Rhan 1: Effeithiau Adnofasgwlaidd Nitrad Anorganig Yn dilyn Atlifiad Isgemia O'r Arennau

Am fwy o wybodaeth. cyswllttina.xiang@wecistanche.com

ABSENOLDEB

Cefndir: Anaf ar gyfer isgemia-atlifiad arennol (IR).yn achos cyffredin oanaf acíwt i'r arennau(AKI), sy'n gysylltiedig â straen ocsideiddiol a bioactifedd ocsid nitrig (NO), a risg uwch o ddatblyguclefyd cronig yn yr arennau(CKD) a chlefyd cardiofasgwlaidd (CVD). Efallai y bydd gan strategaethau newydd sy'n adfer cydbwysedd rhydocs oblygiadau therapiwtig yn ystod AKI a chymhlethdodau cysylltiedig.

Nod: Ymchwilio i werth therapiwtig hybu'r llwybr nitrad-nitraid-NO yn ystod datblygiad camweithrediad arennol a chardiofasgwlaidd a achosir gan IR.

Dulliau: Rhoddwyd sodiwm nitrad (10 mg/kg,ip) neu gerbyd 2 awr i lygod gwrywaidd C57BL/6 J cyn isgemia cynnes yr aren chwith (45 munud) ac yna ychwanegiad sodiwm nitrad yn y dŵr yfed (1 mmol/kg/ diwrnod) am y 2 wythnos ganlynol. Mesurwyd pwysedd gwaed a chyfradd hidlo glomerwlaidd a chasglwyd gwaed ac arennau a'u defnyddio ar gyfer dadansoddiadau biocemegol a histolegol yn ogystal ag astudiaethau adweithedd pibellau arennol. Defnyddiwyd celloedd endothelaidd glomerwlaidd sy'n agored i hypocsia-ailocsigeniad, gyda neu heb angiotensin Ⅱ, ar gyfer astudiaethau mecanistig.

Canlyniadau: Roedd IR yn gysylltiedig â llai o swyddogaeth arennol a phwysedd gwaed ychydig yn uwch, mewn cyfuniad ag anafiadau arennol, llid, camweithrediad endothelaidd, lefelau Ang Ⅱ cynyddol, a fasoreactivity cyfryngol Ang II, a gafodd eu lleddfu i gyd gan nitrad. At hynny, fe wnaeth triniaeth â nitrad (in vivo) a nitraid (in vitro) adfer DIM bioactifedd a lleihau straen ocsideiddiol mitocondriaidd ac anafiadau.

Casgliadau: Gall triniaeth acíwt â nitrad anorganig cyn isgemia arennol fod yn ddull therapiwtig newydd i atal AKI a CKD a'r risg cysylltiedig o ddatblygucamweithrediad cardiofasgwlaidd.

Cliciwch i gyrraedd y cyflenwr am brofiad cistanche

1. Rhagymadrodd

Mae anafiad isgemia-atlifiad (IR) i'r aren, sy'n gysylltiedig â thrawsblannu, llawdriniaeth ddargyfeiriol ar y galon, a sioc, yn risg fawr ar gyfer datblygu anaf acíwt i'r arennau (AKI) a chlefyd cronig yr arennau dilynol (CKD) [1]. Mae mecanweithiau sylfaenol yn gymhleth ac yn cynnwys straen ocsideiddiol sy'n gysylltiedig ag atlifiad, diffyg ocsid nitrig, ac actifadu celloedd imiwnedd, sydd gyda'i gilydd yn arwain at gamweithrediad endothelaidd [2, 3]. Mae ymchwil barhaus wedi bod yn canolbwyntio ar ddod o hyd i therapïau newydd ac effeithiol ar gyfer atal a thrin AKI a'i ddilyniant i CKD, megis rhag-gyflyru isgemia o bell, hypothermia lleol dros dro yn ogystal ag ymyriadau ffarmacolegol newydd [3,4].

Mae'r moleciwl signalau nwyol nitrig ocsid (NO) yn cyfrannu'n bwysig at reoleiddio homeostasis cardiofasgwlaidd ac arennol a dangoswyd ei fod yn chwarae rhan amddiffynnol yn ystod anafiadau IR [5,6]. Fodd bynnag, yn ystod y digwyddiad isgemig, mae diffyg ocsigen yn peryglu swyddogaeth endothelaidd NO synthase (eNOS), a all gyfrannu at y "ffenomen dim-reflow" yn y meinwe isgemig yn ystod y cyfnod atgyfnerthu. Mae hyn yn ei dro yn lluosogi anafiadau celloedd epithelial endothelaidd a thiwbaidd [7], sy'n cyfrannu at ddatblygiad llai o swyddogaeth yr arennau. Yn ogystal â hypocsia yn ystod y cyfnod isgemig, mae cynhyrchu gormodol o rywogaethau ocsigen adweithiol (ROS) a gynhyrchir yn ormodol gan nicotinamide adenine dinucleotide oxidase oxidase (NADPH) oxidase a mitocondria yn ystod y cyfnod ail-berlifiad yn sborion NO [8]. Efallai y bydd gan ddulliau newydd sy'n lleihau straen ocsideiddiol a chynnal DIM bioactifedd werth therapiwtig yn y frwydr yn erbyn methiant yr arennau a achosir gan IR.

Roedd nitrad anorganig (NO3) a nitraid (NOZ) yn cael eu hystyried yn flaenorol fel cynhyrchion cymharol anadweithiol yn deillio o NO metabolaeth. Fodd bynnag, mae ymchwil a gynhaliwyd am fwy na dau ddegawd wedi dangos y gall yr anionau hyn gael eu biodrosi, trwy ostyngiadau cyfresol, ac eto ffurfio NO a rhywogaethau bioactif nitrogen ocsid [9]. Mae gweithgaredd y llwybr amgen nitrad-nitraid-NO hwn yn cael ei wella yn ystod amodau â hypocsia a pH isel pan all y system NOS clasurol ddod yn gamweithredol [10].

Mae'r diet, yn ychwanegol at y system NOS, yn ffynhonnell bwysig o gylchredeg nitrad a nitraid, oherwydd lefelau uchel o nitrad er enghraifft mewn llysiau deiliog gwyrdd. Mae ychwanegiad â nitrad anorganig a nitraid wedi bod yn gysylltiedig ag effeithiau cardiofasgwlaidd ffafriol, gan gynnwys lleihau pwysedd gwaed, mewn astudiaethau arbrofol a chlinigol [11]. Mae effeithiau amddiffyn organau hefyd wedi'u dangos mewn modelau anaf IR arbrofol o'r afu [12], yr ymennydd [13], yr ysgyfaint [14], a'r galon [12,15]. Fodd bynnag, mae gwerth therapiwtig posibl nitrad anorganig a nitraid mewn anaf IR arennau yn parhau i fod yn ddadleuol. Fel yr adolygwyd yn ddiweddar [5], canlyniadau amrywiol mewn modelau IR, gan ddefnyddio therapi nitraid, efallai oherwydd gwahaniaethau yn y dos a ddefnyddir, llwybr gweinyddu, hyd y driniaeth, yn ogystal â'r model arbrofol ei hun [16,17]. Mae sawl astudiaeth arbrofol wedi dangos effeithiau amddiffynnol ychwanegiad nitrad dietegol mewn modelau o glefyd cardiorenaidd, trwy fecanweithiau sy'n cynnwys lleddfu straen ocsideiddiol a gwella DIM bioactifedd yn ogystal â modiwleiddioymatebion ymfflamychol[5]. Hyd yn hyn, mae gwybodaeth gyfyngedig am effeithiau therapi nitrad anorganig mewn anaf IR arennol. Rydym wedi dangos yn flaenorol bod rhag-driniaeth dietegol cronig gydag anafiadau arennol dilynol a achosir gan IR wedi'u gwanhau gan nitrad [18]. Fodd bynnag, mae llai o wybodaeth am werth posibl rhoi hwb i'r llwybr nitrad-nitraid-NO ar ddechrau IR i leihau'r risg o ddatblygu AKI a CKD. Os yw'n amddiffynnol, gallai fod â chymwysiadau clinigol eang mewn cleifion sydd mewn perygl o ddatblygu AKI, er enghraifft y rhai sy'n cael llawdriniaeth fawr.

Yn yr astudiaeth hon, defnyddiwyd model llygoden o anaf IR arennol i ymchwilio i fanteision posibl triniaeth nitrad acíwt yn union cyn y digwyddiad isgemig. Cyfunwyd hyn ag astudiaethau mecanistig o lestri ex vivo ac arbrofion meithrin celloedd in vitro gyda thriniaeth nitraid. Fe wnaethom ddamcaniaethu y byddai rhoi hwb i'r llwybr nitrad-nitraid-NO yn hyrwyddo amddiffyniad yr arennau rhag anaf IR trwy fodiwleiddio straen ocsideiddiol a DIM bioactifedd yn ogystal â swyddogaeth mitocondriaidd.

2. Dulliau

2.1.Adweithyddion

Oni nodir yn wahanol, cafwyd yr holl adweithyddion o Sigma-Aldrich, Sweden.

2.2. Model atdarlifiad isgemia anifeiliaid ac arennau

Cafwyd llygod C57BL/6 J (Dyn, 10 wythnos) gan Janvier Lab-oratories (Ffrainc) a’u cadw yn ein cyfleusterau anifeiliaid yn Karolinska Institutet o dan amodau a reolir gan yr hinsawdd gyda chylch o 12-h golau/tywyll a’u darparu gyda chow cnofilod safonol a dŵr tap. Cymeradwywyd yr holl weithdrefnau anifeiliaid gan y Pwyllgor Moesegol Rhanbarthol ar gyfer Arbrofion Anifeiliaid (Protocol ID: N139/15) ac fe’u cynhaliwyd yn unol â chanllawiau’r Sefydliad Cenedlaethol dros Iechyd (NIH) a Chyfarwyddeb yr UE 2010/63/EU ar gyfer cynnal arbrofion mewn anifeiliaid.

Ar ôl 1 wythnos o ymaddasu, rhoddwyd plasebo (NaCl) neu sodiwm nitrad (NaNO3) i lygod yn fewnberitoneol (10 mg/kg)2 h cyn isgemia unochrog yr aren chwith. Archwiliwyd yr aren dde ond fe'i gadawyd yn gyfan fel arall. Perfformiwyd llawdriniaethau Sham yn yr un modd, ond heb glampio'r aren chwith. Cafodd llygod eu hanestheteiddio ag isoflurane a chadwyd tymheredd y corff ar 37 ±0.5 gradd gan ddefnyddio lamp gwresogi a phad gwresogi hunan-fonitro trwy gydol y feddygfa. Ar ôl y llawdriniaeth, cafodd llygod eu trin â naill ai sodiwm nitrad (1 mmol / kg / dydd) neu blasebo am 2 wythnos tan y terfyniad.

2.3. Mesur pwysedd gwaed

Mesurwyd pwysedd gwaed mewn llygod gan ddefnyddio dull cyff cynffon anfewnwthiol cyn terfynu. Cafodd llygod eu cyflyru ar blât cynnes ar 35 gradd C am 10 munud ac yna eu rhoi mewn atalyddion plastig. Roedd cyff gyda synhwyrydd pwls niwmatig ynghlwm wrth y gynffon, a chofnodwyd gwerthoedd pwysedd gwaed gyda'r system CODA (Kent Scientific, Torrington, CT, UDA). Hyfforddwyd anifeiliaid gyda'r atalyddion ar y plât cynhesu o leiaf dri diwrnod cyn cofnodi pwysedd gwaed. Casglwyd pwysau rhydwelïol systolig, diastolig a chymedrig dros 3 diwrnod yn olynol a chasglwyd canolrif unigol o'r holl werthoedd derbyniol i'w hasesu.

2.4.Cynhaeaf meinwe

Cyn terfynu, rhoddwyd y llygod mewn cewyll metabolig i gasglu wrin ar gyfer cyfrifo cyfradd hidlo glomerwlaidd (GFR). Yna anestheteiddiwyd anifeiliaid ag isoflurane a chasglwyd samplau gwaed trwy'r fena cava israddol. Cafodd yr holl samplau eu centrifugio ar unwaith ar 6000 × g, 4 gradd C am 5 munud ym mhresenoldeb EDTA (Sigma-Aldrich, Stockholm, Sweden), y crynodiad terfynol o 2 mM. Trosglwyddwyd samplau plasma i mewn i diwbiau newydd a'u rhewi ar unwaith mewn rhew sych ac yn olaf eu storio ar -80 gradd. Cafodd yr arennau eu tynnu a'u torri'n sawl rhan ar gyfer arbrofion swyddogaeth fasgwlaidd ex vivo (rhydwelïau rhynglobar a rhydwelïau afferent), histoleg ( Staenio AU a PAS), a meintioli apoptosis a llid (mewnosod cyfansawdd tymheredd torri Meinwe-Tek (OCT) a'i rewi ar gyfer staenio TUNEL a F4/80).

2.5. Mesuriadau nitrad, nitraid, cGMP, creatinin, nitrogen wrea gwaed (BUN), ac angiotensin II

Dadansoddwyd nitraid a nitrad gan HPLC(ENO-20) fel y disgrifiwyd yn flaenorol 【19】. Chwistrellwyd samplau plasma (10 ul) i'r system HPLC gyda chwistrell Hamilton. O ganlyniad, gwahanwyd nitraid a nitrad gan gromatograffaeth cyfnewid ïon cam cefn/cefn ac yna gostyngiad nitrad i nitraid gan gadmiwm a llai o gopr. Cafodd nitraid ei ddeillio gan ddefnyddio adweithydd Griess i ffurfio cyfansoddion diazo a'i ganfod ar 540 nm. Er mwyn atal diraddio cGMP, trosglwyddwyd y plasma i diwbiau sy'n cynnwys atalydd PDE, BMX(3-Isobutyl-1methylxanthine; Sigma-Aldrich #I5879) i roi crynodiad terfynol (10 μM). Samplau oedd wedi hynny wedi'i rewi a'i storio ar-80 gradd cyn dadansoddi cGMP gyda phecyn ELISA (GE Healthcare #RPN226), yn unol â chyfarwyddiadau'r gwneuthurwr.

Canfuwyd y lefelau creatinin plasma ac wrin trwy ddefnyddio Pecynnau Assay Colorimetrig Creatinine (Cayman Chemical, #700460 a # 500701). Defnyddiwyd fformiwla clirio creatinin (CLcr =Llif wrin Urinecrx/Plasmacr) i amcangyfrif GFR. Canfuwyd y lefelau BUN plasma trwy ddefnyddio Pecyn Canfod Lliwimetrig BUN (Invitrogen, #EIA-BUN). Mesurwyd lefelau Ang mewn plasma a meinweoedd yr arennau gan ddefnyddio pecyn Ang ⅡI ELISA (Cloud-Clone Corp., # CEA005Mu) yn unol â chyfarwyddiadau'r gwneuthurwr. Fodd bynnag, roedd paratoi'r darn meinwe ychydig yn wahanol i'r argymhelliad.10 cyf 50 mM HCl mewn 50 y cant EtOH ei ychwanegu at y meinwe a'i gynhesu am 10 munud ar 100 gradd , centrifuged 10 000 × g 10 min. Wedi hynny cafodd y samplau eu rhewi a'u storio ar -80 gradd cyn cael eu dadansoddi. Gwnaed yr holl ddarlleniadau amsugnedd yn SpextraMax iD3 o Dyfeisiau Moleciwlaidd.

2.6. Ynysu a darlifiad rhydwelïau rhynglobar

Cynaeafwyd arennau ar ôl aberth a'u cadw mewn hydoddiant halen ffisiolegol oer iâ (PSS) nes ynysu'r rhydwelïau rhynglobar. Dyrannwyd rhydwelïau rhynglobar arennol (2 mm o hyd) a'u gosod mewn a

siambr myograff (Model 620 M, Daneg Myo Technology, Denmarc) gyda PSs fel y disgrifiwyd yn flaenorol [20]. Cofnodwyd tensiwn isometrig gyda system Powerlab (Powerlab 4/30, AD Instruments, Awstralia). Ar ôl cael eu gosod, cafodd y llestri eu cydbwyso am 20 munud mewn PSs yn byrlymu â carbogen (95 y cant O2; 5 y cant CO2) ar 37 gradd, pH7.4. Yna gosodwyd tensiwn gorffwys y rhydwelïau fel y disgrifiwyd yn flaenorol [21], sef yn unol â gweithdrefn normaleiddio Mulvany [22]. Ar ôl ail gydbwysedd, defnyddiwyd 0.1 mol/L KCl i asesu hyfywedd cylch rhydwelïol.

2.7. Ynysu a micro-darlifiad rhydwelïonau afferol

Cafodd llygod C57BL/6 J eu hanestheteiddio ag isoflurane wedi'i fewnanadlu a chafodd yr arennau eu tynnu a'u sleisio'n gyflym fel y disgrifiwyd yn flaenorol [23-25]. Gosodwyd tafelli arennau yng nghyfrwng Eagle's Eagle (DMEM) a addaswyd mewn oerfel iâ. Cafodd un rhydweli afferol gyda glomerwlws ynghlwm ei ficro-ddyrannu o dan stereomicrosgop a'i drosglwyddo i

siambr a reolir gan dymheredd ar lwyfan microsgop gwrthdro. Roedd y glomerwlws wedi'i osod gyda micropiped dal ac roedd y rhydweli afferol wedi'i dunio a'i ddarlifo â set o ficropipedau. Cadwyd gwasgedd mewnluminal y rhydweli afferent trylifedig ar 60 mmHg yn ystod arbrofion. Cyfyngwyd yr amser ar gyfer dyrannu a'r micro-darlifiad canlynol i 120 munud ar ôl aberthu'r llygoden fel y disgrifiwyd yn flaenorol [26]. Ar ôl cyfnod cydbwysedd o 30 munud ar 37 gradd , cafwyd cromliniau ymateb dos cronnus i Ang II (10-12 i 10-8 mol/L). Cafodd pob crynodiad o Ang II ei ddarlifo am 2 funud, cofnodwyd yr ymateb cyfyngol ac yna mesurwyd diamedr y rhydweli afferol.

2.8. Archwiliad histolegol

Cafodd y samplau arennau eu cynaeafu a'u gosod mewn hydoddiant paraformaldehyd 4 y cant. Ymgorfforwyd meinweoedd arennau sefydlog mewn paraffin ac wedi hynny eu sleisio a'u staenio â Hematoxylin-Eosin (H&E) neu Schiff Asid Cyfnodol (PAS) ar gyfer asesiad histolegol. Defnyddiwyd pedwar anifail a ddewiswyd ar hap o bob grŵp arbrofol i'w dadansoddi. Cafodd deg maes a ddewiswyd ar hap o bob adran eu dal o dan chwyddhad 400 ×. Perfformiwyd yr holl ddadansoddiadau morffometrig mewn modd dall.

2.9. staenio TUNEL

Defnyddiwyd samplau arennau wedi'u mewnblannu gan OCT ar gyfer staenio TUNEL. 6-Deorwyd darnau μm o drwch gyda 20ug/mL proteinase K am 15 munud ar dymheredd yr ystafell, a pherfformiwyd adweithiau TUNEL trwy ddefnyddio Assay TUNEL Click-iTTM Plus (Invitrogen C10618, UDA) yn dilyn cyfarwyddiadau'r gwneuthurwr. Ar ddiwedd y protocol, perfformiwyd y DAPIstaining. Ar gyfer meintioli, dewiswyd tri anifail a thri maes maes o'r ddelwedd (200 ×) ar hap a thynnwyd llun ohonynt gan ddefnyddio microsgop confocal Zeiss LSM 800-Microsgop confocal Airy, mesurwyd y signalau positif gan ddefnyddio meddalwedd ImageJ/Fiji, a chawsant eu cyfrifo fel y cymhareb y signalau positif i DAPI.

2.10. Staenio imiwnfflworoleuedd meinwe a microsgopeg confocal (F4/80)

Cafodd yr arennau eu rhewi yn OCT (Meinwe-Tek, Torrence, CA, UDA) a chafodd adrannau (6 μm) eu paratoi a'u prosesu ymhellach. Cafodd adrannau wedi'u rhewi eu golchi â 1 × PBS a'u rhwystro â 2 y cant o BSA mewn PBS am 30 munud ac yna eu deor â gwrth-F4/80(1:50, BIO-RAD Cl: A3-1) dros nos mewn 4 gradd ystafell oer, ac wedi hynny gyda gwrthgorff eilaidd (Tech 1:200 signalau Cell #4417) ar dymheredd ystafell am 1 awr, ac yna gwrth-staenio gyda 300 nmol/L DAPI(4'6-dimidino-2-ffenyl -indole, dihydrochloride, Invitrogen) am 3 munud. Cafodd y signalau imiwnfflworoleuedd eu delweddu o dan ficrosgop confocal Zeiss LSM{800-Airy confocal. dewiswyd tri anifail a thri maes cae o'r ddelwedd (200 ×) ar hap. Mesurwyd signalau positif F4/80 gan ddefnyddio meddalwedd ImageJ/Fiji ac fe'u cyfrifwyd fel cymhareb y signalau positif i DAPI.

2.11. Diwylliant celloedd

Cafodd celloedd endothelaidd glomerwlaidd llygod mawr (GECs)(DSMZ ACC262, yr Almaen) eu meithrin mewn cyfrwng RPMI1640(Gibco 21870-076) gyda 10 y cant o serwm buchol ffetws a 2 m ML-Glutamine (Gibco 25030-082), penisilin a streptomycin (50 mg/L, Gibco 15140-122). Roedd celloedd yn cael eu cynnal ar 37 gradd mewn awyrgylch llaith o 5 y cant CO2. Mewn arbrofion hypocsia, deorwyd celloedd yn HBSS (Gibco 14025-092) yn lle'r cyfrwng di-serwm mewn siambr ag ocsigen 1 y cant ar 37 gradd C am 2 awr. Cafodd celloedd eu deori ymlaen llaw â nitraid (10 μM), gyda / heb yr atalydd xanthine oxidoreductase (XOR) febuxostat (100 nM), am 30 munud cyn hyp-ocsia. Gwerthuswyd hyfywedd celloedd gan assay PrestoBlue⑧ (Invitrogen, A13261, ac A13262), ac aseswyd marwolaethau celloedd gan assay gwaharddiad Trypan Blue (Sigma, T8154-20 ML).

2.12. Canfod ROS mitocondriaidd

Canfuwyd lefelau uwchocsid mitocondriaidd gyda llifyn fflworogenig (MitoSOXTM, Invitrogen M36008). Ar ôl triniaeth, deorwyd y celloedd endothelaidd â 2 μmol/L MitoSox mewn cyfrwng meithrin ar 37 gradd am 10 munud. Yna golchwyd y celloedd â 1 × HBSS ddwywaith a mesurwyd y signal fflwroleuol (darllenydd SpectraMax iD3, Dyfeisiau Moleciwlaidd, UDA) a'i normaleiddio i hyfywedd celloedd.

2.13. Dadansoddiad imiwnoblotting

Rhoddwyd samplau arennau wedi'u rhewi neu gelloedd endothelaidd mewn byffer yn cynnwys 10 mmol/L Tris-HCl pH 8, 150 mmol/L NaCl, 5 mmol/L EDTA, 60 mmol/L N-octyl-glucoside, 1 y cant Triton X{{9 }}, coctel atalydd proteas, ac atalyddion ffosffatas protein. Cafodd y lysates cell neu feinwe eu centrifugio am 5 munud ar 10,000 × g ar 4 gradd . Trosglwyddwyd y supernatants/proteinau i diwbiau newydd a'u meintioli gan ddefnyddio'r Bio-Rad

assay protein. Dadansoddwyd echdynion protein yn cynnwys swm cyfatebol o broteinau trwy ddefnyddio electrofforesis gel dodecyl sylffad-polyacrylamid y cant (SDS-PAGE). Trosglwyddwyd proteinau i bilen polyvinylidene defluoride immobilon am 1 awr ar 300 mA.Cafodd pilenni eu rhwystro mewn 20mM Tris-HCl (pH7.4), 150 mM NaCl, a 0.1 y cant Tween 20 (TBS-T) yn cynnwys 5 y cant yn rhydd o fraster powdr llaeth am 1 h ac wedi'i imiwno-ganfod â gwrthgyrff i gwrth-TFAM (1: 2000, ab131607), gwrth-OXPHOS (1: 1000, ab110413), gwrth-vinculin (1: 5000, ab129002)(Abcam Cambridge, UK) a gwrth - Caspase hollt-3 (1:1000,#9664)(Technoleg Signalau Cell, Beverly, MA, UDA). Daeth yr holl wrthgyrff eilaidd ar gyfer dadansoddiad imiwnoblot o Dechnoleg Signalau Cell. Ar gyfer blots Gorllewinol, dangosir delweddau hyd llawn heb eu tocio, anodedig gyda marcwyr MW yn y Ffeil Atodol.

2.14. Dadansoddiad ystadegol

Dadansoddwyd cymariaethau lluosog ymhlith grwpiau gan ANOVA unffordd neu ddwy ffordd ac yna prawf ôl-hoc a argymhellir. Cyflwynir data fel cymedr ± SEM. Gwnaed yr holl gyfrifiadau ystadegol gan ddefnyddio Graphpad Prism 8.0. Diffiniwyd arwyddocâd ystadegol fel t<>