Rhan 2|Mae Fformiwla Llysieuol Tsieineaidd, Tonic The Kindney, yn Gwella Atroffi Cyhyrau Trwy Broses Rheoli Ansawdd Mitocondriaidd mewn 5/6 o Lygod Mawr Nephrectomized
Mar 10, 2022
Dongtao Wang1,3, Jianping Chen2, Xinhui Liu1, Ping Zheng1, Gaofeng Song1, Tiegang Yi1,2 a Shunmin Li1
Atrophy cyhyrauyw un o gymhlethdodau difrifol clefyd cronig yn yr arennau (CKD). Mae dadreoleiddio'r broses rheoli ansawdd mitocondriaidd (MQC), gan gynnwys biogenesis mitocondriaidd gostyngol, amharu ar ddeinameg mitocondriaidd ac ysgogi mitophagi, yn chwarae rhan bwysig wrth gyfryngu gwastraffu cyhyrau. Nod yr astudiaeth hon oedd arsylwi effeithiau decoction Jian-Pi-Yi-Shen (JPYS) aratroffi cyhyrmewn llygod mawr CKD ac archwilio ei fecanwaith posibl ar reoleiddio prosesau MQC. Dyrannwyd y 5/6 o lygod mawr nephrectomized ar hap yn 2 grŵp: grŵp CKD a grŵp JPYS. Ar ben hynny, grŵp ffug oedd llygod mawr a weithredir â ffug. Cafodd pob llygod mawr eu trin am 6 wythnos. Dangosodd y canlyniadau fod gweinyddu decoction JPYS yn atal colli pwysau'r corff, colli cyhyrau, gostyngiad mewn maint ffibr cyhyrau, diraddio protein cyhyrau, a mwy o synthesis protein cyhyrau. Yn ogystal, cynyddodd decoction JPYS y cynnwys mitocondriaidd a phroteinau biogenesis ac is-reoleiddiwyd y proteinau awtoffagi a mitophagi. Ar ben hynny, cynyddodd decoction JPYS broteinau ymasiad mitocondriaidd, tra'n lleihau proteinau ymholltiad mitocondriaidd. I gloi, cynyddodd decoction JPYS gynnwys mitocondriaidd a biogenesis, adferodd y cydbwysedd rhwng ymholltiad ac ymasiad, ac atal y llwybr awtoffagy-lysosome (mitoffagi). Gyda'i gilydd, dangosodd ein data fod decoction JPYS yn fuddiol iatroffi cyhyryn CKD, a allai fod yn gysylltiedig â modiwleiddio proses MQC.
Am fwy o wybodaeth cysylltwch â:joanna.jia@wecistanche.com
Mae Cistanche tubulosa yn atalarenclefyd, cliciwch yma i gael y sampl
Trafodaeth
Mae llawer o echdynion crai a chyfansoddion gweithredol ynysig o TCM wedi'u nodi ac wedi dangos effeithiolrwydd rhagorol, yn enwedig mewn gwella gwrth-llid ac anhwylderau metabolig ar gyfer gwahanol fathau oafiechydon yr arennau. Atrophy cyhyrauyn gymhlethdod difrifol i gleifion CKD, a nodweddir gan golli proteinau cyhyrau yn raddol. Mae'r canlyniad andwyol hwn yn lleihau ansawdd bywyd a goroesiad yn sylweddol16, 34. Mae nodweddion pwysicaf yatroffi cyhyryn ostyngiad sylweddol ym mhwysau'r corff a cholli màs cyhyr, gan awgrymu cyflwr metabolig sy'n gysylltiedig â CKD sy'n targedu cyhyrau yn benodol. Fel TCM, mae decoction JPYS wedi dod i'r amlwg fel asiant therapiwtig posibl i'w drinatroffi cyhyra chynyddu màs cyhyr. I ymchwilio i'r gwrth-atroffi cyhyreffaith decoction JPYS a'i fecanwaith posibl, yn yr astudiaeth bresennol, perfformiwyd llygod mawr CKD a achosir gan 5/6nephrectomy, ac mae'r canlyniadau wedi dangos bod decoction JPYS wedi atal colli pwysau'r corff yn sylweddol, colli màs cyhyr, gostyngiad mewn maint ffibr cyhyrau, a phroteolysis protein cyhyrau , ynghyd ag atal UPS a FoxO3a. Ar ben hynny, gallai decoction JPYS gynyddu cynnwys mitocondriaidd a biogenesis, adfer y cydbwysedd rhwng ymholltiad ac ymasiad, a rhwystro actifadu awtophagi a mitophagi. Mae màs cyhyr ysgerbydol yn dibynnu ar gydbwysedd deinamig rhwng synthesis protein a diraddio. Ac mae'r ddwy broses yn cydberthyn yn dynn35. Dangosodd y canlyniadau presennol fod decoction JPYS yn gallu cynyddu synthesis protein ac atal dadansoddiad cyhyr mewn llygod mawr CKD ar yr un pryd. Er mwyn ymchwilio i'r mecanweithiau tanlinellu ar gyfer gohirio diraddio protein gan JPYS decoction, gwnaethom archwilio llwybrau diraddio protein.
Roedd cynnydd mewn Atrogin-1 a MuRF-1 yn hybu hollbresennoldeb a diraddio proteinau adeileddol 26 S proteasome-gyfryngol, a gynyddodd ddiraddiad protein cyhyrau ac felly wedi cyfrannu at wastraffu cyhyrau yn ein hastudiaethau blaenorol36, 37. Mae proteinau ubiquitinated yn gyflym wedi'i ddiraddio gan y proteasome 20S gan gynnwys chymotrypsin a gweithgareddau tebyg i drypsin, sy'n arwain at broteinau Ub-cyfunedig yn peptidau bach38. Yn yr astudiaeth hon, dangosodd ein canlyniadau fod decoction JPYS yn atal y proteinau atrogin uchel a MuRF a gweithgareddau tebyg i chymotrypsin a trypsin mewn cyhyr CKD. Nododd astudiaethau blaenorol fod triniaeth TCM (Zhimu-Huangbai Herb-Pair) wedi atal mynegiant Atrogin-1a MuRF1 mewn cachecsia a achosir gan ganser mewn cyhyr llygod. Awgrymodd y canfyddiadau hyn y gallai decoction JPYS atal diraddio protein cyhyrau trwy atal actifadu UPS mewn llygod mawr CKD.
Gall Akt ffosfforyleiddio FoxO3a mewn sawl safle, sy'n gweithredu fel sgaffald o fewn y cytoplasm, ac sy'n cael ei atafaelu o fewn y cytosol, gan olygu na allant rwymo i hyrwyddwyr eu genynnau targed yn y cnewyllyn i reoli eu trawsgrifio39. Dangosodd astudiaeth flaenorol fod actifadu FoxO3a mewn cyhyrau yn arwain at drawsgrifio cynyddol o'r retrogenau hyn fel Atrogin-1 a MuRF1 ac yn ysgogi proteolysis i effeithioatroffi cyhyr40. Dangosodd ein canlyniad fod decoction JPYS wedi cynyddu lefelau ffosfforyleiddiad FoxO3a yn sylweddol, wedi gwanhau lefel cyfanswm protein FoxO3a yng nghyhyr llygod mawr CKD. Nododd astudiaeth flaenorol fod triniaeth TCM (Zhimu-Huangbai Herb-Pair) wedi lleihau mynegiant cyfanswm protein FoxO3 mewn cyhyr diabetig26. Adroddwyd bod FoxO3a sy'n weithredol yn ei gyfansoddiad wedi ysgogi trawsgrifiad atrogin-1 aatroffi cyhyr, tra bod atal actifadu FoxO3a wedi'i rwystroatroffi cyhyrin vivo ac in vitro40. Gan gyfuno â'r canlyniadau, daethom i'r casgliad y gallai decoction JPYS leihau diraddiad protein cyhyr ysgerbydol yn effeithlon, o bosibl trwy atal ffactorau trawsgrifio FoxO3a.
Mae gallu ycyhyr ysgerbydolmae addasu i aflonyddiadau cellog yn ddibynnol iawn ar fiogenesis mitocondriaidd. Yn ddiweddar, dangoswyd bod maint y mitocondriaidd cyhyr yn lleihau gyda CKD41, 42, a oedd yn gyson â'n canlyniadau, ac roedd y gostyngiad yn cael ei atal gan JPYS decoction. Mae prif gamau'r broses biogenesis mitocondriaidd yn cynnwys digwyddiadau signalau sy'n arwain at reoleiddio trawsgrifiadol o enynnau niwclear, megis NRF1, wedi'i gyfryngu'n bennaf gan PGC-1 43. Dangosodd ein canlyniadau ei bod yn ymddangos bod proteinau biogenesis mitocondriaidd wedi'u rheoleiddio'n is mewn cyhyr CKD fel y nodir gan y cynnwys PGC is a'i gynnwys NRF proteinau targed, a gafodd ei atal gan ddecoction JPYS. Mae gorfynegiant PGC-1 mewn cyhyr ysgerbydol yn cynyddu cynnwys mitocondriaidd a chynhwysedd ocsideiddiol trwy fodiwleiddio grŵp mawr o enynnau sy'n ymwneud â metaboledd44, 45. Ar ben hynny, mae lefelau PGC-1a yn tueddu i gael eu lleihau mewn cyflyrau sy'n gwastraffu cyhyrau46 , 47 a gorfynegiant cyhyrau-benodol o PGC-1a wedi cael ei ddangos i wanhau'r golled hon o gyhyr48. Gyda'i gilydd, roedd ein data'n awgrymu ei bod yn bosibl bod decoction JPYS yn hyrwyddo mynegiant PGC-1 /NRF1 a biogenesis mitocondriaidd dilynol mewn cyhyr CKD.
Mae awtoffagi/mitoffagi yn fecanwaith homeostatig sydd wedi'i gadw'n helaeth ac a ddefnyddir ar gyfer diraddio ac ailgylchu, trwy beiriannau lysosomaidd cytoplasm swmp, proteinau hirhoedlog, mitocondria, ac organynnau49. Mae detholusrwydd mitoffagi yn cael ei reoli gan y proteinau PINK1, Parkin, a BNIP3L. Mae ffosfforyladau PINK1 yn ubiquitin yn Ser65 o broteinau pilen allanol mitocondriaidd (OMM) a pharth tebyg i ubiquitin Parkin. Unwaith y bydd wedi'i ffosfforyleiddio, mae Parkin yn gwella'r signal mitophagi trwy gynhyrchu mwy o gadwyni ubiquitin ar broteinau OMM a all fod yn swbstradau pellach ar gyfer PINK1. Mae BNIP3L wedi'i sefydlogi ar yr OMM, yn rhyngweithio â LC3II wedi'i brosesu, a all hyrwyddo atafaelu mitocondria o fewn yr awtophagosome ar gyfer diraddio9. Yn ein hastudiaeth, dangosodd y canlyniadau fod y marcwyr awtoffagic LC3II a p62, a marcwyr mito-phagic PINK1 a Parkin wedi cynyddu'n sylweddol mewn cyhyr CKD, a chafodd hyn ei arafu gan ddecoction JPYS. Mae astudiaethau diweddar wedi dangos bod awtophagi, gan gynnwys mitophagi, yn aml yn cael ei ysgogi mewn modelau lluosog oatroffi cyhyr, megis dadnerfu a CKD37, 50. Gyda'i gilydd, roedd ein canlyniadau'n awgrymu bod decoction JPYS wedi gwellaatroffi cyhyrtrwy atal y llwybrau awtophagi a mitoffagi.
Dywedir bod mitocondria yn organynnau deinamig iawn sy'n symud yn gyson trwy ymholltiad ac ymasiad51. Credir bod ymasiad mitocondriaidd yn caniatáu cyfnewid eu cynnwys gan gynnwys y DNA mitocondriaidd (mtDNA) a phroteinau, a thrwy hynny gynnal ansawdd mitocondriaidd a chywirdeb mtDNA, credir bod ymasiad mitocondriaidd yn atal cronni cydrannau difrodi a diffygiol trwy ailddosbarthu eu cynnwys gan gynnwys y DNA mitocondriaidd. (mtDNA), lipidau, metabolion, a phroteinau, tra bod ymholltiad mitocondriaidd yn caniatáu i mitocondria wahanu mitocondria sydd wedi'i niweidio'n ddifrifol ac yn gamweithredol gan feitoffagi52. Yn yr astudiaeth bresennol, gwnaethom ddangos bod y protein ymasiad Mfn-2 ac OPA-1 wedi'u rheoli'n is-reoledig mewn cyhyr CKD, a chafodd y newid hwn ei atal gan JPYS decoction. Mae Mfn2 ac OPA-1 yn chwarae rhan bwysig wrth gynnal cyfanrwydd mtDNA, a gallai eu his-reoleiddio achosi ymholltiad mitocondriaidd yn ogystal â darnio mitocondriaidd a mitophagi53. Yn unol â rôl mewn ymasiad mitocondriaidd, mae ymholltiad wedi'i gysylltu â
cael gwared ar mitocondria sydd wedi'i ddifrodi'n ddifrifol trwy ysgogi mitoffagi. Mewn gwirionedd, dangosodd ein canlyniadau fod mynegiant Fis-1 a Drop-1 yn cynyddu cyhyr CKD a chafodd hyn ei atal gan JPYS decoction, a oedd yn gyson â'n canlyniadau50, 54. Felly, mae canlyniadau'r astudiaeth bresennol yn dangos bod decoction JPYS yn modiwleiddio deinameg mitocondriaidd ymasiad ac ymholltiad trwy gynyddu mynegiant Mfn2 ac OPA-1, yn y cyfamser yn lleihau mynegiant Fis-1 a Drop-1.
I gloi, mae'r astudiaeth bresennol yn dangos bod triniaeth decoction JPYS yr wythnos 6- wedi cadw pwysau'r corff, atal colli màs cyhyr a lleihau maint ffibr cyhyrau, a diraddio protein cyhyrau, ynghyd ag ataliad FoxO3a ac UPS mewn llygod mawr CKD. At hynny, gwnaeth decoction JPYS wanhau'r aflonyddwch a achoswyd gan CKD ar brosesau QMC, trwy gynyddu biogenesis mitocondriaidd, adfer y cydbwysedd rhwng ymholltiad ac ymasiad, ac atal y llwybr awtoffagy-lysosome (mitoffagi). Mae'r canfyddiad hwn yn awgrymu strategaeth addawol y gallai gwella'r broses o ddadreoleiddio prosesau MQC ei hatal a'i thrinatroffi cyhyryn CKD.
acteosid mewncistanchecael effeithiau da araren
Defnyddiau a Dulliau
Cyfansoddiad decoction JPYS.
Deunyddiau planhigion: Astragali Radix (Lot. 150,621; gwreiddiau Astragalus membranaceus (Fisch.) Bge. var. Mongolaidd (Bge.) Hsiao), Atractylodis Macrocephalae Rhizoma (Lot. 141230; rhisomau Atractylodes macrocephalacoretez), Diocephalacoretez. 150615; rhisomau Dioscorea gyferbyn â Tunb.), Cistanches Herba (Lot. 150621; perlysiau oCistanche deserticolaYC Ma), Amomi Fructus Rotundus (Lot. 150617; ffrwythau Amomum kravanh Pierre ex Gagnep.), Salviae Miltiorrhizae Radix et Rhizoma (Lot. 150,626; gwreiddiau a rhisomau Salvia miltiorrhiza Bge.), Rheioma et Rhizoma 1504 (Lot. et Rhizoma). ; gwreiddiau a rhisomau Rheum palmatum L.), a Glycyrrhizae Radix et Rhizoma Praeparata cum Melle (Lot. 150615; gwreiddiau a rhisomau Glycyrrhiza uralensis Fisch.) oddi wrth Shenzhen Huahui Pharmaceutical Co., Ltd (Shenzhen, China). Dilyswyd deunyddiau planhigion Te gan Dr Jianping Chen yn seiliedig ar eu nodweddion morffolegol. Cadwyd y sbesimenau taleb yn yr Adran Fferyllol, Ysbyty Meddygaeth Tsieineaidd Traddodiadol Shenzhen gyda rhifau 2010015Z, 2010024ZZ, 2010037Z, 2040056Z, 202086Z, 2010006Z, 2010040Z, 2Z010, yn y drefn honno a 2Z010Z Dilyswyd sicrwydd rheoli ansawdd ar gyfer yr holl ddeunyddiau yn ôl y Pharmacopeia Tsieineaidd (Pwyllgor Pharmacopoeia Tsieina, 2015). Astragali Radix (30 g), Atractylodis Macrocephalae Rhizoma (10 g), Dioscoreae Rhizoma (30 g),Cistanches Herba(10 g), Amomi Fructus Rotundus (10 g), Salviae Miltiorrhizae Radix et Rhizoma (15 g), Rhei Radix et Rhizoma (10 g), a Glycyrrhizae Radix et Rhizoma Praeparata cum Melle (6 g) eu pwyso a'u tynnu mewn berwi dŵr (1.2 L) ddwywaith am 1 h. Ar ôl centrifugio, sychwyd y supernatant o dan bwysau llai i bowdr, ac fe'i storiwyd ar −80 gradd. Cyn y driniaeth, cafodd y powdr ei ail-hydoddi â dŵr Milli-Q a'i fortecs ar dymheredd yr ystafell i gael echdyniad JPYS.
Cyn trin echdyniad ar anifeiliaid, roedd echdyniad JPYS wedi'i safoni'n gemegol. Datblygwyd olion bysedd HPLC ar 260nm ar gyfer dyfyniad JPYSF (Ffig. 8): Defnyddiwyd safon gyfeirio unigol i gadarnhau y dylid nodi nifer o gydrannau cemegol o'r dyfyniad trwy ddadansoddiad HPLC, megis sodiwm danshensu,echinacoside, acteosid, calycosin 7-Ob-glucoside, asid salvianolic B, formononetin a rhein. Eithr, y gofyniad lleiaf ar gyfer y symiau oechinacoside, asid salvianolic B, a rhein ni ddylai fod yn llai na 1.2mg/g, 5.7mg/g, a 0.2mg/g o'r dyfyniad sych. Roedd cynnyrch yr echdynnu yn llai na 32.59 ±1.1 y cant (w/w, Cymedr ±SD, n=3). Cyrhaeddodd y dyfyniad a ddefnyddir yma y gofynion a nodwyd.
Cistancheyn gallu lleddfuclefyd yr arennau
Anifeiliaid arbrofol.
Roedd y protocolau arbrofol a bwydo yn unol â chanllawiau Iechyd Gwladol ac fe'u cymeradwywyd gan Brifysgol GuangzhouMeddygaeth TsieineaiddPwyllgor Sefydliadol Gofal a Defnydd Anifeiliaid. Prynwyd llygod mawr Sprague-Dawley gwrywaidd o Ganolfan Anifeiliaid Labordy Meddygol Guangdong (GDMLAC, Tsieina), Rhif Caniatâd SCXK (YUE) 2013-0002 yn pwyso 190–220 g. Roedd yr anifeiliaid dan reolaeth tymheredd ystafell (20±1 gradd ) a gyda lleithder gyda chylchred golau-tywyll 12/12-awr, ac roedd yn rhaid iddynt gael mynediad at ddŵr a bwyd ad libitum. Cafodd CKD ei achosi gan neffrectomi dau gam 5/6 fel y disgrifiwyd yn flaenorol36. Yn gryno, roedd y llawdriniaeth arennol gyntaf yn cynnwys electro-ofalu yn yr aren chwith ac eithrio ardal 2-mm o amgylch yr hilum. Perfformiwyd ail lawdriniaeth arennol wythnos yn ddiweddarach trwy glymu'r hilum arennol ddwywaith gyda phwyth sidan a thorri'r aren dde yn llawfeddygol. Roedd llawdriniaeth ffug yn cynnwys anesthetig, toriad ffancyn yn amlygu'r aren, a chau wal yr abdomen.
Rhoi cyffuriau.
Ar 16 wythnos ar ôl y llawdriniaeth, roedd lefelau Scr yn y grŵp nephrectomi 5/6 yn sylweddol uwch na rhai'r grŵp ffug (p).<0.05). ten,="" the="" 5/6="" nephrectomy="" group="" was="" randomly="" divided="" into="" two="" groups:="" ckd="" group="" (5/6="" nx,="" n="10):" ckd="" rats="" were="" treated="" with="" distilled="" water="" and="" jpys="" group="" (5/6="" nx+jpys="" decoction,="" n="10):" ckd="" rats="" that="" were="" orally="" administrated="" a="" dose="" of="" 10.89="" mg/kg="" of="" jpys="" decoction="" daily.="" the="" sham-operated="" rats="" were="" also="" treated="" with="" distilled="" water.="" te="" drugs="" were="" administered="" for="" 6="" weeks.="" all="" rats="" used="" in="" this="" study="" received="" humane="">
Paramedrau biocemegol.
Ar ôl 6 wythnos o driniaeth, aberthwyd y llygod mawr â sodiwm pentobarbital a chasglwyd samplau gwaed ar unwaith. Darganfuwyd mynegeion biocemegol serwm Scr, BUN, ac ALB gan ddefnyddio dadansoddwr biocemegol awtomatig Roche.
Astudiaethau morffolegol (AU, staenio SDH). Cafodd adrannau cyhyr parlysu traws (6 mm) eu staenio â hematoxylin ac eosin (AU) yn unol â safonau. Yna mesurwyd arwynebedd trawstoriad ffibr cyhyr (CSA) yn y ffordd yr adroddwyd yn flaenorol37. Mesurwyd arwynebedd trawsdoriadol ffibr ar gyfer tua 100 o ffibrau cyhyrau cyfagos ym mhob adran ar gyfer pob llygoden gan ddefnyddio meddalwedd Image J 1.32 j (NIH, Bethesda, MD, UDA).
Cafodd rhannau rhewedig y cyhyr TA eu staenio â succinate dehydrogenase (SDH, cymhleth II y gadwyn resbiradol) ar gyfer mesur gweithgaredd SDH a dosbarthu math o ffibr yn I (ocsidiad araf), IIa (glycolytig ocsidiol cyflym), neu IIb (cyflym glycolytig) yn unol â phrotocol a ddisgrifiwyd yn flaenorol41. Yn gryno, caniatawyd i adrannau gyrraedd tymheredd yr ystafell yn gyntaf a chawsant eu hailhydradu â PBS (pH 7.4). Adrannau oedd
yna ei ddeor mewn hydoddiant sy'n cynnwys nitroblue tetrazolium (1.5mM), sodiwm succinate (130mM), methosylffad ffenazine (0.2 mM), a Sodiwm azid (0.1 mM ) am 6{{30}} mun. Yna cafodd trawstoriadau eu golchi 3 gwaith mewn PBS, eu dadhydradu mewn 75 y cant (30 s), 90 y cant (30 s), a 100 y cant (10 munud) ethanol a'u gorchuddio â chymysgedd o 50 y cant (v/v) glyserin a 2.5 y cant (w/v) triethylen diamine mewn 0.01M PBS. Cafodd delweddau o gyhyr eu dal gan ddefnyddio microsgop (Nikon Eclipse Ti-SR, Japan) a chawsant eu digideiddio fel delweddau lefel llwyd ar feddalwedd delweddu NIS-Elements gyda chymorth cyfrifiadur Fersiwn 4.10 (Eclipse Ti-SR, Nikon Corporation, Tokyo, Japan) . Roedd gwerth lefel llwyd o sero yn cyfateb i drosglwyddiad golau 100 y cant (y cant T), ac roedd hynny o 255 yn cyfateb i 0 y cant T. Pennwyd gwerth dwysedd optegol yr holl ffibrau cyhyrau yn seiliedig ar y delweddau lefel llwyd (Scion Delwedd, Scion, Frederick, MD) a'i ddosbarthu'n dri grŵp, I ( y cant T: 100-80 y cant ), IIa ( y cant T: 60-40 y cant ) a IIb ( y cant T: 20-0 y cant ).
Dadansoddiad uwch-strwythurol (Microsgopeg Trosglwyddo Electron, TEM).
Roedd gweithdrefnau manwl TEM ar gyfer cyhyrau fel yr adroddwyd yn flaenorol55. Yn gryno, gosodwyd darnau o gyhyr TA 1mm3 mewn cyfaint mewn 2.5 y cant o glutaraldehyde ac yna ôl-osodiad mewn asid osmig 1 y cant ar gyfer profion microsgopeg electron. Defnyddiwyd meddalwedd Image J i ddadansoddi delweddau a gasglwyd gan EM (JEM-1400, JEOL Ltd., Tokyo, Japan) o dan x12, 000 chwyddhad. Pennwyd cynnwys mitocondriaidd trwy feintioli nifer a maint (lleiafswm diamedr) pob mitocondrion fesul cae. Dadansoddwyd cyfanswm o 20 maes fesul cyflwr trwy fanteisio ar feddalwedd Image J56.
Synthesis protein a diraddio protein.
Mesurwyd synthesis protein a diraddiad protein mewn vitro gan ddefnyddio ymgorffori 14-C phenylalanine (Phe) a rhyddhau tyrosin fel y disgrifiwyd yn flaenorol57-59.
Mesur gweithgareddau proteasome.
Mesurwyd te chymotrypsin- a gweithgaredd tebyg i drypsin y proteasome 20 S yn in vitro yn y cyhyr gastrocnemius fel y disgrifiwyd gennym yn flaenorol36.
Blotio gorllewinol.
Roedd meinweoedd cyhyr quadriceps sydd wedi'u rhewi â snap wedi'u homogeneiddio mewn byffer lysis fel yr adroddwyd yn flaenorol36. Gwahanwyd proteinau cytosolig ar gel SDS-PAGE 10 y cant ac yna eu trosglwyddo i bilen PVDF (Labordai Bio-Rad, Hercules, CA, UD). Cafodd safleoedd rhwymo amhenodol y bilen eu rhwystro ar dymheredd yr ystafell am 1 h gyda 5 y cant o laeth powdr di-fraster mewn halwynog wedi'i glustogi gan Tris gyda tween (TBST) ac yna'n cael ei ddeor dros nos ar 4 gradd gyda gwrthgyrff cynradd. Ar ôl golchi gyda TBST, cafodd y pilenni eu deor â gwrthgyrff eilaidd am 1h ar dymheredd ystafell gydag ysgwyd. Ar ôl golchi, canfuwyd bandiau protein a'u dadansoddi gan ddefnyddio System Delweddu AS ChemiDoc™ (Labordai Bio-Rad, CA, UD). Mynegwyd canlyniadau fel y dwysedd optegol integredig o'i gymharu â GAPDH. p-AMPK (1:1000, #2535), p-FoxO3a (1:1000, #13129), SQSTM1/p62 (1:1000, #5114), Mitofusin-2 (1:1000, #9482) , FoxO3a (1:1000, #2497), DRP1 (1:1000, #8570), Cox IV (1:1000, #4844), BNIP3L/Nix (1:1000, #12396) Beclin-1( Daeth gwrthgorff 1:1000, #3495T) ac AMPK (1:1000, #5831) o Cell Signaling Technologies (Danvers, MA, UDA). Daeth gwrthgorff LC3 I/II (1:1000, ab58610), Parkin (1:1000, ab77924) a PINK1 (1:1000, ab23707) o Abcam (Caergrawnt, y DU). Daeth gwrthgorff ATP5B (1:1000, ARP{48185_T100) o Aviva Systems Biology (San Diego, CA, UDA). Daeth gwrthgorff MuRF1 (1: 1000, GTX110475) o Gene Tex (San Antonio, TX, UD). Daeth gwrthgyrff Fis1 (1:100, sc-98900) a NRF-1 (1:100, sc-33771) o Santa Cruz Biotechnology (CA, UDA). Roedd OPA1 (1:1000, 612606) yn dod o BD Biosciences (San Jose, CA, UDA). Daeth Atrogin-1 (1:1000, AP2041) o ECM Biosciences (Versailles, KY, U.S.). Daeth PGC-1 (1:2000, NBP1-04676) o Novus Biological (Colorado, UDA). Roedd GAPDH (1:1000, 60004-1-Ig) o Proteintech (Chicago, IL, U.S.).
Ystadegol dadansoddi.
Dadansoddwyd data gyda SPSS 16.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, UDA). Dangosir canlyniadau fel cymedr ± SD. Dadansoddwyd data a ddosbarthwyd fel arfer gan ANOVA un ffordd ac yna'r prawf gwahaniaeth lleiaf arwyddocaol (LSD), tra bod data heb ddosbarthiad arferol yn cael eu dadansoddi gan ddefnyddio'r prawf Gemau-Howell. Ystyriwyd bod gwahaniaethau yn ystadegol arwyddocaol ar gyfer P <>
Cistancheyn gallu gwellaswyddogaeth yr arennau
Refercyces
1. Chen, DQet al. Mae mynegiadau genynnau a phrotein a metabolomeg yn arddangos signalau rhydocs actifedig a llwybr wnt/ -catenin yn gysylltiedig â chamweithrediad metabolyn mewn cleifion â chlefyd cronig yn yr arennau.Regwneudx Biol.12, 505–521, doi:10.1016/j. redox.2017.03.017 (2017).
2. Chen, L.et al. Rôl actifadu echelin RAS/Wnt/beta-catenin yn pathogenesis anaf podocyt a neffropathi tubulointerstitial.Chem Biol Interact273, 56–72, doi:10.1016/j.cbi.2017.05.025 (2017).
3. Zhao, YYet al. Ymchwiliad metabolomig mewnol yr arennau i glefyd cronig yn yr arennau a'i fecanwaith TGF-beta1 mewn llygod mawr adenin anwythol gan ddefnyddio UPLC Q-TOF/HSMS/MS(E).J. Proteome Res. 12, 2692–2703 (2013).
4. Chen, H.et al. Mewnwelediadau metabolomeg i signalau rhydocs actifedig a chamweithrediad metaboledd lipid wrth ddatblygu clefyd cronig yn yr arennau.Redox Biol. 10, 168–178 (2016).
5. Chen, DQet al. Y cysylltiad rhwng ffenoteip a metaboledd asid brasterog mewn clefyd cronig datblygedig yn yr arennau.Nephrol. Dial. Transplant. doi:10.1093/ndt/gfw415 (2017).
6. Zhao, YY, Liu, J., XL, C., Bai, X. & Lin, RC Astudiaeth fetabonomeg wrinol ar newidiadau biocemegol mewn model arbrofol o fethiant arennol cronig gan adenin yn seiliedig ar UPLC Q-TOF/MS.Clin. Chim. Acta 413, 642–649 (2012).
7. Kovesdy, CP a Kalantar-Zadeh, K. Pam mae gwastraffu protein-ynni yn gysylltiedig â marwolaethau mewn clefyd cronig yn yr arennau?Seminars in nairology29, 3–14, doi:10.1016/j.semnephrol.2008.10.002 (2009).
8. Wang, XH & Mitch, WE Mecanweithiau o wastraffu cyhyrau mewn clefyd cronig yn yr arennau.Nature reviews. Nephrology10, 504–516, doi:10.1038/nrneph.2014.112 (2014).
9. Romanello, V. & Sandri, M. Rheoli Ansawdd Mitochondrial a Chynnal Màs Cyhyrau.Frymlaentiers in physiology6, 422, doi:10.3389/fphys.2015.00422 (2015).
10. Tian, T., Chen, H. & Zhao, YY Defnyddiau traddodiadol, ffytocemeg, ffarmacoleg, gwenwyneg a rheoli ansawdd Alisma Orientale (Sam.) Julep: adolygiad.J Ethnopharmacol158, 373–387, doi:10.1016/j.jep.2014.10.061 (2014).
11. Zhong, Y., Menon, MC, Deng, Y., Chen, Y. & He, JC Datblygiadau diweddar mewn meddygaeth Tsieineaidd traddodiadol ar gyfer clefyd yr arennau.Am. J. Kidney Dis.66, 513–522, doi:10.1053/j.ajkd.2015.04.013 (2015).
12. Zhao, YY Defnyddiau traddodiadol, ffytocemeg, ffarmacoleg, ffarmacocineteg a rheoli ansawdd Polyporus umbellatus (Pers.) Fries: adolygiad.J Ethnopharmacol 149, 35–48 (2013).
13. Wang, M.et al. Mae Metabolomeg yn amlygu bioactifedd ffarmacolegol a mecanwaith biocemegol meddygaeth draddodiadol Tsieineaidd.Chem Biol Interact. 273, 133–141, doi:10.1016/j.cbi.2017.06.011 (2017).
14. Zhao, YYet al. Astudiaeth ffarmaco-fetabonomig ar glefyd cronig yn yr arennau ac effaith therapiwtig ergone gan UPLC-QTOF/HDMS.PLoS One23, e115467, doi:D - NLM: PMC4275224 EDAT- 2014/12/24 06:00 MHDA- 2016/03/02 06:{{11} } CRDT- 2014/12/24 06:00 PHST- 2014/06/24 [derbyniwyd] PHST- 2014/11/23 [derbyniwyd] AID {{ 22}}.1371/journal.pone.0115467 [doi] AID - PONE-D-14-23166 [pii] PST - e-bost (2014).
15. B Ronaldo, P. & Sandri, M. Mecanweithiau cellog a moleciwlaidd oatroffi cyhyr. Disease mawdlls & mechanisms6, 25–39, doi:10.1242/dmm.010389 (2013).
16. Bodine, SCet al. Mae angen adnabod ligasau ubiquitin ar gyfer ysgerbydolatroffi cyhyr. Scicyce294, 1704–1708, doi:10.1126/ gwyddoniaeth.1065874 (2001).
17. Gomes, MD, Lecker, SH, Jagoe, RT, Navon, A. & Goldberg, AL Atrogin-1, protein blwch-F cyhyr-benodol a fynegir yn uchel yn ystodatroffi cyhyr. Trafodion o yr Cenedlaethol Academi o Gwyddorau o yr Unedig Gwladwriaethau o America 98, 14440–14445, doi:10.1073/ padelli.251541198 (2001).
18. Youle, RJ a Narendra, DP Mecanweithiau mitophagi.Nature reviews. Molecular cell biology12, 9–14, doi:10.1038/nrm3028 (2011).
19. Sanchez, AC, Candau, RB a Bernardi, H. Ffactorau trawsgrifio FoxO: eu rolau wrth gynnal homeostasis cyhyrau ysgerbydol.Cellular a molecular life sgiamges: CMLS71, 1657–1671, doi:10.1007/s00018-013-1513-z (2014).
20. Barbieri, E.et al. Effaith pleiotropig ymarfer corff ar ddeinameg mitocondriaidd mewn cyhyrau ysgerbydol sy'n heneiddio.Oxidative mgolicine a cellog lhirhoedledd2015, 917085, doi:10.1155/2015/917085 (2015).
21. Cannavino, J., Brocca, L., Sandri, M., Bottinelli, R. & Pellegrino, MA PGC1-mae gorfynegiant alffa yn atal newidiadau metabolaidd a solewsatroffi cyhyrmewn llygod ôl heb eu llwytho.Mae'r Jochrnal of ffysiology592, 4575–4589, doi:10.1113/Physiol.2014.275545
22. Lira, VAet al. Mae ocsid nitrig ac AMPK yn rheoleiddio PGC-1 ar y cyd mewn celloedd cyhyrau ysgerbydol.Mae'r Jochrnal of physiology588, 3551–3566, doi:10.1113/Physiol.2010.194035 (2010).
23. Zhuang, p.et al. Gwrthdroicyhyratroffigan Zhimu a Huangbai pâr perlysiau trwy actifadu IGF-1/Akt a signal awtophagi mewn cachecsia canser.Supportive care in cancer: official jochrnal of tef Multinatiarl Associatiymlaen of Supportive Care in Gallcer24, 1189–1198, doi:10.1007/s00520-015-2892-5 (2016).
24. Dong, Y.et al. Mae gronynnau Bufei Jianpi yn gwella cyhyrau ysgerbydol a chamweithrediad mitocondriaidd mewn llygod mawr â chlefyd rhwystrol cronig yr ysgyfaint.BMC complemcytary a alternative medicine15, 51, doi:10.1186/s12906-015-0559-x (2015).
25. Kishida, Y.et al. Mae Go-shajinki-Gan (GJG), meddyginiaeth lysieuol draddodiadol o Japan, yn amddiffyn rhag sarcopenia mewn llygod sy'n cyflymu â heneiddedd.Phytomedicine: internatiarl jochrnal of phytotherapy a phytopharmacology22, 16–22, doi: 10.1016/j. rhymed.2014.11.005 (2015).
26. Zhang, J.et al. Gwrthdroicyhyratroffigan Zhimu-Huangbai perlysiau-pâr trwy lwybr signal Akt/mTOR/FoxO3 mewn llygod diabetig a achosir gan streptozotocin.PloS ymlaene9, e100918, doi:10.1371/journal.pone.0100918 (2014).
27. Zhang, ZHet al. Mae lipidomeg a metabolomeg integredig yn datgelu effaith nephroprotective a mecanwaith biocemegol Rheum Officinale mewn methiant arennol cronig.Sci. Rep.6, 22151, doi:10.1038/srep22151 (2016).
28. Zhao, YYet al. Mae ergosta-4,6,8(14),22-tir-3-un sydd wedi'i ynysu oddi wrth Polyporus umbellatus yn atal anafiadau cynnar i'r arennau mewn llygod mawr neffropathi a achosir gan asid aristolochig.J Pharm Pharmacol63, 1581–1586, doi:10.1111/j.2042-7158.2011.01361.x (2011).
29. Zhao, YYet al. Mae astudiaeth fetabonomig sy'n seiliedig ar gromatograffeg hylifol uwch-berfformiad o effaith therapiwtig haen arwyneb Poria cocos ar glefyd cronig yn yr arennau a achosir gan adenin yn rhoi cipolwg newydd ar fecanwaith gwrth-ffibrosis.PLoS One8 , e59617, doi:10.1371/journal.pone.0059617 (2013).
30. Zhao, YYet al. Effaith Agosta-4,6,8(14),22-tetra-3-un (un) ar lygoden fawr methiant arennol cronig a achosir gan adenin: astudiaeth fetabonomig serwm yn seiliedig ar hylif uwch-berfformiad cromatograffaeth/sbectrometreg màs sensitifrwydd uchel ynghyd ag algorithm i-FIT MassLynx.Clin. Chim. Acta413, 1438–1445, doi:10.1016/j.cca.2012.06.005 (2012).
31. Zhao, YYet al. Astudiaeth metabonomeg wrinol ar effeithiau amddiffynnol Agosta-4,6,8(14),22-tetra{5}}un ar fethiant arennol cronig mewn llygod mawr gan ddefnyddio UPLC Q-TOF/MS a nofel Techneg casglu data MSE.Process Biochem47, 1980–1987, doi:10.1016/j. procbio.2012.07.008 (2012).
32. Zhang, ZHet al. Mewnwelediadau metabolomeg i glefyd cronig yn yr arennau ac effaith fodiwlaidd riwbob yn erbyn ffibrosis tubulointerstitial.Sci. Rep., 14472, doi:10.1038/srep14472 (2015).
33. Zhao, YY, P., L., Q., CD, L., FY & Bai, X. Proffilio metabolaidd arennol o anaf arennol cynnar ac effeithiau ad-amddiffynnol epidermis Poria cocos gan ddefnyddio UPLC Q-TOF/HSMS/MSE.J Pharm Biomgol Anal81–82, 202–209, doi:10.1016/j.jpba.2013.03.028 (2013).
34. Singla, R., Gupta, Y. & Kalra, S. Effeithiau cyhyrysgerbydol diabetes mellitus.JPMA. Mae'r Jochrnal of tef Pakistan Mgolical Associatiymlaen 65, 1024–1027 (2015).
35. Stitt, TNet al. Mae llwybr IGF-1/PI3K/Akt yn atal mynegiant ocyhyratroffiligasau ubiquitin a achosir gan atal ffactorau trawsgrifio FOXO.Molecular cell 14, 395–403 (2004).
36. Wang, DTet al. Mae ychwanegu cetoasidau yn cyfrannu at uwch-reoleiddio llwybr Wnt7a/Akt/p70S6K ac is-reoleiddio systemau apoptotig ac ubiquitin-proteasome yng nghyhyr llygod mawr nephrectomized 5/6.Mae'r British jochrnal of nutritiymlaen111, 1536–1548, doi:10.1017/S0007114513004091 (2014).
37. Wang, DT, Yang, YJ, Huang, RH, Zhang, ZH & Lin, X. Mae Myostatin yn Ysgogi'r Systemau Ubiquitin-Proteasome ac Autophagy- Lysosome sy'n Cyfrannu at Wastraff Cyhyrau mewn Clefyd Cronig yr Arennau.Oxidative medicine a cellular longevity2015, 684965, doi:10.1155/2015/684965 (2015).
38. Tawa, NE Jr., Odessey, R. & Goldberg, AL Mae atalyddion y proteasome yn lleihau'r proteolysis cyflymach wrth atroffi cyhyrau ysgerbydol llygod mawr.Te Jochrnal of clinical investigatiymlaen100, 197–203, doi:10.1172/JCI119513 (1997).
39. Calnan, DR & Brunet, A. Te FoxO cod.Oncogene27, 2276–2288, doi:10.1038/onc.2008.21 (2008).
40. Sandri, M.A.et al. Mae ffactorau trawsgrifio Foxo yn achosi'r atrogin ubiquitin ligase sy'n gysylltiedig ag atrogin-1 ac yn achosi ysgerbydolcyhyratroffi. Cell 117, 399–412 (2004).
41. Tamaki, M.et al. Mae clefyd cronig yn yr arennau yn lleihau mitocondria cyhyrau a dygnwch ymarfer corff a'i waethygu gan brotein dietegol trwy anactifadu pyruvate dehydrogenase.Kidney internatiarl85, 1330–1339, doi:10.1038/ki.2013.473 (2014).
42. Yokoi, H. & Yanagita, M. Lleihad yng nghyfaint y cyhyrau mewn clefyd cronig yn yr arennau: rôl mitocondria mewn cyhyr ysgerbydol.Kidney internatiarl85, 1258–1260, doi:10.1038/ki.2013.539 (2014).
43. Hood, DA Adolygiad a Wahoddwyd: biogenesis mitocondriaidd a achosir gan weithgaredd contractile mewn cyhyr ysgerbydol.Jochrnal of apligol ffysiology 90, 1137–1157 (2001).
44. Lin, J.et al. Mae cyd-ysgogydd trawsgrifio PGC-1 alffa yn gyrru ffurfio ffibrau cyhyr plycio araf.Nature418, 797–801, doi:10.1038/natur00904 (2002).
45. Wu, Z.et al. Mecanweithiau sy'n rheoli biogenesis mitocondriaidd a resbiradaeth trwy'r coactivator thermogenic PGC{0}}.Cell98, 115–124, doi:10.1016/S0092-8674(00)80611-X (1999).
46. Adhihetty, PJ, O'Leary, MF, Chabi, B., Wicks, KL & Hood, DA Effaith dinerfu ar apoptosis wedi'i gyfryngu'n mitocondriaidd mewn cyhyr ysgerbydol.Jochrnal of aplied physiology102, 1143–1151, doi:10.1152/J Appl Physiol.00768.2006 (2007).
47. Baker, DJ, Betik, AC, Krause, DJ a Hepple, RT Dim dirywiad mewn gallu ocsideiddio cyhyrau ysgerbydol gyda heneiddio mewn llygod mawr â chyfyngiadau calorig hirdymor: mae'r effeithiau'n annibynnol ar gyfanrwydd DNA mitocondriaidd.Mae'r jochrnals of gerymlaentology. Series A, Biological gwyddorau a meddygol gwyddorau 61, 675–684 (2006).
48. Zechner, C.et al. Mae diffyg cyfanswm y cyhyrau ysgerbydol PGC-1 yn datgysylltu gwahaniaethau mitocondriaidd o benderfyniad math o ffibr a sensitifrwydd inswlin.Cell metabolism12, 633–642, doi:10.1016/j.cmet.2010.11.008 (2010).
49. Mizushima, N. & Komatsu, M. Autophagy: adnewyddu celloedd a meinweoedd.Cell147, 728–741, doi:10.1016/j.cell.2011.10.026 (2011).
50. Kang, C., Yeo, D. & Ji, LL Mae ansymudiad cyhyrau yn actifadu mitophagi ac yn tarfu ar ddeinameg mitocondriaidd mewn llygod.Actaffisioleg 218, 188–197, doi:10.1111/apha.12690 (2016).
51. Chan, DC Ymasiad mitocondriaidd ac ymholltiad mewn mamaliaid.Annual review of cell a developmental biology22, 79–99, doi:10.1146/ blynyddol.cell bio.22.010305.104638 (2006).
52. Benard, G. & Karbowski, M. Cyfuniad a rhaniad mitocondriaidd: Rheoleiddio a rôl mewn hyfywedd celloedd.Seminars in cell & dnoswyllopmental biology 20, 365–374 (2009).
53. Zhao, J.et al. Mae FoxO3 yn actifadu diraddiad protein yn gydlynol gan y llwybrau awtoffagig/lysosomaidd a phroteasomal wrth atroffio celloedd cyhyrau.Cell metabolism6, 472–483, doi:10.1016/j.cmet.2007.11.004 (2007).
54. Romanello, V.et al. Mae ymholltiad mitocondriaidd ac ailfodelu yn cyfrannu atcyhyratroffi. Te EMBO jochrnal29, 1774–1785, doi:10.1038/emboj.2010.60 (2010).
55. Haul, H.et al. Mae Astragaloside IV yn lleddfu anaf arennol mewn llygod db/db.Gwyddonol reports6, 32545, doi:10.1038/srep32545 (2016).
56. Barreto, R.et al. Mae cachecsia sy'n gysylltiedig â chemotherapi yn gysylltiedig â disbyddiad mitocondriaidd ac actifadu ERK1/2 a t38 MAPKs.Oncotarget7, 43442–43460, doi:10.18632/oncotarget.9779 (2016)
57. Fe wnaeth Voltarelli, FA a de Mello, MA Spirulina wella'r protein cyhyrau ysgerbydol mewn llygod mawr sy'n tyfu.Euragored jochrnal of nutritiymlaen47, 393–400, doi:10.1007/s00394-008-0740-9 (2008).
58. Rannels, DE, Kao, R. & Morgan, AU Effaith inswlin ar drosiant protein yng nghyhyr y galon.Te Jochrnal of biological chemistry 250, 1694–1701 (1975).
59. Waalkes, TP & Udenfriend, S. Dull fflworometrig ar gyfer amcangyfrif tyrosin mewn plasma a meinweoedd.Te Jochrnal of laboratory a clinical mgolicine 50, 733–736 (1957).