Swyddogaethau Hanfodol TRPM6 yn Rheoleiddiad Circadian Pwysedd Gwaed

Cyswllt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Pwysigrwydd y sianel ïon arennol TRPM6 yn y secretion circadian o renin i godi pwysedd gwaed

Yosuke Funato, Daisuke Yamazaki, Daisuke Okuzaki, Nobuhiko Yamamoto a Hiroaki Miki

Pwysedd gwaedpatrwm dyddiol, gyda gwerthoedd uwch yn y cyfnod gweithredol. Mae ei ddrychiad ar ddechrau'r cyfnod gweithredol yn cynyddu'n sylweddol y risg o ddigwyddiadau cardiofasgwlaidd angheuol. Ystyrir bod secretion renin a ysgogwyd gan niwronau sympathetig arennol yn hanfodol i'r broses hon; fodd bynnag, mae ei fecanwaith rheoleiddio yn parhau i fod yn anhysbys i raddau helaeth. Yma, rydym yn dangos pwysigrwyddpotensial derbynnydd dros dro yn gysylltiedig â melastin 6 (TRPM6), sianel cation athraidd Mg2 plus, i ychwanegu at secretion renin yn y cyfnod gweithredol.TRPM6mae mynegiant yn cael ei leihau'n sylweddol yn y tiwbyn troellog distal o lygod diffygiol Cnnm. Rydym yn cynhyrchu arennau penodolTRPM6-llygod diffygiol ac arsylwi gostyngiad mewnpwysedd gwaeda diflaniad ei amrywiad circadian. Yn gyson, nid yw secretion renin yn cael ei ychwanegu at y cyfnod gweithredol. Ar ben hynny, mae secretion renin ar ôl actifadu ffarmacolegol -adrenoreceptor, y targed o symbyliad niwronaidd, yn cael ei ddiddymu, ac mae mynegiant y derbynnydd yn cael ei leihau mewn celloedd sy'n cuddio renin. Mae'r canlyniadau hyn yn dangos rolau hanfodolTRPM6 yn y rheoliad circadian opwysedd gwaed.

Amcangyfrifir bod gan tua biliwn o bobl ledled y byd gorbwysedd, sy'n cynyddu'n sylweddol y risg o glefydau amrywiol, gan gynnwys clefydau a allai fod yn angheuol, megis clefyd isgemia'r galon a strôc. Mae'n hysbys bod y digwyddiadau angheuol hyn sy'n gysylltiedig â gorbwysedd yn digwydd yn aml yn gynnar yn y bore, ar ddechrau'r cyfnod gweithredol pangwaedpwysauyn codi'n sydyn. Ystyrir bod secretion renin a ysgogwyd gan niwronau sympathetig arennol yn chwarae rhan hanfodol yn hynpwysedd gwaeddrychiad, ond nid yw ei fecanwaith rheoleiddio yn cael ei ddeall yn dda².

bodybuilding cistanche

Derbynnir yn eang bod rhai mwynau dietegol, yn enwedig sodiwm a photasiwm, yn chwarae rhan bwysig wrth reoligwaedpwysau. Mae magnesiwm yn elfen hanfodol bwysig sy'n ymwneud ag amrywiaeth o weithgareddau biolegol. Mae astudiaethau epidemiolegol wedi dangos perthynas wrthdro sylweddol rhwng lefelau magnesiwm dietegol a'r risg o orbwysedd3-6. Ar ben hynny, mae ysgarthiad magnesiwm wrinol, y tybir ei fod mewn cydbwysedd bras ag amsugno magnesiwm berfeddol, yn cydberthyn yn wrthdro â'r risg o orbwysedd. Mae'r canfyddiadau hyn yn awgrymu cysylltiad agos rhwng homeostasis magnesiwm organig apwysedd gwaedrheoleiddio, gan amlygu pwysigrwydd Mg2 a sianeli a/neu gludwyr wrth reoleiddiopwysedd gwaed.

Mae llawer iawn o fagnesiwm yn cael ei adamsugno'n gyson yn yr aren. Mae'r rhan fwyaf o fagnesiwm yn yr hidlydd glomerwlaidd yn cael ei adamsugno yng nghorff esgynnol trwchus dolen Henle, ond mae cam olaf yr adamsugniad yn digwydd yn y tiwbyn troellog pell (DCT)8. Mae'r broses olaf yn cael ei rheoleiddio'n dynn i addasu faint o adamsugniad i lefel sy'n briodol ar gyfer cynnal homeostasis magnesiwm. Mae dadansoddiadau genomig o glefydau cynhenid ​​​​gyda symptomau hypomagnesemia wedi datgelu sawl moleciwl allweddol sy'n ymwneud â'r broses honTRPM6, amgodiopotensial derbynnydd dros dro yn gysylltiedig â melastin 6(TRPM6), sy'n cael ei dreiglo mewn cleifion â hypomagnesemia enciliol â hypocalcemia uwchradd2,10.TRPM6yn ffurfio sianel ïon athraidd Mg2 plws wedi'i lleoleiddio i bilen apical celloedd DCT ac yn cyfryngu cymeriant Mg2 a mwy o'r lwmen tiwbaidd1. Moleciwl allweddol arall yw cyclin M2(CNNM2), a cludwr Mg2 plws wedi'i leoli i bilen fasochrol celloedd DCT12,13. Mae mwtaniadau Cnnm2 yn achosi hypomagnesemia dominyddol teuluol, a nodweddir gan ddiffygion mewn adamsugniad magnesiwm yn yr arenyl2. Mae llygod diffygiol Cnmm yn dangos symptomau tebyg o hypomagnesemia gyda gwastraff magnesiwm yn yr aren4. Mae union rôl foleciwlaidd CNNM2 yn ddadleuol o hyd, ond mae sawl llinell o dystiolaeth yn awgrymu ei fod yn cyfryngu Mg2 ynghyd ag alllif o gelloedd DCT trwy'r bilenl5 basoochrog, gan gyfrannu felly at adamsugniad magnesiwm. Mae dadansoddiadau pellach o lygod diffygiol Cnnm wedi datgelu bod gan y llygod hyn lawer yn is hefydgwaedpwysauna llygod rheoli4. Fodd bynnag, mae'r manylion mecanistig a chyfraniad sianeli/cludwyr Mg2 a mwy eraill yn hyngwaedpwysaurheoleiddio yn parhau i fod yn anhysbys.

Mae'n hysbys hefyd bod y DCT arennol yn chwarae rhan hanfodol mewngwaedpwysaurheoleiddio oherwydd ei fod yn adamsugno sodiwm yn sylweddol ac yn rheoleiddio cyfaint hylif y corff6. Mynegir nifer o sianeli/cludwyr cation, megis y cyd-drosglwyddydd Na-Cl (NCC), sianel sodiwm epithelial (ENaC), a Na plus / H ynghyd â chyfnewidydd 2 (NHE2), yn y bilen apigol DCT a rhai o mae'r proteinau hyn yn cyfryngu cymeriant Na plws i gelloedd DCT o'r lwmen tiwbaidd. Yna mae Na plws mewngellol yn cael ei allwthio o'r celloedd trwy'r bilen fasochrol gan Na plus /K plus -ATPase i gyflawni ei adamsugniad. Ar wahân i ymwneud uniongyrchol â rheoleiddio cyfaint hylif y corff, mae'r DCT wedi'i leoli ger y macwla densa, sy'n rheoli secretion renin, hormon sydd â'r brif rôl mewn cerddorfa.pwysedd gwaedrheoliad17,18. Trwy synhwyro lefelau Cl- wrinol, mae celloedd macwla densa yn ysgogi celloedd cyfochrog-glomerwlaidd (JG) cyfagos i secretu renin.

Yn y gwaith hwn, rydym yn cynnal dadansoddiadau trawsgrifio gydag arennau o lygod diffygiol Cnnm hypotensive. Rydym yn canfod gostyngiad sylweddol ynTrpm6, gan ein hannog i gynhyrchu aren-benodolTrpm6-llygod diffygiol. Yn annisgwyl, mae dadansoddiadau o'r straen llygoden hwn yn datgelu ffenoteip sy'n ansoddol wahanol i ffenoteip Cnnm2-ddiffygiol: colli amrywiad circadian ogwaedpwysau. Rydym hefyd yn canfod bod y ffenoteip hwn yn cael ei achosi gan secretion amhariad o renin, apwysedd gwaed- hormon codi y mae lefel y gwaed fel arfer yn codi yn ystod y cyfnod gweithredol.

bodybuilding cistanche

Canlyniadau

Is-reoleiddioTRPM6 (potensial derbynnydd dros dro yn gysylltiedig â melastin 6)mynegiant mewn llygod diffygiol Cnnm. Archwilio mecanwaith moleciwlaiddpwysedd gwaedgostyngiad mewn llygod diffygiol Cnnm, cynhaliwyd dadansoddiadau micro-arae DNA i ymchwilio i newidiadau mynegiant genynnau yn aren Cnnm2f/il; Chwe 2-llygod cren, heb y ddau alel Cnnm2 yn yr aren4. Ymhlith y genynnau a fynegwyd yn wahaniaethol (Tabl 1), dewisom ddadansoddi Pvalb aTrpm6, y mynegir y ddau ohonynt yn y DCT919. Datgelodd dadansoddiadau meintiol PCR(qPCR) hynnyTrpm6lleihawyd mynegiant yr un modd yn arenau y ddau Cnnm2fi; Chwe2-Cre a Cnnm2 plws / llygod. Gan fod Cnnm2 plws /A a Cnnm2fi/; Roedd chwech o lygod cre yn hypotensive4, fe wnaethon ni ddadansoddiTRPM6 mynegiant yn fwy manwl. Cadarnhaodd dadansoddiadau imiwnoblotting o lysates arennau ostyngiad sylweddol oTRPM6ar y lefel protein gan ddiffyg2-Cnnm, er nad oedd lefelau NCC a ffosfforyleiddiad NCC (ffurf actif) wedi'u heffeithio'n sylweddol, cadarnhawyd mynegiant CNNM2 gan ddadansoddiadau imiwnoddodiad ac imiwnoblotio olynol). Mae'r gostyngiad oTRPM6yn arennau Cnnm2f/i; Cafodd chwech o lygod cregyn eu cadarnhau hefyd gan ddadansoddiadau imiwnfflworoleuedd.

Fe wnaethom hefyd archwilioTRPM6mynegiant mewn llygod heb CNNM4, sydd hefyd yn dangos symptomau hypomagnesemia20 ond wedi codipwysedd gwaed4. Dangosodd dadansoddiadau imiwnoblotting a immunofluorescence hynnyTRPM6ychwanegir mynegiant yng nghelloedd DCT llygod diffygiol Cnnm, sy'n awgrymuTRPM6cysylltiad agos rhwng mynegiant apwysedd gwaedgwerthoedd, ond nid yw'n gysylltiedig yn uniongyrchol â lefelau magnesiwm gwaed.

RheoleiddioTRPM6mynegiant gan Mg2 a mwy mewngellol mewn celloedd DCT. I nodweddu'r mecanwaith moleciwlaidd oTRPM6 lleihau rheoleiddio mewn llygod diffygiol Cnnm, defnyddiwyd llinell gell sy'n deillio o DCT MDCT21, sy'n mynegi Cnnm2 yn bennaf ac yn gymedrol Cnnm3 a Cnnm4 ymhlith genynnau teulu Cnnm. Gan fod gan CNNM2 a CNNM4 weithgaredd efflux cryf o Mg2 ynghyd â gweithgaredd efflux tra nad oes gan CNNM3 unrhyw Mg2 ynghyd ag efflux activityl5, fe wnaethom berfformio RNA (siRNA)-ymyrrol bach-ganolog o naill ai Cnnm2, Cnnm4, neu'r ddau. Arweiniodd dymchweliad Cnnm2 estynedig mewn lefelau Mg plws mewngellol ([Mg plus ]), a dymchweliad Cnnm4 ar yr un pryd at godiad bychan yn y cyfartaledd [Mg2]; gwerth, nad oedd yn ystadegol arwyddocaol. Archwiliwyd gennym nesafTrpm6mynegiant gan qPCR a chanfuwyd gostyngiad sylweddol ar ôl dymchweliad Cnnm2 a gostyngiad llawer mwy ar ôl dymchweliad dwbl Cnnm2 a Cnnm4. Felly,Trpm6mae'n ymddangos bod mynegiant yn cael ei reoleiddio'n negyddol gan lefelau Mg2 a mwy mewngellol, sy'n gyson â'r adroddiadau blaenorol23. Er mwyn archwilio pwysigrwydd Mg2 plws yn uniongyrchol, fe wnaethom feithrin celloedd MDCT mewn cyfryngau gyda chrynodiadau amrywiol o Mg2 plws .1h, gan ostwng y crynodiad Mg2 plws allgellog arwain at ostyngiad yn lefel Mg2 plws mewngellol a chynnydd mewnTrpm6mynegiant, gan awgrymu rôl ataliol o Mg2 plus .Yn achos celloedd MDCT dymchwel dwbl (Cnnm2/Cnnm4),Trpm6ataliwyd mynegiant gyda gostyngiad Mg2 a mwy

ynghyd â chrynodiadau i lawr i 0.2 mm, ond bu gostyngiadau pellach yn canslo'r effaith ataliol; y ddau mewngellol Mg2 a mwy aTrpm6nid oedd y lefelau'n sylweddol wahanol i gelloedd rheoli a drosglwyddwyd gan siRNA mewn amodau 0.1 a 0.02 mM. Mae'r canlyniadau hyn yn dangos mecanwaith rheoleiddio Mg2 a mwy-ddibynnol oTrpm6mynegiant, sy'n egluro'rTrpm6is-reoleiddio yn arennau llygod diffygiol Cnnm.

Amhariad amodol arTrpm6 (potensial derbynnydd dros dro yn gysylltiedig â melastin 6)yn yr aren. Nesaf, roeddem yn anelu at gynhyrchuTrpm6-llygod diffygiol i ymchwilio ymhellach i bwysigrwyddTRPM6yn rheoleiddiopwysedd gwaed. Fe ddefnyddion ni glôn cell coesyn (ES) embryonig yn cario ailgyfuniadTrpm6alel (Trpm6-) sy'n cynnwys dilyniant derbyniwr sbleis, gan orfodi splicing mRNA cynamserol ac yn arwain at mRNA wedi'i gwtogi ar ôl exon 6. Cafwyd llygod heterosygaidd chimerig trwy chwistrelliad blastocyst o'r celloedd ES a chadarnhawyd ailgyfuniad gan PCR. Croesasom y rhainTrpm6plws/- llygod, ond naTrpm6-/--cafwyd _gwanwyn. Mae'r canlyniad hwn yn gyson ag adroddiadau blaenorol sy'n dangos marwoldeb embryonig mewnTrpm6-llygod diffygiol24,25

Felly, fe wnaethom berfformio amhariad amodol penodol i'r arennau oTrpm6defnyddio Six{0}}Cre, sy'n galluogi mynegiant effeithlon a phenodol o ailgyfuno Cre wedi'i asio â GFP yn yr aren embryonig.Trpm6fl/, Chwe 2-Cre llygod(penodol i'r arennauTrpm6-llygod diffygiol) eu geni ar y gymhareb Mendelaidd ddisgwyliedig. I benderfynu ar fynegiant oTRPM6, gwnaethom gynnal dadansoddiadau imiwnoblotio gan ddefnyddio gwrth-TRPM6gwrthgorff.TRPM6Gostyngwyd lefelau protein yn sylweddol yn yr arennauTrpm6fl/fl, Chwe 2-llygod creadur, ond ni welwyd unrhyw newidiadau arwyddocaol mewn organau eraill. Nid oedd dadansoddiadau staenio imiwnofflworoleuedd ychwaith yn dangos unrhyw fynegiant oTRPM6mewn celloedd DCT positif NCC. Ni welsom unrhyw arwyddocaolTRPM6-signal cadarnhaol mewn mwy na 100 o glystyrau o'r fath o gelloedd NCC-positif, sy'n awgrymu hynnyTRPM6mae mynegiant bron yn cael ei atal yn gyfan gwbl yng nghelloedd DCT Trpmfi/; Chwe 2-llygod cre. Mae'r canlyniadau hyn yn cadarnhau'r genhedlaeth lwyddiannus o aren-benodolTrpm6-llygod diffygiol.

Fe wnaethom archwilio effaith sy'n benodol i'r arennau yn gyntafTrpm6- diffyg ar homeostasis magnesiwm. Gwnaethom gynnal llygod mewn cewyll metabolig a chasglu samplau wrin a serwm, a oedd wedyn yn destun meintioli lliwimetrig o lefelau magnesiwm gan ddefnyddio Xylidyl Blue-I. Roedd lefelau magnesiwm serwm yn sylweddol is ynTrpm6l/l; Chwe llygod cre o gymharu â'r rhai sy'n rheoliTrpm6plws / plws ; Chwe 2-llygod creadur, tra bod lefelau magnesiwm wrinol yn uwch. Gwnaethom hefyd gynnal dadansoddiadau sbectrosgopeg allyriadau plasma wedi'u cyplysu'n anwythol (ICP-ES) i fesur nifer o brif elfennau metel yn y serwm a chanfod mai dim ond lefelau magnesiwm yr effeithiwyd arnynt yn sylweddol yn Trpmd/; Chwe 2-llygod cre. Mae'r canlyniadau hyn yn dangos yn glir bod gan lygod â diffyg Trpm sy'n benodol i'r arennau hypomagnesemia gyda gwastraff magnesiwm arennol, fel sy'n cael ei weld mewn micel diffygiol Cnnm arennau4.

Diffyg amrywiad circadian ogwaedpwysaua gweithgaredd renin. Yn nesaf, darostyngasomTrpm6ff/l; Chwe{0}}Cre llygod igwaedpwysaumesuriadau gan ddefnyddio radiotelemetreg. Systolig a diastoligpwysedd gwaedroedd gwerthoedd y ddau yn sylweddol is ynTrpm6l/; Chwe{0}}Cr o lygod nag mewn llygod rheoli. Mae'n werth nodi bod yr amrywiad circadian arferol opwysedd gwaed, gyda gwerthoedd uchel yn ystod y cyfnod tywyll a gwerthoedd isel yn ystod y cyfnod golau mewn llygod, ni welwyd ynTrpm6f/l; Chwe 2-llygod cre. Er mwyn archwilio a yw'r rhythm circadian yn mynd yn ei flaen fel arfer, defnyddiwyd radiotelemetreg i fesur gweithgaredd locomotif llygod a chadarnhawyd amrywiad circadian clir iawn mewnTrpm6l/; Chwe{{{0}}Cre llygod. Fe wnaethom hefyd archwilio lefelau gwaed fasopressin (AVP) a lefelau mRNA o enynnau dau gloc Bmall a Per2 yn yr ymennydd a'r aren; gwyddys bod pob un yn dangos amrywiad circadian nodweddiadol27,28. Fe wnaethom ddadansoddi ar chwe phwynt amser gwahanol (ar amseroedd 0,4,8 zeitgeber (ZT) ar gyfer y cyfnod golau ac ar 12,16,20 ZT ar gyfer y cyfnod tywyll). Mae llygod rheoli yn dangos patrymau circadian clir o'u mynegiant fel yr adroddwyd yn flaenorol28, ac eto, ni welsom unrhyw annormaleddau arwyddocaol mewnTrpm6/il; Chwe 2-llygod cre. Fe wnaethom hefyd wirio lefel mynegiant Trpm7, sy'n amgodio sianel Mg2 plus -athraidd sy'n perthyn yn agos iTRPM6, yn yr aren. Roedd y patrymau mynegiant yn debyg iawn yn y ddauTrpm6plws / plws ; Chwe2-Cre a Trpm6f/; Chwe 2-Cre llygod, ac nid oeddent yn dangos patrymau circadian clir. Gyda'n gilydd, deuwn i'r casgliad bod y rhythm circadian yn mynd rhagddo fel arferTrpm6ff; Chwe 2-llygod cre. Mae wedi cael ei ystyried bodgwaedpwysauMae drychiad yn ystod y cyfnod gweithredol (y cyfnod tywyll ar gyfer llygod a'r cyfnod golau ar gyfer bodau dynol) mewn bodau dynol a llygod yn digwydd mewn ymateb i gynnydd mewn secretion renin i'r gwaed2. Fe wnaethom fesur gweithgaredd renin mewn samplau gwaed a gasglwyd ar y chwe phwynt amser gwahanol a ddisgrifir uchod. Gwelwyd cynnydd amlwg mewn gweithgaredd renin gwaed yn ystod y cyfnodau tywyll mewn samplau o lygod rheoli, ond ni welwyd unrhyw gynnydd arwyddocaol mewn samplau o'r rhai oTrpm6/lSix{0}}Cre llygod. Fe wnaethom hefyd fesur lefel gwaed noradrenalin, y gwyddys bod ei ryddhau wedi'i ysgogi gan actifadu'r system renin-angiotensin29,30. Yn ôl y disgwyl, diflannodd eu hamrywiad circadian i mewn hefydTrpm6, Chwe 2-llygod cre. Yn y cyfamser, nid oedd lefel protein angiotensinogen gwaed (AGT), moleciwl arall sy'n cyfyngu ar gyfraddau ar gyfer actifadu'r system renin-angiotensin mewn llygod31, wedi'i effeithio ganTrpm6 diffyg. Mae'r canlyniadau'n awgrymu bod yr amrywiad circadian â nam ar renin yn bwysig ar gyfer colli amrywiad circadian ogwaedpwysauganTrpm6-diffyg.

Mae agosrwyddTRPM6-mynegi celloedd i gelloedd sy'n cuddio renin. Mae Renin yn cael ei fynegi a'i gyfrinachu o gelloedd JG yn yr aren17,18. Mae celloedd JG mewn cysylltiad uniongyrchol â'r macwla densa, sydd wedi'i leoli gerllaw'r DCT ac yn ysgogi secretiad renin o gelloedd JG mewn ymateb i ostyngiad mewn lefelau Cl wrinol18. Ni ddangosodd staenio imiwnofflworoleuedd ar gyfer renin a synthase ocsid nitrig niwronol (nNOS), marciwr densa macwla, unrhyw annormaleddau naill ai ym mhatrwm na dwyster y signalau positif a welwyd ger y glomeruli ynTrpm6f/; Chwe 2-llygod cre. Felly, nid yw'n ymddangos bod celloedd sy'n ymwneud yn uniongyrchol â secretiad renin a'i reoleiddio yn cael eu heffeithio'n sylweddol ganTrpm6diffyg. FelTRPM6yn cael ei fynegi ar y cyd â NCC yn y DCT, y tro nesaf archwiliwyd y berthynas ofodol rhwngTRPM6/Celloedd sy'n mynegi NCC (DCT) a'r celloedd macwla densa neu JG. Roedd delweddau confocal o adrannau DCT sagittal yn dangos gorgyffwrdd llwyr bronTRPM6a signalau NCC trwy gydol y DCT.Wedyn, fe wnaethom staenio ar gyfer nNOS a NCC, a chanfod bod yr ardaloedd cadarnhaol ar gyfer nNOS a NCC wedi'u cysylltu, heb unrhyw orgyffwrdd signal.Yn ogystal, staenio dwbl ar gyfer renin aTRPM6/Datgelodd NCC fod rhaiTRPM6/Mae celloedd sy'n mynegi NCC yn agos at gelloedd JG sy'n mynegi renin, sy'n awgrymu hynnyTRPM6/Gall celloedd sy'n mynegi NCC, yn ogystal â'r macwla densa, gael effaith sylweddol ar secretiad renin.

Amhariad renin secretion ganTrpm6 (potensial derbynnydd dros dro yn gysylltiedig â melastin 6)diffyg. Yn gyffredinol, mae'r system nerfol ymreolaethol yn chwarae rhan hanfodol wrth drefnu dilyniant y rhythm circadian. Credir bod secretiad renin o gelloedd JG yn ystod y cyfnod gweithredol yn cael ei ysgogi gan noradrenalin wedi'i secretu o niwronau sympathetig arennol32. Er mwyn ymchwilio'n uniongyrchol i effaith ysgogiad o'r fath ar secretiad renin, gwnaethom baratoi sleisys arennau a'u hysgogi ag isoproterenol, gweithydd -adrenoreceptor (AR). Dangosodd y canlyniadau ostyngiad clir iawn yn y signal renin-positif sy'n weddill yn y dafell ar ôl ysgogiad isoproterenol am 30 munud. Dangosodd dadansoddiadau meintiol fod canran y glomeruli wedi'i amgylchynu gan signal renin-positif wedi gostwng o tua 80 y cant i 30 y cant ar ôl ysgogiad isoproterenol, sy'n dangos bod secretiad renin enfawr yn digwydd. Fodd bynnag, ni welsom effaith sylweddol ysgogiad isoproterenol ar signal renin mewn sleisys arennau oTrpm6/1; Chwe 2-llygod cre. I gadarnhau'r canlyniad, fe wnaethom hefyd fesur gweithgaredd renin gwaed ar ôl gweinyddu isoproterenol. Mae'r canlyniadau'n dangos mai dim ond mewn llygod rheoli y gwelwyd cynnydd sylweddol mewn gweithgaredd renin gwaed, tra bod cynnydd yng nghyfradd y galon yn gyffredin yn y ddau fath. Mae'r canlyniadau hyn yn awgrymu na all celloedd JG sy'n cuddio renin ymateb i ysgogiad gan niwronau sympathetig arennol, yn gyson â diflaniad y cynnydd circadian mewngwaedpwysaua gweithgaredd renin ynTrpm6l/fl; Chwe 2-llygod cre.

Gall celloedd JG hefyd gael eu hysgogi i secretu renin mewn ymateb i prostaglandinau, ymhlith yr hyn yr ystyrir bod prostaglandin E2 (PGE2) yn fwyaf arwyddocaol gan ei fod yn cael ei gyfrinachu'n ffisiolegol gan gelloedd macwla densa pan fydd lefelau Cl wrinol yn gostwng17,18. Ar ben hynny, mae'n hysbys hefyd y gall PGE, trin sleisys arennau ysgogi secretiad renin yn effeithlon33. Mae ysgogi celloedd JG gyda PGE2 ac isoproterenol yn aml yn ysgogi cynhyrchu cAMP, sy'n achosi secretion renin yn y pen draw. Felly, gwnaethom hefyd brofi effaith PGE, ac fe wnaeth yr analog cAMP pilen-athraidd, dibutylyl-cAMP(db-cAMP).PGE2 a db-cAMP ysgogi secretiad renin yn llwyddiannus mewn sleisys aren o Trpmdi/A, Six{2- Cre llygod, a llygod rheoli. Mae hyn yn dangos hynnyTrpm6 nid yw diffyg yn diddymu'r peiriannau cyffredinol sy'n ymwneud â synhwyro ciwiau allanol, trosglwyddo signalau mewngellol, a gweithredu secretiad renin, ond mae'n effeithio'n benodol ar yr ymateb i -AR.

Lleihad -AR mynegiant mewn celloedd JG ganTrpm6 (potensial derbynnydd dros dro yn gysylltiedig â melastin 6)diffyg. Nam -AR responsein derbynnyddTrpm6l/l; Arweiniodd chwe{0}}Cre llygod ni i ymchwilio i statws y mynegiant derbynnydd -AR, ac felly rydym yn perfformio immunofluorescence o 1-AR, y prif -AR isdeip a fynegir mewn celloedd JG34. Fel yr adroddwyd yn flaenorol34, canfuom y patrwm staenio tebyg i fand mewn adrannau arennol o'r ddau reolaeth a Trpmdi/l, Chwe2-Cre llygod. Mae'n hysbys bod 1-AR wedi'i fynegi'n gryf yn y pibellau gwaed a chelloedd JG34, ac yn gyson, roedd y 1-celloedd AR-positif ar ddiwedd y staenio tebyg i fand mewn aren llygoden reoli hefyd yn gadarnhaol ar gyfer staenio renin (dangosir gyda phen saeth). Mewn cyferbyniad, mae staenio Trpm6l/fl; Dangosodd chwech 2-Cre mouse aren nifer llai o 1-AR/renin celloedd-dwbl-positif, sy'n awgrymu bod 1- mynegiant AR wedi gostwng mewn celloedd JG. I gadarnhau’r canfyddiad hwn, fe wnaethom ynysu celloedd JG drwy ddefnyddio dull allgyrchu graddiant dwysedd Percoll yn ôl yr adroddiad blaenorol35. Datgelodd dadansoddiadau imiwnoblotio fod celloedd JG renin-positif yn cael eu cyfoethogi yn y ffracsiwn band 3, sy'n gyson â'u hadroddiad35, a 1-Roedd mynegiant AR yn y ffracsiwn band 3 hwn yn benodol llawer is yn Trpmdi/1; Chwe 2-llygod cre. Gyda'n gilydd, fe wnaethon ni ddarganfod hynnyTrpm6mae diffyg yn lleihau lefel mynegiant 1-AR mewn celloedd JG, sy'n gyson â'r secretion renin â nam.

Effaith yr ymyriad artiffisial ar circadiangwaedpwysauamrywiad. Yn y set olaf o arbrofion, gwnaethom brofi effaith ymyriadau amrywiol ar circadiangwaedpwysauamrywiad. I gadarnhau pwysigrwydd renin, rhoesom atalydd renin aliskiren36 sydd ar gael yn glinigol i lygod gwyllt. HoffiTrpm6abladiad, rhoi aliskiren trwy fewnblannu pwmp mini osmotig yn llawfeddygol wedi atal y circadian yn sylweddolgwaedpwysauamrywiad. Nesaf, gwnaethom gyflawni gweithrediadau dadnerfu arennol, gan mai actifadu -AR ar gelloedd JG trwy'r system nerfol sympathetig yw'r prif lwybr ar gyfer ysgogi secretiad renin mewn modd circadian2. Unwaith eto, canfuwyd bod yr ymyriad yn atal ygwaedpwysauamrywiad. Mae'r canlyniadau hyn yn cyd-fynd â'n model mai diffygion mewn ymateb -AR a secretion renin sy'n gyfrifol am gollipwysedd gwaedamrywiad mewn Trpmdl/l; Chwe 2-llygod cre.

Fe wnaethom hefyd brofi effaith dyrchafu cynnwys magnesiwm dietegol. At y diben hwn, cafodd llygod tebyg eu bwydo â diet Mg uchel yn cynnwys 0.6 y cant (diet arferol:0.3 y cant magnesiwm) am 1 mis. Yn ôl y disgwyl, dangosodd y llygod hynny lefelau Mg gwaed uchel. Yna fe wnaethom wirio lefel mynegiantTRPM6yn DCT; gostyngodd yn sylweddol trwy fwydo diet uchel-Mg, a gostyngodd maint y dietTRPM6mynegiant yn fwy nag abladiad arennol Cnnm2. Pan wnaethom fesur ypwysedd gwaedyn y llygod hyn, canfuom fod llygod sy'n bwydo diet Mg uchel yn dangos llawer llaigwaedpwysauamrywiad naTrpm6-llygod diffygiol, sy'n gyson â'n syniad bod arennolTRPM6yn bwysig i circadianpwysedd gwaedamrywiad.

Tabl 1 Genynnau a gafodd eu huwchreoleiddio neu eu hisreoleiddio yn arennau Cnnm2flfl/flfl; Chwe 2-llygod cre.

Trafodaeth

Yn yr astudiaeth hon, rydym wedi dangos pwysigrwyddTRPM6 (potensial derbynnydd dros dro yn gysylltiedig â melastin 6)yn rheoleiddiopwysedd gwaed. Yn benodol, rydym yn dangos diflaniad bron yn llwyr o'r amrywiad circadian opwysedd gwaedmewn aren-benodolTrpm6-llygod diffygiol. Gwelsom hefyd fod secretion renin, hormon allweddol sy'n rheoli pwysedd gwaed, wedi'i ddileu'n ddifrifolTrpm6-llygod diffygiol, sy'n gyson â'r a welwydpwysedd gwaedffenoteip. Mae sawl adroddiad wedi dangos bod TRPM7, sianel arall Mg2 plus -athraidd yn debyg iawn iTRPM6, hefyd yn effeithio ar bwysedd gwaed37,38. Mae TRPM7 yn ​​atal y cynnydd opwysedd gwaedar weinyddiaeth Angiotensin II trwy atal ymateb celloedd endothelaidd fasgwlaidd i Angiotensin II37. I'r gwrthwyneb, adroddwyd yn ddiweddar bod TRPM7 hefyd yn hwyluso codiadpwysedd gwaedar weinyddu leptin trwy gyfryngu mewnlifiad Mg2 a mwy i gelloedd y corff carotid38. Felly, mae rôl TRPM7 ynpwysedd gwaedrheoleiddio yn amwys. Fodd bynnag, gan nad oedd lefel mynegiant TRPM7 yn ​​yr aren wedi'i effeithio gan arennolTrpm6abladiad (Ffig. 5 Atodol), mae'n ymddangos nad yw TRPM7 yn ​​ymwneud yn uniongyrchol â'r ffenoteipiau a welwyd yn yr astudiaeth hon.

Fel y sylwyd mewn llygod diffygiol Cnnm,pwysedd gwaedgostyngwyd gwerthoedd ynTrpm6-llygod diffygiol (Ffig.2)14. Fodd bynnag, dylid nodi bod gwahaniaeth amlwg rhwng y llygod hyn. Cnnm2 aflonyddwch yn gyffredinol yn lleihaupwysedd gwaed, ond roedd amrywiad circadian yn dal i fod yn amlwg i'w weld. Mewn cyferbyniad, diflannodd yr amrywiad hwn ynTrpm6-llygod diffygiol. Mae gwahaniaeth ansoddol o'r fath hefyd yn gyson â'n sylw bod yr amrywiad circadian o renin wedi'i gadw mewn llygod diffygiol Cnnm (Ffig Atodol 9). Dylid nodi bod y ddau CNNM2 aTRPM6credir eu bod yn bwysig ar gyfer Mg2 arennol ynghyd ag adamsugniad trwy gyfryngu'r Mg2 fectoraidd ynghyd â chludiant trwy'r DCT, ac yn wir, roedd llygod a oedd yn ddiffygiol yn y naill enyn yn arddangos Mg2 arennol unfath ynghyd â ffenoteip gwastraffu (Ffig. 1 a chyf. 39). Mae gwahaniaeth ansoddol opwysedd gwaedffenoteip rhwng Cnnm2-aTrpm6-mae llygod diffygiol yn awgrymu nad yw Mg2 ynghyd â chludiant yn y DCT, swyddogaeth gyffredin y ddau foleciwl, yn ymwneud yn uniongyrchol â'r amrywiad circadian opwysedd gwaeda secretion renin, sy'n awgrymu bod rôl annibynnol CNNMTRPM6sydd wrth wraidd y ffenoteipiau diddorol hyn.

Mae sawl mecanwaith yn gweithio i ysgogi secretiad renin o gelloedd JG i'w gynnalpwysedd gwaed. Yn eu plith, ystyrir bod y mewnbwn gan niwronau sympathetig arennol yn chwarae'r brif rôl wrth ychwanegupwysedd gwaedyn ystod y cyfnod gweithredol o amrywiad circadian32. Mae'r niwronau hyn yn secretu noradrenalin, sy'n clymu ac yn actifadu -AR ar gelloedd JG i ysgogi cynhyrchu cAMP, gan arwain yn y pen draw at secretion renin1732. Yn ein harbrofion gan ddefnyddio sleisys arennau a gafwyd oTrpm6-Diffyg llygod, ysgogiad ag isoproterenol, a -AR agonydd, yn dangos unrhyw effaith ar secretiad renin, tra symbyliad gyda PGE2 neu db-cAMP yn effeithlon cynyddu secretiad renin (Ffig. 4). Mae PGE2 yn cael ei gyfrinachu gan y macwla densa mewn ymateb i lefelau isel o Cl- wrinol ac mae'n actifadu derbynyddion EP2 ac EP4 ar gelloedd JG, sydd, fel actifadu -AR, yn y pen draw yn ysgogi cynhyrchu cAMP40. Felly, mae'r canlyniadau hyn yn awgrymu bod signalau -AR yn cael eu diddymu'n ddetholus yng nghelloedd JG oTrpm6-llygod diffygiol, heb effeithio ar y llwybr signalau cAMP i lawr yr afon. Yn gyson, datgelodd imiwnfflworoleuedd adrannau arennau llygoden ac imiwnoblotting celloedd JG ynysig fod mynegiant -AR wedi gostwng yn sylweddol yng nghelloedd JGTrpm6-llygod diffygiol (Ffig. 5). Dylai mynegiant llai -AR o'r fath wneud celloedd JG yn methu â secretu renin mewn ymateb i symbyliad nerf sympathetig yn ystod y cyfnod gweithredol, a thrwy hynny ddileu amrywiad circadian yn lefel renin gwaed apwysedd gwaed. Dylid nodi bod yna astudiaeth sy'n defnyddio 1/ 2-Llygod cnocio AR, a ddangosodd circadian gostyngolpwysedd gwaedamrywiad felTrpm6-llygod diffygiol41. Roeddent yn ei briodoli i'r gostyngiad mewn gweithgaredd locomotor, ond mae'n dal yn bosibl bod amrywiad circadian llai o weithgaredd renin yn cyfrannu at ostyngiad yn amrywiad circadian opwysedd gwaede. Fel arall, gallai cefndir anarferol eu llygod (cefndir cymysg o C57BL6/J, 129, a VFB; defnyddiwyd C57BL6/ cefndir pur) guddio effaith -AR arpwysedd gwaedamrywiad; mae cefndiroedd genetig yn hanfodol ar gyfer circadianpwysedd gwaedamrywiad42.

bodybuilding cistanche

Sut mae colliTRPM6 (potensial derbynnydd dros dro yn gysylltiedig â melastin 6)mewn celloedd DCT yn arwain at y mynegiant llai -AR mewn celloedd JG wedi parhau i fod yn anodd dod o hyd iddo. Mae arbrofion sy'n defnyddio mathau eraill o gelloedd wedi dangos bod mynegiant -AR yn cael ei reoleiddio gan foleciwlau amrywiol y gwyddys eu bod yn cyfryngu signalau rhynggellog: Mae ychwanegu glucocorticoidau i gyfrwng diwylliant llinell gell sy'n deillio o vas deferens DDT1 MF-2 yn cynyddu -AR mynegiant43. Hefyd, dywedwyd bod nitrig ocsid (NO) yn atal diraddio -AR mewn celloedd cardiaidd trwy S-nitrosylation GRK24. Ymhlith y moleciwlau hyn, mae'n werth nodi bod NO yn cael ei secretu o gelloedd densa macwla arennol, gan ysgogi celloedd JG mewn modd paracrine i gynyddu secretion renin45. Er bod mynegiant nNOS, yr ensym cynhyrchu NO yn yr aren, wedi'i gyfyngu i gelloedd macwla densa, maent mewn cysylltiad uniongyrchol â chelloedd DCT, segment nesaf y tiwbyn arennol6. Felly, mae'n bosibl bodTrpm6-diffyg mewn celloedd DCT yn arwain at y mynegiant -AR gostyngol mewn celloedd JG trwy effeithio ar gynhyrchu neu ryddhau NO o'r celloedd macwla densa cyfagos.

Mae'n hysbys bod celloedd JG hefyd yn cyfathrebu â chelloedd eraill trwy ffurfio cyffyrdd bwlch â chelloedd amgylchynol, megis celloedd mesangial, ac yn derbyn Ca2 plus i atal secretion renin7. Er nad yw celloedd JG a chelloedd DCT yn cysylltu'n uniongyrchol â'i gilydd, maent wedi'u lleoli'n agos o hyd (cyf.46 a Ffig.3)ac mae'n bosibl bod y celloedd hyn yn defnyddio cyfathrebiadau cyffordd bwlch trwy gelloedd rhyngol, megis celloedd mesangial; dywedir bod pob un o'r tri math o gelloedd yn mynegi Cx3747,48, isoform connexin sy'n oligomerizes ac yn ffurfio cyffyrdd bwlch. Efallai y bydd dadansoddiad pellach yn nodi'r moleciwl a'r llwybr sy'n gyfrifol am y signalau rhynggellog rhwng celloedd DCT a JG, sy'n bwysig i ddadorchuddio mecanwaith cyffredinol circadian tarfu.pwysedd gwaedamrywiad ganTrpm6-diffyg.

YnTrpm6-llygod diffygiol, diflannodd yr amrywiad circadian o lefelau gwaed nid yn unig renin ond hefyd noradrenalin. Mae actifadu'r system renin-angiotensin yn ysgogi rhyddhau noradrenalin i'r llif gwaed29,30, ac felly, mae'n ymddangos yn rhesymol bod effaithTrpm6 (potensial derbynnydd dros dro yn gysylltiedig â melastin 6)roedd abladiad ar lefelau renin gwaed a noradrenalin yn debyg. Gan fod noradrenalin hefyd yn gweithredu ar y -AR o gelloedd JG i hyrwyddo secretiad renin, tybir bod y ddau foleciwl yn ffurfio dolen adborth gadarnhaol, gan ysgogi secretion ei gilydd. Fodd bynnag, dylid nodi bod canlyniadau arbrofion gweinyddu isoproterenol yn dangos yn benodol y diffyg mewn secretiad renin (Ffig.4), ac felly mae'n ymddangos mai dyma'r prif reswm dros golli amrywiad circadian o renin a noradrenalin.

Hyd yn hyn, mae amrywiaeth o gyffuriau effeithiol wedi'u datblygu a'u defnyddio i drin cleifion â gorbwysedd. Fodd bynnag, mae nifer sylweddol o gleifion yn dangos gwrthwynebiad i'r triniaethau confensiynol sy'n defnyddio cyfuniad o gyffuriau gwrthhypertensive mawr o wahanol fecanweithiau swyddogaethol4. Mae dadnerfiad llawfeddygol o niwronau sympathetig arennol gan ddefnyddio cathetrau endofasgwlaidd wedi'i gynnal ar sail prawf i drin gorbwysedd ymwrthol o'r fath50. Ei effeithiolrwydd ymarferol o ran gwellapwysedd gwaedmae rheolaeth wedi bod yn ddadleuol51,52, ond mae astudiaethau a gyhoeddwyd yn ddiweddar wedi dangos gostyngiad sylweddol mewnpwysedd gwaedo'i gymharu â rheolyddion ffug53,54. Mae canlyniadau cymysg hefyd ar effaith denervation arennol ar amrywiad circadian opwysedd gwaed. Roedd rhai adroddiadau yn dangos bod graddaupwysedd gwaedroedd gostyngiad o ran dadnerfiad arennol yn fwy yn ystod y cyfnodau gweithredol53, ond nododd eraill nad oedd unrhyw newid yn yr amrywiad circadian opwysedd gwaed55,56. Yn y dadansoddiad gan ddefnyddio anifeiliaid labordy, ataliodd ein gweithrediadau dadnerfu arennol yn erbyn llygod yr amrywiad circadian opwysedd gwaed(Ffig.6). Perfformiwyd gweithrediadau tebyg hefyd yn erbyn llygod mawr, ond nid yw hyd yn oed llygod mawr o fath gwyllt yn dangos bron dim circadianpwysedd gwaedamrywiad yn y lle cyntaf57,58, gan ei gwneud yn anodd gwerthuso effaith y llawdriniaeth. Mae angen mwy o astudiaethau i egluro effaith dadnerfiad arennol ar circadianpwysedd gwaedamrywiad, a fyddai hefyd yn ein helpu i ddeall y mecanwaith manylach opwysedd gwaeddadreoleiddio ganTrpm6-diffyg.

Mesuriadau telemetrig opwysedd gwaed, cyfradd curiad y galon, a gweithgaredd locomotor. Mesuriadau telemetrig opwysedd gwaedeu perfformio fel a ganlyn 4.Pwysedd gwaedcafodd trawsddygiaduron (TAl1PA-C10, Data Sciences International) eu gosod yn llawfeddygol yn y rhydweli carotid cyffredin chwith o 2- i 3-lygod mis oed o dan anesthesia (drwy weinyddu mewnperitoneol o 0.3 mg/ kg medetomidine, 4 mg / kg midazolam, a 5 mg / kg butorphanol). Ar ôl 3 wythnos o adferiad, systolig a diastoligpwysedd gwaedcofnodwyd gwerthoedd gyda 2-munud o samplu wedi'i amserlennu bob 60 munud trwy ddefnyddio meddalwedd Dataquest ART (Data Sciences International). Cafwyd cofnodion am o leiaf bum diwrnod yn olynol, a phennwyd cyfartaleddau'r mesuriadau a gymerwyd ar yr un pryd bob dydd ar gyfer pob llygoden a'u defnyddio ar gyfer dadansoddiadau ystadegol pellach, ac eithrio Ffig Atodol 4. Yn seiliedig ar Nakamori et al.68, arennol perfformiwyd dadnerfu 2 wythnos cyn ei fewnosodpwysedd gwaedtransducers fel a ganlyn. Amlygwyd yr arennau gan doriad abdomenol a chafodd meinwe gyswllt o amgylch y pibellau arennol ei rannu. Yna, cafodd y llongau arennol eu trochi mewn ethanol 95 y cant am 2 funud ac wedi hynny, yn PBS am 2 funud. Perfformiwyd gweithrediad ffug gan ddefnyddio'r weithdrefn gyfatebol heb drochi ethanol. Rhoddwyd 25 mg/kg/dydd i Aliskiren drwy fewnosod pwmp osmotig yn isgroenol(1004, ALZET), a dechreuwyd recordio o'r diwrnod ar ôl cyflwyno'r pwmp. Ar gyfer ychwanegiad magnesiwm, cafodd llygod eu bwydo â diet wedi'i gyfoethogi â magnesiwm yn cynnwys 0.6 y cant o fagnesiwm (CLEA Japan) am 1 mis ynghyntpwysedd gwaedmesur.

Mesurwyd cyfradd curiad y galon gyda'r un system radiotelemetreg, ac eithrio bod y recordiad yn cael ei berfformio gyda samplu wedi'i amserlennu 30- bob munud, a defnyddiwyd un mesuriad ar gyfer dadansoddiad pellach.

Aseswyd gweithgareddau locomotor gan ddefnyddio'r un system radiotelemetreg, trwy fonitro'r newidiadau yng nghryfder y signal o'r trawsddygiadur oherwydd ymsymudiad yr anifail. Yn yr achos hwn, cafodd trawsddygiaduron eu gosod yn llawfeddygol yn y gofod isgroenol yn yr ochr dde. Perfformiwyd recordiadau gyda'r un cyfnodau amser ag a ddisgrifiwyd uchod.

bodybuilding cistanche

Cyfeiriadau

1. Giles, TDCircadian rhythm ofpwysedd gwaeda'r berthynas â digwyddiadau cardiofasgwlaidd.J. Hypertens. 24, S11-S16 (2006).

2. Smolensky, MH, Portaluppi, F.& Hermida, RC i mewnPwysedd GwaedMonitro mewn Meddygaeth Gardiofasgwlaidd a Therapiwteg, 3ydd EDT.(golau Gwyn, WB) Rhan II, Ch.6, 105-128(Springer,2016).

3. Witteman, JCet al. Astudiaeth arfaethedig o ffactorau maethol a gorbwysedd ymhlith menywod yr Unol Daleithiau. Cylchrediad 80,1320-1327(1989).

4. Ascherio, A.et al. Astudiaeth arfaethedig o ffactorau maethol a gorbwysedd ymhlith dynion yr Unol Daleithiau. Cylchrediad 86,1475-1484(1992).

5. Ascherio, A.et al. Astudiaeth arfaethedig o ffactorau maeth,pwysedd gwaed, a gorbwysedd ymhlith merched yr Unol Daleithiau. Gorbwysedd 27,1065-1072(1996).

Nodyn:nid yw'r uchod yn rhestr gyfeirio lawn