Yr Amlygiad Patholegol Mwyaf Cyffredin O CKD Yw Rhyw Ffurf O Ffibrosis Arennol
Sep 15, 2022
Cysylltwch am fwy o wybodaeth
Cefndir:Ffibrosis yw un o nodweddion patholegol mwyaf cyffredin proses heneiddio'r aren, ac mae ffibrosis mewn arennau sy'n heneiddio hefyd yn gwaethygu'r broses o glefyd cronig yn yr arennau (CKD). Mae Corallodiscus flabellata BLBurtt (C.flabellata, CF) yn gyffur botanegol a ddefnyddir yn gyffredin mewn llên gwerin Tsieineaidd. Fodd bynnag, ychydig o astudiaethau sydd wedi nodi ei effeithiau ffarmacolegol. Nod yr astudiaeth hon oedd archwilio effaith echdyniad ethanol CF ar ffibrosis arennol mewn llygod SAMP8 a nodi cyfansoddion gweithredol posibl.
Dulliau:Defnyddiwyd llygoden 8 sy'n dueddol o fod yn heneidd-dra (SAMP8) fel modelau anifeiliaid, a rhoddwyd dosau gwahanol o CF trwy gavage am fis. Er mwyn arsylwi ar faint o heneiddio arennol mewn llygod gan ddefnyddio staenio -galactosidase. Defnyddiwyd staenio masson a lefelau mynegiant Col-lI, a-SMA, a FN i werthuso'r ffibrosis arennol mewn llygod. Mesurwyd lefelau mynegiant protein y llwybr Nrf2 a'r llwybr Wnt/ -catenin/RAS yn yr aren. Ac mae -galactosidase ( -gal) wedi'i ysgogi gan gelloedd E NRK-52 fel model in vitro i sgrinio cydrannau gweithredol CF.
Canlyniadau:Ataliodd dyfyniad ethanol CF yn sylweddol weithgaredd arennol -galactosidase a lefelau mynegiant llygod Coll, a-SMA, a FNin SAMP8, a gwellodd staen Masson mewn llygod SAMP8. Llwyddodd CF i leihau lefelau protein wrinol, creatinin, wrea nitrogen, a serwm o TNF-a ac IL-1 mewn llygod SAMP8 yn rhyfeddol, a chynyddodd lefelau SOD a GSH-Px yn sylweddol. At hynny, ysgogodd CF y llwybr Nrf2 a rhwystro llwybr Wnt/ -catenin/RAS yn arennau llygod. Heblaw, 3,4-dihydroxy phenyl ethanol (SDC-0-14,16) a (3,4-dihydroxy phenyl ethanol-8-O-[4-O-trans -caffeoyl- -D-apiofuranosy-(1→3)- -D-glucopyranosyl (1→6)]- -D-glucopyranoside (SDC-1-8)wedi'u hynysu oddi wrth CF , a leihaodd heneiddedd celloedd NRK-52E, ac efallai bod cynhwysion gweithredol CF yn chwarae'r rôl gwrth-heneiddio.
Casgliadau:Dangosodd ein harbrofion y gallai dyfyniad ethanol CF wella ffibrosis arennol mewn llygod SAMP8 trwy'r llwybr Wnt/ -catenin/RAS. Ac efallai mai CDC-0-14,16 a SDC-1-8 fydd y sail berthnasol i CF gael effeithiau gwrth-arennol sy'n gysylltiedig â heneiddedd.
Geiriau allweddol:Heneiddio, Corallodiscus flabellata, Arennau, Ffibrosis Arennol, SAMP8, Senescence, Wnt/ -catenin/RAS
Rhagymadrodd
Mae mynychder byd-eang clefyd cronig yn yr arennau (CKD) yn cynyddu wrth i'r boblogaeth heneiddio ac mae'n gosod baich sylweddol ar gymdeithas [1-3]. Yr amlygiad patholegol mwyaf cyffredin o CKD yw rhyw fath o ffibrosis arennol[4]. Yn yr un modd, mae ffibrosis arennol hefyd yn un o arwyddion heneiddio'r arennau [2]. Mae astudiaethau wedi dangos bod straen ocsideiddiol, llid, Wnt/ -catenin, system renin-angiotensin-aldosterone (RAS), a signalau rapamycin (mTOR) i gyd yn gysylltiedig â CKD a achosir gan heneiddedd [5]. Mae cysylltiad agos rhwng ffibrosis arennol mewn arennau sy'n heneiddio ac actifadu llwybr signalau Wnt/ -catenin a RAS [6]. Ar ôl actifadu Wnts, mae -catenin yn y cytoplasm yn cael ei drawsleoli i'r cnewyllyn, lle mae'n clymu i'r ffactor trawsgrifio ffactor gwella lymffoid (LEF) / ffactor trawsgrifio T-cell (TCF) ac yn cychwyn trawsgrifio genynnau targed i lawr yr afon. Yn ddiddorol, mae rhanbarth hyrwyddwr y genyn RAS hefyd yn cynnwys gwefannau rhwymo LEF/TCF, sy'n caniatáu -catenin i hyrwyddo rhwymo LEF-1 i'r gwefannau hyn[7].colesterol cistanche,Felly, gallai targedu llwybr signalau Wnt/ -catenin/RAS fod yn strategaeth therapiwtig bosibl ar gyfer ffibrosis arennol [8,9]. Yn y blynyddoedd diwethaf, mae therapi amnewid ffibrosis arennol gyda chynhyrchion naturiol wedi denu sylw llawer o ysgolheigion [10] . Canfu Xiaoyan Shen et al. fod ginsenoside Rgl yn lleddfu ffibrosis glomerwlaidd yn ystod heneiddio'r arennau trwy atal actifadu inflammasome NLRP3 mewn llygod SAMP8 [11]. Archwiliodd yr astudiaeth hon effaith dyfyniad C. flabellate(CF) ar ffibrosis arennol mewn llygod SAMP8 o'r llwybr Wnt/ -catenin/RAS.
Gall Cistanche gwrth-heneiddio
Cofnodwyd CF fel planhigyn meddyginiaethol yn Tsieina gyntaf yn y "Dian Nan Ben Cao. Defnyddir y planhigyn cyfan yn gyffredin ar gyfer trin dysentri, ejaculation cynamserol, clefyd fesigl arloesol, a chlefyd yr arennau mewn ardaloedd lleiafrifoedd ethnig Tsieina [12]. Ar hyn o bryd , prin yw'r adroddiadau am CF mewn ymchwil fodern Canfu'r astudiaethau ffarmacolegol yn ein labordy fod echdyniad CF yn cael effeithiau diwretig a methiant yr afu a achosir gan lipopolysaccharide / D-galactosamine a achosir gan lygod mawr [13, 14] ac astudiaethau ffytocemegol ar datgelodd mai glycosidau ffenylethanoid a flavonoidau oedd prif gydrannau cemegol CF [15,16] Nod yr astudiaeth hon oedd ymchwilio i effaith dyfyniad CF ar ffibrosis arennol yn llygod SAMP8 ac i egluro ei fecanwaith posibl, er mwyn darparu tystiolaeth arbrofol ar gyfer trin clefyd yr arennau â CF a ddisgrifir mewn llyfrau hynafol.
Defnyddiau a dulliau
Casglu ac echdynnu deunydd planhigion
Mae "Meddygaeth Lysieuol Tsieineaidd Yunnan" yn cofnodi y gellir cynaeafu CF trwy gydol y flwyddyn. Cynaeafwyd y planhigion CF a ddefnyddiwyd yn yr arbrawf hwn yn Sir Xixia, Talaith Henan, Tsieina ym mis Medi. Fe'i nodwyd gan yr Athro Suiqing Chen o Brifysgol Meddygaeth Tsieineaidd Henan, a chafodd y sbesimenau eu storio yn y llyfrgell sbesimenau labordy.sgîl-effeithiau cistanche deserticolaCafodd y planhigion (1 kg) eu hadlif â 50 y cant ethanol (3 × 12 L, bob 1 h), a chafodd y gymysgedd ei hidlo â 16 haen o rhwyllen. Cafodd yr hidlwyr cyfun eu sychu gan anweddiad cylchdro gan ddefnyddio sychwr rhewi. Yn olaf, y cynnyrch canrannol o 50 y cant ethanol dyfyniad crai o CF oedd 15.5 y cant . Roedd y darn sych yn cael ei gadw mewn oergell nes ei ddefnyddio ymhellach. Mae'r deunyddiau atodol yn rhestru'r data perthnasol ar ddynodiad cynhwysyn echdyniad CF.
Defnyddiwyd proses wahanu arall a adroddwyd yn flaenorol yn yr astudiaeth hon i gael y ffracsiwn elution dŵr, ffracsiwn elution ethanol 20 y cant, ffracsiwn elution ethanol 30 y cant, a ffracsiwn elution ethanol 40 y cant o CF [13]. Gwahanwyd y ffracsiwn ethanol 40 y cant gan ddefnyddio Sephadex LH-20 a cholofn gel silica a'i buro gan gromatograffaeth hylif perfformiad uchel lled-baratoi (HPLC) i gael cyfansoddion fel SDC-0-14,16, SDC30, {10}}, SDC-0-60(p-hydroxy benzyl alcohol).
Anifeiliaid a gweinyddu
Defnyddiwyd SAMP8 gwrywaidd chwe mis oed a llygod 1 (SAMR1) sy'n gallu gwrthsefyll llygod cyflymach o Ysbyty Cysylltiedig Cyntaf Prifysgol Meddygaeth Tsieineaidd Traddodiadol Tianjin (Tianjin, Tsieina) yn yr astudiaeth hon. Cafodd yr anifeiliaid eu cadw dan amodau golau rheoledig (12-h golau/cylch tywyll), tymheredd (23-25 gradd C), a lleithder (45-55 y cant) a derbyniwyd hysbyseb safonol am ddiet a dŵr libitwm. Rhannwyd cyfanswm o 48 o lygod SAMP8 yn bedwar grŵp arbrofol (n=12/grŵp): llygod model SAMP8 (M), llygod SAMP8 dos isel CF ethanol wedi'u trin yn echdynnu (CF-L, 387.5 mg/kg, yn fewngastrig), llygod SAMP8 dos canolig CF ethanol wedi'u trin ag echdyniad (CF-M, 775 mg/kg, yn fewngastrig), a llygod SAMP8 dos uchel CF ethanol wedi'u trin yn echdynnu (CF-H,1550 mg/ kg, intragastrically). Mae'r llygod yn y rheolaeth SAMRI (Con, n=10) a SAMP8 grwpiau model (M) eu trin â saline ffisiolegol (0.9 y cant ). Cafodd yr holl lygod eu trin ar lafar am 1 mis. Cymeradwywyd yr holl arbrofion anifeiliaid gan bwyllgor moeseg Prifysgol Meddygaeth Tsieineaidd Henan a'u perfformio o dan y canllawiau sefydliadol (Henan, Rhif Cymeradwyo Tsieina: HACTCM-2018009060-19). Yn ystod yr arbrawf, bu un farwolaeth llygoden ym mhob un o'r grwpiau Con ac M, a bu farw dau lygod yn y grŵp CF-H.
Casgliad sampl
Ar ddiwedd yr arbrawf, cafodd y llygod eu cadw'n unigol mewn cewyll metabolaidd ar gyfer 12-h gasgliadau wrinol. Yna anestheteiddiwyd y llygod ag isoflurane, a chasglwyd samplau gwaed trwy waedu ôl-orbitol. Yna tynnwyd yr arennau o bob llygoden trwy lawdriniaeth a'u cadw ar 80 gradd Cyn y dadansoddiadau.
Diwylliant celloedd ac astudiaeth in vitro
NRK{0}}Cafodd celloedd E a brynwyd o Fanc Cell yr Academi Gwyddorau Tsieineaidd (Shanghai, Tsieina) eu meithrin i ymchwilio i effaith echdyniad CF ar heneiddio celloedd a achosir gan D-galactos (D-gal, S11050, Yuanye, Shanghai, Tsieina). Tyfwyd celloedd E NRK-52yn addasiad Dulbecco o gyfrwng Eagle's Dulbecco (DMEM, 12,100,046, Thermo Fisher, Massachusetts, UDA) a gyflenwir â 10 y cant o serwm buchol ffetws mewn deorydd ar 37 gradd C ac ym mhresenoldeb 5 y cant , CO.Cells eu tyfu mewn 96-platiau ffynnon neu 6-blatiau ffynnon i 80-85 y cant cydlifiad ac yna eu trin â chyfryngau twf yn cynnwys gwahanol gyfuniadau cyffuriau: Media plws D-gal ( 20 mg/mL）, Cyfryngau plws D-gal plws CF (10, 25,50, 100 ug/mL) neu Media plws D-gal plws cyfansawdd monomerig (10 μM) yn y drefn honno am 48 h. Yn dilyn hynny, y methyl thiazolyl tetrazolium ( Defnyddiwyd assay MTT i ganfod hyfywedd celloedd, a defnyddiwyd staenio -galactosidase i arsylwi heneiddedd celloedd.
Staeniad sy'n gysylltiedig â heneiddedd -galactosidase
Cafodd arennau wedi'u rhewi o lygod wedi'u sleisio'n adrannau 10-μm-trwchus a chelloedd NRK-52E eu staenio â heneiddedd-gysylltiedig -galactosidase(SA- -gal, C0602, Beyotime Biotechnology, Shanghai, China) dilyn protocolau'r gwneuthurwr.
Dadansoddiad histolegol
Cafodd adrannau'r arennau eu gosod gyda pharaformaldehyd wedi'i glustogi o 4 y cant, a 10- darnau μm-trwchus wedi'u mewnosod â pharaffin eu staenio â thrichrome Masson (G110-06, Service, Wuhan, Tsieina) a'u harsylwi'n ficrosgopig. Mesurwyd yr ardaloedd lliw glas yn adrannau trichrome-staen Masson yn feintiol o chwe maes a ddewiswyd ar hap a'u dadansoddi gan feddalwedd Image-Pro Plus 6.0.
Mesuriadau biocemegol
Dadmer y samplau homogenad serwm ac arennau i dymheredd yr ystafell, a lefelau superoxide dismutase (SOD, CSB-E08556m, Wuhan Huamei, Wuhan, China), glutathione peroxidase (GSH-Px, A005-1-2, Nanjing Jiancheng, Nanjing, Tsieina), interleukin-1 (IL-1 , RK00006, ABclonal, Wuhan, Tsieina), ffactor necrosis tiwmor- (TNF- , RK00027, ABclonal, Wuhan, Tsieina), wrea nitrogen (C{). {10}}, Nanjing Jiancheng, Nanjing, Tsieina), creatinin (Cr, C08556, Nanjing Jiancheng, Nanjing, Tsieina) mewn serwm llygoden, cyfanswm protein wrinol (C08556, Nanjing Jiancheng, Nanjing , Tsieina) mewn wrin llygoden a lefelau mynegiant colagen math I (Col-I, MU30364, Bio-Swamp, Wuhan, Tsieina), -actin cyhyrau llyfn ( -SMA, MU30359, Bio-Swamp, Wuhan, Tsieina), ffibronectin (FN, MU30179, Bio-Swamp, Wuhan, China) mewn meinweoedd arennau llygoden yn cael eu mesur yn olynol yn unol â phrotocol gwneuthurwr y cit assay.
Dadansoddiad imiwnohistocemegol
Perfformiwyd y dadansoddiad imiwn-histocemegol gan ddefnyddio'r dull arferol [17]. Roedd y gwrthgyrff a ddefnyddiwyd yn cynnwys y canlynol: Wnt4 (14371-1-AP, Proteintech, Chicago, USA), -catenin (17565-1-AP, Proteintech, Chicago, USA), derbynyddion math 1 angiotensin II (AGTR1,{{ 7}}AP, Proteintech, Chicago, UDA), p-ffactor niwclear erythroid 2-ffactor cysylltiedig 2 (p-Nrf2, ab76026, Abcam, Caergrawnt,UK), pc-Fos(ab27793,Abcam,Caergrawnt, UK ), ffactor twf meinwe gyswllt (CTGF, GB11078, Gwasanaeth, Wuhan, Tsieina). Arsylwyd yr adrannau o dan ficrosgop (Olympus, Tokyo, Japan).dos cistanche redditMesur arwynebedd a dwysedd optegol integredig (IOD) yr ardal gyda mynegiant lliw haul gan ddefnyddio meddalwedd Image-Pro Plus 6.0 a chyfrifwch y dwysedd optegol cymedrig (MOD, MOD=IOD/arwynebedd)ar gyfer lled -dadansoddiad meintiol.
Dadansoddiad o blotiau gorllewinol
Cynhaliwyd assay blot gorllewinol fel y disgrifiwyd mewn astudiaeth flaenorol [18]. Yn gryno, cafodd meinweoedd yr arennau eu homogeneiddio mewn byffer lysis a'u meintioli gan ddefnyddio Pecyn Assay Protein Bradford (AR0197, Boster Biological Technology, Wuhan, China). Yna bu'r homogenadau yn destun electrofforesis gel sodiwm dodecyl sylffad-polyacrylamid, eu trosglwyddo i bilen fflworid polyvinylidene, a'u rhwystro mewn byffer blocio (llaeth sych di-fraster 4 y cant) am 90 munud. Yna cawsant eu deor â gwrthgyrff cynradd (Wnt4; renin; AGTR1; p-Nrf2; pc-Fos; protein cysylltiedig ECH tebyg i Kelch 1 (Keapl, GB11847, Service-bio, Wuhan, Tsieina); -actin (AC026, Abclonal, Wuhan, Tsieina); a glyseraldehyde-3-ffosffad dehydrogenase (GAPDH, AC033, Abclonal, Wuhan, Tsieina)) dros nos ar 4 gradd , ac yna deor gyda gwrthgorff eilaidd cyfunedig fflwo-presenoldeb priodol am 1 awr ar dymheredd yr ystafell . Sganiwyd y proteinau o ddiddordeb gyda sganiwr IR Odyssey (LI-COR Biosciences, Nebraska, UDA), a mesurwyd dwyster y signal gan ddefnyddio meddalwedd Image Studio. Cafodd y lefelau protein eu normaleiddio yn erbyn y -actin neu GAPDH.
Dadansoddiad UPLC-Q-TOF-MS ar gyfer samplau arennau
Cafodd y meinweoedd arennol eu pwyso a'u homogeneiddio mewn halwynog ffisiolegol oer iâ (w/v=1:1). Yna, ychwanegwyd 1 ml o asetonitrile at 200 μL o samplau homogenad meinwe, ac yna echdynnu ultrasonic am 30 munud. Cafodd y dyfyniad ei allgyrchu ar 12,000 g a 4 gradd am 10 munud. Cymerwyd y supernatant i'r ffiol i'w ddadansoddi. Gwahanwyd cromatograffig ar gromatograffeg hylif uwch-berfformiad (UPLC) (System Dionex UltiMate 3000, Thermo Scientific, Massachusetts, UDA), gyda'r system LC yn cynnwys colofn Acclaim RSLC 120 C18 （2.2 μm, 2.1 × 100 mm; Thermo Gwyddonol).buddion echdynnu cistancheRoedd y cyfnod symudol yn cynnwys hydoddydd A(acetonitrile) a dŵr gyda {{0}.1 y cant o asid fformig (B). Perfformiwyd y gwahaniad gan elution graddiant fel a ganlyn:10-70 y cant A o 0 i 3 mun, 70-78 y cant A o 4 i 13 munud, 78-90 y cant A o 14 i 15 mun, 90 y cant -10 y cant A o 15 i 16 munud, a 10 y cant A o 16 i 20 munud. Cyfaint pigiad y sampl prawf oedd 2μL. Perfformiwyd y dadansoddiad sbectrometreg màs （MS） trwy ddefnyddio ffynhonnell ESI o dan yr amodau a ganlyn: y foltedd capilari yn y modd positif oedd 3.5 kV, a'r foltedd capilari yn y modd negyddol oedd 3.2 kV. Pwysedd y nebulizer oedd 2.0 bar, tymheredd y nwy sych oedd 230 gradd, a'r gyfradd llif oedd 8 L / min.
Dadansoddiad ystadegol
The acquired raw data from ultra-performance liquid chromatography coupled to quadrupole time-of-flight mass spectrometry (UPLC-Q/TOF-MS) analysis were first preprocessed using profile analysis(version 2.1, Bruker, Germany). The"bucket table" was obtained and imported into the SIMCA-P software(version13.0 Umetrics AB, Sweden)for principal component analysis (PCA). Other results were presented as mean±stand-ard deviation(SD). The data were processed using IBM SPSS Statistics 26.0. The normal distribution of the data used the Levene test, which required the average value, P>{{0}}.05; defnyddiwyd y dadansoddiad un ffordd o amrywiant i gymharu rhwng grwpiau. Ystyriwyd bod gwerth AP llai na 0.05 yn ystadegol arwyddocaol.
Canlyniadau
Gwellodd CF heneiddio a ffibrosis yr arennau mewn llygod SAMP8
Er mwyn ymchwilio i effaith CF ar arennau llygod SAMP8, mesurwyd actifedd gal SA- - yn yr arennau. Yn Ffig. la, cynyddodd gweithgaredd SA- -gal ym meinweoedd yr arennau yn sylweddol yn y grŵp M (gwella glas). Roedd gweinyddu CF-L a CF-M yn atal gweithgaredd galactosidase yn sylweddol yn arennau llygod SAMP8 tra nad oedd y gwelliant gan CF-H yn arwyddocaol. Hefyd, roedd mynegai arennau'r grŵp model yn sylweddol is na mynegai'r grŵp rheoli (Ffig. 1b, P<0.05). after="" treatment="" with="" cf-m,="" the="" kidney="" index="" of="" samp8="" mice="" was=""><0.01). next,="" the="" results="" of="" masson's="" trichrome="" staining="" (fig.="" lc,=""><0.01)and the="" expression="" of="" fibrosis="" indicators="" col-i,="" α-sma,="" and="" fn="" revealed="" that="" m-group="" mice="" had="" more="" severe="" renal="" fibrosis="" than="" con-group="" mice,="" and="" cf-l="" and="" cf-m="" significantly="" attenuated="" renal="" fibrosis="" in="" samp8="" mice(fig.leg,=""><>
Gwellodd CF swyddogaeth arennol, straen ocsideiddiol, a lefelau llid mewn llygod SAMP8
Yn ogystal, profwyd dangosyddion swyddogaeth arennol pob grŵp o lygod, a oedd yn cynnwys cyfaint wrin mewn llygod am 12 h, lefelau nitrogen Cr a wrea yn y serwm, a lefelau protein wrin. Fel y dangosir yn Ffig. 2a-d, roedd lefelau protein wrin, serwm Cr a serwm wrea nitrogen y grŵp model yn sylweddol uwch na rhai'r grŵp rheoli (Ffig.2a, P).<0.01), while="" the="" urine="" volume="" of="" the="" model="" group="" was="" significantly="" lower="" than="" that="" of="" the="" control="" group(fig.2b-d,=""><0.01). cf="" supplementation="" down-regulated="" the="" levels="" of="" urine="" protein,="" serum="" cr="" and="" urea="" nitrogen="" in="" the="" model="" group(fig.2b-d,=""><0.05 or=""><0.01) while="" increasing="" the="" urine="" output="" of="" model="" mice.="" collectively,="" the="" results="" indicated="" that="" samp8="" mice="" had="" kidney="" damage="" associated="" with="" aging,="" and="" treatment="" with="" cf="" effectively="" ameliorated="" this="" injury.="">cistanche genghis khanNesaf, archwiliwyd a oedd CF wedi'i fodiwleiddio'n fuddiol yn straen ocsideiddiol a llid yn arennau llygod sy'n heneiddio'n gyflym. Fel y dangosir yn Ffig.2e-h, roedd lefelau SOD a GSH-Pxin yn arennau'r grŵp M yn sylweddol is na rhai'r grŵp Con, ac roedd lefelau IL-1 yn sylweddol uwch na rhai'r grŵp Con. y grŵp Con. Ar ôl triniaeth CF, mae'r dangosyddion uchod wedi'u gwella, yn enwedig mae effaith gwella CF-L a CF-M yn well.
Fe wnaeth CF actifadu llwybr Nrf2 yn aren llygod SAMP8
Mesurwyd lefel mynegiant p-Nrf2 mewn meinweoedd arennau i ymchwilio a oedd llwybr Nrf2 yn ymwneud ag effaith amddiffynnol CF (Ffig.3a-c) yn yr astudiaeth bresennol. Gostyngodd lefel mynegiant p-Nrf2 yn sylweddol yn y grŵp SAMP8 yn unig (P<0.01, fig.="" 3c),="" and="" the="" downregulation="" was="" reversed="" to="" some="" extent="" by="" the="" treatment="" of="" cf="" crude="" extract.="" there="" was="" no="" significant="" change="" in="" the="" expression="" level="" of="" keapl="" among="" the="" groups(fig.="" 3b="" and="" d).="" further,="" the="" expression="" level="" of="" p-c-fos="" was="" detected="" and="" analyzed="" by="" immunohistochemical="" and="" western="" blot="" analyses.="" it="" was="" found="" that="" the="" expression="" level="" of="" p-c-fos="" in="" the="" kidneys="" of="" mice="" in="" the="" m="" group="" was="" significantly="" higher="" than="" that="" in="" the="" con="" group;="" while="" cf="" treatment="" significantly="" reduced="" the="" expression="" levels="" of="" p-c-fos="" in="" the="" kidneys="" of="" the="" mice="" (fig.3a-b="" and="">
CF gwanhau gweithrediad signalau Wnt/ -catenin/RAS yn aren llygod SAMP8
Er mwyn archwilio ymhellach fecanwaith posibl CF yn rhoi'r effaith gwrth-ffibrosis. Perfformiwyd lleoleiddio protein gan ddefnyddio immunohistochemistry. Fel y dangosir yn Ffig. 4a, lefel mynegiant Wnt4 a
-catenin yn cael ei achosi yn bennaf mewn celloedd tiwbaidd arennol. Gwelwyd canlyniadau tebyg pan aseswyd AGTR1, targedau llwybr signalau Wnt i lawr yr afon (Ffig. 4a). Wedi hynny, mesurwyd lefel mynegiant protein, a dangosodd y canlyniadau fod proteinau Wnt4, -catenin, renin, ac AGTR1 wedi'u cronni ym meinwe arennau llygod yn y grŵp model, tra bod CF yn atal y newidiadau hynny'n sylweddol (Ffig. 4b-f ). Ymhellach, roedd lefel mynegiant CTGF hefyd wedi'i leoli a'i ddadansoddi'n feintiol. Yn gyson â'r canlyniadau a grybwyllwyd uchod, mynegwyd CTGF yn bennaf yn y tiwbiau arennol, ac roedd CF yn atal gweithgaredd CTGF (Ffig.4d g) yn sylweddol.
Roedd CF a'i gyfansoddion yn atal heneiddio celloedd NRK-52E a achosir gan D-gal
Defnyddiwyd celloedd E NRK a ysgogwyd gan D-gal i sgrinio rhai cynhwysion actif yn CF, i bennu'r sail ddeunydd ar gyfer trin arennau henaint trwy echdyniad CF. Dangosodd y canlyniadau fod y CF yn gwella hyfywedd celloedd mewn modd sy'n dibynnu ar ddos a'r cyfansoddion
Cafodd SDC-0-14,16 a SDC-1-8 wedi'u hynysu oddi wrth CF effeithiau gwell ar amlhau celloedd. Yn ogystal, roedd 25 ug/mL CF a'r cyfansoddion SDC-0-14,16 a SDC-1-8 i gyd yn dangos effaith atal gweithgaredd -galactosidase (Ffig.5).
Gwellodd CF ddadansoddiad PCA o feinwe'r arennau mewn llygod SAMP8 Dadansoddwyd prif gydrannau (PCA) i archwilio effeithiau CF ar lygod SAMP8. Fel y dangosir yn Ffig.6a, roedd grwpio amlwg rhwng y grwpiau rheoli a model (R2X=0.542; Q2=0.38), sy'n awgrymu bod metabolion mewndarddol llygod SAMP8 yn wahanol i SAMR1 llygod, sy'n achosi iddynt wyro oddi wrth y grŵp SAMR1. Fel y dangosir yn Ffig.6b, roedd y gwahanol grwpiau CF hefyd wedi'u clystyru i wahanol ddosbarthiadau o'r grwpiau rheoli a model, a symudodd y grwpiau CF yn nes at y grŵp rheoli, gan nodi bod y
roedd metabolion mewndarddol y llygod SAMP8 a ymyrrwyd â CF yn debyg i rai'r llygod SAMR1.
Trafodaeth
Mae heneiddio yn chwarae rhan bwysig yn natblygiad CKD [19]. Wrth i ffibrosis CKD fynd rhagddo, mae celloedd senescent yn mynegi ac yn secretu ffactorau pro-ffibrotic (TGF-, CTGF, ac yn y blaen) a ffactorau pro-llidiol (IL-1, IL-6, TNF-, ac ati). ), sy'n ffactorau ffenoteip secretory sy'n gysylltiedig â heneiddedd, a thrwy hynny gyflymu ffibrosis arennol [20, 21]. Ar hyn o bryd, mae meddygaeth Tsieineaidd traddodiadol wedi cyflawni canlyniadau da wrth drin ffibrosis arennol gyda llai o sgîl-effeithiau [22]. Archwiliodd yr astudiaeth hon effeithiau ymyriadol echdyniad CF ar ffibrosis arennol mewn llygod SAMP8. Y straen llygoden a ddewiswyd ar gyfer yr astudiaeth hon oedd SAMP8, a ddatblygwyd yn seiliedig ar hyd oes, heneiddedd, a sgoriau graddio ffenotypig patholegol AKR / llygod ac roedd yn fodel heneiddio carlam o darddiad genetig yn unig [23,24]. Mae astudiaethau wedi dangos bod y newidiadau yn patholeg arennol llygod SAMP8 (9 mis) yn cynnwys ffibrosis tubulointerstitial a glomerulosclerosis segmentol ffocal [25]. A chanfuwyd bod ffibrosis arennol mewn llygod SAMP8 yn gysylltiedig ag oedran [6]. Felly, gwnaethom brofi gweithgaredd -galactosidase a
lefel ffibrosis arennol mewn llygod SAMP8 a chanfuwyd bod CF-L a CF-M yn gwella gweithgaredd ffibrosis yr arennau a -galactosidase mewn llygod SAMP8 (Ffig.1). Ac fe wnaethon ni hefyd brofi allbwn wrin y llygod. Yn gyson ag astudiaethau a gyhoeddwyd yn flaenorol yn nodi bod CF a gafwyd gan ddau broses wahanol yn cael effeithiau diuretig [13], cynyddodd y dyfyniad yn sylweddol gyfaint wrin llygod SAMP8. Hefyd, dangosodd yr astudiaeth bresennol fod ychwanegiad gyda CF yn gwella swyddogaeth arennol, gweithgaredd ensymau gwrthocsidiol, a lefelau ffactorau llidiol mewn llygod SAMP8 (Ffig.2).
Enillodd system Keap{0}}Nrf2 sylw llawer o ysgolheigion yn ystod y blynyddoedd diwethaf oherwydd ei nodweddion gwrthocsidiol a gwrthlidiol. Roedd ei botensial ffarmacolegol wrth drin clefydau'r arennau wedi'i astudio'n helaeth mewn astudiaethau anghlinigol a chlinigol [26]. Mae Nrf2 yn brif reoleiddiwr trawsgrifio ar gyfer genynnau sy'n gysylltiedig â statws rhydocs ac effeithiau gwrthocsidiol [27]. Mae astudiaethau wedi dangos bod angen ffosfforyleiddiad ar gyfer actifadu Nrf2 ac anwythiad genynnau targed [28]. Fe wnaeth actifadu Nrf2 wella dilyniant CKD trwy atal straen ocsideiddiol a chynnal homeostasis rhydocs cellog [29]. Fel ffactor trawsgrifio allweddol, mae Nrf2 yn chwarae rhan hanfodol wrth amddiffyn rhag straen ocsideiddiol trwy reoleiddio ei gwrthocsidyddion i lawr yr afon ac ensymau dadwenwyno [30]. Mae Kim et al. adroddodd bod resveratrol, fel actifydd Nrf2 cryf, wedi lleddfu anaf arennol cynyddol sy'n gysylltiedig â heneiddio [31]. Yn yr astudiaeth bresennol, gwellodd CF wanhad Nrf2 yn aren llygod SAMP8 heb effeithio ar lefel mynegiant Keapl, gan awgrymu y gallai dyfyniad crai CF wella niwed ocsideiddiol yn yr arennau trwy actifadu llwybr Nrf2 (Ffig. 3).
Nodweddir ffibrosis arennol gan ddyddodiad matrics allgellog gormodol (ECM) sy'n arwain at ffurfio creithiau yn y parenchyma arennol [32]. Credir bod trawsnewid ffactor twf- (TGF-) yn cytocin allweddol mewn gorfywiogi ffibro-chwyth [33, 34]. Wrth gwrs, nid yw targedu llwybr signalau TGF yn unig yn ddigon i leihau ffibrosis arennol. Nododd rhai astudiaethau fod CTGF, Wnt/ -catenin, system renin-angiotensin, straen ocsideiddiol, ac yn y blaen, yn gysylltiedig â ffibrosis arennol [35-37]. Mae Wnt/ -catenin yn llwybr signalau a warchodir yn esblygiadol sy'n ymwneud â rheoleiddio homeostasis meinwe, datblygu organau, a thrwsio anafiadau[38]. Sisters et al. trafod effaith pro-ffibrotic signalau Wnt yn y cyhyrau ysgerbydol a'r aren [39]. Sefydlodd tystiolaeth gynyddol fod llwybr signalau Wnt/ -catenin yn chwarae rhan hanfodol wrth reoleiddio datblygiad a dilyniant briwiau ffibrotig arennol yn dilyn anaf [40-42]. Mae'r signal Wnt/ -catenin yn gymharol dawel yn arennau oedolion iach ac yn cael ei actifadu unwaith y bydd yr arennau'n destun gwahanol fathau o niwed [43].
Mewn mamaliaid, mae gan y teulu Wnt o leiaf 19 aelod o'r teulu sy'n hanfodol ar gyfer datblygiad yr arennau. Ac mae o leiaf 15 o'r aelodau hyn o'r teulu wedi'u huwchreoleiddio'n wahanol yn yr aren sy'n heneiddio, gan gynnwys Wnt4 [6]. Dangosodd canlyniadau'r astudiaeth bresennol fod lefel mynegiant protein Wnt4 yn arennau llygod SAMP8 yn sylweddol uwch na'r hyn a welwyd mewn llygod SAMR1, a ddilyswyd gan ddadansoddiadau blot Gorllewinol ac imiwn-histocemegol (Ffig. 4a, d, ac f). Trwy gyd-ddigwyddiad, roedd lefel mynegiant protein -catenin hefyd wedi'i uwchreoleiddio. Hefyd, mynegwyd Wnt4 a -catenin mewn celloedd epithelial tiwbaidd arennol, fel y datgelwyd gan y dadansoddiad imiwn-histocemegol (Ffig.4a ac f). Ysgogodd Wnt/ -catenin ffibrosis arennol trwy achosi genynnau ffibrogenig lluosog megis cydrannau RAS, matrics metalloproteinase-7 (MMP-7), atalydd actifadu plasminogen 1 (PAI-1), a Malwen [37 ]. Mae Zhou et al. disgrifiodd Wnt/ -catenin fel y prif reoleiddiwr i fyny'r afon, sy'n rheoli mynegiant yr holl gydrannau RAS a brofwyd yn yr arennau [44]. Defnyddiodd Zhou et al. fodel llygod mawr nephrectomi 5/6 (5/6 NX) i ddangos lefelau mynegiant prif gydrannau RAS yn yr ymennydd a'r arennau, megis angiotensinogen, ensym trosi angiotensin, ac angiotensin II AT{{25 }}derbynnydd wedi'i uwchreoleiddio'n sylweddol. Cafodd y lefel mynegiant upregulated ei atal gan atalydd canolog Wnt, a oedd yn fector firws cysylltiedig ag adeno yn gorfynegi'r genyn DKK1 [45]. Yn yr un modd, canfu'r astudiaeth bresennol fod AGTR1 yn dal i gael ei fynegi yn yr epitheliwm tiwbaidd arennol, ac roedd lefelau mynegiant renin ac AGTRl ym meinweoedd arennau llygod SAMP8 yn sylweddol uwch na'r rhai mewn llygod SAMR1 (Ffig. 4a a dg). Roedd y canlyniadau hyn yn dangos bod llwybr signalau Wnt/ -catenin/RAS wedi'i actifadu yn arennau llygod SAMP8, ac roedd y CF i bob pwrpas yn atal gweithrediad y llwybr hwn.
Mae CTGF yn cyflawni swyddogaethau biolegol lluosog, gan gynnwys hyrwyddo mitosis celloedd cemotactig, ysgogi adlyniad, a hyrwyddo amlhau celloedd a synthesis ECM [35,46]. Modylodd CCN2(CTGF) signalau Wnt trwy rwymo i brotein sy'n gysylltiedig â derbynnydd lipoprotein dwysedd isel 5/6 (LRP5/6) i gyfryngu ffibrosis ymhellach [39, 47]. Defnyddiodd astudiaethau eraill dawelu genynnau i ddarganfod a chadarnhau bod Nrf2 yn rheoleiddio llwybr Wnt trwy reoleiddio lefel mynegiant CTGF, gan effeithio ar afiechyd rhyng-raniadol arennol. Hefyd, rheolodd Nrf2 lefel trawsgrifio CTGF yn bennaf trwy reoleiddiwr trawsgrifio CTGF c-Fos [48]. Datgelodd y dadansoddiad immunohistochemical fod CTGF a pc-Fos yn cael eu mynegi'n bennaf mewn celloedd epithelial tiwbaidd arennol, a dosbarthwyd pc-Fos hefyd mewn glomeruli. Dangosodd y dadansoddiad meintiol fod lefelau mynegiant y ddau brotein wedi'u rhwystro gan CF(Ffigs.3b ac e a 4a ac c). Yn olaf, defnyddiwyd y dadansoddiad PCA i wirio ymhellach bod CF wedi gwella niwed i'r arennau mewn llygod SAMP8 (Ffig.6). Darparodd yr astudiaeth bresennol dystiolaeth bod y CF nid yn unig wedi ysgogi signalau Nrf2 ond hefyd yn dibynnu ar Nrf2 i gydbwyso straen ocsideiddiol a llid, atal signalau Wnt/ -catenin/RAS, a gwella heneiddio'r arennau a ffibrogenesis arennol. Fodd bynnag, canfuom hefyd welliant anghyson yn effaith CF ar staenio Masson a SA- -gal yn yr arbrawf hwn. Tybir y gallai hyn fod oherwydd y dilyniant anghyson o heneiddio arennol a ffibrosis arennol mewn llygod SAMP8. Gall graddau heneiddio arennol yn y llygod yn yr arbrawf hwn fod yn fwy difrifol na ffibrosis. Felly, nid oedd effaith liniaru CF-H ar heneiddio arennol mewn llygod SAMP8 mor amlwg ag effaith ffibrosis arennol.
Fel monosacarid sy'n lleihau, defnyddir D-galactose yn helaeth mewn amrywiol glefydau sy'n gysylltiedig ag oedran mewn vivo ac in vitro. Canfuwyd bod D-gal yn achosi heneiddedd ac anaf yng nghelloedd NRK-52E [49], yn achosi heneiddedd celloedd epithelial tiwbaidd procsimol dynol yr arennau (HKC-8), a chynyddu lefelau mynegiant dwy arennol proteinau marciwr ffibrosis FN ac a-SMA [6].Yn yr astudiaeth hon, defnyddiwyd D-gal i gymell celloedd E in vitro NRK-52. Gan ddefnyddio assay MTT a staenio -galactosidase i ganfod y cyfansoddion sydd wedi'u hynysu o CF, canfuwyd bod SDC-0-14,16 a SDC-1-8 yn gwella hyfywedd celloedd a achosir gan D-gal ac yn atal D-gal-anwythol heneiddedd cell (Ffig.5). Roedd y rhain yn awgrymu y gallai SDC-0-14,16 a SDC-1-8 fod yn sail berthnasol i CF i oedi heneiddio'r arennau. Mae SDC-1-8 yn un o'r glycosidau ffenylethanoid. canfuwyd bod glycosidau ffenylethanoid yn ymestyn oes Caenorhabditis Elegans [50], gydag effeithiau gwrth-heneiddio, [51] a niwro-amddiffynnol [{52-54]. Mae'r rhain yn darparu cyfeiriad ar gyfer ein hastudiaeth ddilynol ar effeithiau ffarmacolegol CF.
Casgliadau
I gloi, dangosodd astudiaethau in vivo fod CF wedi lleihau ffibrosis arennol mewn llygod oedrannus. Darganfuwyd rhai cynhwysion actif posibl mewn arbrofion in vitro. Darparodd y canfyddiadau hyn gefnogaeth ffarmacolegol ar gyfer trin clefyd yr arennau gan ddefnyddio CF a chyfeiriad ar gyfer ymchwil pellach ar gynhwysion gweithredol CF.
Daw'r erthygl hon o Cao et al. BMC Meddygaeth a Therapïau Cyflenwol (2022) 22:52
