Nanofiberau Asid Oleanolig Straen Ocsidiol a Achosir gan Fater Gronynnol Gwanhau mewn Keratinocytes
Sep 20, 2022
Cysylltwch â oscar.xiao@wecistanche.com am ragor o wybodaeth
Crynodeb:Mae deunydd gronynnol yn yr awyr (PM) yn fwyn o ddangosyddion llygredd aer, a dyma hefyd y prif ffactor sy'n achosi straen ocsideiddiol yn y croen. Roedd asid Oleanolic (OA), cyfansoddyn terpenoid naturiol, i bob pwrpas yn atal heneiddio croen a achosir gan PM; fodd bynnag, mae gan OA hydoddedd dŵr gwael ac amsugno croen, sy'n cyfyngu ar ei gymhwysiad mewn meddyginiaethau a cholur. Nod yr astudiaeth hon oedd paratoi nanofiberau asid oleanolig (OAnf) a gwerthuso effeithiau OA ac OAnf mewn keratinocytes wedi'u trin â PM. Dangosodd y canlyniadau fod (OA wedi'i hydoddi mewn hydoddi mewn dimethyl sulfoxide (DMSO)) wedi gwanhau gorgynhyrchu rhywogaethau ocsiger adweithiol a achosir gan PM, kinase protein wedi'i ysgogi gan straen / kinase kinase Jun-amino-terminal (SAPK / JNK), a mynegiant llidiol a chroen proteinau sy'n gysylltiedig â heneiddio. Yn ogystal, fe wnaeth proses nanoffibr OA wella hydoddedd dŵr OA yn effeithiol fwy na 99,000-plygiad trwy newid ei briodweddau ffisiocemegol, gan gynnwys cynnydd arwynebedd arwyneb, lleihau maint gronynnau, trawsnewid amorffaidd, a ffurfiant bondio hydrogen gyda excipients Roedd gallu treiddiad croen OAnf yn gyson dros 10-blygu uwch nag OA. Ar ben hynny, pan gafodd ei hydoddi yn PBS, dangosodd OAnf weithgareddau gwrthocsidiol, gwrthlidiol a heneiddio gwrth-groen uwchraddol inPM -trin keratinocytes nag OA.I gloi, mae ein canfyddiadau'n awgrymu y gallai OAnf fod yn fformiwleiddiad gwrthocsidiol amserol i wanhau problemau croen a achosir gan PM.
Geiriau allweddol:materion gronynnol; asid oleanolic; nalnofiber; gwrthocsidiol; gwrthlidiol; wrth heneiddio
1. Rhagymadrodd
Mae llygredd aer bellach yn broblem iechyd cyhoeddus ar draws y byd i gyd. Gyda datblygiad technoleg, mae sylweddau niweidiol amrywiol, gan gynnwys nwyon, sylweddau cemegol, llygryddion biolegol, a gronynnau, yn cronni yn yr atmosffer ac yn effeithio'n ddifrifol ar fywydau ac iechyd pobl. Mae mater gronynnol (PM), dangosydd llygryddion aer, yn gyfuniad o gyfansoddion organig amrywiol, deunyddiau sy'n deillio o fiolegol, a niwclysau carbon gronynnol[1]. Mae PM yn mynd i mewn i'r ysgyfaint trwy anadlu ac yn mynd i mewn i gylchrediad y gwaed gan achosi peryglon iechyd systemig fel llid organau a chlefydau cardiofasgwlaidd ac anadlol [2,3]. Yn ogystal, gall PM basio trwy rwystr y croen a chronni yn y ffoliglau gwallt a hyd yn oed dreiddio i'r dermis gyda chyswllt dro ar ôl tro; felly, mae gor-amlygiad o'r croen i PM wedi bod yn gysylltiedig â heneiddio croen anghynhenid, newidiadau mewn pigmentiad, dermatitis atopig, acne, a soriasis [2,4]. Mae cyswllt hir â PM yn arwain at orgynhyrchu rhywogaethau ocsigen adweithiol (ROS) mewn keratinocytes, sy'n sbarduno sawl llwybr signalau gan gynnwys y llwybr apoptosis, llwybrau protein kinase a weithredir gan mitogen (MAPKs), a llid. Gwelir mynegiant uchel o cycloxygenase-2 (COX-2), ffactor necrosis tiwmor- (TNF-a), a interleukin-1 (IL{1) yn gyffredin mewn keratinocytes sy'n agored i PM.Moreover, mae PM hefyd yn actifadu metalloproteinases matrics (MMPs) ac yn arwain at golli elastigedd croen a heneiddio [5].
Mae cynhyrchion naturiol wedi cael eu defnyddio ers tro fel cynhwysion cosmeutical effeithiol. Mae asid oleano-lic (OA, 3 -hydroxyolean-12-en-28-oicacid), cyfansoddyn triterpenoid pum cylch, yn bresennol yn eang mewn planhigion, ffrwythau a llysiau [6]. Mae OA yn adnabyddus am ei effeithiau amddiffynnol hepatig fel lleihau niwed acíwt i'r afu a achosir gan gemegau a ffibrosis / sirosis mewn clefydau cronig yr afu [6,7]. Yn ogystal, mae astudiaethau blaenorol wedi datgelu bod OA yn meddu ar effeithiau gwrthocsidiol, gwrth-ganser, gwrthlidiol, gwrth-diabetig, gwrth-ficrobaidd [8] Kim et al. Datgelodd y gallai OA leihau mynegiant y cytocin pro-llidiol (TNF-a, IL{-6) a phrotein heneiddio croen (MP-1) mewn keratinocytes wedi'u trin â PM [9]. Fodd bynnag, mae priodweddau ffisigocemegol OA yn ei gwneud hi'n anodd hydoddi mewn dŵr, sy'n cyfyngu ar ei gymhwysiad mewn meddyginiaethau, bwyd a cholur.
Dyluniadau fformiwleiddio cyflenwi cyffuriau fel nano-gludwyr polymer, li. posomes, a nanofibers yn cael eu defnyddio fel arfer i wella priodweddau ffisigocemegol y cynhwysion actif. Gallai amgáu cynhwysion actif â chynhwysyddion yn y fformwleiddiadau fferyllol hyn wella eu hydoddedd dŵr ac amsugno croen a lleihau gwenwyndra posibl a llid i'r croen. Yn eu plith, mae nanofibers yn fformiwleiddiad nanosized sy'n dod i'r amlwg, gydag arwynebedd arwyneb mawr, dwysedd isel, a chyfaint mandwll uchel, ac maent eisoes yn cael eu defnyddio'n eang mewn biofeddygaeth, a all leihau cyfaint cyffuriau llafar, cynyddu sefydlogrwydd cynhwysion gweithredol, rheolaeth rhyddhau, gwella bio-argaeledd, a gwneud meinweoedd artiffisial [10]. Mae electrospining yn dechnoleg gyffredin a ddefnyddir i gynhyrchu nanofiber ac mae'n gydnaws iawn â chynhyrchu màs [1]. Felly, gall paratoi nanofiber gan ddefnyddio'r broses electronyddu wella'r bioavail ar yr un pryd. edd ac effeithlonrwydd cynhyrchu cynhwysyn gweithredol gyda hydoddedd dŵr gwael. Mae polyvinyl pyrrolidone (PVPK90) a 2-hydroxypropyl- -cyclodextrin (HPBCD) yn gyfansoddion a gymeradwyir gan FDA ar gyfer hydoddi a dosbarthu cynhwysion fferyllol gweithredol hydroffobig mewn pobl.colesterol cistancheDangosodd astudiaethau blaenorol fod nanofibers a baratowyd gyda HPBCD a PVPK90 wedi gwella'n sylweddol hydoddedd dŵr treiddiad croen uchel resveratrol [12] ac olew plai [13]. Felly, nod yr astudiaeth hon oedd defnyddio PVPK90 a HPBCD fel cludwyr danfon i baratoi'r nanofiberau asid oleanolig (OAnf) ac i werthuso effeithiau OA ac OAnf mewn keratinocytes wedi'u trin â PM.
Gall Cistanche gwrth-heneiddio
Nod yr astudiaeth bresennol oedd gwerthuso effaith fiolegol OA hydoddi mewn DMSO mewn difrod keratinocytes a achosir gan PM. Er mwyn goresgyn hydoddedd dŵr gwael OA, gwnaethom ddefnyddio PVPK90 a HPBCD fel cludwyr dosbarthu i baratoi nanofiberau asid oleanolig (OAnf) trwy broses electronyddu ac yna penderfynasom ar y newidiadau mewn priodweddau ffisiocemegol rhwng OA amrwd ac OAnf i egluro'r gwelliant mewn hydoddedd dŵr a treiddiad croen. Er mwyn cymharu'r effaith fiolegol ar ôl y broses nanofiber o OA, defnyddiwyd model difrod keratinocytes a achosir gan PM i werthuso gweithgaredd gwrthocsidiol, gwrthlidiol a gwrth-heneiddio OAnf ac OA.
2. Defnyddiau a Dulliau
2.1.Deunyddiau
Prynwyd hydrad asid Oleanolic (OA) gan Tokyo Chemical Industry Co., Ltd. (Tokyo, Japan). Prynwyd polyvinyl pyrrolidone (Luviskol" K90 Powder, PVP) oddi wrth Wei Ming Pharmaceutical Mfg. Co, Ltd Taipei, Taiwan) Cafwyd hydroxypropyl-beta-cyclodextrin (HPBCD) gan Zibo Qianhui (Zibo, Tsieina).Methanol a dimethyl sulfoxide (DMSO) eu prynu oddi wrth Aencore Chemical (Surrey Hills, Awstralia) Roedd yr holl gemegau neu adweithyddion ar gyfer diwylliannau celloedd yn radd fiolegol, ac roedd cemegau eraill o benderfyniad ffisigocemegol o radd cromatograffaeth hylif perfformiad uchel (HPLC).
2.2.Assay Hyfywedd Cell
Mae pennu hyfywedd celloedd cynhwysyn gweithredol yn ddull cyffredin a ddefnyddir i ddewis yr ystodau crynodiad cywir ar gyfer cynhwysion actif i werthuso eu gweithgaredd biolegol. Prynwyd keratinocytes HaCaT oddi wrth Istituto Zooprofilattico Sperimen-tale della Lombardia edell'Emilia Romagna (Brescia, yr Eidal). Cafodd celloedd HaCaT eu meithrin yn DMEM (Labordai Himedia,Mumbai, India) yn cynnwys 10 y cant o serwm buchol ffetws (Hazelton Product, Denver, PA, UDA) gyda 1 y cant o streptomycin penisilin (Ceisiau Indus Biolegol, Connecticut, NE). , UDA), a chelloedd HaCaT eu deor mewn deorydd (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, UDA) gyda'r amodau wedi'u gosod ar 37 gradd gyda 5 y cant COz. Ar gyfer paratoi'r samplau prawf, diddymwyd OA ac OAnf yn DMSO a PBS, yn y drefn honno, ac yna gwanhawyd pob sampl yn DMEM heb serwm buchol ffetws ar gyfer pennu hyfywedd celloedd. Cafodd y celloedd HaCaT eu hadu mewn 96-blatiau ffynnon ar ddwysedd o 1 × 104 o gelloedd/100 μL/ffynnon am 24 awr. Yna tynnwyd y cyfrwng diwylliant, a chafodd y celloedd eu trin â chrynodiadau gwahanol o OA ac OAnf yn amrywio o 5 i 80 uM mewn DMEM di-serwm am 24 h. Ar adeg y assay, tynnwyd y cyfrwng triniaeth, ac ychwanegwyd 150 μL o hydoddiant MTT 0.5 mg / mL ym mhob ffynnon. Ar ôl 3 h o ddeori, tynnwyd yr hydoddiant MTT, a diddymwyd y crisialau formazan porffor o bob ffynnon mewn 100 uL o DMSO. Yna mesurwyd yr amsugnedd ar 550 nm pob ffynnon gan ddefnyddio ffotomedr sbectro-blat (BioTek uQuant, Winoski, VT, USA). Cyfrifwyd hyfywedd celloedd gan y fformiwla ganlynol:
2.3.Pennu Cynnwys Rhywogaethau Ocsigen Adweithiol(ROS).
Prynwyd PM (Deunydd Cyfeirio Safonol, SRMB1649b) oddi wrth y Sefydliad Cenedlaethol Safonau a Thechnoleg. Casglwyd y cynnyrch hwn ym 1976 a 197 yn Washington, DC Made. Mae cyfanswm o 10 mg/ml o PM eu hatal yn PBS ac yna sonicated am 10 munud cyn ei ddefnyddio. Cafodd cyfanswm o 1 × 10 ynghyd â keratinocytes HaCaT eu meithrin mewn 96-blatiau ffynnon am 24 awr o dan amodau 37 gradd a 5 y cant o CO2. Cafodd celloedd eu trin â chrynodiadau gwahanol o OA mewn DMSO, OA mewn PBS, ac OAnf yn PBS am24h, yn y drefn honno. Yna, cawsant eu deor â 20 uM dichlorodihydrofluorescein diacetate(DCFH-DA; Sigma, Tokyo, Japan) am 30 munud. Nesaf, ychwanegwyd 50 ug/cm² PM i bob ffynnon a'i ddeor am 1 awr. Wedi hynny, golchwyd celloedd ddwywaith gyda PBS, a dadansoddwyd dwyster fflworoleuedd pob sampl gan ddefnyddio darllenydd plât fflwroleuol (excitation: 485 nm; allyrru: 528 nm) (BioTek, Winooski, VI, UDA) Defnyddiwyd yr hafaliad canlynol i gyfrifo canran ataliad Cynhyrchu ROS:
2.4. Dadansoddiad Blotiau Gorllewinol
Cafodd cyfanswm o 4 × 105 o geratinocytes HaCaT eu meithrin mewn 6-blatiau ffynnon am 24 awr. Yna cafodd celloedd eu trin ag OA neu OAnf mewn cyfrwng di-serwm am 24 awr ac yna ychwanegu PM. Ar ôl gwahanol bwyntiau amser, cafodd celloedd eu gorchuddio â byffer RIPAlysis (Merck Millipore, Burlington, MA, UDA), yna eu centrifugio ar 12,000 rpm am 10 munud. Defnyddiwyd pecyn profi protein BCA (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, UDA) i bennu crynodiad protein. Yna, gwahanwyd y proteinau gan electrofforesis gel dodecylsulfate-polyacrylamide sodiwm (SDS-PAGE), ac yna eu blotio ar fem-branes polyvinylidene difluoride (PVDF) (Merck Millipore). Cafodd pilenni eu rhwystro am 1 h a'u golchi â saline wedi'i glustogi â Tris ( TBS) gyda 1 y cant Tween-20. Deorwyd pilenni â gwrthgyrff cynradd ar 4 gradd dros nos. Roedd y prif wrthgyrff a ddefnyddiwyd yn yr astudiaeth hon yn cynnwys cyclooxygenase-2 (COX-2), matrics metalloproteinase-9 (MMP-9), atalydd meinwe metallopro-teinase-1 (TIMP-1), kinase protein wedi'i ysgogi gan straen / kinase terfynell Jun-amino (SAPK / JNK) (Technoleg Signalau Cell, Danvers, MA, UDA), GAPDH (Bi-dechnoleg Santa Cruz, Dallas, TX, UDA), matrics metalloproteinase-1 (MMP-1) (Proteintech Group, Rosemont, IL, UDA), t380, kinases protein allgellog a reoleiddir (ERK), a ffactor niwclear kappa-light-chain- gwella celloedd B wedi'u actifadu (NF-kB)(Merck Millipore, Burlington, MA, UDA). Nesaf, ychwanegwyd gwrthgyrff eilaidd am 1 h ar dymheredd yr ystafell ac adweithio ag adweithyddion cemilu-minscence gwell (ECL; Thermo Fisher Scientific). Defnyddiwyd gwrthgyrff yn erbyn GAPDH fel rheolaethau mewnol. Dadansoddwyd mynegiant pob protein gan ddefnyddio Touch Imager (e-BLOT; Shanghai, China), a mesurwyd y mynegiant gan ddefnyddio ImageJ.
2.5.Paratoi Nanofibers Asid Oleanolic(OAnf)
Cafodd OAnfs eu electronyddu gyda chymarebau gwahanol o OA: PVP: HPCCD (1: 8: 5, 1: 8: 10, a 1: 8: 20). Paratowyd yr ateb electrospun fel a ganlyn: Diddymwyd 25 mg o OA mewn 5 mL o fethanol, ac ychwanegwyd HPBCD a'i droi â stirrer magnet i gael datrysiad clir; yna, ychwanegwyd PVPK90 ar unwaith, a chyffrowyd y cymysgedd am 1 h.sgîl-effeithiau cistanche deserticolaCafodd y nanofibers eu gwehyddu gan ddefnyddio offer Electro-nyddu FES-COS (Falco Tech Enterprise Co., Taipei, Taiwan) o dan yr amodau canlynol: chwistrell 10 mL gyda nodwydd â diamedr mewnol o 0. Cyflogwyd 22 mm ar gyfer electronyddu; addaswyd y gyfradd llif i 0.2 mL/h; gosodwyd y foltedd cymhwysol ar 12 KV; pellter y casglwr tip oedd 10 cm. Ar ôl y broses electronyddu, casglwyd y nanofiber gan ddefnyddio ffoil alwminiwm. Rhoddwyd y nanofibers sydd newydd eu syntheseiddio mewn bag plastig wedi'i selio a'i storio mewn cynhwysydd atal lleithder.
2.6.Cromatograffaeth Hylif Perfformiad Uchel (HPLC)Dadansoddiad o Asid Oleanolig
Roedd system dadansoddi HPLC (LaChrom Elite L{{{{{{{{{{-2130}}}, Hitachi, Tokyo, Japan) yn cynnwys pwmp L-2130, awtosampler L-2200, ac L{{3} }} synhwyrydd uwchfioled (UV-vis). Y golofn ddadansoddi oedd colofn Mightysil RP-18 GP (250 × 4.6 mm id.,5 um). Roedd y cyfnod symudol yn cynnwys methanol a 0.1 y cant o hydoddiant asid asetig rhewlifol mewn cymhareb sefydlog (95:5; w/v). Cyfradd llif y cyfnod symudol oedd 1 mL/munud, a gosodwyd tonfedd canfod y synhwyrydd UV ar 215 nm. Ymddangosodd yr uchafbwynt amsugno ar gyfer asid oleanolic ar 7.5 munud. Roedd cromlin calibradu asid oleanolic yn dangos llinellol dda (r =0.999) o fewn yr ystod 0.01-100 ug/mL.
2.7.Morffoleg, Diamedr Ffibr, a Mesur Maint Gronynnau OAnf
Roedd gwahanol samplau o nanofiberau wedi'u platio â phlatinwm gyda gorchuddion ïon (E{{{{{{{{{{0}}), HITACH, Tokyo, Japan); gosodwyd yr amod ar 10 mA 120 s yn ddiweddarach. Arsylwyd morffoleg a siâp pob sampl gan ficrosgop electron sganio (Hitachi S4700 Hitachi, Tokyo, Japan). Cyfrifwyd diamedr pob sampl gan feddalwedd delwedd j. Defnyddiwyd dadansoddwr Zetasizer 3000HS (Malvern, Swydd Gaerwrangon, y DU) i fesur maint gronynnau OAnf. Mesurwyd maint gronynnau OA ac OAnf ar grynodiad o 1 mg / mL a 0.1 mg / mL, yn y drefn honno.dos cistanche redditYn ogystal, gwelsom hefyd unffurfiaeth morffoleg OAnf ar ôl hydoddi mewn dŵr gan ddefnyddio microsgop electron trawsyrru (TEM, JEM{{0}}offeryn EXII, JEOL Co., Tokyo, Japan). Addaswyd y sampl prawf i 1 ug/mL o OA mewn dŵr wedi'i ddadïoneiddio ac yna'i ddiferu i'r rhwyll gopr, ac yna diferwyd asid ffosffotungstic 0.5 y cant (w/v) ar unwaith. Ar ôl sychu, gosodwyd pob sampl ar y TEM i'w harsylwi.
2.8.Effeithlonrwydd Llwytho Cyffuriau ac Amgįu OAnf
Mae'n hynod bwysig pennu effeithlonrwydd llwytho cyffuriau ac amgáu'r system gyflenwi ar gyfer gwerthuso perfformiad y broses fferyllol. Cyfrifwyd y llwyth cyffuriau fel canran y cynnwys a bennwyd a chynnwys damcaniaethol yr OA sydd wedi'i gynnwys yn nanoffibrau OA. Ar gyfer penderfyniad llwytho cyffuriau ychwanegwyd 100 μL o bob sampl i 900 μL o fethanol, a'r crynodiad OA oedd lle CoA yw'r crynodiad o OA o OAnf, WoA yw'r swm damcaniaethol o OA a ychwanegwyd, VoAnf yw cyfaint yr hydoddiant OAnf.
Mae'r effeithlonrwydd amgáu yn dangos a wnaeth y nanofibers amgáu'r cyfansoddion gweithredol yn llwyddiannus. Diddymwyd samplau OAnf mewn dŵr wedi'i ddad-ïoneiddio, a'i ychwanegu at y dyfeisiau hidlo allgyrchol (Microcon YM-10, Millipore, Billerica, MA, USA), ac yna eu centrifugio ar 12,00 rpm am 10 munud erbyn y centrifuge oergell (Centrifuge 5430R, Eppendorf, Hamburg, yr Almaen). Cadwyd y rhan wedi'i grynhoi yn y tiwb uchaf, a chasglwyd y rhan heb ei amgáu o'r tiwb isaf oherwydd y gwahaniaeth mewn pwysau moleciwlaidd. Canfuwyd swm yr OA heb ei amgáu gan y dull HPLC a grybwyllwyd uchod. Defnyddiwyd yr hafaliad canlynol i gyfrifo effeithlonrwydd amgáu:
lle AA yw'r swm damcaniaethol o OA (a geir o gyflwr bwydo) sydd wedi'i ymgorffori yn y nanofibers, ac OA Aunentrapped yw swm yr OA heb ei amgáu.
2.9.Hoddedd dyfrllyd OAnf
Diddymwyd OA amrwd (1 mg) a gwahanol fformwleiddiadau cymhareb OAnf (sy'n cynnwys yr hyn sy'n cyfateb i 1 mg o asid oleanolic) mewn dŵr deionized 1 ml, yn y drefn honno, ac yna'n sonicated o dan ultrasonicator (Branson 5510, Emerson Electric, St. Louis, MO, UDA) am 20 mun. Cafodd pob sampl ei hidlo trwy bilen 0.45 um (Pall Corporation, Washington, NY, UDA), a'i wanhau 10-plyg. Dadansoddwyd yr hydoddiannau gwanedig gan HPLC, a defnyddiwyd y gromlin safonol i bennu'r swm asid oleanolic ar gyfer eu hydoddedd dyfrllyd o'i gymharu.
2.10. Pennu Trawsnewid Crisialog-i-Amorffaidd
Defnyddiwyd diffractometreg pelydr-X (Siemens D500, Karlsruhe, yr Almaen) i ddadansoddi ffurf grisialaidd OA, excipients ac OAnf. Cynhaliwyd y dadansoddiad gan ddefnyddio ymbelydredd Cu-Ka wedi'i hidlo â nicel, gan ddefnyddio foltedd o 40 kV a cherrynt o 25 mA. Y gyfradd sganio oedd 1 gradd / mun, ac roedd ystod yr onglau a sganiwyd o 5 gradd i 50 gradd . 2.11.Rhyngweithio Rhyngfoleciwlaidd rhwng OA a Excipients
Defnyddir sbectrosgopeg isgoch trawsnewid Fourier (FTIR) a 1HNuclear cyseiniant magnetig (1H NMR) fel arfer i gadarnhau'r rhyngweithio rhyngfoleciwlaidd rhwng cynhwysion actif a excipients. Cymysgwyd asid oleanolig, PVP, HPBCD, a gwahanol fformwleiddiadau cymhareb OAnf, yn y drefn honno, â photasiwm bromid (KBr) mewn cymhareb cyfaint o 1:9 gan ddefnyddio morter a'i wasgu i dabledi. Yna dadansoddwyd pob sampl gan y sbectrophotometer FTIR (Perkin-Elmer 200 sbectrophotometer, Perkin-Elmer, Norwalk, CT USA).Yr ystod sganio oedd 400-4000 cm-4. , Diddymwyd pob sampl mewn 0.8 ml o 99.8 y cant DMSO-dg (Merck, St.Louis, MO, UDA) a'i ddadansoddi gan sbectromedr JEOL Alpha 400 (Nihon Denshi Co., Tokyo, Japan).
2.12.Ex Treiddiad Croen Vivo o Asid Oleanolic a'i Nanofiber
Perfformiwyd yr arbrawf hwn yn unol â phrotocol safonol canllawiau Cymdeithas Toiletri a Phersawr Cosmetig Ewrop (COLIPA). Gellir rhannu system cell trylediad Franz yn gynwysyddion gwydr y siambr rhoddwr uchaf a'r siambr dderbyn isaf. Gosodwyd cyfanswm o hydoddiant byffer 1.5 mL yn cynnwys 0.14MNaCl,2mMK-HPO4, 0.4 mM KH2PO4 (pH7.4) yn y siambr dderbyn a'i droi gyda bar magnetig ar 600 rpm drwyddo draw yr arbrawf. Cafwyd croen fflangell ffres o fochyn gan gigydd lleol yn y farchnad a'i roi yn yr oergell yn ystod cyfnod yr arbrawf. Torrwyd pob sampl croen yn ddarnau 2 cm × 2 cm a'u gosod rhwng y ddwy siambr, gyda'r stratum corneum yn wynebu i fyny. Roedd cell trylediad Franz yn cael ei chynnal ar 32 gradd gyda baddon dŵr sy'n cylchredeg.buddion echdynnu cistancheYna, ychwanegwyd 200 μL o 1 mg/mL o OA neu OAnf at y siambr rhoddwr am 1,2, neu 4 h. Ar ôl hynny, tynnwyd y croen mochyn o gell trylediad Franz, a chafwyd y stratum corneum trwy dynnu tâp 15 gwaith. Cynheswyd pob sampl croen gweddilliol i 95 gradd gyda phad gwres, a gwahanwyd yr epidermis a'r dermis gan ddefnyddio sgalpel. Roedd pob sampl yn cael ei drochi mewn methanol a sonicated am 1h i echdynnu OA, a chynnwys asid oleanolic ym mhob sampl ei bennu gan y dull HPLC. 2.13. Dadansoddiad Ystadegol
Dangoswyd yr holl ddata fel gwyriad safonol cymedrig ± (SD). Dadansoddwyd arwyddocâd ystadegol rhwng gwahanol grwpiau trwy ddadansoddiad o amrywiant (ANOVA) gyda phrawf post hoc Tukey.p<0.05 indicated="" statistical="" significance.="">
3.1. Gall Asid Oleanolic Atal Llid, Heneiddio, a Llwybrau Signalu ROS/MAPK mewn Difrod Ceratinocytes a Anwythir gan PM
Er mwyn dod o hyd i'r ystod grynodiad briodol ar gyfer gwerthuso gweithgaredd biolegol, penderfynwyd ar sytotocsig-ity o OA hydoddi mewn DMSO mewn celloedd keratinocytes HaCaT dynol gan ddefnyddio assay MTT. Fel y dangosir yn Ffigur 1A, roedd 40 ac 80 μM o OA yn gysylltiedig â hyfywedd celloedd 32 i 16 y cant. Roedd gan OA ar lai nag 20 μM gyfradd goroesi celloedd dros 85 y cant o hyd. Dangosodd y canlyniadau hyn nad oes gan OA mewn crynodiad o 5-20 μM unrhyw effeithiau sytotocsig ar keratinocytes HaCaT dynol (Ffigur 1A). Yn unol â hynny, astudiwyd OA mewn crynodiad o 5-20 uM i ymchwilio i'w weithgaredd gwrthocsidiol a gwrthlygredd mewn difrod keratinocytes a achosir gan PM. Yn ddiweddar, mae llawer o astudiaethau wedi dangos bod PM yn llygrydd aer cyffredin sy'n achosi gorgynhyrchu ROS a difrod dilynol i'r system groen trwy gyfres o straen ocsideiddiol, gan gynnwys perocsidiad lipid, carbonyliad protein, a threiglad DNA [14-16] Fel y dangosir yn Cynyddodd Ffigur 1B, triniaeth PM y cynhyrchiad ROS yn sylweddol o'i gymharu â'r grŵp heb ei drin (t<0.05).in contrast,="" pretreatment="" with="" oa="" effectively="" decreased="" pm-induced="" ros="" overproduction="" in="" a="" dose-dependent="" manner=""><0.05).there-fore, these="" results="" suggested="" that="" oa="" possessed="" antioxidant="" activity="" to="" prevent="" pm-induced="" oxidative="" stress="" by="" reducing="" the="" ros="" overproduction.="" in="" addition,="" ros="" overproduction="" after="" pm="" exposure="" can="" activate="" the="" phosphorylation="" of="" mapks="" proteins,="" including="" p-erk,="" p-p38,="" and="" p-jnk,="" triggering="" the="" protein="" expressions="" of="" inflammation="" and="" aging[17,18]the="" present="" study="" also="" found="" that="" pm="" treatment="" can="" increase="" the="" expression="" of="" inflam-matory="" proteins="" (cox-2="" and="" nf-kb),skin="" aging-related="" proteins="" (mp-1,mmp-9="" and="" timp-1),and="" phosphorylation="" of="" erk,jnk,="" and="" p38=""><0.05). our="" present="" results="" also="" demonstrated="" that="" oa="" at="" 10="" and="" 20="" um="" significantly="" inhibited="" the="" protein="" expression="" of="" nf-kb="" and="" cox-2="" when="" compared="" with="" the="" pm="" treatment="" group="" (p=""><0.05)(figure 1c)furthermore,="" oa="" pretreatment="" also="" effectively="" reversed="" pm-induced="" alteration="" on="" mmp-1="" and="" timp-1="" expression=""><0.05) but="" had="" no="" effect="" on="" mmp-9(figure="" 1d).="" we="" further="" de-termined="" the="" effects="" of="" oa="" treatment="" on="" phosphorylation="" of="" mapks="" during="" pm="" exposure,="" and="" our="" results="" indicated="" that="" oa="" could="" inhibit="" the="" phosphorylation="" of="" jnk=""><05), but="" had="" no="" effect="" on="" erk="" or="" p38="" (figure="" 1e).="" according="" to="" the="" above="" results,="" when="" dissolved="" in="" dmso,="" oa="" displayed="" good="" skin-protective="" activity="" and="" could="" ameliorate="" pm-induced="" ros="" overproduction,="" jnk="" activation,="" and="" inflammatory="" and="" skin-aging="" protein="" expression="" in="">
3.2. Cynyddodd Nanofibers Asid Oleanolic Hydoddedd Dŵr a Threiddiad Croen Asid Oleanolig Crai trwy Wella'r Priodweddau Ffisicocemegol
3.2.1.Morffoleg Arwyneb Asid Oleanolig a'i Nanofibrau
O dan arsylwi SEM, roedd ymddangosiad HPBCD yn cyflwyno excipient sfferig a mandyllog, ac roedd ei faint tua 20 i 50 μm （Ffigur2A）.PVPK90yn excipient gyda gronynnau polygonal afreolaidd a maint gronynnau mwy na 60 um (Ffigur 2B) Mae asid oleanolig .Raw yn bowdr gronynnog afreolaidd crwn gyda maint o 3-60 um. Mae Ffigur 2D-F yn dangos diamedr ffibr cymedrig cymarebau pwysau gwahanol asid oleanolic: HPBCD: PVPK90 oedd 174.83 ± 19.53nm, 219.23 ± 18.93nm, a 403.17 ± 32.99nm, yn y drefn honno. Canfuwyd bod cymhareb uwch o HPBCD (18.93nm). :20) wedi arwain at OAnf â diamedr ffibr mwy (Tabl 1).
3.2.2.Maint Gronyn a Morffoleg OAnf Wedi'i Ail-gyfansoddi mewn Dŵr
Er mwyn arsylwi siâp gronynnau a maint gronynnau'r OAnf (OA: PVP:HPBCD, 1:8:20) wedi'i hydoddi mewn dŵr, dangosodd delwedd OAnf o dan y micro-sgop electron trawsyrru (TEM) bod y gronynnau asid oleanolic yn sfferig ac wedi'u gwasgaru'n unffurf mewn dŵr (Ffigur 3). Cadarnhawyd maint y gronynnau hefyd gan ddadansoddwr maint gronynnau laser (Tabl 2). Meintiau gronynnau OA ac OAnf oedd 5079.50±384.87 nm a 302.37±11.91 nm, yn y drefn honno. Mynegeion aml-dispersity (PDI) OA ac OAnf oedd 1.63 ± 0.21 a 0.32 ± 0.02, yn y drefn honno. Mae'r canlyniadau hyn yn dangos bod y broses electronyddu i bob pwrpas wedi lleihau maint gronynnau OA gyda dosbarthiad gronynnau unffurf ac wedi arwain at wella'r arwynebedd.
3.2.3.Llwytho Cyffuriau, Effeithlonrwydd Mewngapsiwleiddio, a Hydoddedd Dŵr Nanoffibrau Asid Oleanolig
Fel y dangosir yn Nhabl 3, canrannau llwytho OA mewn gwahanol gymarebau o dderbynyddion oedd 72.36 ± 10.45 y cant ,84.23 ± 3.62 y cant , a 98.19 ± 4.82 y cant , yn y drefn honno. Dangosodd y canlyniadau fod cymhareb uwch o HPBCD yn dangos effaith llwytho cyffuriau gwell. Roedd effeithlonrwydd amgáu'r holl fformwleiddiadau yn fwy na 95 y cant, a oedd yn dangos bod PVPK90 a HPBCD wedi amgáu OA yn effeithiol. , a 998.7 ±58.32 ug/mL, yn y drefn honno.cistanche genghis khanDangosodd y canlyniadau hyn fod y cynnydd mewn HPBCD yn y ffurfiant yn gwella hydoddedd dŵr OA amrwd yn ddramatig. Mewn cyferbyniad, ni ellid pennu hydoddedd dŵr OA amrwd oherwydd ei fod yn is na'r terfyn canfod (0.01 ug/mL) yn y dull HPLC. Roedd y canlyniad hwn yn dangos bod gan OAn 1:8:20 fwy na 1000-gwelliant hydoddedd dŵr plyg o gymharu ag OA amrwd. Felly, yn yr astudiaethau canlynol, defnyddiwyd 18:20 OAnf i bennu'r gweithgaredd biolegol yn y model difrod keratinocytes a achosir gan PM.
3.2.4.Crystalline Change of Oleanolic Acid a'i Nanofibers
Dangosir patrymau diffreithiant pelydr-X (XRD) OA amrwd, excipients, a'i nanofibers yn Ffigur 4. Roedd OA amrwd yn arddangos copaon diffreithiant nodwedd dwysedd uchel lluosog ar ongl sganio o 5 gradd -20 gradd , gan nodi hynny Roedd OA amrwd yn gyfansoddyn crisialog. Ar y llaw arall, nid oes gan batrymau diffreithiant PVPK90 a HPBCD unrhyw uchafbwyntiau diffreithiant cymeriad amlwg.Yn ogystal, ar gyfer OA amrwd o dan brosesu electronyddu, mae holl gopaon diffreithiant nodweddiadol yr OA amrwd wedi diflannu'n llwyr, a oedd yn dangos bod natur amrwd Trawsnewidiwyd OA o grisialaidd i amorffaidd (Ffigur 4). Yn ôl y canlyniadau hyn, gallem ddod i'r casgliad bod asid oleanolig amrwd wedi'i grynhoi'n llwyddiannus i HPBCD a'i amgáu gan PVPK90 ar ôl y broses nanofiber.
3.2.5.Ffurfiant Bond Hydrogen Rhyngfoleciwlaidd rhwng Asid Oleanolig a Chyflenyddion
Pennwyd rhyngweithiad rhyngfoleciwlaidd OA amrwd a HPBCD â PVPK90 gan sbectrosgopeg FTIR, a dangosir y canlyniadau yn Ffigur 5. Roedd sbectrwm FTIR yn dangos yn glir amsugnedd sawl grŵp swyddogaethol cemegol o OA amrwd, gan gynnwys band amsugno ar 3463 cm{{{{}). 3}} (—— Dirgryniad ymestyn OH), 1696 cm-1 (—— C= O dirgryniad ymestyn), a 1462 cm-l (—dirgryniad ymestyn CHz)(Ffigur 5). Pan gafodd OA, PVPK90, a HPBCD eu cymhlethu i ffurfio nanofibers, mae'n amlwg bod amsugnedd y grwpiau swyddogaethol cemegol hyn wedi symud i amsugno is. Roedd y canfyddiadau hyn yn arwydd o ryngweithiadau bond hydrogen rhyng-foleciwlaidd rhwng OA a HPBCD â PVPK90. Yn ogystal, roedd yr astudiaeth bresennol hefyd yn defnyddio 'H NMR i gadarnhau'r rhyngweithio rhyngfoleciwlaidd rhwng OA a excipients. Roedd sbectrwm 1HNMR o OA amrwd (Ffigur 6C) yn dangos signal carboxyl ar 812 ppm (H28), protonau rhwym dwbl ar 85.15 ppm (H12), signal hydroxy proton ar 83.38 ppm (H3), a phrotonau methyl (81 ppm). , dangosodd sbectrwm HNMR nanofibers OA fod signal carboxyl o OA wedi diflannu, ac yn amlwg symudwyd y sifftiau cemegol o brotonau dwbl, hydroxy, a methyl i fyny'r cae (Ffigur 6). Dangosodd y canlyniadau hyn ffurfio bondiau hydrogen rhyngfoleciwlaidd rhwng OA a sylweddau, a oedd yn cefnogi amgáu OA yn llwyddiannus gan HPBCD a PVPK90.
3.2.6.Treiddiad Croen Mewn Vitro o Asid Oleanolig Amrwd a'i Nanofibers
Mae gweithgaredd biolegol fformiwleiddiad amserol yn dibynnu'n bennaf ar amsugno'r croen. Pennwyd treiddiad croen yr OA amrwd a'i nanofiberau mewn croen mochyn ex vivo. Fel y dangosir yn Ffigur 7, cynnwys is o OA（<5 μg/cm2）was="" detected="" in="" the="" epidermis="" and="" dermis="" after="" 1,2,="" and="" 4h="" of="" topical="" administration,="" and="" these="" results="" also="" indicated="" that="" raw="" oa="" could="" not="" penetrate="" the="" skin="" in="" a="" time-dependent="" manner.="" the="" result="" showed="" that="" the="" skin="" absorption="" of="" raw="" oa="" was="" extremely="" poor.="" by="" contrast,="" the="" nanofiber="" formulation="" dramatically="" increased="" the="" content="" of="" oa="" in="" the="" epidermis="" and="" dermis="" with="" 19.63="" ug/cm2,31.56="" ug/cm2,and="" 45.27="" ug/cm2="" after="" 1,2,and="" 4h="" of="" topical="" administration,="" respectively.="" these="" results="" demonstrated="" that="" the="" oanf="" formulation="" significantly="" increased="" skin="" absorption="" when="" compared="" with="" the="" raw="" oa="" topical="" administration=""><>
3.3.Roedd Nanoffibrau Asid Oleanolig ar Grynodiadau Di-Sytotocsig wedi Gwell Gweithgaredd Gwrth-lygryddion trwy Wella Gweithgaredd Gwrthocsidiol, Gwrthlidiol a Gwrth-heneiddio
Yn debyg i'r OA a ddiddymwyd yn DMSO, gostyngodd yr OAnf a ddiddymwyd yn PBS ar 40 uM ac 80 uM hyfywedd celloedd HaCaT i 14.1 y cant a 5.6 y cant, yn y drefn honno (Ffigur 8A). Felly, gwerthuswyd 10 uM o OAnf ar gyfer gweithgaredd gwrthocsidiol a gwrthlygredd pellach er mwyn deall a oes gan OA a'i nanofiberiaid y gallu i atal y cynhyrchiad gormodol o ROS a achosir gan PM. Mae Ffigur 8B yn dangos bod OAnf ar 10 uM wedi lleihau'n sylweddol orgynhyrchu ROS a achosir gan PM. Fe wnaethom hefyd gyfrifo cyfradd ataliad cynhyrchu ROS i gymharu'r gweithgaredd gwrthocsidiol rhwng OA hydoddi PBS ac OAnf. Arweiniodd deg micromolar OA mewn PBS at ataliad o 28.3 y cant o gynhyrchu ROS, a chyflawnodd OAnf ataliad o 97.6 y cant (Ffigur 8B). Dangosodd y canlyniadau hyn fod gan OAnf well gweithgaredd gwrthocsidiol nag OA mewn PBS mewn straen ocsideiddiol a achosir gan PM mewn keratinocytes. Yn ogystal, gwnaethom hefyd gymharu gweithgarwch gwrthlidiol difrod keratinocytes a achosir gan PM. Ni allai rhag-drin ag OA amrwd mewn PBS atal mynegiant protein a achosir gan PM o NF-KB a COX-2 Mewn cyferbyniad, roedd rhag-driniaeth gydag OAnf yn PBS wedi lleihau mynegiant NF yn sylweddol. kB a COX-2 mewn celloedd wedi'u trin â PM (t<0.05).these results="" supported="" that="" oanf="" in="" pbs="" had="" better="" anti-inflammatory="" activity="" than="" raw="" oa="" in="" pbs="" (figure="" 8c).then,="" we="" also="" compared="" their="" anti-skin-aging="" activity.="" pretreatment="" with="" oa="" in="" pbs="" had="" no="" effects="" on="" pm-induced="" mmp-1="" or="" timp-1="" alteration.="" however,="" oanf="" in="" pbs="" could="" reduce="" the="" expression="" of="" mmp-1="" and="" rescue="" the="" expression="" of="" timp-1="" when="" compared="" with="" the="" pm-induced="" keratinocytes="" damage="" group=""><0.05)(figure 8d).these="" findings="" indicated="" that="" oanf="" possessed="" better="" anti-skin-aging="" properties="" than="" raw="" oa="" in="" pbs.="" finally,="" we="" analyzed="" the="" phosphorylation="" of="" erk,="" jnk,="" and="" p38="" to="" confirm="" the="" regulation="" of="" mapks="" signaling.="" figure="" 8e="" showed="" that="" the="" treatment="" of="" raw="" oa="" in="" pbs="" could="" not="" downregulate="" pm-induced="" phosphorylation="" of="" these="" mapks="" protein.="" however,="" pretreatment="" with="" oanf="" only="" reduced="" pm-induced="" phospho-jnk="" (p-jnk)="" expression="" but="" had="" no="" effect="" on="" p-erk="" and="" p-p38="" (figure="" 8e).the="" percentage="" changes="" of="" protein="" expression="" induced="" by="" oa="" in="" dmso,="" oa="" in="" pbs,and="" oanf="" in="" pbs="" are="" summarized="" at="" table="" 4.="" oanf="" in="" pbs="" markedly="" reversed="" pm-induced="" protein="" alterations,="" which="" was="" barely="" observed="" in="" oa="" in="" the="" pbs="" group.="" in="" addition,="" the="" effects="" of="" oanf="" in="" pbs="" were="" comparable="" to="" the="" equivalent="" amount="" of="" oa="" in="" dmso,="" which="" indicated="" that="" the="" electrospinning="" process="" increased="" the="" water="" solubility="" of="" oa="" without="" altering="" its="" bioactivities.="" accordingly,="" oanf="" effectively="" inhibited="" the="" expressions="" of="" inflammatory="" proteins="" and="" skin-aging="" proteins="" and="" downregulated="" the="" mapks="" signaling="" pathway="" in="" pm-induced="" keratinocytes="">
4. Trafodaeth
Yn ddiweddar, mae monitro crynodiad materion gronynnol yn yr aer wedi dod yn un o'r dangosyddion pwysicaf a ddefnyddir i werthuso'r mynegai ansawdd aer. Y croen yw organ imiwn mwyaf bodau dynol, a gallai gor-amlygiad PM niweidio swyddogaethau'r croen. Roedd Jin et al. Datgelodd bod gwahanol fathau o PM nid yn unig yn aros yn y stratum corneum allanol yr epidermis ond hefyd yn treiddio i mewn i'r stratum spinosum a ffoliglau gwallt [14]. Os bydd yn agored i PIA gormodol am amser hir, bydd hyn yn achosi camweithrediad rhwystr croen ac mae'n gysylltiedig â llawer o glefydau croen, megis dermatitis atopig, psoriasis, acne, a heneiddio [19,20]. Mae Dijkhoff et al. wedi'i ddangos yn glir y gall PM sbarduno ffurfiad ROS alldarddol ac mewndarddol, gan arwain at ddilyniant straen ocsideiddiol, gan gynnwys perocsidiad lipid, ocsidiad protein, camweithrediad mitocondriaidd, difrod DNA, actifadu llid, a chyflymiad proses heneiddio [15]. Yn unol â hynny, mae gwrthweithio gorgynhyrchu ROS a achosir gan PM yn strategaeth dda a'r dewis cyntaf i atal difrod straen ocsideiddiol yn ystod gor-amlygiad PM. Mae astudiaethau blaenorol hefyd wedi dangos y gall triniaethau gwrth-ocsi-dant, megis diphlorethohydroxycarmalol [21], dieckol [22], dyfyniad Opuntia humifusa [23], a detholiad ceirios tarten [24] wanhau camweithrediad keratinocytes a achosir gan PM yn effeithiol. Canfu ein canlyniadau hefyd y gall OA mewn DMSO leihau gorgynhyrchu ROS a achosir gan PM ac atal y difrod gan PM. Yn ogystal, mae NF-kB yn ffactor trawsgrifio hollbresennol ac anwythol sy'n rheoleiddio mynegiant proteinau proinflammatory, megis COX-2, sy'n chwarae rhan hanfodol mewn llawer o glefydau croen. Soniodd ein canlyniadau y gall OA leihau actifadu NF-kB a achosir gan PM i atal mynegiant protein llidiol COX-2[25]. Ar ben hynny, gall actifadu signalau MAPKs wella mynegiant AP-1 ac yn arwain at reoleiddio trawsgrifiadol o ASau[18]. Yn yr astudiaeth hon, roedd OA yn gallu atal mynegiant protein heneiddio croen MP-1 a chynyddu mynegiant protein gwrth-heneiddio TIMP-1 i atal heneiddio a achosir gan PM o geratinocytes. Dangosodd ein canlyniadau hefyd fod yr OA i bob pwrpas yn atal ffosfforyleiddiad JNK Felly, gall OA atal llid y croen a achosir gan PM a heneiddio trwy is-reoleiddio llwybr signalau ROS / JNK mewn difrod keratinocytes a achosir gan PM.
Hyd y gwyddom, mae hydoddedd dŵr gwael y cyfansoddion gweithredol yn gysylltiedig â bio-argaeledd isel, sy'n cyfyngu ar eu cymhwysiad mewn diwydiannau meddygaeth, bwyd a chosmetig [26,27]. Mae'n hysbys bod gan gyfansoddion â hydoddedd dŵr gwael nifer o nodweddion ffisiocemegol cyffredin, megis maint gronynnau rhy fawr, arwynebedd is, strwythur lipoffilig, a ffurf grisialog [28]. Roedd ein canlyniadau hefyd yn nodi bod gan OA amrwd y priodweddau ffisicocemegol hyn, gan gynnwys maint gronynnau mawr (50 79.50 ±384.87 nm), powdr gronynnog afreolaidd 3-60 ag arwynebedd is (Ffigur 2C), a ffurf grisialaidd amlwg. Roedd y canlyniadau hyn yn dangos bod hydoddedd dŵr OA yn is na 0.01 ug/mL ac y gellid ei ddosbarthu fel cyfansoddyn gweithredol anhydawdd ymarferol yn ôl dosbarthiad hydoddedd dŵr Phar-macopeia (USP) yr Unol Daleithiau[29]. Os na ellir datrys yr anfanteision hyn, byddai gweithgareddau OA ar y croen yn gyfyngedig iawn. Llwyddodd yr astudiaeth bresennol i ddefnyddio PVPK90 a HPBCD fel cludwyr gan ddefnyddio proses electronyddu i baratoi OAnf. Y gwelliant hydoddedd dŵr yw'r prif fynegai a ddefnyddir i gadarnhau'r fformiwleiddiad fferyllol gorau posibl, a dangosodd ein canlyniadau mai OA:PVPK90:HPBCD am 1:8:20 oedd â'r hydoddedd dŵr gorau Roedd hyn yn dangos bod OAnf i bob pwrpas wedi cynyddu hydoddedd dŵr amrwd. OA yn dibynnu ar y gymhareb HPBCD. Yn yr un modd, mae astudiaethau blaenorol hefyd wedi datgelu bod cymhareb uwch o cyclodextrin yn gwella gallu amgáu'r fformiwleiddiad ac yn arwain at gynnydd sylweddol yn hydoddedd dŵr a gweithgaredd biolegol curcumin [30], resvera-trol [12], thymol [31] , a difenoconazole[32]. Ymhellach, roedd yr astudiaeth bresennol hefyd yn cymharu priodweddau ffisigocemegol OA amrwd a'i nanofiberau i egluro'r mecanweithiau gwella hydoddedd dŵr o nanofiberau OA.OA a gynhyrchwyd yn yr astudiaeth hon i gyd yn ffilamentau â nano-maint unffurf. Soniodd canlyniadau'r dadansoddiad maint gronynnau hefyd fod OAnf a ailgyfansoddwyd mewn dŵr yn arddangos gronynnau nanosized gyda homogenedd dosbarthiad uwch. Nododd y canlyniadau hyn fod gan OAnf arwynebedd arwyneb mwy nag OA amrwd.Yn ogystal, gallai ffurfio bondio hydrogen rhyngfoleciwlaidd rhwng cyfansoddion gweithredol a chludwyr hefyd gyfrannu at wella hydoddedd dŵr. Dangosodd sbectrwm FTIR a HNMR OAnf fod OA amrwd wedi'i amgáu'n effeithiol i HPBCD a ffurfio strwythur nanoffibr sefydlog gyda PVPK90 trwy ffurfio'r bondio hydrogen rhyngfoleciwlaidd rhwng OA a HPBCD/PVPK90. Roedd y ffurf grisialog a drawsnewidiwyd i ffurf amorffaidd o'r cyfansoddyn gweithredol hefyd yn ddangosydd o welliant hydoddedd dŵr. Dangosodd patrwm XRD OAnf fod strwythur crisialog OA amrwd yn cael ei drawsnewid i strwythur amorffaidd ar ôl ffurfio nanofibers. Gwelwyd y canlyniad tebyg hwn hefyd mewn sawl cyfansoddyn gweithredol wedi'i lwytho mewn nanofibers [12,30]. Gyda'i gilydd, fe wnaeth y ffurfiad nanofiber wella hydoddedd dŵr OA amrwd yn effeithiol trwy wella'r priodweddau ffisiocemegol, gan gynnwys lleihau maint gronynnau, cynnydd arwynebedd arwyneb, ffurfio bondio hydrogen â chludwyr, a thrawsnewid amorffaidd.
Mae fformwleiddiadau amserol sy'n cynnwys gwrthocsidyddion yn effeithiol i'w danfon i'r epidermis a'r dermis i wrthweithio straen ocsideiddiol a achosir gan PM, llid, a heneiddio'r croen [33]. Yn seiliedig ar wybodaeth am amsugno croen, y stratum corneum yw'r ffactor sy'n cyfyngu ar gyfradd sy'n cyfyngu ar dreiddiad croen ac amsugno cyfansoddion gweithredol, gan arwain at ostyngiad mewn gweithgaredd biolegol [34]. Roedd y canlyniad o dreiddiad croen in vitro yn dangos bod OAnf yn pasio trwy'r stratum corneum yn haws ac yn gyflymach na'r OA amrwd ac wedi aros yn yr epidermis a'r dermis mewn symiau mawr. Cadarnhaodd y canlyniad hwn y gall OAnf wella amsugno croen OA amrwd yn effeithiol. Nesaf, er mwyn penderfynu a oedd gan yr OAnf well gweithgaredd gwrth-lygredd na'r OA amrwd, yn yr astudiaeth hon, defnyddiwyd model difrod keratinocytes a achosir gan PM i gymharu eu gweithgareddau biolegol. Dangosodd ein canlyniadau fod gan OAnf mewn PBS well effeithiau gwrth-lygredd nag OA amrwd, gan gynnwys gorgynhyrchu ROS llai, llai o fynegiant protein llidiol (COX-2 a NF-kB) a phrotein heneiddio croen (MP-1), mwy o fynegiant protein gwrth-heneiddio croen (TIMP-1), a ffosfforyleiddiad JNK wedi'i isreoleiddio. Felly, gallai OAnf fod yn fformiwleiddiad amserol fel asiant gwrthocsidiol ar gyfer atal difrod keratinocyte a achosir gan PM.
I grynhoi, fe wnaeth OAnf wella ei briodweddau ffisiocemegol i ddatrys hydoddedd dŵr gwael OA amrwd a hefyd wedi gwella'n sylweddol amsugno croen OA amrwd. Roedd gan OAnf well gweithgareddau gwrthocsidiol, gwrth-llid a gwrth-heneiddio mewn difrod keratinocytes a achosir gan PM. O ganlyniad, rydym yn awgrymu y gellid defnyddio OAnf fel cynnyrch gofal croen neu fel fformiwleiddiad fferyllol i atal niwed i'r croen a achosir gan PM yn y dyfodol.
Daw'r erthygl hon o Antioxidants 2021, 10, 1411. https://doi.org/10.3390/antiox10091411 https://www.mdpi.com/journal/antioxidants
