Astudiaeth Ar Wahanu Ac Imiwn-gymhwysedd Detholiad Polysacarid O Cistanche Tubulosa

am ragor o wybodaeth:ali.ma@wecistanche.com

Ailadan·Maimaitiaili1,LI Yang1,YAO Mehefin1,YUAN Jie2

（1. Ysgol Fferylliaeth, Prifysgol Feddygol Xinjiang, Urumqi 830011, Tsieina; 2. Collage o Houbo, Prifysgol Feddygol Xinjiang, Xinjiang Klamayi 834000, Tsieina）

AMCAN ABSTRACT:I ynysu y dyfyniad dŵr opolysacaridau o Cistanche tubulosa,ac i ymchwilio i'w himiwn-gymhwysedd in vitro. DULLIAU: Defnyddiwyd resin arsugniad macroporous AB{{{{30}}} i ddadliwio C. tubulosa polysacarid. Cafodd y broses decolorization ei optimeiddio gan brawf orthogonal gyda chyfradd cadw a chyfradd decolorization polysacarid fel sgôr cynhwysfawr, a defnyddio cyfradd arsugniad, amser decolorization, crynodiad sampl fel ffactorau. Cynhaliwyd y profion gwirio. DEAE-650Defnyddiwyd colofn cyfnewid ïon M i wahanu echdyniad dŵr polysacarid C. tubulosa wedi'i ddadliwio. Defnyddiwyd assay CCK-8 i ganfod effeithiau crynodiadau gwahanol o polysacarid （6.25-100 ug/mL） cyn ac ar ôl ynysu ar gyfradd amlhau macrophage llygod RAW264.7. Mabwysiadwyd dull Griess a assay ELISA i ganfod effeithiau crynodiad isel, canolig ac uchel o polysacarid （12.5,25,50 ug/mL） ar ryddhau NO,IL-6 a TNF- mewn celloedd RAW264.7 a achosir gan LPS. CANLYNIADAU: Yn y broses decolorization gorau posibl o AB-8 resin arsugniad macroporous, y gyfradd llif arsugniad oedd 1.2 BV/h, yr amser dad-liwio oedd 9 h, a chrynodiad sampl oedd 25 mg/mL. Sgoriau cynhwysfawr 3 gwaith y profion dilysu oedd 63.43 ％ ,63.29 ％ a 63.34％ , yn y drefn honno, gyda chyfartaledd o 63.35％ (RSD＝0.11％ ,n＝3）. Un polysacarid niwtral (CTZ) a 5 asid polysacaridau (CT1, CT2, CT3, CT4, CT5) ynysu oddi wrth y polysacarid o C. cistanche, y cynnwys oedd 299.2,168.0,123.2,121.6,54. 11.2 mg/g. O'i gymharu â'r grŵp rheoli, 6.25-100 ug/mL CTZ (ac eithrio 6.25 μ g/mL) ）, CT2, CT4, CT5 a ​​6.25 μ g/mL CTC (y polysacarid cyn gwahanu) gallai gynyddu'r gyfradd amlhau yn sylweddol o gelloedd RAW264.7 （P＜{{80}.05）, tra gallai 6.25-100 ug/mL CT1,CT3 a 50 ug/mL CTC leihau cyfradd amlhau RAW264. 7 cell （P＜0.05）. O'i gymharu â'r grŵp LPS, gostyngwyd rhyddhau NO yn sylweddol mewn grwpiau crynodiad isel, canolig ac uchel o CTC, CT2, CT3 a CT5, grŵp crynodiad isel CTZ （P ＜.05）, tra'n cynyddu'n sylweddol mewn grwpiau crynodiad uchel o CT1 a CT4 （P＜0.05）. Gostyngodd rhyddhau IL-6 (ac eithrio grŵp crynodiad uchel CT1 a grŵp crynodiad isel CT5) a TNF- (ac eithrio grŵp crynodiad canolig CT1) yn sylweddol mewn grwpiau crynodiad isel, canolig ac uchel （P＜0.05 ）. CASGLIADAU: Mae'r dechnoleg decolorization optimized o resin arsugniad macroporous yn sefydlog ac yn ymarferol yn yr astudiaeth. Gellir ynysu un polysacarid niwtral a 5 polysacarid asidig o echdyniad dŵr o C. tubulosa polysacaridau, ymhlith y polysacarid CT2 sydd â'r gallu gwrthlidiol cryfach.

GEIRIAU ALLWEDDOL:Cistanche tubulosa polysacarid; Dadliwio; Gwahanu; Cymhwysedd Imiwnedd

Cistanche tubulosayn goesyn sych, cigog gyda dail graddfa oCistanche tubulosa (Schenk) Wighto'r teulu Lidanaceae. Mae astudiaethau modern wedi dangos bod Cistanche Tubula yn cynnwys glycosidau alcohol ffenethyl, glycosidau iridoid, lignans, polysacaridau, alcaloidau, a sylweddau biolegol weithgar eraill, sydd â phriodweddau affrodisaidd, carthydd, afu-amddiffynnol a gwrth-heneiddio. , Gellir defnyddio imiwnedd gwell gwrth-blinder, ac effeithiau nootropig [1-4], ar gyfer triniaeth glinigol o ddiffyg yang aren, diffyg hanfod a gwaed, analluedd ac anffrwythlondeb, gwendid y waist a'r pengliniau, gwendid y cyhyrau a esgyrn, coluddion sych, a rhwymedd [5].

Cliciwch i Cistanche cynhyrchion perlysiau

Dyfyniad dwr yCistanche tubulosa polysacaridyn frown-felyn. Canfu arbrawf blaenorol ein grŵp ymchwil fod yn ychwanegol at yCistanche tubulosa polysacarid, mae'r dyfyniad dŵr hefyd yn cynnwys cydrannau nad ydynt yn darged megis pigmentau a phroteinau sy'n hydoddi mewn dŵr. Mae hyn yn cyfrannu at wahanu a phuro polysacaridau. Mae ymchwil gweithgaredd biolegol wedi achosi anawsterau mawr. Bydd y driniaeth decolorization toddyddion organig traddodiadol yn dinistrio strwythur cemegol y gydran darged yn y dyfyniad crai, a lleihau gweithgaredd ffarmacolegol y person, a chyflwyno cynhwysion niweidiol i'r corff dynol [6]. Mae resin arsugniad macroporous yn ddeunydd cyffredin ar gyfer dad-liwio polysacaridau mewn darnau meddygaeth Tsieineaidd. Mae'n ddeunydd arsugniad polymer cost-effeithiol gyda phriodweddau ffisegol a chemegol sefydlog. Gellir ei dargedu gan ei berfformiad arsugniad dethol a rhidyllu ar gyfer cydrannau pigment. Er mwyn cael gwared ar y pigmentau yn y darnau o feddyginiaeth Tseiniaidd traddodiadol, yn ogystal, gellir ei adfywio trwy piclo a golchi alcali, felly fe'i defnyddir yn eang [7]. Mae'r astudiaeth hon yn bwriadu defnyddio resin arsugniad macroporous i decolorize y dyfyniad dŵr o Cistanche Tubula polysacarid, a defnyddio arbrawf orthogonal i optimeiddio'r amodau decolorization; ar ôl dad-liwio'r dyfyniad, yn ôl natur wahanol y grŵp a gludir gan y polysacarid, bwriedir ei ddefnyddio Mae'r dull o gromatograffaeth colofn cyfnewid ïon yn gwahanu ymhellach y cydrannau polysacarid niwtral ac asidig yn y polysacarid oCistanche tubulosa.

Mae astudiaethau wedi dangos hynnyplanhigyn cistanchemae gan polysacaridau effeithiau imiwnofodwlaidd ac maent yn imiwnofodylyddion naturiol a all actifadu'r system ategu a chelloedd imiwnedd fel lymffocytau T/B, macroffagau, celloedd lladd naturiol (NK), a gallant hefyd hyrwyddo amrywiaeth o ryddhau cytocinau, a hyrwyddo cynhyrchu gwrthgyrff. , ac ati [8-11]. Gall Lipopolysaccharide (LPS) actifadu llwybr signal llidiol macroffagau, ysgogi ocsid nitrig (NO), a cytocinau pro-llidiol fel interleukin 6 (IL-6) a ffactor-alffa necrosis tiwmor (TNF-). Synthesis a rhyddhau, a thrwy hynny sbarduno cyfres o adweithiau llidiol yn y corff [12]. Mae'r astudiaeth hon yn bwriadu sefydlu model llid macrophage llygoden a achosir gan LPS RAW264.7, gan ddechrau o effeithiau polysacarid Cistanche Tubula ar amlhau macrophage, secretion ffactor llidiol, a chynhyrchiad NO, a gwerthusiad rhagarweiniol o'i effaith ar weithgaredd imiwnedd y corff Ei nod yw darparu sail ddamcaniaethol ar gyfer astudiaeth fanwl o sail sylwedd gweithredol gwrthlidiolCistanche tubulosapolysacarid a datblygiad ei adnoddau polysacarid.

Mae astudiaethau rhagarweiniol wedi canfod, pan fydd y polysacaridau yn Cistanche cistanche yn cael eu tynnu â dŵr, bydd mwy o sylweddau sy'n hydoddi mewn dŵr yn cael eu diddymu gyda'i gilydd, sy'n effeithio ar burdeb ycistanche polysacaridau cistanche. Felly, gall eu gwahanu a'u puro ymhellach osod y sylfaen ar gyfer astudio sail deunydd polysacarid a gweithgaredd biolegol. Mae'r dull resin arsugniad macroporous yn ddull decolorization a ddefnyddir yn gyffredin [17-19]. Gan ei fod yn dal yn aneglur ynghylch y cyfansoddiad pigment ynCistanche tubulosa, felly defnyddiodd y grŵp ymchwil arbrofion arsugniad statig i sgrinio'r resin arsugniad macroporous AB-8 mwyaf addas o resinau arsugniad macroporous o wahanol begynau. Mae gan polysacarid Cistanche deserticola allu cadw da. Er mwyn cyflawni gwell effaith decolorization, mae'r ymchwil hwn yn seiliedig ar yr ymchwil flaenorol a defnyddiodd orthogonal arbrofion i benderfynu ar y broses decolorization (golchi Mae'r gyfradd llif desorption, amser decolorization, a chrynodiad màs sampl) wedi'u optimeiddio. O ganlyniad, y dull dad-liwio gorau posibl ar gyfer polysacarid Cistanche tubulosa oedd cyfradd llif elution o 1.2 BV/h, amser dad-liwio o 9 h, a chrynodiad màs sampl o 25 mg/mL. Mae canlyniadau'r arbrawf dilysu yn dangos bod y dull dadliwio yn ymarferol.

Mae purdeb a math polysacaridau naturiol yn ffactorau pwysig sy'n effeithio ar ei weithgaredd. Felly, mae'r ymchwil berthnasol ar ddulliau ynysu a phuro polysacaridau yn dal i fod yn ffocws gwaith ymchwil polysacaridau gweithredol naturiol. Mae'r dulliau a ddefnyddir yn gyffredin ar gyfer gwahanu polysacaridau yn cynnwys dyddodiad, cromatograffaeth gel, cromatograffaeth cyfnewid anion, cromatograffaeth colofn resin macroporous, ac uwch-hidlo [20]. Oherwydd gwahanol gyfansoddiadau monosacaridau, mae gan polysacaridau briodweddau gwefr wahanol. Gellir eu rhannu'n polysacaridau niwtral a polysacaridau asid. Mae polysacaridau niwtral yn bolymerau sy'n cynnwys dau neu fwy o fonomerau siwgr gwahanol nad ydynt yn cynnwys asidau organig. Mae polysacaridau asidig yn fwy cymhleth na polysacaridau niwtral o ran cyfansoddiad a strwythur, heblaw am gynnwys mwy na dau fonomer sy'n seiliedig ar siwgr. , Hefyd yn cynnwys asid uronic Corff mono [21]. Mae cromatograffaeth colofn cyfnewid anion yn defnyddio'r gwahaniaeth yng ngofal polysacaridau i wahanu polysacaridau niwtral o polysacaridau asidig [22]. Am y rheswm hwn, defnyddiodd yr astudiaeth hon golofn cromatograffaeth colofn cyfnewid ïon DEAE-650M i wahanu polysacaridau Cistanche Tubula, a gwahanwyd cyfanswm o 1 polysacarid niwtral a 5 polysacarid asid. Mae Macrophages yn gelloedd imiwnocompetent sy'n gallu rheoleiddio imiwnedd trwy amlyncu a lladd micro-organebau pathogenig. Mae astudiaethau wedi dangos, pan fydd y corff dynol yn cael ei ysgogi gan ddifrod patholegol neu fecanyddol, y gall ymyriad cyffuriau actifadu macroffagau i wella cynhwysedd phagocytig macroffagau a achosir gan LPS, a thrwy hynny atal cynhyrchu NO a chyfres o gelloedd llidiol megis IL{{ 9}} a TNF- secretion ffactor, A thrwy hynny amddiffyn y gwesteiwr rhag pathogenau [23]. I'r perwyl hwn, profodd yr astudiaeth hon effeithiau polysacaridau Cistanche tubulosa amrywiol ar gyfradd amlhau celloedd RAW264.7, yn ogystal â'r effeithiau ar macroffagau a achosir gan LPS i ryddhau NO, IL-6, a TNF-. O ganlyniad, o fewn yr ystod crynodiad màs o 12.5, 25, a 50 ug / mL, roedd nid yn unig yn hyrwyddo toreth o gelloedd RAW264.7 ond hefyd yn atal lledaeniad celloedd RAW264.7 yn sylweddol.

Mae'rpolysacarid o Cistanche tubulosamewn celloedd RAW264.7 a achosir gan LPS i ryddhau NO, IL-6 a TNF- yw CT2. Mae astudiaethau perthnasol wedi dangos y bydd cyfansoddiad monosacarid a phwysau moleciwlaidd polysacaridau yn effeithio ar eiimmunomodulatorygweithgaredd. Mae monosacaridau fel galactos, arabinose, mannose, a glwcos yn cael eu cydberthyn yn gadarnhaol â gweithgaredd imiwnedd polysacaridau [24]. Gall polysacaridau â phwysau moleciwlaidd mwy gynnwys Strwythur clymau lluosog hynod ailadroddus uwch, gallant groesgysylltu derbynyddion wyneb pilen plasma yn aml-gyfeiriadol, ac yn benodolgwella'r immunomodulatoryeffaith [25]. Felly, gall cyfansoddiad monosacarid y polysacarid asidig CT2 yn yr astudiaeth hon gynnwys monosacaridau arbennig neu monosacaridau lluosog sy'n gysylltiedig yn gadarnhaol â gweithgaredd imiwnedd, a gall y pwysau moleciwlaidd fod yn fwy na polysacaridau niwtral a polysacaridau asidig eraill, ond mae angen ymchwil pellach i gadarnhau . I grynhoi, mae'r broses decolorization resin arsugniad macroporous optimized yn yr ymchwil hwn yn sefydlog ac yn ymarferol; Gellir gwahanu 1 polysacarid niwtral a 5 polysacarid asid oddi wrth y dyfyniad dŵr o Cistanche cistanche cistanche, ymhlith y mae gweithgaredd imiwnolegol y polysacarid asid CT2 Cryfach. Gall yr astudiaeth hon osod y sylfaen arbrofol ar gyfer datblygu a defnyddio polysacaridau Cistanche Tubula.