Priodweddau Ac Cyfansoddion sy'n Gysylltiedig â Chroen O'r Rhannau Awyrol Detholiad Persicaria Senticosa

Cyswllt: ali.ma@wecistanche.com

Yun-Hyeok Choi, 1 Jae Yeon Lee, 2 Ji Eun Lee, 1 Yeon Woo Jung, 1 Wonsik Jeong, 1 Seong Su Hong, 1 Young-Rak Cho, 2 a Chun Whan Choi 1

1. Rhagymadrodd

Persicaria senticosayn blanhigyn blynyddol yn y teulu Polygonaceae, sy'n cael ei ddosbarthu yn y cyfan o Korea. Ers y dyddiau cynnar, mae'r planhigyn hwn wedi'i ddefnyddio fel meddygaeth werin gydag effeithiau buddiol ar gyfer trin afiechydon amrywiol megis dileu rhannau chwyddo'r clwyf neu carbuncles a cellulitis a chylchrediad gwaed, a chael gwared ar farweidd-dra gwaed. Mae astudiaethau diweddar wedi dangos hynnyPersicaria senticosawedi cael effeithiau gwrthlidiol [1]; fodd bynnag, nid yw'r planhigyn hwn wedi'i adrodd fel cynhwysyn cosmetig bioactif. Ac mae astudiaethau ffytocemegol blaenorol ar flodau, coesyn a gwreiddiau'r genws Polygonum wedi datgelu amrywiol flavonoidau a chyfansoddion ffenolig megis asid hydroxybenzoig, rutin, quercetin -3-O-glucuronide, quercetin -3-O-glucoside, a luteolin-7-Ystyriwyd O-rutinoside fel y cydrannau mwyaf gweithredol [2, 3]. Mae'r cyfansoddion gweithredol hyn yn arddangos effeithiau ffarmacolegol amrywiol, megis effeithiau gwrthlidiol, gwrth-wlser, gwrth-hypertensive, a gwrthganser [4]. Yn ystod y sgrinio ar gyfer cynhwysion cosmetig trwy fesur yr effaith sborionu radical ar 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH), sborion radical ABTS, ataliad elastase,tyrosinaseataliad, a assay ocsid nitrig, canfuwyd bod nifer o Polygonumextracts yn dangos gweithgaredd grymus.

Cliciwch iDefnyddiau Cistanche ar gyfer lleihau gweithgaredd tyrosinase.

2. Defnyddiau a Dulliau

2.1. Deunyddiau Planhigion a Gweithdrefnau Cyffredinol Cynhyrchion Naturiol.

Persicaria senticosacasglwyd o Seo-myeon, Chuncheon-si, Gangwon-do, Korea, yn 2016 (GPS: N 37 gradd 55′30.1″, E 127 gradd 37′ 57.0″, uchder: 434 m). Dilyswyd sbesimenau talebau(G071) gan Dr. Chun Whan Choi.Persicaria senticosaeu hadneuo yn llysieufa Biocenter, Gyeonggido Business & Science Accelerator, Suwon, SouthKorea (Ffig. S3). Cafwyd y dyfyniad methanol 99.9 y cant o 34Polygonum gan y Korea Plant Extract Bank yn Sefydliad Ymchwil Biowyddoniaeth a Biotechnoleg Korea (Daejeon, Korea). Perfformiwyd arbrofion NMR 1H a 13C ar sbectromedr Bruker Ascend 700 MHz withtetramethylsilane (TMS). Cafwyd LC-ESI-MS ar offeryn TOF 5600+ Triphlyg (AB SCIX, UDA) a HRESI-MSon offeryn LTQ Orbitrap XL (Thermo, UDA). Cynhaliwyd cromatograffaeth haen denau (TLC) ar blatiau Silica gel 60F254 (Merck, yr Almaen) a gel silica 60 RP-18 F254S (Merck, yr Almaen). Perfformiwyd cromatograffaeth colofn (CC) gan ddefnyddio Silica gel 60 (70 ~ 230 rhwyll, Merck, yr Almaen), ODM-A (12 nm S-7 μm, YMC GEL, Japan), a pherfformiwyd paratoadolHPLC ar LC{{ 23}}A (Shimadzu, Japan).

2.2. DIM Assay.

Cafodd celloedd RAW 264.7 eu hadu mewn 96-platiau ffynnon (5 × 104 cell/ffynnon) a chawsant eu trin â sampl am 1 awr cyn ysgogiad LPS (1 ug/mL) am 24 h. Cafodd y rheolydd negyddol ei drin â chyfryngau di-serwm. Mesurwyd faint o nitraid, metabolyn astable o NO, trwy ddefnyddio Griessreagent (1 y cant sulfanilamide a 0.1 y cant naphthyl ethylenediamine dihydrochloride mewn asid ffosfforig 2.5 y cant). Yna mesurwyd amsugnedd ar 540 nm gan ddefnyddio darllenydd ELISA. Pennwyd maint y nitrad o gromlin safonol ar gyfer sodiwm nitraid [5–7].

2.3. Assay Sytowenwyndra Cell.

Cafodd celloedd RAW 264.7 eu platio ar ddwysedd o 5 × 104 o gelloedd/ffynnon mewn 96-blatiau ffynnon. Cafodd celloedd eu trin â samplau am 1 awr cyn ysgogiad LPS (1ug/mL) am 24 awr. Ychwanegwyd MTT (5 mg/mL mewn PBS) at bob ffynnon a'i deor am 2 awr. Tynnwyd y cyfrwng o'r ffynhonnau trwy ddyhead, ychwanegwyd DMSO at bob ffynnon, ac ysgwydwyd y plât. Mesurwyd amsugnedd pob ffynnon ar donfedd o 540 nm gan ddefnyddio darllenydd ELISA. Cyflwynir data fel y gwyriad ± safonol cymedrig o dri atgynhyrchiad.

2.4. Assay Gweithgaredd Sialens Radical DPPH.

Mesurwyd gweithgaredd radicalscavenging DPPH trwy ddefnyddio'r dull a ddisgrifiwyd gan Blois [8] ac Ozgen et al. [9]. Ychwanegwyd toddiant DPPH wedi'i doddi mewn methanol at y sampl, a gafodd ei wanhau i'r crynodiad gofynnol, a chynhaliwyd yr adwaith ar dymheredd ystafell am 30 munud. Mesurwyd amsugnedd ar 517 nm gan ddefnyddio darllenydd ELISA. Defnyddiwyd y hydroxyanisole gwrthocsidiol butylated (BHA) fel rheolaeth bositif, a phenderfynwyd gwerth IC50 y sampl.

2.5. Gweithgaredd Sborion Radical ABTS.

Mesurwyd gweithgaredd sborionu radical ABTS trwy ddefnyddio dull a ddisgrifiwyd yn flaenorol [10, 11]. Ffurfiwyd ABTS plws trwy gymysgu hydoddiant 7 mM ABTSsolution a 2.45 mM potasiwm persylffad (K2S2O8) ag ABTS: K2S2O8 (cymhareb 2: 1) ar gyfer 12-16 h i ffurfio cation (ABTS plws ). Mesurwyd yr amsugnedd ar 734 nmusing darllenydd ELISA. Defnyddiwyd BHA, gwrthocsidydd, fel rheolaeth gadarnhaol.

2.6. Assay Atal Tyrosinase.

Tyrosinasemesurwyd gweithgaredd ataliol trwy ddefnyddio'r dull a ddisgrifiwyd gan Yagiet al. [12]. Cyflawnwyd yr adwaith mewn 0.1M byffer potasiwmffosffad (pH 6.5) yn cynnwys 1.5 mM L-tyrosine a 1250 uned/mL tyrosinase madarch. Deorwyd cymysgedd yr adwaith ar 37 gradd am 20 munud. Assayed y samplau prawf ar gyfer ataliad tyrosinase drwy fesur ei effaith artyrosinasegweithgaredd gan ddefnyddio microplate SpectraMax 190PC ELISAreader ar 490 nm. Defnyddiwyd arbutin ac asid kojic fel rheolaeth gadarnhaol, a phenderfynwyd gwerth IC50 y sampl.

2.7. Assay Ataliad Elastase.

Cyflawnwyd yr adwaith mewn{{0}.5 mM byffer Tris (pH 8.5) yn cynnwys 1 mg/mL N-succinyl-(Ala)3-p-nitroanilide a 0.6 uned/mL elastase . Deorwyd y cymysgedd adwaith ar 25 gradd am 10 munud. Assayed y samplau prawf ar gyfer ataliad elastase trwy fesur ei actifedd elastase effecton gan ddefnyddio darllenydd ELISA ar 405 nm. Defnyddiwyd Ursolicacid fel rheolaeth gadarnhaol, a phenderfynwyd gwerth IC50 y sampl [13].

2.8. Dadansoddiad Ystadegol.

Perfformiwyd dadansoddiad ystadegol o'r data gan feddalwedd PRIZM5 (GraphPad, CA, UDA), a chyflwynir data fel cymedr ± SD. Defnyddiwyd prawf-t Myfyriwr ungynffon ar gyfer dadansoddi arwyddocâd y gwahaniaeth rhwng grwpiau, ac ystyriwyd bod P < 0:05="" yn="" ystadegol="">

3. Canlyniadau a Thrafodaeth

3.1. Priodweddau Planhigion sy'n Gysylltiedig â Chroen Detholiad yn y TeuluPolygonaceae.

Effaith sborionu radical ar DPPH, sborion radical ABTS, ataliad elastase,tyrosinaseataliad, canfuwyd bod assay ocsid andnitrig ar nifer o ddarnau Polygonum yn dangos gweithgaredd cryf. Dangosodd y canlyniadau fod gan y Persicariajaponica a Rumex longifolius yr assay NO (IC{{0}}.3ac o dan 25.0ug/mL). Ar gyfer DPPH, yr IC50 o fethanolicextract o Polygonum cililinerve, Polygonum alpinum, a Persicaria Chinensis oedd 36.9, 15.4, a 19.2ug/mL, yn y drefn honno.Yngweithgarwch sborion radical ABTS, yr IC50 o methanolicextract o Polygonum cuspidate a Polygonum cuspidate oedd 36.9. a 5.3 ug/mL, yn y drefn honno. Yntyrosinasegweithgaredd ataliol, yr IC50 o echdyniad methanolig o Polygonum sachalinensroot a Polygonum cuspidata oedd 289.0 a 483.9 ug/mL, yn y drefn honno. Yn yr assay ataliad elastase, mae'r IC50 o echdyniad methanolig o Polygonum sachalinense, Polygonum cuspidatum, Persicaria hydropiper, Persicaria sieboldi, Polygonumorientale, Persicaria lapathifolia, Persicaria dissitiflora, Rumexacetosella, Rumexacetosella, Persicaria Persicaria, Persicaria Persicaria, Persicaria, Persicaria Lapathifolia, Persicaria dissitiflora, Rumexacetosella, Rumexacetosella, Rumexacetosella, Persicaria, Persicaria Persicaria, Persicaria Roedd Persicaria conspicua, Rheum palmatum, a Persicaria lapathifolia o dan 100 ug/mL (Tabl 1).

3.2. Priodweddau Persicaria senticosa Ffracsiynau sy'n Gysylltiedig â Chroen.

Effaith sborionu radical ar 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH), sborion radical ABTS, ataliad elastase, a assay nitrig ocsid ar sawl un.Persicaria senticosacanfuwyd ffracsiynau i ddangos gweithgaredd cryf. Dangosodd y canlyniadau fod gan y ffracsiynau CH2Cl2 ac EtOAc y assay NO (dan 25 a 44.64 ug/mL, yn y drefn honno). Gweithgareddau sborion radical DPPH ac ABTS o ffracsiynau EtOAc oedd 13.7 a 5.0 ug/mL. Yn y assay ataliad elastase, roedd yr IC50 o ffracsiynau n-hecsan a CH2Cl2 o dan 100 ug/mL (Tabl 2).

3.3. Ynysu a Phenderfynu Cyfansoddion o Detholiad Persicaria senticosa.

Persicaria senticosarhannau o'r awyr (1.4kg), wedi'u sychu yn y cysgod a'u powdr, eu hychwanegu at 4{{10}} Lof 70 y cant ethanol (gradd HPLC) a dwywaith ar dymheredd ystafell (bob tro am 2 ddiwrnod) a chawsant eu crynhoi mewn gwactod 440 gradd i gynhyrchu 180.4 go echdynion. Cafodd y darnau eu hongian mewn dŵr distyll ac yna eu rhannu â n-hecsan (4: 0L × 3), CH2Cl2 (4: 0L × 3), EtOAc (4: 0L × 3), ac n-butanol (4: 0L × 3) i roi n-hecsan (11.7 g), CH2Cl2 (7.4 g), EtOAc (21.7 g), butanol (22.5 g), a ffracsiynau sy'n hydoddi mewn dŵr (110.1 g), (Cynllun 1). Gwahanwyd y ffracsiwn o EtOAc (21.7 g) ganMPLC a ddefnyddiodd gymysgeddau graddiant fel eluents (F001-003). Cafodd cyfansoddion 1 (3.2mg) a 5 (3.9mg) eu hynysu oddi wrth F002 a ddefnyddiwyd gan prep-HPLC. Cafodd y ffracsiwn F001 ei wahanu gan MPLC a ddefnyddiodd gymysgeddau graddiant fel eluents (F011-F018). Cafodd cyfansawdd 6 (1.5mg) ei ynysu oddi wrth F016 a ddefnyddiwyd gan HPLC paratoadol. Cafodd cyfansawdd 7 (2.7mg) ei ynysu o F017 a ddefnyddiwyd gan HPLC paratoadol. Gwahanwyd F012 gan ddefnyddio MPLC a oedd yn defnyddio cymysgeddau graddiant fel eluents(F{{121-F124). Cafodd cyfansawdd 4 (10.8mg) ei ynysu oddi wrth F124 a ddefnyddiwyd gan HPLC paratoadol. Yn ogystal, gwahanwyd F014 gan HPLC paratoadol gan ddefnyddio cymysgeddau graddiant fel eluents (F141-F143). Cafodd cyfansawdd 3 (2.3mg) ei ynysu oddi wrth F141 gan ddefnyddio HPLC paratoadol. Cafodd cyfansawdd 2 (4.8mg) ei ynysu oddi wrth F142 gan ddefnyddio HPLC semipreparative. Perfformiwyd puro haen hydawdd EtOAc trwy wahanu cromatograffaeth colofn a dadansoddiad MPLC i Gyfansoddion 1-7. Fe'i nodwyd fel loliolid (1) [14], quercetin-3-O-glucoside (2) [15], querce tun-3-O-glucuronide (3) [16], 4-methoxy asid caftrarig (4) [17],kaempferol-3-(6-methylglucuronide) (5) [18], quercetin-3-(6-methylglucuronide) (6) [19, 20], a quercetin (7) [21]. Eglurwyd y strwythur gan gyfuniad o sbectrometreg 1D a 2D NMR acMS yn ogystal â chymhariaeth â llenyddiaeth a adroddwyd (Ffigur 1).

3.4. Priodweddau Cyfansoddion o Persicariasenticosa sy'n Gysylltiedig â Chroen.

Effaith sborionu radical ar DPPH,tyrosinaseataliad, a assay ocsid nitrig ar nifer o gyfansoddion oPersicaria senticosacanfuwyd ei fod yn dangos gweithgaredd cryf (Ffig.S4–7). Dangosodd y canlyniadau fod gan Gyfansoddyn 7 y NOassay (IC50 29.7 ug/mL). Ar gyfer DPPH, yr IC50 o Gyfansoddion2, 3, 5, a 7 oedd 39.6, 31.2, 37.0, a 22.7 ug/mL, yn y drefn honno. Mewn gweithgaredd ataliol tyrosinase, yr IC50 o Cyfansoddyn 7 oedd 14.3 ug/mL (Tabl 3).

4. Casgliadau

Persicaria senticosayn blanhigyn blynyddol yn y teulu Polygonaceae sy'n cael ei ddosbarthu yn y cyfan o Korea. Ers y cyfnod cynnar, mae'r planhigyn hwn wedi'i ddefnyddio fel meddygaeth werin gydag effeithiau buddiol ar gyfer trin afiechydon amrywiol. Gwerthusodd yr astudiaeth hon briodweddau a chyfansoddion cysylltiedig â chroen o echdyniad awyrol Persicaria senticosa a thri deg pedwar o blanhigion Polygonaseae. Yn ystod sgrinio ar gyfer cynhwysion cosmetig trwy fesur yr effaith sborionu radical ar DPPH, sborion radical ABTS, gwerthuswyd gwrth-wrinkle gan ddefnyddio ataliad elastase, astudiwyd gwynnu gantyrosinaseataliad, a gwrthlidiol ei brofi ar nitric oxideassay. Canfuwyd bod nifer o ddarnau Polygonum yn dangos cryfder. Dangosodd y canlyniadau fod gan y dyfyniad Persicaria senticosamethanolic weithgareddau sborionu radical DPPH ac ABTS (IC50 61.0 a 17.5 ug/mL). Yn y assay ataliad elastase a assay ocsid nitrig, yr IC50 o methanolicextract o Persicaria senticosa oedd 241.5 ug/mL a 71.8 ug/mL, yn y drefn honno. Rhannwyd dyfyniad ethanolig Persicaria senticosa 70 y cant â n-hecsan, CH2Cl2, Etoac, n-BuOH, a ffracsiynau dyfrllyd.

Dangosodd ffracsiwn hydawdd EtOAc weithgaredd cryf sy'n gysylltiedig â'r croen (Ffigur 2 a Thabl 3). Roedd y canlyniadau hyn yn awgrymu bod cydrannau gweithredol ynPersicaria senticosasy'n gyfrifol am weithgaredd sy'n gysylltiedig â'r croen wedi'i ganoli yn y darn hydawdd EtOAc o Persicaria senticosa (Cynllun 1). Ar y llaw arall, dangosodd y ffracsiwn hydawdd n-hecsan, dichloromethane, a'r ffracsiwn hydawdd BuOH a ddeilliodd o'r echdyniad o Persicaria senticosa weithgaredd cyfartal ar weithgaredd chwilota radical nitrig ocsid, DPPH, ac ABTS, tra bod y ffracsiwn dŵr a oedd yn weddill yn dangos effeithiau ataliol gwael (Tabl 2). ).

Felly, puro tri ffracsiwn gweithredol wedi'i arwain gan fio-dreiddiad, hy, ffracsiwn hydawdd EtOAc oPersicaria senticosaei gynnal i buro'r egwyddorion gweithredol sy'n gyfrifol am y gweithgaredd sy'n gysylltiedig â'r croen a ddilynir gan y broses a ddisgrifir yng Nghynllun 1, yn y drefn honno.

Mae puro'r haen hydawdd EtOAc oPersicaria senticosaPerfformiwyd dyfyniad ethanolig 70 y cant trwy wahanu cromatograffaeth colofn a dadansoddiad MPLC iCompounds 1-7. Fe'i nodwyd fel loliolid (1), quercetin3-O-glucoside (2), quercetin-3-O-glucuronide (3), 4-asid caftraric methoxy (4), kaempferol{{ 11}}(6-methylglucuronide) (5), quercetin-3-(6-methylglucuronide) (6), a quercetin (7). Strwythur ei egluro gan gyfuniad o 1Dand 2D NMR ac MS sbectrometreg yn ogystal â llenyddiaeth a adroddwyd Comparewith ( Ffig. S2 ). Effaith sborionu radical ar 1,1-diffenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH),tyrosinaseataliad, a chanfuwyd bod assay ocsid nitrig ar sawl cyfansoddyn o Persicaria senticosa yn dangos gweithgaredd cryf. Dangosodd Theresults fod gan Gyfansoddyn 7 y assay NO (IC5029.7 μM). Ar gyfer DPPH, yr IC50 o Gyfansoddion 2, 3, 5, a 7 oedd 39.4, 32.1, 37.0, a 22.7 μM, yn y drefn honno. Yntyrosinasegweithgaredd ataliol, yr IC50 o Cyfansoddyn 7 oedd 14.3 μM. Fel y dangosir yn Ffigur 3, Cyfansoddion 2 a 5 yw'r prif gyfansoddion yn y ffracsiwn hydawdd EtOAc o Persicaria senticosa (- Ffig. S1 ). A dangosodd Cyfansoddion 2 a 5 weithgaredd gwrthocsidiol rhagorol (Ffigur 4), sy'n gyson ag astudiaethau blaenorol [18, 22].

Roedd yr astudiaeth bresennol hon yn dangos hynnyPersicaria senticosaac mae Polygonaseae yn cynnwys cyfansoddion cemegol gyda gweithgareddau sy'n ymwneud â chroen nwyddau a gallai fod yn ddiddorol fel ffynhonnell newydd o gyfryngau bioactif ar gyfer diwydiannau cosmetig.