RHAN 1 Mae Liposom Glycoside Ffenylethanol yn Atal Ysgogi HSC a Achosir gan PDGF Trwy Reoliad Llwybr Signalau FAK/PI3K/Akt
Mar 06, 2022
Shi-Lei Zhang 1, Long Ma 1, Mehefin Zhao 2, Shu-Ping Chi 1, Xiao-Ting Ma 1, Xiao-Yan Ye a Tao Liu 1,*
1 Adran Tocsicoleg, Ysgol Iechyd y Cyhoedd, Prifysgol Feddygol Xinjiang, Rhanbarth Ymreolaethol Xinjiang Uyghur, Xinyi Road No.393, Urumqi 830011, Tsieina
2 Labordy Allweddol ar gyfer Meddygaeth Uighur, Sefydliad Materia Medica o Xinjiang, Rhanbarth Ymreolaethol Xinjiang Uyghur, Ardal Tianshan, Ffordd De Xinhua Rhif 140, Urumqi 830004, Tsieina
Am fwy o wybodaeth cysylltwch â:Joanna.jia@wecistanche.com
Mae gan Cistanche deserticola lawer o effeithiau, cliciwch yma i wybod mwy
Crynodeb: Cistanche tubulosayn feddyginiaeth lysieuol Tsieineaidd traddodiadol a ddefnyddir yn helaeth i reoleiddio imiwnedd, aglycosidau ffenylethanoid(CPhGs) ymhlith y prif gydrannau sy'n gyfrifol am y gweithgaredd hwn. Fodd bynnag, mae eu hamsugniad gwael a'u defnydd isel o'r geg yn effeithio'n negyddol ar gymhwyso CPhGs. Mae darparu cyffuriau wedi'i dargedu yn gyfeiriad datblygu pwysig ar gyfer fferylliaeth. Mae astudiaethau blaenorol wedi nodi y gallai CPhGs rwystro dargludiad y llwybrau signalau yn TGF-p1/smad ac atal actifadu celloedd stelate hepatig (HSCs). Nod yr astudiaeth hon oedd gwerthuso effaith ffibrosis gwrth-hepatig liposomau CPhG trwy atal actifadu HSC, hyrwyddo apoptosis, rhwystro'r cylchred celloedd, atal dargludiad llwybrau signalau mewn adlyniad ffocal kinase (FAK) / phosphatidylinositol-3- kinase(PI3K)/protein kinase B(Akt), a phennu eu bod yn weithgaredd hepatoprotective in vitro. Dangosodd astudiaethau rhyddhau in vitro fod liposomau CPhG yn cael effaith rhyddhau parhaus o gymharu â CPhGs cyffuriau. Ataliwyd amlhau HSC ar ôl triniaeth gyda'r liposomau CPhG (29.45,14.72, 7.36 ^g/mL), gyda gwerthoedd IC50 o 42.54 Rg/mL yn yr assay MTT. Gallai crynodiadau gwahanol o liposomau CPhG atal amlhau HSC, hyrwyddo apoptosis, a rhwystro'r cylchred celloedd. Roedd y dull MTT yn dangos ataliad amlwg o ymlediad HSC ar ôl triniaeth liposom CPhG a ffactor twf-BB(rrPDGF-BB) sy'n deillio o Blatennau Llygoden Fawr Ailgyfunol. Cafodd lefelau colagen-1, atalydd metallopeptidase 1 (TIMP-1), actin cyhyrau llyfn (a-SMA), a PI3K/Akt ffosfforyleiddiad eu hisreoli, a matrics metalloproteinase-1 (MMP{ {23}}) wedi'i uwchreoleiddio, trwy driniaeth ymlaen llaw gyda chrynodiadau gwahanol o liposomau CPhG. At hynny, gallai 29.45 Rg/mL o liposomau CPhG leihau mynegiant y protein FAK a'r protein ffosfforyleiddio PI3K ac Akt i lawr yr afon o FAK trwy orfynegiant y genyn FAK. Mae'r arbrawf hwn yn awgrymu y gall liposomau CPhG atal actifadu HSCs trwy atal FAK ac yna lleihau mynegiant Akt/PI3K ffosfforylaidd, a thrwy hynny ddarparu mewnwelediadau newydd i gymhwyso CPhGs ar gyfer ffibrosis yr afu.
Geiriau allweddol: glycosidau ffenylethanoidliposom; celloedd stelate hepatig; amlhau; apoptosis; cylchred gell; FAK/PI3K/Act,
gall ffactorau, fel TGF-p1, alcohol, tocsinau, a steatosis, arwain at actifadu HSCs. Gall y PDGF hefyd arwain at actifadu HSCs [4]. Ar hyn o bryd, mae'r strategaethau therapiwtig sy'n targedu HSCs i atal ffibrosis yr afu yn cynnwys atal actifadu HSCs, amlhau, a chylchred celloedd, yn ogystal ag ysgogi apoptosis HSCs [5].
Cistanche tubulosa(teulu Orobanchaceae), planhigyn parasitig, yn cael ei dyfu'n eang yn rhanbarth deheuol Xinjiang yn Tsieina.C. tubulosadangoswyd ei fod yn cyflwyno gweithgareddau amrywiol, gan gynnwys gwella imiwnedd organeb, gwella dygnwch yr organeb, maethu'r arennau, trin analluedd, a chynyddu deallusrwydd;
1. Rhagymadrodd
mae ganddo hefyd eiddo gwrth-ocsidiad a gwrth-heneiddio [6]. Mae'r planhigyn hwn yn cynnwys glycosidau ffenylethanoid (CPhGs), iridoids, a polysacaridau, y mae CPhGs yn rhai o'r prif rywogaethau bioactif gweithredol [7]. Mewn astudiaeth flaenorol, canfuom y gallai CPhGs rwystro dargludiad y llwybrau signalau yn TGF-p1/smad, atal actifadu HSCs, a chael effeithiau ataliol ar ffibrosis hepatig a achosir gan serwm buchol a achosir gan albwmin mewn llygod mawr [7,8]. Fodd bynnag, mae gan CPhGs hydoddedd dŵr da a hydoddedd lipid gwael ac mae ffactorau allanol megis asidedd ac ensymau dadelfennu yn effeithio arnynt, sy'n lleihau sefydlogrwydd ac effeithiolrwydd CPhGs [9]. Ar ôl gweinyddu intragastrig, mae CPhGs yn ansefydlog yn llwybr gastroberfeddol llygod mawr, a gallai hydrolysis bondiau glycosid ddigwydd yn hawdd. Dim ond 0.83 y cant oedd bioargaeledd geneuol llygod mawr, felly mae'n anodd pennu ei rôl therapiwtig [10]. Felly, rhaid inni ddod o hyd i gyffur gwrth-ffibrotic diogel, effeithiol, parhaus ac wedi'i dargedu ar gyfer HSCs i wella eu heffeithiolrwydd therapiwtig. Mae systemau cyflenwi cyffuriau nanoronynnau yn darparu strategaeth amgen i oresgyn y diffygion hyn oherwydd eu manteision, gan gynnwys gallu llwytho cyffuriau uchel a chylchrediad gwaed hir [11]. Mae ganddynt gysylltiad cryf â'r afu a gallant ddosbarthu cyffuriau'n uniongyrchol i gelloedd trwy endocytosis ac ymasiad. Mae liposomau heb eu haddasu yn cael eu dosbarthu'n bennaf yn y meinweoedd neu'r organau a ddatblygir gan y system reticuloendothelial (RES) ac mae ganddynt y swyddogaeth o dargedu'r afu yn oddefol [12]. Felly, paratowyd liposomau CPhG trwy wasgariad pilen ac amgáu eilaidd i ddarparu effaith gwrth-ffibrosis. Yn yr astudiaeth hon, ein nod oedd ymchwilio i effeithiau liposomau CPhG ar amlhau HSC, apoptosis, a chylchred celloedd, yn ogystal â'i fecanweithiau.
2. Canlyniadau
2.1. Priodweddau Corfforol CPhG Liposome
Roedd priodweddau ffisegol y liposomau CPhG a baratowyd fel a ganlyn fel a ganlyn: Maint y gronynnau oedd (216.7 ± 3.47) nm, y potensial Zeta oedd (-55.6 ± 1.3) mV. Fel y dangosir yn Ffigur 1, roedd y gronynnau yn debyg i grwn, wedi'u gorchuddio â thrwch unffurf ar yr wyneb, ac roedd y dosbarthiad maint gronynnau yn unffurf. Roedd effeithlonrwydd llwytho cyffuriau ac amgįu'r liposomau CPhG yn (3.71 ± 0.32) y cant a (38.46 士 7.85) y cant .
2.2. Rhyddhad In Vitro o Liposomau CPhG a CPhGs
Cyfrifwyd y gyfradd ryddhau gronnus amcangyfrifedig a'i phlotio fel swyddogaeth amser ar gyfer liposomau CPhG a CPhGs (Ffigur 2). Yn yr astudiaeth bresennol; normaleiddiwyd cyfradd rhyddhau'r CPhGs ar ôl 12 h i 100 y cant, tra bod cyfradd y liposomau CPhG yn agos at 100 y cant ar ôl 24 h, a chynyddodd cyfradd rhyddhau'r CPhGs gydag amser. Dadansoddwyd data trwy ddefnyddio gwahanol fodelau ffitio ar gyfer y mecanweithiau rhyddhau rheoledig, gan gynnwys yr hafaliadau trefn sero, trefn gyntaf, a Higuchi. Dangosir yr hafaliadau gosodedig a'r cyfernodau cydberthynas ar gyfer y tri model rhyddhau yn Nhabl 1.
Y model gorau sy'n cyd-fynd â CPhGs a'r liposomau CPhG yw'r hafaliadau Higuchi a'r gorchymyn cyntaf. Ni ddangosodd yr astudiaeth rhyddhau in vitro o liposomau CPhG unrhyw effaith byrstio. Dewiswyd y swyddogaeth ddosbarthu ffit orau i gyfrifo'r paramedrau diddymu T50 (diddymiad 50 y cant). Mae'r canlyniadau'n dangos bod amser cadw cyfartalog liposomau CPhG yn hirach na'r CPhGs, a T50 y liposomau CPhG yw 9.39 h. O gymharu â'r 1.69 h ar gyfer y CPhGs, mae liposomau CPhG yn arddangos effaith rhyddhau parhaus amlwg (Tabl 2).
Yn gyntaf fe wnaethom ymchwilio i effeithiau sytotocsig y liposomau CPhG ar HSCs gyda assay MTT in vitro. Roedd HSCs yn agored i grynodiadau gwahanol o liposomau CPhG, yn amrywio o 0 i 117.79 卩g/mL am 24 h. Lleihaodd liposomau CPhG hyfywedd HSCs mewn modd dibynnol ar ddos, a'u gwerth IC50 oedd 42.535 (ee/mL. Effaith liposomau CPhG (29.45, 14.72, a 7.36 ^g/mL) ar y celloedd yn 24, 48 a 72 h yn cael ei ddangos yn Ffigur 3. Ar ôl triniaeth gyda'r liposomau CPhG, ataliwyd amlder HSCs yn sylweddol ar wahanol adegau (Ffigur 3).
Canfuwyd rhyddhad lactad dehydrogenase (LDH) o HSCs ar ôl 24 h o driniaeth gyda chrynodiadau gwahanol o'r liposom CPhG. Dangosir y canlyniadau yn Nhabl 3. Ni chafodd HSCs a gafodd eu trin â liposomau CPhG unrhyw effaith arwyddocaol ar ryddhau LDH.
2.4. Mae Liposomau CPhG yn Annog HSCs Apoptosis ac Arestio'r Cylchred Cell
Amlygwyd HSCs i liposomau CPhG (29.45,14.72,7.36 卩g/mL) am 24 h, a chynhaliwyd staenio dwbl annexin-V-FITC/PE i ganfod apoptosis trwy sytometreg llif, fel y dangosir yn Ffigur 4a. Cynyddodd cyfanswm apoptosis y celloedd yn ystadegol o gymharu â'r grŵp rheoli (p < 0.05).="" ar="" ôl="" 24="" h="" o="" driniaeth="" ar="" hscs="" ar="" gyfer="" pob="" grŵp="" dos,="" gallai'r="" liposomau="" cphg="" (29.45="" ^g/ml)="" achosi="" apoptosis="" hwyr="" o'r="" hscs,="" ac="" roedd="" canran="" y="" celloedd="" apoptotig="" hwyr="" yn="" uwch="" na="" chanran="" y="" celloedd="" apoptotig="" cynnar.="" roedd="" cyfran="" y="" celloedd="" apoptotig="" cynnar="" yn="" llawer="" uwch="" na'r="" celloedd="" apoptotig="" hwyr="" yn="" y="" grwpiau="" a="" driniwyd="" gan="" cphg="" liposome="" (14.72="" a="" 7.36|^g/ml).="" mae'r="" canlyniadau="" hyn="" yn="" dangos="" yn="" glir="" bod="" liposomau="" cphg="" yn="" achosi="" apoptosis="" hepatocyte,="" yn="" enwedig="" yng="" nghamau="" hwyr="" hscs.="" yn="" ogystal,="" cynyddodd="" cyfanswm="" apoptosis="" gyda="" dos="" y="" liposomau="" cphg.="" mae'r="" canlyniadau="" hyn="" yn="" awgrymu="" y="" gall="" liposomau="" cphg="" atal="" actifadu="" hscs="" a="" ffibrosis="" hepatig="" trwy="" ysgogi="" apoptosis="">
Er mwyn pennu effaith y liposomau CPhG ar gylchred celloedd HSCs, cafodd HSCs eu trin â'r liposomau CPhG ar grynodiadau o 29.45, 14.72, a 7.36 昭/mL am 24 h, a'u dadansoddi yn ôl cytometreg llif (Ffigur 4b). Dangosodd y canlyniadau fod cyfran y celloedd yn y cyfnod G0/G1 wedi cynyddu'n sylweddol (p < {{10}}.05),="" tra="" bod="" canran="" y="" celloedd="" yn="" y="" cyfnod="" s="" yn="" sylweddol="" lleihau="" (p="">< 0.05).="" at="" hynny,="" gostyngwyd="" cyfran="" y="" celloedd="" yn="" y="" cyfnod="" g2/m="" yn="" sylweddol="" o="" gymharu="" â’r="" grŵp="" rheoli=""><0.05). taken="" together,="" these="" results="" exhibit="" the="" cell="" cycle="" modulatory="" activity="" of="" the="" cphg="" liposomes="" in="" hscs,="" which="" may="" relate="" to="" their="" anti-proliferative="" and="" apoptosis-inducing="">
2.5. Astudio Mecanwaith(iau) Gweithredu Liposomau PhG In Vitro
2.5.1. Mae Liposomau CPhG yn Atal Ymlediad HSCs trwy Ysgogiad rrPDGF-BB
Er mwyn ymchwilio ymhellach i effeithiau liposomau CPhG ar yr amlhau a ysgogwyd gan rrPDGF-BB HSCs, cynhaliwyd assay MTT i fesur hyfywedd HSCs a gafodd eu trin â chrynodiadau rhagosodedig o liposomau CPhG ar gyfer 24, 48, a 72 h ( Ffigur 5).
Ar ôl 24 h o driniaeth gyda HSCs wedi'i ysgogi gan rrPDGF-BB a 29.45,14.721 a 7.36 昭/mL o'r liposomau CPhG, cyfraddau goroesiad y celloedd ym mhob grŵp dos oedd 67.5 y cant, 75.3 y cant, a 89.2 y cant, yn y drefn honno. Ar ôl 48 h, roedd y gyfradd goroesi yn 49.2 y cant , 58.6 y cant , a 73.5 y cant , yn y drefn honno, yn y celloedd
o bob grŵp dos. Ar ôl 72 h o driniaeth , cyfraddau goroesiad y celloedd ym mhob grŵp dos oedd 45.3 y cant , 59.2 y cant , a 79.2 y cant , yn y drefn honno. Dangosodd y canlyniadau fod gan liposomau CPhG effaith ataliol sylweddol ar HSCs a ysgogwyd gan rrPDGF-BB, a daeth yr effaith ataliol hon yn fwy amlwg wrth i'r dos gynyddu. Awgrymir bod effaith ataliol liposomau CPhG ar HSCs yn cyfrannu at weithgaredd gwrth-amlhau CPhGliposomo.
2.5.2. Mae Liposomau CPhG yn Atal Ysgogi HSC In Vitro
Mae HSCs yng ngofod Disse yn cynhyrchu cydrannau ECM fel colagen-1, (s-SMA, a cholagen III. Mae HSCs hefyd yn cynhyrchu ffactorau eraill sy'n rheoleiddio datblygiad ECMs, megis MMPs a TIMPs [5]). Er mwyn ymchwilio ymhellach i fecanweithiau a achosir gan rrPDGF-BB mewn HSCs, gwnaethom werthuso mynegiant proteinau sy'n gysylltiedig ag ECM, gan gynnwys colagen-1, Cosma, colagen III, MMP-1, a TIMP{8} }. Mae Ffigur 6a yn dangos y gallai grwpiau liposomau CPhG (29.45,14.72, 7.36 4g/mL) leihau lefelau mynegiant mRNA colagen-1, a-SMA, a TIMP{{18} } a chynyddu lefel mynegiant mRNA MMP-1 yn fwy na'r grŵp rrPDGF-BB.
Ffigur 6. Effeithiau liposomau CPhG ar fynegiadau colagen-1, a-SMA, TIMP-1 , a MMP-1 mewn HSCs. (a ) Mynegiad mRNA o golagen-1, a-SMA, TIMP-1 , a MMP-1 mewn HSCs (assay RT-PCR). (b) Mynegiad protein colagen{{1{0}} ac a-SMA. A, y grŵp rheoli; B, y grŵp trin rrPDGF-BB; C, y grŵp trin rrPDGF-BB ynghyd â liposom CPhG 29.45 g/mL; D, y rrPDGF-BB plws CPhG liposome 14.72(_g/mL wedi'i drin grŵp; E, y rrPDGF-BB a CPhG liposome 7.3 6 卩g/m L treate d grŵp; Data yn cael eu mynegi fel y cymedr 土 SD .** p < 0.01,="" yn="" sylweddol="" wahanol="" o="" gymharu="" â'r="" grŵp="" hscs="" wedi'i="" actifadu="" gan="" rrpdgf-bb.="" #="" p="">< 0.05,="" yn="" sylweddol="" wahanol="" i'r="" grŵp="" rheoli.="" 6-actin="" cael="" ei="" ddefnyddio="" fel="" rheolaeth="">
Roedd y liposomau CPhG hefyd yn codi lefelau mRNA MMP-1. Mynegwyd lefelau a-SMA a cholagen-1 yn uchel mewn HSCs wedi'u hysgogi gan rrPDGF-BB. Mewn cyferbyniad, gostyngodd liposomau CPhG lefelau a-SMA a cholagen-1 (Ffigur 6b). Yn enwedig ar grynodiad uchel (29.45 ^g/mL), lleihaodd liposom CPhG y cynnydd mewn mynegiant colagen-1 a-SMA trwy rrPDGF-BB.
2.53 Mae Liposomau CPhG yn Atal y Llwybr Signalau PI3K/Akt
Mae PI3K/Akt yn llwybr trawsgludo signal pwysig sy'n cael ei gyfryngu gan dderbynyddion tyrosine kinase. Mae llwybr signalau PI3K / Akt yn gweithredu fel synhwyrydd mewn ymateb i ysgogiadau allgellog ac yn cyfryngu'r signalau cellog, a thrwy hynny chwarae rhan hanfodol mewn apoptosis celloedd ac amlhau trwy effeithio ar weithgaredd moleciwlau effeithydd i lawr yr afon [13]. Er mwyn gwirio a yw llwybr PI3K/Akt yn cymryd rhan yn effeithiau gwrth-ymlediad liposomau CPhG ar HSCs, archwiliwyd mynegiant a lefelau ffosfforyleiddiad PI3K/Akt gan ddadansoddiad blotiau gorllewinol. Dangosodd y canlyniadau fod lefelau p-PI3K a p-Akt wedi gostwng yn gyson mewn HSCs ar ôl triniaeth 24 h gyda'r liposomau CPhG, sy'n dangos bod effeithiau gwrth-ymlediad liposomau CPhG yn erbyn HSCs yn gysylltiedig â dadactifadu'r llwybr PI3K/Akt. , fel y dangosir yn Ffigur 7.
2.5.4. Gall y Liiposomau CPhG Is-reoleiddio Mynegiant Proteinau Llwybr PI3K / Akt mewn HSCs o'r Plasmid Gorfynegiant FAK rrPDGF-BB-Cyfryngol
Mae FAK yn enyn hanfodol sy'n rheoleiddio llwybr signalau PI3K/Akt. Gall FAK actifedig ffosfforyleiddiad PI3K, sy'n arwain ymhellach at ffosfforyleiddiad Akt. Mae FAK yn cyfryngu trawsgludiad signal y derbynnydd tyrosine-protein kinase, integrin, a llwybrau eraill i gelloedd, sef cyffordd a chanolbwynt sawl llwybr mewngellol yn ystod actifadu HSCs. Felly, fe wnaethom ddyfalu
y gallai liposomau CPhG atal gweithgaredd llwybr signalau PI3K/Akt trwy amharu ar actifadu FAK. Yn dilyn hynny, cadarnhawyd y ddamcaniaeth hon trwy ddangos gorfynegiant y genyn FAK.
(pEX{{0}}NC) ynghyd â grŵp liposom CPhG 29.45 Lg/mL wedi gostwng yn sylweddol (p < 0.01).
blotio dwyreiniol gyda gwrthgyrff cynradd penodol. ** p < 0.01,="" yn="" sylweddol="" wahanol="" o="" gymharu="">
y grŵp symbyliad rrPDGF-BB ynghyd â pEX-3-FAK. plws p < 0.05,="" yn="" sylweddol="" wahanol="" o="" gymharu="" â'r="" grŵp="" wedi'i="" drin="" rrpdgf-bb.="" &="" p="">< 0.01,="" yn="" sylweddol="" wahanol="" o="" gymharu="" â="" symbyliad="">
ynghyd â grŵp pEX-3-NC. -defnyddiwyd actin fel rheolaeth fewnol.
gall cistanche gwrth-ganser
3. Trafodaeth
Dangoswyd bod gan CPhGs amrywiaeth o weithgareddau biolegol, gan gynnwys gweithgaredd gwrthlidiol [14,15], gweithgaredd gwrth-osteoporosis [16,17], effaith tawelyddol [18] , gweithgaredd gwrthtifatigue [19], effaith niwro-amddiffynnol [ 20], a gweithgaredd hepatoprotective [21,22]. Roedd Yang et al. wedi canfod bod dyfyniad oC. tubulosagallai oedi'n sylweddol gynnydd ffibrosis yr afu cemegol arbrofol trwy atal synthesis colagen a lleihau straen ocsideiddiol [22]. Fodd bynnag, mae effeithiolrwydd GRhGau fel
mae gwarchodwyr gwres yn cael eu cyfyngu gan eu athreiddedd gwael a'u bio-argaeledd isel [23]. Felly, mae angen ehangu cymhwysiad GRhGau trwy ddatblygu system gyflenwi effeithlon i oresgyn yr anawsterau hyn.
Yn ystod y blynyddoedd diwethaf, mae ymchwil cyffuriau ac ymchwil glinigol wedi cadarnhau y gall defnyddio nanoronynnau fel cludwyr cyffuriau wella effeithiolrwydd cyffuriau in vivo. Liposomau yw rhai o'r nanoronynnau pwysicaf [24].
Gellir defnyddio liposomau fel cludwyr cyffuriau i gyflenwi cyffuriau gwrthlidiol, cyffuriau gwrthganser, gwrthfiotigau, cyffuriau gwrthffyngaidd, a chategorïau gwahanol eraill o gyffuriau yn llwyddiannus [25]. Gall liposomau hefyd wella sefydlogrwydd cyffuriau, cynyddu hydoddedd cyffuriau, a hyrwyddo biocompatibility [26]. Ar y llaw arall, mae astudiaethau wedi dangos y gall y system cyflenwi cyffuriau o nanoronynnau solet (yn yr ystod o 10-1000 nm) grynhoi 80 y cant o ddos y cyffur yn yr afu, gan alluogi'r cyffur i fynd i mewn. celloedd yr afu [27]. Roedd Jing Zhu et al. canfuwyd bod gan galanin-liposomau effeithiau targedu afu da [28]. Felly, gellir defnyddio effaith dargedu goddefol meddyginiaethau nano-Tseiniaidd i drin afiechydon yr afu neu glefydau eraill. Maint gronynnau'r liposomau CPhG a baratowyd yn yr astudiaeth bresennol, sydd â rhywfaint o dargedu afu, yw (216.7 ± 3.47) nm. Mae ymddygiad rhyddhau cyffuriau yn eiddo pwysig i systemau cyflenwi nano-gyffuriau. Oherwydd bod gan CPhGs hydoddedd dŵr da, defnyddir hydoddiant byffer PBS (pH=6.0) fel y cyfrwng rhyddhau. O'r gromlin rhyddhau, gellir gweld, cyn 2 h, bod canran y rhyddhau liposomau CPhG yn llai na 40 y cant, ni chafwyd unrhyw ryddhad sydyn, ac roedd effaith rhyddhau parhaus penodol o'i gymharu â rhyddhau CPhGs. O'r hafaliad cromlin rhyddhau wedi'i osod, mae rhyddhau'r liposomau CPhG yn yr hydoddiant byffer ffosffad ar pH=6.0 yn gyson â hafaliad Higuchi.
cistanchecangwrth-apoptosis
Mewn clefydau cronig yr afu, mae gweithrediad parhaus HSCs yn arwain at ffibrosis yr afu [29]. Felly, gallai atal actifadu, amlhau a chylchred celloedd HSCs, neu ysgogi apoptosis HSC, fod yn fan cychwyn newydd ar gyfer therapi wedi'i dargedu ar gyfer ffibrosis yr afu [30-33]. Mae llawer o astudiaethau wedi canfod mai apoptosis yw'r allwedd i wrthdroi ffibrosis hepatig trwy hyrwyddo apoptosis [34]. Mae datblygiad ffibrosis yr afu yn dibynnu ar actifadu HSCs, a all gynnig y potensial i atal actifadu HSC a chymell apoptosis i atal neu drin ffibrosis yr afu [35,36]. Mae LDH yn ensym yn y cytosol gell, sy'n cael ei ryddhau yn y cyfryngau meithrin pan fydd y gellbilen yn cael ei niweidio. Am y rhesymau hyn, gwnaethom gynnal astudiaethau in vitro ar gyfraddau hyfywedd celloedd, cynnwys LDH mewn celloedd, a chylchred celloedd apoptosis HSC sy'n agored i liposomau CPhG. Dangosodd y canlyniadau fod liposomau CPhG yn atal hyfywedd ac amlder HSCs yn gryf ac yn cynyddu canran y celloedd apoptotig mewn modd sy'n dibynnu ar grynodiad. Ar ben hynny, mae canlyniadau'r cylchred celloedd yn nodi y gallai'r liposomau CPhG gymell arestiad cylchred celloedd yn y cyfnod G1. Mae'r canlyniadau'n dangos mai'r allwedd i liposomau CPhG atal a thrin ffibrosis hepatig yw rheoleiddio amlhau celloedd, apoptosis, a chylchred celloedd. O'i gymharu â'r grŵp rheoli gwag, mae gan y cynnwys LDH rhwng pob grŵp duedd sy'n cynyddu'n raddol. Fodd bynnag, nid oedd unrhyw wahaniaeth arwyddocaol (p > 0.05), sy'n dangos, er bod y gweithgaredd yn lleihau ar gyfer HSCs y mae liposomau CPhG yn effeithio arnynt, mae'r rhan fwyaf o'r cellbilenni'n dal yn gyfan. Nid yw'r ataliad ar amlhau HSCs gan liposomau CPhG oherwydd gwenwyndra'r cyffuriau i'r celloedd.
PDGF yw'r ffactor mwyaf hanfodol sy'n effeithio ar y cynnydd mewn HSCs. Mae'r derbynyddion PDGF (PDGF-Ra a -p) yn perthyn i'r teulu derbynyddion tyrosine kinase. Mae PDGF-AA yn rhwymo'n gyfan gwbl i PDGF-Ra, tra bod cadwyni PDGF-B yn rhwymo ac yn pylu gyda PDGF-Ra a -p [37]. Yn dilyn rhwymo'r ligand i'r PDGF-R, mae'r derbynyddion yn pylu, sydd wedyn yn arwain at ffosfforyleiddiad o weddillion tyrosin mewnol ac at actifadu sawl llwybr signalau i lawr yr afon, gan arwain yn y pen draw at amlhau a mudo HSCs actifedig. Mae'r broses hon yn arwain at gynhyrchu a dyddodiad gormodol o golagen ac ECMs eraill, a thrwy hynny hyrwyddo datblygiad a dilyniant ffibrosis yr afu [38]. Mae Breitkopf et al. yn dangos bod gorfynegiant hepatig PDGF-BB yn arwain at amlhau HSC a ffibrosis yr afu [39]. Yn ein hastudiaeth, fe wnaethom ddefnyddio rrPDGF-BB fel symbylydd i actifadu HSCs, a gallai pob grŵp liposom CPhG dosedig atal amlhau HSCs a chyflwyno perthynas effaith dos ymddangosiadol. Awgrymir bod effaith ataliol liposomau CPhG ar HSCs yn cyfrannu at weithgaredd atal amlhau liposomau CPhG.
Mae gweithrediad HSCs yn gysylltiedig â llawer o newidiadau ym mhatrymau mynegiant genynnau celloedd. Yn benodol, mae newidiadau ym mynegiant genynnau colagen-1 ac a-SMA yn cydberthyn fwyaf â phriodweddau ffibrosis HSCs actifedig [40]. Mae MMPs yn endopeptidasau sy'n ddibynnol ar sinc sy'n chwarae rhan bwysig wrth ddiraddio holl gydrannau protein ECM o dan amodau ffisiolegol a phatholegol. Mae'r MMPs a TIMPs yn cyfryngu synthesis a diraddio'r ECM, yn y drefn honno. Gall MMPs hyrwyddo diraddio ECM. Mae'r cydbwysedd cain rhwng MMPs a TIMPs yn pennu nifer yr achosion o ffibrosis yr afu [29]. O'i gymharu â'r grŵp rrPDGF-BB, cynyddodd mynegiant TIMP-1, a-SMA, a cholagen-1 yn y grwpiau liposomau CPhG yn sylweddol, tra bod mynegiant MMP-9 wedi lleihau. Roedd triniaeth liposome CPhG yn arbennig wedi gwrthdroi'r mynegiadau annormal a achosir gan rrPDGF-BB mewn HSCs. Mae'r data hyn yn dangos bod liposomau CPhG o bosibl yn atal cynhyrchu ECM trwy adfer y cydbwysedd rhwng MMPs a TIMPs, a thrwy hynny gynyddu lefelau MMP-1 a lleihau mynegiant TIMP-1, a-SMA, a colagen-1 ac o bosibl yn hyrwyddo diraddio matrics allgellog.
Mae FAK yn fath o gymhleth adlyniad ffocal. Gall PDGF hefyd actifadu FAK trwy ryngweithio â'r protein ECM trwy integrin [41]. Mae'r cyfadeilad adlyniad ffocal yn darparu synhwyrydd uniongyrchol ar gyfer cyfanrwydd yr amgylchedd allgellog. Mae actifadu FAK yn arwain at actifadu PI3K. Dangoswyd bod PI3K yn ymwneud â lluosogi sawl math o gelloedd [42]. Dangoswyd ei rôl hanfodol mewn HSCs trwy ddefnyddio atalyddion PI3K-benodol LY294002 a wortmannin i rwystro mitogenesis a chemotaxis a achosir gan PDGF heb effeithio ar awtoffosfforyleiddiad derbynnydd PDGF [43]. Mae PI3K yn cael ei recriwtio i dderbynyddion PDGF ffosfforyleiddio dimerized, sy'n actifadu protein kinase C (PKC), Akt, a kinases p70S6 (p70S6K) [44]. Adroddwyd bod FAK dominyddol-negyddol (Ad-FAKCD) wedi'i ddefnyddio i rwystro gweithgaredd FAK ac atal actifadu PI3K a achosir gan amlder PDGF a HSCs ar ôl triniaeth PDGF [45]. Felly, rhagdybiwyd gennym fod y llwybr FAK/PI3K/Akt yn darged posibl ar gyfer y liposomau CPhG.
Mae ein canlyniadau'n dangos, o gymharu â'r grŵp ysgogi rrPDGF-BB ynghyd â X-3-FAK, bod lefelau mynegiant protein FAK, PI3K ffosfforylaidd, ac Akt ffosfforylaidd wedi'u hisreoleiddio yn yr ysgogiad rrPDGF-BB ynghyd â X-3-FAK ynghyd â grŵp liposom CPhG 29.45 Lg/mL. Mae'r canlyniadau hyn yn dangos y gallai triniaeth liposome CPhG 29.45 Lg/mL leihau mynegiant y protein FAK a'r proteinau ffosfforyleiddio PI3K ac Akt i lawr yr afon o FAK.
Gyda dyfnhau'r ymchwil ar gemeg a ffarmacoleg meddyginiaethau Tseiniaidd traddodiadol, mae mwy a mwy o gynhwysion gweithredol meddyginiaethau Tsieineaidd traddodiadol wedi'u canfod a'u cadarnhau. Mae Paclitaxel, artemisinin, a chyffuriau eraill wedi'u cydnabod yn eang fel cyffuriau triniaeth llinell gyntaf ar gyfer clefydau cysylltiedig ledled y byd. Fodd bynnag, ar yr un pryd, canfyddir, er bod effaith ffarmacolegol in vitro llawer o gynhwysion meddygol Tsieineaidd yn gryf iawn, mae ganddynt hydoddedd dŵr gwael, hanner oes byr, sefydlogrwydd gwael, bio-argaeledd isel, sgîl-effeithiau gwenwynig, a llawer. problemau eraill sy'n cyfyngu'n ddifrifol ar eu defnydd meddyginiaethol a chlinigol. Mae'r system cyflenwi nano-gyffuriau yn system cyflenwi cyffuriau newydd gyda photensial mawr i'w datblygu ac mae'n fan problemus mewn ymchwil fferylliaeth fodern. Mae ei gymhwysiad wrth ymchwilio a datblygu mathau newydd o feddyginiaethau Tsieineaidd traddodiadol nid yn unig yn gwella ffurfiau traddodiadol meddyginiaethau Tsieineaidd ond hefyd yn gwella effaith iachaol meddyginiaethau Tsieineaidd traddodiadol i raddau ac yn cynyddu sefydlogrwydd cyffuriau in vivo. Ar ben hynny, mae liposomau heb eu haddasu yn cael eu hamsugno'n bennaf gan y RES, yn dibynnu ar eu maint gronynnau, priodweddau wyneb, a ffactorau eraill. Maent hefyd yn cael eu targedu'n oddefol i'r afu. Er mwyn gwella effeithlonrwydd targedu'r afu o liposomau cyffredin, gellir cynyddu crynodiad y meinwe darged trwy gysylltu ligandau penodol neu grwpiau swyddogaethol penodol.
Felly, mewn ymchwil yn y dyfodol, dylem roi pwys ar briodweddau ffisegol a chemegol echdynnu a phuro CPhG, megis hydoddedd, sefydlogrwydd, asidedd ac alcalinedd, yn ogystal ag astudio biofferylliaeth a ffarmacocineteg. Dylem sefydlu theori dylunio fformiwleiddiad unigryw, llwyfan technoleg paratoi, a dull gwerthuso ansawdd ar gyfer CPhGs a hefyd datblygu amrywiaeth o systemau llwytho nano-cyffuriau ar gyfer GRhGau, i sicrhau bod GRhGau yn cael eu defnyddio mor drylwyr â phosibl. Gwneud defnydd llawn o'r manteision hyn fydd cyfeiriad ein hymchwil yn y dyfodol.
