Rhan 2|Mae Glycogen Synthase Kinase 3b Gorfywiogrwydd mewn Celloedd Diglifoledig wrinol yn Rhagweld Dilyniant Clefyd Diabetig yr Arennau

Cliciwch yma i ran 1

Am fwy o wybodaeth cysylltwch â:emily.li@wecistanche.com

TRAFODAETH

Yn yr Unol Daleithiau a gwledydd eraill y Gorllewin, mae DKD yn parhau i fod yn brif etioleg blaengarclefyd cronig yn yr arennauac yn gosod baich trwm ar y systemau trysorlys a gofal iechyd heb unrhyw driniaeth ddiffiniol ar gael eto.5 Cydnabuwyd ers tro na fydd pob claf â diabetes yn symud ymlaen i ddatblygu DN.5 Gan ddibynnu ar y garfan a astudiwyd, amcangyfrifwyd bod DN yn effeithio w30 y cant i 50 y cant o gleifion diabetig. Mae'r mesurau a fabwysiadwyd gan arfer clinigol presennol i nodi cleifion diabetig sydd mewn perygl o ddatblygu DKD wedi'u cyfyngu'n bennaf i archwiliadau llygaid ar gyfer retinopathi ac wrinalysis ar gyfer albwminwria.5 Fodd bynnag, mae tystiolaeth epidemiolegol sy'n cydgyfeirio'n awgrymu bod micro-fasgwlopathi allanol neu albwminwria yn sylweddol anghyson â'r dilyniant dilynol o DKD.12,13,26,27 O'r herwydd, mae angen dybryd i ddatblygu biofarciwr newydd ar gyfer haeniad manwl gywir o gleifion diabetig sydd mewn perygl o gael DN. Mae'r astudiaeth bresennol, am y tro cyntaf, yn adrodd bod GSK3b yn orfywiog ac yn orfywiog mewn parenchymalarencelloedd mewn DN arbrofol a chlinigol, sy'n gysylltiedig âdilyniant clefyd yr arennau. At hynny, mae'n debygol y bydd gorfywiogrwydd GSK3b mewn celloedd wedi'u diblisgo wrinol yn gallu rhagweld dilyniant DN.

Mae Cistanche tubulosa yn atal clefyd yr arennau, cliciwch yma i gael y sampl

Mae GSK3b, kinase serine / threonine-protein serine / threonine-sensitif hynod gadwedig, yn ymwneud yn ganolog â signalau inswlin yn ogystal â nifer o lwybrau signal cellog eraill sy'n hanfodol ar gyfer prosesau pathoffisiolegol sy'n gysylltiedig âarenanaf, atgyweirio, ac adfywio. Mewn meinweoedd sy'n sensitif i inswlin, fel yr afu a'r cyhyr ysgerbydol, mae GSK3b yn weithredol o dan amodau gwaelodol ac yn atal gweithgaredd glycogen synthase.19,28 Mae inswlin yn anactifadu GSK3b yn gyflym trwy ffosfforyleiddiad ataliol yn serine 9, gan arwain at fiosynthesis glycogen. Mae corff cynyddol o dystiolaeth yn awgrymu bod dadreoleiddio GSK3b yn gysylltiedig â diabetes mellitus math 2.19,29–31 Yn wir, ceir data sy'n nodi gorfynegiant GSK3b a gorfywiogrwydd yng nghyhyrau cleifion diabetig31–33 ac ym meinweoedd adipose llygod diabetig gordew.34 Ar ben hynny , mae gorfynegiant trawsgenig o GSK3b mewn cyhyrau ysgerbydol llygod yn achosi goddefgarwch glwcos â nam, ymwrthedd inswlin, a hyperinsulinemia.29,35 I'r gwrthwyneb, dangosodd llygod â diffyg GSK3b mewn cyhyrau ysgerbydol goddefgarwch glwcos gwell.36 Yn gyson, mae atalyddion GSK3, megis lithiwm, yn gallu dynwared gweithredu inswlin mewn llinellau celloedd a meinweoedd.37 At hynny, mewn llygod diabetig gordew, gwellodd atalyddion GSK3 sensitifrwydd inswlin a homeostasis glwcos.38arenyn draddodiadol nid yw wedi cael ei ystyried fel organ darged gweithredu inswlin. Fodd bynnag, roedd tystiolaeth gymhellol yn ddiweddar yn awgrymu bod signalau inswlin i mewnarencelloedd, yn enwedig mewn podocytes, yn chwarae rhan allweddol wrth gynnal glomerwlaidd aarenhomeostasis.39–41 Mae signalau inswlin diffygiol mewn podocytau, oherwydd diffyg neu ymwrthedd inswlin, yn debygol o fod yn sbardun allweddol i lawer o'r briwiau patholegol a welir yn DN. At hynny, mae astudiaethau clinigol wedi dangos bod ymwrthedd i inswlin yn cyd-fynd â dyfodiad a difrifoldeb albwminwria hyd yn oed mewn cleifion normotensive nad oes ganddynt ddiabetes, sy'n awgrymu y gall ymwrthedd inswlin fel y cyfryw achosi albwminwria.42 Yn yr un modd, llygod ag ymwrthedd inswlin podocyt-benodol, a gyflawnir gan ergyd amodol o'r derbynnydd inswlin mewn podocytau glomerwlaidd, albwminwria datblygedig a briwiau glomerwlaidd sy'n ailddangos DN, er gwaethaf absenoldeb hyperglycemia neu ddiabetes.41 I'r gwrthwyneb, mewn anifeiliaid diabetig, mae sensiteiddwyr inswlin yn gallu arafu datblygiad DN yn annibynnol ar reolaeth glycemig.43 Mae'r canfyddiadau hyn yn awgrymu bod signalau inswlin yn rheoleiddio swyddogaeth podocyt yn annibynnol ar lefelau glwcos yn y gwaed. Fodd bynnag, fel trawsddygiadur allweddol y llwybr signalau inswlin, mae rôl GSK3b yn y pathogenesis a dilyniant DN wedi'i danseilio'n fawr.

Yn yarenMynegir , GSK3b yn bennaf mewn podocytes ac, i raddau llai, mewn celloedd mesangial ac endothelaidd yn y glomerwlws20,21 ac fe'i mynegir yn helaeth gan gelloedd tiwbaidd arennol. Mae data gan ein grwpiau ni a grwpiau eraill yn nodi bod GSK3b yn cyfryngu anaf ymreolaethol podocyte trwy integreiddio llwybrau signalau topathig podocyt lluosog.17,20,44,45 Gall anghysondeb, rhwystr genetig neu ffarmacolegol o GSK3b amddiffyn rhag anaf podocyte a gwanhau proteinwria mewn modelau anifeiliaid o glomerulopathïau anddiabetig amrywiol.21 Ar ben hynny, mewn blaengarcronigarenclefyd, canfuwyd bod GSK3b yn fodiwleiddiwr o anaf tiwbaidd arennol a interstitial. Fodd bynnag, mae p'un a yw GSK3b yn ymwneud â DN a sut y mae wedi bod yn ansicr ac yn ddadleuol iawn, er bod yr astudiaeth bresennol yn dangos bod actifadu GSK3b yn well yn yarenac mewn celloedd di-foli wrinol gall fod yn gysylltiedig â datblygiad neu ddilyniant DKD. Er enghraifft, mewn llygod mawr â diabetes a achosir gan streptozotocin, canfu Lin et al.46 fod atalydd cystadleuol adenosine triffosffad yn atal GSK3b (20 Z,30 E)-6- Bromo in indirubin-30 -oxime ( BIO) proteinwria gwanedig a briwiau glomerwlaidd gwell o DN yn absenoldeb cywiro hyperglycemia, sy'n awgrymu bod GSK3b yn chwarae rhan niweidiol yn DN. Hefyd, mewn llygod mawr â diabetes a achosir gan streptozotocin, gwnaeth Paeng et al.22 ganfyddiadau tebyg trwy ddefnyddio BIO a daeth i'r casgliad bod gweithgaredd GSK3b gwell o fewn podocytau o dan amodau diabetig yn gysylltiedig ag apoptosis podocyte a cholled mewn DN. Mae hyn yn gyson ag astudiaeth in vitro arall, lle canfuwyd bod GSK3b yn cyfryngu gwahaniaethiad ac anafiadau podocyte ar ôl dod i gysylltiad â chyfrwng glwcos uchel.47 I'r gwrthwyneb, honnodd Mariappan et al.48 fod actifadu GSK3b yn lle hynny yn lleddfu oherwydd diabetes.arenanaf. Yn eu hastudiaeth, cafodd llygod diabetig a achosir gan streptozotocin eu trin â sodiwm nitroprusside, rhoddwr ocsid nitrig sy'n gallu actifadu GSK3b. Canfuwyd bod albwminwria, hypertroffedd yr arennau, a chroniad matrics allgellog mewn glomeruli i gyd wedi'u lleddfu yn absenoldeb gwelliant mewn gorbwysedd neu hyperglycemia. Fodd bynnag, mae'r canfyddiadau hyn yn gwrth-ddweud yn llwyr y data o lygod wedi'u targedu â genynnau â GSK3 sy'n weithredol yn y cyfansoddiad a ddatblygodd albwminwria digymell ac anaf podocyte.49 Er mwyn cysoni'r canfyddiadau sy'n gwrthdaro, dylid bod yn ofalus wrth ddehongli'r data a gynhyrchir gan ddefnyddio atalyddion cemegol neu actifyddion. o GSK3b. Er y cadarnhawyd dro ar ôl tro bod BIO yn atalydd moleciwlaidd bach hynod ddetholus o GSK3b, nid yw sodiwm nitroprusside yn ysgogydd penodol o GSK3b ond gwyddys ei fod yn cael effaith hemodynamig cryf,50 sy'n debygol o ddrysu ei weithred lleihau albwminwria ac ad-amddiffynnol mewn llygod diabetig. Gyda’i gilydd, er gwaethaf rhywfaint o ddata sy’n gwrthdaro, mae’r dystiolaeth gyffredinol yn tueddu i gefnogi bod GSK3b yn debygol o fod yn gysylltiedig âarenanafa phroteinwria mewn DN. Mae angen crybwyll cwpl o gyfyngiadau'r astudiaeth bresennol. Yn gyntaf, roedd y data rhag-glinigol yn gyfyngedig i'r modelau murine DB/DB yn unig. I benderfynu cyffredinoli rôl GSK3b ynanaf diabetig i'r arennau, mae angen dilysu'r canfyddiadau mewn modelau eraill o DN, gan gynnwys modelau DN math 1. Yn ail, roedd yr arsylwadau clinigol yma yn deillio o garfanau ôl-weithredol o gleifion diabetig gyda maint sampl cyfyngedig ac amser dilynol cymharol fyr. Rhaid cyfaddef, mae angen astudiaethau aml-ganolfan ar raddfa fawr, arfaethedig, ar hap, i wirio ein harsylwadau ac i gadarnhau pŵer GSK3b mewn celloedd di-dor wrinol wrth ragweld canlyniad DKD.

Mae GSK3b, kinase serine / threonine-protein serine / threonine-sensitif hynod gadwedig, yn ymwneud yn ganolog â signalau inswlin yn ogystal â nifer o lwybrau signal cellog eraill sy'n hanfodol ar gyfer prosesau pathoffisiolegol sy'n gysylltiedig âarenanaf, atgyweirio, ac adfywio. Mewn meinweoedd sy'n sensitif i inswlin, fel yr afu a'r cyhyr ysgerbydol, mae GSK3b yn weithredol o dan amodau gwaelodol ac yn atal gweithgaredd glycogen synthase.19,28 Mae inswlin yn anactifadu GSK3b yn gyflym trwy ffosfforyleiddiad ataliol yn serine 9, gan arwain at fiosynthesis glycogen. Mae corff cynyddol o dystiolaeth yn awgrymu bod dadreoleiddio GSK3b yn gysylltiedig â diabetes mellitus math 2.19,29–31 Yn wir, ceir data sy'n nodi gorfynegiant GSK3b a gorfywiogrwydd yng nghyhyrau cleifion diabetig31–33 ac ym meinweoedd adipose llygod diabetig gordew.34 Ar ben hynny , mae gorfynegiant trawsgenig o GSK3b mewn cyhyrau ysgerbydol llygod yn achosi goddefgarwch glwcos â nam, ymwrthedd inswlin, a hyperinsulinemia.29,35 I'r gwrthwyneb, dangosodd llygod â diffyg GSK3b mewn cyhyrau ysgerbydol goddefgarwch glwcos gwell.36 Yn gyson, mae atalyddion GSK3, megis lithiwm, yn gallu dynwared inswlin

gweithredu mewn llinellau celloedd a meinweoedd.37 Ymhellach, mewn llygod diabetig gordew, roedd atalyddion GSK3 yn gwella sensitifrwydd inswlin a homeostasis glwcos.38 Yn draddodiadol nid yw'r aren wedi'i hystyried fel organ darged gweithredu inswlin. Fodd bynnag, awgrymodd tystiolaeth gymhellol yn ddiweddar fod signalau inswlin mewn celloedd arennau, yn enwedig mewn podocytau, yn chwarae rhan allweddol wrth gynnal homeostasis glomerwlaidd ac arennau.39–41 Mae signalau inswlin diffygiol mewn podocytau, oherwydd diffyg neu ymwrthedd inswlin, yn debygol o fod yn sbardun allweddol. ar gyfer llawer o'r briwiau patholegol a welwyd yn DN. At hynny, mae astudiaethau clinigol wedi dangos bod ymwrthedd i inswlin yn cyd-fynd â dyfodiad a difrifoldeb albwminwria hyd yn oed mewn cleifion normotensive nad oes ganddynt ddiabetes, sy'n awgrymu y gall ymwrthedd inswlin fel y cyfryw achosi albwminwria.42 Yn yr un modd, llygod ag ymwrthedd inswlin podocyt-benodol, a gyflawnir gan ergyd amodol o'r derbynnydd inswlin mewn podocytau glomerwlaidd, albwminwria datblygedig a briwiau glomerwlaidd sy'n ailddangos DN, er gwaethaf absenoldeb hyperglycemia neu ddiabetes.41 I'r gwrthwyneb, mewn anifeiliaid diabetig, mae sensiteiddwyr inswlin yn gallu arafu datblygiad DN yn annibynnol ar reolaeth glycemig.43 Mae'r canfyddiadau hyn yn awgrymu bod signalau inswlin yn rheoleiddio swyddogaeth podocyt yn annibynnol ar lefelau glwcos yn y gwaed. Fodd bynnag, fel trawsddygiadur allweddol y llwybr signalau inswlin, mae rôl GSK3b yn y pathogenesis a dilyniant DN wedi'i danseilio'n fawr.

Yn yr aren, mae GSK3b yn cael ei fynegi'n bennaf mewn podocytes ac, i raddau llai, mewn celloedd mesangial ac endothelaidd yn y glomerwlws20,21 ac wedi'i fynegi'n helaeth gan gelloedd tiwbaidd arennol. Mae data gan ein grwpiau ni a grwpiau eraill yn nodi bod GSK3b yn cyfryngu anaf ymreolaethol podocyte trwy integreiddio llwybrau signalau pathig podocyt lluosog.17,20,44,45 Gall anghysondeb, rhwystr genetig neu ffarmacolegol o GSK3b amddiffyn rhag anaf podocyte a gwanhau proteinwria mewn modelau anifeiliaid o glomerulopathies nondiabetig amrywiol.21 Ar ben hynny, mewn cronig cynyddolarenclefyd, canfuwyd bod GSK3b yn fodiwleiddiwr o anaf tiwbaidd arennol a interstitial. Fodd bynnag, mae p'un a yw GSK3b yn ymwneud â DN a sut y mae wedi bod yn ansicr ac yn ddadleuol iawn, er bod yr astudiaeth bresennol wedi dangos y gallai actifadu GSK3b gwell yn yr aren ac mewn celloedd wrinol wedi'u exfoliated fod yn gysylltiedig â datblygiad neu ddilyniant DKD. Er enghraifft, mewn llygod mawr â diabetes a achosir gan streptozotocin, canfu Lin et al.46 fod atalydd cystadleuol adenosine triffosffad yn atal GSK3b (20 Z,30 E)-6- Bromo in indirubin-30 -oxime ( BIO) proteinwria gwanedig a briwiau glomerwlaidd gwell o DN yn absenoldeb cywiro hyperglycemia, sy'n awgrymu bod GSK3b yn chwarae rhan niweidiol yn DN. Hefyd, mewn llygod mawr â diabetes a achosir gan streptozotocin, gwnaeth Paeng et al.22 ganfyddiadau tebyg trwy ddefnyddio BIO a daeth i'r casgliad bod gweithgaredd GSK3b gwell o fewn podocytau o dan amodau diabetig yn gysylltiedig ag apoptosis podocyte a cholled mewn DN. Mae hyn yn gyson ag astudiaeth in vitro arall, lle canfuwyd bod GSK3b yn cyfryngu gwahaniaethiad ac anafiadau podocyte ar ôl dod i gysylltiad â chyfrwng glwcos uchel.47 I'r gwrthwyneb, honnodd Mariappan et al.48 fod actifadu GSK3b yn lle hynny yn lleddfu oherwydd diabetes.arenanaf. Yn eu hastudiaeth, cafodd llygod diabetig a achosir gan streptozotocin eu trin â sodiwm nitroprusside, rhoddwr ocsid nitrig sy'n gallu actifadu GSK3b. Canfuwyd bod albwminwria, hypertroffedd yr arennau, a chroniad matrics allgellog mewn glomeruli i gyd wedi'u lleddfu yn absenoldeb gwelliant mewn gorbwysedd neu hyperglycemia. Fodd bynnag, mae'r canfyddiadau hyn yn gwrth-ddweud yn llwyr y data o lygod wedi'u targedu â genynnau â GSK3 sy'n weithredol yn y cyfansoddiad a ddatblygodd albwminwria digymell ac anaf podocyte.49 Er mwyn cysoni'r canfyddiadau sy'n gwrthdaro, dylid bod yn ofalus wrth ddehongli'r data a gynhyrchir gan ddefnyddio atalyddion cemegol neu actifyddion. o GSK3b. Er y cadarnhawyd dro ar ôl tro bod BIO yn atalydd moleciwlaidd bach hynod ddetholus o GSK3b, nid yw sodiwm nitroprusside yn ysgogydd penodol o GSK3b ond gwyddys ei fod yn cael effaith hemodynamig cryf,50 sy'n debygol o ddrysu ei weithred lleihau albwminwria ac ad-amddiffynnol mewn llygod diabetig. Gyda’i gilydd, er gwaethaf rhywfaint o ddata sy’n gwrthdaro, mae’r dystiolaeth gyffredinol yn tueddu i gefnogi bod GSK3b yn debygol o fod yn gysylltiedig âarenanafa phroteinwria mewn DN. Mae cwpl o gyfyngiadau o'r

mae angen crybwyll yr astudiaeth bresennol. Yn gyntaf, dim ond i'r modelau murine dB/dB y cyfyngwyd y data rhag-glinigol. I benderfynu cyffredinoli rôl GSK3b ynanaf diabetig i'r arennau, mae angen dilysu'r canfyddiadau mewn modelau eraill o DN, gan gynnwys modelau DN math 1. Yn ail, roedd yr arsylwadau clinigol yma yn deillio o garfanau ôl-weithredol o gleifion diabetig gyda maint sampl cyfyngedig ac amser dilynol cymharol fyr. Rhaid cyfaddef, mae angen astudiaethau aml-ganolfan ar raddfa fawr, arfaethedig, ar hap, i wirio ein harsylwadau ac i gadarnhau pŵer GSK3b mewn celloedd di-dor wrinol wrth ragweld canlyniad DKD.

I grynhoi, dangosodd ein hastudiaethau fod mynegiant arennol a gweithgaredd GSK3b yn cael eu mwyhau mewn DN arbrofol a chlinigol. Gall gweithgaredd GSK3b mewn celloedd diblisgo wrinol wasanaethu fel biomarcwr newydd ar gyfer rhagfynegi dilyniant DN. Efallai y bydd ein data yn paratoi'r ffordd ar gyfer archwiliad manwl ar raddfa fawr o'r gwerth y gall GSK3b mewn celloedd wedi'i ddatgysylltu wrinol fod yn biomarcwr prognostig o DN.

DULLIAU

Astudiaethau anifeiliaid

Cymeradwywyd astudiaethau anifeiliaid gan y Pwyllgor a Gofal Anifeiliaid Sefydliadol, ac maent yn cydymffurfio â rheoliadau Adran Amaethyddiaeth yr Unol Daleithiau a Chanllaw'r Sefydliadau Iechyd Cenedlaethol ar gyfer Gofal Dynol a Defnyddio Anifeiliaid Labordy. Prynwyd llygod DB/DB gwrywaidd a sbwriel db/m rheoli 6 wythnos oed o Ganolfan Ymchwil Anifeiliaid Model Prifysgol Nanjing (Nanjing, Tsieina) a'u cartrefu yng Nghyfleuster Canolog Anifeiliaid Prifysgol Zhengzhou. Cafodd yr holl lygod eu bwydo ad libitum, a lladdwyd 8 i 10 o lygod ar oedrannau penodol. Samplwyd sbesimenau wrin a gwaed ar adegau penodol. Ar ôl lladd, cynaeafwyd yr arennau i'w harchwilio ymhellach. Mesurwyd lefelau albwmin wrinol gan ddefnyddio pecyn mesur imiwnosorbent albwmin llygoden sy'n gysylltiedig ag ensymau (Bethyl Laboratories, Montgomery, TX). Pennwyd lefelau creatinin wrin gan ddefnyddio pecyn profi creatinin (BioAssay Systems, Hayward, CA).

Diwylliant celloedd

Roedd podocytau llygoden anfarwoledig amodol rhwng darnau 21 a 25 wedi'u meithrin yn Sefydliad Coffa Roswell Park 1640 canolig wedi'i ategu â serwm buchol ffetws 10 y cant o dan amodau caniataol fel y disgrifiwyd yn flaenorol.22 Roedd isddiwylliannau'r podocytau yn destun amodau na chaniateir i achosi gwahaniaethu am 14 diwrnod ac roeddent yn yna'n agored i gyfrwng milieu/diwylliant arferol a oedd yn cynnwys glwcos 5 mM, milieu diabetig yn cynnwys glwcos (25 mM), a thrawsnewid ffactor twf b1 (2 ng/ml), neu gyfrwng rheoli osmolality uchel yn cynnwys manitol 20 mM ar gyfer 48 oriau. Roedd celloedd epithelial tiwbaidd procsimol Murine a chelloedd mesangial glomerwlaidd llygoden yn cael eu cynnal yng nghyfrwng addasedig Eagle/F12 Dulbecco wedi'i ategu â serwm buchol ffetws 5 y cant. Cafodd celloedd eu platio ar gydlifiad o w70 y cant yn y cyfrwng a oedd yn cynnwys 5 y cant o serwm buchol ffetws am 24 awr ac yna cawsant newyn serwm am 24 awr arall ac yna daeth i gysylltiad â chyfrwng cyfrwng diwylliant/milieu arferol a oedd yn cynnwys glwcos 5 mM, sef milieu diabetig yn cynnwys uchel. glwcos (25 mM) a thrawsnewid ffactor twf b1 (2 ng/ml), neu gyfrwng rheoli osmolality uchel sy'n cynnwys glwcos 5 mM a manitol 20 mM am 48 awr. Aseswyd hyfywedd celloedd gan waharddiad glas Trypan. Ar adegau penodol, roedd celloedd yn cael eu gosod neu lysates celloedd yn cael eu casglu ar gyfer ymchwiliad pellach.

Trawsnewidiad dros dro fectorau

Darparwyd y fectorau sy'n amgodio fector gwag neu'r hemagglutinin (HA) - mutant sy'n weithredol yn gyfansoddiadol (S9A) (S9A-GSK3b-HA/ pcDNA3) o GSK3b gan Dr Gail VW Johnson (Birmingham, AL) a chawsant eu trosglwyddo i podocytau diwylliedig, celloedd mesangial, a chelloedd epithelial tiwbaidd trwy ddefnyddio Lipofectamine 2000 (Life Technologies, Carlsbad, CA) fel y disgrifiwyd yn flaenorol.44 Dilyswyd effeithlonrwydd trawsnewid trwy staenio immunofluorescence neu immunoblotting ar gyfer HA am 12 awr. Yna casglwyd celloedd a'u paratoi ar gyfer dadansoddiad o blotiau'r Gorllewin neu brofion eraill.

RNAi

Cronfa o 3 llygod bach penodol GSK3b, dwplecsau RNA ymyrryd—50-CUUGUCCUGUAGAACUUUCtt-30, {{5}AUGAUCCAUUUCCAAUCACtt{6}}, a 50-AUACCGCAGUCGGACUAUGtt-30 —wedi'u dylunio a'u syntheseiddio yn unol â dilyniant codio cyflawn y genyn murine GSK3b (rhif derbyn GenBank.BC060743.1). Yn ogystal, defnyddiwyd dilyniant RNA ymyriadol bach wedi'i sgramblo (50-GCGAGUAGCGCUAGGAAGUtt-30) heb ddilyniant tebyg i unrhyw ddilyniannau genyn hysbys o lygod, llygod mawr, neu fodau dynol fel rheolaeth ar gyfer RNAi. Aseswyd effeithlonrwydd lipofectamine (Invitrogen, Carlsbad, CA) - tawelu genynnau cyfryngol trwy ddadansoddiad imiwnoblot ar gyfer GSK3b. Gwelwyd ataliad boddhaol o fynegiant protein GSK3b mewn podocytau diwylliedig, celloedd mesangial, a chelloedd epithelial tiwbaidd 24 awr ar ôl RNAi. Yna bu celloedd yn destun cyfrwng milieu/diwylliant arferol, milieu diabetig, neu gyfrwng rheoli osmolality uchel am 48 awr fel y nodwyd uchod cyn i'r celloedd gael eu prosesu ar gyfer profion pellach.

Astudiaethau clinigol

Roedd rhan glinigol yr astudiaeth hon yn cydymffurfio â chanllawiau moesegol Datganiad Helsinki 1975 ac fe'i cymeradwywyd gan Fwrdd Adolygu Sefydliadol Ysbyty Cysylltiedig Cyntaf Prifysgol Zhengzhou. Ni chafodd cyfranogwyr ymchwil dynol eu recriwtio'n benodol ar gyfer yr astudiaeth hon. Casglwyd yr holl ddata clinigol trwy adolygu siart ôl-weithredol a thrwy archwilio darnau o feinwe a archifwyd neu sbesimenau wrin wedi'u bancio. Mae samplau biopsi arennau gormodol neu wedi'u taflu, yn ogystal â samplau wrin ffracsiynol, wedi'u bancio'n rheolaidd yn Sefydliad Neffroleg Ysbyty Cysylltiedig Cyntaf Prifysgol Zhengzhou. Dewiswyd meinweoedd biopsi arennau wedi'u mewnosod â pharaffin wedi'u harchifo heb eu hadnabod wedi'u harchifo gan gleifion ar gamau amrywiol o DN ar hap i'w harchwilio. Cafodd sbesimenau arennau ychwanegol heb friwiau histomorffolegol eu caffael o arennau a daflwyd i'w trawsblannu oherwydd anomaleddau fasgwlaidd neu o feinweoedd biopsi cyn-blant ac a wasanaethwyd fel rheolaethau arferol. Ar gyfer yr astudiaeth garfan ôl-weithredol, cafodd cyfanswm o 127 o gleifion â diabetes mellitus math 2, a oedd wedi cael eu dilyn i fyny ers 2010 gyda samplau banc o wrin ffracsiynau, eu sgrinio’n ôl-weithredol i’w cynnwys yn yr astudiaeth hon. Roedd y cleifion a astudiwyd rhwng 29 ac 80 oed ac wedi cael diagnosis o ddiabetes math 2 yn unol â meini prawf Cymdeithas Diabetes America. Roedd meini prawf gwahardd yn cynnwys colli dilyniant, gwybodaeth annigonol,arencamweithrediad, or overt proteinuria at baseline, or other superimposed kidney diseases such as acute kidney injury or glomerulopathies. Finally, 60 patients have enrolled in this study for further assessment. All patients had been followed up for >5 mlynedd. Yn ystod dilyniant arferol, dogfennwyd data demograffig, yn ogystal â pharamedrau clinigol, gan gynnwys rhyw, oedran, comorbidities, meddyginiaethau, hyd diabetes, pwysedd gwaed, lefel glycemig, lefel creatinin serwm, data urinalysis, Emiradau Arabaidd Unedig, ac eGFR. Y canlyniad clinigol ar ôl 5 mlynedd o ddilyniant oedd presenoldeb neu absenoldeb datblygiad nam arennol, a ddiffiniwyd naill ai fel gostyngiad o $25 y cant mewn eGFR neu ddilyniant albwminwria fel y dangosir gan y cynnydd yn nifrifoldeb albwminwria ar hyd gwahanol gamau clinigol o DN, hynny yw, normoalbuminuria, microalbuminuria, macroalbuminuria, neu broteinwria amlwg. Darparodd pob claf ganiatâd ysgrifenedig gwybodus.

Asesiad morffoleg arennol a dadansoddiad imiwn-histocemeg

Cafodd blociau meinwe arennau llygoden wedi'u hymgorffori mewn fformalin eu torri'n adrannau 3-mm. Ar gyfer histoleg gyffredinol, cafodd adrannau eu prosesu ar gyfer staenio asid-Schiff cyfnodol. Perfformiwyd staenio imiwnohistocemegol ar gyfer GSK3b a p-GSK3b gan ddefnyddio pecyn VECTASTAIN ABC (Vector Laboratories, Burlingame, CA) fel y disgrifiwyd yn flaenorol.20 Fel rheolaeth negyddol, disodlwyd y gwrthgorff cynradd gan serwm di-imiwn o'r un rhywogaeth; ni ddigwyddodd unrhyw staenio. Cafodd nodweddion morffolegol pob rhan eu hasesu gan un sylwedydd mewn modd dallu gyda chymorth patholegydd arennol.

Staenio imiwnofflworoleuol

Cafodd celloedd diwylliedig neu adrannau cryostat wedi'u rhewi eu gosod a'u staenio â gwrthgyrff cynradd ac yna cymhwyso'r gwrthgyrff eilaidd Alexa Fluor-cyfunedig (Invitrogen). Fel rheolaeth negyddol, disodlwyd gwrthgyrff cynradd gan IgG preimmune o'r un rhywogaeth; ni ddigwyddodd unrhyw staenio. Yn olaf, cafodd yr adrannau eu gwrth-staenio â 40,6-diamidino-2-phenylindole-2-phenylindole neu propidium ïodid a'u gosod â chyfrwng mowntio VECTASHIELD (Labordai Vector). Ar gyfer microsgopeg fflworoleuedd FL, dadansoddwyd pob adran ar yr un pryd i eithrio arteffactau oherwydd pydredd newidiol y fflworocrom. Archwiliwyd adrannau gan ddefnyddio microsgop fflworoleuedd Olympus FL gyda chamera digidol Spot II (Olympus, Tokyo, Japan). Ar gyfer staenio lliw deuol, cafodd delweddau eu caffael yn olynol er mwyn osgoi ymyrraeth llifynnau. Defnyddiwyd meddalwedd ImageJ (Y Sefydliadau Iechyd Cenedlaethol, Bethesda, MD) ar gyfer ôl-brosesu'r delweddau, er enghraifft, graddio, uno a dadansoddi cydleoli.

Morffometreg gyfrifiadurol

Cafodd delweddau o staenio imiwn-histocemeg eu dal a’u digideiddio gan ddefnyddio system dadansoddi delweddau gyfrifiadurol a oedd yn cynnwys camera digidol cydraniad uchel dyfais cyplydd gwefr ynghlwm wrth ficrosgop (Olympus BX41, Olympus) ac i gyfrifiadur. Dangoswyd delweddau ar gydraniad picsel o 1024 768 picsel (cydraniad gofodol, 0.24 mm/picsel). Ar gyfer delweddau o staenio imiwn-histocemeg meinweoedd yr arennau dynol, defnyddiwyd meddalwedd ImageJ ar gyfer segmentu delwedd, sefydlu trothwy, a mesuriadau dwyster signal. Cyflawnwyd cywiriadau â llaw yn ôl yr angen. Yn gyffredinol, samplwyd 10 glomeruli neu 10 maes tubulointerstitial ar hap ar gyfer dadansoddiad morffometrig, a mynegwyd y data terfynol fel gwerth dwysedd picsel integredig o'i gymharu â'r grŵp rheoli.

Dadansoddiad immunoblot gorllewinol

Roedd celloedd diwylliedig yn lysed;arenmeinweoeddneu glomeruli arennol ynysig yn homogenized mewn byffer assay radioimmunoprecipitation a ategwyd ag atalyddion proteas, a samplau yn cael eu prosesu ar gyfer dadansoddiad immunoblot. Ar gyfer dadansoddiad immunoblot o'r nifer cyfyngedig o gelloedd exfoliated yn yr wrin, addaswyd protocol y blot Gorllewinol fel y disgrifiwyd yn flaenorol trwy ddefnyddio'r perfformiad uchel NuPAGE Bis-Tris Gels (Invitrogen) a philenni trosglwyddo o ansawdd uchel.25 Gallai immunoblotting mireinio canfod proteinau wedi'u mynegi'n gymedrol mewn cyn lleied â 1000 o gelloedd. Prynwyd yr gwrthgyrff yn erbyn GSK3b, ffibronectin, colagen IV, actin, a glyseraldehyde-3-ffosffad dehydrogenase (GAPDH) gan Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA); prynwyd y rhai yn erbyn synaptopodin oddi wrth PROGEN Biotechnik GmbH (Heidelberg, yr Almaen); a chaffaelwyd y rhai yn erbyn ZO-1 a p-GSK3b gan Cell Signaling Technology (Danvers, MA).

Dadansoddiad ystadegol

All in vitro studies were repeated 3 to 6 times. For immunoblot analysis, bands were scanned and the integrated pixel density was determined using a densitometer and the ImageJ analysis program, version 1.48 (National Institutes of Health). Data were expressed as mean -SD or median (interquartile range). All included patients had baseline data. Patients with missing data or lost to follow-up were excluded from this study. Continuous variables were analyzed as appropriate by using the t-test, Mann-Whitney U test, or 1-way analysis of variance (ANOVA) followed by the Student-NewmanKeuls test if there were 3 comparisons or by the Scheffé test if there were >3 cymhariaeth. Cymharwyd data categorïaidd rhwng grwpiau a ddefnyddiodd y prawf chi-sgwâr. Defnyddiwyd dadansoddiad atchweliad llinol i archwilio perthnasoedd posibl rhwng 2 baramedr. Perfformiwyd dadansoddiadau atchweliad peryglon cymesurol Univariate Cox i asesu'r cysylltiadau rhwng y newidynnau perthnasol a'r risg o ddatblygiad nam arennol, ac yna dadansoddiadau aml-amrywedd o ran drysyddion posibl. Perfformiwyd dadansoddiad cromlin ROC a mesurwyd yr ardaloedd o dan y cromliniau ROC i ddadansoddi pŵer rhai newidynnau wrth ragweld dilyniant nam arennol mewn cleifion diabetig. Trawsnewidiwyd newidynnau nad ydynt wedi'u dosbarthu'n normal, fel Emiradau Arabaidd Unedig, gan logarithm i gyflawni normalrwydd ar gyfer dadansoddiadau atchweliad peryglon cyfran Cox, dadansoddiadau cromlin ROC. Perfformiwyd yr holl ddadansoddiadau ystadegol gan ddefnyddio fersiwn PSS 22 (IBM Corporation, Armonk, NY). gwerthoedd P<0.05 in2-tailed="" tests="" were="" considered="" statistically="" significant="" in="" all="">

DATGUDDIAD

Ni ddatganodd yr holl awduron unrhyw fuddiannau cystadleuol.

DIOLCHIADAU

Cyflwynwyd rhan o'r astudiaeth hon fel cyflwyniad llafar yn y KidneyWeek 2016: Cyfarfod Blynyddol Cymdeithas Neffroleg America, Tachwedd 15-20, 2016, Chicago, IL. Cefnogwyd RG yn rhannol gan y Sefydliad Iechyd. Cefnogwyd XL gan gymrodoriaeth ymchwil i dderbyn hyfforddiant allanol. Cefnogwyd ZL gan grantiau Sefydliad Cenedlaethol Gwyddoniaeth Naturiol Tsieina U1604284, 81770672, a81873612. Nid oedd gan y cyllidwyr unrhyw ran yn y gwaith o gynllunio a chynnal yr astudiaeth hon, casglu, a dehongli'r data, na pharatoi a chymeradwyo'r llawysgrif.

CYFRANIADAU AWDUR

Dyfeisiodd RG y syniadau cysyniadol. Cyfrannodd XL, ZL, ac RG at ddyluniad yr astudiaeth. Cynhaliodd XL, PW, BC, YG, AYG, a BF yr arbrofion diwylliant celloedd. Perfformiodd XL a ZL yr arbrofion anifeiliaid a chasglu'r data gan gleifion diabetig. XL, LJW, DKM, LDD, ZL, a chyfrannodd at y drafodaeth a dehongliad o'r canlyniadau. cymryd yr awenau wrth ysgrifennu'r llawysgrif. Cyfrannodd XL, BC, a BF at olygu llawysgrifau. Roedd pob awdur yn cytuno bod y cysyniad cyfan a pherchnogaeth y gwaith hwn yn perthyn i RG. Cymeradwyodd pob awdur y llawysgrif derfynol.

DEUNYDD ATODOL

Dulliau Atodol.

Tabl S1. Nodweddion pynciau rheoli a chleifion â neffropathi diabetig, wedi'u haenu yn ôl dosbarthiadau histolegol neffropathi diabetig. Tabl S2. Data gwaelodlin demograffig, clinigol a labordy y garfan ôl-weithredol o gleifion diabetig cyfnod cynnar heb unrhyw arwyddion o DKD. Tabl S3. Data demograffig, clinigol a labordy o gleifion diabetig math 2 cyfnod cynnar, wedi'u haenu yn ôl eu canlyniadau arennol ar ôl 5 mlynedd o apwyntiad dilynol. Ffigur S1. Mae gweithgaredd arennol gwell GSK3b yn rhagweld datblygiad a difrifoldebdiabetigarenclefydmewn llygod db/db. Dilynwyd llygod db/db a db/m gwrywaidd rhwng 4 a 13 wythnos oed. (A) Cafodd gwaed ei samplu o lygod heb eu cyflymu yn 4 a 7 wythnos oed, a chafodd lefelau glwcos plasma eu profi. *P < 0.001="" yn="" erbyn="" db/m="" llygod="" yn="" 7="" wythnos="" oed.="" n="" ¼="" 15–18.="" (b)="" samplwyd="" wrin="" yn="" y="" fan="" a'r="" lle="" yn="" 4,="" 7,="" 10,="" a="" 13="" wythnos="" oed="" a="" bu'n="" destun="" prawf="" albwmin="" wrinol="" a="" creatinin="" wrin="" ar="" gyfer="" pennu="" cymarebau="" albwmin-i-creatinin="" wrinol="" (uacrs).="" *p="">< 0.001="" yn="" erbyn="" llygod="" db/m="" yn="" 10="" wythnos="" oed="" (n="" ¼="" 15-18);="" #p="">< 0.001="" yn="" erbyn="" llygod="" db/m="" yn="" 13="" wythnos="" oed.="" n="" ¼="" 15–18.="" (c)="" derbyniodd="" pob="" llygod="" fiopsi="" arennol="" agored="" yn="" 7="" wythnos="" oed="" a="" phroseswyd="" sbesimenau="" biopsi="" ar="" gyfer="" dadansoddiad="" immunoblot="" ar="" gyfer="" p-gsk3b,="" gsk3b,="" a="" gapdh.="" (d)="" roedd="" imiwnoblots="" yn="" destun="" dadansoddiad="" densitometrig.="" pennwyd="" digonedd="" cymharol="" gsk3b="" a="" p-gsk3b="" fel="" cymarebau="" densitometrig="" y="" moleciwl/gapdh="" priodol="" fel="" newidiadau="" plyg="" o="" gymharu="" â="" llygod="" rheoli="" db/m.="" cyfrifwyd="" gweithgaredd="" cymharol="" gsk3b="" fel="" cymarebau="" p="" gsk3b="" i="" gsk3b="" fel="" plygiadau="" o="" lygod="" rheoli="" db/m.="" (e)="" dangosodd="" dadansoddiad="" atchweliad="" llinol="" gydberthynas="" gadarnhaol="" ystadegol="" arwyddocaol="" rhwng="" gweithgaredd="" gsk3b="" arennol="" yn="" 7="" wythnos="" oed="" mewn="" llygod="" db/db="" a="" datblygiad="" a="" difrifoldeb="" albwminwria,="" nodwedd="">diabetigarenclefydyn 13 wythnos oed. R ¼0.699; P ¼ 0.0{{20}}1. (F) Dangosodd dadansoddiad cromlin nodwedd gweithredu derbynnydd fod gweithgaredd GSK3b arennol ar gamau cynnar diabetes (7 wythnos oed) yn darparu cywirdeb a phŵer rhagorol wrth ragweld datblygiad albwminwria a DKD yn 13 wythnos oed mewn llygod db/db. Ffigur S2. Mae ymwrthedd i inswlin a glwcos amgylchynol uchel yn actifadu GSK3b yn synergyddol yng nghelloedd yr arennau. (A) Trawsnewidiwyd podocytau murine diwylliedig, (B) celloedd mesangial glomerwlaidd wrin (MMCs), a (C) celloedd epithelial tiwbaidd arennol (TECs) â oligonucleotides siRNA wedi'u sgramblo (siCon) neu oligonucleotides siRNA (siIRb) sy'n benodol ar gyfer y b isoform o y derbynnydd inswlin (IRB) i fodelu cyflwr ymwrthedd inswlin in vitro. Yna cafodd celloedd eu hamlygu am 48 awr i'r milieu normal arferol sy'n cynnwys glwcos (NG) neu'r milieu diabetig uchel sy'n cynnwys glwcos (HG). Casglwyd lysates celloedd a bu'n destun dadansoddiad immunoblot ar gyfer IRB, p-GSK3b, GSK3b, a GAPDH ac yna dadansoddiad densitometrig o'r blotiau. *P < 0.01="" yn="" erbyn="" mynegiant="" irb="" mewn="" celloedd="" wedi'u="" trin="" â="" sicon="" sy'n="" agored="" i'r="" un="" milieu="" (n="" ¼="" 3),="" #p="">< 0.05="" yn="" erbyn="" yr="" un="" mynegiant="" protein="" yn="" y="" grŵp="" siirb="" þ="" ng="" neu="" sicon="" þ="" hg="" (n="" ¼="" 3),="" &p="">< 0.05="" yn="" erbyn="" yr="" un="" mynegiant="" protein="" yn="" yr="" ail="" grŵp="" þ="" hg="" neu="" siirb="" þ="" ng="" (n="" ¼="" 3).="" ffigur="" s3.="" lefelau="" mynegiant="" o="" mrna="" gsk3b="" mewn="" sbesimenau="" arennau="" dynol="" a="" gafwyd="" gan="" roddwyr="" byw'n="" iach="" a="" chleifion="" â="" neffropathi="" diabetig.="" cafwyd="" data="" o="" www.nephroseq.org="" ar="" sail="" set="" ddata="" ju="" ckd="" glom51="" ac="" fe'i="" mynegwyd="" fel="" dwysedd="" canolrif-ganolog="" log2.="" ffigur="" s4.="" mae="" gweithgaredd="" uwch="" gsk3b="" mewn="" celloedd="" diblisgo="" wrinol="" a="" gasglwyd="" gan="" gleifion="" diabetig="" cyfnod="" cynnar="" yn="" rhagweld="" datblygiad="" clefyd="" diabetig="" yr="" arennau.="" (a,="" b)="" canfod="" gsk3b="" a="" gsk3b="" wedi'i="" actifadu="" mewn="" celloedd="" exfoliated="" wrinol="" a="" gasglwyd="" gan="" gleifion="" diabetig="" cyfnod="" cynnar="" (pts)="" a="" rheolaethau="" iach="" (ctrls).="" casglwyd="" celloedd="" diblisgool="" wrinol="" a'u="" lyssio.="" proseswyd="" lysates="" celloedd="" ar="" gyfer="" dadansoddiad="" immunoblot="" ar="" gyfer="" gsk3b,="" p-gsk3b,="" a="" gapdh.="" (c)="" roedd="" imiwnoblots="" yn="" destun="" dadansoddiad="" densitometrig.="" pennwyd="" digonedd="" cymharol="" gsk3b="" a="" p-gsk3b="" fel="" cymarebau="" densitometrig="" y="" moleciwl/gapdh="" priodol="" wrth="" i="" blygiadau="" newid="" o="" gymharu="" â="" rheolyddion="" (ctrls).="" cyfrifwyd="" gweithgaredd="" cymharol="" gsk3b="" fel="" cymarebau="" p-gsk3b="" i="" gsk3b="" fel="" plygiadau="" rheolaeth="" arferol="" (ctrls).="" (d)="" dangosodd="" dadansoddiad="" cromlin="" nodwedd="" gweithredu'r="" derbynnydd="" fod="" y="" gweithgaredd="" gsk3b="" cymharol="" (cymhareb="" p-gsk3b/gsk3b)="" mewn="" celloedd="" di-flewyn-ar-dafod="" wrinol="" a="" gasglwyd="" gan="" gleifion="" diabetig="" cyfnod="" cynnar="" yn="" darparu="" cywirdeb="" rhagorol="" wrth="" ragweld="">clefyd yr arennau diabetigymhen 5 mlynedd, gyda'r arwynebedd o dan y gromlin (AUC) yn 0.886.

CYFEIRIADAU

1. Umanath K, Lewis JB. Diweddariad ar Neffropathi Diabetig: Cwricwlwm Craidd 2018. Am J Kidney Dis. 2018; 71:884–895.

2. Gregg EW, Li Y, Wang J, et al. Newidiadau mewn cymhlethdodau sy'n gysylltiedig â diabetes yn yr Unol Daleithiau, 1990-2010. N Engl J Med. 2014; 370: 1514-1523.

3. Haller H, Ito S, Izzo JL Jr, et al. Olmesartan ar gyfer oedi neu atal microalbuminuria mewn diabetes math 2. N Engl J Med. 2011; 364: 907-917.

4. Schena FP, Gesualdo L. Mecanweithiau pathogenetig o neffropathi diabetig. J Am Soc Nephrol. 2005; 16(cyflenwad 1):S30–S33.

5. Ritz E, Zeng XX, Rychlik I. Amlygiad clinigol a hanes naturiol neffropathi diabetig. Cyfranna Nephrol. 2011; 170:19–27.

6. Holman RR, Paul SK, Bethel MA, et al. 10-blwyddyn dilynol o reolaeth ddwys ar glwcos mewn diabetes math 2. N Engl J Med. 2008; 359: 1577-1589.

7. Perkins BA, Ficociello LH, Ostrander BE, et al. Microalbuminuria a'r risg o ddirywiad cynnar mewn gweithrediad arennol mewn diabetes math 1. J Am Soc Nephrol. 2007; 18: 1353-1361.

8. Koye DN, Magliano DJ, Reid CM, et al. Risg o ddatblygu CKD normoalbwminwrig i gam olaf clefyd yr arennau mewn pobl â diabetes: Astudiaeth CRIC (Carfan Annigonolrwydd Arennol Cronig). Am J Arennau Dis. 2018; 72: 653-661.

9. Caramori ML, Fioretto P, Mauer M. Yr angen am ragfynegwyr cynnar o risg neffropathi diabetig: a yw cyfradd ysgarthiad albwmin yn ddigon? Diabetes. 2000; 49: 1399-1408.

10. Caramori ML, Fioretto P, Mauer M. Cyfradd hidlo glomerwlaidd isel mewn cleifion diabetig normoalbuminwrig math 1: dangosydd o friwiau glomerwlaidd mwy datblygedig. Diabetes. 2003; 52: 1036-1040.

11. Krolewski AS. Dirywiad arennol cynyddol: y patrwm newydd o neffropathi diabetig mewn diabetes math 1. Gofal Diabetes. 2015; 38:954-962.

12. Robles NR, Villa J, Gallego RH. Neffropathi diabetig nad yw'n broteinwrig. J Clin Med. 2015; 4: 1761-1773.

13. Adler AI, Stevens RJ, Manley SE, et al. Datblygiad a dilyniant neffropathi mewn diabetes math 2: Astudiaeth Diabetes Darpar y Deyrnas Unedig (UKPDS 64). Arennau Int. 2003; 63:225-232.

14. Gluhovschi C, Gluhovschi G, Petrica L, et al. Biofarcwyr wrinol wrth asesu neffropathi diabetig cynnar. J Diabetes Res. 2016;2016: 4626125.

15. Doi T, Moriya T, Fujita Y, et al. Mae IgG4 a Smad1 wrinol yn fiofarcwyr penodol ar gyfer newidiadau strwythurol a swyddogaethol arennol yng nghamau cynnar neffropathi diabetig. Diabetes. 2018; 67: 986-993.

16. De S, Kuwahara S, Hosojima M, et al. Mae ysgarthiad megalin wrinol hyd llawn trwy ecsocytosis yn gysylltiedig â phathogenesis neffropathi diabetig. Diabetes. 2017; 66: 1391-1404.

17. Xu W, Ge Y, Liu Z, et al. Mae Glycogen synthase kinase 3b yn pennu symudedd podocyte a throsiant adlyniad ffocal trwy fodiwleiddio gweithgaredd paxillin: goblygiadau ar gyfer effaith amddiffynnol lithiwm dos isel mewn podocytopathi. Am J Pathol. 2014; 184: 2742-2756.

18. Ali A, Hoefiich KP, Woodgett JR. Glycogen synthase kinase-3: priodweddau, swyddogaethau, a rheoliad. Cemeg Parch. 2001; 101:2527–2540.

19. Beurel E, Grieco SF, Jope RS. Glycogen synthase kinase-3 (GSK3): rheoleiddio, gweithredoedd, a chlefydau. Ffarmacol Ther. 2015; 148: 114-131.

20. Li C, Ge Y, Dworkin L, et al. Mae isoform b GSK3 yn cyfryngu anaf ymreolaethol podocyte mewn glomerwlopathi proteinwrig. J Pathol. 2016; 239:23.