Rhan 1|Mae Amrywiad Genetig yn Goblygu Angiopoietin Plasma-2 yn natblygiad Is-ffenoteipiau Anafiadau Acíwt i'r Arennau

Pavan K. Bhatraju1,2*, Max Cohen1, Ryan J. Nagao3,4, Eric D. Morrell1, Susanna Kosamo1, Xin-Ya Chai1, Robin Nance5, Victoria Dmyterko1, Joseph Delaney5, Jason D. Christie6, Kathleen D. Liu7, Carmen Mikacenic1, Sina A. Gharib1, W. Conrad Liles8, Ying Zheng3,4, David C. Christiani9,10, Jonathan Himmelfarb2 a Mark M. Wurfel1,2

Haniaethol

Cefndir:Nodwyd dau gennym o'r blaenacíwtarenanaf(AKI) is-ffenoteipiau (AKI-SP1 ac AKI-SP2) gyda risgiau gwahanol o ganlyniadau clinigol gwael ac ymatebion i therapi fasopressor. Roedd biofarcwyr plasma camweithrediad endothelaidd (derbynnydd ffactor necrosis tiwmor-1, angiopoietin-1, a 2) yn gwahaniaethu rhwng yr is-ffenoteipiau AKI.

Fodd bynnag, nid yw'n hysbys a yw'r biofarcwyr hyn yn ddim ond marcwyr neu gyfryngwyr achosol wrth ddatblygu is-ffenoteipiau AKI.

Dulliau:Fe wnaethon ni brofi am gysylltiadau rhwng polymorphisms un-niwcleotid o fewn yAngiopoietin-1, Angiopoietin-2,aDerbynnydd Ffactor Necrosis Tiwmor 1Agenynnau ac AKI-SP2 mewn 421 o bynciau difrifol wael o dras Ewropeaidd. Profwyd polymorphisms niwcleotid sengl sy'n perfformio orau (FDR < 0.05)="" ar="" gyfer="" mynegiant="" cis-biomarcwr="" ac="" a="" yw="" risg="" genetig="" ar="" gyfer="" aki-sp2="" yn="" cael="" ei="" gyfryngu="" trwy="" fiofarcwyr="" cylchredeg.="" fe="" wnaethom="" hefyd="" gwblhau="" astudiaethau="" in="" vitro="" gan="" ddefnyddio="" celloedd="" endothelaidd="" microfasgwlaidd="" yr="" arennau="" dynol.="" yn="" olaf,="" fe="" wnaethom="" gyfrifo="" clirio="" arennol="" biofarcwyr="" plasma="" gan="" ddefnyddio="" 20="" o="" gasgliadau="" wrin="" gwahanol="" wedi'u="">

Canlyniadau:Amrywiad genetig, rs2920656C > T, gerANGPT2yn gysylltiedig â llai o risg o AKI-SP2 (cymhareb ods, 0.45; 95 y cant CI, 0.31–0.66; FDR wedi'i addasu=0.003 ) a llai o angiopoietin plasma-2 (p = 0.002). Dangosodd dadansoddiad o gasgliadau achosol fod y risg o ddatblygu AKI-SP2 yn gostwng 16 y cant ar gyfer pob alel bach (T). Cyfryngodd angiopoietin plasma-2 41.5 y cant o'r risg cysylltiedig â rs2920656 ar gyfer AKI-SP2. Cynhyrchodd celloedd endothelaidd microfasgwlaidd yr arennau dynol sy'n cario'r alel T o rs2920656 lefelau rhifol is o angiopoietin-2 er nad oedd hyn yn ystadegol arwyddocaol (p = 0.07). Yn olaf, dangosodd dadansoddiadau fod angiopoietin-2 yn cael ei glirio cyn lleied â phosibl mewn pynciau difrifol wael.

Casgliad:Mae dadansoddiad cyfryngu genetig yn darparu tystiolaeth gefnogol bod angiopoietin-2 yn chwarae rhan achosol mewn risg ar gyfer AKI-SP2.

Geiriau allweddol: Anaf acíwt i'r arennau, Geneteg, Endotheliwm

Am fwy o wybodaeth cysylltwch â:emily.li@wecistanche.com

Mae Cistanche deserticola yn atal clefyd yr arennau, cliciwch yma i gael y sampl

Cefndir

Aciwtarenanaf(AKI) yn effeithio ar 40-60 y cant o gleifion ad- mitted i'r uned gofal dwys (ICU) ac yn cyfrannu at gwael yn y tymor byr a hirdymor canlyniadau. Mae astudiaethau genetig hyd yma wedi canolbwyntio ar gysylltiadau rhwng amrywiadau genetig a'r risg i AKI gymharu achosion (AKI) â rheolaethau (dim AKI). Fodd bynnag, gall y fframwaith hwn fod yn gyfyngedig oherwydd achosion oAciwtarenanafyn heterogenaidd iawn gyda gwahanol waddodion a phroffiliau biolegol. Gall cyfuno cleifion AKI o'r fath i gynyddu maint y sampl arwain at wanhau signalau ystadegol genetig a allai fod yn bresennol mewn un is-set pathoffisiolegol o'r boblogaeth AKI yn unig. Cyfyngiad arall yw bod AKI mewn poblogaethau difrifol wael yn aml yn gymhlethdod o sarhad difrifol, fel sepsis, llawdriniaeth, sioc, niwmonia, a thrawma. Y defnydd o reolaethau heb ddatblyguAciwtarenanafgall fod yn broblemus. Efallai na fydd rheolyddion sy'n cario amrywiad genetig risg uchel yn datblygu AKI os nad ydynt hefyd yn profi sarhad acíwt tebyg ag achosion, ac felly byddent yn cael eu dosbarthu fel rhai nad ydynt yn achosion, gan wanhau unrhyw arwydd cysylltiad posibl. Mae'r defnydd o is-ffenoteipiau AKI sy'n wahanol yn fiolegol mewn astudiaethau cysylltiad genetig yn goresgyn cyfyngiadau blaenorol mewn ffenoteipio AKI trwy ganolbwyntio'n benodol ar y boblogaeth AKI a thrwy gymharu dau is-ffenoteip sy'n wahanol yn fiolegol.

Yn ddiweddar, fe wnaethom nodi dau is-ffenoteip AKI (AKI-SP1 ac AKI-SP2) trwy gymhwyso methodoleg dadansoddi dosbarth cudd i banel o 29 o newidynnau clinigol a biomarcwyr mewn dwy boblogaeth AKI sy'n ddifrifol wael. Yn nodedig, roedd AKI-SP2 yn gysylltiedig â chanlyniadau ysbyty gwaeth (ee marwolaethau, dialysis newydd, a 7-dim adferiad arennol dydd) o gymharu ag AKI-SP1. Fe wnaethom nodi'r is-ffenoteipiau AKI hyn nesaf mewn hap-dreial rheoli aml-ganolfan a gwblhawyd yn flaenorol, Vasopressin yn erbyn Norepinephrine Infusion mewn Cleifion â Sioc Septig (VASST). Astudiodd y treial VASST a oedd y dewis o therapi fasopressor wedi gwella marwolaethau mewn pobl â sioc septig. Er nad oedd gan y boblogaeth AKI yn y treial clinigol unrhyw wahaniaeth mewn marwolaethau o therapi vasopressor, roedd gan AKI-SP1 fudd marwolaeth gyda vasopressin o'i gymharu ag AKI-SP2 heb unrhyw wahaniaeth marwolaethau. Hyd y gwyddom, dyma'r enghraifft gyntaf o nodi is-grwpiau AKI sy'n ymateb i driniaeth yn y rhai sy'n ddifrifol wael.

Yn nodedig, nid oedd yr un newidyn unigol yn well yn ystadegol na'r newidynnau eraill i nodi AKI-SP2 (Tabl 1). Mewn cyferbyniad, model tri-newidyn, gan ddefnyddio angiopoietin plasma-2 (ANG-2), angiopoietin-1 (ANG-1), a derbynnydd ffactor necrosis tiwmor hydawdd{{8} }} (sTNFR-1), oedd â'r perfformiad rhagfynegol optimaidd i wahaniaethuAciwtarenanafis-ffenoteipiau (C-statistic 0.93). Roedd ANG-2 is, sTNFR-1 is, ac ANG-1 uwch yn gysylltiedig â risg is o AKI-SP2. Mae astudiaethau mewn modelau anifeiliaid o AKI wedi dangos bod y biomarcwyr plasma hyn yn ymwneud â'r

pathoffisioleg a difrifoldeb AKI. Fodd bynnag, nid yw'n hysbys a yw'r biomarcwyr plasma hyn yn chwarae rhan achosol yn natblygiad clinigolAciwtarenanafis-ffenoteipiau. Gallai nodi marcwyr achosol lywio targedau ar gyfer datblygu cyffuriau i atal neu drin datblygiad cyffuriauAciwtarenanafyn y rhai sy'n ddifrifol wael a gallai gynorthwyo i haenu risg cleifion.

Mae dadansoddiad cyfryngu genetig yn un o sawl dull casglu achosol a all nodi'r mecanwaith posibl y mae newidyn annibynnol (ee, amrywiad genetig) yn effeithio ar y canlyniad (ee, is-ffenoteipiau AKI) trwy gyfryngwr esboniadol (ee, biomarcwr camweithrediad endothelaidd) . Mae'r dull hwn wedi'i gymhwyso'n eang mewn data clinigol i ddeall mecanweithiau achosol afiechyd. Fe wnaethom ddamcaniaethu bod loci nodweddion cis-meintiol (QTLs) yn yANGPT1, ANGPT2, a TNFRSF1Amae genynnau yn dylanwadu ar ddatblygiad is-ffenoteipiau AKI trwy reoleiddio lefelau cylchredeg eu bio-farcwyr priodol (ANG-1, ANG-2, neu sTNFR-1).

Dulliau

Astudiwch boblogaethau

Gwnaethom adrodd yn flaenorol am nodi is-ffenoteipiau AKI gan ddefnyddio carfan ICU a gasglwyd yn y dyfodol: nodi Polymorphisms Niwcleotid Sengl (SNPs) sy'n Rhagdueddu i Newid Risg Anafiadau Acíwt i'r Ysgyfaint (iSPAAR). Mae poblogaeth iSPAAR yn astudiaeth rheoli achos genom-eang o'r risg o syndrom trallod anadlol acíwt (ARDS) a oedd yn cynnwys cleifion ag ARDS a hebddynt. Roedd poblogaeth iSPAAR yn cynnwys pynciau o hap-dreialon rheoli a gwblhawyd yn flaenorol ac o garfan ICU a oedd wedi'u cofrestru'n arfaethedig. Disgrifiwyd manylion cynllun yr astudiaeth ar gyfer pob poblogaeth sydd wedi ymrestru yn iSPAAR eisoes; Albuterol ar gyfer Trin Anaf Acíwt i'r Ysgyfaint (ALTA), Treial Triniaeth Hylif a Chathetr (FACTT), asid brasterog enteral omega-3, asid gama-linolenig, ac ychwanegiad gwrthocsidiol mewn anaf acíwt i'r ysgyfaint (OMEGA)

ac Epidemioleg Foleciwlaidd Trallod Anadlol Acíwt (MEA) yn Ysbyty Cyffredinol Massachusetts. O fewn iSPAAR, cafwyd cofrestriad astudio 48 h ar ôl derbyniad ICU. Wrth gofrestru ar gyfer yr astudiaeth, casglwyd DNA a phlasma ar gyfer genoteipio a dadansoddi biofarcwr ac ynaAciwtarenanafsicrwydd. Diffiniwyd AKI fel cynnydd mewn creatinin serwm (SCr) o Fwy na neu'n hafal i 0.3 mg/dl neu 50 y cant o SCr "gwaelodlin". Diffiniwyd yr SCr gwaelodlin fel y gwerth isaf cyn cofrestru ar gyfer astudio. Diffiniwyd AKI hefyd gan ddefnyddio meini prawf allbwn wrin wedi'u haddasu (allbwn dyddiol yn lle pob 6 h).

Er mwyn pennu clirio arennol biofarcwyr plasma, gwnaethom gofrestru carfan arfaethedig yn unedau gofal dwys meddygol a llawfeddygol Harbourview, y Salwch CritigolAciwtarenanafCarfan (CIA). Roedd pynciau'n gymwys i gofrestru os oeddent yn bodloni 2 o 4 o feini prawf syndrom ymateb llidiol systemig â haint a amheuir yn glinigol a bod ganddynt gathetr wrinol mewnol yn ei le. Cwblhawyd casgliad wrin wedi'i amseru a barhaodd o leiaf 2-4h a chasglwyd samplau plasma EDTA ar ddechrau a diwedd y casgliad wrin wedi'i amseru. Cyfrifwyd clirio gan ddefnyddio'r fformiwla Clirio(X) = U(X) * V/ P(X), lleU(X) cynrychioli crynodiad wrin o hydoddynX, V yn dynodi cyfaint yr wrin dros y cyfnod casglu o 2–4-h, aP (X) cynrychioli'r crynodiadau plasma cyfartalog o hydoddynX o'r casgliadau gwaed cychwynnol a therfynol.

Strategaeth genoteipio

Perfformiwyd genoteipio mewn 421 o gleifion o dras Ewropeaidd gan ddefnyddio platfform Illumina 660 (Illumina, San Diego, CA). Rheolwyd ansawdd data genoteip gan ddefnyddio hidlydd cyfradd galwadau sampl > 0.97, amledd alel bach (MAF) > 0.01 a chyfradd galwadau SNP > 0.95. Ar ôl rheoli ansawdd, 238 PCE ±50 kilobases oANGPT1, ANGPT2,aTNFRSF1Acafwyd. Anghydbwysedd cysylltedd (LD) tocio r²o {{0}}.8, dilëwyd 48 SNP gan arwain at ddefnyddio cyfanswm o 190 PCE mewn profion cysylltiad. Defnyddiwyd panel cyfeirio'r Prosiect 1000 Genom gan ddefnyddio IPUTE2 v2.3.0 i gyfrifiannu.

Asesiad protein plasma

Mesurwyd biofarcwyr plasma a wrinol gan ddefnyddio profion imiwno electrochemiluminescent (Meso Scale Discovery (MSD), Rockville, MD), fel y disgrifiwyd yn flaenorol. Casglwyd y gwaed mewn tiwbiau di-haint wedi'u trin ag EDTA, casglwyd wrin mewn cynwysyddion di-haint a chafodd y ddau eu centrifugio ar unwaith. Yna cafodd plasma ac wrin eu dosbarthu a'u rhewi ar − 80 gradd . Cafodd y samplau eu storio am gyfnodau gwahanol ond cawsant eu dadmer mewn un swp a dim ond unwaith ar gyfer rhedeg y mesuriadau biofarcwr ar gyfer yr astudiaeth hon. Perfformiwyd yr holl fesuriadau biofarcwr mewn copïau dyblyg yn Labordai Ymchwil Pwlmonaidd Harbourview.

Yn Silico dadansoddiadau

Er mwyn profi SNPs am fynegiant effeithiau QTL, fe wnaethom gwestiynu'r Porth Mynegiant Genoteip-Meinwe (GTEx).

Diwylliant celloedd

Cafodd celloedd endothelaidd microfasgwlaidd yr arennau dynol (HKME Cs) eu puro o arennau'r ffetws ar ôl ymyriadau gwirfoddol yn ystod beichiogrwydd rhwng 100 a 135 diwrnod ar ôl cenhedlu. Cafwyd caniatâd gwybodus ar gyfer defnyddio meinweoedd ffetws gan gleifion. Yna fe wnaethom ddewis 9 o wahanol roddwyr HKMECs ar hap, dadmer a phlatio hanner miliwn o gelloedd mewn fflasgiau T25 wedi'u gorchuddio â 0.2 y cant o gelatin a'u cynnal mewn cyfrwng gwaelodol EBM sy'n cynnwys 1 y cant o wrthfiotig-antimycotig (Life Technologies), 10 y cant FBS, 100 ug/mL ECGS, 50 ug/mL Heparin, a 20 ng/mL VEGF (Ymchwil a Datblygu), ar gyfer cydlifiad 48 h. Ar 48 h, buom yn puro DNA genomig o'r HKMECs a chasglwyd supernatants cell. Llwyddwyd i genoteipio celloedd gan 8 rhoddwr.

Dadansoddiad ystadegol

Mae newidynnau demograffig cleifion yn cael eu hadrodd naill ai fel gwyriad cymedrig plws /-safonol neu fel canolrif a chwarteli. Yn gyntaf, gwnaethom ddefnyddio atchweliad logistaidd i brofi am gysylltiad rhwng yr 190 PCE a datblygiad AKI-SP2 o'i gymharu ag AKI-SP1 gan ddefnyddio model genetig ychwanegyn (Golden Helix, MT). Defnyddiwyd ein model ar gyfer y covariates canlynol: oedran, rhyw, sepsis, a'r pum prif gydran gyntaf. Defnyddiwyd dull Eigenstrat v4.2 i gyfrifo'r prif gydrannau a chafodd y pump uchaf eu cynnwys fel covariates. Adroddir cymarebau ods (ORs) gyda chyfyngau hyder o 95 y cant. Ar gyfer y dadansoddiad rhwng amrywiadau genetig ac is-ffenoteipiau AKI, gwnaethom gywiro ar gyfer cymariaethau lluosog trwy ddefnyddio trothwy cyfradd darganfod ffug Benjamini-Hochberg (FDR) < 0.10,="" sy'n="" amcangyfrif="" bod="" llai="" na="" 10="" y="" cant="" o'r="" cysylltiadau="" â="" gwerth="" fdr="" ar="" neu'n="" is.="" mae'r="" lefel="" hon="" yn="" gadarnhaol="" ffug="" [31].="" mewn="" dadansoddiad="" sensitifrwydd,="" defnyddiwyd="" genoteip="" priodoledig="" i="" nodi="" snps="" ychwanegol="" sy'n="" gysylltiedig="" ag="">

Yn ail, gwnaethom ddefnyddio addasu atchweliad llinol ar gyfer oedran, rhyw, a sepsis i bennu cysylltiadau rhwng SNPs sy'n perfformio orau a log.₂crynodiadau biomarcwyr wedi'u trawsnewid. Yn drydydd, cwblhawyd dadansoddiad casgliad achosol gennym i brofi'r cysylltiad rhwng amrywiadau genetig ac AKI-SP2 a chyfryngu posibl y cysylltiad gan grynodiadau biomarcwyr plasma. Perfformiwyd y dadansoddiad cyfryngu gan ddefnyddio gweithrediad aflinol modelu hafaliad strwythurol a weithredwyd yn y pecyn cyfryngu ar gyfer STATA [32, 33]. Darperir manylion ychwanegol y dadansoddiad o gasgliadau achosol yn yr atodiad ar-lein. Yn bedwerydd, fe wnaethom bennu cysylltiadau rhwng amrywiadau genetig a difrifoldeb AKI, wedi'i fesur gan creatinin serwm uchaf, trwy atchweliad logistaidd. Darperir manylion ychwanegol am ddeunyddiau a dulliau yn yr atodiad ar-lein. Yn y dadansoddiad, fe wnaethom werthuso 190 PCE a defnyddio ceidwadwrp-wertho 0.05/190 =2.6 × 10^{− 4}. O ystyried bod tua 40 y cant o gleifion ICU yn datblygu AKI, a chymhareb rheoli disgwyliedig (AKI-SP1) i achos (AKI-SP2) o 1.5, maint sampl disgwyliedig o 421, a MAF o leiaf { {16}}.30, bydd gennym 81 y cant o bŵer i ganfod risg cymharol o 1.5 neu fwy [34]. Cwblhawyd dadansoddiadau gan ddefnyddio STATA (Fersiwn 15) a Goldenhelix (Fersiwn 4.0). Cymeradwywyd yr holl astudiaethau gan yr Is-adran Pynciau Dynol ym Mhrifysgol Washington. Cafwyd caniatâd gwybodus ysgrifenedig gan yr holl bynciau a gofrestrwyd.

Canlyniadau

Nodweddion poblogaethau O'r 425 o gleifion o'r garfan ddilysu yn ein gwaith blaenorol, roedd gan 421 ddata genoteipio ar gael. Disgrifir demograffeg a nodweddion clinigol sylfaenol yn Nhabl 1. Roedd pob pwnc o dras Ewropeaidd. Dosbarthwyd cyfanswm o 267 (63 y cant) fel AKI-SP1 a 154 (37 y cant) yn AKI-SP2. Roedd gan bynciau a ddatblygodd AKI-SP2 ddifrifoldeb salwch uwch ar gyflwyniad (sgoriau cymedrig ffisioleg acíwt a gwerthusiad iechyd cronig (APACHE) III, 111 ± 26 yn erbyn 74 ± 24), yn fwy tebygol o gael sepsis (84 y cant yn erbyn 66 y cant), a yn fwy tebygol o gael eu trin â fasowasgwyr (79 y cant o'i gymharu â 42 y cant) o gymharu ag AKI-SP1.

Mae Amrywiad Genetig Ger ANGPT2, rs2920656, yn gysylltiedig ag AKI-SP2

O'r 19{8}} SNPs ±50 cilogram o'r genynnau, roedd 72 yn agos at ANGPT1, 100 yn agos at ANGPT2, ac roedd 18 yn agos at y genyn TNFRSF1A. Fe wnaethom nodi un PCE yn cyfarfod FDR < 0.05="" a="" oedd="" yn="" gysylltiedig="" ag="" aki-sp2="" o'i="" gymharu="" ag="" aki-sp1="" (tabl="" 2="" a="" ffig.="" 1).="" ni="" welwyd="" unrhyw="" gysylltiadau="" arwyddocaol="" ag="" snps="" yn="" neu'n="" agos="" at="" angpt1="" neu="" tnfrsf1a="" (tabl="" s2="" a="" s3).="" yr="" snp="" a="" ddangosodd="" y="" cysylltiad="" cryfaf="" â="" risg="" ar="" gyfer="" aki-sp2="" oedd="" rs2920656="" (neu,="" 0.45;="" 95="" y="" cant="" ci,="" 0.31–0.66;="" p="">< 1.4="" ×="" 10−="" 5;="" fdr="0.003)." mae'r="" pce="" cynhenid="" ​​hwn="" ≈="" 30="" kb="" i="" lawr="" yr="" afon="" i="" safle="" 3′="" angp="" t2="" ac="" eglurodd="" tua="" 3="" y="" cant="" o'r="" amrywiad="">

datblygiad AKI-SP2 (R2 ). Gan mai dim ond nifer fach o bynciau oedd yn homosygaidd rs2920656 (n=26), fe wnaethom hefyd brofi cysylltiadau rhwng rs2920656 ac AKI-SP2 mewn model genetig dominyddol, a roddodd gysondeb canlyniadau (NEU, 0.42; 95 y cant CI, 0.28–0.64; p < 1.4="" ×="" 10−="" 6="" ).="" gwnaethom="" hefyd="" brofi="" am="" gysylltiadau="" ychwanegol,="" cryfach="" o="" bosibl,="" o="" fewn="" locws="" angpt2="" gan="" ddefnyddio="" genoteipiau="" priodoledig="" ond="" ni="" chanfuwyd="" unrhyw="" gysylltiadau="" cryfach="" na'r="" hyn="" a="" welwyd="" gyda="" rs2920656="" (tabl="" s4).="" mewn="" dadansoddiad="" sensitifrwydd,="" gwnaethom="" brofi="" a="" oedd="" cynnwys="" cleifion="" difrifol="" wael="">Aciwtarenanafyn dylanwadu ar y cysylltiad genetig. Fe wnaethom grwpio cleifion heb unrhyw AKI ac AKI-SP1 gyda'i gilydd a phenderfynu a oedd cysylltiad cryf o hyd rhwng rs2920656 a risg is o AKI-SP2. Yn y dadansoddiad hwn, nid oedd gan 839 o gleifion AKI nac AKI-SP1 ac roedd gan 154 AKI-SP2. Lleihawyd y risg o ddatblygu AKI-SP2 yn sylweddol eto gyda chael o leiaf un alel T ar gyfer rs2920656 (NEU 0.31; 95 y cant CI, 0.19–0.52; p < 0.001)="" (tabl="" s5).="" mewn="" dadansoddiad="" sensitifrwydd="" arall,="" gwnaethom="" brofi="" a="" oedd="" rs2920656="" yn="" gysylltiedig="" â="" risg="" is="" o="" aki-sp2="" ym="" mhob="" un="" o'r="" pedair="" astudiaeth="" wahanol="" a="" gynhwyswyd="" yn="" ispaar.="" o="" fewn="" pob="" un="" o'r="" tri="" hap-dreial="" rheoli="" (alta,="" factt,="" ac="" omega)="" a'r="" darpar="" garfan="" icu="" (mea),="" roedd="" yr="" amcangyfrif="" pwynt="" yn="" gyson="" â'r="" alel="" bach="" o="" rs2920656="" gan="" ddangos="" risg="" is="" ar="" gyfer="" datblygu="" aki-sp2="" (tabl="" s6="" ).="" felly,="" dadansoddwyd="" rs2920656="" ymhellach="" i="" bennu'r="" cysylltiad="" â="" chrynodiadau="" biomarcwyr="">

Mae alel T rs2920656 yn gysylltiedig â ANG plasma gostyngol-2

Nesaf, dadansoddwyd y cysylltiad rhwng crynodiadau rs2920656 a plasma ANG-2. Roedd addasu ar gyfer oedran, rhyw a sepsis pob copi o'r alel T o rs2920656 yn gysylltiedig â chrynodiadau log2 ANG ANG-2 gostyngol (=− 0.09; 95 y cant CI {{9} }.15, − 0.04; P=0.002). Dangosodd pynciau homosygaidd ar gyfer yr alel C y crynodiadau uchaf o ANG plasma-2 (40,683 pg/ml; amrediad rhyngchwartel (IQR) 19,374-73,205), tra dangosodd y pynciau homosygaidd ar gyfer yr alel T yr isaf crynodiadau ANG plasma-2 (28,308 pg/ml (IQR 14,340-42, 944) Yn ogystal, o'r 100 SNP a brofwyd ger rhanbarth genynnau ANGP T2, rs29206565 oedd y mwyaf cysylltiedig â phlasma ANG -2 crynodiadau (Ffig. 2).

Mae dadansoddiad cyfryngu yn awgrymu bod ANG{0}} yn achosol yn natblygiad AKI-SP2

Fe wnaethom brofi am dystiolaeth bod y cysylltiad rhwng rs2920656 a risg ar gyfer AKI-SP2 yn cael ei gyfryngu trwy grynodiadau ANG-2 plasma (Ffig. 3). Cyfanswm effaith rs2920656 ar AKI-SP2 oedd cyfanswm o=− 0.16 fesul alel (95 y cant CI -0.24, − 0 .10, p=1.0 × 10− 4 ), sy'n awgrymu ar gyfer pob mân alel (T alel) o'r amrywiad genetig bod y risg o ddatblygu AKI-SP2 yn gostwng 16 y cant . Canfu dadansoddiad cyfryngu achosol effaith anuniongyrchol sylweddol ar gyfer rs2920656 ar AKI-SP2 a gafodd ei gyfryngu trwy grynodiadau plasma ANG-2 (anuniongyrchol, − 0.07 fesul alel; 95 y cant CI -0.11, − 0.03; p { {34}}.001), sy'n golygu bod cyfran yr effaith rhwng rs2920656 ac AKI-SP2 sy'n cael ei chyfryngu gan grynodiadau ANG-2 yn 41.5 y cant .

Mae alele rs2920656 yn gysylltiedig â gostyngiad mewn difrifoldeb AKI ar ôl 7 diwrnod

Nesaf, gwnaethom brofi cysylltiad rs2920656 â meini prawf traddodiadol ar gyfer difrifoldeb AKI, megis creatinin serwm uchaf a chynnydd mewn creatinin serwm o fewn 7 diwrnod ar ôl cofrestru ar gyfer yr astudiaeth. Mewn model genetig dominyddol, roedd yr alel T o rs2920656 yn gysylltiedig â gostyngiad mewn creatinin serwm o − 0.44 mg/dL (95 y cant CI, − 0.77 , − 0.10), p=0.01) ar ôl addasu ar gyfer oedran, rhyw, mynegai màs y corff a statws sepsis. Roedd alel bach rs2920656 hefyd yn gysylltiedig â gostyngiad yn y cynnydd mewn creatinin serwm rhwng llinell sylfaen a diwrnod 7 (= - 0.25, 95 y cant CI, - 0.46, − 0.03; p=0.03)

Mae alele T rs2920656 yn gysylltiedig ag ANG-2 is mewn meithriniad celloedd

Gwnaethom gynnal arbrofion in vitro a dadansoddiadau mewn silico i bennu arwyddocâd swyddogaethol rs2920656. O 8 ffetws dynol gwahanolarenmeinwesamplau, 2 yn CC, 5 yn CT, ac 1 yn TT ar gyfer rs2920656. Mewn model genetig trech, roedd crynodiadau ANG-2 ar eu huchaf yn rhifiadol mewn celloedd endothelaidd gan roddwyr homosygaidd ar gyfer yr alel C ac yn is mewn cludwyr yr alel T, p=0.07 (Ffig. 4). Yng nghronfa ddata prosiect GTEx, nid oedd rs2920656 yn gysylltiedig â mynegiant genynnau ANGPT2. Fodd bynnag, roedd dau SNP arall (rs41311412 a rs2515591) sydd mewn LD cymedrol (r2=0.23 a D'=0.86) gyda rs2920656 yn gysylltiedig â mynegiant genynnau ANGPT2 llai (p=4.1 × 10− 5 ) yn y rhydweli tibiaidd, meinwe sydd wedi'i gyfoethogi'n fawr ar gyfer celloedd endothelaidd (Tabl S7).

Mae plasma ANG-2 yn cael ei glirio cyn lleied â phosibl gan yr arennau Er mwyn pennu a oes gwahaniaethau mewnarenswyddogaethGallai hyn ddylanwadu ar grynodiadau ANG plasma, fe fesuron ni ANG-2 cliriad arennol mewn pynciau difrifol wael gyda AKI a hebddo. Mewn 20 o gasgliadau sampl wrin gwahanol wedi'u hamseru gyda samplau plasma wedi'u harchebu, y creatinin serwm canolrifol oedd 0.86 mg/dL gydag ystod rhyngchwartel (IQR) o 0.69 i 1.45 mg/dL. Y crynodiad canolrif ANG-2 plasma oedd 10,261 pg/mL (IQR 6210–19,115 pg/mL). Mewn cyferbyniad, roedd crynodiadau ANG wrinol-2 50-plyg yn is gyda chanolrif o 206 pg/ mL (IQR 11–839 pg/mL). Y cliriad arennol cyfrifedig o ANG-2 oedd < 1="" ml/munud="" ar="" gyfer="" yr="" holl="" gasgliadau="" wrin="" wedi'u="" hamseru,="" sy'n="" awgrymu="" nad="" yw="" crynodiadau="" ang="" plasma="" -2="" yn="" cynyddu="" dim="" ond="" fel="" swyddogaeth="" o="" waethygu="" aki="" (tabl="">