stereostrwythur cymharol 1 gan arbrawf sbectrosgopeg gwella Overhauser niwclear (NOESY), a ddangosodd gydberthynas NOE rhwng y parau proton canlynol (1-H a 10-H3; 3-H a 11-H3; 5-H a 6b-H, 9-H; 6b-H a 7b-H; 7a-H a 10-H3; 7b-H a {{ 190}}H) fel y dangosir yn Ffig. 2. Yn olaf, penderfynwyd cyfluniad absoliwt y safle 1- yn 1 trwy gymhwyso rheol shifft glycosyleiddiad 13C NMR o 1,1 -disacarid,29) a ddarganfuwyd i'w gymhwyso i'r cyfansoddion hemiacetal.30,31) Cadarnhawyd bod stereostrwythur y 1-sefyllfa yn 1 yn cael ei chynnal yn 1a drwy gymharu dadansoddiad 1 H- NMR gan gynnwys yr arbrawf NOESY. Canfuwyd bod y gwerthoedd sifft glycosylation [Dd 1.2 ppm (1 -C) a 0.9 ppm (1- C), yn pyridine-d5] yn nodweddiadol o'r cyfuniad R, Rhemiacetal, a oedd yn cyfateb i'r stereostrwythur absoliwt o 1 fel y dangosir yn Ffig. 3. O ganlyniad, penderfynwyd mai cyfluniad S oedd y ffurfwedd absoliwt yn 1-sefyllfa 1, ac eglurwyd stereostrwythur absoliwt 1 fel y dangosir.

Roedd strwythurau Kankanosides B (2) a C (3) Kankanoside B (2) hefyd yn cael eu hynysu fel powdr amorffaidd gyda chylchdroi optegol negyddol ([a] D 26 118.7 gradd yn MeOH). Roedd y sbectrwm IR o 2 yn dangos bandiau amsugno ar 3410, 1647, ac 1{{5{{80}}}}85 cm 1 y gellir eu priodoli i ffwythiannau hydrocsyl, olefin, ac ether. Pennwyd fformiwla foleciwlaidd C15H24O10 o 2 gan gopaon ïon lled-foleciwlaidd mewn ïon positif FAB-MS a chan FAB-MS cydraniad uchel. Hydrolysis asid o 2 gyda 1.0 M HCl rhyddhau D-glwcos, a nodwyd gan ddadansoddiad HPLC gan ddefnyddio synhwyrydd cylchdro optegol.8,10-12,15-18) Yr 1 H- (CD3OD, Tabl 1) a 13C-NMR ( Dangosodd Tabl 2) sbectra28) o 2 signalau y gellir eu neilltuo i ddau methylen [d 1.40 (DDD, J 5.2, 7.3, 13.5 Hz, 6a-H), 2.52 (DDD, J 7.0, 9.2, 13.5 Hz, 6b-H), 3. , 3.99 (y ddau d, J 11.9 Hz, 10-H2)], pedwar methines [d 2.21 (dd, J 6.4, 8.6 Hz, 9-H), 2.83 (m, 5- H), 4.02 (dd, J 5.2, 7.0 Hz, 7-H), 5.49 (d, J 6.4 Hz, 1-H)], a pâr cisolefifin [d 4.95 (dd, J 4.0 , 6.1 Hz, 4-H), 6.22 (dd, J 1.8, 6.1 Hz, 3-H)], ynghyd â moiety b-glucopyranosyl [d 4.72 (d, J 7.9 Hz, 1 - H)]. Roedd y signalau proton a charbon yn nata 1 H- a 13C-NMR o 2 yn debyg i rai 6-deoxycatalpol (14), heblaw am y signalau oherwydd y 7- a 8- swyddi. Fel y dangosir yn Ffig. 1, dangosodd yr arbrawf COZY 1 H–1 H ar 2 bresenoldeb adeileddau rhannol wedi'u hysgrifennu mewn llinellau trwm ac, yn arbrawf HMBC, arsylwyd cydberthnasau amrediad hir rhwng y parau proton a charbon canlynol ({{ 122}}H, 1 -H a 1-C; 1-H a 3-C; 10-H2 a 7- C; 1-H; 1-H , 7-H, 9-H, 10-H2, a 8-C; 7-H, 10-H2 a 9-C ; 7-H a 10-C). Nodweddwyd stereostrwythur cymharol 2 gan yr arbrawf NOESY, a ddangosodd gydberthynas NOE rhwng y parau proton canlynol (1-H a 10-H2; 3- H a 4-H; 5-H a 6b-H, 9-H; 6b-H a 7-H; 7-H a 9-H) fel y dangosir yn Ffig. 2. Yn olaf, esgorodd triniaeth alcalïaidd o 14 gyda photasiwm hydrocsid dyfrllyd 5 y cant (KOH) 2 a 19, 32) fel bod stereostrwythur 2 yn cael ei egluro.

Cafodd Kankanoside C (3) ei ynysu fel powdr amorffaidd gyda chylchdroi optegol negyddol ([a]D 26 34.0 gradd yn MeOH). Yn y FAB-MS ïon negatif o 3, sylwyd ar bâr o gopaon ïon cwasimoleciwlaidd isotop yn m/z 399 a 401 (MH). Penderfynwyd mai'r fformiwla foleciwlaidd o 3 oedd C15H25ClO10 trwy fesuriad FAB-MS cydraniad uchel. Hydrolysis asid o 3 gyda 1.0 M HCl rhyddhau D-glwcos, a nodwyd gan ddadansoddiad HPLC gan ddefnyddio synhwyrydd cylchdro optegol.8,10-12,15-18) Yr 1 H- (CD3OD, Tabl 1) a 13C-NMR ( Dangosodd Tabl 2) sbectra28) o 3 signalau y gellir eu neilltuo i dri methylen [d 1.70 (br dd, J ca. 3, 13 Hz, 4a-H), 2.70 (br dd, J ca. 6, 13 Hz, 4b-H) , 1.68 (br d, J ca. 13 Hz, 6a H), 2.44 (m, 6b-H), 4.01, 4.04 (y ddau d, J 11.3 Hz, 10-H2)], pum methines [d 2.47 (dd, J 2.5, 7.9 Hz, 9-H), 2.61 (m, 5- H), 3.94 (br s, 7-H), 5.10 (br d, J ca. 3 Hz, 3-H), 5.48 (d, J 2.5 Hz, 1-H)], a moiety b-glucopyranosyl [d 4.60 (d, J 8.0 Hz, 1 -H)]. Roedd y signalau proton a charbon yn sbectra 1 H- a 13C-NMR o 3 yn orosodadwy ar rai 2, ac eithrio'r signalau oherwydd y safleoedd 3- a 4-. Mae safleoedd bD-glucopyranosyl a swyddogaeth clorin yn 3 eu hegluro o'r H-H COZY a HMBC arbrofion fel y dangosir yn Ffig. 1. O ganlyniad, y strwythur planar o 3 ei adeiladu i fod fel y dangosir. Pennwyd stereostrwythur cymharol 3 gan arbrawf NOESY, lle gwelwyd cydberthnasau NOE rhwng y parau proton canlynol (1-H a 3-H, 10-H2; 3- H a 4a-H; 4b-H a 5- H; 5-H a 6b-H, 9-H; 6b-H a 7-H; {{121} }H a 9-H) fel y dangosir yn Ffig. 2.

Strwythurau Kankanoside D (4) a Kankanol (5) Roedd Kankanoside D (4) yn cael ei ynysu fel powdr amorffaidd gyda chylchdroi optegol negyddol ([a] D 25 30.6 gradd yn MeOH). Dangosodd y sbectrwm IR o 4 fand amsugno ar 1655 cm 1 y gellir ei briodoli i swyddogaeth olefin a bandiau amsugno cryf ar 3410 a 1078 cm 1 sy'n awgrymu ei strwythur glycosidig. Yn y FAB-MS ïon positif o 4, gwelwyd uchafbwynt ïon lled-leciwlaidd ar m/z 341 (M Na). Penderfynwyd ar y fformiwla moleciwlaidd C15H26O7 o 4 gan fesuriad FAB-MS cydraniad uchel. Hydrolysis asid o 4 gyda 1.0 M HCl rhyddhau D-glwcos,8,10—12,15—18) tra bod (R)-crwydredd (4a) 33,34) ei gael trwy hydrolysis ensymatig o 4 gyda b-glucosidase. Dangosodd yr 1 H-NMR (Tabl 3, CD3OD) a 13C-NMR (Tabl 4) sbectra28) o 4 signalau aseinio i methyl [d 1.69 (s, 10-H3)], tri methylen [d 1.41, 2.06 (y ddau m, 4-H2), 1.51, 2.01 (y ddau m, 6a- a 6b-H), 2.23 (br dd, J ca. 8, 15 Hz, 7a-H), 2.37 (br dd , J ca. 8, 15 Hz, 7b-H)], methine [d 2.90 (m, 5-H)], a dau methylen sy'n dwyn ffwythiant ocsigen {d [3.56 (DDD, J 2.8, 7.4) , 13.2 Hz), 3.97 (DDD, J 4.9, 8.0, 13.2 Hz), 3-H2], 4.04, 4.18 (y ddau d, J 12.2 Hz, 1-H2)} ynghyd â b- rhan glucopyranosyl [d 4.25 (d, J 7.7 Hz, 1 -H)]. Eglurwyd lleoliad y rhan bD-glucopyranosyl yn 4 gan arbrawf HMBC i fod yn 3-safle (Ffig. 1). Ar sail y dystiolaeth hon, penderfynwyd bod y stereostrwythur absoliwt o 4 fel y dangoswyd.

Cafwyd Kankanol (5) fel powdr amorffaidd gyda chylchdroi optegol positif ([a] D 25 11.1 gradd ). Dangosodd yr ïoneiddiad cemegol (CI)-MS o 5 bâr o gopaon ïon isotop ar m/z 221 a 223 oherwydd ïon lled-folecwlaidd (MH). Datgelodd y mesuriad CI-MS cydraniad uchel o 5 mai'r fformiwla moleciwlaidd oedd C9H13ClO4. Dangosodd y sbectra 1 H-NMR (Tabl 1, CD3OD) a 13C-NMR (Tabl 2)28) o 5 bresenoldeb y swyddogaethau canlynol: tri methylen [d 1.60 (DDD, J 2.5, 5.5, 13.1 Hz, 4a-H), 1.80 (br dd, J ca. 3, 13 Hz, 4b H), 1.83 (br d, J ca. 12 Hz, 6a-H), 2.57 (m, 6b-H), 3.75 , 3.88 (y ddau d, J 9.2 Hz, 10-H2)], pum methines [d 2.76 (dd, J 4.3, 8.0 Hz, 9-H), 2.50 (m, 5- H), 3.80 (br s, 7-H), 5.17 (br d, J ca. 3 Hz, 3-H), 5.26 (d, J 4.3 Hz, 1-H) ]. Cadarnhawyd strwythur planar 5 gan arbrofion 1 H–1 H COZY a HMBC. Hynny yw, roedd yr arbrawf COZY 1 H–1 H ar 5 yn dangos presenoldeb y strwythurau rhannol wedi'u hysgrifennu mewn llinellau trwm, ac yn arbrawf HMBC, arsylwyd cydberthnasau amrediad hir fel y dangosir yn Ffig. 1. Y stereostrwythur cymharol o 5 oedd a bennwyd gan yr arbrawf NOESY, lle gwelwyd cydberthynas NOE rhwng y parau proton ing canlynol (1-H a 9-H; 3-H a 4a-H; 4b-H a {{ 93}} H; 5-H a 6b-H, 9-H; 6b-H a 7-H; 7-H a 9-H) fel y dangosir yn Ffig. 2. O gymharu data 1 H- a 13C-NMR ar gyfer 5 â'r rhai ar gyfer 14a, a gafwyd trwy drin 14 gyda HCl dyfrllyd 5 y cant fel y dangosir yn Siart 1,35) lleoliad y clorin cefnogwyd grŵp mewn 5 i fod yn 3-sefyllfa. At hynny, rhoddodd asetyliad o 5 ag anhydrid asetig (Ac2O) a pyridin y 3,7-ocsid (5a), tra rhoddodd 14a y diasetad (14b) o dan yr un amod asetyliad. Arweiniodd y dystiolaeth hon hefyd i ni gadarnhau lleoliad ffwythiant clorin i fod yn safle 3b (Siart 3). O ganlyniad, roedd y stereostrwythur o 5 yn benderfynol o fod fel y dangoswyd.

Strwythur Kankanoside E (6) Cafodd Kankanoside E (6) ei ynysu fel powdr amorffaidd gyda chylchdroi optegol negyddol ([a]D 25 20.0 gradd yn MeOH). Dangosodd y sbectrwm IR o 6 fandiau amsugno ar 3410, 1647, 1085 cm 1 y gellir eu priodoli i swyddogaethau glycosidig a charbonyl, tra bod ei sbectrwm UV yn dangos uchafswm amsugno ar 211 nm (log e 4.63), gan nodi presenoldeb asid carbocsilig b-annirlawn. Roedd y fformiwla moleciwlaidd C16H28O8 o 6 wedi'i nodweddu gan y FAB-MS positif- a negyddol-ion a gan fesuriad MS cydraniad uchel. Hydrolysis asid o 6 D-glwcos rhydd,8,10-12,15-18) tra bod (2E,6R)-8-hydroxy-2,6-dimethyl- 2-asid octanoic (6a) 36) trwy hydrolysis enzymatig o 6 gyda b-glucosidase. Roedd sbectra 1 H-NMR (Tabl 3, CD3OD) a 13C-NMR (Tabl 4) o 6 yn dangos presenoldeb (2E,6R)-8-hydroxy-2,6- dimethyl-2-miety asid octanoic [d 0.95 (d, J 6.4 Hz, 10-H3), 1.30, 1.48 (y ddau m, 5-H2), 1.45, 1.70 (y ddau m, { {70}}H2), 1.65 (m, 6-H), 1.81 (s, 9-H3), 2.22 (2H, m, 4-H2), 3.61, 3.94 (y ddau m, 8-H2), 6.78 (dd, J 1.2, 7.3 Hz, 3-H)] ynghyd â rhan bD-glucopyranosyl [d 4.26 (d, J 7.6 Hz, 1 -H)] . O gymharu'r signalau carbon yn y sbectrwm 13C-NMR o 6 â rhai 6a, gwelwyd y symudiad glycosyleiddiad o amgylch 8-sefyllfa 6. Cadarnhawyd lleoliad y cysylltiad glwcosid hefyd gan arbrofion HMBC fel y dangosir yn Ffig. 1. O ganlyniad, eglurwyd mai stereostrwythur absoliwt 6 oedd (2E,6R)-8-b- D-glucopyranosyloxy-2,6-dimethyl-2-asid octanoic.

budd echdynnu cistanche

Arbrofol

Defnyddiwyd yr offerynnau canlynol i gael data ffisegol: cylchdroadau penodol, polarimedr digidol Horiba SEPA-300 (l 5 cm); sbectra UV, sbectromedr Shimadzu UV-1600; sbectra IR, sbectromedr Shimadzu FTIR-8100; EI-MS, CI-MS, a CI-MS cydraniad uchel, sbectromedr màs JEOL JMS-GCMATE; FAB-MS ac MS cydraniad uchel, sbectromedr màs JEOL JMS-SX 102A; 1 sbectrwm H-NMR, sbectromedrau JEOL EX-270 (270 MHz) a JNM-LA500 (500 MHz); sbectra 13C-NMR, JEOL EX-270 (68 MHz) a sbectromedrau JNM-LA500 (125 MHz) gyda tetramethylsilane fel safon fewnol; a synhwyrydd HPLC, Shimadzu RID-6Mynegai plygiannol a SPD{28}}Synwyryddion UV-VIS Avp. Defnyddiwyd colofn HPLC, YMC-Pack ODS-A (250 4.6 mm id), a (250 20 mm id) colofnau at ddibenion dadansoddol a pharatoadol, yn y drefn honno.

Defnyddiwyd yr amodau arbrofol canlynol ar gyfer cromatograffaeth: cromatograffaeth colofn gel silica cyfnod cyffredin, gel silica BW-200 (Fuji Silysia Chemical, Ltd., Aichi, Japan, 15{{10}}—35 0 rhwyll); cromatograffaeth colofn gel silica gwrthdro, Chromatorex ODS DM1020T (Fuji Silysia Chemical, Ltd., Aichi, Japan, 100-200 rhwyll); TLC, platiau TLC wedi'u gorchuddio â gel Silica 60F254 (Merck, 0.25 mm) (cyfnod cyffredin) a gel Silica RP- 18 F254S (Merck, 0.25 mm) (cam cefn); HPTLC cam cefn, platiau TLC wedi'u gorchuddio ymlaen llaw gyda gel Silica RP-18 WF254S (Merck, 0.25 mm); a chyflawnwyd y darganfyddiad trwy chwistrellu gyda 1 y cant Ce(SO4)2-10 y cant H2SO4 dyfrllyd ac yna gwresogi.

Deunydd Planhigion

Prynwyd coesau sych o Cistanche tubulosa (SCHRENK) R. WIGHT yn Urumqi, Talaith Xinjiang, Tsieina ym mis Ionawr 2005 trwy Eishin Trading Co., Ltd. Osaka, Japan, a gwnaed gwaith adnabod botanegol gan yr Athro Jia Xiaoguang yn Sefydliad Tsieinëeg Traddodiadol Xinjiang a Meddyginiaethau Ethnolegol. Mae sbesimen taleb (2005.01. Xinjiang-01) o'r planhigyn hwn ar ffeil yn ein labordy.

Echdynnu ac Ynysu

Roedd coesynnau sych o C. tubulosa (5.0 kg) yn cael eu powdro a'u tynnu deirgwaith gyda methanol o dan adlif am 3 h. Roedd anweddiad y toddydd dan bwysau llai yn darparu'r echdyniad methanolig (1340 g, 26.8 y cant o'r feddyginiaeth lysieuol hon). Roedd y dyfyniad methanolig (160 g) yn destun cromatograffaeth colofn gel silica cyfnod arferol [3.2 kg, CHCl3–MeOH–H2O (10 : 3 : 1→7 : 3 : 1, yn is haen → 6 : 4 : 1)MeOH] i roi chwe ffracsiwn [Fr. 1 (5.04 g), Tad. 2 (9.84 g), Tad. 3 (7.80 g), Fr. 4 (13.28 g), Tad. 5 (113.6{{104}}g), a Fr. 6 (7.61 g)]. Gwahanwyd ffracsiwn 1 (5.00 g) gan gromatograffaeth colofn gel silica cam gwrthdroi [150 g, MeOH–H2O (40 6: 60→ 5{{ 162}} : 50→ 60 : 40, v/v)→MeOH] i fforddio pum ffracsiwn [Fr. {{50}} (83{{201}} mg), Tad. 1-2 (590 mg), Fr. 1-3 (180 mg), Fr. 1-4 (124 mg), a Fr. 1-5 (3200 mg)]. Mae Tad. Cafodd {{60}} (830 mg) ei wahanu ymhellach gan HPLC [MeOH–H2O (10 : 90, v/v)] i roi kankanol (5, 20 mg, 0.0034 y cant ), argyol (15, 18 mg, 0.0030 y cant), cistanin (16, 24 mg, 0.0040 y cant), a Fr. 1-1-2 (62 mg), a wahanwyd ymhellach gan HPLC [MeOH-H2O (2 : 98, v/v)] i roi (3R)-3-hydroxy-2-pyrrolidinone (0.0020 y cant) ) a (3R)-3-hydroxy-1-methyl-2-pyrrolidinone (0.0059 y cant ). Mae Tad. Cafodd 1-2 (590 mg) ei buro gan HPLC [MeOH-H2O (35 : 65, v/v) a CH3CN- H2O (20 : 80, v/v)] i roi cistanclorin (17, 21 mg, 0.0035 y cant). Roedd ffracsiwn 2 (9.72 g) yn destun cromatograffaeth colofn gel silica cyfnod gwrthdroi [290 g, MeOH–H2O (20 : 80→30 : 70→40 : 60→60 : 40, v/v)→MeOH] i ryd saith ffracsiynau [Fr. 2-1 (1986 mg), Fr. 2-2 (1563 mg), Fr. 2-3 (3931 mg), Fr. 2-4 (375 mg), Fr. 2-5 (486 mg), Fr. 2-6 (460 mg), a Fr. 2-7 (336 mg)]. Mae Tad. Cafodd 2-1 (466 mg) ei wahanu gan HPLC [MeOH-H2O (5 : 95, v/v)] i roi wridin (0.0069 y cant ). Mae Tad. Cafodd 2-2 (535 mg) ei wahanu gan HPLC [MeOH-H2O (10 : 90, v/v)] i roi gwrthrhide (11, 15 mg, 0.0079 y cant) a 6-deoxycatalpol (14, 214). mg, 0.11 y cant). Mae Tad. Cafodd 2-3 (535 mg) ei wahanu gan HPLC [MeOH-H2O (20 : 80, v / v)] i ddodrefnu gluroside (10, 110 mg, 0.14 y cant) a bartsioside (13, 164 mg, 0.21 y cant ) . Mae Tad. Cafodd 2-4 (375 mg) ei wahanu gan HPLC [MeOH-H2O (30 : 70, v/v)] i roi kankanosides A (1, 32 mg, 0.0054 y cant) a D (4, 9 mg, 0.0015 y cant ). Mae Tad. Cafodd 2-6 (460 mg) ei wahanu ymhellach gan HPLC [MeOH-H2O (45 : 55, v/v)] i ddarparu kankanoside E (6, 161 mg, 0.027 y cant) a (2E,6Z){{192 }}bD-glucopyranosyloxy-2,6-dimethyl-2,6-asid octadienoig (18, 17 mg, 0.0028 y cant ). Roedd ffracsiwn 3 (7.60 g) yn destun cromatograffaeth col umn gel silica cyfnod gwrthdroi [230 g, MeOH–H2O (20 : 80→40 :60→50 :50→ 60 : 40, v/v)→MeOH] i'w rhoi pump o ffracsiynau [Fr. 3-1 (2652 mg), Fr. 3-2 (593 mg), Fr. 3-3 (3610 mg), Fr. 3-4 (190 mg), a Fr. 3-5 (336 mg)]. Mae Tad. Cafodd 3-1 (480 mg) ei buro gan HPLC [MeOH-H2O (10 : 90, v/v)] i roi kankanoside B (2, 19 mg, 0.018 y cant), asid geniposidig (8, 32 mg, 0.030 y cant ), ac ajugol (12, 12 mg, 0.011 y cant ). Roedd ffracsiwn 4 (13.10 g) yn destun cromatograffaeth colofn gel silica ail-gam [390 g, MeOH–H2O (10 : 90→20 :80→30 :70→40 :60→50 :50, v/v)→ MeOH] i roi saith ffracsiwn [Fr. 4-1 (6114 mg), Fr. 4-2 (430 mg), Fr. 4-3 (1058 mg), Fr. 4-4 (170 mg), Fr. 4-5 (2595 mg), Fr. 4-6 (1635 mg), a Fr. 4-7 (1064 mg)]. Mae Tad. Cafodd 4-2 (430 mg) ei wahanu ymhellach gan HPLC [MeOH-H2O (5 : 95, v/v)] i fforddio 2 (70 mg, 0.012 y cant) a kkanoside C (3, 16 mg, 0.0027 y cant) . Mae Tad. Gwahanwyd 4-6 (1058 mg) hefyd gan HPLC [MeOH–H2O (15 : 85, v/v)] i ffwr asid mussaenosidig nish (7, 116 mg, 0.020 y cant) ac 8-asid epiloganig (9, 193 mg, 0.033 y cant ). Roedd ffracsiwn 5 (15.15 g) yn destun cromatograffaeth colofn gel silica cyfnod gwrthdroi [455 g, MeOH–H2O (0 : 100 → 10 : 90 → 20 : 80 → 40 : 60→50 : 50, v/v)→MeOH ] i roi saith ffracsiwn [Fr. 5-1 (9311 mg), Fr. 5-2 (1114 mg), Fr. 5-3 (306 mg), Fr. 5-4 (347 mg), Fr. 5-5 (1620 mg), Fr. 5-6 (1453 mg), a Fr. 5-7 (1106 mg)]. Mae Tad. Cafodd 5-1 (9311 mg) ei grisialu o MeOH i roi D-mannitol (3337 mg, 4.19 y cant).

Nodwyd y cyfansoddion hysbys (7-18) trwy gymharu eu data ffisegol ([a]D, IR, 1 H-NMR, 13C-NMR, MS) gyda gwerthoedd a adroddwyd 1,7,19-24,26,27) neu rhai o samplau masnachol.25) Kankanoside A (1): Powdwr amorffaidd, [a]D 25 107.4 gradd (c 1.50, MeOH). Cydraniad uchel positif-ion FAB-MS: Calcd ar gyfer C16H26O8Na (M Na) 369.1525; Wedi dod o hyd 369.1522. IR (KBr): 3410, 2940, 1647, 1076 cm 1 . 1 H-NMR (500 MHz, CD3OD a pyridine-d5) d: a roddir yn Nhabl 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD a pyridine-d5) d C: a roddir yn Nhabl 2. Positif-ion FAB-MS: m /z 369 (M Na) . FAB-MS ïon negyddol: m/z 345 (MH) .

Kankanoside B (2): Mae powdr amorffaidd, [a]D 26 118.7 gradd (c 0.10, MeOH). Cydraniad uchel positif-ion FAB-MS: Calcd ar gyfer C15H24O10Na (M Na) 387.1267; Wedi dod o hyd 387.1261. IR (KBr): 3410, 2940, 1647, 1085 cm 1 . 1 H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: a roddir yn Nhabl 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: a roddir yn Nhabl 2. Positif-ion FAB-MS: m/z 387 (M Na). FAB-MS ïon negyddol: m/z 363 (MH) .

Kankanoside C (3): Powdr amorffaidd, [a]D 26 34.0 gradd (c 1.00, MeOH). Cydraniad uchel negyddol-ion FAB-MS: Calcd ar gyfer C15H24ClO10 (MH) 399.1058; Wedi dod o hyd 399.1077. IR (KBr): 3410, 2964, 1159, 1078, 1048, 949 cm 1 . 1 H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: a roddir yn Nhabl 1. 13C NMR (125 MHz, CD3OD) d C: a roddir yn Nhabl 2. Negyddol-ion FAB-MS: m/z 399, 401 (MH).

Kankanoside D (4): Powdwr amorffaidd, [a]D 25 30.6 gradd (c 0.50, MeOH). Cydraniad uchel positif-ion FAB-MS: Calcd ar gyfer C15H26O7Na (M Na) 341.1204; Wedi dod o hyd 341.1210. IR (KBr): 3410, 2940, 1655, 1078, 1040 cm 1 . 1 H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: a roddir yn Nhabl 3. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: a roddir yn Nhabl 4. Positif-ion FAB-MS: m/z 341 (M Na). FAB-MS ïon negyddol: m/z 317 (MH) .

Kankanol (5): Powdr amorffaidd, [a]D 25 11.1 gradd (c 1.40, MeOH). Cydraniad uchel CI-MS: Calcd ar gyfer C9H14ClO4 (MH) 221.0580; Wedi dod o hyd 221.0582. IR (KBr): 3399, 3004, 1165, 1096, 1059, 1048, 955 cm 1 . 1 H- NMR (500 MHz, CD3OD) d: a roddir yn Nhabl 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: a roddir yn Nhabl 2. CI-MS m/z ( y cant ): 221 (MH) (5 ), 223 (MH) (2), 185 (88), 167 (100), 149 (71), a 57 (49).

Kankanoside E (6): Powdr amorffaidd, [a]D 25 20.0 gradd (c 2.00, MeOH). Cydraniad uchel positif-ion FAB-MS: Calcd ar gyfer C16H28O8Na (M Na) 371.1682; Wedi dod o hyd i 371.1690. UV [MeOH, nm (log e)]: 215 (4.16). IR (KBr): 3410, 2940, 1647, 1085, 1043 cm 1 . 1 H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: a roddir yn Nhabl 3. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: a roddir yn Nhabl 4. Positif-ion FAB-MS: m/z 371 (M Na). FAB-MS ïon negyddol: m/z 347 (MH).

budd echdynnu cistanche

Hydrolysis Asid o 1—4 a 6 gyda 1 M HCl

Cynheswyd hydoddiant o 1-4 neu 6 (pob un 1.5 mg) mewn 1 M HCl (0.5 ml) o dan adlif am 3 h. Ar ôl oeri, cafodd y cymysgedd adwaith ei dywallt i ddŵr iâ a'i niwtraleiddio â Amberlite IRA-400 (ffurflen OH), a chafodd y resin ei dynnu trwy hidlo. Yna, echdynnwyd yr hidlydd gydag EtOAc. Bu'r haen ddyfrllyd yn destun dadansoddiad HPLC o dan yr amodau canlynol: Colofn HPLC, synhwyrydd Ka LC NH{{10}}, 4.6 mm id 250 mm (Tokyo Kasei Co., Ltd., Tokyo, Japan); canfod, cylchdroi optegol [Shodex OR-2 (Showa Denko Co, Ltd., Tokyo, Japan)]; cyfnod symudol, CH3CN–H2O (75: 25, v/v); cyfradd cymrawd 0.8 ml/mun; tymheredd colofn, tymheredd ystafell. Daethpwyd i adnabod y glwcos-D sy'n bresennol yn yr haen ddyfrllyd trwy gymharu ei amser cadw a'i gylchdroi optegol â rhai sampl ddilys: tR 12.3 min (cylchdro optegol positif)

Hydrolysis Ensymatig o 1, 4, a 6 gyda b-Glucosidase

Cafodd hydoddiant o 1 (7.7 mg) yn H2O (1.5 ml) ei drin â b-glucosidase (5.0 mg, o almon, Oriental Yeast Co., Tokyo, Japan) a chafodd yr hydoddiant ei droi ar 37 gradd am 3 ch. Ar ôl i EtOH gael ei ychwanegu at y cymysgedd adwaith, tynnwyd y toddydd o dan bwysau llai a chafodd y gweddill ei buro gan HPLC [MeOH-H2O (55: 45, v / v)] i ddodrefnu kankagenin a (1a, 2.3 mg, 56 y cant) . Trwy weithdrefn debyg, (R)-rotundiol33,34) (4a, 1.2 mg, 69 y cant ) a (2E,6R)-8-hydroxy-2,6-dimethyl{30}). Cafwyd }asid octanoic36) (6a, 6.8 mg, 62 y cant) o 4 (3.5 mg) a 6 (20.4 mg), yn y drefn honno.

Kankagenin a (1a): A powdr gwyn, [a]D 25 18.4 gradd (c 0.20, MeOH). Cydraniad uchel EI-MS: Calcd ar gyfer C10H16O3 (M ) 184.1099; Wedi dod o hyd 184.1106. IR (KBr): 3410, 2940, 1684 cm 1 . 1 H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: a roddir yn Nhabl 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: a roddir yn Nhabl 2. EI MS: m/z ( y cant ): 184 (M , 37) , 95 (100).

Triniaeth alcalïaidd o 14 gyda 5 y cant o KOH dyfrllyd

Trowyd hydoddiant o 14 (23.0 mg) mewn 5 y cant o KOH dyfrllyd (1.0 ml) ar 80 gradd am 2 awr. Cafodd cymysgedd yr adwaith ei niwtraleiddio ag Amberlite HCR-W2 (ffurflen H). Roedd ail-symud y toddydd o'r hidlydd dan bwysau llai yn rhoi gweddillion, a gafodd ei buro gan HPLC [MeOH-H2O (5: 95, v/v)] i roi 2 (4.0 mg, 16 y cant) a 1932) (10.5 mg , 43 y cant).

Triniaeth Asid o 14 gyda HCl dyfrllyd 5 y cant

Trowyd hydoddiant o 14 (25.0 mg) mewn 5 y cant o HCl dyfrllyd (2.0 ml) ar dymheredd ystafell am 3 h. Arllwyswyd cymysgedd yr adwaith i ddŵr iâ a chafodd y cymysgedd adwaith cyfan ei dynnu gydag EtOAc. Golchwyd dyfyniad EtOAc yn olynol â NaHCO3 dyfrllyd dirlawn a heli, yna ei sychu dros bowdr MgSO4 anhydrus a'i hidlo. Roedd tynnu'r toddydd o'r hidlydd dan bwysau llai yn rhoi gweddillion, a gafodd ei wahanu gan HPLC [MeOH-H2O (20: 80, v/v)] i roi 14a (4.0 mg, 25 y cant).

14a

Powdr gwyn, [a]D 20 21.5 gradd (c 0.30, MeOH). Cydraniad uchel CI-MS: Calcd ar gyfer C9H14ClO4 (MH) 221.0580; Wedi dod o hyd 221.0587. IR (KBr): 3410, 2962, 1365, 1152, 1055, 945 cm 1 . 1 H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: a roddir yn Nhabl 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: a roddir yn Nhabl 2. CI-MS: m/z (y cant): 221 (MH) ( 7), 223 (MH) (3), 203 (M H2O) (97), 205 (M H2O) (33), 185 (7), 167 (12), 159 (32), 121(27), 110 (48), 95 (64), 85 (100), 67 (56), a 57 (65).

Asetyliad o 5 a 14a

Cafodd hydoddiant o 5 (2.5 mg) mewn pyridine (0.5 ml) ei drin ag anhydrid asetig (Ac2O, 0.4 ml) a throi'r gymysgedd ar dymheredd yr ystafell am 12 h. Arllwyswyd cymysgedd yr adwaith i ddŵr iâ a chafodd y cymysgedd adwaith cyfan ei dynnu gydag EtOAc. Golchwyd dyfyniad EtOAc yn olynol gyda HCl dyfrllyd 5 y cant, NaHCO3 dyfrllyd dirlawn, ac yna'n sychu'r heli dros bowdr MgSO4 anhydrus a'i hidlo. Roedd tynnu'r toddydd o'r hidlif o dan bwysau llai yn rhoi gweddillion, a gafodd ei buro gan HPLC [MeOH-H2O (35: 65, v/v)] i roi 5a (2.3 mg, 77 y cant ). Trwy weithdrefn debyg, cafodd 14b (2.7 mg, 87 y cant) hefyd ei baratoi a'i buro gan HPLC [MeOH-H2O (55: 45, v / v)] o 14a (2.1 mg).

5a

Powdr gwyn, [a]D 20 1.8 gradd (c 0.18, MeOH). Cydraniad uchel CI MS: Calcd ar gyfer C11H15O5 (MH) 227.0919; Wedi dod o hyd i 227.0925. IR (KBr): 2962, 1734, 1374, 1258, 1237, 1169, 1103, 1053, 947 cm 1 . 1 H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: a roddir yn Nhabl 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: a roddir yn Nhabl 2. CI-MS m/z ( y cant ): 227 (MH) (28 ), 209 (M H2O) (4), 184 (3), 166 (45), 149 (22), 138 (38), 122 (44), 94 (31), 85 (100), a 57 (34) ).

14b

Powdr gwyn, [a]D 20 23.7 gradd (c 0.06, MeOH). Cydraniad uchel CI-MS: Calcd ar gyfer C13H18ClO6 (MH) 305.0792; Wedi dod o hyd i 305.0790. IR (KBr): 1744, 1376, 1243, 1231, 1001, 941 cm 1 . 1 H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: a roddir yn Nhabl 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: a roddir yn Nhabl 2. CI-MS: m/z ( y cant ): 305 (MH) ( 2), 307 (MH) (1), 263 (MH C2H3O) (6), 265 (MH C2H3O) (3), 245 (30), 203 (8), 185 (100), 167 (7), 149 (33), 121 (26), 95 (15), 85 (37), a 57 (93).

Diolchiadau

Cefnogwyd yr ymchwil hwn gan Raglen 21ain COE, Prosiect Ffiniau Academaidd, a Chymorth Grant ar gyfer Ymchwil Gwyddonol gan Weinyddiaeth Addysg, Diwylliant, Chwaraeon, Gwyddoniaeth a Thechnoleg Japan. Mae'r awduron yn diolch i'r Athro Xiaoguang Jia yn Sefydliad Meddyginiaethau Tsieineaidd Traddodiadol ac Ethnologaidd Xinjiang yn Urumqi, Tsieina, am adnabod deunydd planhigion.

budd cistanche

Cyfeiriadau a Nodiadau

1) Kobayashi H., Oguchi H., Takizawa N., Miyase T., Ueno A., Usmanghani K., Ahmad M., Chem. Pharm. Tarw., 35, 3309—3314 (1987).

2) Xinjiang Gwyddoniaeth a Thechnoleg Wasg, "Technegau Diwylliant o Xinjiang Staple Planhigion Meddyginiaethol," Xinjiang Sefydliad Tseineaidd Traddodiadol a Meddyginiaethau Ethnologic Ed., 2004, tt. 84-88.

3) Du N., Zhou P., Wang J., Liu C., Li W., Zhongguo Yaoke Daxue Xue bao, 24, 46—48 (1993).

4) Xue D., Zhongguo Zhongyao Zazhi, 22, 170—171 (1997).

5) Song Z., Mo S., Chen Y., Tu P., Li W., Zhao Y., Zheng J., Zhongguo Zhongyao Zazhi, 25, 728—730 (2000).

6) Song Z., Tu P., Zhao Y., Zheng J., Zhongcaoyao, 31, 808—810 (2000).

7) Yoshizawa F., Deyama T., Takizawa N., Usmanghani K., Ahmad M., Chem. Pharm. Tarw., 38, 1927—1930 (1990).

8) Matsuda H., Morikawa T., Tao J., Ueda K., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Tarw., 50, 208—215 (2002).

9) Morikawa T., Matsuda H., Toguchida I., Ueda K., Yoshikawa M., J. Nat. Prod., 65, 1468—1474 (2002).

10) Tao J., Morikawa T., Toguchida I., Ando S., Matsuda H., Yoshikawa M., Bioorg. Med. Cemeg., 10, 4005—4012 (2002).

11) Morikawa T., Tao J., Ando S., Matsuda H., Yoshikawa M., J. Nat. Prod., 66, 638—645 (2003).

12) Tao J., Morikawa T., Ando S., Matsuda H., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Tarw., 51, 654—662 (2003).

13) Matsuda H., Morikawa T., Xie H., Yoshikawa M., Planta Med., 70, 847—855 (2004).

14) Sul B., Morikawa T., Matsuda H., Tewtrakul S., Harima S., Yoshikawa M., J. Nat. Prod., 67, 1464—1469 (2004).

15) Morikawa T., Sul B., Matsuda H., Wu LJ, Harima S., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Tarw., 52, 1194—1199 (2004).

16) Xie H., Wang T., Matsuda H., Morikawa T., Yoshikawa M., Tani T., Chem. Pharm. Tarw., 53, 1416—1422 (2005).

17) Morikawa T., Xie H., Matsuda H., Yoshikawa M., J. Nat. Prod., 69 (2006) yn y wasg.

18) Morikawa T., Xie H., Matsuda H., Wang T., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Tarw., 54, 506—513 (2006).

19) Kobayashi H., Karasawa H., Miyase T., Fukushima S., Chem. Pharm. Tarw., 33, 3645—3650 (1985).

20) Otsuka H., Phytochemistry, 33, 617—622 (1993).

21) Zhao W., Yang G., Xu R., Qin G., Phytochemistry, 41, 1553—1555 (1996).

22) Kobayashi H., Karasawa H., Miyase T., Fukushima S., Chem. Pharm. Tarw., 32, 1729—1734 (1984).

23) Xu Z., Yang S., Yang J., Lu R., Zhongcaoyao, 30, 244—246 (1999).

24) Wang SJ, Pei YH, Hua HM, Chin. Cemeg. Lett., 12, 343—344 (2001).

25) Nodwyd y cyfansoddion hysbys hynny trwy gymharu eu data ffisegol â samplau a gafwyd yn fasnachol.

26) Pires R., Burger K., Tetrahedron, 53, 9213—9218 (1997).

27) Kamal A., Ramana KV, Ramana AV, Babu AH, Tetrahedron: Anghymesuredd, 14, 2587—2594 (2003).

28) Neilltuwyd y sbectra 1 H- a 13C-NMR o 1-6 a chyfansoddion cysylltiedig (19, 1a, 5a, 14a, 14b) gyda chymorth gwelliant di-ystumio trwy drosglwyddo polareiddio (DEPT), sbectrosgopeg cydberthynas hidlo cwantwm dwbl ( DQF COSY), cydlyniad cwantwm lluosog heteronuclear (HMQC), ac arbrofion cysylltedd bond lluosog heteronuclear (HMBC).

29) Nishizawa M., Kodama S., Yamase Y., Kayano K., Hatakeyama S., Ya mada H., Chem. Pharm. Tarw., 42, 982—984 (1994).

30) Yoshikawa M., Ueda T., Matsuda H., Yamahara J., Murakami N., Chem. Pharm. Tarw., 42, 1691—1693 (1994).

31) Matsuda H., Shimoda H., Uemura T., Ueda T., Yamahara J., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Tarw., 47, 1753—1758 (1999).

32) Damtoft S., Jensen SR, Nielsen BJ, Phytochemistry, 24, 2281— 2283 (1985).

33) Watanabe K., Takada Y., Matsuo N., Nishimura H., Biosci. Biotechnoleg. Biocemeg., 59, 1979—1980 (1995).

34) Takikawa H., Yamazaki Y., Mori K., Eur. J. Org. Cemeg., 229—232 (1998).

35) Kitagawa I., Fukuda Y., Taniyama T., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Tarw., 39, 1171—1176 (1991).

36) Yamaguchi K., Shinohara C., Kojima S., Sodeoka M., Tsuji T., Biosci. Biotechnoleg. Biocemeg., 63, 731—735 (1999).