Dail Olewydd (Olea Europaea L) Detholiad Nanoronynnau Lipid Wedi'u Llwytho: Optimeiddio Paramedrau Prosesu Yn ôl Dyluniad Ystadegol Blwch-Behnken, Nodweddu In-vitro, A Gwerthusiad o Weithgaredd Gwrth-ocsidydd A Gwrth-ficrobaidd
Jun 10, 2022
Cysylltwchoscar.xiao@wecistanche.comam fwy o wybodaeth
Crynodeb:Nod yr astudiaeth bresennol oedd paratoi a gwerthuso nanoronynnau lipid solet (SLNs) o bowdr echdynnu bondo olewydd (OLP) a oedd yn cynnwys llawer o asiantau gwrth-ocsidydd a gwrthficrobaidd fel oleuropein, polyphenol naturiol. Y mater o bwys yn ymwneud ag OLP oedd yr ansefydlogrwydd oherwydd amodau amgylcheddol ac felly'n peryglu bioactifedd. Er mwyn goresgyn y broblem hon, dyluniwyd SLNs gan homogenaidd poeth a ddilynwyd gan dechneg sonication i amddiffyn y cyffur a gwella ei weithgaredd gwrthocsidiol a gwrthficrobaidd. Defnyddiwyd lipidau fel compritol 888ATO a syrffactyddion fel tween 80 ar gyfer datblygu a sefydlogi SLNS a gwnaed optimeiddio gan ddyluniad ystadegol Box-Behnken(3x3). Dangosodd y swp wedi'i optimeiddio (F9) faint gronynnau, effeithlonrwydd dal, PDI, a photensial zeta 277.46 nm, 80.48 y cant, 0.275. a -23.18 mV yn y drefn honno. Roedd fformiwleiddiad wedi'i optimeiddio (F9) yn arddangos patrwm rhyddhau parhaus hyd at 24 h gyda cinetig rhyddhau archeb gyntaf （R²=0.9984） a chanfuwyd bod y mecanwaith rhyddhau cyffuriau yn fath trylediad Fickian (n=0 .441). Yn dilyn yr astudiaeth sefydlogrwydd, gwelwyd bod y ffurfweddiad SLNs yn sefydlog. Cynhaliwyd astudiaethau gwrth-ocsidiad a gwrth-ficrobaidd ar fformiwleiddiad wedi'i optimeiddio ac roedd canfyddiadau'n awgrymu bod SLNs yn dangos gwell gweithgaredd sborionu radical a gweithgaredd gwrth-ficrobaidd yn erbyn bacteria Gram-positif (Staphylococcus aureus) a Gram-negative (Pseudomonas aeruginosa). Yn olaf, daethpwyd i'r casgliad bod SLNs datblygedig yn gallu diogelu a bod yn addas ar gyfer darparu OLP.
Geiriau allweddol:Olea europaea, oleuropein,nanoronynnau lipid solet, echdyniad dail olewydd,gweithgaredd gwrth-ocsidydd, gweithgaredd gwrth-microbaidd
1 Rhagymadrodd
Mae'r teulu Dicotyledons Oleaceae yn cynnwys tua 30 genera o blanhigion collddail gan gynnwys coed olewydd ac mae wedi cysylltu tua 600 o rywogaethau. Mae aelodau Oleaceae wedi tyfu'n dda mewn rhesymau amserol ac is-dymherol o Asia?. Mae gan olew coeden olewydd (Olea europaea) a geir o wahanol rannau fel ffrwythau, dail, ac ati lawer o fanteision iechyd wrth ei fwyta'n rheolaidd. Yn draddodiadol fe'i defnyddiwyd fel meddyginiaeth werin ar gyfer cywiro gwahanol fathau o dwymyn a phroblemau eraill sy'n gysylltiedig â'r corff2).
Roedd detholiad dail olewydd yn arddangos nifer o weithgareddau therapiwtig megis gwrth-hypertensive, hypoglycemic, gwrthficrobaidd, hypowricemig, ac ati. Mae gweithgaredd gwrth-feirws yn erbyn haint HIV-I wedi'i ddangos a'i adrodd. Yn ogystal, roedd oleuropein (secoiridoid nodweddiadol) a gafwyd o'r planhigyn olewydd yn arddangos gweithgaredd hypocholesterolemig a hypoglycemig gyda gwrth-ocsidydd cryf ac yn ogystal â gweithgaredd gwrthlidiol. Cynnyrch diraddio oleuropein h.y. roedd hydroxytyrosol hefyd yn arddangos yr holl weithgareddau crybwyll uchod ynghyd â chamau gweithredu radical rhydd posibl5.bioflavonoidauMae cysylltu'r holl weithgareddau therapiwtig hyn sy'n ymwneud â phlanhigyn olewydd yn ei wneud yn gyfrannwr pwysig ym maes iechyd · 4).
Yn y prosiect hwn, mae'r awduron yn ymwneud ag eiddo gwrth-microbaidd a gwrth-ocsidydd echdyniad dail Olewydd. Mae gweithgaredd gwrth-ficrobaidd y dyfyniad olewydd yn ganlyniad i asid p-hydroxybenzoic, cyclotrisiloxane hexamethyl, Cyclopentasiloxane octamethyl, a Cyclopentasiloxane desmethyl, vanillic, caffeic, protocatechuic, syringic, asid gallic, ac ati Cynhwysion eraill fel oleuropein, tyrosolce, a quetin asid oleanolic hefyd yn gyfrifol am weithgaredd gwrth-microbaidd. Mae potensial gwrthficrobaidd yr holl sylweddau hyn wedi'i adrodd yn flaenorol gan nifer o ymchwilwyr yn erbyn bacteria, burum, ffyngau, firysau, retroviruses, a pharasitiaid eraill,2).
Gall Cistanche gwrth-heneiddio
Mae cymeriant dietegol o ffynonellau gwrthocsidiol naturiol fel ffrwythau a dail wedi cael llawer o sylw ac yn dangos effaith gadarnhaol ar iechyd bodau dynol. Archwiliodd canlyniadau llawer o astudiaethau epidemiolegol fod cymeriant bwyd llawn polyffenolau yn lleihau nifer yr achosion o glefyd rhydwelïau coronaidd (CHD). Mae'r CHD fel MI (cnawdnychiant myocardaidd), IS (strôc isgemig), ac ati yn gysylltiedig ag athero-sclerosis." Archwiliodd astudiaethau diweddar fod difrod ocsideiddiol yn ffactor etiolegol pwysig ar gyfer cynnydd atherosglerosis, Yn enwedig, yn ôl y ddamcaniaeth straen ocsideiddiol, credir bod addasiad ocsideiddiol o lipoprotein dwysedd isel (LDL) yn chwarae rhan allweddol yn natblygiad atherosglerosis.Felly, ystyrir bod atal proses o'r fath yn ddull therapiwtig pwysig.Amryw o gyfansoddion pwysig fel Oleuropein (hydroxytyrosol, tyrosol) , cafwyd verbascoside (a elwir hefyd yn ac-toeside neu Kalinin), ligstroside, apigenin-7-glucoside, di-cosmetic-7-glucoside, luteolin, catechin, ac ati ar gyfer dail olewydd ac yn arddangos gwrth-ocsidydd gweithgaredd fel yr adroddwyd yn flaenorol Hydroxytyrosol yw'r prif oleuropein dail olewydd sydd â phriodweddau gwrthocsidiol patent).
Heblaw am y gweithgaredd hwn, roedd detholiad dail olewydd yn arddangos gweithgareddau ffarmacolegol eraill fel gwrthlidiol", 12), gwrth-ganser8.14), gwrth-feirws5), hypoglycemicl4), hypolipidemic17, agregu gwrthblatennau. Rhoddodd yr Asiantaeth Diogelwch) ac EMA (Asiantaeth Meddygaeth Ewropeaidd) eu hasesiad o gymhwysedd therapiwtig echdynwyr dail olewydd, ynghyd â'r cymhwysedd mawr, mae cynhyrchion echdynnu dail olewydd yn dioddef o broblemau ansefydlogrwydd mewn amodau atmosfferig (tymheredd, golau ac ocsigen). yn ogystal ag amodau biolegol ac felly gwelwyd bioactifedd gwael20,21).prynu cistancheEr mwyn gwella'r sefydlogrwydd, mae fformwleiddiadau nano-seiliedig amrywiol wedi'u datblygu i archwilio gweithgaredd amrywiol echdynnu dail olewydd. Mae'r fformwleiddiadau hyn yn cynnwys nano-emwlsiwn (W/O yn ogystal â mathau lluosog)2), cyfadeiladau cynhwysiant, cynhyrchion sych chwistrellu?4), allwthio electrostatig25, cyfadeiladau deubegwn), nano-liposomau20, Nano-emwlsiwn, micro -amgapsiwleiddio, PLA nanoronynnau2, a NLCs0.Mae problemau amrywiol yn gysylltiedig â'r fformwleiddiadau hyn fel gwerth cynnyrch isel, gweithdrefn sy'n cymryd llawer o amser, cyfaddawdu effeithlonrwydd caethiwo, halogiad toddyddion gweddilliol, a maint gronynnau uchel. Felly, i reoleiddio'r anfanteision hyn, daeth nanoronynnau lipid i fodolaeth. Mae nanoronynnau lipid es-nanoronynnau lipid solet yn arbennig (SLNs) yn cynnig llawer o fanteision fel gwell effeithlonrwydd caethiwo, maint gronynnau rheoledig, biogydnawsedd, bioddiraddadwyedd, a rhwyddineb paratoi. Ar ben hynny, mae gan lipidau a ddefnyddir ar gyfer paratoi SLNs rywfaint o weithredu synergaidd ar weithgaredd gwrthlidiol ynghyd â'r cyffur sydd wedi'i ddal. Hyd yn hyn, nid oes unrhyw fformiwleiddiad yn seiliedig ar nanoronynnau lipid solet (SLNs) ar gyfer archwilio ei briodweddau gwrth-ficrobaidd a gwrth-ocsidydd hefyd i wella sefydlogrwydd cynnyrch echdynnu absenoldeb olewydd wedi'i ddatblygu.
Felly, anelwyd y gwaith ymchwil at "ddatblygu nanoronynnau lipid solet (SLNs) ar gyfer powdr echdynnu dail olewydd (Olea europaea L.) (OLP).) Gwahanwyd yr egwyddorion gweithredol trwy echdynnu dail olewydd gan ddefnyddio ethanol. Y toddydd oedd wedi'i dynnu trwy sychu i gael y cynnyrch powdr sych. Ymgorfforwyd pŵer echdynnu dail olewydd (OLP) mewn SLNs (OLP-SLNs) a gwnaed optimeiddio gan feddalwedd dylunio arbenigol(Model 8.0.7.1) gan ddefnyddio Box-Behnken Cymerwyd tri ffactor fel cymhareb cyffur (OLP) i lipid, crynodiad syrffactydd (y cant , Tween 80), a chyflymder homogeneiddio (rpm) fel paramedrau annibynnol, a ffactorau fel maint gronynnau, effeithlonrwydd caethiwo, a mynegai aml-dispersity (PDI). eu dewis fel paramedrau dad-ddibynnol Gwerthuswyd fformiwleiddiad wedi'i optimeiddio ar gyfer astudiaeth morffolegol, astudiaeth DSC, astudiaeth rhyddhau in-vitro, ac astudiaeth sefydlogrwydd.Yn olaf, gwerthuswyd gweithgareddau gwrthficrobaidd a gwrth-ocsidiad i wirio'r potensial gwrth-microbaidd a gwrth-ocsidydd o S Ffurfio LNs.
2 Defnyddiau a Dulliau
Cafwyd dail olewydd o'r ardd leol. Cafodd dail ffres eu sychu a'u powdro i'w tynnu. Cafodd lipidau amrywiol fel ATO5 gwerthfawr, compritol 888 ATO eu caffael gan Gattefosse (yr Almaen). Prynwyd glyceryl monostearad (GMS), asid palmitig, asid stearig tween 80, ac ati o central drug house ltd (New Delhi, India).2, 2-Diphenyl{5}}Picryl hydroxyl-hydrate radicals free(DPPH) ) eu caffael gan Merck (Darmstadt, yr Almaen). Prynwyd asid asgorbig, potasiwm dihydrogen ffosffad, amoniwm asetad, methanol, sodiwm hydrocsid, poloxamer 188, ethanol, agar maetholion, a bag dialysis (toriad M.Wt i ffwrdd 12,000 kD) gan Sigma Aldrich(St Louis, UDA). Gradd ddadansoddol yw'r holl gemegau eraill a ddefnyddir ar gyfer yr astudiaeth.
2.1 Echdynnu cydrannau ffenolig
Roedd dail ffres o olewydd yn cael eu sychu a'u powdro i'w tynnu allan. Echdynnwyd yr egwyddorion gweithredol o'r pŵer gyda chymorth toddydd (ethanol: dŵr, 4: 1 v/v). Cymerwyd swm digonol o bowdr (250 mg) yn y fflasg echdynnu ac ychwanegwyd y toddydd (1000 mL) ethanol: dŵr, 4: 1 v /) a chynhyrfwyd y cymysgedd yn barhaus am gyfnod o 24 h. Ar ôl y cam hwn, cafodd y cymysgedd ffisegol ei hidlo a chafodd y toddydd ei anweddu i sychder ar 40 gradd i gael y powdr).
2.2 Paratoi ac optimeiddio SLNs: Rhagarweiniol
astudiaeth sgrinio a chyn-optimeiddio newidynnau fformiwleiddio Ar gyfer dewis lipid addas, syrffactydd, cyflymder ac amser homogeneiddio, amser sonication, ac ati, cynhaliwyd astudiaethau rhagarweiniol. Mae dewis lipid addas yn dibynnu ar hydoddedd y cyffur mewn lipid ac mae dewis syrffactydd yn dibynnu ar hydoddedd lipid mewn syrffactydd.
Cafodd y lipid dan sylw (100 mg) ei doddi uwchben ei ymdoddbwyntiau (tua 10 gradd uchod) yn y ffiol ac yna ymgorffori'r cyffur (OLP) ag ysgwyd parhaus. Mae ymddangosiad lliw golau golau yn dynodi'r diweddbwynt. Perfformiwyd arbrofion tebyg ar gyfer dewis syrffactyddion addas.
2.3 Dyluniad arbrofol
Yn yr astudiaeth bresennol, defnyddiwyd BBD o feddalwedd dylunio arbenigol gyda thri ffactor a thair lefel at ddibenion optimeiddio. Yn yr astudiaeth, mae tri ffactor fel cymhareb cyffur i lipid (A, 1: 3-1: 6), crynodiad syrffactydd (B, y cant ,1. 5-4.5 y cant), a chyflymder homogeneiddio (C Cymerwyd ,rpm, 3000-6000 rpm, am ddau f) fel paramedrau annibynnol a chymerwyd maint par-deitl (nm, Y1), effeithlonrwydd caethiwo (canran , Y2) a PDI (Y3) fel paramedrau dibynnol. Nod cymhwyso'r dyluniad hwn oedd gwneud y gorau o'r tri pharamedr annibynnol uchod a chyflawni'r maint gronynnau gorau posibl, yr effeithlonrwydd caethiwo mwyaf, a'r PDI lleiaf posibl. Gosodwyd y data yn y meddalwedd dylunio arbenigol ar gyfer BBD15). Cynhyrchwyd cyfanswm o 17 swp gyda 5 swp â chyfansoddiad tebyg (pum pwynt canol) (Tabl 1). Defnyddiwyd yr hafaliad polynomaidd ail orchymyn i ddangos dylanwad paramedrau annibynnol amrywiol ar faint gronynnau, effeithlonrwydd caethiwo yn ogystal â PDI.
2.4 Datblygu SLNs
Paratowyd SLNs OLP-lwytho gan homogenization poeth ddilyn gan y dull sonication. Rhoddir cyfansoddiad gwahanol sypiau SLNs wedi'u llwytho gan OLP yn Nhabl 1. Yn gyntaf oll, toddwyd y lipid (compritol 888 ATO) tua 10 gradd o'i ymdoddbwynt ac ychwanegwyd y swm dymunol o OLP (1:{{6} }: 6 cymhareb cyffuriau i lipid). Yn y cyfamser, cafodd y swm gofynnol (1.{9}}.5 y cant) o syrffactydd ei hydoddi mewn dŵr wedi'i ddad-ïoneiddio a chynhaliwyd tymheredd y cyfnod hwn yr un fath â thymheredd y cyfnod lipid. Yna ymgorfforwyd y cyfnod dyfrllyd yn y cyfnod lipid yn raddol a bu'n destun homogeneiddio poeth ar gylch cyflymder amrywiol (rpm, 3000-6000 rpm, dau h) i gael gwasgariad SLNs y cwrs. Caniatawyd i'r emwlsiwn a gafwyd
oer ac yna sonicated am 10 munud ar osgled 100 y cant gyda chymorth sonicator (Math Holwch, Vibra-Cell'VCX 130; Sonics, CT, UDA) i gael y gwasgariad SLNs terfynol. Casglwyd y gwasgariad mewn ffiol wydr a'i storio mewn oergell ar gyfer astudiaeth bellach. Yn yr un modd, datblygwyd SLNs gwag heb API (cyffur).
2.5 Nodweddu OLP-SLNs
2.5.1 Gwerthusiad o faint gronynnau, PDI, a photensial zeta
Defnyddiwyd Sbectrosgopeg Cydberthynas Ffoton (PCS) gan ddefnyddio peiriant zeta sizer (Malvern, nano ZS 90, Malvern Instruments, DU) i fesur maint gronynnau cyfartalog a mynegai aml-dispersity (PDI) o sypiau amrywiol. Cadwyd y tymheredd ar 25 gradd a gosodwyd yr ongl wasgaru ar 90 gradd.cistanchDefnyddiwyd dŵr deionized i wanhau gwasgariad OLP-SLNs gwreiddiol. Potensial Zeta sy'n dangos bod y wefr arwyneb wedi'i bennu gyda chymorth yr un offeryn gyda chryfder maes trydan o tua 20 V/cm27
2.5.2 Astudiaeth morffolegol
Defnyddiwyd microsgop electron trawsyrru (TEM, opteg electron Fei, Japan) gan ddefnyddio carbon wedi'i orchuddio â grid copr i archwilio morffoleg a siâp SLNs parod wedi'u llwytho gan OLP (swp wedi'i optimeiddio F9). Perfformiwyd staenio negyddol â staen asid ffosffotungstic (2 y cant w/w, hyd 20-30 eiliad) i staenio'r sampl OLP-SLNs ac yna sychu ar dymheredd ystafell. Yn olaf, canfuwyd y sampl gan TEM.
2.5.3 Gwerthusiad o effeithlonrwydd caethiwo
Pennwyd effeithlonrwydd caethiwo (EE) trwy archwilio faint o gyffur heb ei ddal a oedd yn bresennol yn y gwasgariad OLP-SLNs. Defnyddiwyd y dechneg centrifugation at y diben hwn. Cymerwyd swm mesuredig (10 mL) o OLP-SLNs mewn tiwb centrifuge a'i ganiatáu i waddod gyda chymorth centrifuge oeri (Remi, India) ar 12000rpm am 15 munud. Dadansoddwyd presenoldeb cyffur heb ei ddal gan sbectrophotometer UV-gweladwy (Model 1800, Shimadzu . Japan) ar 230 nm. Pennwyd canran y caethiwed cyffuriau gan y fformiwla ganlynol (hafaliad 1):
2.5.4 Astudiaeth calorimetreg sganio gwahaniaethol (DSC).
Pwrpas yr astudiaeth hon oedd gwerthuso ymddygiad thermol gwahanol fformwleiddiadau sef OLP pur, compritol 888 ATO, a fformiwleiddiad OLP-SLNs wedi'i optimeiddio (F9) gan ddefnyddio calorimetreg sganio gwahaniaethol (Mettler, Toledo, UDA). Cafodd pob sampl ei bacio mewn padell alwminiwm a'i sganio ar yr ystod tymheredd o 20-350 gradd (cyfradd 10 gradd /mun) gan ddefnyddio padell wag wedi'i selio fel cyfeiriad mewn atmosffer anadweithiol (nitrogen). Cafwyd cromliniau DSC a'u dehongli . 2.5.5 Astudiaeth rhyddhau cyffuriau ( y cant )
Gwnaed yr astudiaeth rhyddhau cyffuriau o swp wedi'i optimeiddio (F9) gan gell tryledu Franz gan ddefnyddio pilen dialysis. Cyn cymhwyso'r bilen dialysis, fe'i datblygwyd trwy drin 0.35 y cant w/v hydoddiant sodiwm sylffit ar 80 gradd am 1-2 munud ac yna asideiddio â HSO({{). 13}}.2 y cant ,v/v) ac yna ei storio am 12 h mewn dŵr distyll. Llenwyd byffer ffosffad halwynog (pH 7.4) yn y compartment derbynnydd a chymerwyd gwasgariad SLN (F9,1 mL) yn y compartment rhoddwr. Perfformiwyd yr arbrawf ar 37 ± 0.5 gradd gyda throi parhaus (50 rpm). Cymerwyd aliquots (1 mL) o'r adran dderbyn ar gyfnodau amser a bennwyd ymlaen llaw a chanfuwyd faint o gyffur a oedd yn bresennol ym mhob sampl gan y sbectroffotomedr UV-gweladwy yn 230 nm. Canfuwyd y cinetig rhyddhau addas o SLNs wedi'u optimeiddio trwy osod y data rhyddhau yn sero, yn gyntaf, model Higuchi a model Korsmeyer-Peppas fel y nodir yn Nhabl 2, a phenderfynwyd gwerth R (Cyfernod Cydberthyniad). Ystyriwyd bod y model â'r gwerth R uchaf yn fodel wedi'i optimeiddio8).
Daw'r erthygl hon o J. Oleo Sci. 70, (10) 1403-1416 (2021)
