Y Croen Dynol Yw Organ Fwyaf y Corff Dynol Ac Yn Amddiffyn Y Corff Rhag Tocsinau Amgylcheddol
Sep 05, 2022
Cysylltwchoscar.xiao@wecistanche.comam fwy o wybodaeth
Crynodeb:Yn ddiweddar, gan fod rôl gwrth-heneiddio melanin yn y croen ac ataliad cynhyrchu melanin wedi'i nodi, mae datblygu deunyddiau sy'n gallu cynnal homeostasis croen wedi bod yn denu sylw. Yn yr astudiaeth hon, fe wnaethom ymchwilio ymhellach i effaith gwrth-melanogenig dyfyniad pilosula Codonopsis (CPE) ac, o dan straen ocsideiddiol, yr effaith cytoprotective mewn Melan-a melanocytes sy'n agored i H2O2. Yn gyntaf, gostyngodd triniaeth CPE gynhyrchu melanin yn sylweddol trwy atal proteinau sy'n gysylltiedig â melanogenesis, gan gynnwys ffactor trawsgrifio sy'n gysylltiedig â microffthalmia (MITF), tyrosinase, a phrotein sy'n gysylltiedig â thyrosinase 2 (TRP 2), o ganlyniad i ffosfforyleiddiad MAPK / JNK yn Melan -a celloedd. Nesaf, i ymchwilio i effeithiau amddiffynnol y CPE ar anaf croen a achosir gan straen ocsideiddiol a'i fecanwaith moleciwlaidd, fe wnaethom bennu effaith CPE ar ôl achosi straen ocsideiddiol trwy amlygu melanocytes i H2O2. Roedd CPE yn diogelu celloedd rhag sytowenwyndra a achosir gan H2O drwy leihau mynegiant y genyn sy’n amgodio’r protein pro-apoptotig Bax, tra’i fod wedi achosi’r genynnau sy’n amgodio’r teulu lymffoma B-cell (Bcl2) a MITF, sy’n rheolydd trawsgrifiadol sy'n hyrwyddo gwahaniaethu melanocyte. At hynny, mae ein canlyniadau'n dangos bod CPE wedi gwella'r broses o gynhyrchu proteinau sy'n gysylltiedig ag awtophagi megis Beclin-1 a chadwyn ysgafn 3 (LC3)Ⅱ; cafodd hyn ei wrthdroi'n sylweddol gan ragdriniaeth 3-methyl adenine (MA, atalydd awtophagi). Gyda'i gilydd, mae ein canfyddiadau'n dangos bod triniaeth CPE nid yn unig yn arddangos effaith gwrth-melanogenig mewn melanocytes arferol ond hefyd effaith cytoprotective mewn melanocytes sy'n destun straen ocsideiddiol trwy ysgogi mynegiant awtoffagy a MITF.maint pidyn cistanche,Felly, credwn fod CPE yn ymgeisydd cryf ar gyfer cynnal a chadw celloedd mewn melanocytes.
Geiriau allweddol:Pilosula codonopsis; Celloedd melan-a; melanogenesis; awtoffagi; straen ocsideiddiol
1. Rhagymadrodd
Y croen dynol yw organ fwyaf y corff dynol ac mae'n amddiffyn y corff rhag tocsinau amgylcheddol, alergenau a straen ocsideiddiol. Mae'n hysbys bod melanin, sy'n cael ei gynhyrchu'n bennaf gan melanocytes, yn chwarae rhan bwysig wrth atal clefydau croen ac mae'n bresennol ym meinweoedd amrywiol y corff dynol [1,2]. Fodd bynnag, mae cynhyrchu a chroniad gormodol o rywogaethau ocsigen adweithiol (ROS) oherwydd straen, ymbelydredd uwchfioled (UV), a heneiddio yn arwain at lawer o anhwylderau croen, megis hyperpigmentation, melasma, ac yn y pen draw diraddio melanocytes. Mae nifer o astudiaethau ar drin melanogenesis wedi canolbwyntio ar reoleiddio mynegiant ffactor trawsgrifio sy'n gysylltiedig â microffthalmia (MITF) a gweithgaredd tyrosinase [3-5]. Yn ogystal, mae astudiaethau diweddar wedi dangos bod melanogenesis croen yn cael ei gyfryngu trwy sawl llwybr signalau melanogenig, gan gynnwys signalau kinase protein-activated mitogen (MAPK), protein kinase A (PKA), a llwybr cylchol adenosine monophosphate (cAMP) [6].
Gall Cistanche gwrth-heneiddio
Mae'r system autophagy cellog yn adnabyddus fel proses hunan-dreulio cellog sy'n diraddio proteinau sydd wedi'u difrodi neu'n ynysu organynnau camweithredol mewn cell ac yna'n eu dadelfennu mewn lysosomau i gynnal homeostasis celloedd [7,8]. Mae astudiaethau diweddar wedi nodi bod awtoffagi yn ymwneud â swyddogaeth arferol melanocytes ac mewn rheoleiddio mynegiant y ffactor trawsgrifio sy'n ffurfio melanin MITF. Felly, mae gan gyfryngau sy'n ysgogi awtoffagy y potensial i gyfyngu ar y difrod a achosir gan belydrau UV ac ocsidiad lipid ac i gynnal homeostasis mewn melanocytes a keratinocytes [9-11].powdr cistanche,Fodd bynnag, ychydig o wybodaeth sydd ar gymhwyso paratoadau naturiol sy'n achosi awtoffagi sy'n amddiffyn melanocytes rhag straen ocsideiddiol.
Codonopsis pilosula yw gwraidd Codonopsis pilosula (Fr.) Nanny., sy'n perthyn i'r teulu Campanula. Mae'n cael ei dyfu neu ei drin ym mynyddoedd Gangwon-do, Korea, ac mae hefyd wedi'i ddosbarthu yn rhanbarthau gogleddol a gorllewinol Tsieina, megis rhanbarthau Guanxi a Shanxi [12]. Mewn meddygaeth werin, fe'i defnyddiwyd yn lle ginseng ers cannoedd o flynyddoedd, gan fod ganddo'r un gweithgareddau ffarmacolegol, megis ailgyflenwi egni i gryfhau'r system imiwnedd, gostwng afiechydon gastroberfeddol, a rheoleiddio pwysedd gwaed, ond am bris is. Mae ymchwil ffytocemegol yn dangos bod C. pilosula yn cynnwys llawer iawn o swcros, polysacaridau, triterpenes, saponins, ffytosterolau, glycosidau ffenolig, alcaloidau, a polyacetylenes [13]. Yn eu plith, gwyddys bod lobetyolin, prif asetylen C. pilosula, yn actifadu NF-kB ac mae ganddo effaith ysgogol imiwn [14] Yn ogystal, yn ôl astudiaethau diweddar ar effaith dyfyniad C. pilosula, detholiad ethanol o Mae C. pilosula yn atal adweithiau alergaidd a achosir gan ovalbumin yn sylweddol, tra bod echdyniad dŵr yn gostwng lefel glwcos plasma, ac mae dyfyniad butanol yn dangos gweithgaredd chwilota radical rhad ac am ddim ac effaith ataliol ar berocsidiad lipid mewn homogenad ymennydd llygod mawr[15-17] .
Yn flaenorol, canfuwyd bod gweithgaredd gwrthocsidiol C.pildsula yn amrywio oherwydd gwahaniaethau mewn cynnwys polyphenol yn dibynnu ar y toddydd echdynnu a ddefnyddir [18]. Felly, fe wnaethom ymchwilio i effaith ataliol melanogenig dyfyniad C. pilosula (CPE) o dan amodau arferol trwy lwybrau signalau mecanistig, yn ogystal â'r effaith cytoprotective yn erbyn straen ocsideiddiol a achosir gan H2O mewn melanocytes Melan-a.
2. Defnyddiau a Dulliau
2.1.Adweithyddion
Prynwyd RPMI 1640 a serwm buchol ffetws (FBS) gan Welgene (Daegu, Korea).dyfyniad salsa cistanchePrynwyd penisilin-streptomycin gan GibcoBRL (Eggenstein, yr Almaen). Prynwyd Phorbol 12-myristate 13-asetad (TPA) o TOCRIS (Bryste, UK).Hydrogen perocsid (HaO2),3-(4,5-dimethylthiazol{{7}) }yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromid (MTT), 4',6-diamidino-2-phenylindole (DAPI), a 3-MA wedi'u prynu gan Sigma -Aldrich (St Louis, MO, UDA). Roedd yr holl gemegau ac adweithyddion eraill o radd ddadansoddol.
2.2.Paratoi Detholiad Pilosula Codonopsis
Cafodd y gwreiddyn C.pilosula (CP) ei dorri'n syml, a chafodd 100 go CP ei drochi mewn 1 Lof 50 y cant ethanol (w/v); yna, cafodd ei dynnu dair gwaith gan ddefnyddio tonnau ultrasonic ar 30 gradd. Ar ôl i bob echdyniad gael ei allgyrchu i gasglu'r uwchnatant, cafodd yr uwchnatant ei grynhoi a'i rewi-sychu i baratoi'r dyfyniad C.pilosula (CPE).
2.3. Diwylliant Cell a Pharatoi Stoc o CPE
Cafodd y celloedd melanocyte Melan-a eu tyfu a'u cynnal yn RPMI 1640 wedi'u hategu â 10 y cant FBS, penisilin (100 U/mL), streptomycin (100 U/mL), a 200 nM phorbol 12-myristate 13- asetad (TPA) a'i gynnal ar 37 gradd mewn deorydd CO2 5 y cant. Ar ôl meithrin celloedd 3 × 105 y ffynnon mewn plât chwe ffynnon, gosodwyd celloedd Melan-a mewn deorydd am 48 h nes i liw'r cyfrwng newid i ddu. Cafodd y toddiannau stoc (100mg/mL) o CPE eu toddi mewn dŵr di-haint a'u storio ar-20 gradd .
2.4.Mesur Hyfywedd Celloedd
Penderfynwyd ar hyfywedd celloedd CPE mewn celloedd Melan-a gan ddefnyddio assay colorimetrig MT a sytometreg llif. Cafodd y celloedd eu cynnal nes iddynt gyrraedd cydlifiad o 80 y cant mewn 96-platiau ffynnon ac yna eu trin â CPE a/neu 0.5 mMH2O2 am 24 h. Ychwanegwyd cyfrwng cell gyda 10 μL o hydoddiant MTT （5 mg / ml）, a deorwyd y celloedd am 4 awr ychwanegol. Ar ôl deori'r celloedd, diddymwyd y crisialau formazan anhydawdd mewn 100 uL o sulfoxide dimethyl. Mesurwyd yr amsugnedd ar 540 nm gan sbectrophotometreg gan ddefnyddio darllenydd microplate. Penderfynwyd ar gelloedd marw gyda phecyn canfod marwolaeth celloedd DP/Atodiad V (EMD Millipore Corporation, Billerica, MA, UDA) yn unol â phrotocol y gwneuthurwr. Yn fyr, cafodd y celloedd eu golchi a'u deor am 15 munud yn RT yn y tywyllwch yn cynnwys FITC-Atodiad V a PI. Wedi hynny, dadansoddwyd celloedd marw gan ddadansoddwr celloedd MuselM.
2.5.In Vitro Amcangyfrif Melanin
Tyfwyd tua 2×105 cell/ffynnon mewn plât chwe ffynnon. Ar ôl triniaeth gyda CPE a/neu 0.5 mM H-Op fel y disgrifiwyd yn flaenorol [19], cynaeafwyd celloedd wedi'u golchi â PBS, eu gosod mewn 1 × PBS yn cynnwys 1 y cant Triton X-100, a'u centrifugio ar 4 gradd yn 13, 000 rpm am 15 munud. Cafodd y cynnwys melanin cellog ei hydoddi gan ddefnyddio 1 N NaOH. Defnyddiwyd darllenydd plât ELISA i fesur y melanin trwy fesur yr amsugnedd ar 405 nm. Cafwyd data o dri arbrawf, a chyfrifwyd y cynnwys melanin a'i ddynodi fel y newid plyg o'i gymharu â'r celloedd rheoli. 2.6.Ynysu Protein a Western Blot Assay
Echdynnwyd samplau protein fel yr eglurwyd yn ein gwaith blaenorol [20]. Yna, mesurwyd crynodiad protein y lysate cell gan ddefnyddio pecyn profi protein BCA (Thermo Scientific, Waltham, MA, UDA). Gwahanwyd symiau cyfatebol o lysate cell dadnatureiddio (30 ugs o lysate cell fesul sampl) gan electrofforesis gel dodecyl sylffad-polyacrylamid 10 y cant (SDS-PAGE) a'i drosglwyddo i bilen nitrocellulose. Deorwyd y bilen gyda'r gwrthgorff cynradd wedi'i wanhau mewn powdr llaeth sgim 5 y cant mewn PBS yn cynnwys 0.05 y cant Tween 20(PBST) dros nos ar 4 gradd .
Yn dilyn deori gwrthgyrff cynradd, cafodd y pilenni eu golchi a'u deor yn yr gwrthgorff eilaidd cyfun HRP a wanhawyd mewn llaeth sgim 5 y cant yn PBST am 1 h ar dymheredd ystafell. Dadansoddwyd mynegiant protein gan ddefnyddio system canfod cemiluminescence gwell (ECL) (AI680, GE Healthcare, Uppsala, Sweden).
2.7.Amcangyfrif o ROS Mewngellol gan staenio DCFH-DA
Amcangyfrifwyd y lefelau ROS cellog yn y celloedd Melan-a a driniwyd gan Hoo gan ddull microsgopeg fflworoleuedd DCFH-DA [21]. Mae lefelau fflworoleuedd DCF mewngellol yn gymesur â'r ROS mewngellol a gynhyrchir. Yn gyntaf, cafodd celloedd 2 × 105/ffynnon eu trin â chrynodiadau unigol o CPE a/neu H-O2 am 24 h, yna ychwanegwyd DCFH2-DA 2 h cyn diwedd yr adwaith. Casglwyd data o dri arbrawf annibynnol neu fwy. 2.8.Prosesu Ystadegol
Cyflwynir yr holl ganlyniadau arbrofol fel y modd ± gwyriadau safonol (SDs) o dri atgynhyrchiad biolegol.coesyn cistancheAseswyd yr arwyddocâd ystadegol ymhlith y gwerthoedd cymedrig lluosog gan ddadansoddiad un ffordd o amrywiant (ANOVA), wedi'i ddilyn gan brawf aml-gymhariaeth Duncan, gan ddefnyddio SPSS 18.0(SPSS Inc., Chicago, IL, USA), fel y nodir yn y chwedlau. A p-gwerth<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">
3. Canlyniadau
3.1.Dirywiad Melanogenesis mewn Melanocytes gan CPE
Mae melanocytes yn syntheseiddio melanin mewn ymateb i ysgogiadau allanol, megis arbelydru UV. Mae ffactorau mawr fel hormon sy'n ysgogi a-melanocyte (-MSH), ffactor bôn-gelloedd (SCF), ac endothelin-1(ET-1) yn cael eu secretu o felanocytes ac yn cynyddu mynegiant MITF a thrwy hynny'n hybu melanogenesis [22,23]. Yn gyntaf, gwnaethom archwilio a oedd triniaeth CPE yn atal cynhyrchu melanin a phroteinau sy'n gysylltiedig â melanogenesis.
Roedd triniaeth CPE ar 100,200, a 300 ug/mL yn lleihau cynhyrchiant melanin yn sylweddol o'i gymharu â'r rheolaeth negyddol. Yn benodol, arweiniodd triniaeth gyda 300 ug/mL o CPE at ostyngiad tebyg i'r hyn a achoswyd gan driniaeth arbutin (Ffigur 1A, B). Yn ogystal, gwnaethom ymchwilio i'r proteinau melanogenesis tyrosinase, TRP-1, TRP{{6 }}, a MITF gan blotio Gorllewinol.manteision a sgîl-effeithiau cistanche tubulosaGostyngodd triniaeth â CPE mewn crynodiadau o 300 ug/mL lefelau'r proteinau MITF, TRP-2, a thyrosinase yn sylweddol (Ffigur 1C). Gan y cadarnhawyd bod CPE yn atal mynegiant proteinau sy'n gysylltiedig â MITF, gan atal ffurfio melanin, fe wnaethom archwilio ymhellach a oedd CPE yn effeithio ar lwybr signalau MAPK. Cynyddodd CPE ffosfforyleiddiad MAPK mewn modd dibynnol ar ddos, gan achosi ffosfforyleiddiad JNK yn benodol (Ffigur 1D). Mae'r canlyniadau hyn yn awgrymu bod yr ataliad melanogenesis gan CPE yn deillio o is-reoleiddio mynegiant MITF a thyrosinase trwy sefydlu ffosfforyleiddiad JNK / MAPK.
3.2.Effaith CPE ar H2O2-Marwolaeth Celloedd Anwythol mewn Melanocytes
Mae celloedd croen, megis keratinocytes a melanocytes, yn ymateb yn sensitif i ROS, megis hydrogen perocsid (HzOz) ac anion superoxide, i gynnal statws arferol. Fodd bynnag, gall anghydbwysedd yn y statws ocsidydd-gwrthocsidydd oherwydd ROS cellog gormodol arwain at gronni proteinau neu organynnau difrodi, gan arwain yn y pen draw at farwolaeth celloedd apoptotig [24,25]. Yn ddiweddar, adroddwyd bod melanin yn hyrwyddo heneiddio croen trwy ysgogi ffurfio melanin yn dibynnu ar amgylchedd allanol y croen, yn ogystal ag iechyd y croen yn cael ei gynnal trwy gadw cynnwys melanin mewngellol [26]. Felly, gwnaethom ymchwilio i effaith echdynnu CPE ar gelloedd sy'n destun straen ocsideiddiol trwy driniaeth H2O2. Dangosodd y celloedd a gafodd eu trin gan HzO ostyngiad o 32.8 y cant yn hyfywedd celloedd o gymharu â'r celloedd heb eu trin. Fodd bynnag, roedd triniaeth CPE yn lleihau'r ataliad ar hyfywedd celloedd mewn modd sy'n dibynnu ar grynodiad o dan driniaeth H-O2. Yn benodol, adferodd CPE ar 300 ug/mL hyfywedd celloedd i 91.9 y cant (Ffigur 2A). Yn ogystal, canfuwyd marwolaeth apoptotig y celloedd wedi'u trin CPE-a/neu H2O{2-drwy staenio dwbl ag Annexin V- FITC/PI, wedi'i ddilyn gan ddadansoddiad cytometrig llif. Yn dilyn triniaeth H2O2, cynyddodd canran y celloedd apoptotig i 34.5 y cant, o'i gymharu â 14.8 y cant yn y celloedd heb eu trin. Fodd bynnag, roedd triniaeth CPE yn atal marwolaeth apoptotig a achosir gan H2O yn sylweddol, gyda chanran celloedd lliw V Atodiadin yn 22.2 y cant (Ffigur 2B). Gan fod hyn yn dangos yr un patrwm â chynnwys ROS, mae'r canlyniadau hyn yn dangos bod CPE yn cynnal hyfywedd celloedd trwy atal marwolaeth celloedd trwy amddiffyn rhag ROS a achosir gan H2O (Ffigur 2C).
3.3.Effaith CPE ar HZO2-Marwolaeth Celloedd Anwythol mewn Melanocytes
Fel y cadarnhawyd yn flaenorol, mae CPE yn cynnal hyfywedd celloedd trwy atal y cynnydd mewn apoptosis yn dilyn triniaeth HzO2. Felly, gwnaethom ymchwilio nesaf i effaith CPE ar fynegiant y proteinau sy'n gysylltiedig â marwolaeth celloedd a'r protein MITF, sy'n rheoleiddio cynhyrchu melanin ym mhresenoldeb H2O2. Fel y dangosir yn Ffigur 3, yn y celloedd a gafodd eu trin â H2O2, gostyngwyd mynegiant MITF ychydig, ar y llaw arall, yn y celloedd a gafodd eu trin â CPE, ac roedd mynegiant MITF bron yr un fath ag yn y celloedd heb eu trin. Yn ogystal, cynyddodd H2O2 fynegiant y protein Bax sy'n achosi apoptosis [27,28] ond gostyngodd mynegiant Bax mewn modd sy'n dibynnu ar ganolbwyntio mewn celloedd a driniwyd gan CPE. Mewn cyferbyniad, gostyngodd H202 fynegiant y protein Bcl2, sy'n hyrwyddo goroesiad celloedd [28,29], ond cynyddwyd mynegiant Bel2 gan driniaeth CPE mewn modd sy'n dibynnu ar ganolbwyntio. Pan wnaethom gyfrifo mynegiant y ddau brotein hyn i bennu'r gymhareb Bax/Bcl2, gwelwyd yr un duedd. Felly, o dan straen ocsideiddiol a achosir gan H2O, lleihawyd mynegiant MITF gan anwythiad marwolaeth celloedd, tra dangosodd CPE effaith amddiffynnol gref, gan atal marwolaeth celloedd a achosir gan H2Oz a chynnal mynegiant MITF.
3.4. Effaith CPE ar Ysgogi Awtophagi mewn Melanosytau a Achosir gan Ocsidiad a Achosir gan Straen
Mae astudiaethau diweddar wedi datgelu bod autophagy a'i rheolydd yn chwarae rhan hanfodol yn yr ymateb gwrthocsidiol yn erbyn straen ocsideiddiol a achosir gan ROS mewn celloedd dynol [26,30]. Feng et al.[31] dangos bod echdyniad dail Apocymum venetum yn amddiffyn niwronau anafedig rhag apoptosis a achosir gan H2O trwy leihau actifadu awtophagi a achosir gan ROS. Ers sefydlu'r cysylltiad rhwng modiwleiddio autophagy a gwrth-melanogenesis, ymchwiliwyd i rôl awtophag yn effaith amddiffynnol CPE yn erbyn straen ocsideiddiol a achosir gan H-Oz yng nghelloedd Melan-a. Defnyddiwyd lefelau LC3, sef protein awtoffagosom, fel dangosydd awtophagi. Roedd data blot y Gorllewin yn nodi bod CPE wedi uwchreoleiddio mynegiant y proteinau pro-awtophagic LC3-Ⅱ a Beclin yn sylweddol, y gostyngwyd eu mynegiant gan driniaeth H2O2. Mae hyn yn awgrymu bod CPE yn cael effaith sytoprotective trwy orchymyn actifadu awtoffagy straen ocsideiddiol mewngellol (Ffigur 4A). Nesaf, dadansoddwyd y rhyngberthynas rhwng effaith sytoprotective ac awtophag CPE mewn celloedd Melan-a a driniwyd â HzOz ymhellach gan ddefnyddio atalydd awtoffagic cryf,{3-MA. O gymharu â data blaenorol, dangosodd celloedd a oedd wedi rhag-drin â 3-MA a CPE ac wedi'u hysgogi â H2O2 lefelau mynegiant LC3-II is (Ffigur 4B). Yn gyffredinol, mae'r data hyn yn awgrymu bod atal awtoffagi yn effeithio'n negyddol ar effeithiolrwydd sytoprotective CPE mewn celloedd wedi'u trin â HZO, sy'n dangos bod awtoffagi yn hanfodol ar gyfer effeithiau sytoprotective CPE.
4. Trafodaeth
Yn flaenorol, fe wnaethom sefydlu'r dull echdynnu gorau posibl gan arwain at y gweithgaredd gwrthocsidiol uchaf yn ogystal â chynnwys polyphenol [18]. Yn yr astudiaeth hon, fe wnaethom gymhwyso'r dull echdynnu ultrasonic cynnyrch uchel a chanfod bod y dyfyniad yn arddangos effaith cytoprotective trwy actifadu awtoffagi o dan amodau straen ocsideiddiol, yn ogystal â thrwy atal melanogenesis mewn celloedd Melan-a.
Yn gyntaf, gwnaethom ymchwilio ymhellach i effaith gwrth-melanogenig melanogenesis is-reoledig CPE.CPE trwy leihau mynegiant genynnau sy'n gysylltiedig â melanogenesis, megis MITF, tyrosinase, a TRP-2. Mae sawl astudiaeth wedi dangos bod mecanweithiau biosynthetig melanogenesis sy'n gysylltiedig â mynegiant ensymau yn cael eu cyfryngu gan wahanol lwybrau signalau, gan gynnwys protein kinase a weithredir gan mitogen (MAPK), protein kinase A (PKA), a PI3K / Akt [32]. Yn eu plith, mae actifadu llwybr signalau MAPK yn atal MITF ar y lefel sefydlogrwydd protein, yn ogystal â'r lefel drawsgrifiadol, mewn melanocytes cynradd dynol [33,34]. Mae ffosfforyleiddiad MAPK a rhaeadrau signalau'r kinase ymatebol allgellog (ERK), c-Jun N-terminal kinase (JNK), a p38 hefyd yn rheoleiddio cynhyrchu melanin. Yn eu plith, mae'r actifydd JNK yn atal melanogenesis trwy ataliad ffosffo o gydweithredolydd trawsgrifio a reoleiddir gan CREB 3 (CRTC3) sy'n dibynnu ar fynegiant MITF [35,36]. Mae ein canlyniadau'n dangos bod ffosfforyleiddiad MAPK, yn enwedig JNK, yn cynyddu i bob pwrpas yn dilyn triniaeth CPE o'i gymharu â chelloedd rheoli. Mae'r canfyddiadau hyn yn awgrymu y gall dadbigmentu a achosir gan CPE mewn melanocytes Melan-a ddigwydd trwy lwybrau signalau a reoleiddir gan MITF / JNK.
Mae melanocytes yn cynhyrchu'r pigment melanin a'i drosglwyddo i keratinocytes, lle mae'r pigmentau'n helpu i amddiffyn y croen rhag straenwyr amgylcheddol ocsideiddiol megis llygryddion aer, cynhyrchion cemegol, a difrod UV [37-39]. Mae MITF yn un o'r prif reoleiddwyr trawsgrifio sy'n gyfrifol am enynnau allweddol sy'n hyrwyddo datblygiad a gwahaniaethu melanocyte, yn ogystal â rheoleiddio melanogenesis. Ar ben hynny, mae MITF yn rheoleiddio mynegiant rhai genynnau sy'n cynnal homeostasis celloedd, gan gynnwys y rhai sy'n amgodio'r proteinau sy'n ymwneud ag amlhau (ee, CDK2) ac apoptosis (ee, Bcl2)[40-42]. Nododd Stein-Grimson et al.[43]llygod mutant MITF fel rhai yr effeithiwyd arnynt gan golled clyw ac aflonyddwch pigmentaidd o ganlyniad i golli melanocytes, yn ogystal ag osteoclastau a chelloedd mast diffygiol. Mae hyn yn awgrymu bod MITF yn chwarae rhan bwysig yn natblygiad y mathau hyn o gelloedd.
Mae CPE yn deillio o feddyginiaethau llysieuol a ddefnyddir i drin clefydau gastroberfeddol ac alergaidd oherwydd ei effeithiau gwrth-heneiddio a gwrth-alergaidd[15,44]. Fodd bynnag, ni wyddys a all CPE amddiffyn melanocytes rhag straen ocsideiddiol. I amcangyfrif effaith CPE ar oroesiad melanocyte mewn ymateb i straen ocsideiddiol, gwelsom farwolaeth celloedd yn gyntaf yn y melanocytes sy'n agored i H-O2. Yn dilyn triniaeth gyda 0.5 mM H-O2 am 24 h, lleihawyd hyfywedd celloedd o'i gymharu â'r celloedd heb eu trin. Fodd bynnag, adferwyd hyfywedd y celloedd a driniwyd gan CPE trwy leihau'r cynnwys ROS; yna cynyddwyd y gymhareb Bax/Bcl2 a mynegiant MITF, yn wahanol i'r celloedd H2O a gafodd eu trin.
Autophagy yw'r brif system ddiraddio mewngellol lle mae difrod i lysosomau yn arwain at eu diraddio. Mae Mizushima et al. [45] dangos, o dan amodau newyn, llid, neu straen ocsideiddiol, y gall y broses awtoffagic reoleiddio diraddio proteinau ac organynnau difrodi mewn celloedd, fel y gellir cyflawni adnewyddu cellog a homeostasis. Mae protein sy'n gysylltiedig â microtiwb 1 cadwyn ysgafn 3 (LC3) a Beclin-1 yn chwarae rhan fawr mewn awtophagi mamaliaid. Mae LC3 yn bodoli mewn dwy ffurf, sef, ffurf sytosolig (LC3 I) a ffurf lipid ffosffatidylethanolamine-gyfunol (LC3 III) sy'n cael ei fewnosod ym mhennau mewnol ac allanol yr awtopagosom cynyddol[46,47]Zhang et al.[1] 48] defnyddio trawsnewid LC3Ito LC3II fel marciwr biocemegol i ddadansoddi statws autophagy mewn melanocytes. Dangosodd ymchwil bellach fod LC3 yn arwydd o ffurfiad awtoffagosom terfynol, tra bod Beclin-l yn cymryd rhan yn y cam cychwynnol o ffurfio autophagosome, gan actifadu awtophagi [49]. Mae'r gweithgaredd awtophagig cyfansoddol yn chwarae rhan allweddol wrth atal difrod ocsideiddiol mewn melanocytes, ond ychydig o astudiaethau a fu ar y mecanweithiau moleciwlaidd sy'n rheoleiddio awtoffagi mewn melanocytes o dan straen ocsideiddiol.
O ganlyniad, buom yn ymchwilio i oblygiad awtophagi wedi'i gyfryngu gan CPE ar gyfer goroesiad celloedd mewn melanocytes sy'n destun straen ocsideiddiol. Mae ein canlyniadau'n dangos, ar ôl triniaeth CPE, bod awtophagi wedi'i actifadu trwy fynegiant cynyddol Beclin-1 a throsi anwythol o LC3Ito LC3 II. Mae hyn yn awgrymu bod CPE yn cael effaith sytoprotective trwy actifadu awtoffagy mewn melanocytes sy'n destun straen ocsideiddiol.
I gloi, dangosodd yr astudiaeth bresennol fod triniaeth CPE nid yn unig yn cael effaith gwrth-melanogenig trwy'r llwybr MITF / JNK mewn melanocytes arferol ond hefyd, o dan straen ocsideiddiol a achosir gan HzOg, yn cynnal goroesiad celloedd ac yn rhoi cytoprotection trwy MITF, gan arwain at actifadu parhaus. o autophagy yng nghelloedd Melan-a.
Daw'r erthygl hon o Cosmetics 2021, 8, 67. https://doi.org/10.3390/cosmetics8030067 https://www.mdpi.com/journal/cosmetics
