R. Vesicarius L. Yn Cael Effaith Nephroprotective yn Erbyn Straen Ocsidiol a achosir gan Cisplatin
Mar 26, 2022
Cyswllt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-bost:audrey.hu@wecistanche.com
Md. Mahmudul Hasan1, Y rhan fwyaf. Sayla Tasmin2, Ahmed M. El-Shehawi3, Mona M. Elseehy4, Md. Abu Reza1ac Ariful Haque2*
Haniaethol
Cefndir:Mae cisplatin yn gyffur gwrthganser rhagorol, ond mae ei ddefnydd wedi gostwng yn rhyfeddol oherwydd neffrowenwyndra difrifol. Mae R. vicarious L. yn llysieuyn deiliog sy'n amlwg gyda photensial gwrth-angiogenig, gwrthlidiol, gwrth-amlhau, hepatoprotective, a nephroprotective. Felly, cynlluniwyd yr astudiaeth hon i archwilio ei echdyniad methanol (RVE) ar gyfer effaith nephroprotective posibl.
Dulliau:Yn bennaf, in vitro, cadarnhawyd gweithgaredd gwrthocsidiol RVE yn seiliedig ar 2, 2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) dawn sborion radical rhydd. Wedi hynny, cafodd llygod gwryw Albino o'r Swistir eu trin â cisplatin (2.5 mg/kg) am 5 diwrnod yn olynol i achosi neffrowenwyndra. Archwiliwyd adferiad o neffrowenwyndra trwy drin yr anifeiliaid ag RVE (25, 50, a 100 mg/kg) yn fewnberitoneol (ip) am y 5 diwrnod olynol nesaf. Ar ôl cwblhau'r driniaeth, aberthwyd llygod a chasglwyd yr arennau. Cafodd rhan ohono ei homogeneiddio mewn byffer sodiwm ffosffad ar gyfer gwerthuso lefel malondialdehyde (MDA), defnyddiwyd rhan arall i werthuso mynegiant genyn (NQO1, p53, a Bcl-2). Ar ben hynny, gwerthuswyd cynhwysedd niwtraleiddio hydrogen perocsid (H2O2) RVE mewn celloedd HK-2 in vitro. Yn olaf, pennwyd ffytogemegau bioactif mewn RVE gan ddefnyddio sbectrometreg màs cromatograffaeth nwy (GC-MS).
Canlyniadau:Dangosodd RVE weithgaredd gwrthocsidiol in vitro mewn modd dibynnol ar ddos gyda gwerth 37.39 ± 1.89 ug/mL IC50.
Lleihaodd triniaeth ag RVE yn rhyfeddol (p < {{0}}.05)="" gynnwys="" mda="" ym="" meinwe'r="" arennau.="" ar="" ben="" hynny,="" lliniarwyd="" yn="" sylweddol="" (p="">< 0.05)="" y="" mynegiant="" o="" enynnau="" nqo,="" t53,="" a="" bcl-2="" mewn="" modd="" dibynnol="" ar="" ddos="" o="" ganlyniad="" i="" weinyddu="" rve.="" gwnaeth="" rve="" yn="" sylweddol="" (p="">< 0.05)="" wrthdroi="" lefel="" h2o2="" mewn="" celloedd="" hk-2="" i="" bron="" normal.="" o="" gc-ms,="" deg="" cyfansoddyn="" gan="" gynnwys="" tri="" gwrthocsidydd="" hysbys="" "4h-pyran-4-un,="" 2,="" 3-dihydro-3,5-dihydroxy-6-methyl-"="" ,="" "hexadecanoic="" acid",="" a="" "squalene"="" eu="" canfod.="" roedd="" y="" dyfyniad="" yn="" gyfoethog="" ag="" alcaloid="">
Casgliad:Yn gyffredinol, mae gan RVE effaith amddiffynnol yn erbyn niwed i'r arennau a achosir gan cisplatin.
Geiriau allweddol:Cisplatin, R. dirprwyol, Llygod, Arennau, celloedd HK-2, straen ocsideiddiol, genyn NQO1
Mae Cistanche deserticola yn atal clefyd yr arennau, cliciwch yma i gael y sampl
Rhagymadrodd
Mae straen ocsideiddiol yn ganlyniad i anghymesuredd rhwng ffurfio rhywogaethau ocsigen adweithiol (ROS) a mecanweithiau amddiffyn gwrthocsidiol rheolaidd [1]. Mae adweithiau biocemegol rheolaidd, amlygiad aml i'r amgylchedd anffafriol, a chymeriant uchel o xenobioteg yn arwain at gynhyrchu ROS [1]. Mae ROS yn rhyngweithio â gweddillion cystein moleciwlau signalau sy'n sensitif i redox gan gynnwys ffactorau trawsgrifio, ffosffatas tyrosine protein, a kinases protein; o ganlyniad, mae ocsidiad grwpiau thiol ar y gweddillion hyn yn arwain at newidiadau i'r proteinau wedi'u targedu, gweithredoedd biolegol, galluoedd signalau, imiwnedd, a pharadeimau byw / marw celloedd atodol [2]. Gelwir rhywogaethau cemegol sy'n cynnwys ocsigen sydd â phriodweddau adweithiol yn ROS sy'n cynnwys radicalau rhydd a moleciwlau anradical megis superoxide a H2O2, yn y drefn honno [3]. Mae straen ocsideiddiol a achosir gan ROS yn gysylltiedig ag etioleg nifer o afiechydon gan gynnwys canser. Mae lewcemia myeloid acíwt (AML) yn dwf canseraidd o gelloedd gwaed o fewn y mêr esgyrn. Mae'r digwyddiadau cellog a moleciwlaidd sy'n sail i AML yn cynnwys difrod DNA, ymlediad clonal, mwy o farwolaethau celloedd, ac ansefydlogrwydd genetig pellach, sy'n ganlyniad straen ocsideiddiol a achosir gan ROS [4]. Mae ffisioleg ddynol wedi cael nifer o fecanweithiau a all gynhyrchu gwrthocsidyddion i amddiffyn rhag straen ocsideiddiol gan arwain at amddiffyn celloedd rhag effeithiau gwenwynig a gwasanaethu i atal clefydau [5]. Fodd bynnag, mae celloedd yn datblygu mecanweithiau mewndarddol i wrthweithio straen ocsideiddiol a chadw ROS gofynnol [6].
NAD(P)H: Mae quinone oxidoreductase 1 (NQO1) yn flavoenzyme [7] sy'n gallu cataleiddio rhydwythiad dau neu bedwar-electron ac sy'n defnyddio'r priodwedd hwn i ddadwenwyno cwinîn [8]. Gall amddiffyn celloedd rhag difrod ocsideiddiol trwy gadw beicio rhydocs o'r neilltu a thrwy leihau cynhyrchu radicalau rhydd [8]. Ar wahân i ddadwenwyno xenobiotig, mae NQO1 hefyd yn ymwneud â niwtraliad superoxide, modiwleiddio diraddiad proteasomal p53 [9], ataliad Bcl-2 [10], a mwy o dueddiad i anaf celloedd [11].
Cisplatin yw'r cyffur gwrthganser platinwm cyntaf a gymeradwyir gan y Weinyddiaeth Bwyd a Chyffuriau (FDA) [12]. Mae cisplatin yn cyflawni apoptosis trwy achosi straen ocsideiddiol a gorfynegi genyn atal tiwmor p53 [12]. Mae nifer o effeithiau andwyol gan gynnwys neffrowenwyndra, hepato-wenwyndra, gastrowenwyndra, otowenwyndra, myelosuppression, a niwrowenwyndra yn ganlyniad straen ocsideiddiol a achosir gan cisplatin [12]. Mae'r sgîl-effeithiau hyn wedi lleihau'n sylweddol y defnydd o cisplatin er bod ganddo weithgaredd gwrthganser rhagorol. Mae'n hysbys bod cisplatin yn achosi straen ocsideiddiol ac yn atal y genyn NQO1 mewn arennau llygod [13]. Felly, mae chwilio a dilysu ffynonellau naturiol effeithiol o wrthocsidyddion yn dod yn faes ymwybyddiaeth. Gall cymeriant gwrthocsidyddion dietegol sy'n deillio o blanhigion fel flavonoidau, carotenoidau, a chyfansoddion ffenolig arwain at amddiffyniad rhag clefydau cardiofasgwlaidd, cataractau a chanser [14].
Gelwir R. vicarious (Polygonaceae) yn "Takpalong / Chukapalong / Amlabetom" yn Bengali [15]. Mae'n tyfu yn ardaloedd anialwch a lled-anialwch Asia , Awstralia , a Gogledd Affrica [16] . Mae'n blanhigyn mewn perygl nad yw wedi'i astudio fawr ddim ym Mangladesh. Yn Bangladesh, mae pobl yn bwyta'r planhigyn cyfan fel llysieuyn ar ôl coginio gyda halen, gwahanol sbeisys ac olew. Weithiau, mae pobl yn defnyddio dail ffres yn unig mewn salad cymysg yn lle letys. Mae'r ddeilen amrwd ychydig yn sur, ond mae'n mynd yn hynod sur ar ôl coginio. Ar ben hynny, mae ychydig o ddail fel arfer yn cael eu cymysgu mewn prydau pysgod wrth eu coginio i gael blas ychydig yn asidig.
Mae'r planhigyn hwn yn cael ei ddefnyddio fel llysieuyn llysieuol a meddyginiaethol ledled y byd [17]. Defnyddir y dail a'r hadau fel gwrthwenwyn ar gyfer gwenwyn neidr a sgorpion, yn y drefn honno [17]. Mewn triniaeth gwerin, mae R. dirprwyol wedi cael ei ddefnyddio ers tro wrth drin afiechydon hepatig, treuliad gwael, rhwymedd, pentyrrau, chwydu, flatulence, trafferthion y galon, poenau, anhwylderau'r ddueg, dyspepsia, y ddannoedd, broncitis, asthma, clefyd y crafu, leucoderma, ac fel a carthydd, stumogig, blasus, tonic, diuretig, ac analgesig [18]. Mae'r planhigyn hwn yn cynnwys nifer o gyfansoddion sy'n bwysig yn fiolegol gan gynnwys flavonoidau, anthraquinones, carotenoidau, fitaminau, lipidau, ac asidau organig, sy'n adnabyddus fel asiantau gwrthocsidiol, gwrthficrobaidd a gwrthganser [19]. Mae pob rhan o'r planhigyn hwn yn cynnwys quercetin (flavonoids) mewn swm uchel [15]. Mae'r planhigyn hwn yn cynnwys 0.25 mg fitamin A, 1.33 mg fitamin C, 2.37 mg fitamin E [15], 3.38 mg flavonoids, a 5.66 mg polyphenols [20] fesul 100 g pwysau sych.
Dangosodd Shahat a chydweithwyr [21] effeithiau gwrth-angiogenig a gwrth-amlhau methanol (80 y cant ) dyfyniad o R. rhan o'r awyr dirprwyol yn erbyn carsinoma hepatocellular mewn model llygod mawr. Dangosodd astudiaeth arall botensial gwrth-angiogenig in vitro o ddetholiad dirprwyol R. [22]. Mae echdyniad methanol o ddirprwy R. cyfan yn amddiffyn rhag hepatowenwyndra a achosir gan garbon tetraclorid mewn vivo [23]. Mae effaith gwrthlidiol mewn cwningod wedi bod yn amlwg gan echdyniad dail methanolig o R. dirprwyol [24]. Adroddodd astudiaeth ddiweddar [25] yn vivo effaith nephroprotective o ffracsiynau R. dyfyniad dirprwyol ethanolig yn erbyn gentamicin a gwenwyndra deucromad potasiwm.
Gan gadw'r wybodaeth uchod i ystyriaeth, ein nod oedd archwilio effaith echdynion dirprwyol R. (RVE) o ran adferiad o neffrowenwyndra a achosir gan cisplatin trwy gynnal mynegiant genynnau NQO1 mewn model anifail.
manteision iechyd cistanche: trin clefydau'r arennau
Defnyddiau a dulliau
Cemegau ac adweithyddion
Prynwyd cisplatin a 2, 2-diffenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) oddi wrth SIGMA-ALDRICH (UDA).
Prynwyd Kit Assay Colorimetrig Creatinine (ID cynnyrch - 700,460) gan Cayman Chemical (UDA). Prynwyd Canolig Eryr Addasedig Dulbecco (DMEM), serwm buchol ffetws (FBS), a gwrthfiotig (10,000 U/mL penisilin a 10,000 ug/mL streptomycin) gan Gibco (Labordai Gibco, UDA). Cafwyd pecyn Assay H2O2 ROS-Glo™ a GoTaq® qPCR Master Mix gan Promega (UDA). Prynwyd pecyn trawsgrifio gwrthdro TIAN- Script M-MLV oddi wrth TIANGEN (Tsieina) a phaent preimio gan IDT (Integrated DNA Technologies, Malaysia). Roedd yr holl gemegau ac adweithyddion eraill a ddefnyddiwyd yn yr arbrawf hwn o radd ddadansoddol.
Casglu samplau planhigion a pharatoi echdynion
Prynwyd planhigion dirprwyol ffres R. o farchnad leol yn Sonadighi, Rajshahi, Bangladesh. Cafodd sbesimen planhigion ei nodi a'i ddilysu gan Dr. Ahmad Humayan Kabir, Adran Botaneg, Prifysgol Rajshahi, Bangladesh. Mae sbesimen o dan taleb rhif. Storiwyd 00095 yn llysieufa Adran Botaneg, Prifysgol Rajshahi. Cafodd rhannau awyrol y planhigyn eu glanhau, eu sychu ar 37 gradd, eu malu'n bowdr bras gan ddefnyddio sychwr electronig, a'u storio mewn cynhwysydd wedi'i selio ar 4 gradd. Diddymwyd y powdr mân (10 g) mewn methanol (500 mL). Sonigwyd y cynnwys (Soni- prep 150, Tsieina) ar 20 kHz am 10 munud. Cyflawnwyd hidlo'r dyfyniad trwy ddefnyddio papur Hidlo Ffibr Gwydr (Macherey NAGEL, GmBH, Almaeneg) gyda Chyfarpar Hidlo DURAN (Almaeneg). Yn olaf, cafodd yr hidlydd ei grynhoi gan ddefnyddio sychwr rhewi (VirTis Benchtop Pro, SP SCIENTIFIC, USA). Enw'r darn o'r diwedd oedd RVE.
Prawf gweithgaredd gwrthocsidiol in-vitro
Cynhaliwyd gallu gwrthocsidiol in-vitro RVE yn seiliedig ar chwilota DPPH fel y disgrifiwyd yn flaenorol [26] heb fawr o addasiad. Aseswyd gallu sborion radical DPPH RVE yn seiliedig ar drosi lliw porffor DPPH i liw melyn. Roedd y cymysgedd adwaith ym mhob tiwb micro-centrifuge (2 mL) yn cynnwys hydoddiant methanolig 95{{5} μL o radicalau DPPH (0.1 mM) a 50 μL RVE o bum crynodiad gwahanol (200, 500, 1000, 2000, a 4000 ug /mL methanol) i wneud crynodiadau terfynol o 10, 25, 50, 100 a 200 ug/mL. Cadwyd tiwb arall sy'n cynnwys 50 μL methanol a 950 μL hydoddiant methanolig o DPPH fel rheolaeth. Gadawyd y tiwbiau prawf am 30 munud mewn lle tywyll. Cymerwyd amsugnedd y cymysgeddau ar 517 nm gan ddefnyddio sbectrophotometer UV-VIS GENESYS 10S (Thermo SCIENTIFIC, USA). Yn olaf, cyfrifwyd canran y gweithgaredd sborionu radical (RSA) yn seiliedig ar afliwiad DPPH gan ddefnyddio'r fformiwla canlynol y cant RSA=[(ADPPH − ARVE)/ADPPH] × 100 lle ADPPH yw amsugnedd yr hydoddiant DPPH (rheoli) ac ARVE yw amsugnedd yr hydoddiant RVE. Galwyd y crynodiad yr arweiniodd RVE at 50 y cant o RSA fel gwerth IC50 ac fe'i cyfrifwyd gan ddefnyddio graff sy'n gosod y cant RSA yn erbyn crynodiadau RVE gwahanol a ddefnyddiwyd.
Anifeiliaid arbrofol a dylunio arbrofol
Cafodd llygod Albino Swisaidd gwrywaidd 42 diwrnod oed (30-32 g pwysau corff) eu cynefino am 1 wythnos cyn dechrau'r arbrawf mewn ystafell (tymheredd o tua 25 ± 2 gradd a ~ 50 y cant o leithder, 12 h cylch tywyll / golau). Darparwyd dŵr yfed a bwyd ad libitum.
Gwahanwyd llygod ar hap yn wyth grŵp (n {{0}}). Cafodd y grŵp (rheoli) cyntaf ei drin â 0.2 mL o 0.9 y cant NaCl. Cafodd y pedwar grŵp nesaf eu trin â cisplatin ar 2.5 mg / kg am 5 diwrnod ar egwyl o 24 h. Ar ôl rhoi cisplatin, gadawyd un grŵp (ail grŵp) heb unrhyw driniaeth bellach a'i neilltuo fel y grŵp rheoli dan straen. Cafodd y trydydd, y pedwerydd, a'r pumed grŵp eu trin ymhellach ag RVE ar 25, 50, a 100 mg / kg, yn y drefn honno am 5 diwrnod. Cafodd tri grŵp arall eu trin ag RVE yn unig ar 25, 50, a 100 mg/kg, yn y drefn honno am 5 diwrnod. Cafodd cisplatin ac RVE eu hydoddi mewn dŵr distyll. Rhoddwyd pob triniaeth yn fewnperitonol. Ar ôl 24 h o'r driniaeth ddiwethaf, cafodd yr anifeiliaid eu ewthaneiddio yn dilyn dadleoliad ceg y groth [25]. Yna agorwyd y peritonewm gyda siswrn, casglwyd gwaed ar ôl tyllu'r galon, a chasglwyd yr arennau gan ddefnyddio grymoedd. Roedd gwaed yn destun i wirio lefel creatinin mewn serwm. Bu'r arennau'n destun gwerthuso lefel malondialdehyde a mynegiant genynnau.
Mesur creatinin serwm
Mesurwyd creatinin serwm gan ddefnyddio Creatinine Colorimetrig Assay Kit-700,460 (Cayman Chemical, USA) yn dilyn protocol y gwneuthurwr a ddarparwyd gyda'r pecyn.
Mesur perocsidiad lipid arennol
Mae malondialdehyde (MDA) yn gynnyrch terfynol perocsidiad lipid ym meinwe'r arennau ac fel arfer yn cael ei fesur fel dangosydd cynhyrchu ROS. Fodd bynnag, mesurwyd lefel MDA mewn meinwe arennol yn ôl astudiaeth flaenorol [27]. Ar y dechrau, roedd y meinwe arennol yn homogenized mewn byffer sodiwm ffosffad (0.1 M, pH 7.4). Ychwanegwyd hydoddiant adwaith yn cynnwys 0.8 y cant asid thiobarbitwrig (1.5 mL), 8.1 y cant SDS (200 μL), 20 y cant (pH 3.5) asid asetig (1.5 mL), a dH2O (600 μL) i 100 μL o feinwe homogenedig, ac yna deorwyd y gymysgedd ar 95 gradd am 1 h. Ar ôl oeri, cafodd y cymysgeddau eu centrifugio ar 10,000 g am 10 munud ar 4 gradd a mesurwyd amsugnedd y supernatant ar 532 nm gyda safon 1, 1, 3, 3- tetra methoxy propan. Mesurwyd cyfanswm y protein gan ddefnyddio pecyn Bradford Protein Assay (BIO-RAD, UDA), a thrwy ei gymharu ag albwmin serwm buchol safonol (BSA). Mynegwyd dwyster perocsidau lipid fel nanomolau (nM) o MDA fesul mili-gram (mg) o brotein.
Adwaith cadwyn polymeras amser real (PCR amser real)
Perfformiwyd PCR amser real fel y disgrifiwyd yn flaenorol [28, 29]. Cafodd cyfanswm yr RNA o feinwe'r arennau ei ynysu gan ddefnyddio adweithydd TRIzol® (Invitrogen) yn unol â'r protocol a ddarparwyd gan y gwneuthurwr. Yna cafodd yr RNA ynysig (1 ug) ei drawsnewid yn cDNA. Yn gyntaf, cymerwyd 2 μL hexamer ar hap (10 μM), 2 μL dNTPs (10 mM), 1 ug RNA, a HO di-niwcleas hyd at 15 μL a'u deor am 5 munud ar 70 gradd. Gosodwyd y gymysgedd ar rew ar unwaith am 2 funud. Yna ychwanegwyd 4 μL o glustogfa llinyn 1af (5x) ac 1 μL M-MLV trawsgrifiad cefn ym mhob tiwb a'u deor am 10 munud a 50
min ar 25 gradd a 42 gradd , yn y drefn honno. Yn olaf, anactifadwyd yr ensym M-MLV gwrthdro-transcriptase trwy ddeor y cymysgedd ar 95 gradd am 5 munud. Roedd y cynhyrchion cDNA wedi'u syntheseiddio yn destun PCR amser real ar gyfer meintioli mynegiant genynnau NQO1, t53, a Bcl-2 gan ddefnyddio paent preimio penodol (Tabl 1 ). Perfformiwyd pob adwaith (10 μL) mewn triphlyg yn cynnwys 5 μL GoTaq qPCR Master Mix (2x) (Promega, UDA), 0.5 μL (10 mM) o bob paent preimio, 3 μL dŵr di-niwcleas, a 1 μL cDNA mewn 48-platiau adwaith ffynnon. Perfformiwyd beicio thermol gan ddefnyddio peiriant PCR amser real (System PCR Amser Real Eco™, Illumine®, UDA) gyda'r amodau beicio canlynol: 95 gradd am 10 munud, ac yna 40 cylch o 95 gradd am 30 s, 50 gradd am 30 s, a 72 gradd am 25 s. Cadarnhawyd penodoldeb adweithiau PCR trwy ddadansoddi'r gromlin doddi ar 95 gradd am 15 s, 45 gradd am 15 s, a 95 gradd am 15 s. Cadarnhawyd penodoldeb adweithiau PCR trwy ddadansoddi'r gromlin doddi ar 95 gradd am 15 s, 45 gradd am 15 s, a 95 gradd am 15 s. Perfformiwyd meintioliad cymharol mynegiant genynnau gan ddefnyddio genyn GAPDH mewndarddol fel rheolaeth yn seiliedig ar y dull ΔΔCq.
Meithriniad celloedd a thriniaeth
Roedd llinell gell epithelial tiwbyn procsimol arennol dynol, celloedd HK-2, yn cael eu cynnal mewn DMEM ynghyd â 10 y cant o FBS a gwrthfiotigau (50 U/mL o benisilin a 50 ug/mL streptomycin) mewn deorydd gyda 5 y cant o CO2 a 95 lleithder y cant ar 37 gradd.
Assay mesur H2O2
Amcangyfrifwyd lefel H2O2 mewn celloedd HK-2 trwy ddefnyddio pecyn ROS- Glo™ H2O2 Assay (Promega, UDA) yn unol â'r protocol a ddarparwyd gan wneuthurwr y cit. Cafodd celloedd HK-2 (1000 o gelloedd) mewn 70 μL DMEM eu gosod yn ffynhonnau'r 96-plât microteitr ffynnon. Ar ôl caniatáu atodi'r celloedd ar wyneb y wal, disodlwyd 10 μL DMEM o ffynhonnau plât microtiter â 10 μL cisplatin (25 μM yn DMEM) a'i gadw mewn deorydd am 12 h. Yna, ychwanegwyd 10 μL RVE i wneud crynodiadau terfynol 125, 250, a 500 ug/mL yn DMEM a'u deor am 12 awr arall. Ar ôl hynny, ychwanegwyd 20 μL H2O2 Substrate Solution a 100 μL ROS-Glo ™ Datrysiad i bob ffynnon. Deorwyd yr adwaith ar dymheredd ystafell am 20 munud. Yn olaf, mesurwyd goleuedd trwy ddefnyddio GloMax Luminometer (Promega, UDA).
Dadansoddiad GC-MS
Perfformiwyd dadansoddiad GC-MS o RVE (hydoddi mewn methanol) fel y disgrifiwyd yn flaenorol [30] gan ddefnyddio GCMS- QP2020 (SHIMADZU) yn cynnwys awto-samplydd (AOC{). {5}}s), chwistrellydd awto (AOC-20i), a Chromatograff Nwy (GC-2010 Plus) wedi'u rhyngwynebu â Sbectromedr Màs sydd â SH-Rxi{{1{{30 37}}}}Colofn capilari Sil MS (30 m × 0.25 μm ID × 0.25 μm DF). Cadwyd y nwy cludo Heliwm ar gyfradd llif cyson o 1.72 mL/munud, ac roedd cyfaint pigiad o 5 μL yn destun cymhareb hollt 10:1. Roedd tymheredd y chwistrellwr yn cael ei gynnal ar 220 gradd, tymheredd y ffynhonnell ïon yn 280 gradd, roedd tymheredd y popty wedi'i raglennu o 80 gradd (daliwch am 2 funud), gyda chynnydd o 5 gradd / mun i 150 gradd (dal amser 5.0). min), yna 5 gradd / mun i 280 gradd , gan orffen gydag isothermol 8 munud ar 280 gradd. Cymerwyd sbectra màs ar 1.5 kV gydag egwyl sgan o 0.5 s a rhedwyd y sampl ar amrediad o 45–350 m/z. Roedd yr oedi toddydd rhwng 0 a 3 munud, a chyfanswm yr amser rhedeg GC-MS oedd 55 munud. Mesurwyd crynodiad cymharol y cyfansoddion a ganfuwyd trwy gymharu ei arwynebedd brig cyfartalog â chyfanswm yr arwynebedd. Perfformiwyd dehongliad o sbectrwm màs mewn GC-MS gan ddefnyddio cronfeydd data Safonol a Thechnoleg y Sefydliad Cenedlaethol (NIST) gan gynnwys NIST08, NIST08s, a NIST14.
Dadansoddiad ystadegol
Perfformiwyd y dadansoddiadau ystadegol gan ANOVA yn dilyn prawf T3 Dunnett gan ddefnyddio meddalwedd IBM SPPS (fersiwn 20). Mynegir data fel modd ± gwyriad safonol (SD). Ystyriwyd y gymhariaeth arwyddocaol yn t<0.05. all="" of="" the="" graphs="" were="" prepared="" using="" microsoft="" excel="" (version="">
Canlyniadau
Prawf gweithgaredd gwrthocsidiol in-vitro
Er yr adroddwyd yn flaenorol bod gan RVE weithgaredd gwrthocsidiol, fe wnaethom ailwirio gweithgaredd gwrthocsidiol ein detholiad gan ddefnyddio gallu sborion radical rhydd DPPH. RVE niwtraleiddio DPPH dos-ddibynnol (Ffig. 1). Datgelodd RVE weithgaredd gwrthocsidiol in vitro sylweddol a gwerth IC50 a gyfrifwyd o RVE oedd 37.39 ± 1.89 ug/mL.
Mesur creatinin serwm
Roedd lefel creatinin serwm mewn llygod yn sylweddol (p <{{0}}.05) wedi="" cynyddu="" ar="" ôl="" rhoi="" cisplatin="" (tabl="" 2).="" roedd="" triniaeth="" ag="" rve="" yn="" rhyfeddol="" (p="">< 0.05)="" wedi="" gwella="" lefel="" creatinin="" mewn="" modd="" dibynnol="" ar="" ddos="" (tabl="">
Mesur perocsidiad lipid arennol
O'i gymharu â rheolaeth, cynyddodd cisplatin yn sylweddol (p <{{0}}.05) gynnwys="" mda="" ym="" meinwe="" arennol="" llygod="" (tabl="" 3).="" mewn="" cyferbyniad,="" fe="" wnaeth="" y="" driniaeth="" rve="" adfer="" yn="" sylweddol="" (p="">< 0.05)="" mda="" i="" bron="" normal="" mewn="" modd="" dos-ddibynnol="" (tabl="">
PCR amser real
Gostyngodd cisplatin yn sylweddol (p < {{0}}.05)="" fynegiad="" mrna="" nqo1="" gan="" 0.15-plygwch="" a="" chynyddwyd="" p53="" a="" bcl-2="" mrna="" mynegiant="" gan="" 24="" a="" 4.2-plyg,="" yn="" ôl="" eu="" trefn="" (ffig.="" 2).="" lliniarodd="" rve="" yn="" sylweddol="" (p="">< 0.05)="" fynegiad="" mrna="" nqo1,="" t53,="" a="" bcl-2="" mewn="" modd="" dibynnol="" dos="" (ffig.="" 2).="" o'i="" gymharu="" â'r="" unig="" grŵp="" sy'n="" cael="" ei="" drin="" â="" cisplatin,="" cynyddwyd="" mynegiant="" mrna="" nqo1="" 3.57,="" 6.36,="" a="" 9.28-plyg="" ar="" 25,="" 50,="" ac="" 100="" mg/kg="" rve,="" yn="" y="" drefn="" honno="" (ffig.="" 2a).="" unwaith="" eto,="" gostyngwyd="" mynegiant="" mrna="" p53="" gan="" 0.63,="" 0.46,="" a="" 0.21-plyg="" yn="" 25,="" 50,="" a="" 100="" mg/kg="" rve,="" yn="" y="" drefn="" honno="" (ffig.="" 2b).="" cafodd="" mynegiant="" mrna="" bcl-2="" hefyd="" ei="" leihau="" gan="" 0.71,="" 0.40,="" a="" 0.32-plyg="" ar="" 25,="" 50,="" a="" 100="" mg/kg="" rve,="" yn="" y="" drefn="" honno="" (ffig.="" 2c).="" ond,="" ni="" ddarganfuwyd="" unrhyw="" newidiadau="" arwyddocaol="" (p=""> 0.05) yn lefel mynegiant genynnau NQO1, t53, a Bcl-2 oherwydd triniaeth ag RVE (Ffig. 3).
H2O2assay mesur
Yn yr assay mesur H2O2, mae'r H2O2ystyriwyd bod y lefel yn gymesur â goleuder. Cynyddodd gweinyddu cisplatin yn sylweddol (p < {{0}}.05)="" lefel="" h2o2="" 2.2-plyg="" (ffig.="" 4).="" gostyngodd="" triniaeth="" ag="" rve="" yn="" sylweddol="" (p="">< 0.05)="" lefel="" h2o2="" o="" 0.25,="" 0.38,="" a="" 0.49-plyg="" yn="" 125,="" 250,="" a="" 500="" ug/ml,="" yn="">
Dadansoddiad GC-MS
Cyfanswm o 10 cyfansoddyn (Tabl 4 a Ffig. 5) gan gynnwys "Isoborneol, ether pentamethyldisilanyl (alcohol sesquiterpene)", "Thymine (pyrimidine nucleobase)", "4H-Py- rhedodd-4-un, 2,{{ 8}}dihydro-3,5-dihydroxy-6-methyl- (saponin)", "Asid hecsadcanoig, methyl ester (asid brasterog methyl ester)", "9,12- Asid octadecadienoig, ester methyl (asid brasterog methyl ester)", "9-Asid octadecenoic (Z)-, methyl ester (asid brasterog methyl ester)), "stearad Methyl (asid brasterog methyl ester)", "Diisooctyl ffthalate (ester)", "13-Docosenamide, (Z)- (alcaloid))", a "Squalene (tri- terpene)" wedi'u canfod yn RVE.
buddion cistanche tubolosa: gostwng lipidau gwaed
Trafodaeth
Mae gwrthocsidyddion naturiol a synthetig wedi'u hastudio'n gynhwysfawr a datgelwyd eu bod yn weithredol ar gyfer naill ai atal neu leddfu gwenwyndra mewn ffisioleg anifeiliaid [31]. Atchwanegiadau gwrthocsidiol yw'r gydran a ddatblygir naill ai trwy synthesis cemegol neu drwy echdynnu o fwydydd naturiol ond nid yw'r rhain yn union yr un fath o ran cyfansoddiad â gwrthocsidyddion sydd ar gael mewn bwyd [5]. Felly, mae'r farn yn cael ei wahanu dros amser p'un a yw gwrthocsidyddion synthetig yn rhoi buddion iechyd tebyg a gwrthocsidyddion naturiol [32] ai peidio. Mae'r ysfa ar ddod i leihau'r defnydd o atchwanegiadau gwrthocsidiol synthetig a cheisio ffynonellau amgen, rhad, adnewyddadwy, naturiol, ac o bosibl mwy diogel o wrthocsidyddion naturiol effeithiol.
Un o'r mecanweithiau pwysicaf yw'r llwybr ffactor sy'n gysylltiedig â ffactor niwclear erythroid-2 (Nrf2) sy'n gyffredinol yn amddiffyn celloedd rhag straen ocsideiddiol a achosir gan straenwyr alldarddol neu mewndarddol [27]. Mae'r gwrthocsidyddion effeithiol yn cymell mynegiant o Nrf2, sy'n symud ymhellach i'r cnewyllyn ac yn clymu i elfen ymateb gwrthocsidiol (ARE) sy'n ysgogi mynegiant genyn dadwenwyno a gwrthocsidiol cam II NQO1 [33, 34]. Mynegir NQO1 yn eang ac yn wahaniaethol mewn modd meinwe-benodol. Mae NQO1 yn flavoprotein gwrthocsidiol cytosolig sy'n cataleiddio'r lleihad 2- o quinones i hydroquinones, gan arwain at ddadwenwyno'r electroffiliau a rhagweld beicio rhydocs [35]. Yn ôl astudiaeth flaenorol [36], mae -lapachone yn actifadu NQO1, sy'n cynyddu lefel NAD plus mewngellol ymhellach ac yn amddiffyn yr aren rhag anaf acíwt a achosir gan cisplatin.
Mae'n hysbys bod cisplatin yn achosi difrod yn y bilen hidlo glomerwlaidd trwy straen ocsideiddiol, llid, ac apoptosis sydd yn gyfan gwbl yn arwain at gyfradd hidlo glomerwlaidd is a cholli athreiddedd pilen arferol [37]. Felly, cynyddwyd lefel creatinin serwm. creatinin serwm yw un o'r marcwyr ymarferoldeb arennol posibl. Cynyddodd triniaeth cisplatin gynnwys MDA mewn meinwe arennau sy'n gynnyrch eilaidd o berocsidiad lipid ac mae'r adroddiad hwn yn gyson ag astudiaethau blaenorol [27, 35, 37, 38]. Roedd triniaeth ag RVE wedi lleihau'n sylweddol y cynnwys MDA ym meinwe'r arennau. Ar yr un pryd, gostyngwyd y lefel creatinin hefyd sy'n dangos effaith wella RVE.
Yn ogystal, gostyngwyd mynegiant NQO1 yn sylweddol, a chynyddwyd mynegiant p53 a Bcl-2 yn sylweddol ar ôl dod i gysylltiad â cisplatin. O ran mynegiant NQO1 a t53 in vivo, mae ein canlyniad yn gyson ag astudiaeth flaenorol [13]. Dangosodd astudiaeth ddiweddar [39] fod cisplatin wedi lleihau mynegiant Bcl-2 yn sylweddol yn aren llygod, ond yn syndod gwelsom fynegiant uchel. Gall y gwahaniaeth hwn fod o ganlyniad i wahaniaeth dos [40] gan fod Mohamed a chydweithwyr [39] wedi defnyddio 8 mg/kg am 12 diwrnod, tra gwnaethom ddefnyddio 2.5 mg/kg am 5 diwrnod yn unig. Nododd astudiaeth arall [41] y gall cisplatin gynyddu mynegiant Bcl-2 ar ddogn pan nad yw'n sytotocsig. Unwaith eto, mae mwy o fynegiant Bcl-2 yn sensiteiddio celloedd tuag at straen ocsideiddiol [40].
Fodd bynnag, mae mynegiant p53 yn isel ar amodau ffisiolegol arferol ond disgwylir iddo gael ei uwch-reoleiddio ar ôl ei drin â cisplatin oherwydd bod yr asiant cemotherapiwtig platinwm hwn yn actifadu llwybr apoptotig dibynnol p53. Ar ôl i ni drin llygod â cisplatin, cynyddwyd p53 yn sylweddol mewn arennau llygod o'i gymharu â rheolaeth. Mae proto-oncogene Bcl-2 arall hefyd wedi'i gydberthyn â lefel mynegiant NQO1. Gan ddynwared y mynegiad p53, canfuom hefyd fod y lefelau Bcl- 2 wedi'u cynyddu gyda thriniaeth cisplatin, ond eu bod wedi'u hail-orchuddio'n sylweddol ar driniaeth ag RVE. Mae hyn yn bosibl, mewn ymateb i straen ocsideiddiol, mae'r genyn p53 yn cael ei actifadu ac yn arwain at arestio cylchred celloedd, heneiddedd, neu apoptosis [6]. Gyda dadwenwyno, mae gorfynegiant NQO1 yn aml yn cael ei ystyried yn gydberthynas ag apoptosis mewn celloedd canser [10], er bod mecanwaith sylfaenol apoptosis a gorfynegiant NQO1 yn dal i fod yn ddadleuol. Ar ben hynny, mewn carsinoma hepatogellog, mae gorfynegiant NQO1 yn lleihau'r mynegiant Bcl-2 [10]. Mae gan broto-oncogene Bcl- 2 hefyd p53 fel y gydberthynas â mynegiant NQO1. Mae p53 yn ffactor trawsgrifio dilyniant-benodol sy'n cael ei actifadu gan nifer o fathau o straen cellog [42], tra bod gorfynegiant Bcl-2 yn gweithredu fel mandwll sefydlogydd mitochondrial i hwyluso rhyddhau cytochrome-c ar straen ocsideiddiol [12]. Yn ein hachos ni, fe wnaethom wirio'r ddau ymateb genyn gyda thriniaeth cisplatin mewn meinwe arennau arferol a chanfod eu mynegiant cynyddol. Roedd triniaeth RVE yn dychwelyd mynegiant t53 a Bcl-2 i bron yn normal mewn modd dibynnol ar ddos. Dangoswyd y math hwn o ddiddymiad mynegiant Bcl-2 hefyd gan ddefnyddio sborionwr ROS Trolox [43]. At hynny, cynyddwyd y lefel H2O2 yn sylweddol mewn celloedd HK-2 oherwydd triniaeth â cisplatin in vitro. Ar ôl triniaeth gyda RVE, cafodd y lefel H2O2 ei hadfer yn sylweddol i lefel arferol. Efallai bod hyn oherwydd effaith triniaeth RVE a gynyddodd mynegiant NQO1 [44], sy'n amddiffyn rhag straen ocsideiddiol [6].
Cadarnhaodd cromatogram GC-MS fodolaeth deg cyfansoddyn yn RVE. Ymhlith y rhain, mae "4H-Pyran- 4-un, 2, 3-dihydro-3,5-dihydroxy-6-methyl-", "Hexadecanoic acid", ac " Mae Squalene" yn gwrthocsidyddion adnabyddus[45-47]. Mae'n bosibl bod y tri chyfansoddyn hyn yn gyfan gwbl wedi cael effaith nephroprotective synergaidd. Adroddodd astudiaethau blaenorol hefyd am ymsefydlu mynegiant NQO1 gan fitamin A [48], fitamin C [49], fitamin E [50], flavonoidau [51], a polyffenolau [50]. Felly, mae'r adroddiad hwn yn awgrymu egluro a yw'r dyfyniad penodol hwn yn cynnwys unrhyw beth ymhlith fitamin A, fitamin C, fitamin E, flavonoidau, a polyphenol, ai peidio.
Casgliad
Mae'r canfyddiad cyffredinol yn awgrymu bod RVE yn ffisiolegol effeithiol wrth amddiffyn yr arennau rhag niwed a achosir gan cisplatin. Felly, mae'n hanfodol egluro'r union gyfansoddion sy'n gyfrifol am liniaru neffrowenwyndra a achosir gan cisplatin a allai ddod yn fuddiol i bobl eu defnyddio.
Diolchiadau
Mae'r awduron yn ddiolchgar i Gangen Rajshahi o Gyngor Ymchwil Gwyddonol a Diwydiannol Bangladesh (BCSIR), am ddarparu cymorth labordy i fesur RNA.
Cyfraniadau awduron
Perfformiodd MMH ddylunio arbrofol, arbrofi, dadansoddi a pharatoi data, ysgrifennu a golygu llawysgrifau, adolygu a drafftio llawysgrifau; MST ac MME wedi gwneud arbrofion a dadansoddi data; Cyfrannodd AME a MAR at oruchwyliaeth ac adnoddau; Roedd AH yn gyfrifol am gysyniadu, goruchwylio, adnoddau, a golygu llawysgrifau. Pob awdur
adolygu'r llawysgrif. Darllenodd yr awduron y llawysgrif derfynol a'i chymeradwyo.
Ariannu
Ariannwyd y gwaith presennol gan rif Prosiect Cefnogi Ymchwilwyr Prifysgol Taif (TURSP - 2020/75), Prifysgol Taif, Taif, Saudi Arabia.
Argaeledd data a deunyddiau.
Mae'r holl ddata perthnasol ar gael a gellid eu darparu ar gais i'r awdur cyfatebol.
Datganiadau
Cymeradwyaeth foesegol a chaniatâd i gymryd rhan
Cymeradwywyd y foeseg ar gyfer cynnal yr arbrawf hwn gan y Pwyllgor Sefydliadol Anifeiliaid, Moeseg Feddygol, Bioddiogelwch a Bioddiogelwch (IAMEBBC), Sefydliad y Gwyddorau Biolegol (IBSc), Prifysgol Rajshahi, ac fe'i darparwyd o dan y memo rhif 31/{{1} }IAMEBBC/IBSc. Perfformiwyd yr holl ddulliau yn unol â'r canllawiau a'r rheoliadau a ddarparwyd gan y pwyllgor moesegol a grybwyllir uchod. Cynhaliwyd yr astudiaeth hon yn unol â chanllawiau ARRIVE (Ymchwil Anifeiliaid: Adrodd ar Arbrofion Mewn Vivo). Nid yw "caniatâd i gymryd rhan" yn berthnasol ar gyfer yr astudiaeth hon.
Manylion Awdur
1 Labordy Bioleg Moleciwlaidd a Gwyddor Protein, Adran Peirianneg Genetig a Biotechnoleg, Cyfadran Bywyd a Gwyddorau Daear, Prifysgol Rajshahi, Rajshahi 6205, Bangladesh. 2 Labordy Patholeg Moleciwlaidd, Sefydliad y Gwyddorau Biolegol, Prifysgol Rajshahi, Rajshahi 6205, Bangladesh. 3Adran Biotechnoleg, Coleg Gwyddoniaeth, Prifysgol Taif, Blwch Post 11099, Taif 21944, Saudi Arabia. 4 Yr Adran Geneteg, y Gyfadran Amaethyddiaeth, Prifysgol Alexandria, Alexandria 21545, yr Aifft.
Cyfeiriadau
1. Bagchi K, Puri S. Radicalau rhydd a gwrthocsidyddion mewn iechyd a chlefyd: adolygiad. Iechyd Dwyrain Môr y Canoldir J. 1998; 4:350–60.
2. Koh EM, Lee EK, Cân CH, Cân J, Chung HY, Chae CH, et al. Mae Ferulate, sy'n rhan weithredol o germ gwenith, yn lleddfu anghydbwysedd PTK / PTP ocsideiddiol a achosir gan straen ac anactifadu PP2A. Gwenwynig Res. 2018; 34(4):333–41.
3. Hassan AI, Ibrahim RY. Mae rhai proffiliau genetig yn iau Ehrlich yn ysgogi llygod sy'n cario tiwmor dan straen arbelydru. J Radiat Res Appl Sci. 2014; 7(2): 188–97.
4. Zhou FL, Zhang WG, Wei YC, Meng S, Bai GG, Wang GAN, et al. Cynnwys straen ocsideiddiol wrth ailwaelu lewcemia myeloid acíwt. J Biol Chem. 2010; 285(20): 15010–5.
5. Pham-Huy LA, He H, Pham-Huy C. Radicalau rhydd, gwrthocsidyddion mewn afiechyd ac iechyd. Int J Biomed Sci. 2008; 4:89–96.
6. Srijiwangsa P, Na-Bangchang K. Rolau NAD (P) H-quinone oxidoreductase 1 (NQO1) ar ddilyniant canser a chemoresistance. J Clin Exp Oncol. 2017; 6:1–6.
7. Siegel D, Yan C, Ross D. NAD (P) H: quinone oxidoreductase 1 (NQO1) yn y sensitifrwydd a'r ymwrthedd i quinones antitumor. Biochem Pharmacol. 2012; 83(8): 1033-40.
8. Dinkova-Kostova AT, Talalay P. NAD (P) H: quinone acceptor oxidoreductase 1 (NQO1), ensym gwrthocsidiol amlswyddogaethol a cytoprotection hynod amlbwrpas. Arch Biochem Biophys. 2010; 501(1):116–23.
9. Cullen JJ, Hinkhouse MM, Grady M, Gaut AW, Liu J, Zhang YP, et al. Ataliad Dicumarol o NADPH: mae quinone oxidoreductase yn ysgogi ataliad twf canser y pancreas trwy fecanwaith uwchocsid-gyfryngol. Canser Res. 2003; 63(17):5513–20.
10. Zhang X, Han K, Yuan DH, Meng CY. Gorfynegiant NAD (P) H: mae quinone oxidoreductase 1 yn atal amlhau celloedd carcinoma hepatogellog ac apoptosis ysgogedig trwy actifadu llwybr AMPK/PGC-1. DNA Cell Biol. 2017; 36(4): 256–63.
11. Zeekpudsa P, Kukongviriyapan V, Senggunprai L, Sripa B, Prawan A. Roedd atal NAD (P) H-quinone oxidoreductase 1 yn gwella tueddiad celloedd cholangiocarcinoma i gyfryngau cemotherapiwtig. J Exp Clin Cancer Res. 2014; 33(1):1–13.
12. Dasari S, Tchounwou PB. Cisplatin mewn therapi canser: mecanweithiau gweithredu moleciwlaidd. Eur J Ffarmacol. 2014; 740:364-78.
13. Mae Zhu X, Jiang X, Li A, Zhao Z, Li S. S-Allylmercaptocysteine yn gwanhau nephrotoxicity a achosir gan cisplatin trwy atal apoptosis, straen ocsideiddiol, a llid. Maetholion. 2017; 9(2): 166.
14. Matkowski A. Diwylliant planhigion in vitro ar gyfer cynhyrchu gwrthocsidyddion - adolygiad. Biotechnol Adv. 2008; 26(6):548–60.
15. El-Bakry AA, Mostafa HAM, Alam EA. Gweithgaredd gwrthocsidiol Rumex dirprwyol L. ar y cam llystyfol o dwf. Asiaidd J Pharm Clin Res. 2012; 5:111–7.
16. Rechinger KH. Rumex (Polygonaceae) yn Awstralia: ailystyriaeth. Nuytsia. 1984; 5:75-122.
17. Shahat AA, Alsaid MS, Alyahya MA, Higgins M, Dinkova-Kostova AT. NAD (P) H: Gweithgaredd inducer Quinone oxidoreductase 1 rhai planhigion meddyginiaethol Saudi Arabia. Med Planta. 2013; 79(06):459–64.
18. El-Hawary SA, Sokkar NM, Ali ZY, Yehia MM. Proffil o gyfansoddion bioactif o Rumex dirprwyol L. J Food Sci. 2011; 76(8): C1195–202.
19. Barbosa-Filho JM, Alencar AA, Nunes XP, Tomaz AC, Sena-Filho JG, Athayde- Filho PF, et al. Ffynonellau carotenau alffa-, beta-, gama-, delta-ac epsilon: adolygiad o'r ugeinfed ganrif. Parch Bras. 2008; 18(1): 135–54.
20. Laouini SE, Ouahrani MR. Sgrinio ffytocemegol, gwrthocsidiol in vitro a gweithgaredd gwrthfacterol o echdynnu Rumex dirprwyol L.. Astudiaeth Wyddoniaeth Par: Chem Chem Engi Biotech Food Ind. 2017; 18:367–76.
