Effaith Amddiffynnol Arennol Rhagdriniaeth Corbys Beluga ar gyfer Anaf Isgemia-Atgillifiad

Syn-ook Lee,¹ Felly Young Chun,²EunHye Lee,²Bomi Kim,²BoHyun Yoon,² et al

Cefndir a Nod. Anaf isgemia/atlifiad (I/R), a achosir gan acíwtarendifrod, yn achosi newidiadau histopatholegol, apoptosis celloedd tiwbyn, llid, ocsidiad, a cholli swyddogaeth arennol. Gwerthuswyd yr effeithiau amddiffynnol rhag anaf I/R o ragdriniaeth corbys beluga. Defnyddiau a Dulliau. Rhannwyd llygod yn bedwar grŵp: grwpiau triniaeth corbys beluga arferol, heb eu trin, isel (2mg), a dos uchel (8mg). Rhoddwyd corbys Beluga ar lafar am bythefnos, ac yna isgemia arennol dwyochrog am 20 munud ac atlifiad am 30 munud. Samplau gwaed aarencasglwyd a dadansoddwyd meinweoedd i ymchwilio i swyddogaeth arennol, histopatholeg, celloedd epithelial ac endothelaidddifrod, apoptosis, straen ocsideiddiol, ac ymatebion llidiol. Canlyniadau. Roedd y grwpiau a ragdriniwyd yn cynnal swyddogaeth arennol, gyda lefelau wrea nitrogen wrea gwaed (BUN) a lefelau creatinin yn sylweddol is, o gymharu â'r grwpiau eraill. Dangosodd y dadansoddiad histopatholegol lai o anaf i'r tiwbyn agos a gostyngiad mewn moleciwl sy'n gysylltiedig ag anafiadau (arenmoleciwl anaf 1 (KIM-1) a secretiad lipocalin sy'n gysylltiedig â neutrophil gelatinase (NGAL)) yn y grwpiau sydd wedi'u trin ymlaen llaw o'u cymharu â'r grwpiau eraill. Terfynell deoxynucleotidyl transferase dUTP nick-end labelu- (TUNEL-) celloedd positif a secretion moleciwlau cysylltiedig apoptosis (Fas a caspase 3) eu lleihau'n sylweddol yn y grwpiau a ragdriniwyd o gymharu â'r grwpiau eraill. Roedd y grwpiau a gafodd eu trin ymlaen llaw yn dangos mynegiant genynnau positif sy'n gysylltiedig â microbestyll (clwstwr o wahaniaethiad (CD31)) a mynegiant moleciwl adlyniad negyddol (moleciwl adlyniad mewngellol 1 (ICAM-1)). Gwelwyd effaith gwrthocsidiol yn y grwpiau rhag-drin, gyda llai o fynegiant malonaldehyde (MDA) a mwy o ensymau gwrthocsidiol (superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), glutathione (GSH), a secretion glutathione peroxidase (GPx)). Yn y grwpiau a gafodd eu trin ymlaen llaw, cafodd F4/80 ynghyd â macroffagau a CD4 ynghyd â ymdreiddiad celloedd T eu hatal a gostyngodd lefelau cytocin proinflammatory (interleukin- (IL-) 1 , IL-6, a ffactor necrosis tiwmor- (TNF-); fodd bynnag, cynyddodd lefelau cytocinau gwrth-lid (trawsnewid ffactor twf- (TGF-), IL-10, ac IL-22). Casgliadau. Dangosodd rhag-driniaeth corbys Beluga effeithiau amddiffynnol yn erbyn niwed arennol a achosir gan I/R, trwy weithgareddau antiapoptotig, gwrthlidiol a gwrthocsidiol.

Cyswllt:joanna.jia@wecistanche.com

propiedades cistanchedeserticola atalarenclefyd, cliciwch yma i gael y sampl

1. Rhagymadrodd

Mae anaf isgemia/atlifiad (I/R), yn ystod neffrectomi rhannol neu drawsblaniad arennol, yn achosi acíwtarennolanaf [1, 2] a gall arwain at ddirywiad anadferadwy o swyddogaeth arennol [3]. Mae isgemia yn sbarduno apoptosis mewn celloedd epithelial tiwbaidd arennol, sy'n cynyddu ymatebion llidiol celloedd rhyng-raniadol. Mae atlifiad yn achosi difrod microfasgwlaidd, sy'n hyrwyddo mudo celloedd llidiol, trwy fynegiant ffactor adlyniad ar wyneb celloedd endothelaidd [4-8]. Mae anaf I / R hefyd yn achosi straen ocsideiddiol, gan gynyddu rhywogaethau ocsigen adweithiol (ROS) a lleihau gweithgaredd ensymau gwrthocsidiol [9], gan arwain at gynhyrchu mwy o ffactorau pro-llidiol [10], actifadu llwybr caspase, a mwy o farwolaethau celloedd apoptotig, sy'n yn y pen draw achosi colli swyddogaeth arennol [11]. Er mwyn atal anaf arennol a achosir gan I/R, cynigiwyd y defnydd o gyfryngau gwrthocsidiol, gyda swyddogaethau gwrthlidiol ac antiapoptotig [10-14].

Mae cyltifarau corbys (gwyrdd, coch, Ffrangeg, neu beluga) yn cynnwys amrywiol gyfansoddion bioactif, yn enwedig gwrthocsidyddion [15]. Mae cyfanswm eu cynnwys polyphenol a flavonoid yn amrywio o 27.30-30.30mg (cyfwerth ag asid tannig) / g i 13.14-16.29mg (cyfwerth â quercetin) / g, yn y drefn honno [16]. Dangoswyd bod gan ffacbys Beluga gynnwys polyphenol sylweddol o uchel ac effeithiau sborion ROS [16]. Adroddodd ein tîm am effeithiau gwrthocsidiol corbys, gan ddefnyddio arbrawf llinell celloedd yr afu in vitro [16]. Dangosodd corbys Beluga effeithiau amddiffynnol sylweddol yn erbyn sytowenwyndra a achosir gan alcohol mewn celloedd AML{-12 o gymharu â chyltifarau corbys eraill. Gwelwyd hefyd effeithiau gwrthlidiol corbys beluga mewn celloedd RAW264.7 a driniwyd â lipopolysaccharid [17]. Lleihaodd triniaeth corbys Beluga yn sylweddol gynhyrchiad ocsid nitrig (NO) a mynegiant synthase anwythol (iNOS), trwy uwchreoleiddio'r ffactor niwclear E2-ffactor cysylltiedig 2- (Nrf{{{30)) heme cyfryngol llwybr oxygenase-1 (HO{{{-1). Roedd yr arbrofion in vitro hyn yn awgrymu effeithiau gwrthocsidiol a gwrthlidiol corbys beluga.

Er mwyn ehangu cymhwysiad corbys beluga, fe wnaethom eu cymhwyso i fodel llygoden anaf I/R arennol a gwerthuso'r effeithiau amddiffynnol arennol. Ar gyfer yr arbrawf hwn, rhoddwyd corbys beluga am 2 wythnos, fel rhag-driniaeth, ac yna isgemia am 20 munud ac atlifiad am 30 munud. Dilyswyd effeithiau amddiffynnol arennol rhag-driniaeth corbys beluga trwy ddadansoddi gweithrediad arennol, histopatholeg, difrod celloedd epithelial ac endothelaidd, apoptosis, straen ocsideiddiol, ac ymatebion llidiol. Fe wnaethom ddamcaniaethu y byddai rhag-driniaeth â chorbys beluga yn atal anaf arennol a achosir gan I/R, trwy weithgareddau gwrth-ocsidydd, gwrthlidiol ac antiapoptotig.

2. Defnyddiau a Dulliau

2.1. Grwpiau Anifeiliaid ac Amodau Triniaeth.

Cyflawnwyd yr holl weithdrefnau gan ddefnyddio protocol anifeiliaid sydd wedi'i gymeradwyo gan Bwyllgor Gofal a Defnydd Anifeiliaid Sefydliadol Prifysgol Yeungnam (AEC{0}}). Rhannwyd llygod (ICR, 8 wythnos oed, gwrywaidd, 23-25g, Orient, Seongnam, Korea) ar hap i'r 4 grŵp canlynol (n =7 fesul grŵp): (1) Grŵp rheoli arferol, normal; (2) Grŵp heb ei drin, wedi'i drin â halen; (3) Dos isel, isel (2mg/100μL halwynog/-BioMed Research International llygoden), 14-grŵp rhag-drin corbys beluga a weinyddir ar lafar y dydd; a (4) Dos uchel, uchel (8mg/100μL halwynog/llygoden), 14-bywga corbys a weinyddir ar lafar y dydd, grŵp rhag-driniaeth. Darparwyd corbys Beluga gan yr Athro Syng-Ook Lee (Prifysgol Keimyung, Daegu, Korea), ac adroddwyd ar baratoi detholiad a dadansoddiad cyfansawdd bioactif mewn astudiaeth flaenorol [16]. Ar ôl y driniaeth, rhoddwyd yr anifeiliaid mewn sefyllfa dueddol, o dan anesthesia, a gwnaed toriad dorsal [1]. Cafodd y rhydweli arennol a'r gwythiennau ar gyfer y ddwy aren eu cuddio â chlamp fasgwlaidd am 20 munud, ac yna atglifiad am 30 munud, yn ôl protocol a ddisgrifiwyd yn flaenorol [18, 19]. Casglwyd gwaed trwy dyllu cardiaidd, a thynnwyd yr arennau. Golchwyd yr arennau â halwynog wedi'i glustogi â ffosffad; defnyddiwyd un aren ar gyfer echdynnu RNA a phrotein, tra bod yr aren arall yn cael ei defnyddio ar gyfer dadansoddiad histolegol.

2.2. Dadansoddiadau Histopatholegol ac Imiwnohistocemegol (IHC).

Perfformiwyd archwiliadau histopathologig gan ddefnyddio staen hematocsilin ac eosin (H&E), a gwerthuswyd anafiadau yn seiliedig ar y ffactorau canlynol: presenoldeb celloedd tiwbyn yn disgyn i'r lwmen, colled niwclear mewn celloedd wedi'u diblisgo, malurion luminal, gofod luminal wedi cwympo, a ymdreiddiad celloedd imiwn. . Cyflawnwyd y sgôr gan arbenigwr patholegol: sgôr 0, dim anaf tiwbaidd; sgôr 1,<10% of="" tubules="" injured;="" score="" 2,="" 10–25%="" of="" tubules="" injured;="" score="" 3,="" 25–50%="" of="" tubules="" injured;="" score="" 4,="" 50–74%="" of="" tubules="" injured;="" and="" score="" 5,="">Anafwyd 75 y cant o'r tiwbiau. Ar gyfer dadansoddiad IHC, gosodwyd yr aren â 4 y cant o baraformaldehyd, a thorrwyd samplau wedi'u mewnosod â pharaffon yn adrannau 5μm. Perfformiwyd staenio H&E a IHC, yn dilyn prosesau arferol. Cymhwyswyd gwrthgyrff cynradd yn erbyn celloedd imiwnedd (F4/80 a chlwstwr o wahaniaethiad 8 (CD8), Abcam, Caergrawnt, DU) a chell endothelaidd (CD31 a moleciwl adlyniad mewngellol 1 (ICAM-1), Abcam) i adrannau , am 24 awr ar 4 gradd (gwanhau 1:200), ac yna'r gwrthgorff eilaidd (Alexa Fluor 594, Life Technology, Waltham, MA, UDA), am 1 awr ar dymheredd ystafell, a 4′,6-diimidino{ {19}}Defnyddiwyd ffenylindole (DAPI) i staenio niwclysau.

2.3. Assay Protein.

Ar gyfer dadansoddi swyddogaeth arennol, gwahanwyd serwm, heb wrthgeulydd, a chanfuwyd crynodiadau creatinin serwm a nitrogen wrea gwaed (BUN) gan ddefnyddio Pecyn Assay Colorimetrig Creatinine a Phecyn Assay Wrea Quant-Chrom (BioAssay Systems LLC, Hayward, CA, UDA). ), yn y drefn honno. Er mwyn asesu anaf tiwbyn / llestr arennol, straen ocsideiddiol, ensymau gwrthocsidiol, ac apoptosis, cafodd meinwe'r arennau ei homogeneiddio â phob byffer priodol. Er mwyn dadansoddi anaf celloedd epithelial tiwbyn arennol, aseswyd crynodiadau moleciwl anaf i'r arennau-1 (KIM-1) a lipocalin sy'n gysylltiedig â neutrophil gelatinase (NGAL) gan ddefnyddio assay immunosorbent-gysylltiedig ag ensymau (ELISA) (USCN Life Science Inc). ., Wuhan, Tsieina). I ddadansoddi apoptosis, mesurwyd crynodiadau Fas a caspase 3 gan ddefnyddio'r pecynnau ELISA priodol (Abcam). Er mwyn gwerthuso straen ocsideiddiol, mesurwyd lefelau malonaldehyde (MDA) gan ddefnyddio pecyn assay MDA (Sefydliad Ymchwil Biobeirianneg Nanjing Jiancheng, Nanjing, Tsieina). Mesurwyd ensymau gwrthocsidiol, gan gynnwys superoxide dis- mutase (SOD), catalase (CAT), glutathione (GSH), a glutathione peroxidase (GPx), gan ddefnyddio pecyn asesu SOD cyfanswm (Sefydliad Ymchwil Biobeirianneg Nanjing Jiancheng), pecyn asesu CAT ( Sefydliad Ymchwil Biobeirianneg Nanjing Jiancheng), pecyn profi fflworometrig GSH, a Phecyn Assay GPx (BioVision Inc.), yn y drefn honno. Defnyddiwyd pob pecyn yn unol â chyfarwyddiadau'r gwneuthurwr.

2.4. Dadansoddiad Mynegiant Genynnau.

Echdynnwyd cyfanswm RNA gyda'r Adweithydd TRIzol, a chafodd cDNA ei syntheseiddio o gyfanswm RNA 20ug, gan ddefnyddio pecyn synthesis cDNA (Invitrogen, Waltham, MA, UDA). Roedd yr amodau PCR amser real fel a ganlyn: 95 gradd am 10 munud, ac yna 40 cylch o 95 gradd am 10 eiliad, 60 gradd am 50 eiliad, a 72 gradd am 20 eiliad. Canfuwyd mwyhad genynnau gan ddefnyddio gwyrdd SYBR, a defnyddiwyd y dull 2−ΔΔCt i ddadansoddi mynegiant. Perfformiwyd arbrofion yn driphlyg, gan ddefnyddio'r dilyniannau preimio canlynol: interleukin- (IL-) 1 , 5′-gcccatcctctgagactcat-3′ a 5′-aggccacagg- tattttgtcg-3′; IL-6, 5′-agttgccttcttgggactga-3′ a 5′ -tccacgatttcccagagaac-3′; ffactor necrosis tiwmor- (TNF-), 5′-agcccccagtctgtatcctt-3′ a 5′-ctccctttgcagaactcagg-3′; trawsnewid ffactor twf- (TGF-), 5′-tggttgtagaggg- caaggac-3′ a 5′-ttgcttcagctccacagaga-3′; IL-10, 5′ -acctggtagaagtgatgccc-3′ a 5′-agggtcttcagcttctcacc-3′; IL- 22, 5′-tccaacttccagcagccata-3′ a 5′-tagcactgactcctcggaac- 3′; a glyseraldehyde 3′-ffosffad dehydrogenase (GAPDH), 5′-tgtgtccgtcgtggatctga-3′ a 5′-cctgcttcac- caccttcttga-3′.

2.5. TUNEL Assay.

Er mwyn asesu apoptosis, perfformiwyd assay labelu diwedd ffug dUTP (TUNEL) wedi'i gyfryngu gan TdT gan ddefnyddio pecyn canfod apoptosis (Chemicon, Bedford, MA, UDA) gan ddilyn cyfarwyddiadau'r gwneuthurwr. Treuliwyd sleidiau yn gryno, wedi'u dadbaraffinio a'u hailhydradu â 20 ug/mL proteinase K, ar 37 gradd am 15 awr, i gael gwared ar broteinau, a'u trin â hydrogen perocsid 3.0 y cant, i dorri perocsidas mewndarddol. Cafodd y sleidiau eu trochi mewn byffer cydbwysedd 1x TdT, ac ychwanegwyd cryfder gweithio'r ensym TdT am 1h ar 37 gradd . Rhoddwyd cyfuniad gwrth-digoxigenin ar derfynell DNA 3′-OH am 30 munud, a datblygwyd y lliw gan ddefnyddio swbstrad peroxidase am 3 munud. Ar ôl triniaeth DAPI, cafodd y sleidiau eu gosod. Cafodd niwclysau TUNEL-positif eu cyfrif ym mhob maes gweledol ym mhob sampl meinwe, o dan chwyddhad 200x.

2.6. Dadansoddiad Ystadegol.

Mynegir yr holl werthoedd fel y cymedr ± gwyriad safonol. Gwerthuswyd gwahaniaethau sylweddol ar gyfer y grŵp anafiadau arennol I/R a'r grwpiau rhag-drin beluga lentil-I/R gan ddefnyddio dadansoddiad o amrywiant, wedi'i ddilyn gan brawf post hoc Tukey, yn SPSS (Pecyn Ystadegol ar gyfer y Gwyddorau Cymdeithasol v. 9.{{ 2}}; Chicago, IL, UDA). ystyriwyd gwerthoedd p < 0.05="" yn="">

manteision cistanche salsa

3. Canlyniadau

3.1. Effeithiau Rhagdriniaeth Corbys Beluga ar Weithrediad Arennol.

Dangosodd y ddau grŵp a gafodd eu trin ymlaen llaw effeithiau amddiffynnol sylweddol yn erbyn anaf I/R (Ffigur 1). Y crynodiadau cymedrig BUN a creatinin serwm yn y grŵp heb ei drin oedd 89 :92 ± 7:29mg/dL a 0:48 ± 0:16mg/dL, yn y drefn honno. Roedd y grwpiau a ragdriniwyd yn dangos BUN wedi'i leihau'n sylweddol (isel: 22:6±3:67mg/dL; uchel: 21:6± 3:17mg/dL) a creatinin serwm (isel: 0:25 ± {{19} }:04mg/dL; crynodiadau uchel: 0:23 ± 0:04mg/dL) o gymharu â'r rhai yn y grŵp heb ei drin (p<0:01), and="" no="" significant="" differences="" were="" observed="" between="" the="" two="" pretreatment="" groups.="" these="" results="" indicated="" that="" pretreatment="" with="" beluga="" lentils="" can="" protect="" against="" acute="" renal="" functional="">

3.2. Effeithiau Rhagdriniaeth Corbys Beluga ar Anafiadau Cell Epithelial Tiwbaidd ac Apoptosis.

Roedd anaf tiwbaidd, yn enwedig atroffi celloedd epithelial, i'w weld yn aml ym medwla allanol yr arennau, a cholled niwclear celloedd exfoliated, malurion luminal ar y tiwbyn arennol, gofod goleuol cwympo, a mewnlifiadau neutrophil interstitial yn cael eu nodi o bryd i'w gilydd yn arennau'r. grŵp heb ei drin (Ffigur 2(a)). Mewn cyferbyniad, roedd yr arennau o'r grwpiau a ragdriniwyd yn dangos morffolegau cellog bron yn normal, a gwelwyd anafiadau tiwbaidd yn llai aml yn y grŵp dos uchel nag yn y grŵp dos isel. Pan fynegwyd yr anaf fel canran fesul ardal uned, gostyngwyd y sgôr anafiadau yn y grwpiau a gafodd eu trin ymlaen llaw (isel: 2:0±0:93; uchel: 1:5± {{{{}). 11}}:53) o'i gymharu â'r grŵp heb ei drin (2:87 ± 1:25) (Ffigur 2(b)). Wrth archwilio secretiad KIM-1 a NGAL (Ffigur 2(c)), dangosodd canlyniadau ELISA fod cynnwys KIM-1 wedi lleihau yn y grwpiau a ragdriniwyd (isel: 1, 922:83 ± 199:42 pg/ mg; uchel: 1,827:83 ± 278:26pg/mg) o gymharu â'r grŵp heb ei drin (1,977:83 ± 184:49pg/mg). Gostyngwyd mynegiant NGAL yn sylweddol yn y grŵp dos uchel (489:34 ± 19:95pg/mg) o'i gymharu â'r rhai yn y dos isel (527:36 ± 15: 19pg/mL) a heb eu trin (537:05 ± 15 : 70pg/mg) grwpiau (t<>

Yna dadansoddwyd a oedd anaf celloedd epithelial tiwbaidd yn achosi apoptosis. Aseswyd apoptosis cellog trwy ganfod DNA cromosomaidd tameidiog, gan ddefnyddio assay TUNEL (Ffigur 2 (d)). Anaml y gwelwyd celloedd TUNEL-positif yn y grwpiau a gafodd eu trin ymlaen llaw (isel: 5:00 ± 1:22; uchel: 2:25 ± 1:09). Mewn cyferbyniad, dangosodd y grŵp heb ei drin niferoedd cymharol uwch o gelloedd TUNEL-positif yn y rhanbarth medulla allanol (47:50 ± 16:77) (p<0:01), showing="" apoptotic="" bodies="" that="" extruded="" into="" the="" tubular="" lumen="" (figure="" 2(e)).="" when="" the="" secretion="" of="" apoptosis-related="" molecules="" (fas="" and="" caspase="" 3)="" was="" analyzed="" by="" elisa="" (figure="" 2(f)),="" fas="" expression="" was="" high:="" 3:96="" ±="" 0:55ng/mg)="" compared="" with="" that="" in="" the="" untreated="" group="" (7:10="" ±="" 0:87ng/mg),="" and="" caspase="" 3="" expression="" showed="" similar="" results="" (low:="" 8:44="" ±="" 2:05ng/mg;="" high:="" 8:25="" ±="" 1:28ng/="" mg;="" and="" untreated:="" 11:99="" ±="" 0:63ng/mg)="" (p=""><0:05). these="" results="" indicated="" that="" beluga="" lentil="" pretreatment="">

apoptosis celloedd epithelial tiwbaidd a achosir gan I/R.

3.3. Effeithiau Rhagdriniaeth Corbys Beluga ar Anafiadau Celloedd Endothelaidd.

Cafodd effeithiau rhag-drin corbys beluga ar gelloedd endothe lial eu gwirio gan IHC, gan ddefnyddio gwrthgorff CD31 (Ffigur 3 (a)). Yn y grŵp arferol, canfuwyd pibellau gwaed positif CD, ond ni chafodd celloedd CD31-positif eu hadnabod yn y grŵp heb ei drin, sy'n dynodi aflonyddwch fasgwlaidd a achosir gan I/R. Dangosodd y grŵp rhag-drin dos uchel gelloedd positif CD31- yn y capilarïau peritubwlaidd, sy'n dynodi effaith amddiffynnol llestr o ragdriniaeth corbys beluga dos uchel. Archwiliwyd celloedd endothelaidd trwy ganfod ICAM- 1, moleciwl adlyniad, a nodwyd celloedd positif yn amlach yn rhanbarth tiwbaidd y grŵp heb ei drin (46: 4 ± 41: 7 celloedd / sleid) o'i gymharu â'r grwpiau a gafodd eu trin ymlaen llaw ( isel: 5:77 ± 1:01 celloedd/sleid; uchel: 3:72 ± 1:05 celloedd/- sleid) (Ffigur 3(b)). Dangosodd y canlyniadau hyn fod rhag-driniaeth ffacbys beluga yn cadw capilarïau ac yn atal actifadu moleciwlau adlyniad ar wyneb y gell endothelaidd.

3.4. Effeithiau Rhagdriniaeth Corbys Beluga ar Straen Ocsidyddol.

To evaluate the antioxidant effects of beluga lentil pretreat- ment, MDA, SOD, CAT, GSH, and GPx levels were detected by ELISA (Figure 4). MDA levels decreased in the pretreated groups (low: 0:85 ± 0:23nmol/mg; high: 0:81 ± 0:22nmol/ mg) compared with that in the untreated group (0:96 ± 0:11nmol/mg) (p >0:05) (Figure 4(a)). However, the antioxidant enzyme activities increased in the pretreated groups (Figure 4(b)) compared with those in the untreated group (p >{{{{20}}}}:05), ar gyfer SOD (isel: 360:21 ± 56:42U/mL; uchel: 362:7{{ 36}} ± 70 :32U/mL; a heb ei drin: 333:52 ± 41:58U/mL), CAT (isel: 3:64 ± 1:09nmol/g; uchel: 3:21 ± 0:76nmol/g; a heb ei drin: 3:18 ± 0:40 nmol/g), GSH (isel: 4:13 ± 0:53 nmol/mg; uchel: 4:56 ± 0:69nmol/mg; a heb ei drin: 3:59 ± 0 :53nmol/mg), a GPx (isel: 198:89 ± 48:43U/ug; uchel: 219:61 ± 138:08U/ug; a heb ei drin: 165:14 ± 34:73U/ug). Er nad oedd y gwahaniaethau hyn yn ystadegol arwyddocaol, roedd y canlyniadau hyn yn awgrymu bod rhag-driniaeth corbys beluga yn atal straen ocsideiddiol arennol a achosir gan I/R trwy wella cryfder gwrthocsidiol yn yr arennau.

3.5. Effeithiau Rhagdriniaeth Corbys Beluga ar Ymdreiddiad Celloedd Imiwnedd, Sytocinau, a Llid. Dadansoddwyd ymdreiddiad Macrophage (F4/80 plus ) a chell T (CD4 plus ) a rhyddhau cytocinau profflamaidd (IL-1, IL-6, a TNF-) i werthuso llid a achosir gan apoptosis. Arsylwyd llai o gelloedd imiwn F4/80 a mwy a CD4 plws yn y grwpiau a gafodd eu trin ymlaen llaw nag yn y grŵp heb ei drin, fel yr aseswyd gan ddadansoddiad IHC (Ffigur 5(a)). Dangosodd y dadansoddiad PCR amser real fod lefelau mRNA arennol cytocin proinflamatory (IL-1 , TNF- , ac IL 6) wedi gostwng yn y grŵp a gafodd ei drin ymlaen llaw o'i gymharu â'r rhai yn y grŵp heb ei drin (Ffigur 5(b). )). Fodd bynnag, cynyddodd lefelau mRNA cytocinau gwrthlidiol (TGF- ac IL-22) yn y grwpiau a ragdriniwyd o'u cymharu â'r grŵp heb ei drin, ac eithrio IL-10 (Ffigur 5(c)). Roedd y canlyniadau hyn yn dangos y gallai anaf ymfflamychol a achosir gan I/R yn yr arennau gael ei atal gan rag-drin corbys beluga oherwydd effeithiau gwrth-fflamychol, er na effeithiwyd ar IL-10.

atodiad anthocyanin

4. Trafodaeth

Mae anaf arennol a achosir gan I/R yn cael ei nodweddu'n draddodiadol gan weithrediad yr arennau sy'n lleihau'n gyflym [20]. Gellir amcangyfrif swyddogaeth arennol gan ddefnyddio gwerthoedd creatinin BUN a serwm, sef cynhyrchion terfynol metabolig nitrogenaidd sy'n dynodi swyddogaeth hidlo glomerwlaidd [21]. Dangosodd y grŵp heb ei drin gynnydd sylweddol mewn gwerthoedd BUN (89:92 ± 7:29mg/dL) a creatinin (0:48 ± {{20}}:16mg/dL), sy’n dangos methiant swyddogaethol yr arennau a achosir gan I/R. Fodd bynnag, dangosodd y grwpiau corbys beluga a driniwyd ymlaen llaw yn sylweddol BUN (isel: 22 : 6± 3: 67mg / dL; uchel: 21:6± 3:17mg/dL) a creatinin serwm (isel: 0: 25 ± 0:04mg/dL; uchel: 0:23 ± 0:04mg/dL) gwerthoedd (p<0:01) compared="" with="" those="" in="" the="" untreated="" group.="" these="" values="" are="" similar="" to="" those="" observed="" in="" normal="" mice="" (male,="" 6wks;="" bun:="" 22:68="" ±="" 3:05mg/dl;="" creatinine:="" 0:25="" ±="" 0:06mg/dl)="" [22].="" the="" significantly="" decreased="" bun="" and="" serum="" creatinine="" values="" observed="" in="" the="" pretreated="" groups="" relative="" to="" the="" untreated="" group="" indicated="" that="" beluga="" lentil="" pretreatment="" exerted="" protective="" effects="" on="" renal="" function="" against="" i/r-induced="" renal="">

Mae'r swyddogaeth arennol gostyngol yn nodi problemau hidlo glomerwlaidd a achosir gan ollyngiad cefn yr hidlif glomerwlaidd ar draws yr epitheliwm tiwbaidd, sy'n cynrychioli'r rhanbarth sydd wedi'i anafu fwyaf gan I/R [23]. Arweiniodd I/R at golled niwclear cell exfoliated, malurion luminal ar y tiwbyn arennol, a gofodau luminal cwympo mewn celloedd epithelial tiwbaidd. Dangosodd y grwpiau a rag-driniwyd llai o anaf tiwbaidd histopathologig mewn modd a oedd yn dibynnu ar ddos. Cadarnhawyd yr anaf tiwbyn histopathologig a arsylwyd trwy asesu marcwyr moleciwlaidd, KIM-1 a NGAL [24]. Mae KIM{4}} yn dderbynnydd ffosffatidylserine sy'n gweithredu fel moleciwl adnabod celloedd apoptotig, gan drosglwyddo cell anafedig i'r lysosom ar gyfer ffagocytosis celloedd apoptotig / necrotig, clirio malurion apoptotig, a chyfyngiad ymateb proinflamatory [25]. Mae NGAL yn brotein siderophores bach sy'n clymu i gelatinasau sy'n deillio o niwtroffiliau dynol. Anaml y mynegir NGAL mewn arennau arferol, ond mae iawndal acíwt, isgemig neu wenwynig i'r arennau yn arwain at secretiad NGAL gan y celloedd epithelial yn y tiwbiau procsimol / distal, gan gynyddu'r crynodiadau NGAL mewn wrin a gwaed; felly, gellir defnyddio NGAL fel biomarcwr cynnar newydd ar gyfer methiant arennol acíwt a achosir gan I/R[26]. Roedd y grwpiau a ragdriniwyd yn dangos llai o secretiad KIM-1 a NGAL, a dangosodd y grŵp rhag-drin dos uchel leihad sylweddol mewn secretion NGAL o'i gymharu â'r grŵp heb ei drin. Roedd y gostyngiadau a welwyd mewn anafiadau tiwbaidd a secretiad protein KIM-1 a NGAL yn dangos bod rhag-drin corbys beluga yn cael effeithiau amddiffynnol yn erbyn difrod celloedd epithelial tiwbaidd a achosir gan I/R.

Pan fo anaf I / R yn ddifrifol, caiff celloedd sydd wedi'u difrodi eu clirio trwy'r llwybr apoptotig, sy'n fecanwaith marwolaeth cell pathoffisiolegol [27]. Gellir canfod difrod DNA penodol i apoptosis trwy assay TUNEL.

Gwelwyd celloedd TUNEL-positif yn aml yn y grŵp heb ei drin, tra bod y grwpiau rhag-drin corbys beluga yn dangos gostyngiad sylweddol yn niferoedd celloedd TUNEL-positif, mewn modd dos-ddibynnol. Cadarnhawyd y dystiolaeth histolegol hon o apoptosis trwy archwilio ymadroddion Fas a caspase 3. Mae Fas yn ligand sy'n clymu i'r derbynnydd marwolaeth celloedd ac fe'i gwelir i ddechrau yn ystod marwolaeth celloedd wedi'i raglennu [28]. Mae Caspase 3 yn ensym gweithredu mewngellol o'r llwybr marwolaeth celloedd apoptotig, gan arwain at ffurfio corff apoptotig [29]. Roedd syntheses protein Fas a caspase 3 wedi gostwng yn sylweddol yn y grŵp a gafodd ei drin ymlaen llaw o'i gymharu â'r rhai yn y grŵp heb ei drin, gan gadarnhau y gall rhag-driniaeth corbys beluga atal trawsgludiad signal apoptotig yn dilyn anaf I / R.

Mae anaf I / R hefyd yn achosi colli microlestri arennol [30], gan arwain at newidiadau pathohistolegol mewn celloedd endothelaidd [20]. Canfuwyd difrod microcynhwysydd arennol gan ddefnyddio gwrth-gorff yn erbyn CD31, marciwr celloedd endothelaidd [30]. Ni chanfuwyd mynegiant CD31 yn y grŵp heb ei drin, sy'n nodi colli microlestri arennol. Fodd bynnag, dangosodd y grŵp dos uchel a ragdriniwyd ymlaen llaw fynegiant CD31 cadarnhaol, gyda dwysedd fasgwlaidd tebyg i'r hyn a welwyd yn y grŵp arferol, a oedd yn nodi bod rhag-drin corbys beluga, ar ddognau uchel, yn cael effaith amddiffynnol ar gadw celloedd endothelaidd. Mae celloedd endothelaidd sydd wedi'u difrodi yn mynegi moleciwlau adlyniad endotheliwm- leukocyte, megis ICAM-1 [31]. Gall moleciwlau adlyniad cynyddol arwain at actifadu leukocyte, rhwystr capilari, cynhyrchu cytocin, ac ymatebion pro-llidiol [32]. Dangosodd y grŵp heb ei drin fynegiant ICAM-1 positif, gan ddangos mynegiant moleciwl adlyniad gwell a achosir gan ddifrod celloedd endothelaidd. Fodd bynnag, roedd y grŵp dos uchel a ragdriniwyd yn dangos mynegiant ICAM{-1 negyddol, gan nodi effeithiau amddiffynnol rhag-drin corbys beluga ar gyfer cynnal celloedd endothelaidd, yn swyddogaethol ac yn ffisiolegol. Gall y strwythurau fasgwlaidd a gynhelir ddarparu llif gwaed cyson, gan ddosbarthu ocsigen a maetholion i feinweoedd a chelloedd a ddifrodwyd gan I/R, gan gynorthwyo adferiad swyddogaethol a histolegol yr aren.

Mae reperfusion yn adfer y cyflenwad ocsigen i gelloedd sydd wedi'u difrodi, a all ysgogi mynegiant ensymau ocsideiddiol sy'n gysylltiedig â straen, sy'n trosi ocsigen yn ROS [33]. Mae ROS yn gynhyrchion ansefydlog ac adweithiol iawn sy'n cynhyrchu radicalau rhydd, sy'n achosi difrod DNA, apoptosis, a necrosis, trwy'r newid mewn proteinau cellog, lipidau, ac asidau niwclëig. Mae radicalau rhydd yn niweidio asidau brasterog annirlawn yn y gellbilen, gan arwain at berocsidiad lipid [34]. Yna caiff perocsid lipid ei ddiraddio i MDA, sy'n lleihau gweithgareddau ensymau gwrthocsidiol, megis SOD, GPx, GSH, a CAT [35]. Mae SOD yn cataleiddio cyfnewidiad uwchocsid i ocsigen a hydrogen perocsid, sy'n cael ei ddiraddio ymhellach gan CAT. Mae GPx yn ensym gwrthocsidiol allweddol sy'n dileu perocsid, gan ddefnyddio GSH. Gall GSH ddadwenwyno gwahanol gynhyrchion ocsideiddiol, ar y cyd â GPx. Dangosodd lefelau MDA ac ensymau gwrthocsidiol berthynas wrthdro yn y dadansoddiad ELISA. Yn y grwpiau a rag-driniwyd, roedd mynegiant MDA yn gymharol isel, ond mynegwyd yr ensymau gwrthocsidiol yn uchel o'u cymharu â'u lefelau priodol yn y grŵp heb ei drin.

Dangosodd y canlyniadau hyn y gall rhag-drin corbys beluga leihau niwed arennol a achosir gan I/R trwy rwystro'r llwybr straen ocsideiddiol, trwy atal perocsidiad lipid pilen ac actifadu ensymau gwrthocsidiol.

Mae atglifiad hefyd yn sbarduno actifadu celloedd endothelaidd fasgwlaidd, gan arwain at fynegiant ICAM-1 ar wyneb y gell. Mae'r ICAM a fynegwyd yn cysylltu â neutrophils trwy antigen sy'n gysylltiedig â ffwythiant lymffocyte-1 (LFA-1), sy'n arwain at ymlyniad niwtroffiliau i gelloedd endothelaidd, ymdreiddiad niwtrophil, a secretion llidiol cytocinau gan neutrophils [36]. Ar ôl i niwtroffiliau ymddangos mewn rhanbarth sydd wedi'i ddifrodi, mae ymdreiddiad F4/80 ynghyd â macroffagau yn digwydd. Mae Macrophages yn gwahaniaethu i ffenoteipiau gwrthlidiol M1 a gwrthlidiol M2, yn dibynnu ar amser a'r amgylchedd cyfagos. Mae macroffagau M1 yn secretu cytocinau ymfflamychol (IL-1, TNF-, ac IL- 6) sy'n gysylltiedig â niwed arennol a achosir gan I/R, tra bod macroffagau M2 yn secretu cytocinau gwrthlidiol (TGF-, IL{). {19}}, ac IL-22) [37, 38]. Mae Macrophages hefyd yn ysgogi actifadu celloedd T CD4 ynghyd â T. Mae celloedd T actifedig yn syntheseiddio interfferon- (IFN-), sy'n cynyddu'r ymateb imiwn trwy actifadu macrophage M1 [39]. Yn yr astudiaeth hon, dangosodd y grwpiau a ragdriniwyd gan ffacbys beluga effeithiau ataliol yn erbyn F4/80 ynghyd â macrophage a CD4 ynghyd â ymdreiddiad celloedd T i'r rhanbarth cortecs arennol, gan arwain at fynegiant gostyngol o IL-1, IL{-6, a TNF- mRNA a mynegiant gwell o TGF- , IL{ {35}}, ac IL-22 mRNA. Dangosodd y canlyniadau hyn y gall rhag-drin corbys beluga leihau'r ymateb llidiol trwy atal ymdreiddiad celloedd imiwn a lleihau mynegiant cytocinau ymfflamychol.

5. Casgliadau

I grynhoi, dangosodd y grwpiau rhag-drin corbys beluga llai o anaf tiwbyn procsimol, llai o secretiad moleciwl sy'n gysylltiedig ag anafiadau, llai o gelloedd TUNEL-positif, gostyngiad yn secretion moleciwl sy'n gysylltiedig â apoptosis, mynegiant microvessel positif, mynegiant marciwr adlyniad negyddol, effaith gwrthocsidiol, ac atal llidiol. ymatebion. Felly, cafodd rhag-driniaeth ffacbys beluga effeithiau amddiffynnol yn erbyn niwed i'r arennau a achoswyd gan I/R, trwy weithgareddau antiapoptotig, gwrthlidiol a gwrthocsidiol. Yn seiliedig ar ganlyniadau'r astudiaeth hon, gellir cadw swyddogaeth arennol trwy ddefnyddio triniaethau corbys beluga mewn sefyllfaoedd clinigol sy'n gysylltiedig ag anafiadau I / R, megis neffrectomi rhannol.

atchwanegiadau flavonoids yn yr arennau

Argaeledd Data

Mae data ar gael ar gais.

Datgeliad

Adroddwyd ar grynodeb y llawysgrif yn 72ain cyfarfod blynyddol Cymdeithas Wrolegol Corea.

Gwrthdaro Buddiannau

Nid oes unrhyw wrthdaro buddiannau.

Cyfraniadau Awduron

Cyfrannodd Syng-ook Lee a So Young Chun yn gyfartal at y gwaith hwn.

Diolchiadau

Cefnogwyd y gwaith hwn gan grant Sefydliad Ymchwil Biofeddygol gan Ysbyty Prifysgol Genedlaethol Kyungpook (2019).

1 Adran Gwyddor Bwyd a Thechnoleg, Prifysgol Keimyung, Daegu 42601, Gweriniaeth Corea

2 Sefydliad Ymchwil Biofeddygol, Ysbyty Prifysgol Cenedlaethol Kyungpook, Daegu 41940, Gweriniaeth Corea

3 Adran Tîm Cymorth Ymchwil Anifeiliaid y Labordy, Ysbyty Prifysgol Yeungnam, Daegu 42415, Gweriniaeth Corea

4 Adran Meddygaeth Fewnol, Coleg Meddygaeth Prifysgol Yeungnam, Daegu 42415, Gweriniaeth Corea

5 Adran Wroleg, Ysgol Feddygaeth, Prifysgol Genedlaethol Kyungpook, Daegu 41566, Gweriniaeth Corea

6 Adran Patholeg, Ysgol Feddygaeth, Prifysgol Genedlaethol Kyungpook, Daegu 41566, Gweriniaeth Corea

7 Adran Wroleg, Coleg Meddygaeth Prifysgol Yeungnam, Daegu 42415, Gweriniaeth Corea

Cyfeiriadau

[1] SY Chun, DH Kim, JS Kim, et al., "Mae hollt dorsal nofel yn mynd at ddull neffrectomi rhannol nad yw'n isgemig ar gyfer adfywio meinwe arennol mewn model llygoden," Peirianneg meinwe a meddygaeth adfywiol, cyf. 15, na. 4, tt 453–466,2018.

[2] M. Agrawal ac R. Swartz, "Methiant arennol llym," Meddyg Teulu Americanaidd , cyf. 61, na. 7, tt. 2077–2088, 2000.

[3] KR Tuttle, "Neffropathi Isgemig," Barn Gyfredol mewn Neffroleg a Gorbwysedd , cyf. 10, na. 2, tt 167– 173,2001.

[4] K. Singbartl a K. Ley, "Amddiffyn rhag isgemia- atlifiad a achosir gan fethiant arennol difrifol acíwt trwy rwystro E- selectin," Critical Care Medicine, cyf. 28, na. 7, tt 2507–2514, 2000.

[5] M. Takada, KC Nadeau, GD Shaw, KA Marquette, a NL Tilney, "Mae'r rhaeadru moleciwl cytocine-adlyniad mewn isgemia / anaf atdlifiad yr aren llygod mawr. Gwaharddiad gan ligand P-selectin hydawdd," The Journal of ymchwiliad clinigol, cyf. 99, na. 11, tt 2682–2890, 1997.

[6] J. Niu, J. Wu, X. Li, ac F. Zhang, "Cysylltiad rhwng endothelin-1/derbynnydd endothelin A a llid yn arennau'r llygoden yn dilyn isgemia/atlifiad acíwt," Adroddiadau Meddygaeth Foleciwlaidd, cyf. . 11, dim. 5, tt 3981–3987, 2015.

[7] L. Wang, X. Liu, H. Chen et al., "Effaith perocsid II ar apoptosis a achosir gan isgemia arennol / anaf atdlifiad mewn llygod mawr," Meddygaeth Arbrofol a Therapiwtig, cyf. 9, na. 3, tt 817–822, 2015.

[8] B. Dong, H. Zhou, C. Han, et al., "Mae mynegiant torlwythiad a achosir gan isgemia/adlifiad yn hyrwyddo apoptosis ac yn amharu ar adferiad swyddogaeth arennol: rôl acidosis a Gpr4," PLoS One, cyf. 9, na. 10, erthygl e110944, 2014.

[9] DL Cruthirds, L. Novak, KM Akhi, PW Sanders, JA Thompson, ac LA MacMillan-Crow, "Targedau Mitochondrial o straen ocsideiddiol yn ystod isgemia arennol / atlifiad," Archifau biocemeg a bioffiseg, cyf. 412, na. 1, tt. 27–33, 2003.

[10] B. Yang, S. Jain, IZ Pawluczyk, et al., "llid ac actifadu caspase mewn isgemia arennol hirdymor / anaf atdlifiad a gwrthimiwnedd mewn llygod mawr," Kidney International, cyf. 68, na. 5, tt. 2050–2067, 2005.

[11] HH Wu, TY Hsiao, CT Chien, a MK Lai, "Mae cyflyru isgemig trwy gyfnodau byr o atglifiad yn gwanhau isgemia arennol / apoptosis a achosir gan atdlifiad ac awtophag yn y llygoden fawr," Journal of biofeddygol science , cyf. 16, na. 1, 2009.

[12] EM El Morsy, MA Ahmed, ac AA Ahmed, "Gwanhau isgemia arennol / anaf atdlifiad trwy rag-gyflyru dyfyniad açai mewn model llygod mawr," Gwyddorau bywyd, cyf. 123, tt 35–42, 2015.

[13] H. Ilhan, M. Eroglu, V. Inal, et al., "Mae therapi ocsigen hyperbarig yn lleddfu straen ocsideiddiol ac anaf i feinwe mewn isgemia arennol / anaf atdlifiad mewn llygod mawr," Methiant Arennol, cyf. 34, na. 10, tt 1305–1308, 2012.

[14] H. Chen, B. Xing, X. Liu, et al., "Mae rhag-gyflyru ocsideiddiol osôn yn atal llid ac apoptosis mewn model llygod mawr o isgemia arennol / anaf atdlifiad," European Journal of Pharmacology, cyf. 581, rhif. 3, tt. 306–314, 2008.

[15] BJ Xu, SH Yuan, a SK Chang, "Dadansoddiadau cymharol o gyfansoddiad ffenolig, gallu gwrthocsidiol, a lliw codlysiau oer-tymor a chodlysiau bwyd dethol eraill," Journal of Food Science, cyf. 72, na. 2, tt S167–S177, 2007.

[16] SO Lee a SH Lee, "Cynnwys polyphenol a gweithgareddau gwrthocsidiol darnau corbys o wahanol gyltifarau," Journal of the Korean Society of Food Science and Nutrition , cyf. 45, na. 7, tt 973–979, 2016.

[17] SO Lee a SH Lee, "Fe wnaeth Nrf{1}}gyfryngu effaith gwrth-lidiol dyfyniad methanolig o ffacbys beluga mewn celloedd RAW264.7 a driniwyd gan LPS," yn Symposiwm Rhyngwladol a Chyfarfod Blynyddol KFN 2018, tt. {{ 7}}, Busan, Korea, 2018.

[18] EE Hesketh, A. Czopek, M. Clay, et al., "Anaf isgemia-atlifiad arennol: model llygoden o anaf ac adfywio," JoVE (Journal of Visualized Experiments), dim. 88, t. 8, 2014.

[19] C. Wei a Z. Dong, "Model Llygoden o anaf acíwt arennau isgemig: nodiadau technegol a thriciau," American Journal of Ffisioleg-Arennol Ffisioleg, cyf. 303, na. 11, tt F1487– F1494, 2012.

[20] JV Bonventre a L. Yang, "Fathoffisioleg cellog o anaf acíwt i'r arennau isgemig," The Journal of Clinical Investigation , cyf. 121, na. 11, tt 4210–4221, 2011.