Effaith Ataliol Deilliad Curcumin J147 Ar Gludiant Melanogenesis A Melanosome Trwy Hwyluso Diraddio MITF Wedi'i Ganoli ar ERK Rhan 1

Mae'r defnydd therapiwtig o curcumin a curcumin a addaswyd yn gemegol (CMC) ar gyfer atal gweithgaredd melanogenesis a tyrosinase wedi'u cydnabod. Mae J147 yn fersiwn wedi'i addasu o curcumin gyda bio-argaeledd a sefydlogrwydd gwell. Fodd bynnag, nid oes unrhyw adroddiad am effeithiau J147 ar bigmentiad in vitro ac in vivo. Yn ein hastudiaethau, fe wnaethom ymchwilio i effeithiau hypo pigmentary triniaeth J147 ar felanocytes ac archwilio'r mecanwaith sylfaenol. Awgrymodd yr astudiaethau presennol fod J147 yn atal melanogenesis gwaelodol a -MSH a achosir, yn ogystal â lleihau estyniad dendrite melanocyte a chludiant melanosom. Chwaraeodd J147 y rolau hyn yn bennaf trwy actifadu'r llwybr kinase protein allgellog a reoleiddir gan signal (ERK). Ar ôl ei actifadu, arweiniodd at ddiraddiad MITF a bu'n is-reoleiddio ymhellach y mynegiant o tyrosinase, TRP-1, TRP-2, Myosin Va, Rab27a, a Cdc42, gan atal synthesis melanin a chludiant melanomaidd yn y pen draw. At hynny, dangoswyd effeithiau hypo pigmentary J147 mewn vivo mewn model pysgod sebra a model hyperbigmentation a achosir gan UVB mewn moch cwta brown. Roedd ein canfyddiadau hefyd yn awgrymu nad oedd gan J147 unrhyw sytowenwyndra in vitro ac in vivo. Gyda'i gilydd, cadarnhaodd y data hyn y gallai J147 fod yn eithaf defnyddiol fel cyfrwng gwynu croen naturiol mwy diogel.

Cistanchehefyd y swyddogaeth ohyrwyddo cynhyrchu colagen, a all gynyddu elastigedd a llewyrch y croen a helpu i atgyweirio celloedd croen sydd wedi'u difrodi. CistancheGlycosidau ffenylethanolcael effaith is-reoleiddio sylweddol artyrosinasegweithgaredd, a dangosir bod yr effaith ar tyrosinase yn ataliad cystadleuol a gwrthdroadwy, a all ddarparu sail wyddonol ar gyfer datblygu a defnyddio'rcynhwysion gwynnuyn Cistanche. Felly, mae gan cistanche rôl allweddol mewn gwynnu croen. Gallatal cynhyrchu melanini leihau afliwiad a diflastod; a hyrwyddo cynhyrchu colagen igwella hydwythedd croena llacharedd. Oherwydd y gydnabyddiaeth eang o'r effeithiau hyn o cistanche, mae llawergwynnu croenmae cynhyrchion wedi dechrau trwytho cynhwysion llysieuol fel Cistanche i gwrdd â galw defnyddwyr, gan gynyddu gwerth masnachol Cistanche mewn cynhyrchion gwynnu croen. I grynhoi, mae rôl cistanche mewn gwynnu croen yn hollbwysig. Gall ei effaith gwrthocsidiol a'i effaith cynhyrchu colagen leihau afliwiad a diflastod, gwella hydwythedd croen a llewyrch, a thrwy hynny gyflawni effaith gwynnu. Hefyd, mae cymhwysiad eang Cistanche mewn cynhyrchion gwynnu croen yn dangos na ellir diystyru ei rôl mewn gwerth masnachol.

Geiriau allweddol: J147, effeithiau hypo pigmentary, cludiant melanosom, llwybr ERK, diraddio MITF

Cliciwch ar Cistanche Tubulosa ar gyfer Whitening

Am ragor o wybodaeth: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

RHAGARWEINIAD

Mae pigmentiad croen yn dibynnu ar synthesis a dosbarthiad melanin yn haen yr epidermis. Cynhyrchir melanin yn bennaf o amgylch cnewyllyn melanocytes a'i storio mewn melanosomau (Tian et al., 2021). Ar ôl aeddfedu, mudodd melanosomau ar hyd microtubules a ffilamentau actin i flaenau dendrite y celloedd ac yn olaf i'r keratinocytes cyfagos i orffen y broses ddosbarthu (Beaumont et al., 2011; Ohbayashi a Fukuda, 2012). O dan statws ffisiolegol arferol, mae melanin yn amddiffyn croen dynol rhag difrod uwchfioled (UV), cemegau gwenwynig, a ffactorau amgylcheddol eraill (Slominski et al., 2004; Yousaf et al., 2020). Fodd bynnag, mae cynhyrchu a chronni gormodol yn achosi hyperbigmentation ac yn gysylltiedig ag anhwylderau croen fel melanoderma ôl-lid, melasma, a lentiginau solar, gan arwain at faich seicogymdeithasol rhyfeddol (Pillaiyar et al., 2017). Felly, mae angen datblygu cyfryngau gwynnu croen effeithiol a diogel.

Yn ystod y blynyddoedd diwethaf, mae bioleg celloedd melanin wedi dod yn faes ymchwil ehangach ac mae nifer o broteinau pwysig sy'n cyfrannu at felanogenesis a chludiant melanin wedi'u hegluro, gan dalu'r ffordd ar gyfer nodi atalyddion synthesis melanin. Mae tyrosinase yn gwbl angenrheidiol ar gyfer melanogenesis ac atal gweithredu catalytig tyrosinase yw'r dull mwyaf cyffredin o leihau cynhyrchiant melanin (D'Mello et al., 2016). Mae nifer o atalyddion tyrosinase hysbys, gan gynnwys arbutin ac asid kojic, eisoes wedi'u datblygu fel ychwanegion cosmetig (Ding et al., 2020). Mae cyfadeilad KIF5b a Rab27A-Melanophilin-Myosin Va yn cyfrannu at y cludiant melanosom allanol (Ohbayashi a Fukuda, 2012; Noguchi et al., 2014). Mae Cdc42 yn rheoleiddio ehangiad dendrit, sy'n hanfodol ar gyfer trosglwyddo melanosom (Luo, 2000). Gallai atal y proteinau uchod hyn atal cludiant melanosom yn sylweddol, sy'n fecanwaith pwysig ar gyfer datblygu cyfryngau gwynnu croen. Mae ffactor trawsgrifio sy'n gysylltiedig â microffthalmia (MITF) yn brif ffactor trawsgrifio mewn melanogenesis. Yn ogystal, mae MITF hefyd yn rheoleiddio cludiant melanosom trwy ysgogi mynegiant Rab27a a Cdc42 (Noguchi et al., 2016). Mae llwybrau signalau lluosog yn cymryd rhan mewn pigmentiad trwy reoleiddio lefel mynegiant MITF. Mae actifadu protein cAMP kinase A (PKA) yn ysgogi pigmentiad trwy elfen ymateb cAMP sy'n rhwymo protein (CREB) i ddadreoleiddio mynegiant MITF yn ddibynnol (Rodríguez a Setaluri, 2014). I'r gwrthwyneb, mae actifadu kinase protein allgellog a reoleiddir gan signal (ERK) yn atal melanogenesis trwy gyflymu diraddiad MITF (Lv et al., 2020a). Mae nifer o asiantau gwrth-melanogenig wedi'u datblygu sy'n targedu gweithgaredd tyrosinase, trosglwyddiad melanosom, neu lwybrau signalau sy'n gysylltiedig â melanogenig. Fodd bynnag, ychydig o atalyddion a gafodd astudiaethau in vivo a dangosodd canlyniadau da (Pillaiyar et al., 2017).

Cyfansoddyn diarylheptanoid yw Curcumin sydd wedi'i ynysu o risom Curcuma longa (Zingiberaceae) ac a ddefnyddir fel blas melyn neu bigment mewn bwydydd (Zheng J. et al., 2018). Mae astudiaethau wedi nodi ei swyddogaethau ffisiolegol amrywiol, gan gynnwys gweithgareddau gwrthlidiol, gwrth-ocsidiol, gwrth-amyloid a gwrth-tiwmor (Liu et al., 2016; Zheng Y. et al., 2018). Ar wahân i'r rhain, mae curcumin yn atal gweithgaredd tyrosinase ac yn atal melanogenesis mewn melanocytes (Lee et al., 2010; Tu et al., 2012). Ond, mae bio-argaeledd gwael curcumin yn cyfyngu ar ei gymhwysiad (Karthikeyan et al., 2020). Er mwyn datrys y broblem hon, mae J147 yn cael ei ddatblygu fel cyfansoddyn cryf o ddeilliad curcumin gyda mwy o sefydlogrwydd a bio-argaeledd (Li et al., 2020). Mae gan J147 effaith niwro-amddiffynnol ac ar hyn o bryd mae mewn treialon clinigol cam I ar gyfer clefyd Alzheimer. Fodd bynnag, nid oes adroddiad o hyd am effeithiau J147 ar bigmentiad in vitro ac in vivo.

DEUNYDDIAU A DULLIAU

Adweithyddion

Cafwyd J147 (J302241), -MSH (M118985), a tyrosinase o fadarch (T128536) gan Aladdin (Shanghai, Tsieina). Cawsom wrthgyrff yn erbyn Myosin Va (sc-365986), KIF5b (sc-133184), GP100 (sc-393094), Cdc42 (sc-8401), Rab27a (sc{{{). 13}}), p-JNK (sc-6254), JNK (sc-7345), p-p38 MAPK (sc-166182) a t38 MAPK (sc-398546) o Santa Cruz (CA, UDA). Cafwyd y gwrthgyrff yn erbyn MITF (97800), p-MEK (2338), MEK (4694), p-ERK (4370), ac ERK (4695) gan Cell Signaling Technology (MA, UDA). Cafwyd y gwrthgyrff yn erbyn tyrosinase (ab180753), TRP-1 (ab235447), TRP-2 (ab221144), cytoceratin (ab7753), ac S100 (ab133519) gan Abcam (Caergrawnt, DU). atalydd p38 SB203580 (S1863), atalydd ERK PD98059 (S1805), pecyn assay protein BCA (P0012), byffer lysis cell (P0013), a -actin (AF5001) gan Beyotime (Shanghai, Tsieina). Prynwyd citiau RT-qPCR (RR036A) gan Takara Biomedical Technology (Beijing, Tsieina).

Diwylliant Cell

Assay MTT

Archwiliwyd hyfywedd celloedd gan MTT assay (Yun et al., 2020). Yn gryno, cafodd y celloedd eu hadu mewn 96-blatiau ffynnon a'u trin â J147 (1–8 μM) am 48 h. Yna, golchwyd y celloedd â PBS a'u disodli â datrysiad MTT (20 μL). Ar ôl deori am 4 awr ychwanegol, tynnwyd y toddiant uwchnatur ac ychwanegwyd DMSO (200 μL) at bob ffynnon. Yn olaf, penderfynwyd ar yr amsugnedd optegol ar 570 nm.

Mesur Cynnwys Melanin

Cafodd celloedd â dwysedd o 2 × 105 o gelloedd/mL eu hadu mewn 6-blatiau meithrin ffynnon. Ar ôl deori 24 h, cafodd celloedd eu meithrin â dosau gwahanol o J147 (1, 2, 4 μM) a chyda neu heb ysgogiad -MSH (60 nM). Ar ôl triniaeth 48 h, cynaeafwyd celloedd a diddymwyd cyfanswm y melanin yn y belen gell mewn 100 μL o hydoddiant gweithio NaOH (1 mol / L, 10 y cant DMSO) ar 80 gradd C am 1 h, a mesurwyd yr amsugnedd ar 405 nm (Lv et al., 2015; Lv et al., 2019).

Assay Gweithgaredd Tyrosinase

Archwiliwyd gweithgaredd tyrosinase cellog fel y disgrifiwyd yn flaenorol (Liao et al., 2017; Lv et al., 2020a). Yn gryno, cafodd celloedd eu lysed gan glustog lysis cell ar ôl golchi dair gwaith, ac yna cafwyd y supernatant ar gyfer assay gweithgaredd tyrosinase trwy allgyrchu'r lysates. 100 μL PBS (0.1M, pH 6.5) cynnwys 10 ug proteinau cymysg gyda 100 μL 0.1 y cant L-DOPA. Deorwyd y plât ar 37 gradd am 1 h, ac yna cafodd amsugnedd optegol ar 475 nm ei fonitro.

Profwyd effaith uniongyrchol J147 ar weithgaredd tyrosinase gan system ddi-gell fel y disgrifiwyd yn flaenorol (Lv et al., 2020a). Yn gryno, cynhaliwyd yr adwaith ar gyfer pennu gweithgaredd tyrosinase madarch mewn plât ffynnon 96- ac roedd cymysgedd yr adwaith yn cynnwys tyrosinase madarch (10 uned), L-tyrosine (0.03 y cant, 50 μL), a 100 μL PBS (0.1 M, pH 6.5) adio gyda chrynodiadau gwahanol o J147. Yn dilyn deori ar 37 gradd am 10 munud, mesurwyd amsugnedd ar 475 nm gan ddefnyddio sbectrophotometer microplate.

Masson-Fontana Lliw Amoniacal Arian

I ganfod pigment melanin, cafodd darnau croen, a melanocytes eu gosod mewn fformalin a'u staenio yn dilyn y protocol safonol (Gu et al., 2018; Lv et al., 2020b). Yn gryno, golchwyd sleidiau 3 gwaith gyda dŵr wedi'i ddad-ïoneiddio ac yna cawsant eu deor mewn hydoddiant arian amonia ar dymheredd ystafell am 12 h. Ar ôl rinsio'n dda mewn dŵr deionized, cafodd y sleidiau eu deori mewn hydoddiant hypo am 5 munud. Nesaf, cafodd y sleidiau eu rinsio eto a'u gwrth-staenio â staen coch niwtral am 5 munud arall. Yn olaf, yn dilyn rinsio trylwyr, gwelwyd sleidiau o dan ficrosgop Nikon-Eclipse-Ti.

Immunofluorescence ar gyfer Trosglwyddo Melanosome

Sefydlwyd system coculture celloedd B16F10 a HaCaT ar y ddysgl confocal, fel y disgrifiwyd yn flaenorol (Lee et al., 2015; Lv et al., 2020c). Ar ôl y driniaeth J147, cafodd y celloedd eu himiwneiddio â gwrth-GP100 a gwrth-Cytokeratin yn unol â'r protocol safonol. Cymerwyd delweddau o ficrosgop Nikon-Eclipse-Ti.

Imiwnohistocemeg ar gyfer S-100

Perfformiwyd imiwnohistocemeg ar gyfer S-100 fel y disgrifiwyd yn flaenorol (Lee et al., 2013; Lv et al., 2020b). Roedd disgrifiad byr fel a ganlyn: rhwystrwyd sleidiau gyda 5 y cant o BSA ar 25 gradd C am 1 awr ac yna cawsant eu deor â gwrthgorff cynradd gwrth-S-100 ar 4 gradd C dros nos. Y diwrnod wedyn, golchwyd sleidiau 3 gwaith gyda hydoddiant TBST a'u deor gyda'r gwrthgorff eilaidd. Yna, cafodd sleidiau eu trin ag aminoethyl carbazole i ddatblygu'r adrannau ac fe'u gwelwyd o dan ficrosgop.

Trawsgrifiad Gwrthdro - PCR

Echdynnwyd cyfanswm RNA cellog gan adweithydd TRIzol a'i feintioli'n sbectroffotometrig. Yna, defnyddiwyd SuperScript II Reverse Transcriptase i syntheseiddio un llinyncDNA yn dilyn y cyfarwyddiadau gweithgynhyrchu.Prynwyd paent preimio oligonucleotid o GenScript(Nanjing, Tsieina). Mae dilyniannau oMITFpreimwyr genyn yw 5′- AGAGCAGGGCAGAGAGTGAGTG -3′, 5′-AACTTGATTCCAGGCTGATGATGTC -3′. Mae dilyniannau oGAPDHgenynpaent preimio yw 5′- AGGTCGGTGTGAACGGATTTG-3′, 5′- TGTAGACCATGTAGTTGAGGTCA -3′. Roedd cynhyrchion PCRwedi'i wahanu gan electrofforesis ar geliau agarose 1 y cant a'u canfodo dan olau uwchfioled (Lee et al., 2013).

Blotio Gorllewinol

Gwahanwyd proteinau (40 ug) gan geliau SDS-PAGE a'u trosglwyddo i bilenni hidlo nitrocellulose (NC) gan system drosglwyddo electrofforetig (Bio-Rad). Cafodd pilenni'r CC eu rhwystro gyda 3 y cant BSA mewn datrysiad TBST ar dymheredd ystafell am 1.5 h. Yna deorwyd pilenni â gwrthgyrff cynradd ar 4 gradd dros nos. Y diwrnod wedyn, golchwyd y blots 3 gwaith gyda hydoddiant TBST ac yna eu deor â gwrthgyrff eilaidd peroxidase-cyfun ar 25 gradd am 1 h, a'u delweddu trwy ddefnyddio cemiluminescence gwell (Lv et al., 2020d).

Pennu Cynnwys Melanin mewn Model Sebrafish

Yn gryno, casglwyd embryonau wedi'u cydamseru a'u gosod gyda phibed (tri i bedwar embryon fesul ffynnon gyda chyfrwng embryo 200 μL mewn 96-blatiau ffynnon). Yna, diddymwyd J147 a PTU yn 0.1 y cant DMSO ac fe'u hychwanegwyd at y cyfrwng embryo o 35 i 60 h (amlygiad 25 h). Gwelwyd dylanwad J147 ar melanogenesis zebrafish o dan y stereomicrosgop (Zheng J. et al., 2018).

Gwerthusiad Seiliedig ar Ffenoteip a Model Moch Gini Gorbigmentation a Achosir gan UVB

Prynwyd 8 mochyn cwta brown (6 wythnos, tua 250-300 g) gan y Sefydliad Labordy Gwyddor Anifeiliaid (Beijing, Tsieina). Roedd y moch cwta hyn yn cael eu cadw ar eu pen eu hunain mewn ystafell tymheredd a lleithder cyson o dan gylchred golau/tywyll 12-h. Roedd yr ardaloedd ar wahân (cylch diametrig 1 cm) o gefn pob anifail yn agored i 500 mJ / cm2 UVB (Sigma SH-4, Shanghai, China) unwaith y dydd am 1 wythnos i sefydlu'r model hyperpigmentation. Yna rhoddwyd y cerbyd (PEG400/EtOH=7:3) a J147 (1 y cant) i'r ardaloedd hyperpigmented (hydoddiant 20 μL fesul cylch) ddwywaith y dydd am 3 wythnos. Gwerthuswyd graddau'r pigmentiad trwy gyfrifo'r gwerth ΔL yn ôl y gwerth L a fesurwyd gan y sbectroffotomedr (YS3010, 3nh, Shenzhen, Tsieina), fel a ganlyn: ΔL=L (pob dydd wedi'i fesur) -L (ar ddiwrnod 0) (Lee et al., 2013; Lv et al., 2020b). Cymeradwywyd yr holl weithdrefnau anifeiliaid yn yr astudiaeth hon gan bwyllgor gofal a defnydd anifeiliaid Prifysgol Changzhou.

Dadansoddiad Ystadegol

CANLYNIADAU

J147 Gostyngiad mewn Melanogenesis a Nifer y Dendritau O fewn Celloedd B16F10

Dangosir strwythur J147 yn Ffigur 1A. Yn gyntaf, cynhaliwyd arbrawf hyfywedd celloedd i ymchwilio i weld a oedd J147 yn sytotocsig i gelloedd B16F10. Fel y dangosir yn Ffigur 1B, ni welwyd unrhyw effeithiau sytotocsig J147 ar ystod dosio o 1-8 μM ar ôl 48 h. Yna, archwiliwyd dylanwad J147 ar synthesis melanin. Fel y dangosir yn Ffigur 1C, roedd J147 yn atal synthesis melanin gwaelodol. -MSH yn hyrwyddo melanogenesis yn sylweddol mewn melanocytes. Cafodd y cynnydd mewn melanogenesis a achoswyd gan -MSH ei wrthdroi ar ôl triniaeth J147. Yn gyson, dangosodd staenio arian amoniacal Masson-Fontana fod J147 wedi lleihau'n sylweddol y cynnwys melanin mewn celloedd B16F10 gyda neu heb -MSH (Ffigur 1D). Yn ogystal, gostyngodd nifer a hyd y dendritau a'r crynodiad melanin mewn dendritau o'u cymharu â chelloedd heb eu trin (Ffigur 1D). Awgrymodd y canlyniadau fod J147 wedi lleihau melanogenesis a ffurfiant dendrit heb effeithiau sytotocsig.

J147 Wedi atal Gweithgaredd Cellog Tyrosinase a Mynegiant Tyrosinase, TRP-1, TRP-2

Cymerodd y teulu tyrosinase o broteinau (tyrosinase, TRP-1, a TRP-2) ran mewn melanogenesis. Ymhlith y rhain, mae tyrosinases yn ensymau allweddol sy'n rheoleiddio'r llwybr biosynthetig melanin (D'Mello et al., 2016). Er mwyn penderfynu a yw J147 yn dylanwadu ar weithgaredd tyrosinase, fe wnaethom ddefnyddio'r dull ocsideiddio L-DOPA yn gyntaf i bennu effeithiau J147 ar weithgaredd tyrosinase cellog. Dangoswyd bod J147 (1-4 μM) yn cael effeithiau ataliol dwys ar weithgaredd tyrosinase cellog mewn modd dos-ddibynnol mewn celloedd B16F10 (Ffigur 2A). Nesaf, perfformiwyd assay gweithgaredd tyrosinase madarch i bennu effeithiau uniongyrchol J147 ar weithgaredd tyrosinase. Fel y dangosir yn Ffigur 2B, ni welwyd unrhyw effeithiau ataliol, sy'n dangos nad oedd J147 yn dylanwadu ar weithgareddau enzymatig tyrosinase madarch (Ffigur 2B). Fel y gwyddom, mae melanogenesis yn cael ei reoli gan weithgaredd a symiau'r tyrosinases hynny. Er mwyn ymchwilio a yw effeithiau gwrth-melanogenig J147 yn cydberthyn â mynegiant tyrosinase, cynhaliwyd dadansoddiad blot gorllewinol. Fel y dangosir yn Ffigur 2C, gostyngwyd lefelau mynegiant tyrosinase yn sylweddol ar ôl triniaeth J147 gyda neu heb -MSH, a gwelwyd yr un canlyniadau yn y mynegiant TRP-1 a TRP-2. Roedd yr arsylwadau hyn yn dangos bod J147 yn atal gweithgaredd tyrosinase cellog a melanogenesis trwy leihau lefelau mynegiant tyrosinase, TRP-1, a TRP-2.

J147 Atal Cludiant Melanosome trwy Reoleiddio Mynegiant Myosin Va, Rab27a a Cdc42

Mae pigmentiad croen dynol yn cael ei bennu gan synthesis melanin yn ogystal â dosbarthiad melanin. Mewn melanocytes mamalaidd, mae melanin yn cael ei wneud yn bennaf yn y corff celloedd ayn mudo ar hyd ffilamentau actina microtubules i dendrites, ac yn olafi'r keratinocytes cyfagos i orffeny dosbarthiadproses (Ohbayashi a Fukuda, 2012). Fel y dangosir ynFfigur 1D, gostyngodd J147 y ffurfiad dendrite yn sylweddol.Ar ben hynny, roedd y crynodiad melanin mewn dendritau hefydwedi'i leihau wrth i'r pigment melanin gael ei agregu yn y periniwclearrhanbarthau. Nesaf, fe wnaethon ni gyd-ddiwyllio celloedd B16F10 a HaCaT iymchwilio i weld a yw J147 yn dylanwadutrosglwyddiad melanosom ikeratinocytes trwy ficrosgopeg confocal. Mae dosbarthiadgwelwyd melanin yn y celloedd HaCaT yn y cyd-ddiwylliantmodel (Ffigur 3A). Mewn cyferbyniad, tra bod y model cyd-ddiwylliant oeddwedi'i drin â J147 am 48 h, signalau gronynnog felanosome i mewnRoedd celloedd HaCaT yn sylweddollleihau (Ffigur 3A).

Er mwyn egluro ymhellach fecanwaith sylfaenol effeithiau atal trosglwyddo melanosom erbyn J147, archwiliwyd nifer o ffactorau hanfodol gennym sy'n ymwneud â chludiant melanosom. Mae KIF5b yn cyfryngu cludiant melanosom allanol ar hyd microtiwbiau, ac mae cyfadeilad Rab27a Melanophilin-Myosin Va yn cyfrannu at gludiant melanosom ar hyd ffilamentau actin mewn melanocytes (Reiner et al., 2020). Yn ogystal, mae Cdc42 yn ysgogi ffurfio dendrites mewn melanocytes, sydd hefyd yn chwarae rhan hanfodol mewn cludiant melanosom. Fel y dangosir yn Ffigur 3B, gostyngwyd mynegiant Cdc42, Myosin Va, a Rab27a, ond nid KIF5b yn sylweddol ar ôl triniaeth J147 mewn cyflwr gyda neu heb -MSH. Nododd ein canfyddiadau fod J147 yn atal cludiant melanosom trwy leihau mynegiant Myosin Va, Rab27a, a Cdc42.

J147 Diraddio MITF Carlam

Mae MITF yn un o'r rheolyddion allweddol ar gyfer melanogenesis ac mae'n rheoli trawsgrifiad genynnau tyrosinase, TRP{0}}, TRP-2, Cdc42, a Rab27a (Noguchi et al., 2016; Kim et al., 2019 ). Edrychwyd yn gyntaf ar ddylanwad J147 ar drawsgrifiadau MITF. Fel y dangosir yn Ffigur 4A, -MSH cynyddodd trawsgrifiad MITF yn rhyfeddol, fodd bynnag, ni welwyd unrhyw newid ar ôl triniaeth J147, sy'n nodi nad yw J147 yn is-reoleiddio mynegiant MITF. Nesaf, archwiliwyd a yw J147 yn dylanwadu ar gyfieithu MITF. Fel y dangosir yn Ffigur 4B, ar ôl triniaeth -MSH, cynyddodd lefelau protein MITF, cyrhaeddodd uchafbwynt o 4 h, a dechreuodd ddirywio ar 8 h (Ffigur 4B). Yn wahanol, ni ostyngodd lefelau protein MITF ar 4 awr ar ôl triniaeth J147, ond ar 8 awr, gostyngodd lefelau protein MITF yn gyflym i lefelau anghanfyddadwy, gan nodi nad yw J147 yn dylanwadu ar gyfieithu MITF ond yn rhyfeddol mae'n cyflymu diraddio protein MITF.

J147 Melanogenesis wedi'i Atal Trwy'r Llwybr Signalau MEK/ERK

Mae llwybr signalau kinases protein a weithredir gan mitogen (MAPK), gan gynnwys kinase protein allgellog a reoleiddir gan signal (ERK), p38, a c-jun N-terminal kinase (JNK), yn chwarae rhan hanfodol mewn pigmentiad (Lee et al., 2013). Mae'n hysbys bod ffosfforyleiddiad ERK yn hwyluso diraddio MITF ac yn y pen draw yn gwasgaru'r ysgogiadau melanogenig, sy'n cynrychioli mecanwaith adborth negyddol mawr (Kwon et al., 2017). Fodd bynnag, mae swyddogaeth y llwybr t38 a'r llwybr JNK yn parhau i fod yn ddadleuol. Felly, archwiliwyd effaith J147 ar lwybrau signalau MAPK. Fel y dangosir yn Ffigur 5A, MEK/ERK wedi'i actifadu gan J147 a p38, ond ni chanfuwyd unrhyw ddylanwad yn ffosfforyleiddiad llwybr signalau JNK.

Am ragor o wybodaeth: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501