Haniaethol

Mae iselder yn cynrychioli anhwylder seiciatrig hynod gyffredin ac anabl yn fyd-eang. Mae tystiolaeth gynyddol yn dangos bod actifadu niwrolidiol gormodol o fewn yr hippocampus yn cyfrannu'n sylweddol at ddechrau a dilyniant symptomau iselder. glycosidau Cistanche ffenylethanol (CPhGs), prif gyfansoddion bioactif wedi'u tynnu o berlysieuyn meddyginiaethol bwytadwy traddodiadolCistanche deserticolaaCistanche tubulosa, wedi arddangos priodweddau ffarmacolegol niwro-amddiffynnol lluosog mewn astudiaethau blaenorol. Nod yr ymchwiliad presennol hwn oedd archwilio'r effeithiau therapiwtig a'r mecanweithiau moleciwlaidd a weithredir gan CPhGs ar ffenoteipiau ymddygiad tebyg i iselder a sbardunwyd gan straen ysgafn anrhagweladwy cronig (CUMS) mewn llygod C57BL/6.

Gwahanwyd chwe deg o lygod SPF-gradd C57BL / 6 ar hap yn chwe charfan arbrofol: grŵp rheoli, grŵp model CUMS, grŵp CPhGs dos uchel (700 mg / kg), grŵp CPhGs dos canolig (350 mg / kg), grŵp CPhGs dos isel (175 mg / kg), a grŵp rheoli cadarnhaol fluoxetine (15 mg / kg). Ar ôl ymyrraeth mesurydd cyffuriau pedair wythnos yn dilyn modelu CUMS, gweithredwyd asesiadau niwro-ymddygiadol cynhwysfawr gan gynnwys prawf dewis swcros (SPT), prawf maes agored (OFT), prawf ataliad cynffon (TST), a phrawf nofio gorfodol (FST). Mae assay imiwnosorbent sy'n gysylltiedig ag ensymau (ELISA) yn darparu crynodiadau niwrodrosglwyddydd serwm monoamine wedi'u meintoli, ochr yn ochr â chytocinau pro-llidiol hippocampal a chyfryngwyr llidiol. Staenio hematoxylin-eosin (HE) a staenio Nissl anafiadau patholegol niwronaidd y tu mewn i ranbarthau gyrus dentate hippocampal. Canfu imiwnohistocemeg dwyster mynegiant protein asidig ffibrilaidd glial (GFAP), moleciwl addasydd ïoneiddio calsiwm-rhwymo-1 (Iba-1), NLRP3, a phroteinau Caspase-1. Gwerthuswyd statws actifadu signalau TLR4/NF-κB i fyny'r afon gan staenio imiwnofflworoleuedd ymhellach.

Dangosodd ein canlyniadau arbrofol fod gweinyddiaeth CPhGs llafar wedi lliniaru annormaleddau ymddygiadol yn ymwneud ag iselder yn rhyfeddol. Cynyddodd y CPhGs ganran ffafriaeth swcros a llai o ansymudedd mewn paradeimau ymddygiad yn seiliedig ar anobaith. At hynny, fe wnaeth triniaeth CPhGs adfer serwm disbyddedig a serotonin hippocampal (5-HT) yn ogystal â lefelau dopamin (DA). Datgelodd darganfyddiad biocemegol ataliad sylweddol o gyfryngwyr pro-llidiol hippocampal a gorgynhyrchu cytocin. Roedd arsylwadau histopatholegol yn dangos rhyddhad dibynnol dos o niwed niwronol hipocampal a ysgogwyd gan CUMS. Dangosodd canlyniadau imiwnohistocemegol fod CPhGs wedi ychwanegu at ddwysedd astrocyte a farciwyd gan GFAP, yn atal gor-ysgogi patholegol o ficroglia Iba-1-positif, a digonedd o brotein sy'n gysylltiedig â llid yr NLRP3 wedi'i reoleiddio i lawr. Dilysodd profion imiwnofflworoleuedd fod CPhGs yn atal actifadu TLR4 gormodol a ffosfforyleiddiad p65 NF-κB o fewn meinwe hippocampal.

Gyda'i gilydd, mae'r canfyddiadau hyn yn cadarnhau bod CPhGs yn defnyddio effeithiolrwydd gwrth-iselder amlwg yn erbyn amlygiadau tebyg i iselder a ysgogir gan CUMS mewn llygod. Mae ei fecanwaith ffarmacolegol yn cael ei gyfryngu'n rhannol trwy swyddogaethau rheoleiddio deuol: adfer homeostasis niwrodrosglwyddydd monoamine ac atal ymatebion niwrolidiol a gyfryngir gan echel signalau TLR4 / NF-κB / NLRP3. Mae'r astudiaeth anifeiliaid hon yn cyflenwi sylfaen arbrofol cyn-glinigol sy'n cefnogi ymelwa pellach ar CPhGs fel asiantau ymgeisiol naturiol addawol neu gynhwysion bwyd swyddogaethol ar gyfer ymyrraeth cynorthwyol iselder.

Geiriau allweddol: glycosidau ffenylethanol Cistanche (CPhGs); iselder; straen ysgafn cronig anrhagweladwy; niwro-llid; astrocytes; microglia; llwybr llidiol TLR4/NF-κB/NLRP3

1. Rhagymadrodd

Mae iselder yn salwch seiciatrig affeithiol amlochrog a nodweddir gan amlygiadau clinigol craidd sy'n cynnwys hwyliau isel parhaus, anhedonia, arafiad seicomotor, aflonyddwch cwsg-effro a chamweithrediad somatig. Gall cyfnodau o iselder difrifol arwain at hunan-niweidio a syniadaeth hunanladdol, gan osod beichiau iechyd cyhoeddus aruthrol ledled y byd. Nododd data arolwg epidemiolegol o Tsieina fod mynychder iselder cenedlaethol yn cyrraedd 2.1%, ac mae Sefydliad Iechyd y Byd wedi dosbarthu anhwylder iselder mawr ymhlith clefydau o'r radd flaenaf sy'n cyfrannu at golled byd-eang ar sail anabledd ym mywydau bywyd.

Serch hynny, mae'r etioleg moleciwlaidd cyflawn sy'n sail i pathogenesis iselder yn parhau i fod yn anghyflawn, gan rwystro datrysiadau therapiwtig clinigol perffaith. Mae rhagdybiaethau pathoffisiolegol cyfoes wedi symud ffocws tuag at fecanweithiau crosstalk niwro-imiwn. Mae cronni ymchwil cyn-glinigol a chlinigol yn amlygu niwro-llid parhaus fel gyrrwr pathogenig hanfodol ar gyfer anhwylderau iselder. O dan heriau straen seicolegol neu ffisiolegol cronig, mae poblogaethau celloedd glial hippocampal yn cael actifadu annormal. Mae microglia gor-actifedig ac astrocytes camweithredol yn sbarduno rhyddhau cadarn o gyfryngwyr pro-llidiol lluosog, gan greu effeithiau chwyddo rhaeadru cytocin pro-llidiol. Mae sarhad niwro-llidiol o'r fath yn achosi dirywiad morffolegol niwronaidd ymhellach, aflonyddwch metabolaidd niwrodrosglwyddydd a nam ar blastigrwydd synaptig, gan hwyluso dilyniant patholegol tebyg i iselder ysbryd yn y pen draw.

Mae ymyriadau gwrth-iselder clinigol prif ffrwd presennol yn dibynnu'n bennaf ar gyffuriau gwrth-iselder cemegol synthetig a gynrychiolir gan fluoxetine, atalydd aildderbyn serotonin dethol (SSRI). Er gwaethaf rhyddhad rhannol o symptomau rhai cleifion, mae gan gyffuriau gwrth-iselder synthetig anfanteision a gydnabyddir yn dda: cymarebau rhyddhad cyflawn anfoddhaol, symptomau iselder gweddilliol aml, tebygolrwydd ailwaelu uchel ar ôl i feddyginiaeth ddod i ben, ynghyd ag sgîl-effeithiau gastroberfeddol, hepatig a metabolaidd niweidiol yn ystod gweinyddiaeth hirdymor. Mewn cyferbyniad, mae meddyginiaethau llysieuol traddodiadol yn cynnwys nodweddion modiwlaidd aml-darged a phroffiliau diogelwch cymharol ysgafn, felly'n denu diddordeb ymchwil cynyddol ar gyfer therapi cynorthwyol anhwylder hwyliau.

Cistanche deserticolaaCistanche tubulosa, a enwir yn gyffredin "ginseng anialwch", yn perthyn i deulu Orobanchaceae. Mae eu coesau cigog yn gwasanaethu fel deunyddiau crai bwyd meddyginiaethol homologaidd clasurol mewn arferion llysieuol Asiaidd traddodiadol. Mae ymchwiliadau ffarmacolegol modern yn dogfennu bioweithgareddau niwro-amddiffynnol lluosog ar gyferCistanchedarnau, gan gynnwys effeithiau gwrth-niwroddirywiad yn erbyn clefyd Alzheimer a chlefyd Parkinson. Mae glycosidau ffenylethanol yn ffurfio prif ffracsiynau bioactif y tu mewnCistanchedyfyniadau, yn bennaf yn cynnwys echinacoside a verbascoside. Mae glycosidau ffenylethanol Cistanche (CPhGs) yn arddangos bio-weithgareddau gwrth-tiwmor, gwrthocsidiol, imiwnofodiwlaidd a niwro-amddiffynnol ar draws llwyfannau arbrofol lluosog.

Mae gwaith labordy rhagarweiniol blaenorol wedi dangos y gallai CPhGs gynyddu crynodiad dopamin striatal a lleddfu ffenoteipiau iselder ysbryd sy'n gysylltiedig â menopos mewn modelau anifeiliaid cnofilod. Fodd bynnag, mae diffyg archwilio systematig o hyd ynghylch a yw CPhGs yn cynhyrchu dylanwadau amddiffynnol ar iselder a achosir gan straen cronig, a rhaeadrau trawsgludo signal manwl sy'n cyfryngu bio-weithgareddau o'r fath. Mae patrwm anifeiliaid straen ysgafn anrhagweladwy cronig (CUMS) yn sefyll fel un model iselder cyn-glinigol sydd wedi'i hen sefydlu. Trwy ddatgelu cnofilod labordy i straenwyr ysgafn amrywiol ar hap dros wythnosau olynol, mae CUMS yn ailadrodd yn ddibynadwy nodweddion iselder craidd fel anhedonia, anobaith ymddygiadol a difrod niwropatholegol hippocampal.

Yn unol â hynny, lluniodd yr ymchwil hwn fodel llygoden iselder a achosir gan CUMS i werthuso gallu tebyg i gyffuriau gwrth-iselder in-vivo yn systematig o dri dos graddiant o CPhGs. Fe wnaethom ganolbwyntio'n arbennig ar adferiad niwrodrosglwyddydd monoamine, trawsnewid ffenoteipaidd celloedd glial hippocampal, a llwybr niwro-llidiol llidus NLRP3 a lywodraethir gan TLR4 / NF-κB. Bwriad yr astudiaeth hon yw darparu tystiolaeth arbrofol wrthrychol i gefnogi datblygiad fferyllol yn y dyfodol a chymhwysiad bwyd swyddogaethol o CPhGs gan dargedu gwella symptomau iselder.

2. Defnyddiau a Dulliau

2.1 Deunyddiau, Adweithyddion ac Offerynnau Arbrofol

Cafwyd detholiad crai CPhGs safonol gan Hotan Dichen Pharmaceutical Biological Co., Ltd (swp Rhif. 20231221, Xinjiang, Tsieina). Cyfanswm cynnwys glycosid ffenylethanol Yn fwy na neu'n hafal i 85 %, yn cynnwys echinacoside Yn fwy na neu'n hafal i 40 % a verbascoside Yn fwy na neu'n hafal i 16 %. Cafwyd capsiwlau hydroclorid fluoxetine gan Patheon France. Daeth citiau assay ELISA masnachol ar gyfer 5-HT, DA, iNOS, COX-2, PGE2, TNF- , IL-1 , IL-18, IL-6, IFN- gan gyflenwyr adweithyddion biolegol cymwys. Roedd gwrthgyrff cynradd a gymhwyswyd ar gyfer imiwn-histocemeg ac imiwnfflworoleuedd yn cynnwys gwrthgyrff gwrth-GFAP, gwrth-Iba-1, gwrth-NLRP3, gwrth-Casas-1, gwrth-TLR4 a gwrth-ffosffo-NF-κB p65. Paratowyd pecynnau staenio histolegol ar gyfer staenio AU a Nissl ar gyfer prosesu toriad ymennydd paraffin.

Roedd offerynnau dadansoddol labordy allweddol yn cynnwys cydbwysedd dadansoddol electronig manwl iawn, gweithfan puro dŵr ultrapur Milli-Q, darllenydd microplate aml-ddull SpectraMax, microsgop fflworoleuedd unionsyth Leica, ynghyd â chaledwedd dadansoddi ymddygiad-cnofilod cyflawn a system meddalwedd olrhain symudiadau SMART 3.0.

Prynwyd chwe deg o lygod SPF-gradd C57BL/6 gwrywaidd, saith wythnos oed gydag ystod pwysau corff cychwynnol 18-22 g, gan Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co, Ltd. Cafodd pob triniaeth arbrofol llygoden gymeradwyaeth foesegol ffurfiol gan Bwyllgor Moeseg Anifeiliaid Prifysgol Meddygaeth Tsieineaidd Shaanxi (cymeradwyaeth moeseg ID: SUCMDL102310). Roedd llygod yn cael eu cadw mewn cyfleusterau cadw anifeiliaid di-pathogen penodol. Cynhaliwyd paramedrau amgylcheddol ar dymheredd amgylchynol (21 ± 2) gradd, lleithder cymharol 60 % ± 10 %, gan weithredu cylchoedd goleuo golau-tywyll safonol 12-awr. Roedd cow cnofilod a dŵr yfed yn hygyrch ad libitum. Perfformiwyd cyfnod cynefino addasol wythnos cyn cychwyn llifoedd gwaith arbrofol ffurfiol.

2.2 Grwpio Anifeiliaid, Modelu CUMS a Gweinyddu Cyffuriau

Ar ôl codiad addasol am wythnos, roedd sgrinio ffafriaeth swcros rhagarweiniol yn eithrio llygod unigol â hoffter cynhenid ​​​​yfed siwgr isel. Cafodd llygod arbrofol cymwysedig eu rhannu ar hap yn chwe grŵp astudio (n = 10 anifail ym mhob grŵp):

Grŵp rheoli (Con): dim straen CUMS, gweinyddu intragastrig o ddŵr deionized isofolumetrig;

Grŵp model CUMS (Mod): derbyn ysgogiad CUMS llawn, gavage â dŵr wedi'i ddad-ïoneiddio â chyfaint cyfartal;

Grŵp CPhGs dos uchel (CPhGs-H): amlygiad CUMS, CPhGs 700 mg/kg pwysau corff yn ôl mesurydd dyddiol;

Grŵp CPhG dos canolig (CPhGs-M): amlygiad CUMS, CPhGs 350 mg/kg fesul mesurydd dyddiol;

Grŵp CPhGs dos isel (CPhGs-L): amlygiad CUMS, CPhGs 175 mg/kg fesul mesurydd dyddiol;

Grŵp rheoli positif fluoxetine (FLX): datguddiad CUMS, gavage fluoxetine 15 mg/kg unwaith y dydd.

Ar gyfer adeiladu model CUMS, mabwysiadwyd deg math gwahanol o straenwyr ysgafn: ataliaeth gorfforol (60 munud), cynnwrf ysgwyd llorweddol (60 munud), crogiad cynffon (60 munud), cawell ar ogwydd 45-gradd ongl (24 h), amgylchedd gwely llaith (24 h), ynysu-cawell gwag (24 h), golau dros nos-goleuo ar gyfer nofio dŵr oer gradd 12 h4, nofio gradd 12 awr (12 h), nofio dŵr poeth gradd 1 4 munud 5 munud, ac ysgogiad clip cynffon yn para 2 funud. Defnyddiwyd dau straenwr gwahanol ar hap bob dydd; ni fyddai'r un straen yn ymddangos yn olynol ar ddau ddiwrnod cyfagos. Parhaodd gweithdrefn fodelu CUMS am bedair wythnos.

Ar ôl gorffen modelu straen pedair wythnos, cafodd sylweddau prawf cyfatebol neu gerbyd toddyddion eu danfon yn fewngastrig unwaith y dydd am bedair wythnos barhaus arall. Yn yr wythfed wythnos arbrofol, gweithredwyd yr holl brosiectau canfod niwro-ymddygiad yn olynol.

2.3 Batri Prawf Niwro-Ymddygiadol

2.3.1 Prawf Dewis Swcros (SPT)

Mae prawf dewis swcros yn gwerthuso ffenoteip iselder craidd tebyg i anhedonia mewn cnofilod. Cyn mesuriad ffurfiol, roedd pob llygoden yn cael ei chadw'n unigol. Cyflawnwyd cam addasu diod swcros-tri diwrnod. Diwrnod un: gosod dwy botel o hydoddiant swcros 1% ym mhob cawell am 24 awr. Diwrnod dau: un botel hydoddiant swcros wedi'i pharu ag un botel dŵr pur. Diwrnod-tri: cyfnewid lleoliad cynwysyddion dŵr siwgr a dŵr pur i ddileu dylanwad tuedd lleoliad. Ar ôl y cylch addasu, roedd llygod yn ymprydio o fwyd a dŵr am 24 awr. Yn dilyn hynny, darparwyd potel ddŵr swcros 1% wedi'i phwyso ymlaen llaw a photel dŵr wedi'i buro. Cyfnewidiwyd safleoedd poteli ar ôl 12 h. Ar ôl cyfanswm hyd y profion 24-h, cofnodwyd pwysau hylif sy'n weddill y ddwy botel yn gywir. Cyfradd dewis swcros (%)=(defnydd swcros-hydoddiant)/(defnydd o hydoddiant swcros + defnydd dŵr wedi'i buro) × 100 %.

2.3.2 Prawf Maes Agored (OFT)

Roedd cyfarpar maes agored yn ffurfio blwch ciwbig pen agored 50 cm × 50 cm × 50 cm. Diffiniwyd rhanbarth sgwâr canolog fel parth canolog 25 cm × 25 cm wedi'i ganoli y tu mewn i'r arena. Gosodwyd pob llygoden yn ysgafn ar wyneb canolog blwch cae agored. Caniatawyd pum munud o amser addasu am ddim. Roedd cofnodi ymddygiad a dadansoddi data yn canolbwyntio ar y cyfnod arsylwi pum munud dilynol. Roedd prif ddangosyddion darllen allan yn cynnwys cyfanswm pellter symud, amser a dreuliwyd y tu mewn i'r parth canolog, ac amlder cofnodion parth canolog. Mae'r paramedrau hyn yn adlewyrchu gweithgaredd locomotor digymell a pharodrwydd archwiliadol o dan amodau amgylcheddol anghyfarwydd.

2.3.3 Prawf Atal Cynffon (TST)

Roedd rhan cynffon y llygoden wedi'i gosod yn ddiogel gan ganiatáu i'r anifail hongian wyneb i waered uwchben wyneb y ddaear. Cyfanswm yr amser cofnodi oedd chwe munud. Cofnodwyd hyd amser ansymudol yn ystod y segment pedwar munud diweddarach. Mae mwy o amser ansymudedd yn cynrychioli statws ymddygiadol uwch-anobaith tebyg i iselder.

2.3.4 Prawf Nofio Gorfodol (FST)

Roedd casgen nofio silindrog dryloyw (diamedr 15 cm, uchder 50 cm) wedi'i llenwi â dŵr a gynhelir ar (25 ± 2) gradd; cyrhaeddodd dyfnder y dŵr 20 cm. Gosodwyd pob llygoden yn ysgafn mewn cynhwysydd nofio am gyfanswm cyfnod cofnodi chwe munud. Cafodd amser ansymudedd arnawf o'r pedwar munud diwethaf ei feintioli'n ystadegol. Mae cyfnod ansymudedd hirach yn dynodi perfformiad ymddygiadol dwysach yn ymwneud ag anobaith.

2.4 Casglu Sampl a Pharatoi Meinwe

Ar bwynt terfynell arbrofol wythnos-8, cafodd llygod chwistrelliad mewnperitoneol o 3% sodiwm pentobarbital (10 mL/kg) ar gyfer anesthesia dwfn. Cynaeafwyd sbesimenau gwaed trwy dechneg gwaedu tynnu pelen y llygad. Wedi hynny, perfformiwyd ewthanasia dadleoli ceg y groth. Cliriodd darlifiad cardiaidd hallt arferol oer sy'n cylchredeg y gwaed y tu mewn i feinweoedd yr ymennydd. Cafodd sbesimenau cyflawn o'r ymennydd cyfan eu dyrannu'n gyflym. Cafodd meinweoedd hanner yr ymennydd eu trochi o fewn hydoddiant paraformaldehyde 4% ar gyfer gosod meinwe 72 awr ar gyfer histoleg ddilynol. Cafodd rhanbarthau ymennydd hippocampal eu hynysu'n gyflym oddi wrth sbesimenau ymennydd sy'n weddill ar blatfform iâ wedi'i oeri ymlaen llaw a'i gadw y tu mewn i amgylchedd storio hylif-nitrogen. Ar gyfer mesur biocemegol, cymysgwyd sampl meinwe hippocampal 10 mg â halwynog arferol wedi'i oeri ymlaen llaw yn dilyn cymhareb cyfaint màs 1: 9, yn cael ei homogeneiddio'n fecanyddol mewn bath iâ. Cafodd homogenad meinwe ei fewngyrchu o dan 4000 r/munud am 15 munud, a chasglwyd ffracsiynau supernatant ar gyfer meintioli biofarcwr ELISA.

2.5 Mesur Mynegai Biocemegol

Yn ôl llawlyfrau gweithredu gwneuthurwr citiau ELISA masnachol, mesurwyd samplau supernatant o homogenate serwm a hippocampal i gaffael gwerthoedd crynodiad niwrodrosglwyddyddion monoamine gan gynnwys 5-HT a DA. Cafodd uwchnatant homogenate hippocampal ei assay ymhellach ar gyfer dangosyddion cyfryngwr llidiol iNOS, COX-2, PGE2, ochr yn ochr â cytocinau pro-llidiol TNF- , IL-1 , IL-18, IL-6 ac IFN- . Casglwyd darlleniadau amsugnedd dwysedd optegol trwy sbectrophotometer microplate. Cafodd crynodiad sampl o brotein ei raddnodi gan ddefnyddio pecyn meintioli protein BCA cyn canfod cytocin.

2.6 Staeniad Histopatholegol Hippocampal

Cafodd samplau sefydlog o feinwe'r ymennydd eu hymgorffori mewn cwyr paraffin a'u sleisio'n adrannau histolegol o drwch 4-μm. Ar gyfer staenio AU: aeth darnau paraffin trwy wyro xylene, hydradiad ethanol graddiant, staenio niwclear hematocsilin, gwrth-staenio cytoplasmig eosin, gwahaniaethu hydroclorig-alcohol, dadhydradu ethanol graddiant, triniaeth tryloywder xylene, a mowntio gwm niwtral. Canolbwyntiodd arsylwi microsgopig ar forffoleg cellog, statws niwclear a chyfanrwydd strwythurol cytoplasmig o fewn rhanbarth gyrus dentate hippocampal.

Mae staenio Nissl yn delweddu corpwscles Nissl niwronaidd gan adlewyrchu gweithgaredd biosynthetig niwronaidd a bywiogrwydd celloedd. Deorwyd tafelli paraffin dewaxed mewn hydoddiant gweithio staenio Nissl. Ar ôl camau golchi dŵr distyll, cafodd adrannau ddadhydradu, gweithdrefn dryloywder a selio. Gwelwyd amrywiadau histomorffolegol o niwronau hippocampal o dan ficrosgop optegol.

2.7 Assay imiwnohistocemeg

Cafodd darnau o feinwe hippocampal sydd wedi'u mewnblannu â pharaffin eu gwyro a'u hydradu. Gweithredwyd camau adfer antigen, blocio peroxidase mewndarddol a chamau blocio amhenodol sy'n rhwymo protein yn olynol. Deorwyd tafelli meinwe dros nos ar dymheredd 4 gradd gyda gwrthgyrff cynradd gwanedig: gwrth-GFAP (1:400), gwrth-Iba-1 (1:400), gwrth-NLRP3 (1:300), gwrth-Caspare-1 (1:400). Ar ôl deori gwrthgyrff eilaidd, perfformiwyd adwaith cromogenig DAB. Cwblhawyd gweithdrefnau gwrth-staenio, dadhydradu a mowntio niwclews. Roedd golau-microsgop yn dal delweddau maes-gweld digidol. Cyfrifodd meddalwedd prosesu delwedd Image-J werthoedd dwysedd optegol cyfartalog i werthuso dwyster mynegiant protein-targed yn lled-feintiol.

2.8 Staenio imiwnofflworoleuedd

Profodd rhannau paraffin hipocampal a baratowyd dewaxio, adalw antigen a gweithrediad blocio. Cafodd gwrthgyrff cynradd gwrth-TLR4 (1:400) a gwrth-ffosffo-NF-κB p65 (1:200) eu cymhwyso a'u deor dros nos ar gyflwr pedair gradd-Celsius. Ychwanegwyd gwrthgyrff eilaidd wedi'u labelu â fflwroleuol ar gyfer deori awr o dan statws cysgodi golau. Cafodd gwrth-staen niwclear DAPI ei gynnwys o fewn cyfrwng mowntio. Ffotograffau microsgop fflworoleuedd laser o signalau fflworoleuedd. Roedd meddalwedd Image-J yn cyfrifo dwysedd fflworoleuedd cyfartalog yn cynrychioli maint actifadu protein TLR4 a p-NF-κB p65.

2.9 Dadansoddiad Ystadegol

Proseswyd data arbrofol gwreiddiol gan ddefnyddio meddalwedd ystadegau SPSS 26.0 a rhaglen graffio GraphPad Prism 9.0. Mynegwyd yr holl ddata canlyniadau meintiol fel cymedrig ± gwyriad safonol (\\(\\bar{x} \\pm s\\)). Cynhaliwyd cymariaethau ystadegol rhwng grwpiau gyda phrofion ystadegol priodol. Barnwyd bod gwerth P llai na 0.05 yn wahaniaeth ystadegol arwyddocaol; P< 0.01 represented highly significant statistical distinction.

3. Canlyniadau Arbrofol

3.1 Gwellodd CPhGs Symptom Anhedonia a Lefelau Niwrodrosglwyddydd Monoamine wedi'u Hadfer

Cyn cychwyn modelu CUMS, nid oedd cyfraddau ffafriaeth swcros sylfaenol yn dangos unrhyw amrywiad ystadegol amlwg ar draws yr holl garfanau anifeiliaid arbrofol. Ar ôl straen CUMS pedair wythnos ynghyd â chylchoedd ymyrraeth pedair wythnos, dangosodd y grŵp model CUMS ostyngiad amlwg yn y gymhareb dewis swcros o'i gymharu ag anifeiliaid rheoli heb straen (P< 0.01), demonstrating successful establishment of anhedonia depressive‑like phenotype. Serum and hippocampal tissue 5‑HT and DA concentrations in Mod group were significantly reduced compared with Con group (P < 0.05 or P < 0.01).

O'i gymharu â charfan model Mod, creodd grwpiau trin CPhGs uchel, canolig ac isel yn ogystal â grŵp positif fluoxetine drychiad amlwg ar ganran dewis swcros, serwm 5-HT, serwm DA, hippocampal 5-HT a chynnwys DA hippocampal (P< 0.05 or P < 0.01). Pharmacological improvement effect exhibited apparent dose‑dependent tendency; high‑dose CPhGs group achieved more robust biomarker‑rescue outcome than medium‑dose and low‑dose subgroups. This set of findings illustrated CPhGs could ameliorate anhedonic behavioral performance and reverse stress‑provoked depletion of key mood‑regulating monoamine neurotransmitters inside peripheral circulation and hippocampal brain tissue.

3.2 Gweithgarwch Archwiliadol Uwch CPhG mewn Prawf Maes Agored

Mewn gwerthusiad ymddygiadol maes agored, amlygodd llygod model CUMS ostyngiad rhyfeddol ar gyfanswm pellter symud, amser aros y parth canolog ac amlder mynediad y rhanbarth canolog yn erbyn llygod rheoli (P< 0.01). Chronic unpredictable stress suppressed spontaneous exploratory behaviors. Following CPhGs or fluoxetine intervention, those three open‑field‑test indicators increased observably (P < 0.05 or P < 0.01). High‑dose CPhGs‑treated mice displayed 46.63 % increase of total travel distance, 127.92 % growth of central‑zone residence time compared against Mod group. Medium‑dose and low‑dose CPhGs also produced measurable but weaker improvement effects. It indicated CPhGs alleviated stress‑induced suppression of autonomous exploration activity.

3.3 CPhGs Amser Ansymudedd Byrrach mewn Paradeimau Ymddygiad Seiliedig ar Anobaith

Mae prawf atal cynffon a phrawf nofio gorfodol yn canfod anobaith ymddygiadol, sy'n cynrychioli darlleniadau ymddygiadol craidd tebyg i iselder. Dangosodd grŵp y Mod amser ansymudedd hirfaith sylweddol yn TST ac FST (P< 0.01) relative to Con group. After drug intervention, CPhGs‑H, CPhGs‑M, CPhGs‑L and FLX groups generated statistically significant shortening of immobility durations (P < 0.05 or P < 0.01). For forced‑swim immobility time, high‑dose CPhGs brought 34.67 % reduction; medium‑dose 30.71 % reduction; low‑dose 20.78 % reduction. For tail‑suspension immobile time: CPhGs‑H achieved 35.91 % decrease. Results suggested CPhGs mitigated despair‑related passive coping behavioral patterns triggered by long‑term unpredictable stress stimulation.

3.4 CPhGs wedi Gostwng Cytocinau Pro-Lidiol Hippocampal Gor-Mynegedig

Roedd crynodiadau cytocin pro-llidiol hippocampal (TNF- , IL-1 , IL-18, IL-6, IFN- ) mewn anifeiliaid model CUMS wedi'u dyrchafu'n sylweddol o'u cymharu â chymheiriaid rheoli (P< 0.01). After CPhGs intervention, these pro‑inflammatory cytokine contents descended in dose‑responsive fashion. High‑dose CPhGs generated the most powerful inhibitory influence. For instance, relative to Mod group, CPhGs‑H decreased TNF‑α level by 42.93 %, lowered IL‑1β by 45.72 %, and reduced IL‑18 by 35.17 %. Medium‑dose CPhGs delivered moderate anti‑inflammatory potency, and low‑dose group exerted limited but detectable inhibitory impacts. This data demonstrated CPhGs could suppress excessive pro‑inflammatory‑cytokine release inside hippocampal tissue under chronic‑stress challenge.

3.5 CPhGs Biomarcwyr Llidiol-Cyfryngu Hippocampal wedi'u Rheoleiddio

Cynyddodd cyfryngwyr llidiol hippocampal iNOS, COX-2 a PGE2 mewn llygod model CUMS yn sylweddol (P< 0.01). After drug intervention, CPhGs‑H, CPhGs‑M markedly diminished iNOS, COX‑2 and PGE2 concentrations (P < 0.05 or P < 0.01). Low‑dose CPhGs‑L group showed limited statistical significance for partial indicators. High‑dose CPhGs treatment group exhibited iNOS reduction rate reaching 49.55 %, COX‑2 reduction 39.58 %. Collectively, CPhGs suppressed stress‑induced up‑regulation of inflammatory‑mediator molecules inside hippocampus.

3.6 Anaf Patholegol Niwronaidd Hippocampal Wedi'i Wahau gan CPhGs

Canlyniadau staenio AU: roedd niwronau hippocampal dantate-gyrus o grŵp Mod yn cyflwyno briwiau patholegol difrifol: trefniant cellog anhrefnus, pyknosis cnewyllol, dirywiad gwagolar cytoplasmig, gan amlygu difrod niwronau amlwg. Dim ond effaith wella ddibwys a ddangosodd grŵp CPhGs-L. Roedd CPhGs dos canolig a dos uchel yn amlwg wedi gwrthdroi newidiadau patholegol o'r fath; Dangosodd grŵp CPhGs-H dos uchel effaith amddiffyn niwronau uwch o'i gymharu â grŵp fluoxetine mewn meysydd gweledol rhannol.

Deilliannau staenio Nissl: Roedd niwronau hippocampal grŵp Mod yn arddangos trefniant anhrefnus, gostyngiad amlwg yn nifer y corff Nissl, a oedd yn adlewyrchu swyddogaeth synthetig niwronaidd â nam a bywiogrwydd cellog isel. Adferwyd digonedd corff Nissl gan ddosau gweinyddu CPhGs. Daeth morffoleg niwronaidd a dwysedd corpwscle Nissl o fewn grŵp CPhGs-H at y lefel grŵp rheoli arferol. Cadarnhaodd canfyddiadau histopatholegol fod CPhGs yn amddiffyn cyfanrwydd niwronau hippocampal rhag dinistr cronig-straen-gyfryngol.

3.7 Statws Ysgogi Hippocampal Glial-Cell wedi'i Reoleiddio gan CPhGs

Mae GFAP yn fiofarciwr penodol ar gyfer poblogaeth astrocyte. O'i gymharu â grŵp Con, gostyngodd dwyster signal positif GFAP hippocampal Mod-group yn sylweddol (P< 0.01), indicating massive astrocyte functional impairment induced by CUMS stress. CPhGs‑H and CPhGs‑M intervention groups distinctly elevated GFAP expression level (P < 0.05 or P < 0.01); high‑dose CPhGs‑H enhanced GFAP average optical density by 64.23 % relative to Mod group. Low‑dose CPhGs‑L generated upward trend without statistical significance.

Mae marciwr protein Iba-1 yn cynrychioli microglia. Arddangosodd grŵp model CUMS signal mynegiant positif Iba-1 yn ddramatig (P< 0.01), implying robust microglia hyper‑activation. After CPhGs intervention, Iba‑1 expression intensity decreased dose‑dependently. CPhGs‑H produced 23.73 % reduction of Iba‑1 optical‑density value versus Mod group. It illustrated CPhGs preserved astrocyte abundance while dampening pathological microglia over‑activation inside hippocampal compartments.

3.8 Mynegiant Hippocampal wedi'i Atal gan CPhGs NLRP3-Inflammasome-Cysylltiedig-Protein

Roedd canfod imiwnohistocemeg yn amlygu mynegiant protein NLRP3 a Caspase-1 y tu mewn i hippocampus Mod-group wedi'u huwchreoleiddio'n sylweddol (P< 0.01). Following CPhGs treatment, NLRP3 and Caspase‑1 protein abundance declined dose‑responsively. High‑dose CPhGs‑H decreased NLRP3 expression by 50.00 %, lowered Caspase‑1 expression level by 57.65 %. It demonstrated CPhGs suppressed pathological NLRP3 inflammasome complex activation in CUMS‑damaged hippocampal tissue.

3.9 CPhGs Atal Gorfywiogi Llwybr Signalau TLR4/NF-κB

Roedd canfod imiwnofflworoleuedd yn dangos bod llygod model CUMS yn dangos dwyster fflworoleuedd cynyddol sylweddol derbynnydd TLR4 ac is-uned p65 NF-κB ffosfforylaidd (P< 0.01). CPhGs intervention obviously reduced TLR4 and p‑NF‑κB p65 fluorescence signal strength (P < 0.05 or P < 0.01). Combined with above‑mentioned NLRP3 inflammasome‑protein detection results, these observations supported the inference: CPhGs inhibited TLR4/NF‑κB upstream signal‑cascade hyper‑activation, which sequentially restrained downstream NLRP3 inflammasome assembly and neuro‑inflammatory cascade amplification.

4. Trafodaeth

Mae anhwylder iselder mawr yn glefyd niwro-seiciatrig difrifol. Yn ystod y blynyddoedd diwethaf, mae damcaniaeth niwro-llidiol iselder wedi denu sylw ymchwil eang. Gall straen seicolegol ailadroddus cronig ysgogi gweithrediad system imiwnedd gynhenid ​​y tu mewn i'r system nerfol ganolog. Mae cydberthynas agos rhwng Hippocampus, un rhanbarth yr ymennydd sy'n agored iawn i sarhad straen, â modiwleiddio hwyliau, prosesu gwobrau a swyddogaeth cof. O dan ysgogiad straen parhaus, mae homeostasis cell glial hippocampal yn cwympo. Mae microglia hyper-actifedig ac astrocytes wedi'u difrodi yn secretu llawer iawn o cytocinau pro-llidiol, gan arwain at anaf strwythurol niwronaidd, anhwylder metabolig monoamin-niwro-drosglwyddydd, gan hyrwyddo ymddangosiad ymddygiadol tebyg i iselder yn y pen draw.

Mae gan gynhyrchion naturiol gweithredol traddodiadol sy'n deillio o feddyginiaeth lysieuol fanteision ffarmacolegol aml-darged, gan ddod yn adnoddau ymgeisiol addawol ar gyfer darganfod cyffuriau gwrth-iselder. Mae CPhGs yn gydrannau bio-actif llofnod wedi'u hynysu oddi wrthyntCistanchellysieuyn meddyginiaethol. Lluniodd yr ymchwil hwn fodel llygoden iselder straen cronig a achosir gan CUMS, gan wirio'n gynhwysfawr effeithiolrwydd tebyg i gyffuriau gwrth-iselder in-vivo o CPhGs graddiant-dos. Dangosodd canlyniadau arbrofol ymddygiadol fod triniaeth CPhGs wedi lleddfu symptom anhedonia yn sylweddol, gwell gweithgaredd archwilio, a llai o amser ansymudedd yn gysylltiedig ag anobaith mewn llygod model iselder, gan ddangos cydberthynas effaith dos-effaith glir.

Damcaniaeth niwrodrosglwyddydd monoamine yw theori pathogenesis iselder clasurol. Mae serotonin a dopamin yn ymgymryd â rolau rheoleiddio hanfodol sy'n cwmpasu sefydlogi emosiynol, canfyddiad adborth gwobrau a modiwleiddio ymddygiad sy'n gysylltiedig â chymhelliant. Arweiniodd straen CUMS at ddirywiad amlwg mewn crynodiadau 5-HT a DA mewn serwm a meinwe hippocampal yn ein hanifeiliaid model. Adferodd ymyriad CPhGs y ddwy lefel niwrodrosglwyddydd monoamine hyn yn effeithiol. Mae'r canlyniad hwn yn gyson ag adroddiadau ymchwil a gyhoeddwyd yn gynharach ynghylchCistanchedetholiadau modiwleiddio niwrodrosglwyddyddion monoamine ymennydd.

Datgelodd profion biofarcwr biocemegol pellach fod CUMS wedi ysgogi codiad cadarn o cytocinau pro-llidiol lluosog (TNF- , IL-1 , IL-18, IL-6, IFN- ) ynghyd â chyfryngwyr llidiol (iNOS, COX-2, PGE2) o fewn meinwe hippocampal. Roedd ymyrraeth CPhGs wedi gwrthdroi statws gorfynegiant ymfflamychol yn sylweddol. Profodd staenio histopatholegol HE a Nissl yn reddfol fod CPhGs wedi lliniaru difrod hippocampal-niwron a achoswyd gan straen ac yn diogelu cyfanrwydd morffolegol niwronaidd.

Mae poblogaethau celloedd glial yn gweithredu fel cyfranogwyr canolog gan gyfryngu ymatebion niwro-llidiol. Mae astrocytes yn cynnal ailgylchu niwrodrosglwyddyddion, sefydlogrwydd strwythurol rhwystr gwaed-ymennydd a chyflenwad maeth niwronau. Mae microglia yn gweithredu fel celloedd effeithydd cynhenid-imiwn preswyl y tu mewn i barenchyma'r ymennydd. Mae straen cronig yn ysgogi colled astrocyte neu anallu swyddogaethol, ochr yn ochr â gor-ysgogi patholegol microglia. Nododd ein data imiwn-histocemeg fod triniaeth CPhGs wedi codi dwysedd astrocyte GFAP-positif, yn y cyfamser wedi gostwng maint microglia gor-actifadu wedi'i farcio gan Iba-1 yn yr hippocampus. Gall yr eiddo rheoleiddio ffenoteip cell-glial hwn fod yn rhannol wrth wraidd nerth ffarmacolegol niwro-amddiffynnol a gwrth-iselder CPhG.

Mae NLRP3 inflammasome yn cynrychioli platfform moleciwlaidd hanfodol sy'n cyfryngu rhaeadru niwro-llidiol. Mae ei actifadu yn gyrru aeddfedu a secretiad cytocinau pro-llidiol IL-1 ac IL-18 i lawr yr afon. Mae echel signal TLR4 / NF-κB yn gweithredu fel signal preimio hanfodol i fyny'r afon ar gyfer actifadu llidus NLRP3. Mae ysgogiad derbynnydd TLR4 yn hyrwyddo ffosfforyleiddiad is-uned NF-κB a thrawsleoli niwclear, yn traws-actifadu ymhellach NLRP3, trawsgrifio genynnau pro-IL-1. Yn ein hastudiaeth bresennol, ysgogodd straen CUMS welliant cydamserol ar gyfer mynegiant protein TLR4, NF-κB p65, NLRP3 a Caspase-1 wedi'i ffosfforyleiddio. Roedd ymyrraeth CPhGs yn amlwg yn rhwystro gweithrediad y rhaeadru signal cyfan hwn. Felly deuwn i'r casgliad bod CPhGs yn lleddfu anaf niwro-llidiol yn rhannol trwy atal actifadu llidus NLRP3 wedi'i gyfryngu gan TLR4 / NF-κB.

Gyda'i gilydd, mae ein tystiolaeth arbrofol model anifeiliaid yn cefnogi'r model mecanistig: mae CPhGs yn cynhyrchu effeithiau tebyg i gyffuriau gwrth-iselder mewn llygod iselder a achosir gan CUMS trwy ddau ddimensiwn sylfaenol: (1) adfer homeostasis niwrodrosglwyddyddion monoamine sy'n gysylltiedig â hwyliau (5-HT, DA); (2) modiwleiddio homeostasis cell glial hippocampal ac atal rhaeadr patholegol niwro-llidiol NLRP3 a yrrir gan TLR4/NF-κB.

Mae nifer o gyfyngiadau'r ymchwiliad hwn yn haeddu ystyriaeth. Roedd y gwaith hwn yn gweithredu arbrofion in-vivo ar lefel anifeiliaid yn unig. Nid ydym wedi cynnal dilysiad mecanistig ar lefel cellog na threialon clinigol dynol. Felly, dylai casgliad trosiadol tuag at therapi iselder dynol aros yn ddarbodus. Yn ogystal, ni ddyrannodd yr ymchwil hwn gyfraniadau cyfansoddion monomer unigol (echinacoside, verbascoside) o fewn dyfyniad CPhGs cymysg. Gall ymchwil yn y dyfodol ganolbwyntio ar ddilysu mecanistig cell-diwylliant, cymharu gweithgaredd cydran unigol, yn ogystal ag arsylwi peilot rhagarweiniol dynol-pwnc.

5. Casgliad

Mae glycosidau ffenylethanol Cistanche (CPhGs) yn cynhyrchu gweithredoedd ffarmacolegol sylweddol tebyg i gyffuriau gwrth-iselder yn erbyn ffenoteipiau ymddygiadol anrhagweladwy cronig sy'n achosi straen ysgafn sy'n debyg i iselder mewn llygod C57BL/6. Mae ei fecanweithiau therapiwtig yn gysylltiedig ag adfer lefelau serotonin serwm a hippocampal a niwrodrosglwyddydd dopamin, cadw cyfanrwydd strwythur niwronaidd hippocampal, modiwleiddio cydbwysedd swyddogaethol astrocyte-microglia, yn ogystal ag atal TLR4 / NF-κB / NLRP3 rhaeadru patholegol patholegol-ymfflamychol. Mae'r astudiaeth anifeiliaid cyn-glinigol hon yn darparu cyfeiriad arbrofol ar gyfer datblygiad pellach CPhGs fel sylwedd cynorthwyol therapiwtig naturiol neu gynhwysyn bwyd swyddogaethol sy'n targedu gwelliant symptomau iselder.

Cyfeiriadau

Ren L, Shao YT, Qin SH. Astudiaeth ar adnabod targed ac effaith saponin A ar anhwylder iselder. Nat Prod Res Dev, 2024, 36:44-51.

Fan L, Peng Y, Wang JW, et al. Mae cyfanswm y glycosidau o goesynnau Cistanche tubulosa yn lleddfu ymddygiadau tebyg i iselder: rhyngweithio deugyfeiriadol rhwng y ffytogemegau a microbiota'r perfedd. Ffytomeddygaeth, 2021, 83:153471.

Fan L, Peng Y, Chen XN, et al. Dadansoddiad integredig o gyfansoddiad ffytocemegol, ffarmacocineteg, a ffarmacoleg rhwydwaith i archwilio gwahaniaethau rhwng coesynnau Cistanche deserticola a C. tubulosa yn seiliedig ar weithgaredd gwrth-iselder. Bwyd a Swyddogaeth, 2022, 13: 8542-8557.

Yirmiya R, Rimmerman N, Reshef R. Iselder fel clefyd microglial. Tueddiadau mewn Niwrowyddorau, 2015, 38:637-658.

Jia XN, Gao ZH, Hu HL. Microglia mewn iselder: safbwyntiau cyfredol. Gwyddoniaeth Tsieina-Gwyddorau Bywyd, 2021, 64: 911-925.

Wu B, Gan AN, Wang RX, et al. Alpinia oxyphylla Miq. mae olew anweddol yn lleddfu ymddygiadau iselder ac yn atal niwro-llid mewn llygod sy'n agored i CUMS trwy atal y llwybr signalau MyD88 / NF-κB a gyfryngir gan TLR4. Journal of Chemical Neuroanatomy, 2023, 130: 102270.