Glycosides Phenylethanol O Herba Cistanche Gwella'r Microamgylchedd Tiwmor Hypocig A Gwella Effeithiau Oxaliplatin

Cyswllt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

LIMEI WEN1,2*, JUNPING HU1*, JIAWEI ZHANG1 a JIANHUA YANG1,2

Haniaethol.Canser yr iau yw un o'r mathau mwyaf cyffredin o tiwmor malaen ac fe'i nodweddir gan faleisusrwydd uchel, yn gyflym dilyniant, afiachusrwydd uchel, a marwolaethau. Oxaliplatin (OXA) adroddwyd bod ganddynt effeithlonrwydd amlwg yn erbyn uwch canser yr afu/iau gyda gwenwyndra y gellir ei oddef. Mewn tiwmorau solet, mae'r hypocig microamgylchedd yn hyrwyddo pontio epiotheliol-mesenchymal (EMT), sydd hefyd yn gallu achosi ymwrthedd i gyffuriau i ganser yr afu i gyffuriau platinwm. Mae Herba Cistanche (Cistanche tubulosa) wedi cael eu defnyddio'n aml mewn meddygaeth Tsieineaidd draddodiadol a'r glycosidau ffenylethanol o Herba Cistanche (CPhGs) yw'r cydrannau gweithredol mawr. Nod yr astudiaeth bresennol oedd ymchwilio i effeithiau CPhGs ar hyfywedd, apoptosis, mudo, a goresgyniad o gelloedd canser yr afu. Roedd celloedd canser yr iau HepG2 yn wedi'i rannu'n reolaeth, DMSO, CoCl2, OXA, OXA + CoCl2 a grwpiau CPhGs + OXA + CoCl2. Wedi hynny, gwrthdroi PCR meintiol trawsgrifio a dadansoddiad blot gorllewinol oedd perfformio i bennu lefelau mynegiant y ffactor hypocia-inducible 1α (HIF-1α), lysyl oxidase-fel 2 (LOXL2), a genynnau a phroteinau sy'n gysylltiedig ag EMT (h.y., E-cadherin a Twist), yn mwyn ymchwilio i effeithiau CPhGs ar ganser yr afu. Y canlyniadau'n dangos y gallai CPhGs wella effeithiau OXA ar ganser yr iau, ac yn atal y mudo, yr ymosodiad, a cyfradd apoptotig celloedd canser yr afu. Yn ogystal, roedd triniaeth CPhGs yn ysgogi israddio HIF-1α, LOXL2, a Twist, a rheoleiddio E-cadherin yn effeithiol. Mae'r canfyddiadau presennol bod CPhGs wedi sbarduno cynnydd sylweddol mewn sensitifrwydd i OXA a rhwystro EMT a ysgogwyd gan hypocia mewn afu/iau canser drwy atal llwybr signalau HIF-1α. Felly Gellir ystyried CPhGs yn synhwyrydd cyffuriau platinwm effeithiol, a allai wella effeithlonrwydd cemotherapi mewn cleifion ag canser yr afu.

sistanchGallaigwella effeithlonrwydd cemotherapimewn cleifion â chanser yr afu.

Cyflwyniad

Mae canser yr iau yn diwmor malaen sydd fel arfer yn cynnwys y system dreulio, ac mae'n cynnwys mathau cynradd ac uwchradd. Mae canser yr afu/iau sylfaenol wedi'i rannu'n garsinoma hepatogellog a cholangiocarcinoma ymwthiol (1,2). Yn nodedig, mae'r iau canser yn gysylltiedig â chyfradd uchel o achosion a marwolaethau byd-eang (3). Yn ôl Sefydliad Iechyd y Byd, mae'n rhagwelir y bydd >1,000,000 yn gysylltiedig â chanser yr afu marwolaethau erbyn 2030, ac o'r achosion sydd newydd eu cadarnhau, y rhai yn tir mawr Bydd Tsieina yn cyfrif am 46.6%.

Adroddwyd bod Oxaliplatin (OXA) yn atal effeithiau ar dwf canser yr afu/iau gyda gwenwyndra y gellir ei oddef mewn lleoliadau clinigol. Serch hynny, mae effeithlonrwydd cyffredinol mae therapi cyffuriau sy'n seiliedig ar blatinwm yn cael ei lesteirio gan ymwrthedd celloedd tiwmor (4). Cydnabyddir yn dda fod canser yr iau yn arddangos sensitifrwydd is i gemotherapi o'i gymharu â mathau eraill o ganser. Mae ymwrthedd amlddrug canser yr afu wedi cyfrannu at ei ymwrthedd i nifer o asiantau therapiwtig (5). Yn astudiaeth flaenorol, adroddodd Xie a Zhong (6) fod HepG2 roedd celloedd yn dangos sensitifrwydd gwael i adriamycin, 5-fflworid, a cisplatin o dan amodau hypocig. Er gwaethaf y ffaith bod asiantau cemotherapi platinwm yw'r prif opsiynau triniaeth ar gyfer canser, mae ymwrthedd i'r cyffuriau hyn yn bodoli ymhlith cleifion. At hynny, mae prognosis cleifion ag mae canser yr afu yn parhau'n wael (7,8). Hyd yma, mae ymdrechion helaeth wedi wedi'u gwneud i ymchwilio i ymwrthedd i gyffuriau ac i wella cyffuriau sensitifrwydd mewn cleifion â chanser yr afu.

O dan amodau hypocig, mae ailgartrefu'n digwydd yn celloedd canser, sy'n gallu arwain at epiotheliol-mesenchymal pontio (EMT) a dynwared fasgwlaidd (VM). EMT a Gall VM wedyn hyrwyddo goresgyniad a metastasis pell. At hynny, mae EMT wedi'i ddyfalu i wasanaethu rôl fel y sbardun ar gyfer dilyniant canser (9). Yn ychwanegol mae ffactorau sy'n ysgogi hypocia (HIFs) yn ymwneud â neovessel ffurfio, metabolaeth ynni, amledd cellog, goresgyniad, a metastasis (10).

Mae protein Lysyl ocsid (LOX)-fel 2 (LOXL2) yn aelod o'r teulu LOX ac mae'n gysylltiedig iawn â'r cofalent croesgysylltu collagen ac elastin, sy'n gallu arwain at ffibrosis ac sy'n hanfodol ar gyfer uniondeb yr alloffer matrics (11). Mewn astudiaeth flaenorol, ystyriwyd LOXL2 bod â chysylltiad agos â metastasis celloedd canser (12). At hynny, dangoswyd bod LOXL2 yn modiwleiddio'r pathogenesis a dilyniant nifer o fathau o faleisus canser drwy lwybrau ychwanegol ac ymwthiol, a oedd yn mynegeion pwysig ar gyfer gwerthuso prognosis gwael (13,14).

Mae Herba Cistanche yn berlysiau tonig a ddosberthir yn gyffredin yn rhanbarthau anialwch, sydd wedi cael eu defnyddio'n aml mewn traddodiadol Meddygaeth Tsieineaidd (15,16). Cistanche tubulosa (C. tubulosa) yn feddyginiaeth llysieuol naturiol a blannwyd yn gyffredin yn Xinjiang Rhanbarth Ymreolaethol. Mae'r glycosidau ffenylethanol o Herba Cistanche (CPhGs) yn gwasanaethu fel un o'r prif weithgar gydrannau Herba Cistanche. Yn flaenorol, Hu et al (17) nodi y gallai CPhGs ddwysáu anaf i'r iau yn H22 llygod sy'n cario tiwmor ac yn llesteirio twf celloedd canser. Ef awgrymwyd y gallai'r mecanwaith sylfaenol fod yn gysylltiedig i ostyngiad mewn serum α-fetoprotein a gallai wella imiwnedd yn y llygod.

Yn yr astudiaeth bresennol, model hypocig o afu HepG2 roedd celloedd canser yn cael eu cymell gan ddefnyddio CoCl2. Ar y sail hon, mae'r astudiaeth bresennol yn anelu at ymchwilio i effeithiau OXA ar y amlhau, apoptosis, mudo, ac ymosodiad ar ganser celloedd ym mhresenoldeb CPhGs o dan amodau hypocig. Yn ychwanegol, lefelau mynegiant mRNA a phrotein HIF-1α, Canfuwyd LOXL2, E-cadherin a Twist. At hynny, mae'r union fecanweithiau sy'n sail i effeithiau CPhGs ar y ymchwiliwyd i bathogenau o ganser yr afu.

Deunyddiau a dulliau

Llinell celloedd.

Llinell gell canser yr iau HepG2, fel y nodwyd gan ddefnyddio y dull STR, ei ddarparu gan yr Ymchwil Glinigol Sefydliad, Ysbyty Cysylltiedig Cyntaf Xinjiang Meddygol Prifysgol (Urumqi, Tsieina). Cafodd y celloedd eu diwylliant yn DMEM glwcos uchel (HyClone; Cytiva) sy'n cynnwys 10% o'r ffetws serum buchol (FBS; Hyclone; Cytiva) ar 37°C mewn deorydd sy'n cynnwys 5% CO2.

Paratoi CPhGs.

C. echdynnu tiwbosa (CPhGs) cafwyd gan Hetian Dichen Biotech Co,, Ltd. Y cynnwys CPhGs oedd >80%, ac ymhlith y rhain roedd cynnwys echinacoside a ferffacose oedd 44.5 ac 16.1%, yn y drefn honno. Stems o C. tubulosa (Schrenk) Casglwyd Wight yn Hydref 2016 gan Xinjiang, Tsieina. Nodwyd y planhigyn gan Dr. Junping Hu. Mae'r holl sbesimenau talebau hyn (rhif 201610) wedi'u hadneuo yn y Planhigion Herbarium, Ysgol y Fferyllfa, Prifysgol Feddygol Xinjiang, Xinjiang, Tsieina.

costancheechdynnuoHetian Dichen Biotech Co, Ltd.

Dylunio arbrofol.

Celloedd HepG2 (5x104 /ml) eu trin gyda chrynodiadau amrywiol o CPhGs (5, 25, 50, 100, 200 a 500 μg/ml) am 48 h ar 37°C (24 h ar ôl hadu) i sgrinio CPhGs-L/M/H dos. Celloedd HepG2 (5x104 /ml) oedd rhannu'n grwpiau canlynol: i) Grŵp rheoli, wedi'i ddiwyllio mewn DMEM glwcos uchel; ii) grŵp DMSO, wedi'i ddiwyllio mewn 0.1% DMSO (v/v); iii) Grŵp CoCl2 (grŵp model hypocia), wedi'i ddiwyllio mewn DMEM di-sero sy'n cynnwys 100 μM CoCl2; iv) OXA grŵp (grŵp rheoli cadarnhaol), wedi'i ddiwyllio mewn 5 μM OXA (Beijing Solarbio Gwyddoniaeth & Technology Co, Ltd.); v) OXA + CoCl2 grŵp, wedi'i ddiwyllio mewn 5 μM OXA ynghyd â 100 μM CoCl2; a vi) grwpiau CPhGs, wedi'u trin â CPhGs-L/M/H (25, 50 a 100 μg/ml, yn y drefn honno) ynghyd â 5 μM OXA a 100 μM CoCl2.

Ymosodiad hyfywedd celloedd.

Penderfynwyd ar hyfywedd celloedd gan ddefnyddio Cell Cyfrif Kit-8 (CCK-8) ymosodiad yn ôl y gwneuthurwr cyfarwyddiadau (Beijing Solarbio Science & Technology Co, Ltd.) ac fel y disgrifiwyd yn flaenorol (18). Celloedd (2.0x103 celloedd/da) eu hadu mewn platiau 96-da. Wedi hynny, mae 24 h ar ôl hadu, roedd celloedd yn cael eu trin am 48 h yn ôl y driniaeth amodau ym mhob grŵp. Yna disodlwyd y cyfrwng gyda 100 μl DMEM glwcos uchel, ac yna'r ychwanegiad o 10 μl CCK-8 adagent; roedd y celloedd wedi'u deori am 1 h ar 37°C. Mesurwyd dwysedd optegol gan ddefnyddio aml-ganfod darllenydd microplat (Thermo Fisher Gwyddonol, Inc.) ar 450 nm. Paratowyd chwe dyblygiad ar gyfer pob cyflwr.

Penderfynu ar gyfradd apoptotig.

Penderfynwyd ar gyfradd apoptotig defnyddio Pecyn Canfod Apoptotig Atodiad V/PI (Beijing Solarbio Gwyddoniaeth & Thechnoleg Co, Ltd.). Celloedd HepG2 (5x105 ) oedd wedi'u brechu mewn platiau 6-da ar 37°C mewn 5% CO2. Wedi hynny, mae 24 h ar ôl triniaeth, roedd y celloedd wedi'u diwylliant mewn DMEM di-sero ar gyfer 4 h. Yna treuliwyd y celloedd gan ddefnyddio 0.25% wedi'u trypsineiddio (Gibco; Thermo Fisher Gwyddonol, Inc.), ac yna o leiaf dri golchfa gyda PBS wedi'i oeri ymlaen llaw. Ar ôl canoli am 167.7 x g am 5 munud ar 4°C, cafodd y celloedd eu had-dalu gyda byffer rhwymol 1X a addaswyd y crynodiad i 1 ~ 5x106 /ml, ac yna wedi'i staenio gyda 5 μl Atodiadin V-FITC a 5 μl PI am 15 munud yn yr ystafell tymheredd. Yna cafodd y celloedd cytometreg llif gan ddefnyddio Cytomedr llif BD LSRFortessa (BD Biowyddorau) a FlowJo 10.6.2 meddalwedd (Tree Star, Inc.).

Tabl I. Dilyniannau Primer

Ymosodiad gwella clwyfau.

Effeithiau ataliol CPhGs ar gell archwiliwyd mudo gan ymosodiad gwella clwyfau (19). Mae'r celloedd wedi'u hadu'n blatiau 6-da nes bod monolayer 100% yn cael ei ollwng wedi'i gael. Wedi hynny, cafodd y celloedd eu clwyfo gan ddefnyddio Tip pibellau 200-μl, wedi'i olchi â PBS a'i deori â thriniaethau mewn cyfrwng di-sero. Ar ôl triniaeth cyffuriau, mae'r clwyf yn gwella mesurwyd cyflymder yn 0, 12, 24 a 48 h, yn y drefn honno. Anaf cafwyd delweddau gan ddefnyddio microsgop fflworoleuol (Nikon Ti-S, Japan) o dan chwydd o x10. Cau clwyfau oedd mesur gan y pellter clwyfau ym mhob cyfnod a'i fynegi fel canran o'r pellter clwyfau cychwynnol ar 0 h.

Ymosodiadau trawswell.

Aseswyd goresgyniad celloedd gan Transwell ymosodiadau. Ataliwyd celloedd (celloedd 1x105/ml) yn 200 μl DMEM glwcos uchel heb FBS. Yna cafodd y celloedd eu hadu ar ffynhonnau uchaf wedi'u gorchuddio â Matrigel wedi'u gorchuddio â polyethylen hidlydd terephthalate cofiadwy (maint pore, 8.0 μm). Mae cyfanswm o Gosodwyd 500 μl DMEM glwcos uchel yn cynnwys 10% FBS yn y siambr is. Defnyddiwyd swabiau cotwm i dynnu'r celloedd ar wyneb uchaf yr hidlydd ar ôl 48 h ar 37°C. Y celloedd a ymlid drwy'r membran wedi'u gosod gyda 4% paraffurfaldiffyg am 30 munud. Wedi hynny, roedd celloedd wedi'u staenio gyda 0.1% o fioled grisial am 15 munud ar dymheredd ystafell. Gwelwyd celloedd goresgynnol o dan ficrosgop fflworoleuol (Nikon Ti-S) ar chwydd o x100.

Ffigur 1. Effeithiau crynodiadau gwahanol o CPhGs ar gell HepG2 hyfywedd ar ôl 48 h.

Gwrthdroi'r PCR meintiol -meintiol (RT-qPCR).

Cyfanswm Cafodd RNA ei echdynnu o gelloedd HepG2 gan ddefnyddio adweithydd TRIzol® (Invitrogen; Thermo Fisher Gwyddonol, Inc.) a cDNA synthesis yn cael ei gynnal gan ddefnyddio pecyn aduniad PrimeScript RT (Takara Bio, Inc.) yn ôl protocol y gwneuthurwr. qPCR ei pherfformio ar system PCR Amser Real 7500 (Cymhwysol Biosystemau; Thermo Fisher Gwyddonol, Inc.) defnyddio gwyrdd™ TB Premix Ex Taq™ (Takara Bio, Inc.) yn ôl protocol y gwneuthurwr. Mae'r primers a ddefnyddir ar gyfer qPCR wedi'u rhestru yn Nhabl I. Roedd amodau PCR yn cynnwys gwadu ar 95°C am 30 sec, ac yna 40 cylch o wadu ar 95°C am 5 sec a atodi ar 60°C am 30 sec. Yn olaf, mae'r canlyniadau ymhelaethu eu dadansoddi gan ddefnyddio'r dull 2-ΔΔCq (20).

Dadansoddiad blot y Gorllewin.

Cafodd proteinau eu tynnu o gelloedd trin am 48 h drwy homogeneiddio mewn clustogi lysis RIPA (Thermo Fisher Gwyddonol, Inc.) sy'n cynnwys swildod protease a ffosffad. Penderfynwyd ar gynnwys protein celloedd gan ddefnyddio dull y BCA. Yna gwahanwyd Proteinau (40 μg) gan SDS-PAGE ar gel 10% a'i drosglwyddo i membran PVDF. Cafodd y membran ei rwystro mewn 5% o laeth nad yw'n llaeth am 1 h ar 4°C, a'u deori gyda'r gwrthgyrff sylfaenol canlynol: β-actin (1:5,000; cath. bs-0061R; BIOSS), HIF-1α (1:1,000; cath. Na. ab179483; Abcam), LOXL2 (1:500; cat. ab179810; Abcam), E-cadherin (1:1,000; cat. bs-10009R; BIOSS) a Twist1 (1:500; cath. bs-2441R; BIOSS) dros nos ar 4°C. Y yna cafodd membran ei deori gyda gwrth-gwningen geifr IgG H&L gwrthgyrff eilaidd (1:2,000; cath. ab205718; Abcam) am 4 h ar dymheredd ystafell. Ar ôl golchi gyda TBS-0.05% Tween-20, delweddwyd y blotiau gan ddefnyddio'r Gwell System Chemiluminescence (Amersham; Cytiva). Mae'r perthynas roedd dwysedd y bandiau wedi'i led-fesur gan ddwysedd dadansoddiad gan ddefnyddio meddalwedd ImageJ2x (fersiwn 2.1.4.7; Rawak Meddalwedd Inc.), a lleiniau dwysedd o'r canlyniadau oedd normaleiddio i ddwyster β-actin.

Ffigur 2. Effeithiau CPhGs ynghyd ag OXA ar hyfywedd HepG2 celloedd yn 48 h.

Dadansoddiad ystadegol.

Meddalwedd SPSS 19.0 (SPSS, Inc.) ei ddefnyddio ar gyfer dadansoddi data. Cyflwynir data fel y golygu ± wyriad safonol ac fe'u dadansoddwyd gan un ffordd ANOVA ac yna prawf ôl-hoc Tukey. P<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="" difference.="" all="" experiments="" were="" performed="" at="" least="" in="">

Canlyniadau

Effeithiau CPhGs ar hyfywedd celloedd.

Roedd celloedd HepG2 yn cael eu trin gyda chrynodiadau amrywiol o CPhGs (5, 25, 50, 100, 200 a 500 μg/ml) am 48 h (24 h ar ôl hadu). Fel y dangosir yn Ffig. 1, bu gostyngiad sylweddol yn hyfywedd celloedd a gafodd eu trin gyda 200 a 500 μg/ml CPhGs o'i gymharu â'r grŵp rheoli (P<0.05). these="" findings="" indicated="" that="" cphgs="" could="" modulate="" cell="" viability="" in="" a="" dose‑dependent="">

Mae CPhGs yn gwella effeithiau OXA ar ganser yr iau.

Y effeithiau CPhGs ar hyfywedd celloedd HepG2 wedi'u modiwleiddio OXA eu hasesu wedyn (Ffig. 2). Ar ôl ~48 h, mae'r cyfuniad o CPhGs ac OXA wedi lleihau'n sylweddol y hyfywedd celloedd HepG2 o'i gymharu â'r un yn y grŵp OXA +CoCl2. Yn benodol, CPhGs-M + OXA + CoCl2 a Roedd CPhGs-H + OXA + CoCl2 yn cyfyngu'n sylweddol ar hyfywedd o gelloedd HepG2 o'i gymharu â'r grŵp OXA + CoCl2 (P<0.05 and=""><0.01,>

Ffigur 3. Effeithiau'r CPhGs ynghyd ag OXA ar fudo ac ymosodiad celloedd HepG2 ar 48 h.

Mae CPhGs yn llesteirio mudo ac ymosodiad celloedd canser yr afu.

Astudio ymhellach botensial ymledol a gallu mudol celloedd canser yr afu yn dilyn triniaeth gyda CPhGs ac OXA, perfformiwyd ymosodiadau gwella clwyfau a Thrawswell. Y ymosodiad gwella clwyfau yn dangos, o'i gymharu â hynny yn y grŵp DMSO, gostyngwyd mudo celloedd HepG2 yn dilyn triniaeth gyda CoCl2, OXA, a CPhGs (200 neu 500 μg/ml) (P<0.05; fig.="" 3a="" and="" b).="" for="" the="" transwell="" assay,="" the="" invasive="" ability="" of="" cells="" was="" markedly="" inhibited="" in="" the="" co-treatment="" groups="" (cphgs="" +="" oxa="" +="" cocl2)="" compared="" with="" that="" in="" the="" oxa="" +="" cocl2="" group=""><0.01; fig.="" 3c="" and="" d).="" conversely,="" in="" the="" co‑treatment="" groups="" (cphgs="" +="" oxa="" +="" cocl2),="" the="" invasive="" potential="" and="" migratory="" ability="" of="" cells="" were="" markedly="">

Effeithiau CPhGs ac OXA ar apoptosis.

Canlynol driniaeth gyda'r cyfuniad o CPhGs ac OXA ar gyfer 48 h, roedd celloedd HepG2 wedi'u staenio gydag Atodiad V-FITC a PI, ac yna cytometreg llif i bennu cellog apoptosis. Fel y dangosir yn Ffig. 4A, mae'r grwpiau cyd-driniaeth (CPhGs-L/M/H + OXA + CoCl2) yn dangos gweddlun graddol yng nghyfran y celloedd apoptotig gyda'r cynnydd mewn CPhGs Crynodiad. Mae'r rhan fwyaf o'r celloedd sy'n cael eu trin â CPhGs a Lleolwyd OXA yn rhanbarth C4, a ddangosodd fod y cyfuniad o CPhGs ac OXA a ysgogodd apoptosis yn y cyfnod cynnar. O'i gymharu ag yn y grŵp OXA + CoCl2, mae canfuwyd gweddlun sylweddol yng nghyfradd apoptotig celloedd yn y grwpiau sy'n cael eu trin ag OXA, CoCl2, a chymedrol neu uchel dosau o CPhGs (P<0.01; fig.="" 4b).="" these="" findings="" indicated="" that="" the="" combination="" of="" oxa="" and="" cphgs="" may="" contribute="" to="" the="" apoptosis="" of="" hepg2="">

mRNA lefelau mynegiant HIF-1α, LOXL2, E-cadherin a Twist yn dilyn CPhGs a chyd-deori OXA.

Oedd dim gwahaniaethau ystadegol yn lefelau mynegiant mRNA o HIF-1α, LOXL2, E-cadherin a Twist rhwng y rheolydd a grwpiau DMSO (P>0.05; Ffig. 5A-D). I'r gwrthwyneb, coCl2 ysgogi cynnydd sylweddol yn lefelau mynegiant mRNA o LOXL2, HIF-1α a Twist o'i gymharu â'r rhai yn y grŵp DMSO (P<0.01; fig.="" 5a,="" b="" and="" d).="" compared="" with="" those="" in="" the="" oxa="" +="" cocl2="" group,="" the="" mrna="" expression="" levels="" of="" loxl2,="" hif‑1α="" and="" twist="" were="" significantly="" enhanced="" in="" the="" cphgs‑h="" +="" oxa="" +="" cocl2="" groups=""><0.01; fig.="" 5a,="" b="" and="" d).="" by="" contrast,="" cocl2="" induced="" a="" significant="" downregulation="" in="" the="" mrna="" expression="" levels="" of="" e‑cadherin="" compared="" with="" those="" in="" the="" dmso="" group=""><0.01; fig.="" 5c).="" all="" concentrations="" of="" cphgs="" combined="" with="" oxa="" and="" cocl2="" were="" able="" to="" upregulate="" the="" mrna="" expression="" levels="" of="" e‑cadherin="" compared="" with="" those="" in="" the="" oxa="" +="" cocl2="" group=""><0.01; fig.="" 5c).="" these="" results="" indicated="" that="" the="" combination="" of="" cphgs="" and="" oxa="" effectively="" inhibited="" the="" emt="" under="" hypoxic="">

Ffigur 4. Effaith CPhGs ynghyd ag OXA ar ganran y celloedd HepG2 apoptotig ar 48 h, fel y'i pennwyd gan staeniau dwbl Atodiadin-V/PI.

Lefelau mynegiant protein o HIF-1α, LOXL2, E-cadherin, a Twist yn dilyn CPhGs a chyd-deori OXA. Mae'r canlyniadau o blotting gorllewinol yn datgelu bod y lefelau mynegiant protein o HIF-1α, LOXL2, ac roedd Twist wedi'u rheoleiddio o dan hypocig amodau o'i gymharu â'r rhai yn y grŵp DMSO. I'r gwrthwyneb, roedd lefelau mynegiant protein E-cadherin wedi'u hisreoleiddio dan amodau hypocig (P<0.01; fig.="" 6a="" and="" b).="" notably,="" the="" protein="" expression="" levels="" of="" hif‑1α,="" loxl2,="" and="" twist="" were="" significantly="" decreased="" in="" the="" cphgs‑m="" +="" oxa="" +="" cocl2="" or="" cphgs‑h="" +="" oxa="" +="" cocl2="" groups="" compared="" with="" those="" in="" the="" oxa="" +="" cocl2="" group=""><0.01; fig.="" 6a="" and="" b).="" compared="" with="" the="" dmso="" group,="" the="" cocl2="" treatment="" significantly="" decreased="" the="" expression="" level="" of="" e‑cadherin.="" in="" the="" cphgs="" groups,="" the="" protein="" expression="" levels="" of="" e‑cadherin="" were="" significantly="" increased="" compared="" with="" those="" in="" the="" oxa="" +="" cocl2="" group=""><0.01; fig.="" 6b).="" these="" findings="" indicated="" that="" cphgs="" treatment="" could="" effectively="" inhibit="" the="" downregulation="" of="" e‑cadherin,="" and="" the="" upregulation="" of="" hif‑1α,="" loxl2,="" and="" twist="" induced="" by="">

cistanche yn lleihau colesterol

Trafodaeth

Mae Hypocia yn nodwedd gyffredin yn y microamgylchedd canser; mae hyn yn gysylltiedig yn bennaf â'r ffaith bod y nifer fawr o gelloedd canser yn gyflymach o'i gymharu â'r ffurfio fasgwlaidd o neovessels aberrant. Yn ogystal, mae prosesau biolegol eraill, gan gynnwys parhad, metastasis, a sensitifrwydd cyffuriau yn cael eu effeithir arnynt gan hypocia (21). Y microamgylchedd hypocig tiwmor yn hanfodol ar gyfer pathogenesis a dilyniant canser, a mae hefyd yn bwysig o ran ymwrthedd i gyffuriau a fasgwlaidd o ganser yr afu (22).

Yn yr astudiaeth bresennol, roedd celloedd HepG2 yn cael eu trin â gwahanol crynodiadau o CPhGs, y mae CPhGs (200 μg/ml) yn eu plith gallai achosi gostyngiad sylweddol mewn hyfywedd celloedd. Arbennig Gallai CPhGs fodiwleiddio hyfywedd cellog mewn dos-ddibynnol modd. O dan amodau hypocig, mae'r cyfuniad o OXA a CPhGs (50 neu 100 μg/ml) yn cyfyngu'n sylweddol ar y hyfywedd celloedd HepG2 o'i gymharu â thriniaeth OXA yn unig. Gwelwyd tuedd debyg sy'n dibynnu ar ddos yn yr ymfudo ac ymosodiadau ymledol ar gelloedd canser yr afu. Ar hyn o bryd, mae'n helaeth cynhaliwyd astudiaethau i ymchwilio i rolau canser apoptosis celloedd yn pathogenesis clefyd yr afu (23-26). Datblygwyd sawl strategaeth ar gyfer trin canser yr afu drwy hyrwyddo apoptosis (27-29); felly, mae ymyrraeth yn Gall apoptosis celloedd HepG2 fod yn ymgeisydd addawol ar gyfer atal a thrin canser yr afu. Mae'r apoptosis o Cafodd celloedd HepG2 eu gwella'n sylweddol yn dilyn triniaeth gyda'r cyfuniad o CPhGs-M/-H ac OXA o'i gymharu â hynny mewn celloedd sy'n cael eu trin ag OXA yn unig. Felly, roedd yn nodi y gallai CPhGs wella effeithiau gwrth-tiwmor OXA yn sylweddol.

Gall HIF-1α uwchraddio lefelau mynegiant E-cadherin, N-cadherin, a Vimentin, yn ogystal â rhywfaint o drawsgrifio ffactorau, megis Snail1/2, Sioni 1, a Twist1. Wedi hynny, mae hyn gallai arwain at golli polareiddio cellog, colli cell celloedd cyffyrdd, newidiadau mewn protein cytosgerbydol, a'r mudo ac ymlediad celloedd canser, a allai arwain at y trawsleoli celloedd canser i'r system gylchredol drwy y basilar membran a'r metastasis dilynol (30). Yn y astudiaeth bresennol, defnyddiwyd CoCl2 i ysgogi model o hypocia, a sbardunodd gynnydd yn hyfywedd celloedd HepG2, fel ogystal â mudo celloedd ac ymosodiad. At hynny, mae'r mRNA ac roedd lefelau mynegiant protein HIF-1α yn sylweddol cynyddu, gan nodi bod CoCl2 wedi ysgogi cynhyrchu microamgylchedd hypocig. Triniaeth gyda'r cyfuniad o CPhGs ac OXA yn cyfyngu'n sylweddol ar y mRNA a'r protein lefelau mynegiant o HIF-1α a ysgogwyd gan hypocia. Mae'r canfyddiadau hyn awgrymu y gallai CPhGs ddwysáu'r microamgylchedd o ganser yr afu mewn modd sy'n dibynnu ar ddos.

Mae E-cadherin yn moleciwl adhesion Ca2+-dibynnol, sy'n â rôl allweddol mewn adhesiad celloedd celloedd, cynnal a chadw'r uniondeb o strwythur meinweoedd, a throsglwyddo signalau. Mewn achosion o israddio neu hyd yn oed golli swyddogaeth adhesiad, celloedd canser gall arddangos amlhau a difrïo heb reolaeth, a allai hyrwyddo mwy o ymosodiad ar gelloedd canser a metastasis dilynol(31). Yn ogystal, mae E-cadherin yn hanfodol ar gyfer atal EMT celloedd canser, sydd â chysylltiad agos â'r gwahaniaethu, yr ymosodiad, metastasis a'r prognosis o malaen epiotheliol lluosog. EmT-inducing transcription ffactorau (EMT-TFs), fel Twist, Snail, a Sioni, yn hanfodol ar gyfer EMT. Adroddwyd bod Hypocia wedi rhoi signalau ar waith llwybrau sy'n ysgogi mynegiant EMT-TF; yn arbennig, gallai hyrwyddo EMT yn uniongyrchol drwy actifadu trawsgrifiadol o ffactorau hyn (32). Mae'r gefeilliaid yn helix-ring-helix wedi'i gadw'n uchel ffactor trawsgrifio sydd newydd ei nodi yn ddiweddar blynyddoedd. Mae mynegiant High Twist wedi'i ganfod mewn nifer o mathau o gelloedd canser(33). Felly, mae'n hanfodol ymchwilio y cysylltiad rhwng mynegiant Twist a'r mudo neu metastasis celloedd canser, yn ogystal ag atal clinigol a trin metastasis(34). Yn yr astudiaeth bresennol, datgelwyd bod lefelau mynegiant mRNA a phrotein E-cadherin eu hisreoleiddio ym mhresenoldeb hypocia, tra bod y mRNA a lefelau mynegiant protein o Twist yn cael eu dyrchafu. Roedd y canfyddiadau hyn yn gyson â chanlyniadau goresgyniad a ymosodiadau mudo, a oedd yn awgrymu y gallai hypocia gyfrannu i ddigwyddiad EMT. Yn dilyn triniaeth gydag OXA, mae'r roedd lefelau mynegiant protein o E-cadherin wedi'u hisreoleiddio; roedd hyn yn dangos bod OXA yn arddangos effeithlonrwydd gwael wrth atal twf celloedd canser yr afu, tra gallai hyrwyddo EMT. Fodd bynnag, ar y cyd â CPhGs, mae'r sensitifrwydd o gelloedd HepG2 i OXA yn dangos gwelliant amlwg mewn presenoldeb hypocia. At hynny, mae cyd-drin â Gallai CPhGs ac OXA atal hyfywedd cellog, mudo ac ymosodiad celloedd HepG2. Dim ond mynegiant Twist ac E-cadherin a ganfuwyd gan yr astudiaeth bresennol; felly, mae astudiaethau yn y dyfodol yn anelu at canolbwyntio ar fwy o farciwyr sy'n gysylltiedig ag EMT, er mwyn gwerthuso effaith lesol CPhGs ar EMT a ysgogwyd gan hypocia yn canser yr afu.

Adroddwyd bod HIF-1α yn hyrwyddo'r ymadrodd o LOXL2, ac i wella mudo ac ymosodiad celloedd canser hepatig, a allai fod â chysylltiad agos â'r prognosis gwael o ganser yr iau (30). Mewn astudiaeth flaenorol, mae'r lefelau mynegiant o LOXL2 mewn meinweoedd canser yr iau cyfagos wedi cynyddu'n sylweddol o'u cymharu â'r rhai yn y canser meinweoedd (35). Yn ogystal, roedd cysylltiad agos rhyngddo a'r ymosodiad a metastasis o ganser yr afu. seilo genynnau LOXL2 gan RNA ymyrryd bach yn llesteirio'r llu o HepG2 a chelloedd SMCC-7721, a arweiniodd at arestio cylch celloedd o celloedd canser a mwy o apoptosis (36). Shao et al (35) ymchwilio i'r gydberthynas rhwng LOXL2 mewn canser yr iau samplau, ffactorau clinigopathig, VM, a phrognosis ymhlith 201 o achosion a gafodd lawdriniaeth i gael triniaeth. Roedd damcaniaethol bod LOXL2 yn gwasanaethu rolau pwysig yn y pathogenesis a dilyniant canser yr afu, a all wasanaethu fel targed ar gyfer datblygu cyffuriau. At hynny, Peng et al (37) dangos y gallai LOXL2 actifadu'r Snail/E-cadherin a llwybrau signalau cinase Src/Focal adhesion, a all gyfrannu at y pathogensis a'r dilyniant o EMT o gelloedd canser gastrig. Yn yr astudiaeth bresennol, o dan amodau hypocig, y mRNA a mynegiant protein lefelau LOXL2 yn cynyddu, tra bod ei fynegiant yn wedi'u hisreoleiddio yn dilyn triniaeth gydag OXA. Ymhellach driniaeth gyda chyfuniad o CPhGs ac OXA wedi arwain at israddio mynegiant LOXL2 amlwg, a all helpu'n effeithiol i effeithiau gwrth-dwll OXA ar ganser yr afu.

costancheEffeithiolyn cynorthwyo'r effeithiau gwrth-tiwmoroOXA ar ganser yr afu.

I gael rhagor o wybodaeth, cliciwch yma.

Mae rhai cyfyngiadau i'r astudiaeth bresennol. Y astudiaeth bresennol fod wedi defnyddio dwy gell ganser yr iau arall llinellau, gan gynnwys llinell gell SMCC-7721, ond gallai'r rhain peidio â chael ei ddefnyddio gan nad oedd yn bosibl prynu'r gell hon llinellau am eu bod wedi'u camddehongli a'u bod yn deillio o celloedd HeLa. Yn ogystal, ni wnaeth yr astudiaeth bresennol ddadansoddi'r effeithiau gwrthocsidiol gwahanol grynodiadau o CPhGs yn y celloedd.

I gloi, gallai CPhGs newid y tiwmor hypocig microamgylchedd celloedd canser yr afu drwy fodiwleiddio'r Llwybr signalau HIF-1α. Yn ogystal, mae sensitifrwydd yr afu/iau celloedd canser i OXA yn cael eu dyrchafu'n sylweddol mewn ymateb i driniaeth gyda chyfuniad o CPhGs ac OXA. Rhain canfyddiadau ddarparu strategaeth driniaeth newydd i wella'r sensitifrwydd canser yr afu i gemotherapi.