Sgrinio Ffytocemegol A Gweithgaredd Estrogenig Cyfanswm Glycosidau O Cistanche Deserticola

Cyswllt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-bost:audrey.hu@wecistanche.com

Haniaethol

Dros y degawdau, bu ymdrechion parhaus i wella ansawdd bywyd dynol. Mae syndrom ôlmenopawsol yn bryder difrifol i les iechyd menywod. Ar hyn o bryd therapi hormonaidd yw'r prif driniaeth ar gyfer y cyflwr hwn. Fodd bynnag, gallai'r therapi hwn arwain at gam-drin estrogen, gan arwain at adweithiau niweidiol a sgîl-effeithiau. O ganlyniad, mae therapi hormonaidd wedi bod yn aflwyddiannus wrth wella syndrom ôlmenopawsol.Cistanche deserticolayn berlysiau tonic clasurol mewn meddygaeth Tsieineaidd traddodiadol. Mae'n dangos gweithgaredd estrogenig sylweddol. Prif gyfansoddion gweithredol y perlysiau hwn yw glycosidau. Mewn arbrawf blaenorol, nodwyd tri ffactor pwysig sy'n cyfrannu at gyfanswm cynnyrch glycosid, cynnyrch acteosid, a gweithgaredd estrogenig, sef, crynodiad eluent, pH, a chyfaint eluent. Yn yr arbrawf hwn, penderfynwyd ar y broses buro optimaidd gan ddefnyddio methodoleg wyneb dylunio-ymateb cyfansawdd canolog i gael glycosidau o'r perlysiau hwn. Canfuwyd bod crynodiad eluent (ethanol) o 85 y cant a chyfaint o 25 BV ar pH o 11 optimaidd. Nodwyd un ar hugain o gyfansoddion gweithredol gan asesiad sbectrometreg màs cromatograffaeth hylif/pedwarpol perfformiad uchel amser hedfan. Mae'r astudiaeth hon yn darparu mewnwelediadau gwerthfawr ar gyfer ymchwil manwl pellach sy'n gwerthuso gweithgareddau estrogenig cyfanswm glycosidauCistanche deserticola.

Geiriau allweddol: Dyluniad cyfansawdd canolog; Cistanche deserticola cyfanswm glycosidau; LC/Q-TOF-MS; technoleg puro; prawf twf groth.

Rhagymadrodd

Cistanche deserticolayn berlysiau tonic bwytadwy, clasurol. Cafodd ei grybwyll gyntaf yn clasur llysieuol Shen Nong ac ymrestrodd yn y radd uchaf. Mae'n berlysieuyn cynnes a melys. Mae ganddo nifer o briodweddau meddyginiaethol, megis maethu'r afu a'r arennau, cryfhau'r cyhyrau a'r esgyrn, a gwella rheoleiddio imiwnedd ynghyd â gweithgareddau gwrth-heneiddio a gwrth-tiwmor [1-4]. Mae rhai cyfansoddion naturiol wedi'u hynysu a'u nodi o echdynion y perlysiau hwn, a'r prif rai yw glycosidau ffenylethanoid, lignanoidau, iridoidau, polysacaridau, ac alcaloidau [5-8].

Mae'r cyffuriau a geir o blanhigion meddyginiaethol yn cynnwys amrywiol gyfansoddion gweithredol, sy'n bennaf gyfrifol am eu gweithredoedd therapiwtig. Gall effeithiolrwydd yr un cyffur a geir o wahanol ffynonellau planhigion amrywio oherwydd y gwahaniaethau yn y math a maint y cyfansoddion gweithredol sy'n bresennol ynddo. Felly, mae'n bwysig nodi a meintioli'r holl gyfansoddion gweithredol sy'n bresennol yn y cyffuriau a geir o blanhigion meddyginiaethol. Mae'r un peth yn wir am C. deserticola. Mae methodoleg arwyneb ymateb yn ddull arbrofol i ymchwilio i'r rhyngweithio rhwng gwahanol ffactorau ar yr un pryd [9-10]. Gellir ei ddefnyddio ar gyfer optimeiddio paramedrau echdynnu ar gyfer ffytoparmaceuticals ac amcangyfrif meintiol o gyfansoddion gweithredol mewn cyffuriau. Mae dylunio cyfansawdd canolog (CCD) yn un o'r dyluniadau arbrofol sy'n ddefnyddiol mewn methodoleg arwyneb ymateb. O'i gymharu â dyluniadau orthogonal ac unffurf, mae gan CCD gywirdeb uwch a rhagweladwyedd gwell [11].

Gall y syndrom postmenopausal leihau ansawdd bywyd menywod yn sylweddol. Fel rheol, defnyddir estrogen i drin y cyflwr hwn. Fodd bynnag, gall defnydd hirdymor o estrogen arwain at gam-drin, a thrwy hynny achosi adweithiau niweidiol a sgîl-effeithiau amrywiol. Felly, mae'n hanfodol dewis therapi amgen, yn ddelfrydol cyffur llysieuol sy'n cynnwys estrogen fel cynhwysyn gweithredol ar gyfer trin syndrom postmenopausal [12-13].

Mewn arbrawf rhagarweiniol, nodwyd strwythurau cyfansoddion naturiol amrywiol a gafwyd o C. deserticola gan ddefnyddio sbectrometreg màs (MS) [14]. Cadarnhawyd mai glycosidau yw'r prif gyfansoddion gweithredol sydd â gweithgaredd estrogenig sylweddol [14-15]. Er mwyn datblygu cynhwysyn gweithredol estrogenig diogel ac effeithiol mewn cyffur newydd, mae angen ymchwiliad manwl i TGCD ar ôl ei buro. Yn yr astudiaeth hon, defnyddiwyd CCD yn gyntaf i optimeiddio puro cyfanswm glycosidau C. deserticola (TGCD). Yn dilyn hynny, defnyddiwyd prawf twf y groth i werthuso gweithgareddau estrogenig yr un glycosid. Defnyddiwyd cromatograffaeth hylif perfformiad uchel/sbectrometreg màs amser hedfan pedwarplyg (HPLC/Q-TOF-MS) ar gyfer dadansoddiad ansoddol o gyfansoddion TGCD ar ôl eu puro. Cymhwyswyd y broses hon i ddangos yn benodol bresenoldeb amrywiol gyfansoddion gweithredol gyda gweithgaredd estrogenig yn TGCD. Gall hyn ar yr un pryd ddarparu sail ar gyfer ei ddefnydd clinigol mewn syndrom ôlmenopawsol yn lle estrogen.

Gweithdrefn Arbrofol

Offerynnau

System Agilent 1290 HPLC (Agilent Technologies, Palo Alto, CA, UDA), system amser hedfan pedwarpôl Agilent 6530 LC/MS (Q-TOF) (Agilent Technologies, Palo Alto, CA, UDA), a Chemical HPLC{ {5}}Defnyddiwyd gweithfannau D fel offer cromatograffig ar gyfer prosesu data. Defnyddiwyd dŵr ultrapur Milli-Q ar gyfer yr astudiaeth gyfan. Cydbwysedd dadansoddol electronig AR1140 (Ohaus International Ltd.); Darllenydd microplate 680 (Bio-Rad Corporation); a defnyddiwyd centrifuge cyflym 64R (Beckman Coulter Allegra) ar gyfer paratoi sampl.

Cyffuriau a chemegau

Prynwyd C. deserticola o'r farchnad gyffuriau a'i nodi gan yr Athro Zhang Delian (Prifysgol Masnach Harbin, Tsieina). Prynwyd diethylstilbestrol safonol (99 y cant pur, lot rhif 60518) gan Dr. Ehrenstorfer (yr Almaen). Cafwyd safonau eraill acteoside (111530-200505) ac echinacoside (111670-200503) gan y Sefydliad Cenedlaethol ar gyfer Rheoli Cynhyrchion Fferyllol a Biolegol, Beijing, Tsieina. Roedd purdeb pob safon yn > 98 y cant . Prynwyd Acetonitrile (ACN), methanol, ac asid fformig (gradd MS) gan Thermo Scientific Pierce (Rockford, IL, UDA). Cafwyd dŵr ultrapure gan Hangzhou Wahaha Group Co, Ltd (Hangzhou, Tsieina). Roedd yr holl adweithyddion oedd ar gael yn fasnachol o radd ddadansoddol.

Paratoi glycosidau cyfanswm o C. deserticola puro hydoddiant

Ar ôl trochi mewn 75 y cant ethanol am 12 h, echdynnwyd y powdr crai o C. deserticola (100 g) gyda 800 ml o 75 y cant (v/v) ethanol ar 80 gradd am 150 munud o dan adlif. Yna cafodd ei hidlo trwy hidlydd dec dwbl ac yna ei dynnu gyda 800 ml o 75 y cant ethanol ddwywaith am 150 munud ychwanegol. Yn dilyn hynny, cyfunwyd yr hidlwyr a'u crynhoi mewn gwactod ar 45 gradd. Cafwyd y dyfyniad trwy dynnu'r toddydd. Ychwanegwyd rhywfaint o ddŵr distyll at y darn i gael crynodiad o 0.5 g/mL, a ddefnyddiwyd i sgrinio'r broses buro.

Ar gyfer arsugniad gan ddefnyddio resin macroporous AB-8, addaswyd pH hydoddiant y sampl prawf i 11. Yn gyntaf, defnyddiwyd dŵr distyll 2 BV i olchi'r amhureddau i ffwrdd. Yna, cafodd yr eluent mewn crynodiad o 25 BV 85 y cant ethanol ei osgoi a'i gasglu. Yn olaf, unwyd yr eluent puredig a gasglwyd. Ychwanegwyd rhywfaint o ddŵr distyll at y darn i gael crynodiad o 1.5 g/mL, a ddefnyddiwyd ar gyfer gweinyddu intragastrig. Ar gyfer rheolaeth gadarnhaol, paratowyd hydoddiant diethylstilbestrol (20 ug / mL) gyda powdr diethylstilbestrol.

Yn ôl y gymhareb puro ({{0}}.6), trosglwyddwyd rhywfaint o'r dyfyniad (sy'n cyfateb i 1 g o C. deserticola) i fflasg folwmetrig 10 mL, hydoddi mewn hydoddiant methanol 50 y cant (v/v) mewn bath ultrasonic am 5 munud, a'i wanhau i 10 mL. Cafwyd yr hydoddiant meddyginiaethol ar ôl hidlo'r supernatant trwy bilen hidlo 0.45 μm. Cafodd acteoside ac echinacoside (1 mg yr un) eu cymysgu a'u diddymu'n llwyr mewn hydoddiant methanol 10 ml 50 y cant (v / v). Yn olaf, cafodd yr ateb safonol ei hidlo trwy hidlydd Millipore 0.45 μm cyn ei ddadansoddi.

Amodau LC-MS

Gwahanwyd cromatograffaeth mewn system HPLC (Agilent 129{{10}}), wedi'i chyfarparu â system dosbarthu toddyddion cwaternaidd, degasifier gwactod, a synhwyrydd arae ffotodiod. Perfformiwyd dadansoddiad MS/MS mewn system Agilent-1290 HPLC/6530 Q-TOF-MS offeryn, gyda ffynhonnell ïoneiddiad electrochwistrellu mewn moddau ïon positif a negyddol. Defnyddiwyd tarian Cymesuredd Waters RP C18 colofn (4.6 × 250 mm, 5 μm) (Waters Corporation, Milford, MA, UDA) ar gyfer gwahanu. Roedd y cyfnod symudol yn cynnwys 0.2 y cant o hydoddiant dyfrllyd asid ffurfig (v/v) (A) ac ACN (B), a chafodd ei bwmpio ar gyfradd llif o 0.5 mL/munud. Cyfaint pigiad pob sampl oedd 10 μL. Roedd y rhaglen elution graddiant fel a ganlyn: 5 - 23 y cant B am 0 - 35 munud, 23 - 25 y cant B am 35 - 65 munud , a 25 - 5 y cant B am 65 - 70 munud. Roedd tymheredd y golofn yn cael ei gynnal ar 30 gradd. Cafodd y cromatogramau eu monitro a'u cofnodi ar 330 nm. Gosodwyd y pwysedd nwy atomization ar 30 Psi, ac roedd y foltedd capilari yn 3.5 kV. Cyfradd llif y nwy sych oedd 8 L/munud ar dymheredd o 30 gradd. Gosodwyd tymheredd y nwy gwain ar 400 gradd ar gyfradd llif o 12 L/munud. Gosodwyd yr egni gwrthdrawiad ar 10-20 eV ar gyfer sganiau ynni isel a 30-50 eV ar gyfer sganiau ynni uchel. Cofnodwyd y data sbectra màs o fewn yr ystod sgan o 50–1000 Da mewn moddau sganio ïon positif a negyddol. Yn yr astudiaeth hon, gwnaed cymhariaeth gyflym ac effeithlon rhwng TGCD a'r safonau o dan yr un amod LC-MS.

Prawf twf wterws

Gwnaed hyn yn gwbl unol ag argymhellion y Canllaw ar Ofal a Defnyddio Anifeiliaid Labordy y Sefydliadau Iechyd Cenedlaethol. Adolygwyd a chymeradwywyd yr holl weithdrefnau arbrofol gan Bwyllgor Moesegol Anifeiliaid Prifysgol Masnach Harbin, Tsieina.

Prynwyd llygod Kunming benywaidd anaeddfed (tua 21 d o enedigaeth, wedi'u diddyfnu) sy'n pwyso 12 ± 2 g, o Ganolfan Anifeiliaid Labordy Sylfaen Diwydiant Biolegol Cenedlaethol Changchun (Changchun, Tsieina). Cafodd y llygod eu cadw mewn ystafell a reolir gan dymheredd (22 ± 2 gradd) gyda bwyd a dŵr ad libitum. Dechreuwyd arbrofi ar anifeiliaid ar ôl pum niwrnod o ymgynefino. Ymprydiodd y llygod dros nos â dŵr ad libitum cyn rhoi'r toddiant prawf yn fewngastrig.

Rhannwyd y llygod ar hap yn 22 grŵp, gyda 10 anifail ym mhob grŵp. Rhoddwyd cyffuriau arbrofol o'r un cyfaint iddynt ddwywaith y dydd (bore a gyda'r nos) am bedwar diwrnod fel a ganlyn:

Grŵp 1: Glysosidau cyflawn mewngastrig o hydoddiant puro C. deserticola (20 mL/kg), (cyfaint toddiant/pwysau llygoden),

Grŵp II: Dŵr distyll mewn-gastrig (grŵp rheoli negyddol), a

Grŵp III: Diethylstilbestrol mewngastrig (20 ug/mL) (grŵp rheoli cadarnhaol).

Ar y pumed dydd, aberthwyd yr holl lygod. Cafodd y grothau eu tynnu a'u pwyso ar unwaith a chyfrifwyd cyfernodau'r groth.

Dadansoddiad ystadegol

Defnyddiwyd prawf-t sampl pâr dwy gynffon i nodi gwahaniaethau ystadegol arwyddocaol yn y paramedrau amrywiol yn y gwahanol grwpiau arbrofol. Perfformiwyd y dadansoddiad gan ddefnyddio meddalwedd ystadegol SPSS (SPSS for Windows v21.0, SPSS Inc., USA). Ystyriwyd bod y gwahaniaethau yn ystadegol arwyddocaol ar lefel hyder o 95 y cant (p <>

Canlyniadau a thrafodaeth

Llinoledd a chydberthynas acteosid a chyfanswm cynnyrch glycosidau

Hafaliad atchweliad llinol y cynnyrch acteosid oedd y {{0}}x – 14.75 (lle mae x yn grynodiad acteosid, ac y yw ei arwynebedd brig cyfatebol) gyda chyfernod cydberthynas o r=1 yn yr ystod crynodiad o 0.12−{{10}}.72 mg/mL. Roedd hyn yn dangos cromlin calibradu llinol. Hafaliad atchweliad llinol cyfanswm y cynnyrch glycosidau oedd y=26.074x plws 0.0866 (lle mae x yn grynodiad cyfanswm glycosidau, ac y yw ei arwynebedd brig cyfatebol) gyda chyfernod cydberthynas o r { {12}}.9982 yn yr ystod crynodiad o 0.013 -0.065 mg/mL. Roedd hyn hefyd yn dangos cromlin calibradu llinol.

Ymchwiliad methodolegol

Ymchwiliwyd i fanwl gywirdeb, atgynhyrchedd, sefydlogrwydd ac adferiad y samplau yn yr ymchwiliad methodolegol. Yn yr arbrawf manwl, y gwyriad safonol cymharol (RSD) o acteosid a chyfanswm glycosidau oedd 1.43 y cant a 0.05 y cant yn y drefn honno. Yn yr arbrawf atgynhyrchu, roedd yr RSD o acteosid a chyfanswm glycosidau yn 0.10 y cant a 1.44 y cant yn y drefn honno. Yn yr arbrawf sefydlogrwydd 24 h, yr RSD o acteosid a chyfanswm glycosidau oedd 0.14 y cant, a 0.90 y cant yn y drefn honno. Yn yr arbrawf adfer, roedd adferiad acteosid yn 100.50 y cant gyda RSD o 2.08 y cant, tra bod adferiad cyfanswm glycosidau yn 99.12 y cant gyda RSD o 1.65 y cant. Roedd yr holl werthoedd RSD yn llai na 3 y cant. Roedd y canlyniadau hyn yn dangos cywirdeb ac atgynhyrchedd da. Yn ogystal, roedd y sampl yn sefydlog am 24 h. Mae canlyniadau adferiad hefyd o fewn yr ystod a ganiateir (95 - 105 y cant ). Felly, gellir defnyddio'r dull hwn ar gyfer pennu acteosid a chyfanswm cynnyrch glycosidau ar ôl puro.

Ymchwiliad un ffactor o TGCD

Gall llawer o ffactorau effeithio ar buro TGCD gan ddefnyddio resin macroporous, megis math o resin, ffactorau arsugniad statig (amser arsugniad, crynodiad gollyngiadau, a pH yr hydoddiant sampl), ac amodau elution (cyflymder llif, cyfaint, a chrynodiad). Gan ddefnyddio capasiti arsugniad a chyfraddau dadsugniad ac elution TGCD fel mynegeion, pennwyd y cyflwr arbrofol yn seiliedig ar ganlyniadau arbrofion un ffactor. Gan ddefnyddio resin arsugniad macroporous math AB-8, pennwyd yr amodau optimwm canlynol: 0.5 mg/mL hydoddiant sampl, pH o 10, amser arsugniad statig o 8 h, 2 BV dŵr distyll ar gyfer golchi amhureddau, 20 BV 80 y cant ethanol fel eluent, a chyflymder llif o 0.5 BV/ min. Dangosir y canlyniadau penodol yn Ffigurau 1−7.

CCD ar gyfer optimeiddio technoleg puro TGCD

Yn seiliedig ar ganlyniadau'r ymchwiliad un ffactor, dewiswyd tri ffactor sy'n dylanwadu'n sylweddol ar y dull puro fel mynegeion, sef, pH yr hydoddiant sampl (x1), crynodiad eluent (x2), a chyfaint eluent (x3). Yn ôl egwyddor CCD, mae gan bob ffactor bum lefel. Gosodwyd lefelau uchaf ac isaf y ffactorau amrywiol hyn yn ôl canlyniadau'r arbrawf rhagarweiniol. Dangosir lefelau’r ffactorau yn Nhabl 1 a dangosir y canlyniadau arbrofol yn Nhabl 2.

Penderfynwyd ar gyfanswm y cynnyrch glycosidau ac acteosid i wneud y gorau o'r dull puro ar gyfer TGCD. Yn gyntaf, gosodwyd cyfanswm y cynnyrch glycosidau ac acteosid i feini prawf rhifol dymunoldeb (d) rhwng {{0}}−1. Yna, cyfrifwyd y dymunoldeb cyffredinol (OD) [OD=(d1, d2, d3,....,dn)1/n, lle mai n yw'r rhif mynegai]. SPSS21.{{10}} meddalwedd a meddalwedd dylunio-arbenigwr yn cael eu defnyddio ar gyfer atchweliad llinol lluosog a gosod binomaidd newidynnau annibynnol ac OD, gyda p < 0.05="" wedi'i="" ystyried="" safon="" ystadegol="" arwyddocaol="" o'r="" hafaliad.="" dewiswyd="" yr="" hafaliad="" gyda="" gwerth="" r="" mwy="" (cyfernod="" cydberthynas="" lluosog)="" fel="" y="" model="" ffit="" gorau.="" cynrychiolir="" yr="" hafaliad="" llinol="" aml-amrywedd="" fel="" y="–" 1.02="" –="" 0.131x1="" plws="" 0.034x2="" plws="" 0.012x3="" (r="" {{="" 25}}.55,="" p="0.004)." yr="" hafaliad="" binomaidd="" yw="" y="–" 21.92173="" –="" 0.74079x1="" plws="" 0.62914x2="" plws="" 0.041161x3="" plws="" 0.014972x1x2="" plws="" 2.06050*10-4x1x3="" ×="" 1.{2x2="" +="" 0.62914x2="" +="" {56}}.78730="" ×="" 10-3x22="" -="" 2.89446="" ×="" 10-3x32="" (r="0.91," p="0.012)." gellir="" gweld="" o'r="" hafaliadau="" uchod="" bod="" cyfernod="" cydberthynas="" yr="" hafaliad="" atchweliad="" llinol="" aml-amrywedd="" yn="" is.="" mae'r="" gydberthynas="" rhwng="" y="" newidynnau="" annibynnol="" a="" dibynnol="" yn="" isel="" iawn,="" ac="" fe'i="" hystyriwyd="" yn="" anffafriol="" i'w="" ddefnyddio="" yn="" y="" model="">

Ond, roedd cyfernod cydberthynas yr hafaliad binomaidd yn uchel ac roedd yn arwain at ffit da. Felly, dewiswyd y model binomaidd. Yn seiliedig ar ddadansoddiad cynhwysfawr o'r ffigwr arwyneb a'r map cyfuchlin ynghyd â'r data arbrofol (gwerth OD ger 9.6), cafwyd yr ystod optimwm o'r dull puro. O Ffigur 8, gellir gweld bod y gwerth OD uchaf wedi'i gynhyrchu pan oedd pH yr hydoddiant sampl (A) yn yr ystod o 9 - 10, ac roedd y crynodiad eluent (B) yn yr ystod o 79 - 85 y cant . Mae Ffigur 9 yn dangos y cafwyd y gwerth OD uchaf pan oedd gwerth pH hydoddiant sampl (A) yn yr ystod o 9-10, a'r cyfaint eluent (C) yn yr ystod o 20-25 BV. Dengys Ffigur 10 y cafwyd y gwerth OD uchaf pan oedd y crynodiad eluent (B) yn yr ystod o 80 - 85 y cant, ac roedd y cyfaint eluent (C) yn yr ystod o 20 - 25 BV. O ddadansoddiad cynhwysfawr o'r data hyn, penderfynwyd bod pH hydoddiant y sampl, crynodiad eluent, a chyfaint eluent yn yr ystod o 9 - 10, 80 - 85 y cant , a 20 - 25 BV yn y drefn honno. Yn seiliedig ar yr hafaliad binomaidd aml-amrywedd ar gyfer canlyniadau deilliadol amrywiol a'r cynllun optimaidd, canfuwyd bod y dull puro TGCD gorau ar grynodiad eluent (ethanol) o 85 y cant a chyfaint o 25 BV ar pH o 11. Y gwerth OD cyfatebol oedd 0.8332 , a chyfanswm y cynnyrch glycosidau oedd 73.0339 y cant. Mae'r argraff weledol o ffigurau 8-10 yn nodi mai'r dull gorau yw'r un y cafodd rhyngweithiadau rhwng y ddau ffactor eu hystyried, er bod y dull gorau a dynnwyd o'r fformiwla yn cydnabod yr un y cynhwyswyd rhyngweithiadau ymhlith y tri ffactor ynddo. Roedd y ddau ganlyniad yn wahanol ac ystyriwyd mai'r dull puro optimaidd oedd gyda chrynodiad eluent (ethanol) o 85 y cant a chyfaint o 25 BV ar pH o 11.

Mesur twf y groth

Dangosir cyfernod groth pob grŵp yn Nhabl 3. O'i gymharu â'r grŵp rheoli negyddol, roedd canlyniadau'r grwpiau eraill yn sylweddol wahanol. Canfuwyd bod TGCD a gafwyd o 20 o wahanol ddulliau puro i gyd yn cyflawni gweithredoedd estrogenig.

Arbrawf cadarnhau

Dangosodd canlyniadau cynhwysfawr y CCD a phrawf twf y groth yr ystyriwyd mai'r dull puro gorau posibl oedd gyda chrynodiad eluent (ethanol) o 85 y cant a chyfaint o 25 BV ar pH o 11. Yn ystod y

broses ddilysu, y cynnyrch cyfartalog o gyfanswm glycosides oedd 70.9150 y cant. Y gwyriad cyfartalog rhwng y gwerthoedd a ragfynegwyd a'r gwerthoedd gwirioneddol oedd 2.1180 y cant. Felly, gellir awgrymu bod rhagweladwyedd a hygrededd arbrofol y model hwn yn dda.

Adnabod TGCD ar ôl puro

Yn seiliedig ar amser cadw a data MS, dyfalwyd 21 o gyfansoddion naturiol, gan gynnwys campneoside 1, 2′-acetylacteoside, cistanoside A, cistanoside B, syringalide A 3'- - L-rhamnopyranoside, tubuloside A, tubuloside B, salidroside, cistanoside G, asid teniposide, decaffeoylacteoside, 8-asid epiloganig, echinacoside, cistanoside F, cistantubuloside B1, isoacteoside, acteoside, cis-acteoside, kankanoside E, osmanthuside B, a cistanoside C. Yr amser cadw, MS ac MS/ Dangosir gwybodaeth MS, fformiwla, a chyfansoddion hapfasnachol yn Nhabl 4.

Mae Q-TOF-MS yn arbennig o addas ar gyfer adnabod strwythurol cydrannau moleciwlaidd cymhleth cyffuriau a bwyd oherwydd gall ddarparu cyfansoddiadau elfennol posibl trwy fàs moleciwlaidd union a nodweddion strwythurol yr ïonau darn. Er mwyn sefydlu nodweddu strwythurol systematig, defnyddiwyd Q-TOF-MS, data MS, chwilio cronfa ddata, a llenyddiaeth gyfeiriol gyhoeddedig hefyd ar gyfer adnabod. Mae fformiwla moleciwlaidd pob cydran darged wedi'i didynnu o'r rhiant ïon, ac fe'i parwyd â'r cyfansoddion hysbys. Gellid pennu'r fformiwla hon ymhellach o'i ïonau darnio cysylltiedig. Er enghraifft, dangosodd brig 5 ïon dadprotonedig pennaf ar m/z 654 (C30H38O16), a oedd yn union yr un fath â chyfansoddiad elfennol campneoside 1. Ffurfiwyd colled caffeoyl o ïon darn yn m/z 493, a cholli ffurfiwyd rha moiety o ïon darn yn m/z 347.

Casgliad

Gan ddefnyddio technoleg LC-Q-TOF-MS, mae dull dadansoddi ansoddol syml a chadarn ar gyfer TGCD wedi'i ddatblygu a'i ddilysu'n llawn. Roedd y data dilysu ar gyfer sgrinio ac adnabod cyfansoddion naturiol o TGCD yn foddhaol. Tybiwyd un ar hugain o gyfansoddion bioactif o TGCD fel a ganlyn: salidroside, cistanoside G, asid geniposidig, decaffeoylacteoside, campneoside 1, 8-asid epiloganig, 2'-acetylacteoside, cistanoside A, cistanoside B, syringalid A3′{9 }}L-rhamnopyranoside, echinacoside, cistanoside F, cistantubuloside B1, isoacteoside, acteoside, tubuloside A, cis-acteoside, kankanoside E, osmanthuside B, cistanoside C, a tubuloside B. Gall nodweddu strwythurol y cyfansoddion hyn ddarparu sylfaen arbrofol ar gyfer eu rheolaeth ansawdd a'u cymhwysiad clinigol pellach oherwydd eu gweithgaredd estrogenig. Gall hyn gynnig opsiwn therapiwtig newydd a gwell ar gyfer trin syndrom ôlmenopawsol, a thrwy hynny osgoi sgîl-effeithiau ac adweithiau niweidiol therapi estrogen.

Byrfoddau

TGCDCistanche deserticolacyfanswm glycosidau cromatograffaeth hylif LC/Q-TOF-MS/sbectrometreg màs amser hedfan pedwarplyg

Methodoleg arwyneb ymateb RSM

CCD dylunio cyfansawdd canolog

Sbectrometreg màs MS HPLC/Q-TOF-MS Cromatograffaeth hylif perfformiad uchel/ sbectrometreg màs amser hedfan pedwarplyg

ACN Acetonitrile

Cyfaint gwely BV

OD dymunoldeb cyffredinol

Cromatograffeg hylif LC-MS-sbectrometreg màs

Sbectrometreg màs pedwarpôl Q-TOF-MS amser hedfan

TCM meddyginiaethau Tsieineaidd traddodiadol

Gwyriad safonol cymharol RSD

Diolchiadau

Cefnogwyd y prosiect hwn gan Sefydliad Cenedlaethol Gwyddoniaeth Naturiol Tsieina (Rhif 81073015), Sefydliad Gwyddonol Natur Talaith Heilongjiang (ZD2017014), Cynllun hyfforddi talent ifanc arloesol y Coleg yn Nhalaith Heilongjiang (UNPYSCT- 2017209). Mae'r awduron yn datgan nad oes gwrthdaro buddiannau o ran cyhoeddi'r papur hwn.

Gwrthdaro buddiannau

Nid yw'r awduron yn datgan unrhyw wrthdaro buddiannau.

Cyfeiriadau

[1] Nan ZD, Zeng KW, Shi SP, Zhao MB, Jiang Y., Tu PF, glycosidau Phenylethanoid gyda gweithgareddau gwrthlidiol o'r coesau Cistanche deserticola diwylliedig yn anialwch Tarim, Fitoterapia, 2013, 89, {{4} }.

[2] Guo Y., Cao L., Zhao Q., Zhang L., Chen J., Liu B., Zhao B., Nodweddion rhagarweiniol, y gweithgaredd gwrthocsidiol a hepatoprotective o polysacarid o Cistanche deserticola, International Journal of Biological Macromolecules , 2016, 293, 678-685.

[3] Nan ZD, Zhao MB, Zeng KW, Tian SH, Wang WN, Jiang Y., Tu PF, iridoids gwrthlidiol o'r coesau Cistanche deserticola diwylliedig yn Tarim Anialwch, Tseiniaidd Journal of Meddyginiaethau Naturiol, 2016, 14, 61-65.

[4] Peng F., Chen J., Wang X., Xu C., Liu T., Xu R., Newidiadau yn Lefelau Glycosidau Phenylethanoid, Gweithgaredd Gwrthocsidiol, a Nodweddion Ansawdd Eraill mewn Cistanche deserticola Slices gan Steam Processing, Chemical a Bwletin Fferyllol (Tokyo), 2016, 64, 1024-1030.

[5] Wang T., Zhang X., Xie W., Cistanche deserticola YC Ma, "Desert Ginseng": adolygiad, The American Journal of Chinese Medicine, 2012, 40, 1123-1141.

[6] Song Y., Song Q., Li J., Zhang N., Zhao Y., Liu X., Jiang Y., Tu P., Strategaeth integredig i wahaniaethu meintiol chamomile rhwngCistanche deserticolaa C. tubulosa gan ddefnyddio cromatograffaeth hylif perfformiad uchel-hybrid sbectrometreg trap ïon pedwarpol triphlyg llinol, Journal of Chromatography A, 2016, 1429, 238-247.

[7] Li Y., Peng Y., Wang M., Zhou G., Zhang Y., Li X., sgrinio cyflym ac adnabod y gwahaniaethau rhwng metabolion oCistanche deserticolaa dyfyniad dŵr C. tubulosa mewn llygod mawr gan ddadansoddiad adnabod patrwm cyfunol UPLC-Q-TOF-MS, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 2016, 131, 364-372.

[8] Li WL, Sun XM, Cân H., Ding JX, Bai J., Chen Q., HPLC/Q-TOF-MS Adnabod Cyfansoddion a Amsugnwyd a'u Metabolitau mewn Serwm Llygoden Fawr ac Wrin ar ôl Gweinyddu Cistanche ar Lafar deserticola Extract, Journal of Food Science, 2015, 80, H2079-2087.

[9] Almasi A., Dargahi A., Mohamadi M., Biglari H., Amirian F., Raei M., Tynnu Penisilin G trwy gyfuniad o sonolysis a phroses Photocatalytic (sono-ffotocatalytig) o ddatrysiad dyfrllyd: optimeiddio prosesau defnyddio RSM (Methodoleg Arwyneb Ymateb), Meddyg Electron, 2016, 8,

[10] 2878-2887. Hou W., Zhang W., Chen G., Luo Y., Optimeiddio Amodau Echdynnu ar gyfer Gweithgaredd Ffenolig, Flavonoid a Gwrthocsidiol Uchaf o ddata bract Melaleuca Dail Gan Ddefnyddio'r Fethodoleg Arwyneb Ymateb, PloS One, 2016, 11,

[11] e0162139. Pooralhossini J., Ghaedi M., Zanjanchi MA, Asfaram A., Y dewis o echdynnu â chymorth uwchsain ynghyd â sbectroffotometrig ar gyfer pennu asid galig yn gyflym mewn samplau dŵr: Dyluniad cyfansawdd canolog ar gyfer optimeiddio newidynnau proses, Ultrasonics Sonochemistry, 2017, 34 , 692- 699.

[12] Han L., Boakye-Yiadom M., Liu E., Zhang Y., Li W., Song X., Fu F., Gao X., Nodweddu strwythurol ac adnabod glycosidau ffenylethanoid oCistanches deserticola YC Magan UHPLC/ESI-QTOF-MS/MS, Dadansoddi Ffytocemegol, 2012, 23, 668-676.

[13] Lu D., Zhang J., Yang Z., Liu H., Li S., Wu B., Ma Z., Dadansoddiad meintiol o Cistanches Herba gan ddefnyddio cromatograffaeth hylif perfformiad uchel ynghyd â chanfod arae deuod ac uchel- sbectrometreg màs cydraniad wedi'i gyfuno â dulliau cemometrig. Journal of Gwahanu Gwyddoniaeth, 2013, 36, 1945-1952.

[14] Li WL, Chen Q., Yang B., Gao S., Zhang JJ, Sgrinio echdynion effeithiol ffyto-estrogenig a dos oCistanche deserticola, Meddyginiaethau Llysieuol Tsieineaidd, 2013, 5, 292-296.

[15] Li YP, Huang FR, Dong J., Xiao C., Xian RY, Ma ZG, Zhao J., Adnabod Cyflym Cistanche trwy Dechnoleg Delweddu Sbectrwm Fflworoleuedd Wedi'i Gyfuno â Dadansoddiad Prif Gydrannau a Rhagoriaeth Fisher, Guang Pu Xue Yu Guang Pu Fen Xi, 2015, 35, 689-694.