Rhan 1: Adnabod Niwronau Dopaminergig a All Sefydlu Cof Cyswllt A Therfynu Ei Fynegiad Ymddygiadol yn Acíwt
Mar 19, 2022
Cyswllt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791
Michael Schleyer, 1* Alice Weiglein, 1 Juliane Thoener, 1 Martin Strauch, 2 Volker Hartenstein,3
Melisa Kantar Weigelt, 1 Sarah Schuller, 1 Timo Saumweber, 1 Katharina Eichler,4,5,6 Astrid Rohwedder,4,7 Dorit Merhof,2 Marta Zlatic,5,7 Andreas S. Thum,4,8 a Bertram Gerber1,9 ,10*
1 Sefydliad Niwrobioleg Leibniz, Adran Geneteg Dysgu aCof, 39118 Magdeburg, Yr Almaen, 2Institute of Imaging & Computer Vision, RWTH Prifysgol Aachen, 52056 Aachen, Yr Almaen, 3Adran Bioleg Foleciwlaidd, Cell a Datblygiadol, Prifysgol California, Los Angeles, California 90095-1606, 4Prifysgol Konstanz, Sefydliad ar gyfer Bioleg, 78464 Konstanz, yr Almaen, 5HHMI Campws Ymchwil Janelia, Ashburn, Virginia 20147, 6Institute of Neurobiology, Campws Gwyddoniaeth Feddygol Prifysgol Puerto Rico, Old San Juan, Puerto Rico 00901, 7Adran Sŵoleg, Prifysgol Caergrawnt, Caergrawnt, CB{ {12}}EJ, Y Deyrnas Unedig, 8Prifysgol Leipzig, Sefydliad Bioleg, 04103 Leipzig, yr Almaen, 9Canolfan Gwyddorau'r Ymennydd Ymddygiadol, 39108 Magdeburg, yr Almaen, a 10Institute for Biology, Otto von Guericke University Magdeburg, 39106 Magdeburg, Yr Almaen
Mae trawsnewidiad ymaddasol o archwilio'r amgylchedd i chwilio am adnoddau hanfodol i ddefnyddio'r adnoddau hyn unwaith y bydd y chwiliad yn llwyddiannus yn bwysig i bob anifail. Yma rydym yn astudio'r cylchedwaith niwronaidd sy'n caniatáu i larfal Drosophila melanogaster o'r naill ryw drafod y trawsnewidiad fforio-ecsbloetio hwn. Rydym yn gwneud hynny trwy gyfuno cyflyru Pavlovian ag olrhain ymddygiad cydraniad uchel, trin niwronau a adnabyddir yn unigol yn optogenetig, a dadansoddiadau seiliedig ar ddata EM o drefniadaeth synaptig. Rydym yn canfod y gall actifadu optogenetig y niwron dopaminergig DAN-i1 sefydlucofyn ystod hyfforddiant a therfynu ymddygiad chwilio a ddysgwyd yn llym mewn prawf adalw dilynol. Fodd bynnag, mae ei actifadu yn gadael ymddygiad cynhenid heb ei effeithio. Yn benodol, gall actifadu DAN-i1 sefydlu atgofion cysylltiadol o falens cyferbyniol ar ôl hyfforddiant pâr a di-bâr gydag arogl, a gall ei actifadu yn ystod y prawf adalw derfynu'r ymddygiad chwilio sy'n deillio o'r naill neu'r llall o'r atgofion hyn. Mae ein canlyniadau'n awgrymu ymhellach, yn ei arwyddocâd ymddygiadol, bod actifadu DAN-i1 yn debyg, ond nid yw'n gyfwerth â gwobr siwgr. Mae dadansoddiadau dendrogram o'r holl gysylltiadau synaptig rhwng DAN-i1 a'i ddau brif darged, y celloedd Kenyon, a niwron allbwn corff madarch MBON-i1, yn awgrymu ymhellach y gellid cyflwyno'r signalau DAN-i1 yn ystod hyfforddiant ac yn ystod y prawf adalw i y celloedd Kenyon ac i MBON-i1, yn y drefn honno, o fewn strwythurau canghennog lleol heb eu hadnabod yn flaenorol. Byddai hyn yn darparu motiff cylched cain i derfynu'r chwiliad ar ôl ei gwblhau'n llwyddiannus.
Geiriau allweddol: dopamin; archwilio-ecsbloetio; corff madarch; optogeneteg; atgyfnerthu; chwilio
Datganiad o Arwyddocâd
Yn y frwydr i oroesi, mae'n rhaid i anifeiliaid archwilio eu hamgylchedd i chwilio am fwyd. Unwaith y deuir o hyd i'r bwyd, fodd bynnag, mae'n addasol i flaenoriaethu ei ecsbloetio dros barhau â chwiliad a fyddai bellach mor ddibwrpas â chwilio am y sbectol rydych chi'n eu gwisgo. Mae'r cyfaddawd hwn rhwng fforio a chamfanteisio yn bwysig i anifeiliaid a phobl, yn ogystal ag ar gyfer dyfeisiau chwilio technegol. Rydym yn ymchwilio i ba un o'r 10,{3}} niwron yn unig mewn larfa pryfyn ffrwythau all ddod â'r cydbwysedd yn y cyfaddawd hwn, a nodi un niwron dopamin o'r enw DAN-i1 a all wneud hynny. O ystyried y tebygrwydd mewn swyddogaeth niwronau dopamin ar draws y brenin anifeiliaid
Ar hyn o bryd, gall hyn adlewyrchu egwyddor gyffredinol o sut y caiff chwiliad ei derfynu unwaith y bydd yn llwyddiannus.
Rhagymadrodd
Gall anifail sy'n archwilio ei amgylchedd ddefnyddio profiad y gorffennol i'w arwain i chwilio am fwyd. Pan ddarganfyddir bwyd, fodd bynnag, mae'n addasol i derfynu'r chwiliad ac yn lle hynny ecsbloetio'r ffynhonnell fwyd. Yma rydym yn astudio'r cylchedau sy'n caniatáu i larfal Drosophila melanogaster drafod y trawsnewidiad fforio-ecsbloetio hwn. Symlrwydd rhifiadol ymennydd y larfa, ynghyd â mynegiant trawsgen penodol celloedd a gwybodaeth am ei gysylltedd synaptig (Pfeiffer et al., 2010; Li et al., 2014; Eichler et al., 2017; Saumweber et al., 2018; Eschbach et al., 2020), yn caniatáu i hyn gael ei ymchwilio ar lefel y niwronau a nodir yn unigol.
Mae larfâu D. melanogaster yn hawdd i gysylltu arogleuon â gwobr bwyd (Scherer et al., 2003; Gerber a Hendel, 2006; Schipanski et al., 2008; Rohwedder et al., 2012; Apostolopoulou et al.; Kudow et al. 20 14). , 2017, 2019). Yn hollbwysig, mae ymddygiad dysgedig sy'n seiliedig ar y cysylltiadau arogl-bwyd hyn yn dod i ben os yw'r wobr yn bresennol yn ystod prawf adalw (Ffig. 1A). Felly, gellir ystyried ymddygiad a ddysgwyd fel chwiliad, a derfynir yn addasol gan y canlyniad a geisir (hy, gan y wobr) (Schleyer et al., 2011, 2013, 2015a). Nid yw ymddygiad arogleuol cynhenid yn cael ei effeithio yn yr un modd (Ffig. 1B), sy'n awgrymu bod ymddygiad cynhenid o'r fath yn cael ei drefnu mewn modd tebyg i atgyrch (Schleyer et al., 2011, 2013, 2015a,b). Felly, gall gwobrau naturiol achosi dwy effaith: yn ystod yr hyfforddiant, maen nhw'n darparu signal gwobrwyo a all fod yn gysylltiedig â chiwiau a fydd wedyn yn arwain chwiliad gwobrau; ac yn ystod y prawf adalw, gallant derfynu'r chwiliad dysgedig hwn yn ddifrifol, gan atal yr anifeiliaid rhag crwydro oddi wrth adnodd ar ôl ei ddarganfod. Mae'r trawsnewid hwn felly'n adlewyrchu newid yn y strategaeth ar gyfer ennill gwobr, nid newid mewn cymhelliant (hy, nid colli diddordeb yn y wobr).
Mae infertebratau ac infertebratau fel ei gilydd, niwronau dopaminergig (DANs) yn darparu signalau atgyfnerthu ar gyfer dysgu cysylltiadol (Waddell, 2013; Schultz, 2015; Kaun a Rothenfluh, 2017). Yn D. melanogaster, mae setiau gwahanol o DANs yn cyfleu atgyfnerthiad archwaeth a gwrthun, yn y drefn honno (larfa: Schroll et al., 2006; Rohwedder et al., 2016; Saumweber et al., 2018; Eschbach et al., 2020; pryfed llawn dwf: Schwaerzel et al., 2003; Claridge-Chang et al., 2009; Liu et al., 2012) (gall senario tebyg fod yn anifeiliaid di-asgwrn-cefn sy'n dod i'r amlwg hefyd: Lammel et al., 2012; Groessl et al., 2018; Menegas et al., 2018; Menegas et al. al., 2018). Gan sefydlu strwythur adrannol, mae'r DANs hyn yn croestorri ffibrau cyfochrog celloedd Kenyon (KCs), niwronau cynhenid canol arogleuol trefn uchaf y pryfed, a elwir yn gorff madarch. Gan barchu'r un strwythur adrannol hwn, mae niwronau allbwn corff madarch (MBONs) yn casglu gwybodaeth ar draws y KCs ac yn ei anfon tuag at gylchedau echrydus (gweler Ffig. 2A–D) (larfa: Selcho et al., 2009; Pauls et al., 2010 Eichler et al., 2017; Saumweber et al., 2018; Eschbach et al., 2020; oedolion: Sejourne et al., 2011; Places et al., 2013; Aso et al., 2014a, Wabell Oswald; , 2015; Takemura et al., 2017). Yn nodedig, datgelodd adluniad microsgop electron diweddar fod gan DANs ddau brif darged: y KCs a'r MBONs (gweler Ffig. 2B)(larfa: Eichler et al., 2017; oedolion: Takemura et al., 2017).
Yn larfal D. melanogaster, gall actifadu DANs o'r clwstwr pPAM gael effaith werth chweil yn ystod hyfforddiant (Rohwedder et al., 2016). O bedwar diwrnod y clwstwr hwn, gall dau yn unigol roi effaith mor werth chweil (DAN-h1 a DAN-i1) (Saumweber et al., 2018). Yma, rydym yn dewis canolbwyntio
Ffigur 1. Gall siwgr roi gwobrau a signalau terfynu chwilio. Hyfforddwyd larfa fel bod arogl yn cael ei gyflwyno naill ai mewn pâr neu heb ei baru â siwgr. Mewn prawf adalw dilynol, cawsant eu profi am eu hoff arogleuon naill ai yn absenoldeb neu ym mhresenoldeb y siwgr (braslun tuag at y brig). Datgelodd profion yn absenoldeb siwgr arogleuol cysylltiadolcof, wedi'i feintioli fel DP positif. Mynegiant ymddygiadol hyncofei derfynu ym mhresenoldeb siwgr. Felly, gall siwgr roi dau fath o signal: yn ystod yr hyfforddiant, mae'n darparu signal gwobrwyo y gellir ei gysylltu â'r arogl i arwain yr anifeiliaid yn ddiweddarach yn eu chwiliad gwobrau; ac yn ystod y prawf galw i gof, y mae y siwgr fel y gwobrwy a geisir yn rhoi arwydd i derfynu y chwiliad dysgedig hwn. Meintiau sampl: N=29, N =28. Profwyd B, larfa am hoff aroglau cynhenid, naill ai yn absenoldeb neu ym mhresenoldeb siwgr (braslun tuag at y brig). Ni effeithiodd siwgr ar ymddygiad arogleuol cynhenid, gan awgrymu ei sefydliad tebyg i atgyrch. Meintiau sampl: N=20 yr un. Mae llythrennau gwahanol uwchben y plotiau blychau yn dynodi arwyddocâd pâr (prawf Mann–Whitney U, t, 0.05, wedi'i gywiro yn ôl Bonferroni-Holm). * Arwyddocâd o sero (prawf arwydd un sampl, t, 0.05, wedi'i gywiro yn ôl Bonferroni-Holm). ns, ddim yn arwyddocaol. Mae'r holl brofion ystadegol a'u canlyniadau yn cael eu hadrodd ynghyd â'r data ffynhonnell yn Ffigur Data Estynedig 1-1. Ar gyfer y gwerthoedd hoff aroglau sy'n sail i sgoriau DP yr arbrawf hwn, gweler Ffigur 9A.
Ffigur 2. Cylchedwaith y matrics DAN-KC-MBON. Chiasm y llabed medial. Mae gwybodaeth arogl yn cael ei phrosesu i gymell ymagwedd gynhenid, yn ogystal â thuag at ranbarth calyx y corff madarch KCs (porffor; wedi'i arddangos yn llawn yn un enghraifft o KC ar yr ochr dde). Yn yr un modd mae gwybodaeth am wobrau blas yn cael ei phrosesu i arwain ymddygiad cynhenid, yn ogystal â thrwy niwronau modiwleiddio aminergig yn bennaf (a ddangosir yn DAN-i1, turquoise / du) tuag at adrannau unigol llabedau corff madarch (ar yr ochr chwith, nodir adrannau). Mae pob un o bedair adran y lobe medial (hk) yn derbyn mewnbwn o un DAN sydd hefyd yn mewnosod yr un adran yn yr hemisffer cyfochrog. Mae MBONs y lobe medial yn tynnu o adrannau sengl, yn nodweddiadol o'r ddau hemisffer (a ddangosir yn MBON-i1, magenta/melyn), ac yn cyflwyno eu hallbwn, mewn ffurfweddiadau sy'n wahanol rhwng adrannau, ar draws y rhaniad hemisfferig. Gyda'i gilydd, mae'r MBONs yn gyfrifol amcof- ymddygiad chwilio yn seiliedig. Mae'r data'n seiliedig ar Eichler et al. (2017) a Saumweber et al. (2018). B, Y matrics DAN-KC-MBON yn yr i-compartment. Mae DAN-i1 a'r rhan fwyaf o KCs yn sefydlu synapsau cemegol cilyddol, ac mae DAN-i1 a KCs yn darparu allbwn i MBON-i1. Er mwyn symlrwydd, dim ond synapsau gyda'r niwronau DAN-i1 a MBON-i1 chwith a ddangosir yn fanwl. Mae'r un cysylltedd i'w gael yn y rhan fwyaf, os nad pob un, o adrannau eraill (Eichler et al., 2017; Saumweber et al., 2018). Mae C, DAN-i1 (turquoise) yn derbyn mewnbwn o'r tu allan i'r corff madarch (llwyd tywyll) ipsilateral i'w gorff cell (rhanbarth wedi'i labelu 1) ac yna'n innervates yr i-compartment yn y ddau hemisffer (labelu 2 a 3). Mae MBON-i1 (magenta) yn croesi'r llinell ganol ddwywaith; mae'n derbyn mewnbwn yn adran i y ddau hemisffer ac yn darparu allbwn mewn rhanbarthau cyfagos i gorff madarch y ddau hemisffer. D,Yr un fath ag yn C, ond mewn golygfa ar ogwydd ychydig, yn dangos adluniadau sgerbwd o'r niwronau DAN-i1 a MBON-i1 chwith ac un enghraifft KC (du). Mae'r data'n seiliedig ar Eichler et al. (2017). E, Dendrogram o'r niwron DAN-i1 chwith. Mae dotiau lliw yn cynrychioli synapsau allbwn o DAN-i1. Mae trionglau'n cynrychioli synapsau mewnbwn i DAN-i1. Mae lliwiau'n cynrychioli niwron partner y synaps priodol. Mae pob synaps arall o fewn y corff madarch wedi'u labelu "Arall." Heb eu harddangos mae synapsau y mae DAN-i1 yn eu ffurfio â niwronau y tu allan i gorff y madarch, yn enwedig yn rhanbarth 1 (Eschbach et al., 2020). Mae llinellau dot yn nodi rhanbarthau lle mae'r niwron yn croesi llinell ganol yr ymennydd. F, Yr un fath ag yn E, ond ar gyfer y niwron MBON-i1 chwith. Heb eu harddangos mae synapsau y mae MBON-i1 yn eu ffurfio â niwronau y tu allan i gorff y madarch. Ar gyfer fersiynau cydraniad uchel o niwronau DAN-i1 a MBON-i1 y ddau hemisffer, yn ogystal â'r holl KCs aeddfed, gweler Ffigurau Data Estynedig 2-1, 2-2, a 2-3, yn y drefn honno .
ar DAN-i1 oherwydd ei fod wedi’i ddadansoddi’n fanylach o’r blaen (Saumweber et al., 2018) ac oherwydd ei fod yn rhoi effaith werth chweil fwy cadarn na DAN-h1 (Saumweber et al., 2018; data heb ei gyhoeddi). Yn gyntaf, rydym yn darparu cyfrif manwl o drefniant gofodol yr holl synapsau rhwng DAN-i1 a'i ddau bartner allbwn mawr, MBON-i1 a'r KCs. Yna, rydym yn gofyn a all actifadu optogenetig DAN-i1 gyfryngu nid yn unig signal gwobr yn ystod hyfforddiant ond hefyd signal i derfynu acíwt a ddysgwyd i chwilio am y wobr yn ystod y prawf adalw.
bodybuilding cistanche
Defnyddiau a Dulliau
Model arbrofol a manylion pwnc. Defnyddiwyd larfâu cyfnod bwydo trydydd-instar o'r ddau ryw (D. melanogaster), 5d oed ar ôl dodwy wyau, drwy'r amser. Roedd pryfed yn cael eu cynnal ar gyfrwng safonol, yn y diwylliant torfol ar 25 gradd, 60 y cant -70 y cant o leithder cymharol, a chylchred golau/tywyll 12/12 h. Fe wnaethon ni gymryd llwyaid o gyfrwng bwyd o ffiol bwyd, dewis ar hap y nifer dymunol o larfa, eu rinsio'n fyr mewn dŵr tap, a dechrau'r arbrawf.
Fe ddefnyddion ni larfa trawsgenig i fynegi sianel ïon gatiau golau ChR2-XXL mewn DANs. I'r perwyl hwn, croeswyd y straen effeithydd UAS-ChR2-XXL (Dawydow et al., 2014) (a ddarparwyd yn garedig gan R. Kittel, Prifysgol Leipzig), i un o ddau straen gyrrwr: naill ai 58E{{6 }}Gal4 (Pfeiffer et al., 2008; Liu et al., 2012; Rohwedder et al., 2016) (Canolfan Stoc Bloomington rhif 41347) neu'r straen gyrrwr hollt-Gal4 SS00864 (Eichler et al., 2017; et al., 2018) i gael epil heterosygaidd dwbl. Mae gyrrwr yn rheoli straen y gyrrwr wedi'i groesi i gopi lleol o w1118 (Canolfan Stoc Bloomington #3605, #5905, #6326). Gan fod effeithydd yn rheoli straen sy'n cario'r safleoedd glanio a ddefnyddir ar gyfer y Gal4 (attP2) neu'r hollt-Gal4 (attP40/attP2), ond eto heb fewnosod parth Gal4 ("gwag") (Pfeiffer et al., 2010), croeswyd i UAS- ChR2-XXL. Gwnaethom gadarnhau patrwm mynegiant58E02 a SS00864 trwy eu croesi i pJFRC-10xUAS-IVS-mCD8::GFP (Pfeiffer et al., 2010) (Canolfan Stoc Bloomington #32185). Gan fod ChR{41}}XXL yn ddigon sensitif i gael ei actifadu gan olau dydd (heb ei ddangos), codwyd pryfed mewn ffiolau a dywyllwyd yn gyson gan lapio cardbord du. Ar gyfer yr arbrawf a gyflwynir yn Ffigur 8E, croeswyd UAS-ChR2 (Schroll et al., 2006) i 58E02-Gal4.
Gosodiad arbrofol. Ar gyfer arbrofion ymddygiadol, hyfforddwyd larfa mewn dysglau Petri o ddiamedr mewnol 9 cm a'u profi mewn dysglau Petri o ddiamedr mewnol 9 neu 15cm (y ddau o Sarstedt) fel y crybwyllwyd yn y chwedlau ffigur, ym mhob achos wedi'u llenwi â 1 y cant agarose (gradd electrofforesis). ; Roth). Fel yr arogl, fe ddefnyddion ni n-amyl asetad wedi'i wanhau 1:20 mewn olew paraffin (AM; CAS: 628-63-7; Merck), ac mewn rhai achosion hefyd heb ei wanhau 1-octanol (OCT; CAS: {{). 9}}; Merck).
Cynhaliwyd arbrofion y tu mewn i flwch amgylchynol 43 43 73cm wedi'i gyfarparu â bwrdd golau wedi'i wneud yn arbennig yn cynnwys arae LED 24 12 (470nm; Solarox) a phlât tryledu 6-mm o drwch o Plexiglas barugog ar ei ben i sicrhau golau glas unffurf ar gyfer actifadu ChR2-XXL (120mW/cm2). Gosodwyd dysglau Petri yn uniongyrchol ar ben y plât tryledu. Amgylchynwyd y dysglau Petri gan gylch trylediad polyethylen; y tu ôl i'r cylch tryledu, gosodwyd 30 o LEDau isgoch (850nm; Solarox) i ddarparu golau a oedd yn anweledig i'r larfa ond eto roedd yn caniatáu cofnodi ac olrhain eu hymddygiad ar gyfer dadansoddiad all-lein. I'r perwyl hwn, gosodwyd camera (Basler acA204090umNIR; Basler) gyda hidlydd pas isgoch uwchben y ddysgl Petri. Am fanylion ychwanegol ynghylch y gosodiad arbrofol, gweler Saumweber et al. (2018).
bodybuilding cistanche
Dysgu arogl-siwgr cysylltiadol. Roedd arbrofion dysgu yn dilyn protocolau sefydledig (Michels et al., 2017). Paratowyd cynwysyddion arogleuon ymlaen llaw trwy ychwanegu 10ml o sylwedd arogl at gynwysyddion Teflon wedi'u gwneud yn arbennig (diamedr mewnol 5 mm gyda chaead tyllog gyda 7 twll o 0.5 mm o ddiamedr yr un). Gorchuddiwyd dysglau Petri â chaeadau wedi'u haddasu wedi'u tyllu yn y canol gan 15 tyllau â diamedr 1 mm yr un i wella awyru.
Ar gyfer hyfforddiant arogl-siwgr, gosodwyd 20 larfa yng nghanol dysgl Petri wedi'i llenwi ag agarose a oedd yn cynnwys 2mol/L D-ffrwctos (CAS: 57-48-7; Roth) fel gwobr (1) ac wedi'i chyfarparu â dau arogl. cynwysyddion ar yr ochrau gyferbyn, y ddau wedi'u llenwi ag AM (AM1). Ar ôl 2.5 munud, cafodd y larfa eu dadleoli ar ddysgl Petri ffres gydag agarose plaen, di-flas, gyda dau gynhwysydd gwag (EM), lle buont hefyd yn treulio 2.5 munud. Perfformiwyd tri chylch hyfforddi "pâr" o'r fath, ym mhob achos gan ddefnyddio prydau Petri ffres. Yn hanner yr achosion, dechreuodd yr hyfforddiant gyda seigiau Petri a oedd yn cynnwys gwobrau fel y nodwyd (AM1/EM), ond yn hanner arall yr achosion cafodd y dilyniant ei wrthdroi (EM/AM1). Ar gyfer pob carfan o larfâu a hyfforddwyd AM1/EM (neu EM/AM1), hyfforddwyd ail garfan ar y cyd, hynny yw, trwy gyflwyniadau “heb barau” o arogl a gwobr (AM/EM1, neu EM1/AM, yn y drefn honno).
Yn dilyn hyfforddiant, trosglwyddwyd y larfa i ganol pryd Petri prawf a'u profi am eu hoff aroglau. Yn bwysig ddigon, cynhaliwyd y prawf galw'n ôl naill ai ar ddysgl Petri blaen i'w hasesucof- ymddygiad chwilio yn seiliedig ar neu ar ddysgl Petri yn cynnwys gwobr i benderfynu a oedd presenoldeb gwobr yn terfynu'rcof- chwilio yn seiliedig. Yn y naill achos neu'r llall, roedd cynhwysydd AM ar un ochr i'r ddysgl Petri brawf a chynhwysydd EM ar yr ochr arall. Penderfynwyd ar nifer y larfa ar y naill ochr o ddelwedd y camera 3 munud ar ôl i'r prawf ddechrau. O'r niferoedd hyn, cyfrifwyd ffafriaeth arogl fel a ganlyn:
Felly, gall gwerthoedd DP amrywio o 1 i 1, gyda gwerthoedd cadarnhaol yn nodi bod yn well gan y larfa yr arogl yn fwy ar ôl ymarfer pâr na heb bâr. Mae gwerthoedd DP cadarnhaol yn dangos cysylltiad archwaeth yn unol â hynnycofmae hynny'n cael ei ddehongli orau felcof- ymddygiad chwilio yn seiliedig. Mae gwerthoedd DP negyddol, ar y llaw arall, yn dynodi cysylltiadol anwrthwynebolcof.
Dysgu cysylltiadol trwy actifadu DAN optogenetig. Ar gyfer arbrofion optogenetig, perfformiwyd hyfforddiant a phrawf yn analog. Fodd bynnag, roedd yr holl brydau Petri wedi'u llenwi ag agarose plaen (hy, ni ddefnyddiwyd unrhyw flasau blasus). Yn lle hynny, ar gyfer hyfforddiant pâr, parwyd AM ag ysgogiad golau glas parhaus i actifadu naill ai 58E02-DAN neu 864- DAN am 2.5 munud, ac yna 2.5 munud o dywyllwch heb arogl (AM1/EM). Ar gyfer hyfforddiant heb bâr, cafwyd cyflwyniad arogl ac ysgogiad golau ar wahân (AM/EM1). Ar gyfer yr arbrawf a gyflwynir yn Ffigur 8E, cyflwynwyd arogl a golau am 5 munud yr un; roedd yr arbrawf hwnnw fel arall yn dilyn y gweithdrefnau a ddisgrifiwyd gan Rohwedder et al. (2016).
Ar ôl tri chylch hyfforddi o'r fath, cynhaliwyd y prawf galw'n ôl, a chyfrifwyd dewis arogleuon a DP fel y disgrifiwyd. Yn hollbwysig, cynhaliwyd y prawf adalw naill ai heb actifadu golau glas i benderfynu a yw'r DANs yn cyfryngu signal gwobr yn ystod hyfforddiant neu gydag actifadu golau glas i benderfynu a all y DANs, yn ogystal, gyfryngu signal i derfynu'r chwiliad.
Mae amrywiadau o'r protocol hwn wedi'u nodi yn y chwedlau ffigur.
Ymddygiad arogleuol cynhenid. Paratowyd cynwysyddion arogl a seigiau Petri fel y disgrifir uchod. Casglwyd carfannau o;20 larfa o'r ffiol, eu golchi'n fyr mewn dŵr tap, a'u gosod ar ddysgl Petri gyda chynhwysydd AM ar un ochr a chynhwysydd gwag ar yr ochr arall. Ar ôl 3 munud, penderfynwyd ar y dewis arogleuon cynhenid yn ôl Hafaliad 1. Cynhaliwyd y prawf ffafriaeth hwn naill ai yn absenoldeb neu ym mhresenoldeb siwgr, neu yn absenoldeb neu ym mhresenoldeb actifadu golau glas, i benderfynu a yw'r amodau prawf hyn yn newid. ymddygiad arogleuol cynhenid.
Dadansoddiad o drawsgyweirio ymddygiad ar ôl hyfforddiant gydag actifadu 864-DAN. Cafodd ymddygiad larfal ei olrhain ar fideo a'i ddadansoddi fel y disgrifiwyd yn fanwl gan Paisios et al. (2017). Yn gryno, dadansoddwyd dwy agwedd ar chemotaxis larfaol. Yn gyntaf, cyfrifwyd modiwleiddio ysbaddu pen (HC yr eiliad) (HC/s) fel a ganlyn:
Yn y mesur hwn, mae'r ongl pennawd (HA) yn disgrifio cyfeiriadedd pen yr anifail o'i gymharu â'r arogl, gydag onglau pennawd absoliwt (abs (HA)) o 0 gradd neu 180 gradd, er enghraifft, yn nodi bod yr arogl sydd y tu blaen neu y tu ôl i'r larfa, yn y drefn honno. Mae'r mesur hwn felly'n rhoi sgorau cadarnhaol ar gyfer yr atyniad (hy, pan fydd yr HC yn cyfeirio'r larfa tuag at y targed arogleuon yn hytrach nag i ffwrdd), tra'i fod yn rhoi sgorau negyddol ar gyfer gwrthwynebiad.
Imiwnohistocemeg. Cafodd ymennydd larfal eu dyrannu mewn toddiant halwynog rhydd Ca{{{{{{}}}}a'i osod yn hydoddiant Bouin wedi'i wanhau 1:2 gyda Ca21-hydoddiant halwynog am ddim am 7 munud. Dilynwyd tri cham golchi (pob 10 munud) yn PBST (0.3 y cant Triton-X 100 yn PBS) gan ddeor gyda'r gwrthgyrff cynradd dros nos ar 4 gradd . Ar ôl tri golchiad (pob 10 munud) mewn PBS, deorwyd y meinwe gyda'r gwrthgyrff eilaidd am 1 awr ar dymheredd ystafell. Ar ôl tri cham golchi terfynol yn PBS (pob 10 munud), gosodwyd samplau yn Vectashield (Vector Laboratories). Archwiliwyd paratoadau o dan ficrosgop confocal DM 6000 CS (Leica Microsystems).
bodybuilding cistanche
Fel gwrthgyrff, fe wnaethom naill ai ddefnyddio gwrthgorff llygoden gwrth-FASII monoclonaidd (DSHB, gwanhau 1:50 mewn toddiant blocio sy'n cynnwys serwm gafr arferol 4 y cant) a gwrthgorff cwningen gwrth-GFP (A11122, Invitrogen, wedi'i wanhau 1:1{ {28}}00 mewn datrysiad blocio sy'n cynnwys 4 y cant o serwm gafr arferol) fel gwrthgyrff sylfaenol a gwrthgorff gwrth-lygoden Cy3 (715-165-150, Jackson ImmunoResearch Laboratories) a Alexa-488 gwrth-gwningen gwrthgorff (A11034, Invitrogen), y ddau wanhau 1:200 yn PBS, fel gwrthgyrff eilaidd; neu fe wnaethom ddefnyddio gwrthgorff llygoden gwrth-ChR2 monoclonaidd (ProGen Biotechnik) wedi'i wanhau 1:100 mewn 0.3 y cant PBST fel gwrthgorff cynradd, gwrthgorff gwrth-lygoden Cy3 (715-165-150, Labordai ImmunoResearch Jackson), wedi'i wanhau 1:300 yn 0.3 y cant PBST , gan fod y gwrthgorff eilaidd, a Alexa-488 gwrth-HRP (Jackson ImmunoResearch Laboratories), wedi gwanhau 1:300 yn 0.3 y cant PBST, ar gyfer gwrth-staenio.
