Gweithredu Promitotig Oenothera Biennis Ar Fibroblastau Dermol Dynol Senescent Rhan 2

3. Trafodaeth

Yn yr astudiaeth hon, fe wnaethom ymchwilio i effaith echdyniad cell hydroffilig Oenothera biennis (ObHEx) ar heneiddedd cellog, gan ei fod yn dangos priodweddau gwrth-heneiddio croen pan gafodd ei brofi mewn modelau in vitro ac ex vivo [18]. Fe ddefnyddion ni fodel senescent tebyg o NHDF sy'n destun SIPS ar gyfer triniaeth gyda H2O2 [21,22].

Gall glycoside cistanche hefyd gynyddu gweithgaredd SOD ym meinweoedd y galon a'r afu, a lleihau'n sylweddol y cynnwys lipofuscin a MDA ym mhob meinwe, gan ysbeilio radicalau ocsigen adweithiol amrywiol (OH-, H₂O₂, ac ati) yn effeithiol a diogelu rhag difrod DNA a achosir. gan OH-radicaliaid. Mae gan glycosidau ffenylethanoid Cistanche allu sborionu radicalau rhydd, gallu lleihau uwch na fitamin C, gwella gweithgaredd SOD mewn ataliad sberm, lleihau cynnwys MDA, a chael effaith amddiffynnol benodol ar swyddogaeth pilen sberm. Gall polysacaridau cistanche wella gweithgaredd SOD a GSH-Px mewn erythrocytes a meinweoedd yr ysgyfaint llygod senescent arbrofol a achosir gan D-galactos, yn ogystal â lleihau cynnwys MDA a cholagen yn yr ysgyfaint a phlasma, a chynyddu cynnwys elastin, wedi effaith sborion dda ar DPPH, ymestyn amser hypocsia mewn llygod senescent, gwella gweithgaredd SOD mewn serwm, ac oedi dirywiad ffisiolegol yr ysgyfaint mewn llygod senescent arbrofol Gyda dirywiad morffolegol cellog, mae arbrofion wedi dangos bod gan Cistanche y gallu gwrthocsidiol da ac mae ganddo'r potensial i fod yn gyffur i atal a thrin clefydau heneiddio'r croen. Ar yr un pryd, mae gan echinacoside yn Cistanche allu sylweddol i ysbeilio radicalau rhydd DPPH a'r gallu i ysbeilio rhywogaethau ocsigen adweithiol ac atal radicalau rhydd-

diraddio colagen a achosir, ac mae hefyd yn cael effaith atgyweirio da ar ddifrod anion radical rhydd thymin.

Cliciwch ar Ble Alla i Brynu Cistanche

【Am ragor o wybodaeth:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Er mwyn deall mecanwaith gweithredu ObHEx ar ffibroblastau dermol dynol senescent, trwy ddatgelu'r llwybrau biolegol a newidiwyd gan y dyfyniad, fe wnaethom berfformio dull proteomig uwch-ddwfn sbectrometreg màs sy'n annibynnol ar ddata. Caniataodd inni gael y dadansoddiad proteome mwyaf cyflawn hyd yn hyn o gelloedd senescent ac, am y tro cyntaf, meintioli nifer o farcwyr henebrwydd ar yr un pryd.

Yn gyntaf oll, i asesu'r anwythiad heneiddedd trwy driniaeth H2O2 ar gelloedd NHFD, fe wnaethom feintioli'r marcwyr henebrwydd hysbys. Cadarnhaodd ein data proteomeg ymsefydlu heneiddedd gan straen ocsideiddiol: yn wir, gwelsom lefelau newidiol o farcwyr heneiddedd hysbys yn ymwneud â'r cynnwys lysosomaidd cynyddol (GLB1 a FUCA1), difrod DNA (ATR, ATM, MACROH2A1, a MACRO2A2) a chylchred celloedd cyfnod G2 arestio (CDK1NA a MKI67). Ar ben hynny, mae'r dadansoddiad cyfoethogi llwybr o'r proteinau sydd wedi'u dadreoleiddio fwyaf mewn celloedd H2O2 a driniwyd yn erbyn celloedd rheoli yn pwyntio at mitosis, gan adlewyrchu'r arestiad amlhau senescent.

Wrth gymharu proteome celloedd SIPS NHDF sy'n cael eu trin ag ObHEx yn erbyn rhai heb eu trin, canfuom fod y driniaeth gyda'r dyfyniad yn gallu adfer yn rhannol lefelau'r proteinau a'r cyfadeiladau sy'n chwarae rolau hanfodol mewn sawl cam o mitosis. Cynyddodd deoriad ObHEx lefelau CDK1, protein mitotig allweddol sy'n sbarduno mynediad i mitosis trwy ffurfio cymhleth gyda cyclin B [34]. At hynny, cafodd pob un o'r pum is-uned yng nghymhlyg condensin I eu huwchreoleiddio. Mae'r cyfadeilad hwn yn cynnwys dwy is-uned cynnal a chadw strwythurol cromosomau (SMC), SMC2 a SMC4, a thri is-uned nad ydynt yn SMC, NCAPD2, NCAPH, ac NCAPG. Yn y prometaphase, swyddogaeth y cymhleth condensin I yw hyrwyddo cyddwysiad math cromosomau trwy gyflwyno supercoils positif i'r DNA mewn modd sy'n ddibynnol ar ATP [35]. Yn ogystal â hyn, mae'r dyfyniad yn uwch-reoleiddio KNTC1, NUF2, a TRIP13, sef tri phrotein sy'n gysylltiedig â'r cinetocore, cyfadeilad mawr sydd, yn ystod y prometaphase, yn cysylltu cromatin centromeric â microtiwbwlau o bolion gwerthyd gyferbyn i ffafrio gwahanu chwaer gromatidau [ 36,37]. Mae adferiad rhannol o lefelau proteinau MCM hefyd wedi'i ganfod. Mae'r proteinau hyn wrth wraidd y cymhleth helicas atgynhyrchu sy'n dad-ddirwyn DNA llinyn dwbl i ddarparu llinynnau sengl fel templedi ar gyfer DNA polymeras. Mae'r cymhleth MCM yn cael ei drawsnewid yn hofrennydd gweithredol yn ystod y cyfnod S ond mae eisoes wedi'i lwytho ar chromatin yn ystod y telophase [38,39]. Cynyddodd y dyfyniad lefelau IQGAP3, PBK, a DHFR hefyd. Mae'r cyntaf, IQGAP3, yn rheolydd pwysig o ddilyniant mitotig oherwydd ei fod yn hyrwyddo gweithgaredd cdk7, sy'n hanfodol ar gyfer activation Cdc2 [40,41]; Mae PBK yn kinase sy'n weithredol mewn mitosis yn unig; pan gaiff ei ffosfforyleiddio, mae'n rhyngweithio â p53, gan ei ansefydlogi a gwanhau'r llwybr difrod DNA [42]; ac mae DHFR yn ensym allweddol mewn biosynthesis DNA y mae ei lefelau wedi'u gwanhau'n sylweddol mewn ffibroblastau dynol senescent [43].

Roedd profion bio-orthogonol hefyd yn dangos gallu ObHEx i ddychwelyd yn rhannol nodweddion henebrwydd, sef gweithgaredd lysosomaidd ac arestiad cylchred celloedd. Yn wir, i wirio a yw adfer mynegiant protein mitotig gan ObHEx yn trosi i adweithio'r gylchred gell, fe wnaethom gynnal arbrofion FACS (Didoli Celloedd wedi'i Actifadu Fflworoleuedd) ar gelloedd SIPS NHDF a gafodd eu trin ai peidio â'r dyfyniad. Dangoson nhw fod ObHEx yn gallu lleihau'r ffracsiwn o gelloedd a gafodd eu blocio yn y cyfnod G2 a hyrwyddo eu hail-fynediad i gylchred celloedd senescent.

4. Defnyddiau a Dulliau

4.1. Diwylliant Cell

Cafodd Ffibroblastau Dermol Dynol Normal (NHDF; Promocell) eu meithrin yn Eryr Addasedig Canolig Dulbecco (DMEM; Gibco) wedi'i ategu â 10 y cant o serwm buchol ffetws (FBS; Gibco) a 500 U/mL o penisilin-streptomycin (Gibco) mewn 95 y cant o aer , 5 y cant CO2 ac awyrgylch llaith ar 37 ◦C.

4.2. Sefydlu Senescence Cynamserol a Achosir gan Straen (SIPS)

Cafodd cyfanswm o 10 1200 000 gelloedd NHDF eu hadu i bob un o'r dysglau meithrin celloedd 60 mm, ddiwrnod cyn eu deor gyda 100 µM H2O2 ar 37 ◦C am 2 h [21,22]. Yn dilyn hynny, golchwyd yr H2O2 gyda Phosphate Buffered Saline (PBS; Gibco) i derfynu'r driniaeth a thyfwyd y celloedd mewn cyfrwng arferol am 4 diwrnod. Ar gyfer y celloedd nad ydynt yn senescent, a ddefnyddir fel rheolydd, 2240 000 celloedd NHDF eu hadu i bob un o'r seigiau meithrin celloedd 60 mm. Perfformiwyd yr arbrawf mewn 5 atgynhyrchiad biolegol.

4.3. Detholiad Hydroffilig Oenothera Biennis (ObHEx) Paratoi

Paratowyd y dyfyniad yn labordai Arterra Bioscience SpA [18]. Cafwyd y diwylliannau celloedd o ddail planhigion Oenothera biennis (a ddarparwyd gan GEEL Floricultura ss) trwy ysgogi toreth o gelloedd meristematig ar blatiau agar solet tan y calluses a gafwyd. Trosglwyddwyd y celloedd i'r cyfrwng twf hylifol (Gamborg B5, wedi'i ategu â 2,4 dichloro asid asetig ffenoxy (1 mg / L), adenine (1 mg / L), a cinetin (0.01 mg / L). )) a'i dyfu fel diwylliannau atal o dan ysgwyd orbitol. Unwaith y cafwyd diwylliannau o tua 150 g/L, casglwyd y celloedd a'u gosod mewn PBS ar pH 7.4 i baratoi echdyniad sy'n hydoddi mewn dŵr. Ar ôl lyophilization, diddymwyd y powdr a gafwyd mewn dŵr neu gyfryngau diwylliant cell ar y crynodiadau priodol ar gyfer profi.

4.4. Triniaeth Detholiad Hydroffilig Oenothera Biennis (ObHEx).

Cafodd celloedd NHDF eu deor am 24 awr gyda 0.01 y cant (p/v) ObHEx mewn cyfrwng cyflawn. Yn dilyn hynny, golchwyd y celloedd deirgwaith gyda PBS a'u trin am 24 awr ychwanegol gyda 0.01 y cant (p / v) ObHEx mewn cyfrwng di-serwm. Yna cawsant eu datgysylltiedig trwy drypsineiddio, eu centrifugio ar 500 g am 10 munud ar 4 ◦C, a'u golchi ddwywaith gyda PBS. Cafodd celloedd rheoli heb eu trin yr un deoriadau heb ObHEx.

4.5. Paratoi Sampl ar gyfer Dadansoddiad Proteomig

Cafodd pelenni eu hailddarparu mewn 60µL o glustogiad assay radioimmunoprecipitation (RIPA) a'u gorchuddio gan sonigiad. Mesurwyd crynodiad protein y lysadau cellog gan ddefnyddio Pecyn Assay Protein DC™ (Biorad; #5000112). Perfformiwyd treuliad colofn sbin micro S-TrapTM (Protifi, Huntington, CA, UDA) ar 50 µg o lysates cell yn unol â chyfarwyddiadau'r gwneuthurwr. Yn gryno, gostyngwyd y samplau gyda 20 mM tris (2- carboxyethyl)phosphine (TCEP) a'u alkylated gyda thioacetamide 50 mM (CAA) am 15 munud ar dymheredd ystafell. Yna ychwanegwyd asid ffosfforig dyfrllyd at grynodiad terfynol o 2.5 y cant ac yna ychwanegu byffer rhwymo S-Trap (90 y cant methanol dyfrllyd, 100 mM TEAB, pH 7.1). Yna llwythwyd y cymysgeddau ar golofnau S-Trap. Perfformiwyd pum cam golchi ychwanegol ar gyfer dileu SDS yn drylwyr. Yna, treuliwyd y lysates cellog gyda 2.5 µg o trypsin (Promega) ar 47 ◦C am 1 h. Ar ôl elution, cafodd y peptidau eu sychu dan wactod, eu hailddarparu mewn 2 y cant ACN, 0.1 y cant FA a'u meintioli gan Nanodrop.

4.6. nanoLC-MS/MS Adnabod a Meintioli Protein

Chwistrellwyd cyfanswm o 400 ng o bob sampl ar system cromatograffaeth hylif perfformiad uchel (HPLC) nanoplat (Bruker Daltonics, Bremen, yr Almaen) ynghyd â timsTOF Pro (Bruker Daltonics, Bremen). , Yr Almaen) sbectromedr màs. Gwahaniad HPLC (Toddydd A: {{30}}.1 y cant o asid fformig mewn dŵr; Hydoddydd B: 0.1 y cant o asid fformig mewn acetonitrile) ar 250 L/munud gan ddefnyddio colofn allyrrydd llawn (C18, 25 cm × 75 µm 1.6 µm) (Ion Optics, Fitzroy, Awstralia) gan ddefnyddio elution graddiant (2 i 13 y cant hydoddydd B yn ystod 41 munud; 13 i 20 y cant yn ystod 23 munud; 20 y cant i 30 y cant yn ystod 5 munud; 30 y cant i 85 y cant am 5 munud, ac, yn olaf, 85 y cant am 5 munud i olchi'r golofn). Cafwyd data màs-sbectrometrig gan ddefnyddio dull caffael darnio cyfresol croniad cyfochrog (diaPASEF) dadansoddiad data-annibynnol. Y gosodiadau diapers oedd: ystod màs o 400 i 1200 Da, mae symudedd yn amrywio o 0.60 i 1.43 1/k0, nifer y ffenestr symudedd o 1, amcangyfrif amser beicio o 1.79 s, camau màs fesul cylch o 32.

4.7. MS Prosesu Data a Dadansoddi Biowybodeg

Perfformiwyd dadansoddiad data gan ddefnyddio meddalwedd DIA-NN (fersiwn 1.8) [44]. Cynhaliwyd chwiliad yn erbyn cronfa ddata ddynol UniProtKB/Swiss-Prot Homo sapiens (rhyddhau Chwefror 2021, 20,408 o gofnodion) gan ddefnyddio llif gwaith di-lyfrgell. At y diben hwn, gwiriwyd yr opsiynau "Crynodeb FASTA ar gyfer chwilio am ddim o'r llyfrgell/cynhyrchu llyfrgelloedd" ac opsiynau "sbectra dysgu dwfn, RTs, ac IMs" ar gyfer cynhyrchu ïon rhagflaenol. Caniatawyd uchafswm o 2 holltiad a fethwyd gan drypsin a gosodwyd yr addasiad newidiol uchaf i 5. Gosodwyd carbamidomethylation (Cys) fel yr addasiad sefydlog, tra gosodwyd toriad methionin protein N-terminal, ocsidiad methionin, ac asetyliad N-terminal fel newidyn addasiadau. Gosodwyd yr ystod hyd peptid i 7-30 o asidau amino, amrediad gwefr rhagflaenol 2-4, amrediad m/z rhagflaenydd 300-1800, a darn ïon m/z ystod 200-1800. I chwilio'r rhiant ïonau màs a darnio, cafodd cywirdeb ei gasglu'n awtomatig gan DIA-NN ac fe'i gosodwyd tua 13 ppm ar gyfer pob dadansoddiad. Gosodwyd y cyfraddau darganfod ffug (FDRs) ar y lefelau protein a pheptid i 1 y cant . Caniatawyd cyfatebiaeth rhwng rhediadau. Ar gyfer y strategaeth feintioli, defnyddiwyd LC cadarn (manylrwydd uchel) fel y cynghorwyd yn nogfennaeth y meddalwedd, tra bod gosodiadau rhagosodedig yn cael eu cadw ar gyfer paramedrau algorithm eraill.

Perfformiwyd dadansoddiad ystadegol a biowybodeg gyda meddalwedd Perseus (fersiwn 1.6.15) ar gael am ddim ar y wefan (cyrchwyd ar 22 Mehefin 2021) [45] ac R/R Studio ac RStudio fersiwn 20 21.09.1 30 (cyrchwyd ar 12 Tachwedd 2021). Perfformiwyd yr holl ddadansoddiadau ystadegol R gan ddefnyddio'r pecyn stats R. Defnyddiwyd allbwn matrics adroddiad tud gan DIA-NN a thrawsnewidiwyd dwyster log2 ar gyfer dadansoddiad ystadegol. Ar gyfer y gymhariaeth ystadegol, rydym yn gosod pedwar grŵp, pob un yn cynnwys 5 atgynhyrchiad biolegol. Yna fe wnaethom hidlo'r data i gadw dim ond proteinau ag o leiaf 3 gwerth dilys mewn o leiaf un grŵp. Nesaf, priodolwyd y data i lenwi pwyntiau data coll trwy greu dosraniad Gaussian o haprifau gyda gwyriad safonol o 33 y cant o'i gymharu â gwyriad safonol y gwerthoedd a fesurwyd a 1.8 newid gwyriad safonol y cymedr i efelychu dosbarthiad isel. gwerthoedd signal. Perfformiwyd prawf-t y myfyriwr rhwng AAA a CTRL FDR < 0.05, S0=0.1 i gadarnhau presenoldeb marcwyr sy'n benodol i heneb. Yna, i ymchwilio a yw'r gwahaniaeth ym maint yr effaith rhwng absenoldeb neu bresenoldeb y driniaeth yr un peth ar gyfer celloedd lle ysgogwyd heneiddedd ai peidio, ymchwiliwyd i'r rhyngweithio rhwng y ddau ffactor (hy, Sefydlu a Thriniaeth) gan ddefnyddio ANOVA Dwyffordd. yn R. Yna, addaswyd gwerthoedd-p a gafwyd ar gyfer rhyngweithio'r ddau ffactor ar gyfer profion lluosog gan ddefnyddio dull Benjamini-Hochberg [46] i reoli'r Gyfradd Darganfod Ffug (FDR). Yn olaf, perfformiwyd dadansoddiad post hoc HSD Tukey ar broteinau yn dangos gwerth q < 0.05. Mae'r data proteomeg sbectrometreg màs wedi'u hadneuo i'r ProteomeXchange Consortium trwy ystorfa partner PRIDE [47] gyda'r dynodwr set ddata PXD034222.

4.8. Staining ß-Galactosidase sy'n Gysylltiedig â Senescence

Gwerthuswyd gweithgaredd ß-galactosidase (SA-ß-gal) sy'n gysylltiedig â Senescence gan ddefnyddio pecyn staenio Technoleg Signalau Cell (#9860). Cafodd cyfanswm o 1250 000 o gelloedd/ffynnon NHDF eu hadu i mewn i 6-blat ffynnon ddiwrnod cyn SIPS; tra, fel rheolydd, 250 000 cell/ffynnon. Ar ôl 4 diwrnod mewn cyfrwng arferol, cafodd y celloedd eu deor neu beidio â 0.01 y cant (p/v) ObHEx am 48 h. Yn dilyn hynny, cawsant eu golchi â PBS a'u trin â'r toddiant gosod am 15 munud. Ar ôl dau olchi gyda PBS, cafodd y celloedd eu deor â'r hydoddiant staenio ß-gal (pH terfynol o 6.0) yn cynnwys 5-bromo-4-chloro-3-indolyl- -D-galacto -pyranoside (X-Gal) ar 37 ◦C mewn deorydd sych am 20 h. Mae celloedd positif yn las. Mae'r lliw yn ganlyniad i holltiad X-Gal mewn galactos a 5-Bromo-4-chloro-3-indoxyl(X) gan SA-ß-gal. Mae'r indoxyl yn cael ei ocsidio i 5,50 -dibromo-4,40 -dichloro-indigo sy'n ffurfio gwaddod glas dwys. Aseswyd canran y celloedd positif yng nghyfanswm y celloedd trwy gyfrif 100-150 o gelloedd mewn 5 delwedd a ddewiswyd ar hap a ddaliwyd gan y microsgop, ar gyfer pob cyflwr. Roedd celloedd yn cael eu cyfrif gan ddefnyddio meddalwedd ImageJ. Perfformiwyd yr arbrawf yn driphlyg.

4.9. Dadansoddiad Didoli Celloedd wedi'i Weithredu gan Fflworoleuedd

Cafodd cyfanswm o {{0}} o gelloedd/ffynnon NHDF eu hadu i mewn i 6-blat ffynnon ddiwrnod cyn SIPS; tra, fel rheolydd, 50 000 cell/wel. Ar ôl 4 diwrnod mewn cyfrwng arferol, cafodd y celloedd rheoli a senescent eu trin neu beidio â 0.01 y cant (p / v) ObHEx am 72 h. Yna, deorwyd y celloedd ym mhresenoldeb 5 µg/mL o Hoechst 33342 am 30 munud ar 37 ◦C. Ar ôl trypsineiddio a centrifugio ar 500 g am 2 funud, cawsant eu hailddarlledu mewn 200 µL o PBS. Yn olaf, mesurwyd fflworoleuedd celloedd gan Ddadansoddwr Cell BD LSFortessa. Dadansoddwyd data gan ddefnyddio meddalwedd FlowJo v10.8.1. Perfformiwyd yr arbrawf yn driphlyg.

5. Casgliadau

Mae'r proffilio proteome byd-eang dwfn sy'n gysylltiedig â heneiddedd a geir yma yn darparu cannoedd o broteinau sydd wedi'u dadreoleiddio gan SIPS y gall y gymuned wyddonol eu hecsbloetio i ddeall hynafiaeth ymhellach ac i werthuso effeithiau modylwyr newydd posibl. At hynny, mae ein gwaith yn profi mecanwaith gweithredu pro-mitotig ObHEx ar ffibroblastau dermol dynol senescent: trwy gynnydd mewn mynegiant protein mitotig, mae'n hyrwyddo adfer ymlediad celloedd senescent. Felly, yn seiliedig ar y canlyniadau hyn, rydym yn cynnig ObHEx fel cynorthwyydd pwerus yn erbyn heneiddedd sy'n gysylltiedig â heneiddio croen.

Cyfraniadau Awdur:Cysyniadoli, SC, MCM ac ICG; methodoleg, SC, KR, IM, CC (Cerina Chhuon) ac ICG; meddalwedd, KR; ymchwiliad, SC, IM, CC (Cerina Chhuon), KT, SF, ADL, IP a CC (Corinne Cordier); adnoddau, MCM ac ICG; ysgrifennu — paratoi drafft gwreiddiol, SC ac ICG; ysgrifennu — adolygu a golygu, SC, MCM, ac ICG Mae pob awdur wedi darllen a chytuno i fersiwn gyhoeddedig y llawysgrif.

Datganiad Argaeledd Data:Mae'r data proteomeg sbectrometreg màs wedi'u hadneuo i'r ProteomeXchange Consortium drwy ystorfa partner PRIDE [47] gyda'r dynodwr set ddata PXD034222 (Manylion cyfrif yr adolygydd: Enw defnyddiwr: adolygydd_pxd034222@ebi.ac.uk; Cyfrinair: fK9Pjv90) .

Diolchiadau: Cefnogwyd yr astudiaeth hon gan Programma Operativo Complementare Ricerca e Innovazione 2014-2020, Asse I "Capitale Umano", Azione I.1 "Dottorati Innovativi con caratterizzazzione Industriale". Diolchwn i aelodau eraill y platfform Proteomeg Necker Vincent Jung a Joanna Lipecka am eu cefnogaeth wyddonol amhrisiadwy a'u hawgrymiadau ffrwythlon.

Cyfeiriadau

1. Di Micco, R.; Krizhanovsky, V.; Baker, D.; d'Adda di Fagagna, F. Senescence Cellular in Ageing: O Fecanweithiau i Gyfleoedd Therapiwtig. Nat. Parch Mol. Cell Biol. 2021, 22, 75–95. [CrossRef] [PubMed]

2. González-Gualda, E.; Pobydd, AG; Ffruk, L.; Muñoz-Espín, D. Arweinlyfr i Asesu Heneiddedd Cellog yn Vitro ac yn Vivo. FEBS J. 2021, 288, 56–80. [CrossRef] [PubMed]

3. Sikora, E. ; Bielak- ˙Zmijewska, A.; Mosieniak, G. Beth Yw a'r Hyn Nad Yw Senescence Cell. Postepy Biochem. 2018, 64, 110–118. [CrossRef] [PubMed]

4. Choi, E.-J.; Kil, IS; Cho, E.-G. Mae Fesiglau Allgellog sy'n Deillio o Fibroblastau Senescent yn Gwanhau'r Effaith Dermal ar Wahaniaethu Ceratinocyte. Int. J. Mol. Sci. 2020, 21, 1022. [CrossRef] [PubMed]

5. Krtolica, A. ; Parrinello, A.S.; Lockett, A.S.; Desprez, PY; Campisi, J. Senescent Fibroblasts Hyrwyddo Twf Celloedd Epithelial a Tumorigenesis: Cyswllt rhwng Canser a Heneiddio. Proc. Natl. Acad. Sci. UDA 2001, 98, 12072–12077. [CrossRef]

6. Wlaschek, M.; Maity, P.; Makrantonaki, E.; Scharffetter-Kochanek, K. Meinwe Gysylltiol a Senescence Fibroblast mewn Heneiddio Croen. J. Buddsoddi. Dermatol. 2021, 141, 985–992. [CrossRef]

7. Paez-Ribes, M.; González-Gualda, E.; Doherty, GJ; Muñoz-Espín, D. Targedu Celloedd Senesent mewn Meddygaeth Drosiadol. EMBO Mol. Med. 2019, 11, e10234. [CrossRef]

8. Soto-Gamez, A.; Demaria, M. Ymyriadau Therapiwtig ar gyfer Heneiddio: Achos Senescence Cellog. Discov Cyffuriau. Heddiw 2017, 22, 786–795. [CrossRef]

9. Latorre, E. ; Birar, VC; Sheerin, AN; Jeynes, JCC; Hooper, A. ; Dawe, AD; Melzer, D.; Cox, LS; Faragher, RGA; Ostler, EL; et al. Mae Modyliad Moleciwl Bach o Fynegiant Ffactor Splicing Yn Gysylltiedig ag Achub o Senescence Cellog. Biol Cell BMC. 2017, 18, 31. [CrossRef]

10. Munir, R. ; Semmar, N. ; Farman, M.; Ahmad, NS Adolygiad wedi'i Ddiweddaru ar Weithgareddau Ffarmacolegol a Chyfansoddion Ffytocemegol o Briallu'r Hwyr (Genus Oenothera). Pac Asiaidd. J. Trop. Biomed. 2017, 7, 1046–1054. [CrossRef]

11. Timoszuk, M.; Bielawska, K.; Skrzydlewska, E. Briallu'r Hwyr (Oenothera biennis) Gweithgaredd Biolegol Dibynnol ar Gyfansoddiad Cemegol. Gwrthocsidyddion 2018, 7, 108. [CrossRef]

12. Lee, SY; Kim, CH; Hwang, BS; Choi, K.-M.; Yang, I.-J.; Kim, G.-Y.; Choi, YH; Parcb, C. ; Jeong, J.-W. Effeithiau Amddiffynnol Oenothera Biennis yn erbyn Straen Ocsidiol a Achosir gan Hydrogen Perocsid a Marwolaeth Celloedd mewn Keratinocytes Croen. Bywyd 2020, 10, 255. [CrossRef]

13. Granica, S. ; Czerwi ´nska, ME; Piwowarski, YH; Ziaja, M.; Kiss, Cyfansoddiad Cemegol AK, Gweithgaredd Gwrthocsidiol a Gwrthlidiol o Detholiadau a Baratowyd o Rannau Awyrol Oenothera Biennis L. ac Oenothera Paradoxa Hudziok A Gafwyd ar ôl Tyfu Hadau. J. Amaeth. Cemegydd Bwyd. 2013, 61, 801–810. [CrossRef]

14. Fecker, R. ; Buda, V. ; Alexa, E.; Avram, S.; Pavel, IZ; Muntean, D.; Cocan, I. ; Watz, C. ; Minda, D.; Dehelean, CA; et al. Sgrinio Ffytocemegol a Biolegol o Oenothera Biennis L. Detholiad Hydroalcoholic. Biomoleciwlau 2020, 10, 818. [CrossRef]

15. Schäfer, L. ; Kragballe, K. Atchwanegiad ag Olew Briallu Gyda'r Hwyr mewn Dermatitis Atopig: Yr Effaith ar Asidau Brasterog mewn Neutrophils ac Epidermis. lipidau 1991, 26, 557–560. [CrossRef]

16. Barbulova, A.; Apone, F. ; Colucci, G. Diwylliannau Celloedd Planhigion fel Ffynhonnell Cynhwysion Actif Cosmetig. Cosmetics 2014, 1, 94–104. [CrossRef]

17. Cesar, LK; Cech, DS Synergedd ac Antagoniaeth mewn Detholiad o Gynnyrch Naturiol: Pan nad yw 1 ac 1 yn Gyfartal 2. Nat. Prod. Cynrychiolydd 2019, 36, 869–888. [CrossRef]

18. Ceccacci, A.S.; De Lucia, A.; Tito, A. ; Tortora, A. ; Falanga, D.; Arciello, S.; Ausanio, G.; Di Cicco, C.; Monti, MC; Apone, F. Mae Detholiad Diwylliannau Cell Oenothera Biennis Wedi'i Waddoli â Gweithgaredd Gwrth-Heneiddio'r Croen Yn Gwella Priodweddau Mecanyddol Cell. Metabolitau 2021, 11, 527. [CrossRef]

19. Farwick, M.; Köhler, T.; Schild, J.; Mentel, M.; Maczkiewitz, U.S.; Pagani, V. ; Bonfigli, A. ; Rigano, L.; Bureik, D.; Mae Gauglitz, GG Pentacyclic Triterpenes o Terminalia Arjuna yn Dangos Manteision Lluosog ar Groen Hen a Sych. Ffarmacol y Croen. Physiol. 2014, 27, 71–81. [CrossRef]

20. Bonte, F.; Dumas, M.; Chaudagne, C.; Meybeck, A. Dylanwad Asiatic Acid, Madecassic Acid, ac Asiaticoside ar Synthesis Colagen I Dynol. Med Planta. 1994, 60, 133–135. [CrossRef]

21. Chowdhary, S. Effeithiau Straen Oxidative ar Gynhyrchu Heneidd-dra mewn Ffibroblastiau Dynol. J. South Carol. Acad. Sci. 2018, 16, 2 .

22. Wang, Z. ; Wei, D. ; Xiao, H. Dulliau Sefydlu Senescence Cellog Gan Ddefnyddio Straen Ocsidiol. Dulliau Mol. Biol. 2013, 1048, 135–144. [PubMed]

23. Hildebrand, DG; Lehle, S.; Borst, A. ; Haferkamp, ​​S.; Essmann, F.; Schulze-Osthoff, K. -Fucosidase fel Biomarcwr Cyfleus Newydd ar gyfer Senescence Cellog. Cylchred Cell 2013, 12, 1922–1927. [CrossRef] [PubMed]

24. Lee, GAN; Han, JA; Im, JS; Morrone, A. ; John, K.; Goodwin, EC; Kleijer, WJ; DiMaio, D.; Hwang, ES Senescence-Cysylltiedig Beta-Galactosidase A yw Lysosomal Beta-Galactosidase. Cell Heneiddio 2006, 5, 187–195. [CrossRef] [PubMed]

25. Gorgoulis, V. ; Adams, PD; Alimonti, A.; Bennett, DC; Bischof, O.; Esgob, C. ; Campisi, J.; Collado, M.; Evangelou, K.; Ferbeyre, G.; et al. Senescence Cellog: Diffinio Llwybr Ymlaen. Cell 2019, 179, 813–827. [CrossRef]

26. Matsuoka, S.; Ballif, BA; Smogorzewska, A.; McDonald, ER; Hurov, KE; Luo, J. ; Bakalarski, CE; Zhao, Z.; Solimini, N.; Lerenthal, Y. ; et al. Mae Dadansoddiad Is-haen ATM ac ATR yn Datgelu Rhwydweithiau Protein Helaeth sy'n Ymatebol i Ddifrod DNA. Gwyddoniaeth 2007, 316, 1160–1166. [CrossRef]

27. Zhang, R.; Chen, W.; Adams, PD Dyraniad Moleciwlaidd o Ffurfio Ffocws Heterochromatin sy'n Gysylltiedig â Senescence. Mol. Cell Biol. 2007, 27, 2343–2358. [CrossRef]

28. LaBaer, ​​J. ; Garrett, MD; Stevenson, LF; Slingerland, JM; Sandhu, C.; Chou, HS; Fattaey, A. ; Harlow, E. Gweithgareddau Swyddogaethol Newydd ar gyfer y Teulu P21 o Atalyddion CDK. Genes Dev. 1997, 11, 847–862. [CrossRef]

29. Scholzen, T.; Gerdes, J. Y Protein Ki-67: O'r Hysbys a'r Anhysbys. J. Cell Physiol. 2000, 182, 311–322. [CrossRef]

30. Passos, JF; von Zglinicki, T. Dulliau ar gyfer Didoli Celloedd Celloedd Ifanc a Senescent. Dulliau Mol. Biol. 2007, 371, 33–44.

31. Dai, Y. ; Tang, H. ; Pang, S. Swyddogaethau Hanfodol Ffosffolipidau mewn Rheoleiddio Heneiddio a Hyd Oes. Blaen. Physiol. 2021, 12, 1998. [CrossRef]

32. Mae Llwybr Arwyddion Draenogod Dashty, M. Yn Gysylltiedig â Chlefydau sy'n Gysylltiedig ag Oedran. J. Metab Diabetes. 2014, 5, 2. [CrossRef]

33. Wang, D.; Lu, P.; Liu, Y.; Chen, L. ; Zhang, R.; Sui, W. ; Dumitru, AG; Chen, X. ; Wen, F. ; Ouyang, H.-W.; et al. Ynysu Celloedd Senescent Cynamserol Byw Gan Ddefnyddio Technoleg FUCCI. Sci. Rep. 2016, 6, 30705. [CrossRef]

34. Qian, J. ; Beullens, M.; Huang, J.; De Munter, A.S.; Lesage, B. ; Bollen, M. Cdk1 yn Archebu Digwyddiadau Mitotig trwy Gydgysylltu Switsh Ffosffatas sy'n Gysylltiedig â Chromosom. Nat. Cymmun. 2015, 6, 10215. [CrossRef]

35. Kong, M. ; Cutts, EE; Pan, D. ; Beuron, F. ; Kaliyappan, T.; Xue, C. ; Morris, EP; Musacchio, A.; Vannini, A.; Greene, EC Condensin Dynol I a II Gyrru Cywasgiad ATP-Dibynnol helaeth o DNA wedi'i Rhwymo Niwcleosom. Mol. Cell 2020, 79, 99–114.e9. [CrossRef]

36. Kops, GJPL; Gassmann, R. Coroni'r Kinetochore: Y Corona Ffibraidd mewn Gwahanu Cromosomau. Tueddiadau Cell Biol. 2020, 30, 653–667. [CrossRef]

37. Ma, HT; Poon, RYC TRIP13 Swyddogaethau wrth Sefydlu Man Gwirio Cynulliad Spindle trwy Ailgyflenwi O-MAD2. Cynrychiolydd Cell 2018, 22, 1439–1450. [CrossRef]

38. Kuipers, MA; Stasevich, TJ; Sasaki, T.; Wilson, KA; Hazelwood, KL; McNally, JG; Davidson, MW; Gilbert, DM Hynod Sefydlog Mae Llwytho Proteinau McM ar Gromatin mewn Celloedd Byw yn Angenrheidiol i'w Dadlwytho. J. Cell Biol. 2011, 192, 29–41. [CrossRef]

39. Meng, Q. ; Gao, J. ; Zhu, H.; Ef, H. ; Lu, Z. ; Hong, M.; Zhou, H. Mae'r Astudiaeth Proteomig o Gelloedd Ffibroblast Croen Dynol a Drosglwyddwyd yn Gyffredin yn Datgelu Rheoliad o Broteinau Cymhleth Condensin Cromosom sy'n Ymwneud â Henaduriaeth Atgynhyrchol. Biocemeg. Bioffys. Res. Cymmun. 2018, 505, 1112–1120. [CrossRef]

40. Larochelle, A.S.; Pandur, J. ; Fisher, RP; Salz, HK; Suter, B. Cdk7 Yn Hanfodol ar gyfer Mitosis ac ar gyfer Gweithgaredd Kinase mewn Vivo Cdk. Genes Dev. 1998, 12, 370–381. [CrossRef]

41. Leone, M. ; Cazorla-Vázquez, S.; Ferrazzi, F.; Wiederstein, JL; Gründl, M.; Weinstock, G. ; Vergarajauregui, S.; Eckstein, M.A.; Krüger, M.; Gaubatz, S.; et al. Mae angen IQGAP3, sef Targed YAP, ar gyfer Dilyniant Cylchred Celloedd Priodol a Sefydlogrwydd Genom. Mol. Canser Res. 2021, 19, 1712–1726. [CrossRef] [PubMed]

42. Nandi, AK; Ford, T.; Fleksher, D.; Neuman, B. ; Rapoport, AP Gwanhau Man Gwirio Difrod DNA gan PBK, Kinase Mitotig Newydd, Yn Cynnwys Rhyngweithio Protein-Protein ag Atalydd Tiwmor P53. Biocemeg. Bioffys. Res. Cymmun. 2007, 358, 181–188. [CrossRef] [PubMed]

43. Da, L. ; Dimri, Meddyg Teulu; Campisi, J.; Chen, KY Rheoleiddio Mynegiant Genynnau Dihydrofolate Reductase a Chydrannau E2F mewn Fibroblastau Diploid Dynol yn ystod Twf a Senescence. J. Cell Physiol. 1996, 168, 580–588. [CrossRef]

44. Demichev, V. ; Messner, CB; Vernardis, SI; Lilley, KS; Ralser, M. DIA-NN: Rhwydweithiau Niwral a Chywiro Ymyrraeth yn Galluogi Cwmpas Proteome Dwfn mewn Trwybwn Uchel. Nat. Dulliau 2020, 17, 41–44. [CrossRef]

45. Tyanova, S.; Temu, T. ; Sinitcyn, P.; Carlson, A.; Hein, FY; Geiger, T.; Mann, M.; Cox, J. Llwyfan Cyfrifiadurol Perseus ar gyfer Dadansoddiad Cynhwysfawr o Ddata Omics (Prote). Nat. Dulliau 2016, 13, 731–740. [CrossRef]

46. ​​Benjamini, Y. ; Hochberg, Y. Rheoli Cyfradd Darganfod Gau: Dull Ymarferol a Phwerus at Brofion Lluosog. JR Ystad. Soc. Ser. B (Dull.) 1995, 57, 289–300. [CrossRef]

47. Perez-Riverol, Y.; Bai, J.; Bandla, C.; García- Seisdedos, D.; Hewapathirana, A.S.; Kamatchinathan, S.; Kundu, DJ; Prakash, A.; Frericks-Zipper, A.; Eisenacher, M.; et al. Adnoddau Cronfa Ddata PRIDE yn 2022: Canolfan ar gyfer Tystiolaeth Proteomeg Seiliedig ar Sbectrometreg Màs. Asidau Niwcleig Res. 2021, 50, D543–D552. [CrossRef]

【Am ragor o wybodaeth:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】