Dadansoddiad Ansawdd A Gwerthusiad Cynhwysfawr o Cistanche Deserticola O Wahanol wreiddiau yn Tsieina

Crynodeb: Nod yr astudiaeth bresennol yw egluro gwahaniaethau ansawddCistanche deserticola(CD) o wahanol ardaloedd. Dadansoddwyd yn gymharol gynnwys cyfansoddion bioactif a dynnwyd o wahanol rannau (gwreiddyn, coesynnau canol a brig) a'u gweithgareddau gwrthocsidiol. Dangosodd y canlyniadau fod tarddiad a rhannau yn effeithio'n sylweddol ar gynnwys a gweithgareddau gwrthocsidiol cydrannau bioactif. Dangosodd y samplau o anialwch deheuol Tengger (D) grynodiadau uchel ocyfanswm polyffenolau(17.66 mg GAE/g DW) averbscoside(6.98 mg/g DW). Dangosodd y cyfansoddion hyn alluoedd sborion uchel yn erbyn ABTS (IC50=1.48 mg/mL) a DPPH (IC50=0.38 mg/mL). Dangosodd samplau o anialwch deheuol Gurbantunggut (E) y cynnwys uchaf o gyfanswm flavonoidau (16.58 mg RE/g DW). Ymddangosodd y cynnwys uchaf o gyfanswm triterpenoid yn y sampl o anialwch Badangirin (A) (18.63 mg OAE / g DW). Roedd gan samplau o anialwch gurbantunggut (F) polysacaridau a phrocyanidinau ar lefelau o 31.18 mg DE/g DW a 4.71 mg PCE/g DW, yn y drefn honno. Roedd gan y samplau o anialwch gogledd Tengger (C) yr uchafechinosidecynnwys (17.75 mg/g DW) a gallu sborion radical hydroxyl (IC50=3.05 mg/mL). Echdynnwyd tair prif gydran gan ddadansoddiad o'r prif gydrannau (PCA) gyda chyfradd cyfraniadau amrywiad cronnus o 85.43 y cant . Rhannwyd y samplau yn dri grŵp trwy ddadansoddi clwstwr hierarchaidd (HCA). Dosbarthwyd y pedwar maes cynhyrchu (A, B, C a D) o'r grŵp cyntaf a'r ail ym Mongolia Fewnol a Gansu, a'i sgôr gynhwysfawr oedd y pedwar uchaf. Bydd canlyniadau'r astudiaeth hon yn darparu sail ddamcaniaethol ar gyfer gwerthuso ansawdd, datblygu cynnyrch a safoni Cistanche deserticola yn Tsieina.

Geiriau allweddol:Cistanche deserticola; tarddiad; cyfansoddion bioactif;gweithgaredd gwrthocsidiol; gwerthusiad cynhwysfawr

Cael Deunydd Cistanche o ansawdd uchel

Cistancheyn blanhigyn parasitig llawn gwraidd gorfodol o Orobanchaceae, a elwir hefyd ynDayun, goblyn, Bambŵ Aurac ati [1]. Mae 4 rhywogaeth ac 1 amrywiad o'r genwsCistancheyn fy ngwlad, gan gynnwysCistanche deserticola, Cistanche tubulosa, Cistanche halen amrwd, blodau gwyn Cistanche a thywod Cistanche.Cistanche deserticolaaCistanche tubulosawedi'i gynnwys yn rhifyn 2020 o'r Pharmacopoeia Tsieineaidd

Coesynnau cigog sych o Cistanche deserticola. Mae Cistanche Cistanche yn barasitig ar wreiddiau tamarisk anialwch, wedi'i ddosbarthu'n bennaf yn ardaloedd anialwch deheuol Xinjiang. Mae Desert Cistanche yn barasitig ar wreiddiau'r planhigyn gosod tywod ac atal gwynt Haloxylon amoniwm, ac fe'i dosberthir yn bennaf yn ardaloedd anialwch Mongolia Fewnol, megis Cynghrair Alxa (Zuoqi, Youqi, Ejina Banner), Gansu a gogledd Xinjiang [{{ 1}}]. Cofnodwyd Cistanche deserticola gyntaf yn "Shen Nong's Materia Medica". Mae'n felys ei flas, yn gynnes ei natur, ac mae ganddo'r swyddogaethau o "gynnal pum llafur a saith anaf, maethu'r canol, dileu poen oer a gwres yn y coesyn, maethu'r pum organ fewnol, cryfhau yin, a bod o fudd i'r hanfod a gwaed", ac fe'i gelwir yn "ginseng anialwch" [4]. Mae astudiaethau ffarmacolegol modern wedi dangos bod gan Cistanche deserticola swyddogaethau o ostwng siwgr gwaed, gostwng lipidau gwaed[5], gwella swyddogaeth esgyrn[6], lleithio'r coluddion a'r carthyddion[7-8], gwrth-ocsidiad[9], diogelu'r afu[10-11], a gwrth-iselder. [12], lleddfu blinder [13] a gweithgareddau ffisiolegol eraill. Mae cysylltiad agos rhwng gweithgaredd biolegol Cistanche a'r gwahanol gydrannau swyddogaethol y mae'n eu cynnwys, megis polyffenolau, flavonoidau, polysacaridau, echinacea, a verbascoside [14]. Mae astudiaethau wedi dangos mai glycosidau ffenylethanoid fel echinacoside a verbascoside yn Cistanche yw'r prif sylweddau gweithredol ar gyfer tonhau yang arennau, gwrth-heneiddio a gwrth-blinder [15], a gallant hyrwyddo amlhau osteoblastau a lluosogiad bôn-gelloedd mesenchymal mêr esgyrn. . Gwahaniaethu Osteoblast[16-18]; Mae gan Cistanche deserticola polysacarid weithgareddau ffarmacolegol megis rheoleiddio gweithgaredd imiwn[19], amddiffyn nerfau[20], a gwrth-osteoporosis[21].

Mae gan y gallu dysgu a chof effaith wella benodol [22].

Mae gwahanol ffactorau megis hinsawdd, amgylchedd daearyddol ac amodau pridd yn effeithio'n fawr ar fathau a chynnwys cydrannau bioactif Cistanche deserticola, sy'n dod ag anawsterau i brosesu dwys Cistanche deserticola a rheoli ansawdd a safoni ei gynhyrchion [23]. Felly, mae'n arwyddocaol iawn astudio mathau, cynnwys a gweithgareddau gwrthocsidiol sylweddau bioactif yn Cistanche deserticola o wahanol darddiad ar gyfer y feddyginiaeth, diogelwch bwyd a datblygiad a defnydd cynhwysfawr o Cistanche deserticola.

Yn y papur hwn, cymerwyd Cistanche deserticola o wahanol ardaloedd cynhyrchu anialwch yn fy ngwlad fel y gwrthrych ymchwil, a'i gyfanswm polyffenolau, cyfanswm flavonoidau, cyfanswm polysacaridau, cyfanswm triterpenes, cyfanswm proanthocyanidins, echinacoside, verbascoside a sylweddau biolegol weithgar eraill a'u gweithgareddau gwrthocsidiol eu hastudio. Defnyddiwyd dadansoddiad prif gydrannau (PCA) a dadansoddiad clwstwr hierarchaidd (HCA) ymhellach ar gyfer dadansoddiad ystadegol aml-amrywedd i ddarparu sail ddamcaniaethol ar gyfer gwerthuso ansawdd Cistanche deserticola a safoni cynhyrchion wedi'u prosesu.

1 Defnyddiau a dulliau

1.1 Deunyddiau, Adweithyddion ac Offerynnau

Roedd y samplau o'r chwe ardal gynhyrchu (AF) i gyd yn goesynnau sych a chigog o Cistanche deserticola (Tabl 1). Yn ôl y dulliau samplu a adroddwyd [24-26], enwyd y gwreiddyn, y canol a'r brig yn 1, 2, a 3, yn y drefn honno (fel y dangosir yn Ffigur 1). Cafodd y samplau eu rhewi-sychu, eu malurio, eu hidlo trwy ridyll rhwyll 50-, eu selio dan wactod, a'u storio ar -18 gradd i'w defnyddio'n ddiweddarach.

Tabl 1 Adweithyddion tebyg i deserticola Cistanche a safonau: acetonitrile, asid fformig cromatograffigol pur cwmni Merck yn yr Almaen; Verbasin ac echinacoside safonol cromatograffig pur Ambel (Shanghai) Co., Ltd.; sodiwm carbonad, asid galig, sodiwm nitraid, alwminiwm nitrad, sodiwm hydrocsid, ethanol, rutin, vanillin, asid asetig rhewlifol, asid perclorig, asetad ethyl, aseton, ether, ffenol, asid sylffwrig, methanol, persylffad potasiwm ac adweithyddion eraill i gyd yn ddomestig gradd ddadansoddol, a brynwyd o Beijing Soleil Treasure Technology Co, Ltd.

Offerynnau: FD1A-50 ynghyd â Rhewi Dryer, Beijing Bo Yikang Company; TGL-20B Centrifuge, Shanghai Anting Scientific Instrument Co., Ltd.; 756 UV-Vis Spectrophotometer, Shanghai Qinghua Gwyddonol Offeryn Co, Ltd; LC-20AB Cromatograff Hylif Perfformiad Uchel gan Shimadzu Corporation o Japan; Synergedd H1 Darllenydd Microplate Aml-Swyddogaeth Porton Offeryn Co., Ltd.

1.2 Dulliau penderfynu ar sylweddau biolegol actif

1.2.1 Pennu cyfanswm cynnwys polyphenol

Cyfeiriwch at ddull Li [27] et al. Pwyswch 0.50 g o'r sampl, defnyddiwch 70 y cant ethanol fel y toddydd echdynnu (cymhareb solid-hylif 1:40), tynnwch ef mewn dyfais ultrasonic gyda phŵer sefydlog o 250 W (60 gradd, 40 min ), a centrifuge ar 4000 r/munud am 10 munud ar ôl oeri. Casglwch y supernatant i gyfaint (50 mL) i'w ddefnyddio.

Ychwanegu hydoddiant Folinphenol (5 mL, 110 y cant) i'r hydoddiant samplu (1 mL), ysgwyd yn dda, gadael i sefyll am 15 munud, yna ychwanegu hydoddiant sodiwm carbonad (4 mL, 7.5 y cant), ysgwyd yn dda, gadewch sefyll yn y tywyllwch am 20 munud Mesurwyd ei amsugnedd (765 nm), a mynegwyd y canlyniad mewn cywerth asid galig (mg asid Gallic cyfatebol, GAE/g DW), a'r hafaliad cromlin safonol oedd y=0. 0505x ynghyd â 0.0347,

R2=0.9991.

1.2.2 Pennu cyfanswm flavonoidau

Cyfeiriwch at ddull Xiong Shuangli [28] et al. Mae'r paratoad hydoddiant sampl yr un fath â 1.2.1. Rhoddwyd yr hydoddiant samplu (1 mL) mewn fflasg folwmetrig brown 10 mL, ac ychwanegwyd hydoddiant sodiwm nitraid (0.3 mL, 5 y cant), ei ysgwyd a'i ysgwyd, ac ar ôl sefyll am 15 munud, hydoddiant alwminiwm nitrad (0.3 mL, 10 y cant), hydoddiant sodiwm ocsid hydrogen (4 mL, 4 y cant), gwanhau i 10 mL gydag ethanol (50 y cant), ysgwyd yn dda, a gadael i sefyll yn y tywyllwch

Ar ôl 20 munud, mesurwyd yr amsugnedd (510 nm), a mynegwyd y canlyniad fel cywerth rutin (mg Rutin cyfwerth, RE/g DW). Yr hafaliad cromlin safonol oedd y=0.0053x plws 0.0161, R

2=0.9992.

1.2.3 Pennu cyfanswm y triterpenau

Cyfeirier at ddull He Ce [29] et al. Mae'r paratoad hydoddiant sampl yr un fath â 1.2.1. Cafodd yr hydoddiant samplu (0.4 mL) ei anweddu i sychder mewn baddon dŵr, a'r hydoddiant asid asetig vanillin-rewlifol a baratowyd yn ffres (0.4 mL, 1.5 y cant), asid perchlorig (1.6) mL), ychwanegwyd baddon dŵr poeth (70 gradd , 15 munud) yn eu trefn, a'u hychwanegu ar ôl oeri. Asetad ethyl (5L), mesurwyd yr amsugnedd (560 nm) ar ôl sefyll am 10 munud, a mynegwyd y canlyniad fel cyfwerth asid oleanolic (mg

Cyfwerth ag asid oleanolig, OAE/g DW), yr hafaliad cromlin safonol yw y=16.005x-0.0256, R2=0.9987.

1.2.4 Pennu cyfanswm cynnwys polysacarid

Cyfeiriwch at y dull Zhang Yadan et al. [30]. Pwyswch 1.00 g o'r sampl, defnyddiwch ddŵr deionized fel y toddydd echdynnu (cymhareb solid-i-hylif 1:30), tynnwch ef mewn dyfais ultrasonic gyda phŵer sefydlog o 250 W (60 gradd, 50 min), a centrifuge ar 4000 r/munud am 10 munud ar ôl oeri. , casglwch y supernatant ac ychwanegwch 4 gwaith cyfaint yr ethanol (95 y cant), ar ôl sefyll (4 gradd , 12 h), centrifuge ar 5000 r/munud i gasglu'r gwaddod,

Ar ôl golchi dro ar ôl tro gydag aseton, ether ac ethanol absoliwt am 2 waith yn ei dro, gan ychwanegu swm priodol o ddŵr deionized i ailgyfansoddi, deproteinization (dull carthu) a depigmentation (dull carbon activated) eu perfformio, ac mae'r cyfaint ei addasu i 10 mL o'r blaen profi.

Ychwanegwyd yr hydoddiant samplu (1 mL) yn olynol gyda hydoddiant ffenol (0.6 ml, 6 y cant) ac asid sylffwrig crynodedig (3 mL), ei ysgwyd a'i ysgwyd, ac yna ei ferwi am 10 munud. Ar ôl oeri, mesurwyd yr amsugnedd (490 nm), a mynegwyd y canlyniad fel cyfwerth â glwcos (mg) dextrose, DE / gDW). Yr hafaliad cromlin safonol yw y=0.0146x-0.015, R2=0.9998.

1.2.5 Pennu cynnwys proanthocyanidin

Cyfeiriwch at ddull Li Caixia [31] ac eraill. Pwyso 0.50 g o'r sampl, defnyddio 80 y cant ethanol fel y toddydd echdynnu (cymhareb solid-i-hylif 1:30), ei dynnu mewn dyfais ultrasonic gyda phŵer sefydlog o 250 W (50 gradd, 40 munud), a centrifuge ar 4000 r/munud am 10 munud ar ôl oeri. , casglwch y supernatant i gyfaint (50 mL) i'w ddefnyddio. Ychwanegwyd yr hydoddiant samplu (0.5 mL) gyda hydoddiant vanillin-methanol (3 mL, 4 y cant) ac asid hydroclorig crynodedig (1.5 mL), a mesurwyd yr amsugnedd (500 nm) ar ôl 15 munud o adwaith. Mynegwyd y canlyniad fel cywerth proanthocyanidin (mg Proanthocyanidin cyfwerth, PCE/ g DW), yr hafaliad cromlin safonol yw y=2.1709x-0.0036, R2=0.9979.

1.2.6 Pennu Verascoside ac Echinacea

Cyfeiriwch at ddull Xu Mingjun [32] ac eraill. Pwyswch 1.00 g sampl, defnyddiwch 80 y cant ethanol fel y toddydd echdynnu (cymhareb solid-i-hylif 1:30), tynnwch ef mewn dyfais ultrasonic gyda phŵer sefydlog o 250 W (60 gradd, 40 munud ), a centrifuge ar 4000 r/munud am 10 munud ar ôl oeri, casglwch y supernatant i gyfaint (50 mL) i'w ddefnyddio.

Colofn gromatograffig: Colofn Alltima C18 (4.6 mm × 250 mm, 5 μm); cyfnod symudol: hydoddiant asid fformig 0.4 y cant (A) -acetonitrile

(B); y rhaglen elution yw: 0~10 mun, 90 y cant (A); 10 ~ 20 munud, 90 y cant ~ 80 y cant (A); 20 ~ 30 munud, 80 y cant ~ 75 y cant

(A); 30 ~ 40 munud, 75 y cant ~ 80 y cant (A); 40~50 munud, 80 y cant ~90 y cant (A), tymheredd colofn 25 gradd, cyfradd llif 1.00 mL/munud;

Y donfedd canfod oedd 330 nm; cyfaint y pigiad oedd 1{{10}} μL. Gan gymryd y crynodiad fel yr abscissa a'r arwynebedd brig cyfatebol fel y mesuryn, lluniwch gromlin safonol echinacoside y=15311296.40x-119140.61, R2=0. 9996, yr ystod linellol yw 0.04 ~ 0.48 mg / mL; cromlin safonol verbascoside y=21780400.45x- 121356.95, R2=0.9994, amrediad llinol 0.04~0.08 mg/mL.

1.2.7 Assay gweithgaredd gwrthocsidiol in vitro

Paratoi hydoddiant sampl: Pwyswch 1.20 g o sampl, defnyddiwch ethanol 60 y cant fel y toddydd echdynnu (cymhareb solid-i-hylif 1:25), a'i dynnu mewn dyfais ultrasonic gyda phŵer sefydlog o 250 W (60 gradd, 40 min), a'i oeri am 4500 r. Centrifuge ar / mun am 15 munud, casglu'r supernatant, cymryd swm addas o uwchnatant a'i wanhau gyda 60 y cant ethanol, fel bod crynodiad yr hydoddiant sampl yn 1, 3, 5, 10, 20, 30, a 40 mg /mL i'w brofi.

1.2.7.1 Gallu radical rhydd ABTS i chwilota

Wrth gyfeirio at ddull Roberta et al. [33] gydag ychydig o addasiad: mae hydoddiant mam ABTS yn ddŵr wedi'i ddad-ïoneiddio i baratoi hydoddiant cymysg gyda chrynodiad terfynol o bersylffad potasiwm o 2.45 mmol/L a chrynodiad terfynol ABTS o 7 mmol/L, a gadewch iddo sefyll yn y tywyllwch (25 mmol/L). gradd , 12 h). Gwanhewch â dŵr wedi'i ddad-ïoneiddio cyn ei ddefnyddio i wneud yr amsugnedd ar 734 nm 0.70±0.05, sef hydoddiant gweithio ABTS. Ychwanegu 10 μL o hydoddiant sampl (1-40 mg/mL) i'r plât microtiter, ychwanegu hydoddiant gweithio ABTS (200 μL), amddiffyn rhag golau ar dymheredd ystafell am 30 munud, mesur ei amsugnedd (734 nm) gyda 60 y cant ethanol fel rheolydd, yn ôl Equation (1) yn cyfrifo cyfradd ABTS ynghyd â radical rhydd chwilota. ABTS a chyfradd sborion radical rhydd ( y cant ) { { 18 }} ( { { }}

A1−A2A0) × 100 (1) Yn y fformiwla: A0 yw amsugnedd 60 y cant ethanol yn lle hydoddiant sampl (gwag); A1 yw amsugnedd hydoddiant sampl wedi'i gymysgu â hydoddiant ABTS; A2 yw amsugnedd dŵr wedi'i ddadïoneiddio yn lle gwerth hydoddiant ABTS.

1.2.7.2 Gallu sborionu radical rhydd DPPH

Gan gyfeirio at y dull o Zhong Wenxiu et al. [34] gydag addasiad bach: ychwanegwyd yr ateb samplu (110 μL) gyda datrysiad DPPH (250 μL), cymysgwyd yn dda, ac yna ychwanegwyd at y plât ELISA, a'r amsugnedd oedd wedi'i fesur gyda 60 y cant ethanol fel y rheolaeth yn y tywyllwch am 25 munud. (517 nm), a chyfrifwyd y gyfradd sborionu radical DPPH yn unol â fformiwla (2). DPPH·cyfradd sborionu radical (canran )=(1-A1−A2A0)×100 (2) Yn eu plith: A0 yw gwerth amsugnedd 60 y cant ethanol yn lle'r sampl (gwag); A1 yw gwerth amsugnedd yr hydoddiant sampl ar ôl ei gymysgu â hydoddiant DPPH; A2 yw gwerth amsugnedd ethanol anhydrus yn lle hydoddiant DPPH.

1.2.7.3 OH gallu sborionu radical

Gan gyfeirio at ddull Smirnoff et al. [35] gyda mân addasiad: ychwanegwch 50 μL o'r hydoddiant sampl i 50 μL o hydoddiant sylffad fferrus (6.0 mmol/L), ychwanegwch 50 μL o hydrogen hydoddiant perocsid (6 mmol/L), cymysgwch yn dda ac adweithio 15 munud, yna ychwanegwch 50 μL o hydoddiant ethanol asid salicylic-absoliwt 6 mmol/L, adweithio ar 37 gradd am 30 munud, mesurwch yr amsugnedd ar 510 nm, a chyfrifwch y Cyfradd sborionu radical OH yn ôl fformiwla (3). Cyfradd sborionu radical OH ( y cant )=(1-A1−A2A0) × 100 (3) Yn eu plith: A0: gwerth amsugnedd y sampl wag (dŵr distyll yn lle'r sampl); A1: gwerth amsugnedd y system datblygu lliw a'r sampl; A2: Mae dŵr distyll yn disodli amsugnedd hydoddiant hydrogen perocsid.

1.3 Dadansoddi Data

Pennwyd yr holl ddata yn driphlyg, a mynegwyd y canlyniadau fel gwyriad safonol cymedrig ± (SD). Defnyddiwyd meddalwedd Origin 2019 ar gyfer dadansoddi prif gydrannau a dadansoddi clwstwr; Defnyddiwyd meddalwedd SPSS Statistics 26.0 ar gyfer dadansoddi amrywiant, a P<0.05 indicated="" a="" significant="">

Os hoffech wybod mwy am cistanche, anfonwch E-bost atom: wallence.suen@wecistanche.com